XIX Verano de la Investigación Científica y Tecnológica del Pacífico PRODUCCIÓN DE ANTICUERPOS POLICLONALES EN RATÓN CONTRA LA PROTEÍNA EspF DE Escherichia coli ENTEROPATÓGENA Fernando Valdez Urias Departamento de Ciencias Biológicas Universidad de Occidente, fefer_1992@hotmail.com. Asesor Dr. Fernando Navarro García, Centro de Investigación y Estudios Avanzados del IPN México, D.F. fnavarro@cell.cinvestav.com Planteamiento del problema Escherichia coli enteropatógena (EPEC) es una de las principales causas de diarrea en niños menores de dos años en países en vías de desarrollo. La principal característica histopatológica de la infección es una lesión que induce EPEC en el intestino conocida como lesión A/E (adherencia y eliminación). Para causar esta lesión, la bacteria inyecta por lo menos seis proteínas a la célula eucariota; una de ellas es EspF, la cual presenta efectos multifuncionales tales como: la eliminación de la barrera epitelial y de las microvellosidades, crecimiento de pedestales de actina, entre otras. Debido a que EspF es muy importante para la patogénesis de EPEC, el objetivo del presente trabajo fue realizar anticuerpos policlonales contra EspF utilizando ratones; para que con esta herramienta se pueda estudiar el funcionamiento de EspF mediante técnicas de Western Blot, Inmunoflorescencia e Inmunoprecipitación. Metodología Se indujo la producción de la proteína recombinante EspF-His a partir de cepas de E. coli BL21 pLis D3. Se purificó la proteína usando agarosa-NTA acoplada a Ni+ la cual tiene gran afinidad por la bandera de histidinas de EspF. Se determinaron las mejores condiciones de purificación como el tipo de buffers y tiempo de interacción del lisado de las bacterias con la resina. Debido a que EspF-His se procesa y se obtienen varios fragmentos de EspF-His, se procedió a realizar un segundo paso de purificación haciendo geles de poliacrilamida y electroeluyendo solo a EspF-His completa para que el anticuerpo la reconozca de manera específica. Finalmente se inmunizaron ratones BALB/c con EspF-His cada semana por un mes. Al finalizar la inmunización se sacrificaron los ratones obteniendo sueros contra EspF-His y se realizó la titulación de los mismos. Conclusiones De los ratones inmunizados se obtuvieron anticuerpos policlonales contra EspFHis que permitirán realizar ensayos para conocer mejor el funcionamiento de esta proteína y a su vez seguir estudiando el papel que juega en la redistribución del citoesqueleto de la célula eucariota. © Programa Interinstitucional para el Fortalecimiento de la Investigación y el Posgrado del Pacífico Agosto 2014