CCAYAC-CR-03

COMISIÓN DE CONTROL ANALÍTICO Y AMPLIACIÓN DE COBERTURA
CRITERIOS PARA LA VALIDACIÓN INTERNA Y CONFIRMACIÓN DE MÉTODOS
FISICOQUÍMICOS
VIGENTE A PARTIR DE:
2014-02-17
1.
FECHA DE PROXIMA REVISIÓN
2017-02-17
Clave:
CCAYAC-CR-03/0
Hoja: 1 de 30
SUBSTITUYE A:
CCAYAC-P-058/0
FECHA: 2011-02-16
OBJETIVO
Definir los criterios mínimos para llevar a cabo actividades de validación interna o confirmación de
métodos que involucren mediciones fisicoquímicas y físicas cuantitativas y cualitativas, para
presentar evidencia objetiva de que estos se pueden aplicar correctamente antes de utilizarlos
para los ensayos analíticos.
2.
ALCANCE
Este documento debe ser aplicado por el personal de los laboratorios de ensayo aspirantes a
terceros autorizados ante la COFEPRIS, para la validación interna o confirmación de los métodos
fisicoquímicos
volumétricos,
gravimétricos,
potenciométricos,
espectrofotométricos,
cromatográficos y pruebas físicas empleados en el análisis de agua, alimentos, juguetes,
cerámicas, bebidas alcohólicas y no alcohólicas entre otros y, es factible establecer no
conformidades con base en los criterios descritos en el mismo.
3.
DEFINICIONES
3.1 ANALITO: Componente específico de una muestra, a medir en un análisis.
3.2 BLANCO DE REACTIVOS: Reactivos usados durante el proceso analítico (incluyendo
los solventes usados en la extracción o disolución) los cuales son analizados para
garantizar que la medición no es influenciada por los materiales utilizados durante el
análisis.
CONTROL DE EMISION
Nombre
Fecha y Firma
Elaboró:
Revisó:
Autorizó:
Guillermo Vega Rodríguez
Raúl Zavala Morales
Rosa María Soberanes
Duran
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2014-02-17
FECHA DE PROXIMA REVISIÓN:
2017-02-17
Clave:
CCAYAC-CR-03/0
Hoja: 2 de 30
SUBSTITUYE A:
CCAYAC-P-058/0
FECHA: 2011-02-16
3.3 BLANCO DE MUESTRA: Son matrices que no contienen el analito de interés. Son
difíciles de obtener pero son necesarios para estimar las interferencias que pudieran
encontrarse durante el análisis de las muestras de prueba.
3.4 CONFIRMACIÓN DEL MÉTODO: Evidencia objetiva para demostrar que al aplicar un
método normalizado, se cumple con las especificaciones del mismo y se cuenta con la
competencia técnica para realizarlo adecuadamente tomando en consideración sus
propias instalaciones, equipo y personal. Tiene como objetivo, el comprobar que el
laboratorio domina el método normalizado y lo utiliza correctamente.
3.5 CRITERIOS DE ACEPTACIÓN: Parámetros bajo los cuales el resultado de una prueba
será considerado aceptable.
3.6 CURVA DE CALIBRACION: Es la representación gráfica de la señal medida como una
función de cantidad del analito.
3.7 INCERTIDUMBRE: Estimación que caracteriza el intervalo de valores, dentro de los
cuales se encuentra el valor convencionalmente verdadero de la magnitud medida.
3.8 INFORME DE CONFIRMACIÓN O VALIDACIÓN: Es en documento en el que los
registros, los resultados y la evaluación completa del proceso de confirmación o
validación están ensamblados y resumidos.
3.9 INTERVALO DE CONFIANZA: Intervalo en torno al valor estimado que contiene el valor
real con una probabilidad determinada.
3.10 INTERVALO DE TRABAJO: Intervalo comprendido entre las concentraciones superior e
inferior (incluyendo dichas concentraciones) y para las que se ha demostrado que el
analito es cuantificado con un nivel satisfactorio de repetibilidad, recuperación y
linealidad.
3.11 INTERVALO LINEAL: Es la capacidad de un método analítico para dar resultados que
son directamente proporcionales a la concentración del analito dentro de un intervalo
dado.
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2017-02-17
Clave:
CCAYAC-CR-03/0
Hoja: 3 de 30
SUBSTITUYE A:
CCAYAC-P-058/0
FECHA: 2011-02-16
3.12 LIMITE DE CUANTIFICACIÓN: Es la concentración más baja a la cual el analito puede
cuantificarse con una precisión y veracidad aceptables bajo las condiciones
experimentales establecidas.
3.13 LIMITE DE DETECCIÓN: Es la concentración más baja a la cual puede detectarse el
analito pero no necesariamente cuantificarse bajo las condiciones experimentales
establecidas.
3.14 METODO NORMALIZADO: Proceso de medición robusto donde pequeñas variaciones
en el procedimiento no deben producir de forma imprevista grandes variaciones en los
resultados.
3.15 METODO NO NORMALIZADO: Método alternativo que demuestra o estima el mismo
analito tal cual se mide utilizando el método normalizado.
3.16 MUESTRA ADICIONADA: Porción representativa del material a evaluar, a la que se le
adicionan cantidades conocidas del analito de interés.
3.17 PARAMETRO DE DESEMPEÑO: Parámetro específico a evaluar en una confirmación o
validación interna del método.
3.18 PRECISIÓN INTERMEDIA: Grado de concordancia entre resultados analíticos
individuales, cuando el procedimiento se aplica repetidamente a diferentes porciones de
una muestra homogénea por días, analistas o instrumentos diferentes, usando el mismo
método. Es un parámetro cuantitativo para evaluar la precisión.
3.19 PROTOCOLO DE CONFIRMACIÓN O VALIDACIÓN: Documento que describe las
actividades para llevar a cabo la confirmación o validación, incluyendo los criterios de
aceptación para la aprobación del método de prueba.
3.20 RECUPERACIÓN: Cantidad del analito recuperada cuando la muestra de prueba es
conducida a través del método analítico completo. Es un parámetro cuantitativo para
evaluar la exactitud.
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Hoja: 4 de 30
SUBSTITUYE A:
CCAYAC-P-058/0
FECHA: 2011-02-16
3.21 REPETIBILIDAD: Grado de concordancia entre resultados analíticos individuales,
cuando el procedimiento se aplica repetidamente a diferentes porciones de una muestra
homogénea por un solo analista, usando los mismos instrumentos y método en intervalos
cortos de tiempo.
3.22 RESPUESTA ANALÍTICA: Lectura obtenida al aplicar un método analítico, como
pueden ser el área o altura del pico en un cromatograma, lectura de absorbancia,
cuentas de iones en un Espectro de Masas, lectura en mV, mL gastados en volumetría,
diferencia de peso en un gravimétrico, entre otros.
3.23 RESULTADO DE ENSAYO: Valor de un mensurando obtenido tras la realización de un
método de ensayo específico.
3.24 ROBUSTEZ: Es una medida de la efectividad del método analítico de que tan buen
desempeño mantiene aún sin una implementación perfecta.
3.25 SELECTIVIDAD: Es la capacidad de un método analítico para medir solamente lo qué se
pretende que se mida.
3.26 SENSIBILIDAD: Es el cambio en la respuesta del instrumento que corresponde a un
cambio en la concentración del analito.
3.27 SESGO: Es la diferencia entre el valor promedio obtenido de los resultados de prueba
con respecto a un valor de referencia aceptado o conocido. Es un parámetro cuantitativo
para evaluar la exactitud.
3.28 VALIDACIÓN INTERNA: Es el proceso que establece, mediante estudios de laboratorio,
que las características de desempeño del método, satisfacen los requisitos para su
aplicación analítica
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Hoja: 5 de 30
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CCAYAC-P-058/0
FECHA: 2011-02-16
4. DOCUMENTOS APLICABLES
4.1 AOAC. Guidelines for Single Laboratory Validation of Chemical Methods for Dietary Supplements
and Botanicals. 2013.
4.2 CENAM. Guía para estimar la incertidumbre de medición. 2004.
4.3 Center for Drug Evaluation and Research (CDER) Reviewer. Guidance Validation of
Chromatographic Methods. FDA 1994.
4.4 Directiva 96/23/CE. Funcionamiento de los Métodos Analíticos y la Interpretación de los Resultados.
Agosto 2002.
4.5 Document No. SANCO/10684/2009. Method Validation and Quality Control Procedures for Pesticide
Residues Analysis in Food and Feed. National Food Administration.
4.6 Entidad Mexicana de Acreditación. Manual de Procedimientos. Criterios de Aplicación de la Norma
NMX-EC-17025-IMNC-2006/ISO/IEC 17025:2005. MP-FE005-10. 2014.
4.7 Entidad Mexicana de Acreditación. Política de incertidumbre de mediciones MP-CA005-05. 2013.
4.8 Eurachem/CITAG Guide CG 4. Quantifying Uncertainty in Analytical Measurement. Third Edition.
2012.
4.9 FAO. Guidelines for Single-Laboratory Validation of Analytical Methods for Trace-level
Concentrations of Organic Compounds.
4.10 FAO. The Codex Alimentarius Volume 3 “Residues of Veterinary Drugs in Foods” 2nd. Ed (1993).
4.11 FDA. Guidelines for the Validation of Chemical Methods for the FDA Foods Program. Version 1.
2012
4.12 GUM. Evaluation of measurement data-Guide to the expression of uncertainty in measurement.
First edition. 2008.
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Hoja: 6 de 30
SUBSTITUYE A:
CCAYAC-P-058/0
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4.13 Harmonized Guidelines for Single Laboratory Validation of Methods of Analysis (IUPAC Technical
Report). Appl. Chem., Vol. 74, No.5, pp. 835-855. 2002.
4.14 Miller N. James y Miller C. Jane. Estadística y Quimiometría para Química Analítica. 4ª. Edición.
Prentice Hall. 2002.
4.15 NMKL. Procedimiento No. 4 (2009). Validación de métodos de análisis químicos.
4.16 NMKL. Procedimiento No. 5 (2003). Estimación y expresión de la incertidumbre de la medición en
análisis químico.
4.17 NMX-CH-140-IMNC-2002. Guía para la expresión de incertidumbre en las mediciones.
4.18 RILAA/INPAZ. Curso a distancia sobre Validación de Métodos Químicos. Buenos Aires,
Argentina. 2005.
4.19 The Fitness for Purpose of Analytical Methods. A Laboratory Guide to Method Validation and
Related Topics. Eurachem Guide. 1998.
4.20 Validation of Analytical Methods for Food Control. Food and Agriculture Organization of the United
Nations. Rome, 1998.
5. RESPONSABILIDADES
5.1 Laboratorio Tercero Autorizado
Aplicar este documento para la validación interna o confirmación de sus métodos según corresponda.
5.2 Padrón de evaluadores
Aplicar este documento para el proceso de evaluación a laboratorios de prueba
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Hoja: 7 de 30
SUBSTITUYE A:
CCAYAC-P-058/0
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6. CRITERIOS DE LA ACTIVIDAD
6.1
Criterio No. 1.- Clasificación del método
6.1.1
Método Normalizado es aquel método publicado como primera instancia en:


Normas Oficiales Mexicanas (NOM´s)
Normas Mexicanas (NMX´s)
Como segunda instancia:












6.1.2
Métodos Oficiales del AOAC
Standard Methods
Environmental Protection Agency (EPA)
Pesticide Analytical Manual (PAM)
Collaborative International Pesticides Analytical Council (CIPAC)
American Society for Testing Materials (ASTM)
International Standard Organization (ISO)
Codex Alimentarius
Food and Drug Administration (FDA)
Food and Agriculture Organization (FAO)
European Commission (CE)
United States Department of Agriculture (USDA)
Método no Normalizado es aquel:
1. Desarrollado por el laboratorio (método propio).
2. Método obtenido de publicaciones científicas (Journals, tesis, etc).
6.1.3
Los métodos para propósitos de confirmación o validación interna se clasifican como:
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Categoría
Tipo de prueba
I
Cuantificación del analito
II
Cuantificación del analito
a nivel trazas
III
Presencia del analito a
un límite (prueba límite)
IV
Física cuantitativa
Clave:
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SUBSTITUYE A:
CCAYAC-P-058/0
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Alimentos y agua
Aditivos
Nutrientes
Metales pesados
Residuos orgánicos
Micotoxinas
Biotoxinas
Residuos veterinarios
Contaminantes
Plaguicidas
Formaldehído
Sales cuaternarias
Oxidantes,
Derivados clorados
Grado alcohólico
Color
Turbiedad
Conductividad
pH
Humedad, etc.
6.2 Criterio No. 2.- Confirmación de métodos
6.2.1 Se lleva a cabo para:
 Métodos normalizados.
 Modificaciones al método normalizado que no presenten diferencia significativa estadística.
6.2.2 Los parámetros de desempeño (dependiendo del tipo de prueba) para llevar a cabo la
confirmación del método son:
Clave:
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Hoja: 9 de 30
SUBSTITUYE A:
CCAYAC-P-058/0
FECHA: 2011-02-16
Categoría
I
II
III
IV
Contenido
Trazas
Límite
Física
Intervalo lineal
SI
SI
NO
NO
Intervalo de trabajo
SI
SI
NO
NO
Límite de detección
NO
NO
SI
NO
Límite de
cuantificación
NO
SI
NO
NO
Recuperación
SI
SI
NO
NO
Repetibilidad
SI
SI
NO
SI
Precisión intermedia
SI
SI
NO
SI
Incertidumbre
SI
SI
NO
SI
Selectividad
NO
NO
SI
NO
Parámetro de
desempeño
6.3
Criterio No. 3.-Validación interna de métodos
6.3.1 Se lleva a cabo para:
 Métodos no normalizados.
 Modificaciones a un método normalizado que presenten diferencia significativa estadística.
6.3.2 Los parámetros de desempeño (dependiendo del tipo de prueba) para llevar a cabo la
validación interna del método son:
Clave:
CCAYAC-CR-03/0
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Hoja: 10 de 30
SUBSTITUYE A:
CCAYAC-P-058/0
FECHA: 2011-02-16
Categoría
I
II
III
IV
Contenido
Trazas
Límite
Física
Intervalo lineal
SI
SI
NO
NO
Intervalo de trabajo
SI
SI
NO
NO
Límite de detección
NO
NO
SI
NO
Límite de
cuantificación
NO
SI
NO
NO
Recuperación
SI
SI
NO
NO
Repetibilidad
SI
SI
NO
SI
Precisión intermedia
SI
SI
NO
SI
Incertidumbre
SI
SI
NO
SI
Sesgo
SI
SI
NO
NO
Selectividad
SI
SI
SI
NO
Sensibilidad
SI
SI
NO
NO
Robustez
SI
SI
NO
SI
Parámetro de
desempeño
6.4 Criterio No. 4.- Selección de la matriz
6.4.1 Para métodos individuales usar la matriz más solicitada o la más compleja y considerar
todos los analitos señalados en el método.
6.4.2 Para métodos generales que apliquen a diferentes matrices: residuos orgánicos,
metales contaminantes, plaguicidas, etc. Se debe seleccionar una matriz representativa
por categoría:
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FECHA DE PROXIMA REVISIÓN:
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Clave:
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Hoja: 11 de 30
SUBSTITUYE A:
CCAYAC-P-058/0
FECHA: 2011-02-16
 Para alimentos de origen vegetal:
Grupo
Alto contenido de
humedad
Bajo contenido de
humedad
Alto contenido de grasa
Alto contenido ácido
Alto contenido de
azúcar
Categoría
Frutas y vegetales
Granos de cereales
Semillas oleosas y nueces
Frutas cítricas
Frutas secas, miel
Lúpulo, miel, café, cocoa y sus productos,
té, especias
Difíciles
 Para alimentos de origen animal:
Grupo
Carne
Leche y sus
productos
Huevos
Miel
Categoría
Carne roja
Carne blanca
Pescado
Menudencia
Grasa de carne
Leche
Queso
Yoghurt
Crema
Mantequilla
Huevo
Miel
6.4.3 Para métodos multiresiduos, si estos consideran más de 20 analitos, puede elegirse un
número de analitos representativos en base a la probabilidad de encontrarlos como
residuos en las muestras y a sus propiedades fisicoquímicas, como por ejemplo los que
den la respuesta más pobre o más variable.
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6.5
FECHA DE PROXIMA REVISIÓN:
2017-02-17
Clave:
CCAYAC-CR-03/0
Hoja: 12 de 30
SUBSTITUYE A:
CCAYAC-P-058/0
FECHA: 2011-02-16
CRITERIO No. 5.-Preparación de muestras
6.5.1 Utilizar blancos de muestra o muestras en una cantidad equivalentes a la indicada por
el método.
6.5.2 Cuando no se dispone de un blanco de muestra, determinar el contenido promedio del
analito en una muestra comercial. Preparar estas muestras utilizando una cantidad
equivalente a la mitad de la muestra que originalmente requiere el método y adicionar
diferentes niveles de concentración de estándar.
6.5.3 Cuando no sea posible adicionar de manera directa el analito a la muestra, la adición
puede ser llevada a cabo en alguna etapa del método, de preferencia en las primeras
etapas.
6.5.4 Los blancos de muestras o muestras adicionadas deben ser preparados por un mismo
analista.
6.5.5 Para las pruebas físicas cuantitativas no se adicionan muestras, estas se utilizan con el
contenido original de analito.
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FISICOQUÍMICOS
VIGENTE A PARTIR DE:
2014-02-17
6.6
FECHA DE PROXIMA REVISIÓN:
2017-02-17
Clave:
CCAYAC-CR-03/0
Hoja: 13 de 30
SUBSTITUYE A:
CCAYAC-P-058/0
FECHA: 2011-02-16
CRITERIO No. 6.-Evaluación de los parámetros de desempeño
Parámetro
Muestras
Repeticiones
Calcular/determinar
a)
Graficar respuesta
analítica (y) vs. nivel
de concentración
adicionado (x)
a) Utilizar los niveles
establecidos en la curva de
calibración ó considerar la
tabla guía contenida en el
anexo 7.1.
b)
Confirmar
visualmente la
existencia de
linealidad del
intervalo.
b)
Los
niveles
de
concentración deben estar
igualmente espaciados en
el intervalo de interés.
c)
Elaborar gráfico de
residuales.
d)
Confirmar
aleatoriedad de los
residuales alrededor
de la recta
Blancos de muestra
(matriz) o muestras
adicionadas
Intervalo
lineal
Mínimo 5 niveles
diferentes de
concentración
Cada nivel por
triplicado
Observaciones
e)
Calcular el intervalo
de confianza del
intercepto
c) Considerar en el intervalo
el valor de la especificación
y/o
los
valores
de
aceptación y rechazo y
estar en la medida de lo
posible al centro de este.
d) Reportar el intervalo de
concentraciones obtenido
en
las
unidades
establecidas por el método.
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Parámetro
Intervalo de
trabajo
Límite de
detección
(pruebas
cualitativas)
Muestras
FECHA DE PROXIMA REVISIÓN:
2017-02-17
Repeticiones
Utilizar los datos
obtenidos en la
estimación del
intervalo lineal
Blancos de muestra
(matriz) o muestras
adicionadas.
Mínimo 5 niveles
diferentes de
concentración.
10 réplicas de
cada nivel
Calcular/determinar
a)
Calcular la cantidad
recuperada para
cada nivel
b)
Considerar los
niveles que cumplen
con los criterios de
recuperación y
repetibilidad
establecidos.
c)
Graficar la
concentración
obtenida (y) vs. la
concentración
adicionada (x)
d)
Calcular el
coeficiente de
correlación (r ) y el
intervalo de
confianza de la
pendiente.
Elaborar tabla de respuesta de
resultados positivos y
negativos con respecto a la
concentración
Clave:
CCAYAC-CR-03/0
Hoja: 14 de 30
SUBSTITUYE A:
CCAYAC-P-058/0
FECHA: 2011-02-16
Observaciones
Reportar el intervalo de
concentraciones obtenido
en las unidades
establecidas por el método
Establecer como límite de
detección , la
concentración mínima en la
cual se obtienen 10
resultados positivos
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VIGENTE A PARTIR DE:
2014-02-17
Parámetro
Muestras
FECHA DE PROXIMA REVISIÓN:
2017-02-17
Repeticiones
Calcular/determinar
a)
Límites de
detección y
cuantificación
Recuperación
y sesgo
Utilizar los datos
obtenidos en la
estimación del
intervalo lineal
Utilizar los datos
obtenidos en la
estimación del
intervalo de trabajo
b)
Calcular
la
pendiente (m) y la
desviación estándar
de la ordenada al
origen (sbo) a partir
de la respuesta
analítica (y) vs nivel
de
concentración
adicionado (x)
Estimar los límites
con las siguientes
ecuaciones:
LD 
3.3 * sbo
m
LC 
10 * sbo
m
Determinar el intervalo de
confianza de la recuperación.
Clave:
CCAYAC-CR-03/0
Hoja: 15 de 30
SUBSTITUYE A:
CCAYAC-P-058/0
FECHA: 2011-02-16
Observaciones
a) Reportar los límites
estimados
estadísticamente en las
unidades establecidas por
el método.
b) Considerar como límite
práctico de cuantificación
el nivel inferior estimado
en el intervalo de trabajo.
Reportar el intervalo de
confianza del % de
recobro
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FISICOQUÍMICOS
VIGENTE A PARTIR DE:
2014-02-17
Parámetro
Repetibilidad
y precisión
intermedia
Muestras
Blancos de
muestra o
muestras
adicionadas.
FECHA DE PROXIMA REVISIÓN:
2017-02-17
Repeticiones
Cada nivel por
triplicado.
Calcular/determinar
a)
Considerar
los
resultados obtenidos
(% de recobro) para
los niveles inferior,
medio y superior
estimados en el
intervalo de trabajo
como los datos para
el analista 1, equipo
1 o día 1
b)
Analizar
las
muestras por un
analista diferente (3
niveles/triplicado
/analista). Obtener el
% de recobro.
c)
Niveles inferior,
medio y superior
estimados en el
intervalo de trabajo
Combinar todos los
resultados y de ser
necesario verificar la
sospecha de valores
anómalos por nivel,
aplicando la prueba
de Grubbs.
d)
Efectuar el análisis
de ANOVA de dos
factores. Verificar la
significancia
estadística.
e)
Obtener la media de
todos los datos y
calcular
los
coeficientes
de
variación de la
repetibilidad (CVr) y
precisión intermedia
(CVR).
Clave:
CCAYAC-CR-03/0
Hoja: 16 de 30
SUBSTITUYE A:
CCAYAC-P-058/0
FECHA: 2011-02-16
Observaciones
a)
Si
solo
se
dispone de un
analista, analizar
las muestras en
dos
días
diferentes o con
dos
equipos
diferentes (tres
niveles/triplicado
/día o equipo).
b)
Reportar
coeficientes
variación
obtenidos
los
de
Clave:
CCAYAC-CR-03/0
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CRITERIOS PARA LA VALIDACIÓN INTERNA Y CONFIRMACIÓN DE MÉTODOS
FISICOQUÍMICOS
VIGENTE A PARTIR DE:
2014-02-17
Parámetro
Muestras
Hoja: 17 de 30
SUBSTITUYE A:
CCAYAC-P-058/0
FECHA: 2011-02-16
FECHA DE PROXIMA REVISIÓN:
2017-02-17
Repeticiones
Calcular/determinar
Observaciones
a) Especificar el mensurando.
b) Identificar las fuentes de
incertidumbre
Incertidumbre
No aplica
Utilizar la
información
obtenida en el
proceso de
confirmación o
validación
interna.
c) Cuantificar los
componentes de la
incertidumbre (u)
Reportar la incertidumbre
expandida con un factor
de cobertura k=2 y una
nivel de significancia del
95 %.
d) Calcular la incertidumbre
estándar combinada (uc)
e) Calcular la incertidumbre
expandida(Uexp)
a)
Sensibilidad
Utilizar los datos
obtenidos en la
estimación del
intervalo de trabajo
b)
Graficar
la
respuesta analítica
(y)
vs
la
concentración
adicionada (x)
Calcular
pendiente
recta (m)
de
la
la
Reportar la relación entre
el cambio de respuesta
analítica por unidad de
concentración.
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Parámetro
Muestras
FECHA DE PROXIMA REVISIÓN:
2017-02-17
Repeticiones
Clave:
CCAYAC-CR-03/0
Hoja: 18 de 30
SUBSTITUYE A:
CCAYAC-P-058/0
FECHA: 2011-02-16
Calcular/determinar
Observaciones
Comparar las mediciones de
las soluciones
Para métodos
cromatográficos verificar
adicionalmente la pureza
del pico de interés
utilizando un detector de
arreglo de diodos o
espectrometría de masas
y su resolución
Solución estándar
y blanco de
muestra o muestra
adicionada
Selectividad
Para métodos
cuantitativos a una
concentración
equivalente al nivel
medio del intervalo
de trabajo
estimado.
Para métodos
cualitativos a una
concentración por
encima del límite
de detección.
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CRITERIOS PARA LA VALIDACIÓN INTERNA Y CONFIRMACIÓN DE MÉTODOS
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VIGENTE A PARTIR DE:
2014-02-17
Parámetro
Muestras
FECHA DE PROXIMA REVISIÓN:
2017-02-17
Repeticiones
Calcular/determinar
Clave:
CCAYAC-CR-03/0
Hoja: 19 de 30
SUBSTITUYE A:
CCAYAC-P-058/0
FECHA: 2011-02-16
Observaciones
a) Identificar de 4 a 7 factores
que puedan tener un efecto
significativo en el desempeño
del método y variar ligeramente
cada uno ellos.
b) Efectuar una serie de 8
combinaciones de valores
nominales con variaciones
deliberadas (combinaciones de
Youden)
Blancos de muestra
o muestras
adicionadas
Robustez
Concentración
equivalente al nivel
medio estimado en
el intervalo de
trabajo
8 muestras
c) Analizar una muestra por
duplicado con cada serie de
combinaciones
d) Calcular las diferencias de
las mediciones de los
subgrupos.
a) Reportar los factores que
más influyen en el resultado
final.
b) Establecer si el método
es robusto frente a las
variaciones establecidas.
e) Graficar en una línea los
valores de las diferencias de
menor a mayor.
f) Calcular la desviación
estándar de las diferencias
(sDi).
Nota 1. Para la determinación de: intervalo lineal y de trabajo, límites de detección y cuantificación, recuperación, sesgo,
repetibilidad, sensibilidad y robustez se debe aplicar el método de ensayo específico por un mismo analista (el de más
experiencia en el análisis) bajo las mismas condiciones.
Nota 2. Para pruebas físicas cuantitativas la repetibilidad y precisión intermedia se calculan en base a la lectura directa.
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6.7
FECHA DE PROXIMA REVISIÓN:
2017-02-17
Clave:
CCAYAC-CR-03/0
Hoja: 20 de 30
SUBSTITUYE A:
CCAYAC-P-058/0
FECHA: 2011-02-16
Criterio No. 7.- Criterios de aceptación
Parámetro
Intervalo lineal
Intervalo de trabajo
Límite de cuantificación
práctico
Límite de cuantificación
estimado
Recuperación
Repetibilidad
Precisión intermedia
Sesgo
Robustez
Criterio de aceptación
a)
b)
c)
a)
b)
Comportamiento lineal en la gráfica de concentración vs respuesta analítica.
Datos aleatorios en el gráfico de residuales
El intervalo de confianza del intercepto debe incluir el cero
Coeficiente de correlación r= 0.98 a 1.00
El intervalo de confianza de la pendiente debe incluir el valor de la unidad
Nivel inferior estimado en el intervalo de trabajo
Menor o igual al nivel inferior estimado en el intervalo de trabajo
Los establecidos en la referencia original del método. Si no se dispone de estos datos
utilizar como guía las tablas contenidas en los anexos 7.3 y 7.4.
El intervalo de confianza del % de recobro debe incluir el valor de 100 %
Si sDi < sR el conjunto de los factores no influye en el resultado y por tanto el método es
robusto.
La muestra no debe presentar ningún tipo de señal que interfiera con la señal que se
encuentra para el estándar
a)
Cromatografía
Resolución apropiada del analito de interés
El analito debe eluir en el tiempo de retención típico de la sustancia de referencia en las
mismas condiciones experimentales
Selectividad
b)
Espectrofotometría
Los máximos de absorción en el espectro del analito presentaran las mismas longitudes
de onda que los de la sustancia de referencia.
c)
Prueba límite
 Muestra sin analito: negativa.
 Muestra con analito: positiva.
 Sustancia de referencia: positiva.
Nota 3.- Utilizar estos criterios como una guía y no de forma rígida. En algunos casos como matrices complejas,
concentraciones muy bajas del analito (dioxinas, orgánicos persistentes) y métodos para multiresiduales pudieran no ser
alcanzados.
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6.8
FECHA DE PROXIMA REVISIÓN:
2017-02-17
Clave:
CCAYAC-CR-03/0
Hoja: 21 de 30
SUBSTITUYE A:
CCAYAC-P-058/0
FECHA: 2011-02-16
Criterio No. 8.- Protocolo de confirmación o validación interna
6.8.1
Elaborar un protocolo que incluya lo siguiente:
Título
1.Objetivo
2. Campo de aplicación
3. Método de ensayo
4. Equipo
5. Materiales
6. Reactivos
7. Muestras
8. Desarrollo experimental
9. Resultados
10. Criterios de
aceptación
Protocolo de confirmación o validación interna (según aplique). Señalar asimismo
el nombre y clave del método que se pretende validar.
Considerar los parámetros de desempeño a evaluar y el analito a determinar
Indicar el tipo de producto (s) para los cuales aplica la validación
Elaborar un diagrama de flujo simplificado, que señale la metodología empleada
para cuantificar el analito (método interno)
Descripción general del equipo a utilizar en la validación.
Indicar los materiales a utilizar separando como material de uso general y material
volumétrico
a) Indicar el nombre de los reactivos a utilizar y su grado.
b) Señalar los patrones a utilizar con su grado de pureza o concentración.
c) Detallar la preparación de las soluciones de trabajo (soluciones que no
requieren de un valor de título exacto).
d) Detallar la preparación de la soluciones de referencia (soluciones que requieren
de un título exacto, soluciones stock, curva de calibración, etc.).
Indicar las características, forma de almacenamiento y cantidades de muestra
estimadas para llevar a cabo la validación.
Detallar la preparación de los blancos de muestra o muestras adicionadas.
Detallar las instrucciones para cada uno de los parámetros de desempeño a
ensayar.
Propuesta de formato de registro
Establecer los criterios de aceptación que deben cumplirse con su respectiva
referencia bibliográfica.
6.8.2
Debe incluir los parámetros de desempeño de acuerdo al tipo de prueba para los
diferentes tipos de procedimientos analíticos y los criterios de aceptación predeterminados.
6.8.3
Debe ser aprobado previo a su uso y en su caso los cambios efectuados antes de su
implementación. Incluir firmas de quien elaboró, revisó y aprobó.
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6.9
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Clave:
CCAYAC-CR-03/0
Hoja: 22 de 30
SUBSTITUYE A:
CCAYAC-P-058/0
FECHA: 2011-02-16
Criterio No. 9.- Informe de resultados
6.9.1
Elaborar un informe de resultados que incluya lo siguiente:
Título
1.Objetivo
2. Campo de aplicación
3. Método de ensayo
4. Equipo
5. Materiales
6. Reactivos
Informe de resultados de confirmación o validación interna (según aplique).
Señalar asimismo el nombre y clave del método que se validó.
Considerar los parámetros de desempeño evaluados y el analito determinado.
Indicar el tipo de producto (s) para los cuales aplicó la validación
Elaborar un diagrama de flujo simplificado, que señale la metodología empleada
para cuantificar el analito (método interno)
Descripción del nombre, marca, modelo, número de serie, número de
identificación e intervalo de trabajo del equipo utilizado en la validación
Descripción de:
a) Nombre, marca y lote del material de uso general utilizado.
b) Nombre, marca, clave, volumen nominal y volumen real del material volumétrico
empleado
a) Indicar el nombre, marca, grado, pureza, presentación y lote de los reactivos
utilizados
b) Indicar el nombre, marca, pureza o concentración, presentación y lote de los
patrones de referencia utilizados
c) Detallar la preparación de las soluciones de trabajo (soluciones que no
requieren de un valor de título exacto) que se emplearon
d) Detallar la preparación de la soluciones de referencia (soluciones que requieren
de un título exacto, soluciones stock, curva de calibración, etc.) que se utilizaron.
Indicar las características, forma de almacenamiento, marca, presentación,
caducidad y cantidades de muestra utilizadas para llevar a cabo la validación.
7. Muestras
Detallar la preparación de los blancos de muestra o muestras adicionadas
utilizados.
Detallar como se llevaron a cabo los ensayos de cada uno de los parámetros de
8. Desarrollo experimental
desempeño.
Presentación de resultados en forma de tablas, señalando fechas de inicio y
9. Resultados
término, analistas, laboratorio, analito, matriz, unidades y clave de bitácora o
registro primario
Presentar en forma de tabla los criterios de aceptación considerados y los
10. Análisis de resultados
resultados obtenidos y hacer las observaciones correspondientes.
Efectuar una conclusión final en donde se señale que el método se ajusta al uso
11. Conclusión
propuesto
12. Bibliografía
Referencias utilizadas.
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Hoja: 23 de 30
SUBSTITUYE A:
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FECHA: 2011-02-16
Los que aplique:
13. Anexos
Bases de datos utilizadas
Cromatogramas, espectros, resultados impresos, etc.
Certificados de análisis o pureza.
Certificados de trazabilidad
Certificados de calibración de material.
Formatos de verificación de material
Gráficos de control, etc.
6.9.2
Los resultados deben ser evaluados, analizados y comparados contra los criterios de
aceptación.
6.8.4
La conclusión del informe debe indicar si los parámetros fueron acordes y por tanto el
método puede utilizarse. Si no se cumple con los criterios de aceptación, los resultados deben
ser investigados, o si se aceptan deben ser justificados. Incluir firmas de quien elaboró, revisó y
aprobó.
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Clave:
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Hoja: 24 de 30
SUBSTITUYE A:
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FECHA: 2011-02-16
7. ANEXOS
7.1 Guía para considerar los niveles del intervalo lineal
Categoría
Tipo de prueba
Intervalo recomendado
I
Cuantificación del analito
Cuantificación del analito a
nivel trazas
80 a 120 % el valor de la especificación
II
0 a 150 % el valor de la especificación
7.2 Valores críticos de G (p=0.05) para un contraste de dos colas
Tamaño de
muestra
3
4
5
6
7
8
9
10
Valor crítico
1.155
1.481
1.715
1.887
2.020
2.126
2.215
2.290
Referencia.- Outliers in Statistical data, Vic Barnett and Toby Lewis, 2nd Edition, 1984, John Wiley & Sons Limited
7.3 Criterios de aceptación para la recuperación
Concentración del analito
100 %
10 %
1%
0.1 %
0.01 %
Intervalo
98-101 %
95-102 %
92-105 %
90-108 %
85-110 %
Referencia.- AOAC. Guidelines for Single Laboratory Validation of Chemical Methods for Dietary Supplements and
Botanicals. 2013
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FECHA DE PROXIMA REVISIÓN:
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Concentración del analito
≥ 100 µg/kg ó µg/L (ppb)
≥ 10  100 µg/kg ó µg/L (ppb)
≥ 1  10 µg/kg ó µg/L (ppb)
≤ 1 µg/kg ó µg/L (ppb)
Clave:
CCAYAC-CR-03/0
Hoja: 25 de 30
SUBSTITUYE A:
CCAYAC-P-058/0
FECHA: 2011-02-16
Intervalo
80-110%
70-110 %
60-120 %
50-120 %
Referencia.- The Codex Alimentarius “Residues of Veterinary Drugs in Foods” Joint FAO/WHO Food Standards Program.
1993
7.4 Criterios de aceptación para repetibilidad y precisión intermedia
Concentración del analito
100 %
10 %
1%
0.1 %
0.01 %
Coeficiente de variación
CV  2%
CV 3 %
CV 4 %
CV  6 %
CV  8 %
Referencia.- AOAC. Guidelines for Single Laboratory Validation of Chemical Methods for Dietary Supplements and
Botanicals. 2013
Concentración del analito
> 1000 µg/kg ò µg/L (ppb)
> 100 ≤ 1000 µg/kg ò µg/L (ppb)
> 10 ≤ 100 µg/kg ò µg/L (ppb)
>1 µg/kg ò µg/L (ppb)
≤ 1 µg/kg ò µg/L
Coeficiente de variación
CV 10 %
CV  15 %
CV  20 %
CV  30 %
CV  35 %
Referencia.- FAO. Guidelines for Single-Laboratory Validation of Analytical Methods for Trace-level Concentrations of
Organic Compounds.
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Clave:
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Hoja: 26 de 30
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7.5 Combinaciones de Youden (Robustez)
Número de corrida
1
2
3
4
5
6
7
8
Combinación de factores
B
C
D
E
F
B
c
D
e
f
b
c
d
E
f
b
c
d
e
F
B
C
d
e
F
B
c
d
E
f
b
C
D
e
f
b
c
D
E
F
A
A
A
A
a
a
a
a
7.6. Fórmulas estadísticas
a) Media
_
x
x
n
a) Desviación estándar (s)
s



 x  x


n  1
2
b) Coeficiente de variación (CV)
CV 
s

*100
x
d) Pendiente (m)
m
n  xy   x  y
n  x 2   x 
2
G
g
g
G
g
G
G
g
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e) Ordenada al origen (bo)
bo 
 y  m x
n
f) Coeficiente de correlación (r)
r
n xy    x  y
n x    x  n y    y 
2
2
2
2 1/ 2
g) Media general (x)

x
x1  x 2  x 3  x 4  .....  x n
n
h) Desviación estándar de la repetibilidad (sr)
s r  MSd
i)
Coeficiente de variación de la repetibilidad (CVr)
CVr 
sr
_
* 100
x
j)
Desviación estándar de la precisión intermedia (sR)
s R  MSd  MSe
Clave:
CCAYAC-CR-03/0
Hoja: 27 de 30
SUBSTITUYE A:
CCAYAC-P-058/0
FECHA: 2011-02-16
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FECHA DE PROXIMA REVISIÓN:
2017-02-17
k) Coeficiente de variación de la precisión intermedia (CVR)
CVR 
sR
_
* 100
x
l)
Intervalo de confianza (IC)
IC  promedio  t (0.05) *
s
n
m) Desviación estándar de la regresión (sy/x)
sy / x 
y
 yˆ i 
2
i
n2
n) Desviación estándar de la ordenada al origen (sbo)
sbo  s y / x
1

n
x 2
 x2 
 x 
2
n
o) Desviación estándar de la pendiente (sb1)
sb1 
sy / x
 x
2
 x
2
i
Clave:
CCAYAC-CR-03/0
Hoja: 28 de 30
SUBSTITUYE A:
CCAYAC-P-058/0
FECHA: 2011-02-16
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FECHA DE PROXIMA REVISIÓN:
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p) Intervalo de confianza de la pendiente IC(b1)
IC(b1 )  b1  t (0.05) * sb1
q) Estadístico G
_
valor sospechoso  x
G
s
7.7 ANOVA (repetibilidad y precisión intermedia)
Nivel
Analista, día o equipo
1
2
100.23*
102.77
Inferior
99.11*
101.97
Medio
101.85*
99.00*
99.73*
98.12*
99.33*
102.01
102.06
100.21
102.14
101.85
Superior
99.75*
100.60
99.36*
100.40
*Datos obtenidos de la prueba de intervalo de trabajo
Clave:
CCAYAC-CR-03/0
Hoja: 29 de 30
SUBSTITUYE A:
CCAYAC-P-058/0
FECHA: 2011-02-16
Clave:
CCAYAC-CR-03/0
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Hoja: 30 de 30
SUBSTITUYE A:
CCAYAC-P-058/0
FECHA: 2011-02-16
FECHA DE PROXIMA REVISIÓN:
2017-02-17
Análisis de varianza de dos factores con una sola muestra por grupo
RESUMEN
Cuenta
Suma
Promedio
Varianza
Fila 1
Fila 2
Fila 3
Fila 4
Fila 5
2
2
2
2
2
203
201.08
203.86
201.06
199.94
101.5
100.54
101.93
100.53
99.97
3.2258
4.0898
0.0128
4.6818
0.1152
Fila 6
2
200.26
100.13
8.0802
Fila 7
Fila 8
Fila 9
2
2
2
201.18
200.35
199.76
100.59
100.175
99.88
3.1752
0.36125
0.5408
Analista 1
9
896.48
99.60888889
1.05238611
Analista 2
9
914.01
101.5566667
0.82435
ANÁLISIS DE VARIANZA
Origen de
las
variaciones
Suma de
cuadrados
Grados de
libertad
Niveles
7.80331111
8
Analista
17.0722722
1
Error
7.21057778
8
Total
32.0861611
17
Promedio de
los cuadrados
F calculada
Probabilidad
F tablas
MSd=
0.975413889
1.08220331
0.45688708
3.43810123
MSe=
17.07227222
18.9413639
0.00243816
5.31765507
0.901322222
COMISIÓN DE CONTROL ANALÍTICO Y AMPLIACIÓN DE COBERTURA
CONTROL DE CAMBIOS DE DOCUMENTOS DEL SISTEMA DE GESTIÓN DE LA CALIDAD
VIGENTE A PARTIR DE:
2014-02-17
PÁGINA
CRITERIOS PARA LA VALIDACIÓN INTERNA Y CONFIRMACIÓN
DE MÉTODOS FISICOQUÍMICOS
NUMERAL
PÁRRAFO
Todo el
documento
Título
1/20
1/20
1.Objetivo
2.Alcance
CLAVE:
CCAYAC-CR-03/0
CLAVE: CCAYAC-P-058 FECHA: 2011-02-16
O CAMBIOS: Adición, eliminación
Cambia de procedimiento a criterios
Criterios para la validación interna y confirmación de métodos fisicoquímicos
Definir los criterios mínimos para llevar a cabo actividades de validación de
métodos no normalizados interna o confirmación (validación parcial) de métodos
normalizados que involucren mediciones fisicoquímicas y físicas cuantitativas y
cualitativas, para presentar evidencia objetiva de confirmar que estos se pueden
aplicar correctamente antes de utilizarlos para los ensayos analíticos
Aplica a los métodos fisicoquímicos volumétricos, gravimétricos,
potenciométricos, espectrofotométricos, cromatográficos y pruebas físicas
empleados en el análisis de agua, alimentos, fármacos, materia prima, producto
a granel, producto terminado, productos biológicos, juguetes, cerámicas, bebidas
alcohólicas y no alcohólicas entre otros.
Este documento debe ser aplicado por el personal de los laboratorios deensayo
aspirantes ante la COFEPRIS a terceros autorizados, para la validación de sus
métodos y por los miembros del padrón de evaluadores para el proceso de
evaluación a laboratorios de prueba y es factible establecer no conformidades
con base en los criterios descritos en el mismo.
Este documento debe ser aplicado por el personal de los laboratorios de ensayo
aspirantes a terceros autorizados ante la COFEPRIS, para la validación interna o
confirmación de los métodos fisicoquímicos volumétricos, gravimétricos,
potenciométricos, espectrofotométricos, cromatográficos y pruebas físicas
empleados en el análisis de agua, alimentos, juguetes, cerámicas, bebidas
alcohólicas y no alcohólicas entre otros y, es factible establecer no
conformidades con base en los criterios descritos en el mismo.
1/20
4/20
3.Definiciones
4.Documentos
aplicables
Se agregan definiciones para Confirmación del método, informe de confirmación
o validación, intervalo de confianza, protocolo de confirmación o validación y
validación interna.
Se eliminan los conceptos matriz o placebo, fortificada, reproducibilidad y
validación parcial
Center for Drug Evaluation and Research (CDER) Reviewer. Guidance Validation
of Chromatographic Methods. FDA 1994.
CCAYAC-F-001/5
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CONTROL DE CAMBIOS DE DOCUMENTOS DEL SISTEMA DE GESTIÓN DE LA CALIDAD
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2014-02-17
CRITERIOS PARA LA VALIDACIÓN INTERNA Y CONFIRMACIÓN
DE MÉTODOS FISICOQUÍMICOS
CLAVE:
CCAYAC-CR-03/0
Document No. SANCO/10684/2009. Method Validation and Quality Control
Procedures for Pesticide Residues Analysis in Food and Feed. National Food
Administration.
Entidad Mexicana de Acreditación. Manual de Procedimientos. Criterios de
Aplicación de la Norma NMX-EC-17025-IMNC-2006/ISO/IEC 17025:2005. MPFE005-10. 2014.
FAO. Guidelines for Single-Laboratory Validation of Analytical Methods for Tracelevel Concentrations of Organic Compounds.
FAO. The Codex Alimentarius Volume 3 “Residues of Veterinary Drugs in Foods”
2nd. Ed (1993).
FDA. Guidelines for the Validation of Chemical Methods for the FDA Foods
Program. Version 1. 2012
GUM. Evaluation of measurement data-Guide to the expression of uncertainty in
measurement. First edition. 2008.
Miller N. James y Miller C. Jane. Estadística y Quimiometría para Química
Analítica. 4ª. Edición. Prentice Hall. 2002.
NMKL. Procedimiento No. 4 (2009). Validación de métodos de análisis químicos.
NMKL. Procedimiento No. 5 (2003). Estimación y expresión de la incertidumbre
de la medición en análisis químico.
Validation of Analytical Methods for Food Control. Food and Agriculture
Organization of the United Nations. Rome, 1998.
CENAM-EMA. Guía técnica sobre trazabilidad e incertidumbre en las mediciones
analíticas que emplean la técnica de medición de conductividad electrolítica. Abril
2008.
CENAM-EMA. Guía técnica sobre trazabilidad e incertidumbre en las mediciones
analíticas que emplean las técnicas de Espectrofotometría de Absorción Atómica
y de Emisión y Atómica con Plasma Acoplado Inductivamente. Abril 2008.
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CRITERIOS PARA LA VALIDACIÓN INTERNA Y CONFIRMACIÓN
DE MÉTODOS FISICOQUÍMICOS
CLAVE:
CCAYAC-CR-03/0
CENAM-EMA. Guía técnica sobre trazabilidad e incertidumbre en las mediciones
analíticas que emplean las técnicas de Cromatografía de Gases (GC) y
Cromatografía de Líquidos de Alta Resolución (HPLC). Abril 2008.
CENAM-EMA. Guía técnica sobre trazabilidad e incertidumbre en las mediciones
analíticas que emplean la técnica de Gravimetría de Masa. Abril 2008.
CENAM-EMA. Guía técnica sobre trazabilidad e incertidumbre en las mediciones
analíticas que emplean la técnica de medición de pH. Abril 2008.
CENAM-EMA. Guía técnica sobre trazabilidad e incertidumbre en las mediciones
analíticas que emplean la técnica de Titulación volumétrica. Abril 2008.
CENAM-EMA. Guía técnica sobre trazabilidad e incertidumbre en las mediciones
analíticas que emplean la técnica de Espectrofotometría de Ultravioleta-Visible.
Abril 2008.
Colegio Nacional de Químicos Farmacéuticos Biólogos. Guía de Validación de
Métodos Analíticos. Edición 2002.}
Eurolab. Measurement Uncertainty in Testing. A short introduction on how to
characterize accuracy and reliability of results including a list of useful references.
Techical Report No. 1/2002. June 2002.
Se cambia por:
5. RESPONSABILIDADES
5.1 Laboratorio Tercero Autorizado
5/20
5. Descripción de
Aplicar este documento para la validación interna o confirmación de sus métodos
la actividad
según corresponda.
5.2 Padrón de evaluadores
Aplicar este documento para el proceso de evaluación a laboratorios de prueba
5/20
5.1.1
Farmacopea de los Estados Unidos Mexicanos (FEUM)
United States Pharmacopoeia (USP)
British Pharmacopoeia (BP)
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6/20
CRITERIOS PARA LA VALIDACIÓN INTERNA Y CONFIRMACIÓN
DE MÉTODOS FISICOQUÍMICOS
5.2 y 5.3
Categoría
Tipo de prueba
I
Cuantificación del analito
II
Cuantificación del analito a nivel trazas
III
Presencia del analito a un límite (prueba
límite)
IV
Física cuantitativa
CLAVE:
CCAYAC-CR-03/0
Alimentos y agua
Aditivos
Nutrientes
Metales pesados
Residuos orgánicos
Micotoxinas
Biotoxinas
Residuos veterinarios
Contaminantes
Plaguicidas
Formaldehído
Sales cuaternarias
Oxidantes,
Derivados clorados
Grado alcohólico
Color
Turbiedad
Conductividad
pH
Humedad, etc.
Se elimina el contenido de los criterios no. 2 y 3
Se divide en dos criterios.
Criterio No. 2.- Confirmación de métodos
Se lleva a cabo para:
 Métodos normalizados.
 Modificaciones al método normalizado que no presenten diferencia
significativa estadística.
8/20
5.4
Criterio No. 3.-Validación interna de métodos
Se lleva a cabo para:
 Métodos no normalizados.
 Modificaciones a un método normalizado que presenten diferencia
significativa estadística.
La tabla se divide en dos partes.
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CRITERIOS PARA LA VALIDACIÓN INTERNA Y CONFIRMACIÓN
DE MÉTODOS FISICOQUÍMICOS
CLAVE:
CCAYAC-CR-03/0
Física
Gravimétrica
Volumétrica
Potenciométrica
Cromatográfica
Parámetro de
desempeño
Espectrofotométrica
Tipo de prueba
Categoría
Parámetro
I
II
III
IV
de desempeño
Contenido
Trazas
Límite
Física
Seleccionar el tipo de matriz a evaluar conforme a:
9/20
5.5
1. La más solicitada.
2. La más compleja.
3. Para métodos generales que apliquen a diferentes matrices;
FEUM, Residuos orgánicos, metales contaminantes, etc. Se debe
seleccionar una matriz representativa por grupo (alimentos,
principio activo, tipo de presentación, entre otros)
a. Alimentos: lácteos, cárnicos, productos de la pesca agua,
cereales, frutas, vegetales, productos de panificación,
miel, productos de confitería, especias, entre otros.
b. Medicamentos: cápsula, gragea, tableta, suspensión,
jarabe, ungüento, colirio, espuma, gel, supositorio,
parche, jalea, ovulo, entre otros.
Para métodos individuales usar la matriz más solicitada o la más compleja y
considerar todos los analitos señalados en el método.
Para métodos generales que apliquen a diferentes matrices: residuos orgánicos,
metales contaminantes, plaguicidas, etc. Se debe seleccionar una matriz
representativa por categoría:
Para métodos multiresiduos, si estos consideran más de 20 analitos, puede
elegirse un número de analitos representativos en base a la probabilidad de
encontrarlos como residuos en las muestras y a sus propiedades fisicoquímicas,
como por ejemplo los que den la respuesta más pobre o más variable.
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CRITERIOS PARA LA VALIDACIÓN INTERNA Y CONFIRMACIÓN
DE MÉTODOS FISICOQUÍMICOS
10/20
5.6
Intervalo lineal
10/20
5.6
Intervalo de
trabajo
11/20
5.6
Límites de
detección y
cuantificación
11/20
5.6
Recuperación y
sesgo
CLAVE:
CCAYAC-CR-03/0
Se agregan dos tablas para alimentos de origen vegetal y animal
Calcular el intervalo de confianza del intercepto
Se cambia Anexo A por 7.1
Utilizar los datos obtenidos en la estimación del intervalo lineal
Cada nivel por triplicado
Calcular la cantidad recuperada para cada nivel
Calcular la pendiente (m), el coeficiente de correlación (r) y el intervalo de
confianza de la pendiente
Blancos de muestra (placebos) o muestras adicionadas
Mínimo 5 niveles diferentes de concentración.
Cada nivel por triplicado
Graficar la respuesta analítica (y) vs la concentración adicionada (x)
Blancos de muestra (placebos) o muestras adicionadas.
Mínimo 5 niveles diferentes de concentración
Cada nivel por triplicado
Calcular la concentración recuperada para cada nivel de concentración
adicionado.
Para el sesgo, efectuar la resta aritmética de la concentración añadida menos la
concentración recuperada
Determinar el intervalo de confianza de la recuperación.
Reportar el intervalo de confianza del % de recobro
Se conjuntan en una sola columna
Se elimina el concepto reproducibilidad
Blancos de muestra (placebos) o muestras adicionadas.
Tres niveles diferentes de concentración (niveles inferior, medio y superior
estimados en el intervalo de trabajo)
Cada nivel por triplicado sextuplicado
12/20
Analizar las muestras por un mismo analista (analista 1) en 2 días diferentes (3
5.6 Repetibilidad y niveles/triplicado /día).
reproducibilidad Analizar las muestras por un analista diferente (3 niveles/triplicado /analista).
Obtener el % de recobro
Utilizar la información obtenida en la estimación del intervalo de trabajo como los datos
para el día 1 (cada nivel por triplicado por día).
Considerar los resultados obtenidos (% de recobro) para los niveles inferior,
medio y superior estimados en el intervalo de trabajo como los datos para el
analista 1, equipo 1 o día 1
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CRITERIOS PARA LA VALIDACIÓN INTERNA Y CONFIRMACIÓN
DE MÉTODOS FISICOQUÍMICOS
CLAVE:
CCAYAC-CR-03/0
Combinar todos los resultados y de ser necesario verificar la sospecha de valores
anómalos por nivel, aplicando la prueba de Grubbs.
Efectuar el análisis de ANOVA de dos factores. Verificar la significancia
estadística.
Calcular la media (x), desviación estándar (sr) y el coeficiente de variación (CVr)
de los % de recuperación obtenidos para cada nivel adicionado
Combinar estos resultados con los datos obtenidos en la estimación de la
repetibilidad y calcular la media (x), desviación estándar (sR) y el coeficiente de
variación (CVR) de los % de recobro para cada nivel
Obtener la media de los todos los datos y calcular los coeficientes de variación
de la repetibilidad (CVr) y precisión intermedia (CVR).
Si no se cuenta con dos analistas o dos equipos para estimar la reproducibilidad, estimar
solo la repetibilidad con el mismo analista pero utilizando un tercer día.
Si solo se dispone de un analista, analizar las muestras en dos días diferentes o
con dos equipos diferentes (tres niveles/triplicado /día o equipo).
Calcular el % de recuperación de los 6 resultados para cada nivel
Reportar la desviación estándar
obtenidos
(sr) o coeficiente de variación (CVr) máximos
Reportar los coeficientes de variación obtenidos
13/20
5.6 Sensibilidad
13/20
5.6 Selectividad
Blancos de muestra (placebos) o muestras adicionadas.
Mínimo 5 niveles diferentes de concentración
Cada nivel por triplicado
Blancos de muestra o muestras adicionadas con cantidades conocidas de interferencias,
productos de degradación o impurezas
Solución estándar y blanco de muestra o muestra adicionada
:Para métodos cuantitativos a una concentración equivalente al nivel medio del intervalo
de trabajo estimado.
Para métodos cualitativos a una concentración por encima del límite de detección.
Por duplicado
Comparar las mediciones de las soluciones
Evaluar si la presencia de las interferencias, impurezas o productos de degradación
inhiben o incrementan la detección del analito.
Pueden emplearse técnicas confirmatorias para asegurar la identidad del analito como
son la utilización de detectores de espectrometría de masas, arreglo de diodos o
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CRITERIOS PARA LA VALIDACIÓN INTERNA Y CONFIRMACIÓN
DE MÉTODOS FISICOQUÍMICOS
CLAVE:
CCAYAC-CR-03/0
infrarrojo.
Cuando no se tienen estándares de interferencias o impurezas se pueden aplicar las
siguientes condiciones de degradación:
a) Temperatura: 70-120 °C o 20 °C por debajo de su punto de fusión, durante 2 a 4
semanas.
b) Luz UV, luz fluorescente y/o humedad relativa por un tiempo apropiado.
c) pH 1 a 2 y/o 10 a 12 y someterlas a 60-80 °C por un tiempo apropiado.
d) Para líquidos y semisólidos adicionar peróxido de hidrógeno.
Para métodos cromatográficos verificar adicionalmente la pureza del pico de interés
utilizando detector de arreglo de diodos o espectrometría de masas y su resolución
14/20
5.6 Robustez
15/20
5.6 incertidumbre
15720
5.6
16/20
5.7 Criterios de
aceptación
Se elimina los conceptos de placebo y por duplicado
Utilizar la información obtenida en el proceso de confirmación o validación interna.
Puede utilizarse como guía los criterios establecidos en las referencias 2, 12, 14, 16 y
18.
Reportar la incertidumbre expandida con un factor de cobertura k=2 y una nivel de
significancia del 95 %.
Se elimina la nota 1
El intervalo de confianza del intercepto debe incluir el cero
Pendiente: valor cercano a 1
Coeficiente de correlación:
r  0.98 para cuantificación de residuos e impurezas
r  0.99 para cuantificación de contenido e ingrediente activo
Coeficiente de correlación r= 0.98 a 1.00
El intervalo de confianza de la pendiente debe incluir el valor de la unidad
Límite de detección
Selectividad
La muestra no debe presentar ningún tipo de señal que interfiera con la señal que se
encuentra para el estándar
Cromatografía
Resolución apropiada del analito de interés
El analito debe eluir en el tiempo de retención típico de la sustancia de referencia en las
mismas condiciones experimentales
Espectrofotometría
Los máximos de absorción en el espectro del analito presentaran las mismas longitudes
de onda que los de la sustancia de referencia.
Prueba límite
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CRITERIOS PARA LA VALIDACIÓN INTERNA Y CONFIRMACIÓN
DE MÉTODOS FISICOQUÍMICOS



16/20
17/20
5.8
5.9
CLAVE:
CCAYAC-CR-03/0
Muestra sin analito: negativa.
Muestra con analito: positiva.
Sustancia de referencia: positiva
10. Análisis estadístico
Establecer para cada parámetro de desempeño la herramienta estadística a
utilizar para su evaluación
Debe incluir los parámetros de desempeño de acuerdo al tipo de prueba para los
diferentes tipos de procedimientos analíticos y los criterios de aceptación
predeterminados.
Debe ser aprobado previo a su uso y en su caso los cambios efectuados antes
de su implementación. Incluir firmas de quien elaboró, revisó y aprobó.
3. Antecedentes
Hacer una breve explicación de las características del analito, su importancia
sanitaria o nutricional, así como las especificaciones nacionales e
internacionales establecidos para este.
Los resultados deben ser evaluados, analizados y comparados contra los
criterios de aceptación.
La conclusión del informe debe indicar si los parámetros fueron acordes y por
tanto el método puede utilizarse. Si no se cumple con los criterios de aceptación,
los resultados deben ser investigados, o si se aceptan deben ser justificados.
Incluir firmas de quien elaboró, revisó y aprobó.
Se otorga un periodo de transición de 180 días contados a partir de la
fecha de publicación para que los laboratorios que se encuentren
autorizados o en proceso del mismo se apeguen a estos criterios.
18/20
6.0 Notificación de Para los laboratorios que soliciten autorización posterior a la fecha de
vigencia
publicación, deberán cumplir estos criterios de inicio.
Estos criterios se aplicarán en todos los procesos de evaluación que se
realicen a los 180 días naturales, a partir de la fecha de publicación del
documento en la página web de la COFEPRIS.
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CRITERIOS PARA LA VALIDACIÓN INTERNA Y CONFIRMACIÓN
DE MÉTODOS FISICOQUÍMICOS
Determinación
Intervalo recomendado
Contenido o principio activo
80 a 120 % del contenido del marbete o
especificación
Cuantificación de una
impureza
50 a 120 % el valor de la especificación
Uniformidad de contenido
19/20
Anexo A
CLAVE:
CCAYAC-CR-03/0
Prueba de disolución
Residuos y contaminantes
Categoría
70 a 130 % la concentración declarada en el
marbete
Mínimo  20% el intervalo establecido
0 a 150 % el valor de la especificación.
Tipo de prueba
Intervalo recomendado
80 a 120 % el valor de la
especificación
Cuantificación del analito a
0 a 150 % el valor de la
II
nivel trazas
especificación
Se modifica el contenido dela tabla de recuperación para residuos y
contaminantes en alimentos y agua.
I
19/20
Anexo B
Cuantificación del analito
Se elimina la tabla de recuperación en productos farmacéuticos.
Se cambia el concepto de reproducibilidad por precisión intermedia
Se modifica el contenido dela tabla de repetibilidad y reproducibilidad para
residuos y contaminantes en alimentos y agua.
Se elimina la tabla de repetibilidad y reproducibilidad en productos farmacéuticos
Se agregan referencias a las tablas
Se agregan a los anexos:
Valores críticos de G
Combinaciones de Youden
Fórmulas estadística
ANOVA (repetibilidad y precisión intermedia)
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