M Qdj ¿Qué es un colorante? Compuesto químico que va tener afinidad por estructuras celulares específicas. Se da un intercambio de iones entre el colorante y el sitio activo en la estructura celular. “Los colorantes que se utilizan en Micro son sales donde hay Iones negativos, Iones Positivos. Ion Negativo: Anicónico o Acido Ion Positivo: Catiónico o Básico ¿Qué propiedades debe tener una célula para que exista una coloración en ella? Filtración Permeabilidad Afinidad de carga ¿Qué es un mordiente y explique los dos tipos Es un inductor de la coloración, ayuda a que el colorante se fije en el sitio activo. Hay dos tipos: Químicos: Lugol = Yodo En la tinción de Gram que forma un complejo insoluble en agua. Físicos: El calor en la tinción de Zhiel Neelsen Que es una tinción Negativa y de un ejemplo de esta.? Son aquellas que no son capases de teñir las células, porque no presenta permeabilidad para ser absorbido ni se da contacto de carga con sitos activos por ejemplo Tinta China Explique que es un colorante de contrate y de dos ejemplos. Provee el color de todas aquellas estructuras que se decoloraron después del colorante principal o inicial. Este siempre será el último colorante de todos los pasos de la tinción. Por ejemplo, Azul de Metileno en la tinción de Zhiel Neelsen, Safranina en la tinción de Gram. Realice un cuadro diferencial con los tipos de tinciones en bases a colores. Simples Se utiliza solo un colorante por ejemplo el azul de lactofenol utilizado en micología Compuestos Se utiliza mas de un solo colorante en la misma tinción. Por ejemplo la tinción de Gram Especiales Permiten observar estructuras específicas como esporas o Flagelos. Explique los siguiente y mencione ejemplos. Tinciones diferenciales Tiñen microorganismos específicos por ejemplo: Pared celular en la tinción de Gram Tinciones acido resistentes Se aprovechan ciertos componentes ácidos de la pared celular de algunos microorganismos. Por ejemplo Tinción De Ziehl Neelsen Tinciones Fluorescentes Se usó de colorantes fluorescentes o anticuerpos específicos marcados. Tinción de Auramina Rodamina (Tuberculosis o sífilis) ¿Qué es un estudio directo? Se prepara al fresco ya que su uso de suspensiones de la muestra en agua o solución salina, Se utiliza soluciones de KOH para romper QUERATINA (Por ejemplo, en muestras de piel o uñas en micología) Su montaje es sencillo “entre porta y cubre “se observa siempre en 40x Usos: Para buscar Trichomonas vaginalisis, Micelio, Levaduras. Rellene el siguiente cuadro. Examen solución salina (Bact) Examen Directo con KOH (Micolo) Tinción Negativa Búsqueda de estructuras móviles. Búsqueda de Hongos Preparación de frotis A partir de muestra total Reporte Reporte Neg Positivo Positivo para Neg para Trichomonas V Trichomonas V A partir de muestra total Neg para estructuras Micoticas. Neg para estructuras levaduriformes encapsuladas. Positivo para estructuras micoticas Búsqueda de A partir de Positivo para levaduras en sedimento del estructuras capsuladas LCR levaduriformes extracelulares encapsuladas Escriba cuatro características de la tinción de Gram Fue inventada por Cristian Gram Es la tinción más utilizada en Micro Es compuesta y diferencial Las Gram Positivas la célula bacteriana tiene un color morado Gram Negativas si la célula bacteriana tiene un color rosado Escriba el procedimiento de la tinción de Gram 1. 2. 3. 4. Agregar cristal Violeta Mordiente: Lugol Decolorar con Alcohol acetona Agregar safranina Medios de Cultivos Bacteriano s Medio de Cultivo Rico Este permite el crecimiento de muchos microrganismos como Hongos y Bacterias. Medio rico en nutrientes y NO posee ningún agente selectivo: • Agar nutritivo. • Caldo/agar tripticasa de soya. • Caldo infusión cerebro corazón. • Caldo tioglicolat Agar sangre Medio base (rico) + Sangre de canero o humana El agregar sangre permite evaluar fenómeno conocido como hemólisis debido a enzimas bacterianas llamadas hemolisinas Se debe considerar que la Sangre de carnero permite visualizar mejor la hemólisis ¿Qué se debe hacer si se utiliza Sangre Humana? Montar control de calidad con cepa de referencia de Streptococcus pyogenes Sangre humana puede contener trazas de antibióticos y o anticuerpo vacúnales antiestreptococo que inhiba crecimiento, por eso se prefiere utilizar agar con sangre de carnero Tipos de Hemolisis Beta hemolisis Alfa Hemolisis Gama Hemolisis Agar Chocolate • Agar nutritivo + sangre lisada Este Permite crecimiento de bacterias fastidiosas como Neisseria gonorrhoeae y Haemophilus influenzae Factores NAD y hemina dentro de los GR son necesarios para su crecimiento, por eso se debe lisar la sangre para que puedan crecer. Defina que es un medio selectivo y Diferencial. Selectivo Diferencial Este posee un componente que “selecciona” el crecimiento de las bacterias e inhibe el crecimiento de otras. Posee un componente que “diferencia” a las que si pueden crecer según su patrón de fermentación del carbohidrato presente en el medio (diferencias en el color de la colonia) Ejemplo: • Fermentación de lactosa: Agar MacConkey (lactosa + y lactosa -) • Fermentación de manitol: Agar Manitol Sal (manitol + y manitol -) Agar MacConkey Este Promueve el crecimiento de Bacilos Gram Negativos fermentadores y no fermentadores de lactosa. Su componente que lo hace selectivo: cristal violeta y sales biliares (inhiben crecimiento de Gram positivos). Indicador de Ph: rojo neutro (rosado-amarillo) Componente que lo hace diferencial: lactosa (carbohidrato) Fermentadores de lactosa: colonias rosadas (lactosa +) No fermentadores de lactosa: colonias amarillas (lactosa -) Agar Manitol Sal Este promueve el crecimiento de Gram Positivos pertenecientes al género Staphylococcus sp. Componente que lo hace selectivo: alta concentración de NaCl (7.5%) inhibe crecimiento de Gram negativos y otros cocos Gram positivos no halotolerantes. Indicador de pH: rojo de fenol (amarillo - rosado) Componente que lo hace diferencial: manitol (carbohidrato) Fermentadores de manitol: colonia amarilla (manitol +) No fermentadores de manitol: colonia roja (manitol -)