MICROORGANISMO PARA GENERACIÓN DE ENERGÍA ELÉCTRICA Bioelectrogénesis a partir de bacterias del género Geobacter UNIVERSIDAD DE GUANAJUATO División de Ciencias de la Salud e Ingenierías Departamento de Ingeniería Agroindustrial Licenciatura en Ingeniería Agroindustrial Biotecnología 9no Semestre Dr. César Díaz Pérez Elizabeth Flores Rodríguez Martes, 4 de diciembre de 2018 Índice Índice .................................................................................................................................................... 1 Introducción ......................................................................................................................................... 2 Microorganismos involucrados ............................................................................................................ 3 Origen ............................................................................................................................................... 3 Hábitat .............................................................................................................................................. 3 Descripción morfológica ................................................................................................................... 3 Metabolismo..................................................................................................................................... 3 Reproducción y crecimiento ............................................................................................................. 4 Producción biotecnológica ................................................................................................................... 4 Celda de Combustible Microbiana, CCM (Microbial Fuel Cell, MFC) ............................................... 4 Ánodo ............................................................................................................................................... 5 Cátodo .............................................................................................................................................. 5 Membrana de Intercambio de Protones (Proton Exchange Membrane, PEM) ............................... 5 Regulador.......................................................................................................................................... 5 Inversor ............................................................................................................................................. 6 Funcionamiento ................................................................................................................................ 6 Perspectivas.......................................................................................................................................... 6 Conclusión ............................................................................................................................................ 8 Referencias bibliográficas .................................................................................................................... 8 1 Introducción Debido a la forma en que se utilizan los combustibles se ha destruido gran parte del paisaje y cuerpos de agua, ocasionando contaminación que en muchos casos es irreversible y, ante este problema, es imprescindible obtener nuevas fuentes de energía eléctrica que causen un mínimo impacto en el medio ambiente y no dependan de los combustibles fósiles. Se conoce como bioelectrogénesis o bioelectricidad a la producción de electricidad que se lleva a cabo por seres vivos (Mohn, 2017), la cual se considera como una alternativa para generar energía de un modo más eficiente, ya que, al ver las ventajas se denota que es una biotecnología más barata, que contamina menos y se aprovecha en un proceso metabólico si la necesidad de alterarlo (Hernández Gómez & Sánchez Olvera, 2017). La bioelectrogénesis se deriva de estudiar los procesos que realizan los microorganismos, entre ellos la respiración. Sin embargo, el proceso para generar electricidad requiere un medio favorable para que la bacteria oxide materia orgánica y a la vez reduzca iones metálicos, liberando de esta forma los electrones a través de una membrana que, a su vez, representan la energía, que, en resumen, es la electricidad (Hernández Gómez & Sánchez Olvera, 2017). Este proceso puede llevarse a cabo en la mayoría de los organismos, pero muy pocos generan una cantidad considerable de electricidad para que pueda aprovecharse o notarse (Mohn, 2017). Se denomina Celda de Combustible Microbiana (CCM) al sistema bioeléctrico que emplea esta clase de microorganismos para generar electricidad a partir de energía química, su diseño consiste en un ánodo, un cátodo y una membrana de intercambio protónico que los separa y, a la vez, están conectados por un circuito eléctrico ( (Das & Mangwani, 2010). Existen microorganismos de diversas especies que se consideran aliados en generación de electricidad, entre ellos están las bacterias de las especies Shewanella putrefaciens, Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli y del género Geobacter de la familia Geobaceracea, ésta última fue la primera en conocerse, de ella sobresalen dos especies Geobacter sulfurreducens y Geobacter metalliresucens. Estas bacterias tienen la capacidad de transferir electrones a moléculas como el Fe (III) y Mn (IV) (Lovley, Dissimilatory Fe (III) and Mn(IV) Reduction, 1991) óxidos de nitrógeno (Lovley, Dissimilatory metal reduction, 1993),sustancias de alto peso molecular formadas por la degradación química y biológica de restos de plantas y animales (Lovley, Humic Substances as a Mediator for Microbially Catalyzed Metal Reduction, 1998). Permite la transferencia de electrones de forma directa a los electrodos, generando pequeñas corrientes eléctricas (Gregory, Bond, & Lovley, 2004) La capacidad de Geobacter para transferir electrones desde y hacia electrodos permite obtener electricidad a partir de materia orgánica (Bond & Lovley, 2003), o el uso de electrodos como donador de electrones para la reducción de contaminantes como nitrato, uranio y disolventes clorados (Wall & Krumholz, 149–166) .Además, puede oxidar cadenas de ácidos grasos, alcoholes y compuestos monoaromáticos (tolueno y fenol, que en concentraciones elevadas son cancerígenos); tienen un papel importante en el ciclo del carbono y la biorremediación ya que metabolizan contaminantes peligrosos para el ser humano a formas menos complejas (Hernández Gómez & Sánchez Olvera, 2017). 2 Microorganismos involucrados Origen Las especies de Geobacter fueron descubiertas en 1987 por el Dr. Derek R. Lovley (ver imagen 1) y sus colaboradores de la Universidad de Massachusetts Amherst (Poddar & Khurana, 2011) en un sedimento de agua del río Potomac en Washington D.C. A este género se le asociaron descubrimientos con la facultad de respirar uranio, la biodegradación anaerobia de compuestos derivados del petróleo, la respiración de ácidos húmicos, la capacidad de generar electricidad y la identificación de nanocables conductores (Lovley, Dissimilatory Fe (III) and Mn(IV) Reduction, 1991). Derek Lovley y sus colegas han encontrado más de 20 especies de la familia Geobacter (Roach, 2004) Hábitat Imagen 1 Derek Lovley, pionero en bioelectrogénesis con el género Geobacter. Se encuentran en sedimentos de agua dulce, marinos anóxicos, sedimentos de sal de pantano, ambientes subterráneos y acuíferos. Dichos ambientes son ricos en nitratos y sulfatos, pero deben ser espacios libres de oxígeno puro (Holmes, Bond, O’Neil, Reimers, & Tender L. R.:Lovley, 2004) Descripción morfológica El género Geobacter pertenece al grupo Deltaproteobacteria de la familia Geobacteraceae, son Gram-negativas y se caracterizan por tener una forma recta o ligeramente curveada, varían de 1.2-2.0 µm de longitud y 0.5-0.6 µm de diámetro, además, poseen dos apéndices celulares, flagelos y Pili como se observa en la imagen 2 de la derecha (Shelobolina et al, 2007) (Straub & Buchholz-Cleven, 2001). Los flagelos son estructuras proteicas de 20 nm de diámetro y 16 µm de longitud, suele haber dos por célula. Son los que permiten el Imagen 2 Morfología de Geobacter sulfurreducens. desplazamiento de la bacteria y su presencia es vital para la búsqueda de Fe (III) y metales. Los Pili son estructuras proteicas, conductoras de electricidad, su función es transferir electrones desde la superficie externa del Geobacter hasta los materiales reductores localizados al costado de la célula. La cantidad varía de 100 hasta 1000 por bacteria, miden de 3-5 µm de diámetro por 1-5 µm de longitud. Le proveen la habilidad de transferir electrones al hierro insoluble, metales o electrodos (Shelobolina, Vrionis, Findlay, & Lovley, 2008) Metabolismo El metabolismo para degradar los contaminantes depende de la obtención de la energía de éstos, y se clasifican en fotótrofos, quimiorganótrofos y quimiolitótrofos. En general, el metabolismo es quimiorganótrofo anaerobio, utilizan compuestos orgánicos como fuente de energía y de carbono para su crecimiento y desarrollo (Romero, Vásquez, & Lugo, 2012). En respiración anaerobia requiere la presencia de receptores de electrones como nitratos, sulfatos, fumaratos, ferricianuro, Fe (III) (Lovley, Dissimilatory Fe (III) and Mn(IV) Reduction, 1991), oxígeno y electrodos (Bond & Lovley, 3 2003). También, posee una red de citocromos que constituye un mecanismo de transporte electrónico y vincula entre sí la membrana interna, el periplasma y la membrana externa, con el fin de transferir los electrones desde una sustancia oxidada a otra que se reduce (Romero, Vásquez, & Lugo, 2012). Para obtener los electrones, se oxida la materia orgánica hasta producir dióxido de carbono, agua, energía en forma utilizable (electrones) y ATP (Lovley, Dissimilatory metal reduction, 1993) y el citocromo actúa como un capacitor almacenando energía (Romero, Vásquez, & Lugo, 2012). Reproducción y crecimiento El proceso reproductivo es fisión binaria, las células individuales se duplican en un tiempo de 19 ±3.6 h en laboratorio. El crecimiento ocurre en una serie de fases, en la primera (fase Lag) las células se ajustan a su nuevo ambiente, en la segunda, fase exponencial, la población se duplica a intervalos regulares bajo condiciones óptimas de pH y temperatura. La tercera etapa, fase estacionaria, es cuando el número de células producidas es igual a la cantidad de células que mueren, a esto se le denomina equilibrio dinámico, el crecimiento bacteriano se detiene debido al agotamiento de algún nutriente. La fase de muerte/declinación se consigue cuando la tasa de destrucción supera a la tasa de crecimiento. Las condiciones óptimas de crecimiento son un pH en rango de 6.2-7.4 y temperatura de 22-30 °C. Producción biotecnológica El género Geobacter puede transformar internamente energía química en energía eléctrica, transfiriendo los electrones derivados de la oxidación de compuestos orgánicos a electrodos, constituyendo una celda de combustible microbiana (Salgado, 2009) Para producir energía eléctrica empleando CCM se requieren elementos básicos como son: un equipo que transforme la energía química de la materia orgánica en energía eléctrica (CCM), un elemento que proteja la celda de procesos inadecuados de carga y descarga, que es conocido como regulador de carga; y un elemento que transforme la corriente directa en alterna, el inversor. Celda de Combustible Microbiana, CCM (Microbial Fuel Cell, MFC) La producción de esta biotecnología consiste en una celda de combustible microbiana (CCM) la cual se describe en la imagen 3, una CCM es un reactor bio-electroquímico capaz de convertir la energía química en energía eléctrica mediante reacciones químicas catalizadas por Geobacter en condiciones anóxicas, ausencia de oxígeno puro, pero en presencia de nitratos o sulfatos como agentes de oxidación cuando se descompone la materia orgánica. La estructura de una CCM consiste en dos compartimientos, uno anódico y uno catódico que están separados por una membrana permeable de intercambio de protones (Romero, Vásquez, & Lugo, 2012). El ánodo se conserva en condiciones anaeróbicas donde una película del Geobacter sobrepuesta oxida la materia orgánica y genera dióxido de carbono, protones y electrones. Los electrones viajan a través de una resistencia que conecta el ánodo con el cátodo, originando una pequeña corriente que puede ser medida y utilizada para realizar trabajo (Lovley, Bug juice: harvesting electricity with 4 microorganisms, 2006). La transferencia de electrones sobre el electrodo es directa debido a los Pili de la bacteria, ya que se adhieren a los electrodos y permiten que los electrones se transfieran desde la materia orgánica hasta el ánodo. Imagen 3 Diagrama esquemático de una Celda de Combustible Microbiana. Ánodo El material con el que está construido el ánodo debe ser conductivo, biocompatible y químicamente estables en la solución del reactor. El material más versátil es el carbón, le provee una superficie áspera para que las bacterias se anclen firmemente y está disponible en placas de grafito compacto o barras, aunado a que es más económico, fáciles de manipular y tienen un área de contacto definida (Yia et al., 2009) Cátodo El material debe ser conductivo, biocompatible y químicamente estable para soportar la interfaz donde se reduce el oxígeno puro con los protones y electrones. El material afecta el desempeño de la CCM (Bond & Lovley, 2003). Membrana de Intercambio de Protones (Proton Exchange Membrane, PEM) El material del que está construida debe poseer alta selectividad de protones, estabilidad y firmeza ya que debe canalizar los protones en una sola dirección desde el ánodo hacia el cátodo. La PEM más utilizada es la Nafion® 117 con alta selectividad, pero baja estabilidad, la otra opción utilizada es el Ultrex con baja selectividad de protones, pero una estabilidad muy alta (Logan & regan, 2006) Regulador Se encarga de conectar los módulos a la carga, monitores el sistema y establece los parámetros para que funcione de forma correcta, el parámetro fundamental es el voltaje, puesto que, debe mantenerse constante en el tiempo (Romero, Vásquez, & Lugo, 2012). 5 Inversor Su función es transformar la corriente continua generada por los módulos de CCM en corriente alterna con magnitud de 110 V o 120 V, es necesario para lograr el funcionamiento de los aparatos electrónicos (Romero, Vásquez, & Lugo, 2012). Funcionamiento La forma de aplicación de estas celdas está basada en el mecanismo que usan las baterías convencionales como se ilustra en la imagen 4, las cuales utilizan láminas de materiales conductores y sustancias químicas que almacenan energía que es transformada en energía eléctrica por las láminas. No obstante, las CCM donde se utilizan organismos como Geobacter solo necesitan compuestos orgánicos (Hernández Gómez & Sánchez Olvera, 2017). Imagen 4 Sistema bioeléctrico (Hernández Gómez & Sánchez Olvera, 2017). Perspectivas Medina & Zapata (2017) en su investigación de tesis realizaron la evaluación de la producción de energía eléctrica y la disminución de la Demanda Química de Oxígeno (DQO1) en agua residual 1 La Demanda Química de Oxígeno es un parámetro para estimar la calidad del agua, cuanto mayor es la DQO más contaminante es la muestra. 6 sintética, mediante la acción de dos bacterias, Escherichia coli y Pseudomonas aeruginosa, utilizando electrodos de grafito y tela de carbono. Como resultados se mostró que Escherichia coli bajo determinadas condiciones de pH y temperatura obtuvo los mayores valores de voltaje, medidos en mV. Concluyendo la factibilidad del uso de bacterias como la antes mencionada en celdas de combustible microbianas para producir energía eléctrica y disminución de DQO, ya que proporcionan un proceso de depuración y producción de energía simultaneo cuyo objetivo es disminuir los costos de operación de cualquier planta tratadora de aguas residuales. La energía que se puede generar mediante una CCM a través de bacterias bioelectrogénicas en comparación con otras fuentes de energía es baja, ya que esta biotecnología es considerada relativamente nueva, sin embargo, a pesar de ello ha avanzado en eficiencia debido a que en la actualidad se produce una densidad de potencia en el electrodo de W/m2 ante los mW/m2 obtenidos en las primeras experiencias (ver Tabla 1). Aunado a que el tamaño de los electrodos ha disminuido hasta 800 veces y la densidad de corriente ha aumentado incluso hasta 100 veces du producción en tan solo 10 años de investigación (Romero, Vásquez, & Lugo, 2012). Tabla 1 Resultados de los estudios realizados en CCM con bacterias del género Geobacter (Bond & Lovley, 2003) (Richter, y otros, 2008) (Yia et al., 2009) (Lovley, Derek R., 2006). En 2017 Collazos y Bravo evaluaron la diversidad bacteriana asociada a biopelículas formadas sobre los ánodos de celdas de combustible microbianas utilizando muestras ambientales como inóculo (agua residual doméstica, ARD y agua residual industrial, ARI) y único sustrato energético. Las celdas se monitorearon en función de la producción de energía eléctrica y se realizó la caracterización molecular a las biopelículas formadas. En los resultados reportaron valores de densidad de potencia máxima de 4.85 mW/m2 para ARD y de 1.85 mW/m2 para el caso de ARI, con disminuciones de 71 % 7 de DBO2 par el ARD y de 59 % para ARI. En el reconocimiento de las secuencias a partir de las biopelículas sobre los ánodos, se recuperaron 15 secuencias mediante la amplificación del gen del ARNr 16s y mediante un análisis filogenético se ubicó a estas secuencias en la clase Deltaproteobacteria y entre ellas, se encuentra la familia Geobacteraceae. De este trabajo se concluyó que esta biotecnología debería enfocarse más en temas de biorremediación que a la vez permitan la obtención de energía eléctrica. (Collazos & Bravo, 2017) Conclusión El utilizar el proceso metabólico de estos microorganismos en la bioelectrogénesis en actividades humanas forma parte de una red de beneficios biotecnológicos con la implementación de técnicas para el aprovechamiento de estos procesos y sus reactivos. Las bacterias del género Geobacter poseen características que podrían controlarse fácilmente en CCM para su crecimiento, desarrollo y producción de electricidad. El potencial de producción es el requerido para proveer de energía necesaria a una vivienda, por lo que esta forma de energía puede ser una solución para ciertas zonas que no poseen una red eléctrica (Romero, Vásquez, & Lugo, 2012). Referencias bibliográficas Bond, D. R., & Lovley, D. R. (2003). Electricity Production by Geobacter sulfurreducens Attached to Electrodes. 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