METABOLISMO MICROBIANO Crecimiento Bacteriano METABOLISMO MICROBIANO METABOLISMO MICROBIANO No puede haber vida sin una fuente de energía Consiste de un gran número de reacciones químicas destinadas a transformar las moléculas nutritivas en elementos que posteriormente serán utilizados para la síntesis de los componentes estructurales; como pueden ser las proteínas. Funciones específicas a saber: • Obtener energía química del entorno, almacenarla, para utilizar luego en diferentes funciones celulares. • Convertir los nutrientes exógenos en unidades precursoras de los componentes macromoleculares de la célula bacteriana. • Formar y degradar moléculas necesarias para funciones celulares específicas. Ejemplos: movilidad, transporte de nutrientes. La transformación de los nutrientes en 1 compuesto útil para la subsistencia de un organismo se lleva a cabo por medio de las reacciones químicas que realizan unas proteínas conocidas como Enzimas La energía liberada en las reacciones catabólicas se usa para fosforilar ADP, generando ATP. La energía almacenada en el ATP se utiliza en la mayoría de los trabajos celulares. Por lo tanto, el ATP acopla los procesos productores de energía de la célula a los consumidores de energía. La función química esencial del metabolismo productor de energía es la de sintetizar moléculas orgánicas que poseen un alto nivel de energía potencial en forma de enlaces ricos en energía, la que luego es acoplada por medio de reacciones a las vías anabólicas FUNCIONES DEL METABOLISMO MICROBIANO -Permite conocer el modo de vida y el hábitat de diferentes especies bacterianas. El ser humano actuando como hospedero por ejemplo, ofrece una variedad de nichos ecológicos que se diferencian entre sí por aspectos físicos y químicos (temperatura, concentración de O2, pH, presión osmótica, etc.) en los cuales pueden crecer y multiplicarse distintas especies bacterianas, de acuerdo a sus requerimientos nutricionales. -Permite formular medios de cultivo para el aislamiento e identificación de los patógenos participantes. -Desde el punto de vista terapéutico nos permite conocer y entender el modo de acción de algunos antimicrobianos que bloquean una vía metabólica o la síntesis de alguna macromolécula esencial para la bacteria. Tipos de metabolismo microbiano I.- Según la fuente de carbono que utilizan. Las bacterias se pueden dividir de acuerdo a la forma en la que el organismo obtiene o utiliza el carbono para la construcción de la masa celular. II.- Según el punto de vista Biosintético La forma en la que organismo obtiene los equivalentes reductores para la conservación de energía o en las reacciones biosintéticas: • Autótrofos • Heterótrofos • Mixotrofos • Litotrofo • Organotrofo III.- Según la fuente de energía Según la forma en la que el organismo obtiene la energía para vivir y crecer • Quimiotrofos • Fototrofos Tipos de metabolismo microbiano • Quimiolitoautótrofos En la práctica, estos términos se combinan casi libremente • Fotolitoautótrofos • Quimiolitoheterótrofos • Quimioorganoheterótrofos • Fotoorganotrofos I. Según la fuente de carbono que utilizan •Autótrofo: crecen sintetizando sus materiales a partir de sustancias inorgánicas sencillas. El carbono se obtiene del dióxido de carbono (CO2). •Heterótrofo: su fuente de carbono es orgánica. El carbono se obtiene de compuestos orgánicos. En este último grupo se encuentran todas las bacterias de interés médico. •Mixótrofo: son aquellas bacterias con metabolismo energético litotrofo (obtienen energía de compuestos inorgánicos), pero requieren sustancias orgánicas como nutrientes para su metabolismo biosintético. El carbono se obtiene tanto de compuestos orgánicos como fijando el dióxido de carbono. II. Según el punto de vista biosintético La forma en la que organismo obtiene los equivalentes reductores para la conservación de energía o en las reacciones biosintéticas: •Litotrofo: son aquellas que sólo requieren sustancias inorgánicas sencillas Los equivalentes reductores se obtienen de compuestos inorgánicos. (SH2 SO, NH3, NO - , Fe, etc.). •Organotrofo: requieren compuestos orgánicos. Los equivalentes reductores se obtienen de compuestos orgánicos. (hidratos de carbono, hidrocarburos, lípidos, proteínas, alcoholes). III. Según la fuente de energía: Según la forma en la que el organismo obtiene la energía para vivir y crecer: •Quimiotrofo: externos. La energía se obtiene de compuestos químicos • Fototrofo: La energía se obtiene de la luz En la práctica, estos términos se combinan casi libremente •Quimiolitoautótrofos: obtienen energía de la oxidación de compuestos inorgánicos y el carbono de la fijación del dióxido de carbono. Ejemplos: bacterias nitrificantes, bacterias oxidantes del azufre, bacterias oxidantes del hierro, bacterias oxidantes del hidrógeno. •Fotolitoautótrofos: obtienen energía de la luz y el carbono de la fijación del dióxido de carbono, usando compuestos inorgánicos como equivalentes reductores. Ejemplos: Cianobacterias (agua como equivalente reductor), Chlorobiaceae, Chromaticaceae (sulfuro de hidrógeno), Chloroflexus (hidrógeno) En la práctica, estos términos se combinan casi libremente •Quimiolitoheterótrofos : obtienen energía de la oxidación de compuestos inorgánicos, pero no pueden fijar el dióxido de carbono. Ejemplos: algunos Nitrobacter spp. •Quimioorganoheterótrofos: obtienen energía, carbono y equivalentes reductores para las reacciones biosintéticas de compuestos orgánicos. Ejemplos: la mayoría de las bacterias, como Escherichia coli, Bacillus spp., Actinobacteria. Las bacterias patógenas que viven a expensas de la materia orgánica son quimioorganótrofas. •Fotoorganotrofos: obtienen energía de la luz y el carbono y los equivalentes reductores para las reacciones biosintéticas de compuestos orgánicos. Algunas especies son terminantemente heterótrofas, pero muchas otras pueden también fijar el dióxido de carbono y son mixótrofas. Ejemplos: Rhodobacter, Rhodopseudomonas, Rhodospirillum, Rhodomicrobium, Rhodocyclus, Heliobacterium. Tipos de metabolismo microbiano Tipos de metabolismo microbiano Tipos de metabolismo microbiano SUMINISTRO ENERGÉTICO: Las células bacterianas, poseen una gran variedad de sustancias como fuente de energía. En los seres vivos, la utilización de la energía potencial contenida en los nutrientes se produce por reacciones de oxido-reducción En las bacterias de interés médico los sistemas de oxidoreducción que transforman la energía química de los nutrientes en una forma biológicamente útil, incluyen la Fermentación Respiración. y la RESPIRACIÓN Es un proceso metabólico productor de energía en el que los donadores de electrones son compuestos orgánicos y el aceptor final de electrones es el oxígeno molecular. Una característica distintiva de la mayoría de los procesos respiratorios es la presencia en la célula de un equipo de enzimas transportadoras, que constituyen la cadena respiratoria de transporte de electrones. La energía que se libera durante la oxidación completa de un compuesto orgánico (respiración), es mucho mayor que la que procede su fermentación. El rendimiento total de ATP por mol de sustrato respirado es de 38 ATP; mientras que en la fermentación, es de 2 ATP. Muchos de los microorganismos que realizan respiración son aerobios estrictos, mientras otros ante condiciones de anaerobiosis pueden obtener la energía que necesitan, por fermentación o respiración anaeróbica. En este último caso los microorganismos son anaerobios facultativos. 1 Carbono 6 - P 2 3 RXs irreversible. Enzima reguladora de la glucólisis 4 La fructosa 1,6 fosfato se rompe en 2 moléculas. Desde aquí la glucólisis es dual. 5 6 Se Incorpora un Pi. Rx de Oxido -reducción 7 Hidrólisis de un Pi, lo usa el ADP para convertirse en ATP 8 9 10 Hidrólisis de un Pi del fosfoenolpiruvato, lo usa el ADP para convertirse en ATP, y como producto se forma piruvato CICLO DE KREBS ANAEROBIOSIS: Respiración Anaeróbica CICLO DE CORY CICLO DE KREBS CADENA RESPIRATORIA Y FOSFORILACIÓN OXIDATIVA Repaso…….. Macronutrientes Micronutrientes ATP Moneda de energía. C, O, H,N,S,P. K, Ca, Mg, Fe Zn, Co, Mo, Ni, Cu Repaso…….. Es una ruta metabólica que cataboliza glucosa a pi ruvato usando una serie de enzimas distintos a la glucólisis y a la ruta de la pentosa fosfato. La inmensa mayoría de las bacterias utilizan la glucólisis y la vía pentosa fosfato, siendo esta vía una vía secundaria Repaso…….. En un sentido amplio los microorganismos utilizan como fuente de energía una de las 3 siguientes: Fototrofos Captan energía de la Luz Solar Quimioorganotrofos Quimiolitrofos Oxidan moléculas orgánicas para obtener energía. Emplean nutrientes inorgánicos como fuente de energía. Repaso…….. Metabolismo CATABOLISMO Moléculas grandes y complejas son descompuestas en moléculas más pequeñas y sencillas, liberándose energía en el proceso. Parte de esta energía es atrapada y esta disponible para realizar un trabajo (puede utilizarse en el anabolismo). ANABOLISMO Es la síntesis de moléculas complejas a partir de moléculas más sencillas con consumo de energía. Repaso…….. Metabolismo CATABOLISMO • PROTEINAS Aminoácidos. • POLISACARIDOS • LÍPIDOS • Acetil CoA • Piruvato Di, Mono sacáridos. Ácidos grasos. Glicerol EL CICLO OPERA EN CONDICIONES DE AEROBIOSIS Y ES RESPONSABLE DE LA LIBERACION DE ENERGÍA, PRODUCTO DE LA OXIDACIÓN DE NADH Y FADH2 POR LA CADENA DE TRANSPORTE DE ELECTRONES. SIENDO EL OXIGENO MOLECULA ACEPTOR FINAL DE ELECTRONES. Productos intermediarios para el ciclo de Krebs. Las moléculas son oxidadas completamente a CO2 con producción de: ATP NADH FADH2 EL ATP SE FORMA COMO CONSECUENCIA DE LA ACTIVIDAD DE LA CADENA DE TRANSPORTE DE ELECTRONES. Eucariotas: Mitocondria. Procariotas: Membrana celular. OBTENCION DE ENERGÍA FERMENTACIÓN El sustrato energético es oxidado y degradado sin la participación de una aceptor externo de electrones. Condición: Anaerobiosis. Compuestos intermediarios son aceptor de e-. Dichas moléculas sirven tanto como dadores como aceptores de electrones. Ejm: Piruvato RESPIRACIÓN El metabolismo productor de energía puede utilizar aceptores exógenos de e- . AEROBIA Aceptor final de e- es el oxígeno. ANAEROBIA Aceptor final de eson productos inorgánicos. Fe +3, NO3, SO4, CO2. OBTENCION DE ENERGÍA PIRUVATO Los e- van a la cadena de transporte de e-. LA CARACTERISTICA ÚNICA DEL METABOLISMO MICROBIANO ES LA DIVERSIDAD DE FUENTES A PARTIR DE LAS CUALES SE GENERAN ATP, NADH… La mayoría de las bacterias tienen vías glucolíticas y la vía de las pentosas fosfatos. Vía Entner-Doudoroff Agrobacterium: es un género de bacterias gram negativas que causan tumores en las plantas. Rhizobium: es un género de bacterias gram-negativas del suelo que fijan nitrógeno atmosférico. Bacilos cortos. Pseudomona: es una especie de bacterias Gram-negativas, aeróbicas, con motilidad unipolar. Es un patógeno oportunista en humanos y también en plantas. Enterococcus faecalis. Gram + RESPIRACIÓN ANAEROBICA. Los electrones derivados de los azúcares y de otras moléculas orgánicas suelen ser cedidos a aceptores de electrones orgánicos endógenos (fermentación), o bien, al O 2 molecular mediante una cadena transportadora de electrones (respiración aerobia). Sin embargo, numerosas bacterias tienen cadenas transportadoras de electrones que pueden operar con aceptores de electrones exógenos diferentes al O 2 . Este proceso se denomina Respiración Anaerobia. Los principales aceptores de electrones son el nitrato, el sulfato y el CO2 , pero los metales y algunas moléculas orgánicas también pueden ser reducidos. RESPIRACIÓN ANAEROBICA. El proceso mediante el cual algunas bacterias utilizan nitrato como aceptor final de electrones se denomina a menudo reducción Desasimilatoria de nitrato. El nitrato puede ser reducido a nitrito por la nitrato reductasa, que sustituye a la citocromo oxidasa. El nitrito formado también es muy tóxico. Por consiguiente, normalmente el nitrato es reducido aún más hasta gas nitrógeno, un proceso denominado Desnitrificación. Existe una cantidad considerable de datos que indican que la desnitrificación es un proceso de varios pasos en el que participan cuatro enzimas: nitrato reductasa, nitrito reductasa, óxido nítrico reductasa y óxido nitroso reductasa. 02 Además de Paracoccus, la desnitrificación la realizan algunos miembros de los géneros Pseudomonas y Bacillus. Todos ellos utilizan esta ruta alternativa a como la respiración aerobia normal y pueden considerarse anaerobios facultativos. Si hay O2 , estas bacterias utilizan la respiración aerobia (el O2 reprime la síntesis de nitrato reductasa). RESPIRACIÓN ANAEROBICA. Dos tipos de nitrito reductasas bacterianas catalizan la formación de NO en las bacterias. Uno contiene los citocromos c y d\ (p. ej., Paracoccus y Pseudomonas aeruginosa), y el otro es una proteína con cobre (p. ej., Alcaligenes). La nitrito reductasa parece tener una localización periplásmica en las bacterias Gram negativas. La óxido nítrico reductasa cataliza la formación de óxido nitroso a partir de NO, y forma un complejo con el citocromo be en la membrana. Un ejemplo bien estudiado de Desnitrificación lo tenemos en la bacteria Gram negativa del suelo Paracoccus denitrificans, que reduce nitrato a N2 anaeróbicamente. Su cadena de transporte de electrones contiene dos de las enzimas ligadas a membrana (nitrato reductasa y oxido nítrico reductasa), mientras que las otras dos necesarias para la desnitrificación son periplásmicas (nitrito reductasa y óxido nitroso reductasa). Las cuatro enzimas utilizan los electrones procedentes de las coenzimas Q y c para reducir nitrato y generar FMP. RESPIRACIÓN ANAEROBICA. La Desnitrificación en suelo anaeróbico da lugar a la pérdida de nitrógeno del suelo y afecta negativamente a la fertilidad del terreno. Otros dos grupos importantes de bacterias que utilizan la respiración anaerobia son anaerobios obligados. Los que usan el CO2 o el carbonato como aceptor final de electrones reciben el nombre de metanógenos debido a que reducen el CO2 a metano. El sulfato también puede actuar como aceptor final en bacterias tales como Desulfovibrio. El sulfato es reducido a sulfuro (S2 ~ o H2S). BACTERIAS SULFOREDUCTORAS. La respiración anaerobia es muy prevalente en suelos y sedimentos anóxicos. Repaso…….. TRANSPORTE DE ELECTRONES. BOMBEO DE PROTONES. Repaso…….. Flavoproteinas (FMN) Citocromo Oxidasa Citocromos b, c1,c,a y a3 Repaso…….. Flavoproteinas FERMENTACION LIBERA ENERGIA A PARTIR DE AZUCARES U OTRAS MOLECULAS ORGANICAS, COMO AMINOACIDOS, PURINAS Y PIRIMIDINAS. NO NECESITA OXIGENO NO NECESITA UNA CADENA TRANSPORTADORA DE ELECTRONES NI UN CICLO DE KREBS UTILIZA UNA MOLECULA ORGANICA COMO ACEPTOR FINAL DE ELECTRONES. SE PRODUCEN PEQUEÑAS CANTIDADES DE ATP. DURANTE LA FERMENTACION LOS ELECTRONES SE TRANSFIEREN SE TRANFIEREN JUNTO CON LOS PROTONES AL ACIDO PIRUVICO FERMENTACIÓN En ausencia de respiración aerobia o anaerobia, el NADH no es oxidado por la cadena transportadora de electrones. Al considerar las fermentaciones microbianas deben tenerse en cuenta dos aspectos unifícadores: 1)la NADH es oxidada a NAD + , 2) El aceptor de electrones es piruvato o un derivado de éste. FERMENTACIÓN 1.- Fermentación Alcohólica: alcohol deshidrogenasa. PiruvatoEtanol. 2.-Fermentación ácido láctica: Homoláctica: piruvato – lactato: lactato deshidrogenasa 1 2 3 Heteroláctica: piruvato – lactato: FOSFOCETOLASA ETANOL, Co2,. 3.- Fermentación ácido fórmica: Piruvato – ácido fórmico – H2 y CO2 Fórmico hidrogenoliasa. 3.-1.- Fermentación ácido mixta. Productos: etanol, a.acético, láctico, succínico, fórmico. 3.2.- Fermentación Butanodiólica. 4.- Fermentación Butírica 5.- Fermentación Propionica 3.1 5 4 3.2 Biosíntesis de aminoácidos y proteínas. Los aminoácidos son indispensables para la biosíntesis de proteínas. Algunos microorganismos pueden sintetizar directa o indirectamente todos los aminoácidos a partir de los productos intermediarios del metabolismo de carbohidratos. Otra fuente importante de precursores (productos intermedios) de la síntesis de aminoácidos es el ciclo de Krebs. Los aminoácidos se forman a partir de 2 reacciones que se denominan: Aminación y Transaminación. Aminación: el agregado de un grupo amino al ácido pirúvico o a un ácido orgánico del ciclo de Krebs apropiado convierte el ácido en un aminoácido. Transaminación: Si el grupo amino proviene de una aminoácido preexistente. La mayoría de los aminoácidos presentes en el interior celular están destinados a ser unidades fundamentales para la síntesis de proteínas. A, G C,T,U