Microbiología , 109-1. PREINFORME DE LABORATORIO N°5 TÉCNICAS DE INOCULACIÓN [Luisa Fernanda Payares Castro]1 26 de septiembre, 2022 Figura 1. Flujograma de la preparación de frotis de medio sólido y líquido. 1 Estudiantes curso de Microbiología, 109-1 Facultad de Ciencias Matemáticas y naturales Página 1 de 6 Microbiología , 109-1. Figura 2. Flujograma de los métodos de tinción de microorganismos. Facultad de Ciencias Matemáticas y naturales Página 2 de 6 Microbiología , 109-1. 1. CUESTIONARIO 1. ¿Cuál es la diferencia entre una tinción simple y una diferencial? Las tinciones se pueden clasificar como simples cuando toda la muestra se tiñe del mismo color y se utiliza un sólo colorante (azul de lactofenol o tinta china); tinción diferencial, cuando se visualiza más de un color porque se utiliza más de un colorante (Gram o Ziehl-Neelsen). En la tinción diferencial el colorante utilizado pone de manifiesto diferencias entre células bacterianas o entre partes de una misma célula (López-Jácome et al., 2014). 2. ¿Qué tipo de tinción es la Gram? La tinción Gram, es un tipo de tinción diferencial y la más utilizada en el laboratorio de microbiología, constituye la base para separar los principales grupos de bacterias (es decir, gram-positivas y gram negativas). Después de la fijación de la muestra a un portaobjetos de vidrio (mediante calentamiento o tratamiento con alcohol), se expone la muestra a violeta de cristal y después se añade yodo para formar el complejo con el colorante principal. Durante la decoloración con alcohol o acetona el complejo queda retenido en las bacterias gram positivas, aunque se pierde en los microorganismos gramnegativos; los microorganismos gramnegativos retienen el colorante safranina (de ahí su color rojo). El grado en el que un microorganismo conserva el colorante depende del microorganismo, de las condiciones del cultivo y de las habilidades tintoriales del microscopista (Murray et al., 2013). 3. ¿Cuál es el fundamento? Reactivos utilizados en la tinción Gram Facultad de Ciencias Matemáticas y naturales Página 3 de 6 Microbiología , 109-1. Los procedimientos de tinción de Gram inician con la aplicación de un colorante básico, violeta de genciana. A continuación se aplica una solución de yodo; todas las bacterias se tiñen de color azul en este punto del procedimiento. Luego la célula se trata con alcohol. Las células grampositivas que conservan el complejo de violeta de genciana-yodo adquieren un color azul y las células gramnegativas se decoloran por completo con la adición de alcohol. Como último paso se aplica otro colorante (como rojo de safranina) de forma que las células gramnegativas decoloradas adquieran un color contrastante; las células grampositivas adquieren un color violáceo. La base de la reacción diferencial a la tinción de Gram es la estructura de la pared celular (Brooks et al., 2011). 4. ¿Qué otro tipo de tinciones puede mencionar? Facultad de Ciencias Matemáticas y naturales Página 4 de 6 Microbiología , 109-1. Tabla 1. Preparaciones microscópicas y tinciones utilizadas en el laboratorio de microbiología clínica. Tomado de Microbiologia Médica por Murray et al., 2013, 7ª Edición. 5. ¿Cuáles son algunas limitaciones de las tinciones? ● ● ● ● ● La tinción de Gram no solo sirve para bacterias, sino también para algunos hongos y parásitos; no obstante, esta técnica tiene algunos inconvenientes, como la contaminación con otros microorganismos y la imposibilidad de visualizar algunas bacterias, entre ellas Legionella pneumophila, Leptospira spp y Bartonella spp (Tobón y Hoyos, 2020). Entre las limitaciones de la tinción de Gram se encuentra que se requiere un número elevado de microorganismos (más de 104 microorganismos/mL). En el caso de muestras biológicas, como es el caso del líquido cefalorraquídeo, que se trata de una muestra líquida con un número bajo de microorganismos, se tiene que centrifugar para concentrar los patógenos y el precipitado se tiñe y se observa (Gonzáles et al., 2020). Tinción de tinta china. Se debe tener cuidado de no interpretar mal las gotas de grasa o los linfocitos en forma de levadura. Las gotas de grasa no tendrán una pared celular bien definida. Los linfocitos tienen un borde peludo y un núcleo excéntrico Las cápsulas de criptococos generalmente están delineadas y la pared celular de levadura bien definida está ubicada en el centro de la cápsula (Gonzáles et al., 2020). Los frotis de tinta china positivos sólo pueden usarse como diagnóstico presuntivo. El diagnóstico definitivo se establece mediante cultivo y / o detección antigénica (Gonzáles et al., 2020). La reacción de coloración de Ziehl-Neelsen se ve afectada por la alteración física de la pared celular bacteriana. Por lo tanto, un microorganismo físicamente alterado por exceso de calor no reacciona a esta tinción de forma prevista. Es importante controlar la fijación con calor debido a que un exceso del mismo puede dar como resultado tinciones erróneas (Gonzáles et al., 2020). Facultad de Ciencias Matemáticas y naturales Página 5 de 6 Microbiología , 109-1. 2. BIBLIOGRAFÍA López-Jácome, L. E., Hernández-Durán, M., Colín-Castro, C. A., Ortega-Peña, S., Cerón-González, G., & Franco-Cendejas, R. (2014). Las tinciones básicas en el laboratorio de microbiología. Investigación en discapacidad, 3(1), 10-18. Murray, P. R., Rosenthal, K. S., Kobayashi, G. S., & Pfaller, M. A. (2013). Microbiologia Médica. 7ª edição. Brooks, G., Carroll, K., Butel, J., Morse, S., & Mietzner, T. J. (2011). Melnick y Adelberg Microbiología médica. México DF: Mc Graw Hill Education. Tobón, G. A. J., & Hoyos, A. V. (2020). Tinción de Gram de tejido: alcances y limitaciones. Medicina & Laboratorio, 18(11-12), 557-573. Gonzáles, R., Elizalde, B., Cortés, M., & Orduña, M. (2020). Las tinciones básicas en el Laboratorio de Microbiología: Un enfoque gráfico. UNAM, FES Zaragoza, noviembre de. Facultad de Ciencias Matemáticas y naturales Página 6 de 6