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Fundamentos y Técnicas de Análisis Bioquímico. Química Clínica.
Marcel Sayol
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MARCEL SAYOL
Médico Especialista en Medicina Familiar y Comunitaria
Miembro de la Sociedad Española de Medicina de Urgencias y Emergencias
Ingeniero Técnico
Profesor numerario de IES
FUNDAMENTOS Y TÉCNICAS DE
ANALISIS BIOQUÍMICO
QUÍMICA CLÍNICA
CICLO FORMATIVO DE GRADO SUPERIOR “LABORATORIO DE DIAGNÓSTICO
CLÍNICO”
CRÉDITO 4
Año 2005
Registro General de la Propiedad Intelectual. Número de asiento registral:
02/2006/4401
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ESTUDIO DEL METABOLISMO DE LOS LÍPIDOS
CONTENIDOS
Estructura, funciones y clasificación de los lípidos
Metabolismo de los lípidos
Lípidos séricos. Lipoproteínas
Procedimientos de medida de la concentración de lípidos
Patrones de alteración del metabolismo lipídico
OBJETIVOS ESPECÍFICOS
Describir la estructura química de cada una de las clases de lípidos, y clasificarlos
según este criterio
Describir los procesos de absorción y digestión de las grasas
Describir el proceso de oxidación de los ácidos grasos y la formación de cuerpos
cetónicos
Describir el proceso de biosíntesis de los ácidos grasos y del colesterol
Clasificar las lipoproteínas plasmáticas en función de su movilidad electroforética,
densidad, velocidad de sedimentación, tamaño y contenido
Definir las apolipoproteínas en función de su localización
Describir el proceso de transporte de los lípidos endógenos y de los exógenos
Enumerar los pasos a efectuar en el proceso de medida de la concentración de
lípidos
Describir las clases de aspectos del suero
Definir los procedimientos más comunes de medida del colesterol y de los TG
Definir los criterios de valoración de riesgo de enfermedades cardiovasculares
Clasificar las hiperlipoproteinemias y las hipolipoproteinemias
Clasificar las anormalidades lisosómicas de lípidos de presentación más frecuente
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1. Estructura, funciones y clasificación de los lípidos
1.1.
Química de los lípidos
Desde el punto de vista de su estructura química, los lípidos son compuestos
orgánicos hidrocarbonados que constituyen ésteres reales o potenciales de ácidos
grasos.
Todos ellos tienen dos propiedades comunes: ser insolubles en agua y ser extraíbles
de las células y de los tejidos por disolventes no polares tales como el cloroformo, el
éter y el benceno entre otros.
Existen diversas clases de lípidos según su constitución química, así pues cabe
destacar en primer lugar a los ácidos grasos, compuestos esenciales de la mayor
parte de los lípidos, los triglicéridos que son los más abundantes, los fosfolípidos,
formados por la adición de un grupo fosfórico, los esfingolípidos formados por la
unión de un ácido graso con una molécula de esfingosina, los glucolípidos
formados por la unión con un hidrato de carbono, los lípidos insaponificables en
los que se incluyen los esteroides y los terpenos, las ceras formadas por la unión de
un ácido graso y un alcohol de cadena larga, y por último las lipoproteínas
combinación de un lípido y una proteína, muy abundantes en el plasma.
Las funciones de cada una de estas clases de lípidos es diferente, pero cabe destacar
como las más relevantes la de constituir la forma más importante de almacenar
energía y la de formar las membranas celulares.
1.2 Ácidos grasos
Son ácidos alifáticos de cadena larga y constituyen las unidades básicas de varias
clases de lípidos, además son los responsables del aspecto graso o aceitoso que
poseen todos los lípidos. Los ácidos grasos no se encuentran en estado libre sino que
aparecen como producto de la hidrólisis de los lípidos o unidos a ellos por enlaces
covalentes. Poseen una larga cadena hidrocarbonada con un grupo carboxilo
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terminal, ejemplo de ello son el ácido palmítico y el ácido oleico representados en la
figura 2.1
Los ácidos grasos tienen una fórmula común: R-COOH, donde R representa la larga
cadena hidrocarbonada que puede tener de 4 a 26 átomos de carbono, o bien más
detalladamente: CH3-(CH2)n-COOH. Su nombre sistemático deriva del hidrocarburo
con el cual está emparentado sustituyendo la terminación o por la de oico final.
Cuando tiene un doble enlace la sustitución es por cenoico, si tiene dos enlaces dobles
la sustitución es por dienoico, y con tres dobles trienoico. El símbolo 18:0 quiere
decir un ácido graso con 18 átomos de carbono sin enlaces dobles, el símbolo 18:2
significa un ácido graso de 18 carbonos con dos dobles enlaces, etc. Los átomos de
carbono se numeran a partir del extremo carboxilo y a los átomos número 2 y 3 se les
llama a veces carbono α y carbono β respectivamente y al último carbono (el carbono
metilado del extremo distal de la cadena), carbono ω.
La posición del doble enlace viene representada por el símbolo Δm por ejemplo Δ10
indica que hay un doble enlace entre los carbonos números 10 y 11. En el caso de
haber más de un doble enlace, la notación Δm indicará la posición del primero de
ellos, quedando los siguientes en las posiciones más cercanas posibles al primero,
teniendo en cuenta que los enlaces dobles no se hallan nunca conjugados, es decir no
tienen la forma: (-CH=CH-CH=CH-), sino que se encuentran separados por un grupo
metileno: (-CH=CH-CH2-CH=CH-). Así pues, la notación que correspondería al ácido
linoleico sería 18:2 Δ6, igualmente para el ácido linolénico sería: 18:3 Δ3, y para el
ácido araquidónico: 20:4 Δ6.
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Figura 2.1 Dos ejemplos de la estructura de un ácido graso
Figura 2.1
Ácido esteárico
O
C CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2- CH2- CH2- CH2- CH2-CH3
HO
Ácido oleico
O
C CH2 -CH2-CH2- CH2-CH2- CH2-CH2 -CH
CH- CH2-CH2-CH2 - CH2- CH2-CH2-CH2-CH3
HO
La cadena hidrocarbonada de la cual están formados los ácidos grasos puede ser de
tres tipos, saturada, con uno o más enlaces dobles y con enlaces triples. Los ácidos
grasos saturados son aquellos que poseen enlaces simples entre sus átomos de
carbono, los ácidos grasos monoinsaturados son aquellos que tienen un solo
enlace doble y los ácidos grasos poliinsaturados son aquellos que tienen dos o más
enlaces dobles en su cadena. Los ácidos grasos con algún enlace triple son escasos en
la naturaleza.
Los ácidos grasos difieren entre sí por la longitud de su cadena y por el número y la
posición de sus enlaces insaturados. La mayoría de los ácidos grasos naturales poseen
un número par de átomos de carbono y los que contienen 16 o 18 átomos de carbono
son los que más abundan.
Una característica muy importante de los ácidos grasos es la de tener un extremo, el
carboxilo, muy polar e hidrófilo, mientras que el otro extremo es no polar e
hidrófobo. Esta característica se manifiesta claramente cuando se ponen en contacto
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un ácido graso y agua, el ácido graso forma entonces una capa monomolecular sobre
la superficie del agua, de manera que el grupo carboxilo se introduce en el agua y la
cadena no polar sobresale por encima de la superficie sin contactar por lo tanto con el
agua.
Se denominan ácidos grasos esenciales aquellos que siendo imprescindibles para
el funcionamiento del organismo, se deben incluir en la dieta puesto que el
metabolismo carece de los mecanismos para su síntesis endógena. Los ácidos grasos
esenciales son tres: el ácido linoleico, el ácido linolénico y el ácido araquidónico,
aunque respecto a este último hay autores que no lo consideran esencial debido a que
se puede sintetizar a partir del ácido linoleico y por lo tanto sería sólo esencial si
existiera carencia de éste.
Los ácidos grasos más abundantes que se hallan en la naturaleza se resumen en las
tablas 2.1 y 2.2 siguientes.
TABLA 2.1
ÁCIDOS GRASOS SATURADOS
Nº de
Estructura química Nombre
átomos de
Nombre trivial
sistemático
carbono
12
CH3(CH2)10COOH
n-dodecanoico
Ácido láurico
14
CH3(CH2)12COOH
n-tetradecanoico
Ácido mirístico
16
CH3(CH2)14COOH
n-hexadecanoico
Ácido palmítico
18
CH3(CH2)16COOH
n-octadecanoico
Ácido esteárico
20
CH3(CH2)18COOH
n-eicosanoico
Ácido araquídico
24
CH3(CH2)22COOH
n-tetracosanoico
Ácido lignocérico
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TABLA 2.2
ÁCIDOS GRASOS INSATURADOS
Nº de átomos de
Estructura química
carbono
16
Nombre
trivial
CH3(CH2)5CH=CH(CH2)7COOH
Ácido
palmitoleico
18
CH3(CH2)7CH=CH(CH2)7COOH
Ácido oleico
18
CH3(CH2)4CH=CHCH2CH=CH(CH2)7COOH
Ácido
linoleico
18
CH3CH2CH=CHCH2CH=CHCH2CH=CH(CH2)7COOH
Ácido
linolénico
20
CH3(CH2)4CH=CHCH2CH=CHCH2CH=CHCH2CH=CH(CH2)3COOH Ácido
araquidónico
1.3 Triglicéridos
Son compuestos que contienen ácidos grasos como constituyentes, son los más
sencillos y abundantes de entre todos los lípidos. Para su designación también se
emplean los sinónimos siguientes: lípidos neutros, grasas y triacilglicéridos y suelen
representarse por las siglas TG.
Químicamente son ésteres del alcohol glicerina y de tres moléculas de ácidos grasos
(R1, R2, R3). En la figura 2.2 se representa la estructura general de los triglicéridos y
como ejemplo uno de ellos, la tripalmitina.
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Figura 2.2 Estructura general de los triglicéridos. Ejemplo: tripalmitina
Estructura general de un ácido graso
H
H
H
H
C
C
C
O
O
O
C
R1
H
C
C
O
R2
C
Glicerina
O
R3
Tripalmitina
Glicerina
H
O
H
O
O
C
CH 2- CH2- CH2- CH2- CH 2- CH2- CH2- CH2- CH 2- CH2- CH2- CH2- CH 2- CH2-CH3
O
H
C
O
C
CH 2- CH2- CH2- CH2- CH 2- CH2- CH2- CH2- CH 2- CH2- CH2- CH2- CH 2- CH2-CH3
O
H
C
O
C
CH 2- CH2- CH2- CH2- CH 2- CH2- CH2- CH2- CH 2- CH2- CH2- CH2- CH 2- CH2-CH3
H
Res iduos de palmítico
Figura 2.2
Los TG no poseen carga eléctrica, y por lo tanto no son polares pero sí hidrofóbicos y
tienen una densidad más baja que la del agua. Constituyen los componentes
principales del depósito graso de reserva en las células animales y en las plantas, pero
no se encuentran formando las membranas celulares. Existen dos grupos de TG, los
simples y los mixtos. Los primeros contienen los tres ácidos grasos iguales,
mientras que los mixtos contienen dos o más ácidos grasos distintos.
Si los TG se someten a ebullición o se mezclan con ácidos o con bases, se hidrolizan,
proceso que recibe el nombre de saponificación. El proceso resumido se representa
en el siguiente esquema:
3NaOH
TG →
Glicerina + 3 ácido graso-Na
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Existen enzimas pancreáticos llamados lipasas que también tienen acción
hidrolizante sobre los TG.
Los TG que proceden de fuentes animales suelen tener cadenas de ácidos grasos
cortas y saturadas y se solidifican a temperatura ambiente, los que proceden de
fuentes vegetales suelen tener cadenas más largas y poliinsaturadas y permanecen en
estado líquido incluso a temperaturas bajas.
Cuando los TG se exponen al aire puede ocurrir un proceso llamado auto-oxidación
consistente en que el oxígeno molecular puede atacar a los ácidos grasos que tienen
dos o más enlaces dobles rindiendo productos complejos (éstos son los responsables
del sabor desagradable de las grasas rancias). El proceso de auto-oxidación no tiene
lugar normalmente en las células puesto que lo impide la acción de la vitamina E,
algunos enzimas y posiblemente también la acción de la vitamina C, pero puede
ocurrir que en algunas enfermedades en las que se producen depósitos lipídicos
anormales en los tejidos, el proceso de auto-oxidación sí tenga lugar.
La principal función de los TG es la de constituirse como lípidos de reserva, para ello
se localizan en el citoplasma celular en forma de gotitas aceitosas microscópicas
dispersadas y emulsionadas. En los adipocitos o células grasas, los TG se encuentran
almacenados en grandes cantidades en forma de gotitas de grasa que ocupan
prácticamente todo el citoplasma. El poder de almacenar energía es mucho mayor en
los TG que en el glucógeno ya que a igualdad de masa, rinden más del doble de
calorías los primeros que el segundo. Otra función importante de los TG que se
encuentran almacenados en los adipocitos, es servir de aislante térmico frente a
temperaturas muy bajas, función que se hace especialmente patente en algunos
animales como las focas y las morsas entre otros. El tejido adiposo sirve también
como tejido de relleno que ocupa los espacios existentes entre los órganos internos.
1.4 Fosfolípidos
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Llamados también lípidos polares, son compuestos sólidos que tienen un aspecto
céreo y se localizan casi exclusivamente en las membranas celulares y en el plasma,
aunque se pueden encontrar trazas en los depósitos grasos. Su función principal,
como se deduce, es pues de tipo estructural.
Los fosfolípidos son ésteres del glicerol que contienen un grupo de ácido fosfórico en
uno de los átomos de ca Como características de los fosfolípidos, hay que distinguir
en primer lugar la existencia de una cabeza hidrofílica muy polar junto con una carga
negativa en el grupo P (a pH=7), además los grupos R que tuviese la molécula de
fosfolípido, pueden aportar otra u otras cargas eléctricas adicionales. Las colas
hidrocarbonadas son de tipo no polar, esto hace que puedan formar micelas en el
agua. Los fosfolípidos pueden experimentar hidrólisis por la acción de ácidos, bases y
por enzimas llamadas fosfolipasas.
rbono terminales de la cadena del glicerol. Pueden tener además otros grupos
enlazados a la porción fosfato como por ejemplo si hay una molécula de colina, se
llamará fosfatidilcolina (figura 2.3), si contiene una etanolamina se llamará entonces
fosfatidiletanoamina, etc.
Figura 2.3 Fosfatidilcolina.
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+
N(CH 3) 3
Figura 2.3
CH 2
Colina
CH 2
Cabeza polar
O
O
P
O
-
O
H
H
CH 2
C
C
O
O
C
Cola no pol ar
O
H
C
CH 2
CH2
CH 2
CH2
CH 2
CH2
CH 2
CH2
CH 2
CH2
CH 2
CH2
CH 2
CH2
CH 2
CH
CH 2
CH
CH 2
CH2
CH 2
CH2
CH 2
CH2
CH 2
CH2
CH 2
CH2
CH 3
CH3
O
1.5 Esfingolípidos
Este tipo de lípidos contienen una sustancia llamada esfingosina que es un
aminoalcohol de cadena larga, o en su defecto un análogo, unida a una molécula de
ácido graso también de cadena larga y un alcohol polar.
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Los esfingolípidos se clasifican en: 1) esfingomielinas que contienen una
fosfocolina o fosfoetanolamina y fósforo, por lo que también se las puede clasificar
como fosfolípidos, son las más abundantes y se hallan en las membranas de las
células animales y en la cubierta que rodea las células nerviosas, (figura 2.4). 2) Los
cerebrósidos contienen una glucosa o una galactosa y no contienen fósforo ni
tampoco poseen carga eléctrica. 3) Los gangliósidos contienen un oligosacárido y es
muy frecuente que una o más de sus unidades de monosacárido terminales sea el
ácido N-acetilneuramínico llamado también ácido siálico, los gangliósidos tampoco
tienen fósforo y constituyen el 6% aproximadamente de los lípidos de las membranas
en la materia gris del cerebro, así como también se encuentran en los lugares
específicos situados en la superficie de las neuronas que sirven de unión a los
neurotransmisores sinápticos.
1.6 Glucolípidos
Son lípidos que contienen un azúcar en su molécula, pero carecen de grupo fosfórico,
los más sencillos son los glucosildiacilglicéridos que se encuentran en las plantas y en
determinados microorganismos.
Se da la circunstancia que los cerebrósidos y los gangliósidos se pueden clasificar
como esfingolípidos, tal como se ha visto en el apartado anterior, y también como
glucolípidos puesto que contienen a la vez azúcar y esfingosina.
Figura 2.4
Estructura de la esfingomielina
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CH3
CH 3
N+
CH 3
CH 2
Figura 2.4
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Cabeza de fosfocolina
CH 2
O
O
P
-
O
O
CH 2
H
C
H
C
HC
Esfingosina
NH
OH
C
O
CH 2
CH
CH 2
CH2
CH 2
CH2
CH 2
CH2
CH 2
CH2
CH 2
CH2
CH 2
CH2
CH
CH2
CH
CH2
CH 2
CH2
CH 2
CH2
CH 2
CH2
CH 2
CH2
CH 2
CH 3
CH 2
Ácido gra so
CH 2
CH 3
1.7 Ceras
Las ceras constituyen una clase de lípidos que se forman por la esterificación de un
ácido graso con un alcohol de cadena larga, saturados y no saturados. La mayor parte
de ellos se encuentran formando diferentes estructuras del organismo humano y de
los animales. Son segregados por las glándulas sebáceas de la piel a modo de
recubrimiento de la misma y para mantenerla flexible, impermeable y lubrificada. El
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pelo, el vello y la lana de los animales además de las plumas, también contienen
ceras, así como en las hojas de muchas plantas, en las frutas, en algunos insectos y en
la cera de las abejas en forma de ácido palmítico.
1.8 Lípidos insaponificables
La característica más relevante de esta clase de lípidos es que no experimentan
hidrólisis. Se clasifican en dos grupos los esteroides y los terpenos que
describimos a continuación.
a) Los esteroides son moléculas derivadas del núcleo de un compuesto
llamado
perhidrociclopentanofenantreno
cuya
estructura
Representa en la figura 2.5.
26
CH3
25 HC
Figura 2.5
27
CH3
24 CH2
23 CH2
22 CH2
18
CH3
12
11
C
19 CH3
1
2
HO
14
A
B
5
4
17
D
16
15
9
10
3
13
20
CH3
HC
21
8
Núcleo del perhidrociclopentanofenantreno
7
6
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se
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Existen numerosos compuestos en el metabolismo humano con estructura de
esteroide, entre ellos resulta importante destacar los ácidos biliares, las
hormonas sexuales, tanto masculinas como femeninas, las hormonas de la
corteza adrenal y los esteroles como el colesterol (figura 2.5) y el lanosterol
Cabe destacar también la existencia de algunos esteroides constituyendo los
venenos de los sapos.
b) Los terpenos derivan del isopreno (2-metil-1,3-butadieno) y pueden ser
moléculas lineales o cíclicas. Un terpeno importante es el β-caroteno, sustancia
aceitosa de color rojo-pardo muy abundante en las zanahorias, formada por 8
residuos de isopreno y que es un precursor de la vitamina A o retinol. Las otras
tres vitaminas liposolubles, la vitamina E, la vitamina K y la vitamina D,
pertenecen también a este grupo.
1.9 Lipoproteínas
Son asociaciones de ciertas proteínas con lípidos, las más importantes son las
proteínas plasmáticas de las que trataremos más extensamente en el apartado 3.
Una característica de las lipoproteínas es que no existe enlace covalente entre el
lípido y la proteína que la forma. Pueden contener lípidos polares, lípidos neutros o
colesterol y sus ésteres. Actúan como vehículos de transporte de los lípidos desde el
intestino delgado hasta el hígado y de éste a los depósitos grasos y a otros tejidos.
1.10 Micelas lipídicas
En los sistemas acuosos (al igual que en los jabones), los lípidos polares se dispersan
para formar las llamadas micelas constituidas por asociaciones de estos lípidos
dispuestos uno al lado de otro formando un compartimento cerrado, (figura 2.6).
Cada lípido posee un extremo polar o hidrófilo y un extremo no polar o hidrófobo,
razón por la cual se disponen de la manera descrita cuando se hallan dispersos en
agua.
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Figura 2.6 Micela lipídica, monocapa y bicapa lipídica
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También pueden formar monocapas en las superficies acuosas con sus cabezas
hidrofílicas proyectadas hacia el interior de la fase acuosa y las colas hidrocarbonadas
hidrofóbicas expuestas al aire. Otra posibilidad es también la formación de bicapas
que son estructuras cooperativas que se mantienen juntas mediante muchas
interacciones reforzantes de tipo no covalente, así como por fuerzas atractivas
existentes entre cadenas adyacentes. Actualmente se acepta que las propiedades de
las bicapas son muy semejantes a las de las membranas biológicas formadas por una
bicapa fosfolipídica con proteínas específicas y enzimas.
Los liposomas o vesículas lipídicas son de forma esférica ligeramente alargadas con
un diámetro de varios cientos de angstroms (Ǻ) y con un grosor de cada capa de unos
50 Ǻ. En su interior pueden quedar atrapados iones o moléculas. Tienen interés
farmacológico.
1.11
Funciones del tejido adiposo
El tejido adiposo está constituido fundamentalmente por un conjunto de células que
contienen gran cantidad de triglicéridos formando la llamada gota lipídica que ocupa
prácticamente todo el citoplasma.
El tejido adiposo tiene cinco funciones: 1) Constituir el material de reserva
energética. 2) Aislamiento térmico que protege de las pérdidas de calor hacia el
exterior del organismo. 3) Acolchonamiento de determinadas partes del cuerpo
como las plantas de los pies y las palmas de las manos que amortiguan la presión
ejercida sobre ellas. 4) Función de relleno entre los órganos internos. Éstos al no
poseer formas geométricas regulares dejan espacios virtualmente vacíos entre sí que
se rellenan de grasa. Sucede a veces en individuos muy delgados, por ejemplo en la
anorexia nerviosa, que los espacios situados debajo de los riñones al ser deficientes
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en grasa, impiden el sostenimiento adecuado de estos órganos y se desplazan hacia
abajo (ptosis renal), localizándose en una posición anómala. 5) Configuración de la
silueta externa del organismo, que si bien es una función muy importante en
algunos animales, en el humano se limita a contribuir en la diferenciación de la forma
corporal entre los dos sexos.
2. Metabolismo de los lípidos
2.1 Digestión y absorción de grasas
Los lípidos constituyen una parte muy importante de la nutrición y se obtienen a
partir de la grasa animal en forma de triglicéridos y colesterol fundamentalmente, y
de los vegetales como lípidos poliinsaturados y de fitosterol, que es el equivalente al
colesterol de las plantas. Los lípidos exógenos se incorporan al organismo en tres
fases: la digestión, la absorción y el transporte.
En la fase de la digestión, que tiene lugar en la luz intestinal, juega un importante
papel la bilis formada sobretodo por ácidos biliares anfipáticos *(2), que actúan
sobre los acúmulos de lípidos deglutidos transformándolos en pequeñas micelas más
fácilmente accesibles a la acción de los enzimas digestivos (proceso que se conoce con
el nombre de emulsión) *(3). Los enzimas digestivos que se producen en el páncreas
son la lipasa pancreática *(4), la colesterolesterasa y la fosfolipasa A, el
primero
actúa
sobre
los
triglicéridos
liberando
ácidos
grasos
formando
monoglicéridos, diglicéridos y glicerol, la segunda actúa sobre los enlaces estéricos
liberando ácidos grasos y colesterol libre, y el último tiene acción hidrolizante sobre
los fosfolípidos *(5).
En la fase de absorción, los lípidos atraviesan la mucosa intestinal y alcanzan el
interior de las células mucosas por un mecanismo de pinocitosis. La mayor parte de
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las grasas ingeridas pasa a los vasos linfáticos antes de alcanzar el sistema sanguíneo.
Los TG así absorbidos se distribuyen fundamentalmente en el tejido subcutáneo,
localizándose en el interior de los adipocitos.
2.2 Oxidación de los ácidos grasos
Como ya se ha mencionado los triglicéridos tienen fundamentalmente la función de
proveer de energía a los humanos y animales, por término medio proporcionan más
del 40% de la energía que necesita diariamente un individuo de un país desarrollado,
y abastecen de forma significativa a órganos como el hígado, el corazón y el músculo
esquelético. Cada gramo de peso proporciona unas 9 kilocalorías, energía que se
almacena en los enlaces de los ácidos grasos en su mayor parte, mientras que el
glicerol contribuye sólo en un 5%.
Los ácidos grasos se activan y se oxidan en la mitocondria de los hepatocitos por
pérdida sucesiva de fragmentos de dos carbonos mediante la llamada beta-oxidación
en la cual el átomo de carbono en posición beta se oxida y produce un β-cetoácido.
Los ácidos grasos que alcanzan el hepatocito tienen dos procedencias, unos vienen de
la sangre unidos a la albúmina y otros proceden de la hidrólisis de los TG por acción
de las lipasas. Cuando los ácidos grasos se encuentran en el citoplasma deben
someterse a la acción de las sintetasas de acil-CoA que catalizan la reacción
esquematizada en la figura 2.7, puesto que como ácidos grasos libres no pueden
atravesar la membrana mitocondrial.
Figura 2.7 Preparación de un ácido graso para su entrada en la mitocondria
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Figura 2.7
ATP
R-COOH + CoA-SH
AMP
R
C
S
CoA
O
(Acil-CoA)
En esta reacción se forma un enlace tioéster entre el grupo carboxilo del ácido graso y
el grupo tiol del CoA, generando acil-CoA, éstos no pueden todavía atravesar la
membrana mitocondrial, pero la acción de dos enzimas, la carnitín-aciltransferasa-I y
la carnitín-aciltransferasa-II catalizan la unión del acil-CoA con la carnitina pudiendo
ahora atravesar la membrana. La carnitina es sintetizada por los humanos a partir del
aminoácido lisina y se encuentra en la matriz interna de la mitocondria.
El acil-CoA se encuentra ahora en disposición de poderse oxidar y lo hace en dos
fases. En la primera fase los ácidos eliminan fragmentos de 2 carbonos, iniciándose
en el extremo carboxilo de la cadena mediante una serie de repeticiones de acciones
enzimáticas que consiguen separar una unidad de acetilo de 2 carbonos cada vez,
(figura 2.8). Por ejemplo el ácido palmítico se somete a siete pases enzimáticos, y en
cada uno se separa una unidad de 2 carbonos en forma de acetil-CoA. Al final de los
siete pases queda una unidad de 2 carbonos en forma de acetil-CoA, rindiendo
globalmente 8 fragmentos de 2 carbonos en forma de acetil-CoA. En la segunda fase
los restos de acetil-CoA entran en el ciclo de Krebs.
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La oxidación completa del ácido palmítico produce 129 moléculas de ATP, de los
cuales 96 proceden de las ocho moléculas de acetil-CoA, 21 de las 7 moléculas de
NADH oxidadas en la cadena respiratoria, y 14 de las 7 moléculas de FADH2 *(6)
también oxidadas en la cadena respiratoria, (obsérvese que en conjunto suman 131
moléculas de ATP, pero en el proceso de activación del ácido palmítico se consumen 2
moléculas, por lo que el resultado neto es de 129).
Los ácidos grasos de cadena impar, liberan propionil-CoA (H3C-CH2-CO-S-CoA) en la
etapa final de la tiolisis.
Figura 2.8 β-oxidación de los ácidos grasos
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O
R
CH 2
CH 2
CH 2
S
C
CoA (Acil-CoA)
FAD
1) Oxidación
FADH2
R
CH 2
C
H
O
C
C
S
CoA
(Enoil-CoA)
H
H 2O
R
CH 2
2) Hidratación
OH H
O
C
C
C
H
H
+
NAD
CoA
S
(L-hidroxiacil-CoA)
3) Oxidación
H + + NADH
O
R
CH 2
C
O
CH2
CoA-SH
C
S
CoA
4) Tiolisis
O
R
CH 2
(Cetoacil-CoA)
C
O
S
(Acil-CoA acortado
en 2 átomos de C)
CoA + H3 C
C
S
CoA
(Acetil-CoA)
Figura 2.8
2.3 Formación de cuerpos cetónicos
El acetil-CoA formado en la oxidación de los ácidos grasos tiene como destino entrar
en el ciclo de Krebs, pero para ello es necesario que exista un equilibrio en las
degradaciones de grasas y de hidratos de carbono. Para que el acetil-CoA pueda
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entrar en el ciclo de Krebs dependerá de sí el oxalacetato es asequible para unirse al
acetil-CoA y formar citrato. Si la degradación de grasas es mucho mayor que la
degradación de hidratos de carbono, tal como sucede en la diabetes mellitus y en el
ayuno prolongado, la concentración de oxalacetato será baja debido a que éste se
utiliza para la formación de glucosa (gluconeogénesis). Por otra parte en la diabetes,
los tejidos no pueden utilizar la glucosa como fuente de energía y es por eso que en su
lugar utilizarán a las grasas. De todo ello se deduce que habrá poco oxalacetato y no
podrá condensarse con el acetil-CoA, entonces éste se degradará por otra vía
formando los llamados cuerpos cetónicos, (figura 2.9).
Los cuerpos cetónicos se forman a partir de dos moléculas de acetil-CoA según el
esquema representado en la figura 2.10.
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Figura 2.9 Vías metabólicas del acetil-CoA con déficit de oxalacetato
Figura 2.9
[Oxalacetato]
Gluconeogénesis
+
Acetil-CoA
Cuerpos
cetónicos
Ciclo de
Krebs
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Figura 2.10 Formación de cuerpos cetónicos
H
HO
NAD
C
+
+
NAD H + H
CH3
O
+
H
C
CH3
CH 2
CH 2
COO
COO
D-3-hidroxibutirato
Acetoacetato
D-3-hidroxibutirato
CO 2
O
CH 3
C
CH 3
Acetona
D-3-hidroxibutirato
Acetoacetato
Acetoacetato
Acetona
Hepatocito
Sangre
Tejidos
Figura 2.10
En las mitocondrias de las células hepáticas, dos moléculas de acetil-CoA de hidratan
y dan acetoacetato más dos moléculas de CoA y un hidrogenión, el acetoacetato así
formado se convierte en D-3-hidroxibutirato, o bien en acetona que pasan a la sangre
y posteriormente a los tejidos donde puede tener lugar también la conversión de
acetoacetato a D-3-hidroxibutirato y acetona. Estos tres compuestos se les llama
comúnmente cuerpos cetónicos, una producción excesiva de cuerpos cetónicos se
denomina cetosis. El acetoacetato y el D-3-hidroxibutirato constituyen combustibles
normales de las células, sobretodo las del músculo cardíaco y de la corteza renal. En
los tejidos periféricos, el acetoacetato se combina con el succinil-CoA y después de
varias reacciones se convierte en dos moléculas de acetil-CoA que se incorporan al
ciclo de Krebs para su oxidación completa.
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2.4 Biosíntesis de ácidos grasos
La biosíntesis de ácidos grasos tiene lugar en el citoplasma celular a partir del acetilCoA, transformándose éste en diversas sustancias intermedias y finalmente en ácido
palmítico. Se precisa además la intervención de ATP y de NADPH. La síntesis de
ácidos grasos no tiene lugar por la ruta inversa a su degradación, sino que ambos
ocurren por vías distintas. Además la síntesis tiene lugar en el citoplasma en lugar de
la matriz mitocondrial como ocurre en la oxidación.
El acetil-CoA se combina con el dióxido de carbono y en presencia de ATP, dando
malonil-CoA, ADP, y fósforo inorgánico (Pi), en una reacción irreversible:
Acetil-CoA + ATP + CO2
→
Malonil-CoA + ADP +
Pi
La reacción es catalizada por el enzima acetil-CoA-carboxilasa que contiene un grupo
prostético (ver unidades 3 y 5) llamado biotina *(7) que es una vitamina. La biotina
funciona como transportador de CO2.
El malonil-CoA de tres átomos de carbono es un precursor de las unidades de dos
carbonos con las que se construye la cadena de ácido graso. La molécula de acetilCoA funciona como cebador o iniciador del proceso en el cual el extremo carboxilo
pasará a formar el carbono número 15 del ácido palmítico formado, mientras que el
grupo metilo pasará a formar el carbono número 16. Por lo tanto el crecimiento de la
cadena se hace posible por la adición sucesiva de restos acetilo al extremo carboxílico
de la cadena, estos grupos acetilo derivan de los dos átomos de carbono del malonilCoA, el tercer carbono del malonil-CoA se pierde en forma de CO2. En este proceso es
muy importante la participación de una proteína transportadora de acilos, llamada
abreviadamente ACP.
El ácido palmítico formado se puede alargar para formar otros ácidos grasos
saturados por la acción de dos sistemas enzimáticos situados, uno en la mitocondria y
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el otro en el retículo endoplasmático. La prolongación se obtiene por adiciones
sucesivas de acetil-CoA en el primer sistema enzimático, y de malonil-CoA en el
segundo. A partir del ácido palmítico también pueden formarse ácidos grasos
insaturados, pero no existen enzimas en los mamíferos para introducir dobles enlaces
entre carbonos a partir del carbono número 9, motivo por el cual no se pueden
sintetizar los llamados ácidos grasos esenciales
2.5 Biosíntesis de colesterol
El colesterol es sintetizado en forma endógena por el hígado a razón de
aproximadamente unos 1,5 gramos diarios. Mientras que el colesterol aportado de
forma exógena por la dieta es solamente de 0,15 a 0,3 gramos diarios, hecho que hay
que resaltar si se considera la importancia que se le atribuye al exceso de colesterol en
el organismo como causa de enfermedad cardiovascular.
El colesterol tiene tres funciones básicas: 1) Está presente en las membranas de las
células eucariotas, pero no de las procariotas. 2) Forma parte de las lipoproteínas
plasmáticas. 3) Es un precursor de las hormonas esteroideas (progesterona,
testosterona, estradiol, cortisol, etc.). 3) Es un precursor de las sales biliares.
El colesterol procede del acetil-CoA *(8). El Acetil-CoA, molécula de 2 carbonos se
convierte a través de sucesivas transformaciones bioquímicas en una molécula de
colesterol de 27 átomos de carbono, (tabla 2.3). El paso de acetil-CoA a mevalonato
de 6 carbonos, es irreversible y está catalizado por el enzima 3-hidroxi-3metilglutaril-CoA-reductasa (abreviadamente HMG-CoA-reductasa), que es un enzima
limitante de la biosíntesis del colesterol, por lo que su actividad será el principal
factor en la regulación de la producción endógena de colesterol. Algunos fármacos del
grupo de las estatinas, como la lovastatina, la simvastatina o la pravastatina inhiben
la actividad de este enzima y producen consecuentemente una disminución de la
producción de colesterol endógeno.
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TABLA 2.3
Nombre
Número de átomos de carbono
Acetil-CoA
2
Mevalonato
6
Isopentenilpirofosfato
5
Farnesilpirofosfato
15
Escualeno
30
Lanosterol
30
Colesterol
27
3. Lípidos séricos. Lipoproteínas
3.1 Introducción
Los lípidos plasmáticos están formados por las siguientes sustancias:
Colesterol, el 30% en forma libre y el 70% en forma esterificada
Triglicéridos
Fosfolípidos
Ácidos grasos libres
El transporte de estos compuestos se lleva a cabo de forma tal que los ácidos grasos
libres van unidos a la albúmina, mientras que los restantes van unidos a las
lipoproteínas plasmáticas.
El estudio de las lipoproteínas tiene especial interés por el hecho de haberse
demostrado que la cardiopatía isquémica, primera causa de muerte en los países
desarrollados, guarda una estrecha relación con los niveles plasmáticos de dichas
sustancias.
Los lípidos procedentes de la ingesta o de la producción endógena tienen que ser
transportados a través de la sangre, desde el intestino y desde el hígado
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respectivamente, hasta la célula, lugar de consumo o almacenamiento, pero ocurre
que el colesterol y los triglicéridos son muy hidrofóbicos y por ello no pueden ser
transportados de manera directa en la sangre sino que se hace necesario un sistema
de transporte que posibilite su solubilización. Este sistema de transporte está
constituido por un conjunto de moléculas llamadas lipoproteínas.
3.2 Lipoproteínas plasmáticas
Las lipoproteínas constan de los siguientes componentes, (figura 2.11):
1) Cubierta anfipática. Constituida por una capa de fosfolípidos con cabezas polares
dirigidas hacia el exterior de la partícula, y por ácidos grasos dirigidos hacia el
interior de la misma formando el núcleo apolar. Además la cubierta presenta
algunas moléculas de colesterol libre con su grupo hidroxilo dirigido hacia las
cabezas polares de los forfolípidos.
2) Apolipoproteínas. Formadas por cadenas polipeptídicas que desarrollan una
función estructural y sobretodo dirigen el metabolismo de las lipoproteínas
además de constituir el lugar específico de reconocimiento por parte de los
receptores de membrana celulares.
3) Núcleo apolar. Se trata de un microentorno de carácter hidrofóbico que está
constituido por lípidos no polares, ésteres de colesterol y triglicéridos.
Hay que constatar que las lipoproteínas no presentan una estructura estática, sino
que se encuentran en continua reorganización. Esta dinámica depende del estado
metabólico de cada partícula en cada momento concreto, esto hace que en los
procesos metabólicos de estas partículas existan notables intercambios entre los
lípidos y las proteínas que las forman.
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Figura 2.11 Estructura general de una lipoproteína
Figura 2.11
Colesterol no esterificado
Triglicéridos
Apolipoproteínas
Fosfolípidos
Ésteres de colesterol
Las lipoproteínas plasmáticas fueron en un principio, aisladas y caracterizadas según
su densidad mediante ultracentrifugación, clasificándose según su velocidad de
sedimentación en unidades Svedberg (ver unidad didáctica número 15 del libro
Fundamentos y Técnicas de Análisis Bioquímico-Técnicas Instrumentales del mismo
autor), originándose de ello una terminología que todavía se sigue usando.
Posteriormente las lipoproteínas del plasma se pudieron aislar también mediante
técnicas electroforéticas dando lugar a la clasificación en lipoproteínas alfa, beta, y
pre-beta. Esta clasificación tiene una correlación muy exacta con la clasificación
mediante las siglas HDL, LDL, VLDL respectivamente, (tabla 2.4).
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TABLA 2.4
Nombre originado
por
ultracentrifugación
Quilomicrones
Unidades
Svedberg
(S)
Tamaño
(nm)
Contenido
75-1200
90% deTG y 4%
de colesterol
62% de TG y 18%
de colesterol
35% de TG y 35%
de colesterol
10% de TG y 60%
de colesterol
10% de TG y 60%
de colesterol
36% de TG y 14%
de colesterol
Nombre
originado por
electroforesis
Sin movilidad
Densidad (δ)
(g/cm3)
VLDL
Pre-β
0,93 < δ < 1,006
IDL
Pre-β
1,006< d < 1,019
LDL
β
1,019 < δ< 1,063
Lp(a)
β y pre-β
1,050 < δ < 1,12
26-30
HDL
α
1,063 < δ < 1,21
5-12
δ < 0,93
20-400
28-75
25-35
0-20
18-25
Las siglas VLDL significan lipoproteínas de muy baja densidad, las LDL significan
lipoproteínas de baja densidad y las HDL significan lipoproteínas de alta densidad.
Las
siglas Lp(a) hacen referencia a la lipoproteína a que últimamente se ha
relacionado como factor de riesgo independiente en cuanto a enfermedad
cardiovascular, (parece ser que a partir de niveles superiores a 30 mg/dL tiene una
correlación muy positiva con los infartos de miocardio). La Lp(a) es una lipoproteína
parecida a la LDL pero difiere en el tipo de apoproteína. Migra a la región pre-β en la
electroforesis, su tamaño es intermedio entre las VLDL y las LDL y su densidad se
encuentra en el rango de la HDL. Tiene una homología molecular considerable con el
plasminógeno y los genes de ambas proteínas se encuentran en el cromosoma 6 muy
próximos entre sí.
El papel de transportador es distinto en cada una de las lipoproteínas, de manera que
fundamentalmente el colesterol es transportado por las LDL y las HDL, mientras que
los triglicéridos lo son por las VLDL y por los quilomicrones.
Los quilomicrones son las fracciones de lipoproteínas que tienen mayor tamaño y
además son las de menor densidad debido a su alto contenido en TG y bajo contenido
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en proteínas. Cuando se deja reposar una muestra de suero lipémico a una
temperatura de 4 a 6° C durante 12-16 horas, se puede observar una capa cremosa en
la parte superior debido a que tienen menor densidad que las otras lipoproteínas. Los
quilomicrones se sintetizan en el epitelio intestinal y se liberan al sistema linfático
alcanzando posteriormente el sistema sanguíneo a través del conducto torácico y la
vena yugular. Las VLDL son moléculas sintetizadas por el hígado a partir de
remanentes de quilomicrones, son cofactores necesarios para que la lipoproteinlipasa
hidrolice a los TG, que pasan a los tejidos dando lugar a moléculas IDL.
3.3 Apolipoproteínas
Constituyen la parte proteica de las lipoproteínas y cada una de ellas puede contener
varios tipos de apoproteínas. Las más importantes son las siguientes: la Apo B que
tiene dos variantes: la Apo B100 de síntesis hepática y la Apo B48 de síntesis
intestinal, la primera se encuentra en la LDL, VLDL e IDL, la segunda forma parte de
los quilomicrones. La Apo E se encuentra en todas las clases de lipoproteínas
excepto en la LDL, se sintetiza en el hígado y su función principal es el
reconocimiento de las lipoproteínas por parte de receptores de membrana. La Apo C
es una familia de péptidos de síntesis hepática y se encuentra sobretodo en las VLDL,
en los quilomicrones y en las HDL. Otras clases de apoproteínas son la Apo AI, la
Apo AII y la Apo A IV.
3.4 Transporte de lípidos de origen exógeno
Los lípidos procedentes de la absorción intestinal son reesterificados en la célula de la
mucosa intestinal formando de nuevo TG, fosfolípidos y ésteres de colesterol que se
unen a las apoproteínas y forman un quilomicrón. Éste pasa a la linfa y después a la
sangre. Una clase de apoproteína del tipo Apo C permite al quilomicrón interaccionar
con la lipasa endotelial (LPL) situada en el endotelio vascular y se hidrolizan los TG
del quilomicrón liberando ácidos grasos que pasan al tejido correspondiente para ser
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utilizados o almacenados. El quilomicrón va perdiendo su contenido de TG y de Apo
C y consecuentemente pierde también su capacidad de interacción con la LPL, lo que
queda de ello será el quilomicrón residual. El quilomicrón residual es captado por el
hígado a través de un receptor específico que reconoce a la Apo E de esta misma
partícula.
3.5 Transporte de lípidos endógenos
Los lípidos de origen hepático junto con la Apo B100, la Apo E y la Apo C forman las
VLDL, éstas son objeto de acción de la LPL en el plasma haciendo que pierdan gran
parte de sus TG, la parte restante de ellas son las IDL. Las IDL entonces, pueden
seguir dos vías distintas, una parte de ellas será captada por el hígado a través del
receptor para su Apo E (llamado receptor Apo B100, E de Goldstein-Brown) y el resto
se transformará en LDL.
Por otra parte se sabe que las LDL son las encargadas de abastecer de colesterol a los
tejidos de forma que éste se introduce en las células por un mecanismo que depende
del receptor Apo B 100, E.
Se ha podido comprobar que existe otro mecanismo de entrada de colesterol a las
células independiente del receptor Apo B 100, E, es el llamado receptor scavenger
que se encuentra en los macrófagos, las células musculares lisas y en el endotelio
fundamentalmente. Para que la LDL se pueda unir a este receptor es necesario que
esté oxidada ya que en este estado tiene bloqueados los sitios de unión con la Apo B
100, E pero no con el receptor scavenger. Esto implica que con la LDL oxidada todo
el colesterol se vaya acumulando en las células musculares lisas de la pared vascular
hasta convertirlas en células espumosas que se depositarán en el vaso
produciendo la placa de ateroma. Además las LDL oxidadas adquieren unas
propiedades citotóxicas y quimiotácticas sobre el sistema monocito-macrófago que
producirán un aumento de la lesión ateromatosa. De todo ello se deduce que la
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fracción oxidada de LDL juega un papel importantísimo en la producción de lesiones
ateromatosas. Las causa de oxidación de la LDL se deben en general a que sus ácidos
grasos puedan sufrir procesos de oxidación a través de mecanismos mediados por
radicales libres dando lugar a compuestos que se unen a la Apo B produciendo un
cambio de carga en la LDL. Este proceso de oxidación se puede desencadenar por la
presencia de cationes divalentes y sobretodo por metabolitos, como el anión
superóxido, liberados por algunas células como los monocitos y las plaquetas, así
como por las células endoteliales y musculares lisas.
El colesterol que se encuentra en exceso se elimina por vía biliar ya que no existen
enzimas capaces de intervenir en su degradación. Para que llegue el colesterol al
hígado y por lo tanto pueda ser eliminado por la bilis, debe de existir un sistema de
transporte que permita trasladarlo desde los tejidos periféricos hasta este lugar. Este
transporte corre a cargo de la HDL y por lo tanto parece ser que a partir de un cierto
valor de concentración, dicha lipoproteína tenga efectos protectores frente a las
enfermedades que se relacionan con los depósitos tisulares de colesterol.
4. Procedimientos de medida de la concentración de lípidos
4.1 Preliminares
Las dos determinaciones que se deben hacer inicialmente son el colesterol y los
triglicéridos, para ello debe efectuarse la extracción sanguínea después de un periodo
de ayuno de 12 horas para evitar que la hiperquilomicronemia postprandrial
interfiera con la determinación de la trigliceridemia. En aquellos estudios en los que
sólo se deba determinar la colesterolemia, no será necesario el ayuno previo, pero sí
lo será, en aquellos que además se deba determinar la fracción HDL.
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La tercera prueba que a continuación se aconseja hacer es la del aspecto del suero,
para ello se deberá mantener éste en un tubo de ensayo en posición vertical a 4°C
durante 12 horas. En general el aspecto del suero se suele describir con una de las
siguientes calificaciones: claro, lactescente, opalescente, ámbar, hemolizado,
ictérico o formando un anillo de quilomicrones.
Un suero claro y transparente correspondería a un suero normal y por lo tanto
descarta la presencia de hipertrigliceridemia, pero nos previene de posibles errores
de laboratorio o de interferencias que son muy frecuentes al determinar los TG.
Un aspecto opalescente indica la presencia de VLDL o de partículas remanentes de
VLDL en cantidades importantes. Si se observa plasma en lugar de suero puede dar
lugar a confusión ya que la eventual hiperfibrinogenemia puede ofrecer un aspecto
semejante.
Un aspecto lactescente advierte de la presencia de quilomicrones o de VLDL muy
grandes, pero no descarta la presencia de grandes cantidades de VLDL normales.
Un aspecto ámbar, difícil de valorar, hace sospechar la presencia de altas
concentraciones de LDL o de betacarotenos. Se emplea poco porque es difícil de
sistematizar.
Un aspecto hemolizado revela posibles interferencias en la medida de otros
parámetros de laboratorio y en estos casos se recomienda practicar una nueva
extracción, a la vez que suspender el estudio en curso.
Un aspecto ictérico también nos previene de la existencia de posibles artefactos en las
demás pruebas de laboratorio efectuadas y además indica posibles afectaciones
hepático-biliares o procesos hemolíticos.
En el caso de observar un suero lactescente u opalescente, está indicado hacer un
estudio del aspecto del suero refrigerado, para lo cual se recomienda utilizar una
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cantidad de unos 10 mL en un tubo de vidrio ancho (de unos 2 cm). En este caso
habrá dos opciones:
1) En el caso de un suero opalescente, puede que sea uniformemente opalescente
(traslúcido), luego esto indicará la presencia de grandes cantidades de VLDL o de
remanentes y nos descarta la presencia de quilomicrones, o bien en el caso de
existir una pequeña capa superior de material blanco, indicaría la presencia de
remanentes de quilomicrones.
2) En el caso de un suero con aspecto lactescente, acabado de obtener, también hay
dos posibilidades: que aparezca una capa cremosa o lechosa en la parte superior y
el resto del suero sea claro o poco turbio, que nos descartará la presencia de
cantidades importantes de VLDL, y la otra posibilidad es que haya la misma capa
cremosa pero el resto del suero sea francamente turbio, en este caso existiría la
presencia combinada de quilomicrones con un aumento de VLDL.
Conociendo la colesterolemia, la trigliceridemia y el aspecto del suero, podremos
orientar fácilmente el diagnóstico de una hiperlipidemia.
La cuarta determinación que deberemos hacer es la fracción HDL, prueba que
resultará muy útil para valorar el riesgo cardiovascular, ya que su concentración
guarda una relación inversamente proporcional con dicha patología.
Una vez se ha determinado la fracción HDL-colesterol, podemos calcular con
bastante aproximación el valor de la fracción LDL-colesterol mediante la fórmula de
Friedewald siguiente:
[LDL
colesterol
] = [colesterol
total ] − ( [HDL colesterol ] +
[TG ] )
5
o bien:
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[LDL colesterol ] = [colesterol
total ] − ( [HDL colesterol ] +
86
[TG ] )
2,2
Si las unidades se expresan en mmol/L. Las fórmulas son válidas sólo si la
concentración de triglicéridos no supera los 500 mg/dL.
A continuación se realizará la quinta prueba, es decir la electroforesis de las
lipoproteínas que generalmente se hace sobre un soporte electroforético de gel de
poliacrilamida (ver unidad didáctica número 12 del libro del mismo autor antes
citado), a también en acetato de celulosa. Las bandas así obtenidas se tiñen con un
colorante como por ejemplo el aceite rojo 7B o azul brillante de Coomasie, y
aparecen reveladas sobre el soporte electroforético de tal manera que se les designan
nombres análogos a las bandas de las proteínas séricas según la tabla 2.4. Los valores
normales para cada fracción respecto del total de lípidos son las siguientes: αlipoproteínas: 16-46%; pre β-lipoproteínas: 3-30%; β-lipoproteínas: 39-65%.
Hay que considerar que la técnica es esencialmente cualitativa pero resulta así mismo
útil para la cuantificación de las fracciones y para el seguimiento de las hiperlipemias.
2.2 Procedimientos de medida del colesterol
Existen varios métodos colorimétricos para la determinación del colesterol, uno de
los más antiguos es el método de Liebermann-Burchard que se basa en formar un
compuesto coloreado por la acción del ácido sulfúrico concentrado sobre el colesterol
en medio anhidro. El medio anhidro se consigue con ácido acético y el producto final
obtenido es el colesterileno de color verdoso cuya absorbancia se compara con la de
un estándar de colesterol, calculándose posteriormente la concentración de colesterol
de la muestra. La reacción es la siguiente:
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Medio anhidro
Colesterol + H2SO4
colesterileno
→
Ácido acético
La técnica consiste en pipetear en tres tubos de ensayo los volúmenes de reactivos de
acuerdo con el cuadro siguiente:
Muestra
Estándar
Reactivo de
Liebermann
H2O destilada
Blanco
4 mL
Problema
0,1 mL
4 mL
0,1 mL
Patrón
0,1 mL
4 mL
-
-
A continuación se incuban los contenidos de los tubos durante 20 minutos a
temperatura ambiente, ajustándose el espectrofotómetro al cero con el blanco y se
efectúan lecturas de absorbancias en los tubos problema (Ax) y patrón (Ap) a 620 nm,
teniendo en cuenta que las soluciones obtenidas son estables durante 40 minutos.
Posteriormente se calcula la concentración de colesterol sabiendo que el estándar
suele tener una concentración de 200 mg/dL, del modo siguiente:
[Colesterol ] =
Ax
· 200
Ap
La muestra a emplear debe ser suero en ayunas y sin haber sufrido hemólisis.
El reactivo de Liebermann contiene: 240 mL de ácido acético 7,5M; anhídrido acético
5,2M; y ácido dimetil-benzeno sulfónico 50 mmol/L que se debe mantener
refrigerado durante su almacenamiento, además hay que tener en cuenta que se trata
de productos cáusticos por lo que se deberán tomar precauciones en su manejo.
Otra técnica para la determinación del colesterol es la técnica de Allain que se
fundamenta en las reacciones siguientes:
Colesterolesterasa
1) Ésteres de colesterol + H2O
→
Colesterol + ácidos grasos
Colesteroloxidasa
2) Colesterol + O2 + H2O
→
Colestenona + H2O2
Peroxidasa
3) H2O2 + fenolampirona
→
Quinona + H2O
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La técnica consiste en pipetear en tubos de ensayo cantidades adecuadas de reactivo
(contiene los enzimas, fenolampirona y un tampón), muestra (suero o plasma) y
estándar. Se mezclan los tubos durante 10 minutos a temperatura ambiente, se ajusta
al cero el espectrofotómetro mediante el blanco y se leen las absorbancias a 500 nm.
Seguidamente se calcula la concentración problema de modo análogo al anterior
método teniendo en cuenta que el rango de linealidad es válido hasta 700 mg/dL. Se
debe tener en cuenta además, las posibles interferencias que pudieran ocasionar
sustancias como el ácido ascórbico, la hemoglobina y la bilirrubina a dosis elevadas,
así como por la eventual presencia de ciertos fármacos.
La determinación de la fracción HDL de colesterol se determina basándose en el
hecho que las lipoproteínas LDL y VLDL precipitan en presencia de fosfotungstato e
iones magnesio, mientras que las HDL permanecen en la solución pudiéndose
determinar en el sobrenadante. La técnica consiste en centrifugar el suero con el
reactivo precipitante durante 20 minutos a un mínimo de 4000 rpm y determinar el
colesterol del sobrenadante mediante la técnica de Allain descrita anteriormente. El
reactivo precipitante suele contener además de fosfotungstato y magnesio, un
potenciador de color que hace resaltar más visiblemente el sobrenadante.
4.3 Procedimientos de medida de los triglicéridos
La mayoría de métodos utilizados para la determinación de los triglicéridos se basan
en las reacciones siguientes:
Lipasa
1) TG
→
Glicerol + ácidos grasos libres
Glicerol kinasa
2) Glicerol + ATP
→
Glicerol-1P + ADP
Glicerol-1P deshidrogenasa
3) Glicerol-1P + NAD+
→
Dihidroxiacetona-P + NADH + H+
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A veces se suele añadir un reactivo especial como por ejemplo la hidrazina que forma
un complejo con la dihidroxiacetona-P y desplaza el equilibrio de la reacción hacia la
derecha forzando a que la reacción termine. Seguidamente se lee la absorbancia del
NADH a 340 nm (ver unidad didáctica número 4 del libro citado anteriormente).
Existen otros métodos que generan glicerol-3P y éste a su vez, genera peróxido de
hidrógeno que por acción de una peroxidasa se convierte en una sustancia coloreada.
4.4 Procedimientos de medida de las apolipoproteínas
La cuantificación de las apolipoproteínas se efectúa mediante nefelometría (ver
unidad 7 de la obra citada), midiéndose la dispersión luminosa debida a la formación
de grandes complejos antígeno-anticuerpo.
5. Patrones de alteración del metabolismo lipídico
5.1 Generalidades
Es muy importante el papel que juegan los lípidos en la producción de enfermedades
que afectan al sistema cardiovascular, según estadísticas las enfermedades
cardiovasculares son la primera causa de muerte a partir de los 45 años en los países
industrializados, los síntomas y las defunciones se producen cuando el exceso de
lípidos que no se elimina o no se utiliza, se deposita en tejidos y paredes arteriales
obstruyendo el normal flujo de sangre a órganos vitales. Cuando la restricción del
flujo sanguíneo se produce en las arterias coronarias, sobreviene el angor o angina
de pecho, en caso de compromiso circulatorio relativamente leve, o el infarto de
miocardio cuando la obstrucción es total. Si la obstrucción ocurre en algún vaso
cerebral se produce un accidente vascular cerebral (AVC) con necrosis de tejido
neuronal. El exceso de lípidos produce también su acumulación en órganos sobretodo
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en hígado y en riñón y puede impedir su normal funcionamiento, si se acumulan en la
piel forman los llamados xantomas.
El perfil analítico de lípidos que se obtiene en el laboratorio representa solamente un
aspecto de la valoración de riesgo de enfermedad cardiovascular, tan importantes
como éste, son el consumo de tabaco, la hipertensión arterial, el sedentarismo, y la
obesidad que en conjunto se les clasifica en factores de riesgo susceptibles de ser
modificados. Otros factores de riesgo no modificables son la edad, el sexo (los
hombres tienen más riesgo que las mujeres) y los antecedentes familiares, así como
otras enfermedades concomitantes como por ejemplo la diabetes mellitus.
En cuanto a la valoración de riesgos a través de parámetros analíticos hay que señalar
que las concentraciones de LDL colesterol están en relación directa con el riesgo,
mientras que las concentraciones de HDL colesterol lo están en relación inversa.
Obsérvese la tabla 2.5 como guía orientativa en la valoración del riesgo cardiovascular
en función del perfil lipídico.
TABLA 2.5
Determinación
Nivel deseable
Nivel límite
Nivel indeseable
Colesterol total
< 200 mg/dL
200-249 mg/dL
≥250 mg/dL
HDL colesterol
≥55 mg/dL
35-54 mg/dL
<35 mg/dL
LDL colesterol
<130 mg/dL
130-159 mg/dL
≥160 mg/dL
Triglicéridos
<250 mg/dL
250-500 mg/dL
>500 mg/dL
Las principales enfermedades relacionadas con la acumulación de lípidos en los
tejidos se clasifican en tres grandes grupos: las hiperlipoproteinemias, las
hipolipoproteinemias y las anormalidades lipídicas lisosómicas. Las primeras se
dividen a su vez en primarias y secundarias, las primarias se clasifican por el sistema
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de Frederickson enumerándose mediante números romanos del I al V y se describen
a continuación.
5.2 Hiperlipoproteinemias primarias
Hiperlipoproteinemia tipo I. Llamada también quilomicronemia familiar, se
transmite de forma autosómica dominante. Puede ser debida a tres tipos de
errores congénitos, la deficiencia del enzima LPL, la deficiencia de la
apolipoproteína C II y en tercer lugar la presencia de un inhibidor de la lPL. La
enfermedad se manifiesta con una hipertrigliceridemia plasmática de 500 a 2000
mg/dL y sus síntomas clínicos al igual que en otros tipos de hipertrigliceridemia
son en primer lugar el dolor abdominal, presente ya desde la infancia localizado
en el epigastrio y la zona periumbilical con irradiación lumbar, la pancreatitis
aguda que suele ser frecuente en este tipo de enfermos, así como la
hepatoesplenomegalia debida al depósito de triglicéridos en las células del sistema
mononuclearfagocítico. También es frecuente encontrar células espumosas en la
médula ósea por el mismo motivo. La acumulación de TG en la piel produce la
aparición de xantomas eruptivos que se manifiestan como pequeñas pápulas
amarillentas en las zonas sometidas a presión. Cuando la hipertrigliceridemia
supera los 2000 mg/dL se puede observar la llamada lipemia retinalis, la cual es
observable en el fondo del ojo donde las vénulas y las arteriolas adquieren un
color rosa pálido, pero que no produce ninguna alteración de la función visual.
Por otra parte pueden aparecer alteraciones neuropsiquiátricas de difícil
explicación etiopatogénica, como la demencia, la depresión y la pérdida de
memoria reciente. El diagnóstico se puede hacer en primer lugar por el aspecto de
“sopa de tomate” que adquiere la sangre y el aspecto lechoso del suero obtenido
después del ayuno de 12 horas. La analítica demuestra un aumento de los TG con
un colesterol normal. También la “prueba del refrigerador” resulta útil, ésta
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consiste en dejar durante 12 horas el suero en una nevera a 4°C y observar
después que los quilomicrones forman una capa cremosa en la parte superior del
tubo mantenido verticalmente. Adicionalmente las concentraciones de LDL y
HDL suelen ser normales. El diagnóstico definitivo de la falta del enzima LPL se
confirma mediante el estudio de la actividad del enzima. La deficiencia de la apo C
II se confirma mediante separación de las apolipoproteínas de la VLDL por
electroforesis. En los casos que la enfermedad sea debida a la presencia de un
inhibidor de la LPL, éste se puede objetivar observando que la actividad
enzimática no se corrige añadiendo apo C II, siendo dicha actividad normal en el
tejido adiposo.
Hiperlipoproteinemia tipo II. Consiste en un incremento de las LDL y se divide en
tres
formas:
1)
hipercolesterolemia
poligénica,
llamada
también
hipercolesterolemia primaria grave, 2) hipercolesterolemia familiar combinada y
3) hiperlipemia familiar combinada. En la primera no existe defecto identificable
y se cree debida a factores ambientales y cursa con niveles de colesterol total
superiores a 300 mg/dL. Las formas familiares se heredan a través de genes
autosómicos dominantes que conllevan a una incapacidad de los receptores
celulares que impiden la unión de la LDL para su eliminación. El pronóstico de
esta enfermedad dependerá fundamentalmente de ser homocigoto o heterocigoto
para el gen en cuestión.
Hiperlipoproteinemia tipo III. Llamada también enfermedad de la “β ancha”. El
proteinograma electroforético realizado en estos enfermos resalta la existencia de
una proteína presente en concentraciones patológicamente elevadas que ocupa la
zona comprendida entre la β y la pre-β (LDL y VLDL respectivamente) del
lipoproteinograma y que corresponde a la lipoproteína IDL. Esta enfermedad se
llama también disbetalipoproteinemia familiar y se transmite genéticamente de
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forma autosómica recesiva causando una mutación en la secuencia de
aminoácidos de la apo-E que la hace irreconocible para sus receptores hepáticos.
El perfil diagnóstico completo de esta enfermedad será: 1) Elevación paralela y
simultánea de la colesterolemia y la trigliceridemia. 2) En la electroforesis con
acetato de celulosa o agarosa se observa una banda β ancha. 3) Cociente:
VLDL colesterol
> 0,3 (criterio válido si TG < 1000 mg/dL).
TG
4) La electroforesis por isoelectroenfoque constituye la prueba de confirmación
del diagnóstico donde se demuestra la existencia de las isoformas anormales en
un alelo de la apo-E de las IDL.
Los individuos que padecen esta enfermedad presentan xantomas cutáneos de dos
tipos, unos llamados xantomas planos de coloración anaranjada que típicamente
se localizan en las palmas y en los pliegues interdigitales y otros, los xantomas
tuberoeruptivos localizados en codos y rodillas. También presentan aterosclerosis
generalizada, prematura y grave con afectación de las arterias coronarias, carótida
interna, aorta abdominal y arteria femoral que causan frecuentemente cardiopatía
isquémica e insuficiencia vascular cerebral, en hombres la patología aparece a
partir de los 20 años de edad y en las mujeres a partir de la menopausia.
Hiperlipoproteinemia tipo IV.
Se hereda con rasgo autosómico dominante o
como parte del síndrome de hiperlipidemia familiar combinada. Cursa con un
incremento de los niveles de VLDL y el defecto parece ser un aumento en su
producción o una disminución en su depuración o ambas. Los síntomas aparecen
en la edad adulta presentando afectaciones coronarias prematuras. El aumento de
los niveles de VLDL da lugar a una banda electroforética pre-β ancha junto con la
ausencia de la banda de los quilomicrones. Los niveles de TG están elevados y el
colesterol es normal.
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Hiperlipoproteinemia tipo V. Corresponde a un aumento de las VLDL y de
quilomicrones. Esta afectación provoca niveles de TG muy altos ya sea por la
incapacidad de eliminar las lipoproteínas ricas en TG, o por el exceso de
producción o por ambas cosas. Se desconoce el mecanismo genético de esta forma
familiar. El aspecto del suero incluye un anillo cremoso en la parte superior y el
patrón electroforético consiste en la presencia de bandas anchas de quilomicrones
y pre-β. Los niveles de LDL y de HDL son normales o bajos, pero los de colesterol
total y TG están aumentados. En general los pacientes presentan síntomas a partir
de los 20-50 años que suelen ser dolor abdominal y xantomas eruptivos, pero no
se detectan afectaciones coronarias prematuras.
5.3 Hiperlipoproteinemias secundarias
Las hiperlipoproteinemias secundarias consisten en niveles aumentados de lípidos
asociadas a otras afecciones primarias que se corrigen al tratar éstas. Las más
frecuentes son debidas al mal funcionamiento hepático o las de origen periférico,
entre las primeras cabe destacar la hepatitis biliar, la obstrucción biliar, la cirrosis y la
pancreatitis aguda, mientras que dentro de las segundas se pueden incluir el infarto
de miocardio, la insuficiencia renal, la gota, la anemia perniciosa y la diabetes
mellitus.
5.4 Hipolipoproteinemias
Las hipolipoproteinemias también constituyen un grupo de enfermedades
importantes, entre ellas destaca en primer lugar la ausencia de LDL o
abetalipoproteinemia que se debe a la incapacidad de secreción de lipoproteínas
que contienen apo B, o a la incapacidad de su síntesis, o a ambos factores. Se trata de
una situación muy grave pues carecen totalmente de LDL y el problema fundamental
es la malabsorción de grasas, incluidas las vitaminas liposolubles. Un hecho
característico es la presencia de células repletas de vacuolas lipídicas de gran tamaño
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en la mucosa intestinal. Presentan manifestaciones neuromusculares como debilidad,
ataxia e hiporreflexia, también puede producirse ceguera. El frotis de sangre muestra
un 50-70% de eritrocitos en forma de espinas (llamados acantocitos). La
malabsorción de vitamina K no suele producir problemas de hemorragias pero si que
presentan un tiempo de protrombina anormalmente alargado.
La enfermedad de Tangier consiste en la ausencia de HDL que provoca una
acumulación de ésteres de colesterol en el sistema reticuloendotelial, pero no afecta al
funcionamiento de los órganos principales. El perfil analítico pone de manifiesto
unas cantidades muy bajas, a veces indetectables de HDL, de LDL y de colesterol
total, así como ausencia de la banda α en el lipidograma electroforético, siendo los TG
normales o elevados. La clínica correspondiente a estos enfermos consiste en
amígdalas y adenoides de gran tamaño de color naranja-amarillento, presentan
además hepatoesplenomegalia, debilidad y atrofia muscular, neuropatías periféricas
con depresión de los reflejos tendinosos, pero lo más grave en estos casos es la
aterosclerosis. Los depósitos de ésteres de colesterol se pueden demostrar por biopsia
rectal.
5.5 Anormalidades lisosómicas de lípidos
Los lisosomas constituyen verdaderas “bolsas” intracelulares de enzimas que
hidrolizan lípidos y otros constituyentes bioquímicos, estas vías catabólicas
generalmente constan de diversos pasos cada uno de ellos catalizado por un enzima,
cuando uno de éstos está ausente o en menor cantidad, se acumula el sustrato en el
punto de la deficiencia. Las afectaciones de este tipo se describen a continuación.
Enfermedad de Gaucher. Es la más frecuente, se debe a la ausencia del enzima βglucocerebrosidasa que hace que se acumule glucocerebrósido. El diagnóstico de
laboratorio incluye la presencia de células de Gaucher que son histiocitos
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cargados de lípidos en la médula ósea, acompañado de elevación sérica de
fosfatasa ácida.
Enfermedad de Niemann-Pick. Llamada lipidosis de esfingomielina, consistente
en la deficiencia de esfingomielinasa que provoca acumulación de esfingomielina.
En el laboratorio, a menudo se detectan células de apariencia espumosa en el
frotis de médula ósea, tratándose de histiocitos sobrecargados. Al contrario de la
enfermedad descrita anteriormente, la fosfatasa ácida sérica es normal.
Enfermedad de Krabbe. Llamada también lipidosis de galactocerebrósido o
leucodistrofia de células globoides. La deficiencia es el enzima galactocerebrósidoβ-galatosidasa que produce una acumulación de galactocerebrósidos. Afecta
principalmente al sistema nerviosa central (SNC) provocando deterioro mental y
motor graves. En el análisis se detecta un aumento de las proteínas del líquido
cefalorraquídeo (LCR) y la presencia de células globoides que son histiocitos
multinucleados de gran tamaño. En general es una enfermedad mortal a partir de
los 6-12 meses del inicio.
Distrofia metacromática. Se debe al defecto de arilsulfatasa A que provoca la
acumulación de 3-sulfato-galatosilcerebrósido. Produce parálisis progresiva y
deterioro mental.
Enfermedad de Fabry. Llamada también angioqueratoma corporal difuso
universal. Se produce por la acumulación de trihexósido de ceramida en el SNC
como consecuencia de la falta del enzima lisosómico α-galactosidasa. Se hereda
como rasgo ligado al cromosoma X y se produce un exantema maculopapular con
dolor y quemazón en las extremidades, opacidades corneales, insuficiencia renal e
infartos cerebrales y de miocardio.
Enfermedad de Tay-Sachs. Llamada también gangliosidosis Gm2. Generalmente se
trata de lactantes que acumulan gangliósido GM2 en las neuronas debido al déficit
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de hexoaminidasa A. Los enfermos sufren deterioro psicomotor y muchas veces
demencia. Existe una variante: la gangliosidosis GM1.
Fucosidosis. Es la deficiencia de α-fucosidasa que produce el acúmulo de
esfingolípidos que contienen fructosa y fragmentos de glucoproteínas. El tipo I se
asocia con insuficiencia respiratoria, retraso psicomotor piel gruesa, sialorrea,
cardiomegalia e hipersudoración, el tipo II es más leve, pero aparecen
angioqueratomas.
_____________________________________________________
APÉNDICE
*(1) Anfipático significa que es hidrofílico e hidrofóbico a la vez.
*(2) Los ácidos biliares conocidos son el ácido taurocólico y el ácido glicocólico,
derivados del ácido cólico de naturaleza esteroide unido a los aminoácidos taurina y
glicina respectivamente. Estos ácidos son aniones a pH 7 y actúan como detergentes
puesto que su grupo hidrofílico es soluble en agua mientras que su grupo hidrofóbico
(su porción esteroide), lo es en las grasas, esto hace que la parte hidrofóbica pueda
disolverse en las gotitas de grasa, dejando que la parte hidrofílica permanezca en el
exterior de la superficie de las gotitas de grasa, así adquieren carga negativa y al
repelerse entre sí se mantienen separadas. De esta manera su superficie aumenta con
relación a su volumen (cuanto más pequeñas sean las gotitas, mayor será su
superficie relativa) y consecuentemente aumentará la superficie de contacto entre las
fases acuosa y lipídica. Todo ello tiene un sentido: los enzimas digestivos son
hidrosolubles y por lo tanto no pueden penetrar en el interior de las gotitas de grasa,
pero al aumentar la superficie de contacto, éstas resultan ser más accesibles a la
acción de los enzimas.
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*(3) Se ha sugerido también la presencia de una lipasa en el intestino delgado,
segregada posiblemente por éste, ya que los individuos pancreatectomizados pueden
digerir pequeñas cantidades de lípidos.
*(4) Es importante saber que no existe lipasa en la saliva y por lo tanto no se produce
ninguna digestión de grasas en la boca. También se ha detectado la existencia de una
lipasa en el estómago pero debido a que su funcionamiento sólo tiene lugar a un pH
de alrededor de 7, parece dudosa su eficacia ya que el jugo gástrico suele tener un pH
mucho más bajo. De ello se deduce pues, que el proceso de digestión de las grasas
solamente tiene lugar es el intestino delgado.
*(5) En el año 1891 Munk observó por casualidad en un individuo que tenía una
fístula linfática (canal que comunica el sistema linfático con el exterior del
organismo), que en ayunas, la linfa que recogía a través de la fístula era líquida y de
color claro, mientras que después de una comida rica en grasas aparecía de aspecto
lechoso por el hecho de tener gotitas de lípidos en suspensión. Estas gotitas
recibieron el nombre de quilomicrones.
*(6) FADH2 son las siglas del compuesto flavin adenin dinucleótido reducido.
*(7) La biotina se encuentra ampliamente difundida en los alimentos y no suele ser
causa de enfermedad carencial. Se sabe que en las dietas que contienen grandes
cantidades de albúmina de huevo crudo pueden ser perjudiciales puesto que una
proteína, la avidina, de la albúmina de huevo se combina con la biotina e impide su
absorción. Se conoce la anécdota de un único caso de un individuo con déficit natural
de biotina, corresponde a un hombre que hacía una dieta estrictamente formada por
una docena de huevos crudos diarios y varios litros de vino.
*(8) En el año 1940, Konrad E. Bloch inyectó acetato marcado radiactivamente a las
ratas de experimentación y comprobó posteriormente que el colesterol contenía el
isótopo de carbono marcado, de lo que dedujo que el acetato es un precursor del
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colesterol, hecho que le valió el premio Nobel del año 1964 compartido con Feodor
Lynen).
ACTIVIDADES DE AUTOEVALUACIÓN
PRUEBA OBJETIVA DE SELECCIÓN ALTERNATIVA MÚLTIPLE
Sólo es válida una de las cuatro respuestas de cada pregunta.
1) Cuando el aspecto del suero es hemolizado se recomienda una de las siguientes
conductas:
a) mantener refrigerado el suero a 4°C durante 6 horas y volver a observarlo
b) anotar que se trata de suero con lisis de hematíes y seguir efectuando las
demás pruebas de laboratorio con normalidad
c) repetir la extracción sanguínea y suspender la práctica de otras pruebas de
laboratorio
d) anotar la presencia de betacarotenos y sospechar altas concentraciones de
VLDL
2) El símbolo 20:2 significa que se trata de un ácido graso:
a) con 20 átomos de carbono y con enlaces simples
b) con 20 átomos de carbono y un enlace doble en el carbono número 2
c) con 20 átomos de carbono y algún enlace doble
d) con 2 enlaces dobles, uno en el carbono número 20 y el otro en el número 2
3) Las micelas están formadas por:
a) terpenos
b) esteroides
c) lipoproteínas
d) ceras
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4) Una de las siguientes enfermedades no es una anormalidad lisosómica lipídica:
a) enfermedad de Fabry
b) enfermedad de Krabbe
c) enfermedad de Tay-Sachs
d) abetalipoproteinemia
5) La denominada lipemia retinalis consistente en la observación de vénulas de
color rosa pálido en el fondo del ojo, se pone de manifiesto cuando:
a) los niveles de TG superan los 2000 mg/dL
b) los niveles de colesterol superan los 250 mg/dL
c) los niveles de HDL están por debajo de los 100 mg/dL
d) los niveles de quilomicrones superan los 20.000 mg/dL
6) El método más apropiado, entre los siguientes, para la determinación de las
apolipoproteínas es:
a) volumetría polarográfica
b) nefelometría
c) polarimetría
d) fotometría de llama
7) El reactivo de Liebermann-Burchard para la determinación colorimétrica del
colesterol contiene todos los componentes siguientes menos uno, señalarlo:
a) ácido acético
b) ácido dimetil-benzeno sulfónico
c) peroxidasa
d) anhídrido acético
8) Está totalmente comprobado que una de las siguientes sustancias a dosis altas
interfiere con la prueba de Allain, señalarla:
a) vitamina E
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b) vitamina C
c) Ca++
d) ácido pantoténico
9) Los ácidos grasos poliinsaturados son aquellos que:
a) tienen dos o más enlaces dobles
b) tienen solamente un enlace doble
c) tienen un o más enlaces triples
d) tienen todos los enlaces simples
10) Las lipoproteínas que contienen aproximadamente la misma cantidad de TG que
de colesterol son:
a) las VLDL
b) las LDL
c) las HDL
d) las IDL
PROBLEMAS
1) Aplicando el método de Liebermann-Burchard, se efectúan lecturas de
absorbancia a 620 nm para una muestra de suero y un estándar, dando los valores
de 0,842 y 0,432 respectivamente. La concentración del estándar utilizado es de
150 mg/dL. Calcular la concentración de colesterol de la muestra y compararlo
con los valores normales.
2) A partir de una muestra de plasma se han obtenido unos valores de colesterol
total de 225 mg/dL, de la fracción HDL-colesterol de 59 mg/dL y de TG de 265
mg/dL. Calcular a partir de los datos disponibles, la concentración de LDLcolesterol.
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3) Con la intención de diagnosticar la hiperlipoproteinemia tipo III
(disbetalipoproteinemia familiar), se determinan los valores de colesterolemia y
trigliceridemia obteniéndose los resultados de 360 y 880 mg/dL respectivamente.
La fracción VLDL-colesterol, obtenida por ultracentrifugación, resultó ser de 354
mg/dL. Enumerar las pruebas y efectuar los cálculos que se deberán realizar para
establecer el correcto diagnóstico.
________________________________________________________
CRITERIOS Y ACTIVIDADES DE EVALUACIÓN
Definir la estructura de los ácidos grasos, triglicéridos, fosfolípidos, esfingolípidos,
glucolípidos, ceras, lípidos insaponificables, lipoproteínas y micelas lipídicas
Describir las funciones del tejido adiposo
Definir el proceso de oxidación de los ácidos grasos y el de formación de cuerpos
cetónicos
Definir el proceso de biosíntesis de los ácidos grasos y del colesterol
Describir la estructura de las lipoproteínas plasmáticas y las apolipoproteínas
Describir el transporte de lípidos exógenos y endógenos
Seleccionar los métodos apropiados para la determinación del colesterol y los TG
Enumerar los procesos patológicos que cursan con valores anormales de
colesterol y sus fracciones HDL y LDL
Clasificar las hiperlipoproteinemias y las hipolipoproteinemias primarias
Clasificar las anormalidades lisosómicas lipídicas
PROPUESTA DE ACTIVIDADES DE REFUERZO
Contestar detalladamente a las siguientes preguntas:
¿Cuál es la conducta a seguir delante de la observación de un suero con aspecto
lactescente?
¿Cómo se pueden clasificar los esfingolípidos?
¿Cuáles son las causas más habituales de producción de cetosis?
¿Cuál es el proceso y la causa atribuidos a la formación de la placa de ateroma?
¿Preguntas?: msayol@xtec.cat
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