1º FORO DE COLABORACIÓN PÚBLICO-PRIVADA EN SANIDAD ANIMAL Sector Porcino SGIT-INIA DEPARTAMENTO DE BIOTECNOLOGÍA 13 de Noviembre de 2012 DEPARTAMENTO DE BIOTECNOLOGÍA Grupos de investigación (porcino): • Inmunología porcina: F. Alonso, J. Domínguez, A. Ezquerra, G. del Real, C. Revilla • Biotecnología y Biología Molecular y Celular R. Blasco, J.C. Saiz • Biotecnología de virus animales C. Alonso, J. M. Escribano Spin off DEPARTAMENTO DE BIOTECNOLOGÍA Modelos víricos (porcino): Virus de la estomatitis vesicular Virus de la fiebre aftosa Virus de la peste porcina africana Virus de la peste porcina clásica Virus del síndrome respiratorio y reproductivo porcino Virus de la gripe Enterovirus porcinos Virus de la hepatitis E DEPARTAMENTO DE BIOTECNOLOGÍA Líneas de investigación (porcino): Desarrollo de: Vectores virales Adyuvantes Biofactorias Vacunas Sistemas de detección (serológica y genómica) Ac Monoclonales Antivirales (Interacción patógeno-célula hospedador) DEPARTAMENTO DE BIOTECNOLOGÍA Líneas de investigación (porcino): Vectores virales: Mejora de sistemas de expresión Baculovirus • Hasta 8 veces más producción • Mejor expressión y secrección Vaccinia HindIII EcoRI YFG My HIS c pRB21-Myc-His Amp 199k Da 116 kDa 97 kDa 54 kDa 37 kDa Coomassie Suero porcino (IgG) DEPARTAMENTO DE BIOTECNOLOGÍA Líneas de investigación (porcino): Biofactorias • IBES® = Improved Baculovirus Expression System 1,000 mg/L IBES® + Top-Bac® 400 mg/L 100 mg/L Top-Bac® Conventional Bac DEPARTAMENTO DE BIOTECNOLOGÍA Líneas de investigación (porcino): Adyuvantes Direccionamiento Uso de ligandos específicos como adyuvantes para el direccionamiento de antígenos a células de SI Nanopartículas de transporte dirigido para vacunas DEPARTAMENTO DE BIOTECNOLOGÍA Líneas de investigación (porcino): Adyuvantes Direccionamiento Análisis de la capacidad inmunomoduladora de citoquinas y quimioquinas 100 pfu 100 S IRES S IRES poly I:C nAb Pk VPg PBS Cn (1.335) Survival (%) 5´NCR 75 Análisis de la capacidad inmunomoduladora de regiones genómicas no codificantes de virus RNA 50 25 5´NCR S (470) (403) IRES 0 0 5 10 dpi 15 DEPARTAMENTO DE BIOTECNOLOGÍA Líneas de investigación (porcino): Sistemas de detección (genómica y serológica) Polimorfismos del gen Mx1 en cerdo Ibérico Susceptibilidad a la infección por virus de Influenza porcina y PRRS a b g aa ab ag bb gg N (%) N (%) N (%) N (%) N (%) TORBISCAL 134 (87,6%) _ 19 (12,4%) _ GUADYERBAS 27 (71,1%) _ 8 (21,1%) _ 3 (7,9%) OTROS 139 (97,9%) 3 (2,1%) _ 0 (0%) _ JABALÍ 55 (88,7%) 5 (8,1%) _ 2 (3,2%) _ DUROC 32 (82,1%) 7 (17,9%) _ 0 (0%) _ LANDRACE 13 (65,0%) 6 (31,6%) _ 1 (5%) _ LARGE WHITE 21 (100%) 0 (0%) _ 0 (0%) _ MEISHAN 16 (100%) 0 (0%) _ 0 (0%) _ ZUMU 80 (100%) 0 (0%) _ 0 (0%) _ 450 (a,wt) aa IBÉRICO 422 450 ag 422 (g, D28) gg 0 (0%) DEPARTAMENTO DE BIOTECNOLOGÍA Líneas de investigación (porcino): Sistemas de detección (serológica y genómica) 86 KDa ELISA “casero” (P/N) 8 6 4 50 KDa 2 37 KDa 0 0 1.2 1 1.0 3 4 5 6 7 8 Golden Standard (Ratio) 0.8 A495 2 0.6 0.4 SENSIBILIDAD ESPECIFICIDAD 0.2 80 40 20 10 Antigen (ng/well) 5 2.5 Humano Porcino “Casero” Humano Porcino 96.4 % 100 % 100 % 96.9 % comercial 96,4 % 88.2 % 75 % 83,3 % Desarrollo, optimización y validación de inmunoensayos: Especificidad y Sensibilidad DEPARTAMENTO DE BIOTECNOLOGÍA Líneas de investigación (porcino): Ac Monoclonales Desarrollo y caracterización de anticuerpos monoclonales para: el análisis del SI porcino, con énfasis en APC 2F8 BAC-ORF2 BAC-CONTROL SIN INFECTAR Inmunoensayos y caracterizacion de interacciones célula-virus BAC-OR 2 4G11 BAC-Δ (1-111) ORF2 BAC-Δ (1-111) ORF2 BAC-CONTROL SIN INFECTAR DEPARTAMENTO DE BIOTECNOLOGÍA Líneas de investigación (porcino): Antivirales (Interacción patógeno-célula hospedador) VPA 7 VIRAL FAMILIES (ENVELOPED & NON-ENVELOPED) O Vero Log virus yield (PFU/ml) OH 120 Cell viability (%) 100 80 BHK-21 8 h 60 BHK-21 25 h Preinfection treatment * * * * * * * EMCVERAV SFV SINV VSV LCMV ASFV WNV USUV Non-enveloped Vero 8 h 40 12 11 10 9 8 7 6 5 4 3 2 1 Enveloped Control VPA Post-infection treatment * * * * * * * EMCV ERAV SFV SINV VSV LCMV ASFV WNV USUV Non-enveloped Enveloped Vero 25 h 20 0 0 0.1 1 10 VPA (mM) 100 1000 Inhibición de la multiplicación de virus con envuelta en cultivo celular DEPARTAMENTO DE BIOTECNOLOGÍA Líneas de investigación (porcino): Antivirales (Interacción patógeno-célula hospedador) • Antivirales: Péptidos antivirales inhibidores: impiden el transporte de virus • Estatinas: Inhiben el colesterol • Antivirales de fuentes naturales: • resveratrol y oxyresveratrol (complemento piensos) (trans-2,3,4,5-tetrahydroxystilbenes) Oxyresveratrol Resveratrol