UNIDAD DIDACTICA 2. ANALISIS DE PELIGROS Y PUNTOS DE CONTROL CRITICO. LECCION 4. TECNICAS DE MUESTREO EN EL ANALISIS MICROBIOLOGICO DE ALIMENTOS 1 .INTRODUCCION Además de los muestreos realizados por los fabricantes en base a características físicas y/o químicas de los productos, cada vez más se están utilizando criterios microbiológicos en los planes de muestreo, ya que aseguran la salubridad y calidad de los alimentos y, por tanto, en la aceptación por el consumidor. El binomio microorganismos – salubridad y calidad se refiere a la presencia o ausencia de microorganismos patógenos o sus toxinas y la facilidad para su control o destrucción. La aplicación de criterios microbiológicos debería distinguir entre un producto aceptable o inaceptable o entre prácticas de fabricación y manipulación aceptables o inaceptables Un criterio microbiológico para un alimento consiste en: • • • • • Establecer el alimento al que se aplicará el criterio Establecer los contaminantes (microorganismo o sus toxinas) El método analítico que va a utilizarse para su detección y/o recuento La muestra procedente de lote fabricado Los límites microbiológicos apropiados para el producto. Los términos para describir los criterios microbiológicos son: • • • Norma microbiológica: criterio definido por Ley y por tanto obligatorio. Especificación microbiológica: criterio obligatorio aplicado a un alimento o ingrediente para que sea aceptado por el fabricante Recomendación microbiológica: utilizado por el fabricante para controlar el proceso. No son obligatorias. Para el cumplimiento de los objetivos de los criterios microbiológicos debe tenerse en cuenta: • • • • • • Evidencia de riesgo La microbiología de la materia prima El efecto del tratamiento La probabilidad y consecuencias de la contaminación microbiana y/o el crecimiento de los microorganismos durante posteriores manipulaciones y almacenamiento El tipo de riesgo para el consumidor La relación coste / beneficio asociada con la aplicación del criterio. Para ello, es necesario: • • • Conocer los agentes etiológicos específicos Los métodos analíticos Disponer de procedimientos de muestreo para establecer límites de tolerancia. Los agentes etiológicos como Salmonellas, Staphilococu aureus y C. perfringes causan entre el 70 – 80% de las enfermedades alimentarias de los países occidentales mientras que en Japón el 40 – 50% de los brotes fueron debidos a Vibrio parahaemolyticus por el consumo de pescado crudo Metodología: se basan en métodos de detección y recuento publicados por IDF, ISO, AOAC, APHA y ICMSF, los tres primeros intentar armonizar sus métodos. Programas de muestreo: son procedimientos para la recogida de muestras, el análisis adecuado de unidades de muestra y la toma de decisiones en función de un criterio establecido, tal como la presencia o ausencia de un determinado contaminante o número de bacterias totales que no debe exceder en una muestra. 2. DEFINICION DE CONCEPTOS Probabilidad La probabilidad de obtener un resultado positivo es el número de veces que el resultado es positivo dividido entre el número de veces que se analiza el alimento. Varía entre 0 y 1 Población y muestra En relación con el resultado de un análisis, se considera población a todos los resultados de las pruebas realizadas sobre todas las unidades del lote del alimento y muestra a los resultados obtenidos exclusivamente con las unidades de muestra analizadas. No confundir entre la muestra estadística y la muestra del analista. Elección de las unidades de muestra Las características de las muestras son: Aleatorias: todas las unidades que forman parte del lote tengan la misma probabilidad de formar parte de la muestra. Homogeneidad: que pertenezcan a un mismo grupo, turno, máquina etc. Programa de muestreo Tras el análisis de las unidades de muestra, los resultados obtenidos deben confrontarse con determinados criterios para decidir si el lote debe aceptarse o rechazarse. La elección del procedimiento de muestreo y del criterio de decisión se denomina programa de muestreo. Tomadas 10 unidades de muestra de un lote y tras el análisis microbiológico se decide que si existe el microorganismo en 2 o menos unidades (resultando el análisis positivo) el lote se acepta; si se encuentra el microorganismo en 3 o más unidades muestrales el lote se rechaza. Este programa de muestreo viene definido por n=10 (tamaño muestral) y c=2 (número máximo de unidades defectuosas). La curva característica Una vez definido el programa de muestreo, el fabricante estará interesado en conocer que proporción de los lotes que produce serán aceptados o rechazados. Para ello, se establece la curva característica en la cual el eje de abcisa constituye el porcentaje de defectuoso con el que fabrica la empresa y en el eje de ordenadas la probabilidad de aceptación del lote. CURVA CARACTERISTICA DE OPERACION PARA n=10 Y c =2 1 Probabilidad de aceptación 0.9 0.8 0.7 0.6 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 0 0 10 20 30 40 50 60 1 0.93 0.68 0.38 0.17 0.05 0.01 Porcentaje de defectuoso La probabilidad de aceptación de un lote con el programa de muestreo n=10 y c=2 y un porcentaje de defectuoso del 20% es del 68%, es decir, en 68 ocasiones de cada 100 el lote se aceptará y el 32 ocasiones el lote se rechazará Probabilidad de los riesgos del productos y del consumidor La decisión de aceptar o rechazar lotes se toma en base a los resultados derivados del análisis de un determinado número de muestras. Así en ciertas ocasiones se rechazarán lotes que deberían ser aceptados denominándose riesgo del productor y en otras ocasiones se aceptará un lote cuya carga microbiana excede a lo especificado en el programa de muestreo denominándose riesgo del consumidor. 3. PROGRAMAS DE MUESTREO EN ANALISIS MICROBIOLOGICOS 3.1. Programas de dos clases El atributo a considerar es la presencia o ausencia de un microorganismo y en el caso de presencia del mismo la tasa microbiana por encima o debajo de una concentración. Un programa de atributos de 2 clases viene definido por: • • • n = número de unidades de muestras a analizar c = número máximo permisible de unidades defectuosas para aceptar el lote m: recuento superior a una concentración dada que determina una unidad defectuosa. La severidad del programa de muestreo depende del n si c está definido, siendo más severo si se analizan 100 unidades de muestra con c = 2 que si n = 10. 3.2. Programa de atributos de 3 clases En este caso, la calidad del producto puede dividirse en tres atributos dependiendo de la concentración de microorganismos en las unidades de muestra. Se define este programa por: • • • n = número de unidades de muestras a analizar c = número máximo permisible de unidades defectuosas para aceptar el lote m: valor de recuento de microorganismos que separa la calidad buena de una calidad provisionalmente aceptable • M = valor de recuentos de microorganismos por el cual se rechaza el lote. Para describir la calidad de un lote sus recuentos estarán comprendidos entre: 0ym myM mayor que M aunque sólo hay que definir 2 de ellas ya que la suma de las tres es igual a la unidad. Estas dos clases podrían definirse como el porcentaje de rechazables, es decir valor superior a M (Pd) y el porcentaje de provisionalmente aceptables es decir entre m y M (Pm). Por lo tanto, el porcentaje de aceptables, igual o menor a m, es 100% menos la suma de los otros dos porcentajes. Las probabilidades asociadas a diversos programas de tres clases para varias calidades del lote . La aceptación o rechazo de un lote depende no sólo de la proporción del material rechazable (Pd) sini también de la proporción del provisionalmente aceptable (Pm), o lo que es lo mismo de la distribución de frecuencias de los microorganismos en el lote. Ejemplo: si se analiza un lote con un: 20 % de provisionalmente aceptables 10 % de rechazables n = 10 c=2 la probabilidad de aceptación del lote será de un 21% otro lote con: 40 % de provisionalmente aceptables 0 % de rechazables n = 10 c=2 la probabilidad de aceptación del lote será de un 17% 3.3. Elección de un programa de muestreo La severidad de un programa de muestreo depende de: • • • El riesgo para el consumidor Presencia de microorganismos patógenos, toxinas, metabolitos Presencia de microorganismos que alteran el alimento. TABLA 1. PROGRAMA DE 2-CLASES (c=0). PROBABILIDADES DE ACEPTACION (Pa) DE LOTES QUE CONTIENEN LAS PROPORCIONES INDICADAS DE UNIDADES DE MUESTRA ACEPTABLES Y RECHAZABLES COMPOSICION DEL LOTE Aceptables Rechazables 98 2 95 5 90 10 80 20 70 30 60 40 50 50 40 60 30 70 20 80 10 90 < : Pa menos de 0,05 NUMERO DE UNIDADES DE MUESTRA ANALIZADAS PROCEDENTES DE LA POBLACION (n) 3 0,94 0,86 0,73 0,51 0,34 0,22 0,13 0,06 0,03 0,01 < 5 0,90 0,77 0,59 0,33 0,17 0,08 0,03 0,01 < < < 10 0,82 0,60 0,35 0,11 0,03 0,01 < 15 0,74 0,46 0,21 0,04 < 20 0,67 0,36 0,12 0,01 < 30 0,55 0,21 0,04 < 60 0,30 0,05 < 100 0,13 0,01 < TABLA 2 PROGRAMA DE 2-CLASES PARA DETERMINADOS VALORES DE c. PROBABILIDADES DE ACEPTACION (Pa) DE LOTES QUE CONTIENEN LAS PROPORCIONES INDICADAS DE UNIDADES DE MUESTRA ACEPTABLES Y RECHAZABLES Composición del lote Aceptables Rechazables (100-p) (p) 98 2 95 5 90 10 80 20 70 30 60 40 50 50 40 60 30 70 20 80 10 90 5 95 C=3 1,00 1,00 1,00 0,99 0,97 0,91 0,81 0,66 0,47 0,26 0,08 0,02 C=2 1,00 1,00 0,99 0,94 0,84 0,68 0,50 0,32 0,16 0,06 0,01 < C=1 1,00 0,98 0,92 0,74 0,53 0,34 0,19 0,09 0,03 0,01 < C=3 1,00 1,00 0,99 0,88 0,65 0,38 0,17 0,05 0,01 < C=2 1,00 0,99 0,93 0,68 0,38 0,17 0,05 0,01 < C=1 0,98 0,91 0,74 0,38 0,15 0,05 0,01 < C=4 1,00 1,00 0,99 0,84 0,52 0,22 0,06 0,01 < C=2 1,00 0,96 0,82 0,40 0,13 0,03 < C=1 0,96 0,83 0,55 0,17 0,04 0,01 < C=9 1,00 1,00 1,00 1,00 0,95 0,76 0,41 0,13 0,02 C=4 1,00 1,00 0,96 0,63 0,24 0,05 0,01 c=1 0,94 0,74 0,39 0,07 0,01 < < TABLA 3. PROGRAMA DE 3-CLASES: PROBABILIDADES DE ACEPTACION (Pa) DE LOTES QUE CONTIENEN LAS PROPORCIONES INDICADAS PARA VARIOS NUMEROS DE UNIDADES DE MUESTRA ANALIZADAS Y PARA DIVERSOS VALORES c (Pd= % RECHAZABLES; Pm = ACEPTABLES PROVISIONALMENTE) Pm Pd N=5, c=3 50 40 30 20 10 5 0 N=5, c=2 50 40 30 20 10 5 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 0,03 0,08 0,17 0,33 0,59 0,77 1,00 0,03 0,07 0,16 0,32 0,58 0,77 0,99 0,02 0,06 0,15 0,31 0,56 0,75 0,97 0,01 0,04 0,12 0,27 0,52 0,69 0,91 < 0,02 0,07 0,20 0,43 0,60 0,81 < 0,03 0,12 0,32 0,47 0,66 < 0,04 0,18 0,31 0,47 < 0,06 0,14 0,26 < 0,02 0,08 0,03 0,08 0,16 0,32 0,58 0,77 0,99 0,02 0,06 0,14 0,29 0,55 0,72 0,94 0,01 0,04 0,11 0,24 0,47 0,63 0,84 < 0,02 0,06 0,16 0,36 0,50 0,68 < 0,02 0,09 0,23 0,35 0,50 < 0,03 0,12 0,20 0,32 0,01 0,05 0,09 0,16 < 0,01 0,02 0,06 < < 0,01 Pm Pd N=5, c=2 50 40 30 20 10 5 0 N=10, c=3 40 30 20 10 5 0 N=10, c=2 30 20 10 5 0 N=10, c=1 30 20 10 5 0 10 20 30 40 50 60 70 80 0,02 0,06 0,14 0,29 0,53 0,70 0,92 0,01 0,04 0,09 0,21 0,41 0,55 0,74 < 0,01 0,05 0,13 0,27 0,38 0,53 < 0,02 0,06 0,16 0,23 0,34 < 0,02 0,07 0,12 0,19 0,01 0,03 0,05 0,09 < 0,01 0,01 0,03 < < 0,01 0,01 0,03 0,10 0,34 0,59 0,99 < 0,02 0,08 0,29 0,51 0,88 0,01 0,05 0,20 0,34 0,65 < 0,02 0,10 0,20 0,38 < 0,03 0,08 0,17 0,01 0,02 0,05 < < 0,01 0,02 0,09 0,32 0,55 0,93 0,01 0,06 0,21 0,39 0,68 < 0,02 0,10 0,20 0,38 0,01 0,04 0,08 0,17 < 0,01 0,02 0,05 < < 0,01 0,02 0,07 0,24 0,43 0,74 < 0,03 0,11 0,21 0,38 0,01 0,04 0,08 0,15 < 0,01 0,02 0,05 < < 0,01 90 TABLA 4. PROBABILIDADES DE ACEPTACION (Pa) PARA LOS PROGRAMAS DE ATRIBUTOS DE 2 Y 3-CLASES CUANDO EL LOTE CONTIENE 5%, 20% Ó 50% DE UNIDADES DE MUESTRA PROGRAMA DE MUESTREO N c 5 5 5 5 10 10 10 10 15 20 60 0 1 2 3 0 1 2 3 0 0 0 2CLASES 0,77 0,98 1,00 1,00 0,60 0,91 0,99 1,00 0,46 0,36 0,05 5% >m 3-CLASES 0%>M 5%>M 0,77 0,98 1,00 1,00 0,60 0,91 0,99 1,00 0,46 0,36 0,05 0,77 0,77 0,77 0,77 0,60 0,60 0,60 0,60 0,46 0,36 0,05 2CLASES 0,33 0,74 0,94 0,99 0,11 0,38 0,68 0,88 0,04 0,01 20%>>m 3-CLASES 0%>M 10%>M 20%>M 0,33 0,74 0,94 0,99 0,11 0,38 0,68 0,88 0,04 0,01 0,33 0,33 0,33 0,33 0,11 0,11 0,11 0,11 0,04 0,01 0,33 0,53 0,58 0,59 0,11 0,24 0,32 0,34 0,04 0,01 2CLASES 0,03 0,19 0,50 0,81 < 0,01 0,05 0,17 50%>m 3-CLSES 0%>M 25%>M 0,03 0,19 0,50 0,81 < 0,01 0,05 0,17 0,03 0,11 0,19 0,23 < 0,01 0,02 0,03 50%>M 0,03 0,03 0,03 0,03 El riesgo de una enfermedad alimentaria es tanto más elevado conforme el patógeno va multiplicándose en el alimento y, por tanto, su número aumenta. Pero además la manipulación del alimento durante la distribución , el almacenamiento y la preparación puede provocar la disminución, mantenimiento o aumento del número de microorganismos presentes. De esta forma, la elección de un programa de muestreo debe tener en cuenta: • • El tipo de riesgo que conllevan las especies microbianas que se están analizando Condiciones previsibles de manipulación y consumo a las que el lote se someterá tras el muestreo. La tabla 5. recoge 15 tipos de programas de muestreo en relación con los factores anteriormente mencionados. TABLA 5. SEVERIDAD DEL PROGRAMA (CATEGORIA) EN RELACION CON EL RIESGO SANITARIO Y CON LAS CONDICIONES DE USO. CONDICIONES NORMALES ESPERADAS DE MANIPULACION Y CONSUMO DEL ALIMENTO TRAS EL MUESTREO Reducen el Riesgo sin Aumentan el riesgo cambios riesgo Tipo de riesgo Sin riesgo directo para la salud Utilidad (contaminación general, reducción de vida útil y alteración Categoría 1 Categoría 2 Categoría 3 Riesgo para la salud Bajo, indirecto (indicadores) Categoría 4 Categoría 5 Categoría 6 Moderado, directo, diseminación limitada Categoría 7 Categoría 8 Categoría 9 Moderado, directo, potencialmente extensa Categoría 10 Categoría 11 Categoría 12 Categoría 13 Categoría 14 Categoría 15 diseminación Grave, directo Entre los factores que influyen en el riesgo hay que tener en cuenta: • • • • Consideraciones epidemiológicas Consideraciones ecológicas Consideraciones clínicas Consideraciones laboratoriales El agua y el marisco son frecuentes vehículos de fiebres tifoideas, cólera y hepatitis. Si bien la carne de aves y abasto se relacionan con brotes de salmonelosis, el jamón cocido y los bollos rellenos con las intoxicaciones estafilocócicas. La carne de ave cocinada, la cual ha sufrido un abuso de tiempo y temperatura es vehículo del C. perfringes. Es conocido que el botulismo se produce en alimentos procesados por el calor en el hogar. La leche cruda es frecuentemente vehículo de Campilobacterias, Brucellas y Salmonellas y en el arroz cocido se relaciona con la gastroenteriris causada por el Bacillo cereus. Las enfermedades alimentarias se originan, principalmente, por el consumo de alimentos de origen animal, aunque también el hombre es un reservorio de algunos patógenos. En la presentación de dichas enfermedades hay que considerar: • • • • • • Costumbres locales y prácticas higiénicas Suministro de agua Control de procesado de alimentos Detección – retirada – decomiso de alimentos contaminados Control de parásitos Uso de refrigeración en la distribución y en los hogares. La mortalidad de algunas enfermedades depende de la susceptibilidad de ciertos segmentos de la población (niños, malnutridos, ancianos). La mortalidad varía según el tipo de microorganismo patógeno causante de la enfermedad. Así en el botulismo la mortalidad se cifra en un 50%, puede elevarse hasta un 70% en el caso del cólera. Es importante el aislamiento e identificación del agente patógeno en el laboratorio, ya que muchos síntomas son comunes a diferentes microorganismos En la tabla 6 se presentan los principales microorganismos patógenos, causantes de enfermedades alimentarias Las pruebas de detección de patógenos en los alimentos se deben realizar en circunstancias especiales: • • En un muestreo rutinario, si el historial de los análisis de una determinada muestra confirma que cuando el patógeno está presente desarrolla la enfermedad. En un muestreo específico: • Si la epidemiología de un brote de origen alimentario hace sospechar que un determinado lote de alimentos ha sido la causa de la enfermedad. • Cualquier circunstancia que haga sospechar la presencia de un patógeno. 3.4. Influencia de las condiciones de manipulación y uso en el riesgo. Hemos relacionado el riesgo con la tasa de microorganismos en el alimento. Ahora bien, El riesgo puede: aumentar: en el caso de la leche en polvo puede haber multiplicación microbiana durante su reconstitución no cambiar: congelación en el caso de helados disminuir: cocinado de los alimentos Durante la manipulación tras el análisis, hay que tener en cuenta: • Naturaleza del alimento como medio de multiplicación microbiana La incorporación de sal al 10% permite el crecimiento estafilocócico, pero no de Salmonella. Así si estos alimentos no se refrigeran puede clasificarse en la categoría 9 de los Estafilococos y en la 11 de las Salmonellas. • La carne fresca con mayor desarrollo microbiano se clasificaría en las categorías 3, 6, 9, 12 ó 15 mientras que la carne deshidratada en categorías 2, 5, 8, 11 ó 14. • Competencia microbiana: los estafilococos no crecen en la carne fresca alimentos con organismos alterantes, pero si se desarrolla tras el cocinado. • Temperatura si se mantiene el jamón cocido a una temperatura inferior de 6º C, puede considerarse en la categoría 8 en lugar de la 9; sin embargo, el pescado ahumado C. botulinum a temperaturas de 3º C durante suficiente tiempo de almacenamiento puede producir toxinas. • Hábitos de consumo: en Japón que se consume pescado crudo es un medio idóneo para el desarrollo de V. Haemolyticus, con lo que se consideraría en la categoría 9. TABLA 6 PRINCIPALES PATOGENOS CAUSANTES DE ENFERMEDADES ALIMENTARIAS Microorganismo (enfermedad) Frecuencia aparición de la enfermedad I RIESGOS GRAVES Brucella melitensis B. abortus, B. Relativamente rara, ocasiones endémica Suis (Brucelosis) Clostridium botulinum tipos A, B, Rara E y F (Botulismo) pero Clostridium perfringes Tipo Rara C(Enteritis necroticans) Virus de la hepatitis A (Hepatitis Frecuente A) Ejemplo de vehículos en Leche cruda y queso sobre todo de cabra Alimentos enlatados elaborados defectuosamente. Productos cárnicos curados en el hogar, pescados crudos y ahumado Carne de cerdo cocinada Marisco crudo, ensaladas piezas cárnicas frías, hortalizas crudas, agua Salmonella typhi; S. paratyphi A, B Endémica en muchas partes del Agua, leche y productos lácteos (schttmulleri) y C (especialmente mundo; ocasionalmente epidémica crudos, productos cárnicos, Fiebre tíficas y paratíficas) hortalizas y marisco Shigiella dysenteriae I (sigelosis, Esporádica o epidémica Hortalizas crudas y ensaladas disentería bacilar) Vibrio cholerae O1, (cólera) Esporádica, endémica ocasionalmente epidémica y Pescado, marisco y agua Otros factores relevantes Frecuentemente convalecencia prolongada Alta mortalidad; el reconocimiento rápido y tratamientos específicos pueden ser esenciales para la supervivencia del enfermo, se requieren precauciones de los fabricantes Alta mortalidad en personas deficiente en proteínas Muy grave en pacientes con trastornos hepáticos; convalecencia prolongada Requiere cuidados médicos prolongados; puede transmitirse por portadores (S. typhi) Alta mortalidad; a menudo se diagnostica erróneamente; dosis infectiva baja Microorganismo (enfermedad) Frecuencia aparición de la Ejemplo de vehículos Otros factores relevantes enfermedad II RIESGOS MODERADOS: DISEMINACION POTENCIALMENTE EXTENSA Enfermedad alimentaria Leche y productos lácteos crudos, Mayor incidencia en malnutridos y Estreptococosβ-hemolíticos contienen huevo en personas recuperándose de (garganta séptica y dolorosa, cirugía intestinal; alta mortalidad escarlatina) en personas no tratadas y deshidratadas. Secuelas: faringitis aguda, nefritis, artritis y complicaciones cardiovasculares. Diseminación secundaria por contactos Escherichia coli patógeno (diarrea En aumento en muchas áreas; Alimentos en contacto con personas Grave en individuos jóvenes; por E. coli) causa frecuente de la diarrea de infectadas, carne cruda o poco hecha, síndrome parecido a la sigelosis leche y productos lácteos crudos, viajeros ensaladas, agua. Salmonella typhimurium y otros Muy frecuente serovares de Salmonella (Salmonelosis) Shigella flexneri. S. boydii, S. Esporádica a veces endémica sonnei (véase Sección I) (Sigelosis, disentería bacilar) Carne de aves huevos, otras carnes Graves en niños y ancianos; otros muchos alimentos contaminación cruzada entre carne de entre carnes de aves y otras carnes; algunas cepas de S. typhimurium y de otros , serotipos son muy virulentas Alimentos que puedan ser Grave para niños y ancianos; contaminados por personas infecciones secundarias por infectadas o por agua residuales contacto; a veces dosis infectivas como hortalizas crudas, ensaladas bajas Microorganismo (enfermedad) Frecuencia aparición de la enfermedad III RIESGOS MODERADOS: DISEMINACIÓN LIMITADA Bacillus cereus (gastroenteritis por Frecuente B. cereus) Campylobacter fetus subsp. jejuni Frecuente (Campilobacteriosis) Clostridium perfringens tipo A Frecuente (Enteritis por C. perfringens) Staphylococcus aureus Frecuente (Enterotoxicosis estafilocócica o intoxicación estafilocócica) Vibrio cholerae no Ol (Cólera no Ol) Vibrio parahaemolyticus (Gastroenteritis por V parahaemolyticus) Yersinia enterocolitica y Y paratuberculosis (Yersiniosis) En aumento Ejemplo de vehículos Otros factores relevantes Arroz cocido o frito, productos cereales reconstituidos, pudines y natillas Leche cruda, agua, carne de aves y otros tipos de carne Carnes cocinadas no curadas, carne de aves y salsas Jamón, embutidos fermentados, otros productos cárnicos incluyendo carnes de aves, pasteles de crema, leche cruda, cruda, platos preparados con queso y huevos. Productos de pastelería fabricados con caseinato Mariscos, crustáceos Frecuente en Asia en aumento en Pescados crudos de agua salada, todo el mundo crustáceos En aumento Leche cruda, leche pasterizada Los síntomas pueden parecerse a recontaminada agua, «tofu» los de la apendicitis 3.5. Elección de la categoría Los alimentos con un tratamiento térmico son más seguros; aunque hay riesgo de recontaminación tras el tratamiento, de condiciones idóneas de multiplicación, no se cocinan antes de su consumo. En la elección de la categoría hay que tener en cuenta 2 aspectos: 1. Si consideramos la vida útil del alimento, el recuento de aerobios en placa (RAP) es un indicador valioso en alimentos no pasterizados, mientras que en alimentos pasterizados, el RAP es un reflejo del tratamiento, ya que un alimento muy alterado tras la pasterización puede dar un RAP aceptable, en este caso, es recomendable un recuento microscópico directo (RMD), ya que esta prueba indicará la tasa bacteriana que el alimento tenía antes del tratamiento. Para las pruebas RMD y RAP la elección de la categoría sería 1, 2 ó 3, dependiendo del uso posterior del alimento. 2. Microorganismos indicadores (coliformes): Un alimento crudo que sufra tratamiento térmico la categoría 4 es la apropiada. Un alimento pasterizado con coliformes (recontaminación del alimento por malas condiciones higiénicas, se demora en su reconstitución se elige la categoría 6. En el caso de alimentos crudos sin cocinarse con estafilococos coagulasa +, se recomienda la categoría 7. Alimentos ya cocinados que son recontaminados con estafilocos por manipuladores se escogerá la categoría 9. Tanto el B. Cereus como Cl perfringes presentan riesgos moderados ya que producen esporas en alimentos con calentamiento moderado. Se clasifican en la categoría 8 si su consumo es inmediato tras la descongelación o en la categoría 9 si se demora el consumo. Las Salmonellas en alimentos proteicos como el huevo se destruyen tras la pasterización; aunque puede haber recontaminación y la congelación o deshidratación posterior no destruyen estas bacterias. Si el alimento deshidratado se consume como tal sin reconstitución se elige la categoría 11 Si la reconstitución se retrasa y no hay tratamiento térmico posterior se considera en la categoría 12. Si se cocina tras su reconstitución se mantendrá en la categoría 10. La tabla 7 amplia el número de ejemplos anteriormente mencionados. 3.6 Elección del programa de 2 ó 3 clases La elección del programa de 2 o 3 clases estriba en si se puede permitir la presencia de una muestra positiva en cualquiera de las unidades de fabricación. Si la respuesta es NO se elegirá un programa de 2 clases con c= 0 Si la respuesta es SI se podrá elegir un programa de 2 ó 3 clases. ¿se va a estimar el microorganismos problema por: pruebas de presencia o ausencia (+/-) o por pruebas de recuento? Las pruebas de +/- requieren un En las pruebas de recuento es preferible un programa de 3-clases Programa de 2-clases ¿Puede aceptarse la presencia de este microorganismo en el alimento? Si no es posible c=0 Elíjase a partir de la tabla 2 los valores de n para proporcionar la probabilidad deseada Elíjase a partir de la tabla 3 los valores den y c para proporcionar la probabilidad deseada Si es posible c>0 Elíjase a partir de la tabla 3 los valores de n y c para proporcionar la probabilidad deseada Se recomienda un programa de 3-clases: TABLA 7.RELACIONES ENTRE CATEGORIAS, TIPO DE AIMENTO, PRUEBAS MICROBIOLOGICAS Y CONDICIONES DE TRATAMIENTO DEL ALIMENTO Tipo de prueba Sin riesgo directo para la salud, contaminación general, alteración y vida útil Influencia de las condiciones Reducción del riesgo Categoría 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 Riesgo no se modifica 2 Pescado, fresco o congelado Crustáceos crudos congelados Canales antes de refrigeración Canales refrigeradas Despojos comestibles refrigerados Canales congeladas Carne deshuesada congelada Carne picada congelada Despojos comestibles congelados Carne de pollo, fresca o congelada Leche en polvo Pruebas bacteriológicas RAP RAP RAP RAP RAP RAP RAP RAP RAP RAP RAP 2 Ovoproductos líquidos pasterizados congelados o deshidratados RAP 2 Pescados empanados, precocinados congelados Crustáceos precocinados congelados Carne de cangrejo precocinada refrigerada o congelada RAP 2 Aumento del riesgo Alimento 3 RAP RAP Tratamiento, usos o manipulación previstas Cocinado antes de consumo Cocinado antes de consumo Cocinado antes de consumo Cocinado antes de consumo Cocinado antes de consumo Cocinado antes de consumo Cocinado antes de consumo Cocinado antes de consumo Cocinado antes de consumo Cocinado antes de consumo Tras rehidratación se consume o refrigera inmediatamente Se emplean inmediatamente después de reconstitución en productos formulados que posteriormente no se tratan térmicamente Se consumen rápidamente tras su descongelación Se consumen rápidamente tras su descongelación Recocinada antes de su consumo; es posible que se someta a un control de temperatura escaso y puede almacenarse períodos prolongados tras la apertura del envase o su descongelación 3 Riesgo para la salud bajo indirecto (microorganism os indicadores Reducción del riesgo 4 4 4 Riesgo no se modifica 5 5 5 5 5 5 5 5 Moluscos bivalvos frescos o congelados RAP Se consumen crudos o tras un cocinado muy ligero; puede que se sometan a un control de temperatura escaso y pueden almacenarse períodos prolongados tras la apertura del envase o su descongelación E. coli Pescado fresco o congelado Cocinado antes de consumo E. coli Crustáceos crudos congelados Cocinado antes de consumo Productos deshidratados que RAP, coliformes Cocinado antes de consumo requieren un calentamiento o hervirse antes de su consumo Leche en polvo Coliformes Se consume rápidamente tras su reconstitución Ovoproductos líquidos Coliformes Se emplean inmediatamente sin ningún pasterizados, congelados o tratamiento posterior deshidratados Pescados precocinados No siempre se recalientan bien antes de E. coli empanados, congelados su consumo pero suelen consumirse inmediatamente tras el recalentamiento Crustáceos precocinados Consumo inmediato tras descongelación E. coli congelados Verduras o frutas (pH 4,5) E. coli Consumo inmediato tras descongelación congelada Productos vegetales Consumo inmediato tras descongelación E. coli deshidratados Cereales (incluyendo harinas) Mohos Se cocinan, pero las micotoxinas no tienen por qué destruirse con el calentamiento Harina, concentrados y productos Mohos Sufren un procesado posterior, pero las de la soja micotoxinas no tienen por qué destruirse por el calentamiento 5 5 Aumento del riesgo Riesgo para la salud moderado, del riesgo directo, diseminación Reducción del riesgo Galletas «estables» rellenas o con Coliformes cobertura Agua mineral natural no Coliformes carbonatada (eauxplates) y otras aguas embotelladas no carbonatadas 6 Crustáceos precocinados congelados E. coli 6 Carne de cangrejo precocinada refrigerada o congelada E. coli 6 Moluscos bivalvos frescos o congelados E. coli 6 Productos formulados deshidratados o de disolución instantánea reconstitución RAP, coliformes 7 (Según el criterio de la ICMSF no hay ejemplos) Patógenos vegetativos que no producen toxinas termoestables Se consumen en estado seco Por regla general se consume pronto tras la apertura del envase (el número de microorganismos disminuye con nel tiempo de embotellado, pero algunos pueden sobrevivir) 0 no se cocinan o muy ligeramente; a veces se almacenan con escaso control de la temperatura y pueden almacenarse períodos prolongados tras la descongelación 0 no se cocinan o muy ligeramente; a veces se almacenan con escaso control de la temperatura y pueden almacenarse períodos prolongados tras la descongelación 0 no se cocinan o muy ligeramente; a veces se almacenan con escaso control de la temperatura y pueden almacenarse períodos prolongados tras la descongelación Posible almacenamiento tras la reconstitución con almacenan con escaso control de la temperatura y pueden almacenarse períodos prolongados tras la descongelación que precisan periodos de tiempo prolongados Cocinado antes de consumo limitada Riesgo no se modifica 8 Sangre, plasma o gelatina deshidratada 8 8 Carne de pollo precocinada, que Staph. Aureus será recalentada, congelada Carne de pollo precocinada lista Staph. Aureus para consumo (por ej., rollitos de pavo) congelada Crustáceos precocinados Staph. Aureus 8 Quesos «duros»y «semiduros» 8 8 Staph. Aureus Cl. perfringens Staph. Aureus Productos de panadería con Staph. Aureus rellenos de baja acidez o elevada a (por ej., pastel de carne empanadas, pizzas) congelados Aperitivos que contienen harina B. Cereus de maíz o de arroz como principal ingrediente Pasta congelada o desecada Staph. Aureus Agua mineral natural no carbonatada (eaux plates) Pseudomonas aeruginosa Usados como ingredientes en productos que no reciben un tratamiento térmico adecuado (enterotoxinas y esporas sobreviven al calentamiento) Recalentada antes de su consumo, pero la enterotoxina no se destruye Se consume rápidamente tras la descongelación o se mantiene en refrigeración Se consumen rápidamente tras la descongelación congelados Normalmente no se tratan térmicamente; puede que no se mantengan en refrigeración (no debería haber crecimiento tras el procesado) No siempre se recalientan de forma apropiada antes de su consumo, pero se consumen rápidamente tras el recalentamiento Se recalientan, pero las esporas y la toxina emética no se inactivan; se consumen rápidamente tras el recalentamiento Normalmente se trata térmicamente, pero la enterotoxina puede permanecer activa Normalmente se consume rápidamente tras la apertura del envase; no sufre posteriores tratamientos Aumento del riesgo 9 Carne de pollo precocinada, lista Staph. Aureus para consumo (por ej., rollitos de pavo) congelada 9 Carne de pollo curada y/o ahumada 9 Productos deshidratados o de Staph. Aureus disolución instantánea que requieren reconstitución Productos de panadería (listos Staph. Aureus para consumo) con ingredientes de baja acidez o elevada aw Carne de cangrejo precocinada, Staph. Aureus refrigerada 9 9 Riesgo para la salud moderado, directo; diseminación posiblemente extensa Reducción del riesgo Staph. Aureus 10 Leche en polvo 10 Ovoproductos líquidos Salmonella pasterizados, congelados o deshidratados Productos deshidratados que Salmonella requieren ebu11ición antes de su consumo Carne de pollo precocinada, que Salmonella 10 10 Salmonella No se recalienta siempre; con escaso control de temperatura tras descongelación y puede almacenarse períodos de tiempo prolongados Puede que se almacene con escaso control de temperatura y durante períodos de tiempo prolongados Puede que se almacene con escaso control de temperatura y durante períodos de tiempo prolongados Puede que se almacene con escaso control de temperatura y durante períodos de tiempo prolongados Puede que no se cocine antes de su consumo y que se almacene con escaso control de temperatura y/o congelada durante períodos de tiempo prolongados Se usa como ingrediente de un producto que se trata térmicamente Se usa como ingrediente de un producto que se trata térmicamente Se calientan antes de su consumo Se recalienta antes de su consumo se recalienta antes de su consumo, congelada Harina, concentrados y productos Salmonella de la soja Se usa como ingrediente de un producto que se trata térmicamente 10 Riesgo no se modifica 11 11 11 11 Productos de panadería (preparados para cocinarse) con ingredientes de baja acidez o elevada a (por ej., pastel de carne, empanadas, pizzas), congelados Derivados de cereales congelados o deshidratados Carne de pollo precocinada, lista para consumo (por ej., rollitos de pavo) congelada Carne de pollo curada y/o ahumada, refrigerada o congelada Productos deshidratados a base de carne de pollo Salmonella Se calientan antes de su consumo Salmonella Se calientan antes de su consumo Salmonella Se consume rápidamente descongelación Salmonella Se consume rápidamente tras la apertura del envase o tras la descongelación Salmonella Leche en polvo Salmonella No siempre se recalientan bien antes de su consumo; pueden emplearse como ingredientes de ensaladas tras su rehidratación; se consumen rápidamente tras rehidratación Se consume rápidamente tras la reconstitución Se consumen rápidamente tras la reconstitución o descongelación Ovoproductos pasterizados Salmonella líquidos, congelados o deshidratados Cacao Salmonella Chocolate y otros productos de Salmonella confitería Alimentos de humedad Salmonella intermedia para animales de compañía. tras la Se usa como ingrediente de productos estables Productos estables, consumidos sin posteriores tratamientos Productos estables consumidos sin posteriores tratamientos Alimentos deshidratados y que Salmonella no precisan reconstitución para animales de compañía Sangre, plasma o gelatina Salmonella deshidratada Coco (desecado) Salmonella Aumento del riesgo Mantequilla de cacahuete Salmonella 12 Paté Salmonella 12 Roast beef congelado Salmonella 12 Alimentos deshidratados que Salmonella precisan de rehidratación para animales de compañía 12 Leche en polvo 12 Ovoproductos pasterizados Salmonella líquidos, congelados o deshidratados Coco (desecado) Salmonella 12 Salmonella Productos estables consumidos posteriores tratamientos sin Se usa en productos estables Se consume en estado seco; crecimiento no previsto Producto estable consumido sin posterior tratamiento Puede que se almacene con escaso control de la temperatura durante períodos de tiempo prolongados Puede que, tras la descongelación, se almacene con escaso control de la temperatura durante períodos de tiempo prolongados Puede que. tras la rehidratación, se almacene con escaso control de la temperatura durante períodos de tiempo prolongados Puede que, tras la reconstitución, se almacene con escaso control de la temperatura durante períodos de tiempo prolongados Puede que, tras la descongelación o reconstitución, se almacene con escaso control de la temperatura Probablemente usado en un producto de humedad elevada; puede almacenarse con escaso control de temperatura y durante períodos de tiempo prolongados 12 Levaduras Salmonella 12 Mantequilla de cacahuete Salmonella 12 Productos formulados deshidratados o de disolución instantánea que requieren reconstitución Productos de panadería (listos para consumo) con rellenos o cubiertas de baja acidez o elevada a, congelados (Según el criterio de la ICMSF no hay ejemplos) Salmonella 12 Riesgo para la salud grave y directo Reducción del riesgo 13 Salmonella Brucella, C. botulinum, C. perfringens, tipo C Salm. typhi, Shig. dysenteriae. V cholerae. Virus de la hepatitis A Puede que se usen como ingredientes de un producto de humedad elevada; pueden almacenarse con escaso control de temperatura y durante períodos de tiempo prolongados tras la formulación, descongelación o rehidratación. Puede que se use como ingrediente de un producto de humedad elevada; puede almacenarse con escaso control de temperatura y durante períodos de tiempo prolongados tras la formulación, descongelación o rehidratación Pueden almacenarse con escaso control de la temperatura y durante períodos de tiempo prolongados tras la reconstitución Pueden almacenarse, tras la descongelación, con escaso control de la temperatura y durante períodos de tiempo prolongados Cocinado antes de su consumo Riesgo no se modifica 14 15 (Según el criterio de la ICMSF Brucella, no hay ejemplos) C. botulinum, C. perfringens, tipo C Salm. typhi, Shig. dysenteriae. V cholerae. Virus de la hepatitis A (Según el criterio de la ICMSF Brucella, no hay ejemplos) C. botulinum, C. perfringens, tipo C Salm. typhi, Shig. dysenteriae. V cholerae. Virus de la hepatitis A Productos estables consumidos en el mismo estado que quedan tras su procesado o inmediatamente tras la descongelación o reconstitución Sujetos a control de temperatura escaso y almacenados, durante períodos de tiempo prolongados tras su preparación, descongelación o reconstitución • • • Si un alimento se fabrica bajo buenas prácticas, pueden existir unidades con valores analíticos superiores al habitual sin haber problemas (provisionalmente aceptables) Existe un límite de riesgo (M) Permite controlar la tendencia de los análisis. Si hay un aumento de muestras entre los valores m y M indica una falta de control. 3.7. Determinación de m y M El valor de m es la cantidad aceptable y esperable que un microorganismo puede alcanzar en un alimento. Si el microorganismo es un patógeno se recomienda que m = 0 ó nivel de detectibilidad de la prueba analítica. M es el nivel de contaminación de riesgo inaceptable, M se establece mediante diferentes estrategias: • • • Indice de utilidad del producto: relación entre tasa bacteriana y alteración evidente (color, olor) Indice higiénico general Peligro para la salud M se establece por el riesgo y m está definido por las BPF El conocimiento del lote es fundamental para la elección de un programa de muestreo, ya que aquellos productos con un extenso historial de buena calidad: Reduce los costes de almacenamiento Disminuye el número de unidades de muestra a analizar (n = 5) con o que el coste analítico es menor. La severidad de un programa se mide por la probabilidad de aceptación de los lotes en los que una determinada % de unidades de muestra es rechazable. Así, un programa de 3 clases con: n=5 c=3 5% de unidades rechazables 30% de unidades aceptables provisionalmente La probabilidad de aceptación es del 75% Un programa de 2 clases con: n = 60 c=0 5% de unidades rechazables Un programa de 2 clases con: n = 60 c=0 0,5% de unidades rechazables La probabilidad de aceptación es del 95% Puede suponerse que en el primer caso, una probabilidad de un 75% no proporciona protección alguna; sin embargo, la pérdida de 1 lote de cada 4 es tan importante que obligará al productor a reducir el contenido bacteriano de su producto a un nivel inferior. La elección de n y c en un programa de muestreo varía en función de la rigurosidad Es más riguroso cuando n es alto y c es bajo y es menos riguroso cuando n es bajo y c es alto Con un 5% de rechazables, n = 5 y c = 1 la probabilidad de aceptación es de 77,5 %. Con el mismo porcentaje de rechazables si n = 3 y c = 3 la probabilidad de aceptación es 100%. La tabla 8. refleja los programas de muestreo recomendables en función del riesgo TABLA 8 PROGRAMAS DE MUESTREO RECOMENDADOS PARA DIFERENTES GRADOS DE RIESGO PARA LA SALUD Tipo de riesgo Sin riesgo directo para la salud Utilidad (vida útil y alteración) Riesgo para la salud Bajo, indirecto (indicadores) Moderado, directo, diseminación limitada Moderado, diseminación directo, CONDICIONES NORMALES ESPERADAS DE MANIPULACION Y CONSUMO DEL ALIMENTO TRAS EL MUESTREO Reducen el riesgo Riesgo sin cambios Aumentan el riesgo Aumento de la vida útil Sin modificación Disminución de vida Categoría 1 Categoría 2 útil 3-clases n=5, c=3 3-clases n= 5, c=2 Categoría 3 3-clases n=5, c=1 Disminución del riesgo Sin modificación Categoría 4 Categoría 5 Aumento del riesgo 3-clases n=5, c=3 3-clases n= 5, c=2 Categoría 6 3-clases n= 5, c=1 Categoría 7 Categoría 8 3-clases n=5, c=2 3-clases n= 5, c=1 Categoría 9 3-clases n= 10, c=1 Categoría 10 Categoría 11 2-clases n=5, c=0 2-clases n= 10, c=0 Categoría 12 potencialmente extensa Grave, directo 2-clases n= 20, c=0 Categoría 13 2-clases n=15, c=0 Categoría 14 2-clases n= 30, c=0 Categoría 15 2-clases n= 60, c=0 Aunque el valor de n dependerá siempre de la capacidad analítica del laboratorio, aunque debe constituir un compromiso entre la protección total del consumidor y la capacidad del laboratorio. Cuando se requieren inspecciones más rigurosas; se aumenta n, m y M y disminuye el valor de c. Si c = 0, la severidad se incrementa aumentando las unidades de muestra a analizar. Las inspecciones más rigurosas pueden realizarse para Establecer cargas económicas a suministradores con un historial de producción y manipulación de lotes con una calidad microbiológica deficiente Reemplazar programas de muestreos rutinarios cuando se presume que el grado de importancia o sus condiciones sobrepasan lo especificado en la tabla anterior. PROGRAMAS DE MUESTREO Y LIMITES MICROBIOLOGICOS RECOMENDADOS PARA CARNE CRUDA Producto Canal antes de refrigerarse Canales refrigeradas Despojos refrigerados Canales refrigeradas Carne deshuesada congelada (vaca, ternera, cerdo, ovino) Carne picada congelada Despojos congelados Análisis Categoría RAP RAP RAP RAP RAP RAP RAP Límite por cm² o g m M N c 1 1 1 1 1 Programa de clase 3 3 3 3 3 5 5 5 5 5 3 3 3 3 3 105 106 106 5x105 5x105 106 107 107 107 107 1 1 3 3 5 5 3 3 106 5x105 107 107 PROGRAMAS DE MUESTREO Y LIMITES MICROBIOLOGICOS RECOMENDADOS PARA PRODUCTOS CARNICOS PROCESADOS Producto Sangre deshidratada, plasma y gelatina Roast beef Paté Análisis Categoría Staph. Aureus C. perfringes Salmonella Salmonella Salmonella 8 8 11 12 12 Programa de clase 3 3 2 2 2 N c Límite por cm² o g m M 5 5 10 20 20 1 1 0 0 0 102 102 0 0 0 104 104 PROGRAMAS DE MUESTREO PARA CARNES CURADAS EN SEMICONSERVA Análisis Programa de clase Paso1: Inspección visual para detectar 2 envases abombados o defectuosos Paso 2: Medida de temperatura entre envases Paso 3: determinar aerobios en placa con muestras del centro y periferia del envase N C 10 2 3 m M Aceptación 0 0 Rechazo si se detectan 1 o más envases con defectos. Si no se encuentran defectuosos, se procederá con el paso 2 10 0 0 Aceptar si la temperatura es menor de 10ºC. Si es mayor procédase con el paso 3 5 2 103 104 PROGRAMAS DE MUESTREO Y LIMITES MICROBIOLOGICOS RECOMENDADOS PARA CARNE CRUDA N c Límite por cm² o g m M 8 10 Programa de clase 3 2 5 5 1 0 103 0 104 3 3 2 5 10 10 1 1 0 103 103 0 104 104 Salmonella 8 9 11 Carne de ave curada y/o ahumada Staph. Aureus Salmonella 9 11 3 2 10 10 1 0 103 0 104 Productos avícolas deshidratados Salmonella 11 2 10 0 0 RAP 1 3 5 3 5x105 Producto Análisis Categoría Carne de ave precocinada, congelada, que se recalienta antes de su consumo (platos preparados) Staph. Aureus Salmonella Carne de ave cocinada, congelada, lista para su consumo (rollitos de pavo) Staph. Aureus Carne de pollo cruda (fresca o congelada), durante su procesado 107 PROGRAMAS DE MUESTREO Y LIMITES MICROBIOLOGICOS RECOMENDADOS PARA LECHE EN POLVO Y QUESO Producto Leche en polvo Queso de tipo duro y semiblando Análisis Categoría RAP Coliformes Salmonella Rutina normal 2 5 10 11 12 10 11 12 8 Salmonella Población alto riesgo Staph. Aureus Programa de clase 3 3 2 2 2 2 2 2 2 N c 5 5 5 10 20 15 30 60 5 2 1 0 0 0 0 0 0 0 Límite por cm² o g m M 3x104 10 0 0 0 0 0 0 104 3x105 102 PROGRAMAS DE MUESTREO Y LIMITES MICROBIOLOGICOS RECOMENDADOS PARA HUEVO LIQUIDO PASTERIZADO, CONGELADO Y OVOPRODUCTOS DESHIDRATADOS Análisis Categoría Programa de clase N c m M 4 RAP 2 106 3 5 2 5x10 1 10 103 Coliformes 5 3 5 2 0 10 2 5 0 Salmonella Rutina normal 0 11 2 10 0 0 12 2 20 0 0 10 2 15 0 Salmonella Población alto riesgo 0 11 2 30 0 0 12 2 60 0 3. BIBLIOGRAFIA. - BERNEL, M. (2002). “Criterios microbiológicos: fundamentos para su aplicación en el sistema de APPCC”. Revista A.I.C.E. Enero-Marzo. - E.E.C. (2001). “On strategy for setting microbiological criteria for foodstuffs in Community legislation”. SAINCO 1252/2001. Rev.8. Bruselas. - FAO/WHO (1997). “Risk management and food safety”. FAO. Roma. - FAO/WHO (1999). “Risk assessment of microbiological hazards in foods. Report of the joint FAO/WHO Expert Consultation. Genova. - FAO/WHO (2000). “Report of the joint FAO/WHO expert consultation on risk assesssment of microbiological hazards in foods”. FAO . Roma.