3 Con el equipo de destilación simple armado, primero comenzar midiendo en la probeta 100mL de alcohol medicinal para luego pasarlo al balón de destilación y agregarle 2 perlas de ebullición. Después de adquirir los 50mL de alcohol puro en la probeta, colocarlo en una probeta de 100mL y agregarle 50mL de agua destilada formando una solución de 100mL. A continuación, encender el mechero de bunsen debajo de la malla de asbesto que esta sobre el trípode. Al final del circuito colocar una probeta de 50mL. Esperar a que comience el proceso de destilación del cual se podrá evidenciar cuando el termómetro llegue entre los 76°C a más pero no supere los 99° para que no se evapore. Luego, colocar el alcoholímetro para medir el grado y multiplicarlo por dos para obtener la pureza total. 4 En cada tubo de ensayo (4), agregar n-hexano, cloroformo, alcohol y agua destilada respectivamente. A continuación, colocar 10 gotas de cristal violeta en cada tubo y agitar. ¿Qué solvente es el más apropiado para la extracción? Tubo con cloroformo más cristal violeta. SI Presentaba una mezcla casi homogénea, ambos presentaban el mismo color, pero el cloroformo presentaba mayor densidad y un color más oscuro. Asimismo, se llegaba a diferenciar por la creación de un anillo en medio de las dos sustancias. Después de agitar, se puede observar diferencias en cada tubo de ensayo. Tubo con n-hexano más cristal violeta. NO Tubo con alcohol más cristal violeta y tubo con agua destilada más cristal violeta. NO Presentaba una mezcla tan heterogénea que no se llegó a mezclar con el n-hexano, quedando el n-hexano libre del color morado, haciendo imposible una extracción. Presentaban una mezcla homogénea por lo que no se podían diferenciar y hacer una extracción. Por lo tanto, el cloroformo fue el soluto más propicio para realizar el proceso de extracción. 4 En la pera de decantación colocar 15 mL de cristal violeta y 15 mL de cloroformo. Luego agitar 1 minuto y 30 segundos para integrarlos bien. Colocar 15 mL de cloroformo otra vez. Al poco tiempo, se evidenciará un anillo en medio formando en el fondo un color más oscuro evidenciando mayor densidad por el cloroformo y por encima quedará el cristal violeta más claro. Después, abrir la llave de la pera de decantación para extraer el cloroformo con el tinte puro. Sin embargo, este proceso se repetirá las veces que sean necesarias hasta que el cristal violeta quede semi trasparente. Cuando el cristal violeta quede semi trasparente, se podrá contabilizar por mL la pureza de la tinta junto al cloroformo. 5cromatografía en papel Marcar la línea de comienzo en el papel filtro con un lápiz para mayor precisión, asimismo, tratar de que sea entre 1 o 2 cm. Colocar en el centro de la línea de trazada una gota de la muestra. Poner el papel filtro con la muestra dentro de un vaso precipitado o frasco con el solvente. Secar y proceder a realizar los análisis correspondientes de Rf. Esperar a que suba la marca hasta casi al final de la tira de papel filtro. Cromatografia capa fina En la hoja de sílice (fase estacionaria) colocar las muestras o componentes en la línea de siembra. Luego ponerlo en la placa dentro de la cubeta de vidrio (cámara cromatográfica) con el solvente. Finalmente, se pueden realizar los análisis correspondientes de Rf e identificación de componentes. Aguardar a que se de la elución, dejando que el frente del solvente llegue hasta al máximo punto de la fase estacionaria. (capilaridad) Esperar a que seque. En el caso de que no se visualizen los resultados colocar la sustancia desarrolladora acorde a las muestras. 5cromatografía en columna Armar el equipo (buretra con el soporte, el matraz Erlenmeyer y embudo) y colocar al fondo de la buretra un pedazo de algodón. Se coloca una pequeña cantidad de arena de mar, distancia 10 a 12 mm. Favoreciendo el proceso de compactación de la misma. Añadir un poco de eluyente y luego encima una solución espesa del absorbente con eluyente y abrir la llave para que salga el exceso de fase móvil para asegurar un empaquetamiento uniforme de la fase estacionaria. Abrir la llave de la columna hasta que la muestra penetre la absorbente, luego comenzar a colocar eluyente y volver a abrir la llave. Añadir de nuevo arena de mar hasta que alcance 1 cm de altura sobre la absorbente y con la ayuda de una pipeta poner la muestra sobre la fase estacionaria. Seguir este procedimiento hasta que la muestra se acabe y se evidencien las coloraciones respectivas encada frasco con las extracciones. Finalmente, se pueden realizar los análisis correspondientes en la cromatografía de capa fina para la identificación de componentes. *En la fase estacionaria (absorbente) el gel de sílice y la alúmina, en la fase móvil (eluyente) agua o cualquier disolvente adecuado a la polaridad de los componentes de la mezcla que se desea separar. informe 6 1 reaccióndumer¿ Colocar en el tubo de ensayo la mezcla de acetato de sodio y cal yodada, taponarlo y poner el tubo de entrega que conecta al recipiente con agua y otro tubo. Poner el tubo de ensayo con la mezcla sobre un mechero con una pinza o soporte. Se puede observar dentro de un rato, se rellenará el otro tubo con gas metano y descenderá el agua dentro de este, pero aumentará en el recipiente. 2reacción de baeyer Añadir 15 gotas en cada tubo de ensayo ácido oleico, n-hexano y la muestra problema respectivamente. Adicionar 5 gotas de permanganato de potasio en cada uno y agitar suavemente. Finalmente, en el caso de que sea positivo cambiará a un color marrón (presencia de insaturaciones), sino permanecerá en un color morado. 3 reacción de acido sulfurico https://www.documaniatv.com/documentales/la-vida-privada-de-las-plantas/ Añadir 10 gotas en cada tubo de ensayo ácido oleico, n-hexano y la muestra problema respectivamente. Adicionar 10 gotas de ácido sulfúrico en cada uno , agitar suavemente y con cuidado ya que al hacerlo se le aumenta la temperatura. Finalmente, en el caso de que sea positivo cambiará a un color marrón (presencia de insaturaciones), sino permanecerá en el mismo color que estaba. 4reacción de acido nitrico Añadir 10 gotas de benceno (incoloro) en un tubo de ensayo. Adicionar 10 gotas de ácido nítrico (HNO3) y hervir con cuidado por 5 minutos. Después de los 5 minutos, en un vaso precipitado añadir hielo y dejar reposar el tubo de ensayo para que se enfrié rápido. Finalmente, en el caso de que sea positivo cambiará a un color amarillo (presencia de anillos aromáticos), sino permanecerá en el mismo color que estaba. Informe 7 R Lucas: Colocar 5 gotas de terc-butanol, 2-propanol, 1-propanol, fenol y la muestra problema en cada tubo respectivamente. Añadir 15 gotas de reactivo de Lucas (ZnCl2/HCl) en cada tubo. Finalmente, agitar y medir el tiempo de turbidez de cada tubo. Los compuestos con alcohol reaccionarán con una precipitación blanquecina, mientras que el fenol no. E sodio metálico: Colocar 10 gotas de tercbutanol, 2-propanol, 1-propanol, fenol y la muestra problema en cada tubo respectivamente. Añadir 2 gotas de fenolftaleína y luego un trozo de sodio metálico (Na) a cada tubo. Finalmente, se puede observar distintos grados de coloración y diferentes reacciones. Para el alcohol primario se formarán burbujas muy rápido, para el terciario más lento, para el fenol de acuerdo a la cantidad de Na que se le coloque, emitirá calor o podría explosionar. E bordwell - wellman: Colocar 10 gotas de tercbutanol, 2-propanol, 1-propanol, fenol y la muestra problema en cada tubo respectivamente. Finalmente, se puede observar la oxidación inmediata del alcohol primario y el secundario mas no el terciario, asimismo, el fenol reacciona lentamente. Añadir 10 gotas del reactivo de Bordwell – Wellman en cada tubo. E cloruro férrico: Colocar 10 gotas de tercbutanol, 2-propanol, 1-propanol, fenol y la muestra problema en cada tubo respectivamente. Añadir 2 gotas de cloruro férrico (FeCl3) en cada tubo. Finalmente, se puede observar que el único compuesto en reaccionar es el fenol que se torna a un morado inmediatamente, los demás presentan un color amarillo al no reaccionar. Informe 8 lab 9 Reacción de fehling: Colocar 10 gotas de acetaldehído, aldehído, cetona y la muestra problema en cada tubo respectivamente. Primero añadir 10 gotas de Fehling A (azulado) y luego 10 gotas de Fehling B (incoloro) en cada tubo. Calentar los tubos de ensayo en baño maría por 5 minutos. Finalmente, se puede visualizar que solo reaccionan los aldehídos junto a la muestra problema y cambian a un color rojizo ladrillo, pero la cetona se mantiene en un color azul por la misma combinación de ambos reactivos. Reacción de 2,4-dinitrofenilhidrazina Colocar 10 gotas de acetaldehído, aldehído, cetona y la muestra problema en cada tubo respectivamente. Añadir 10 gotas de 2,4dinitrofenilhidrazona (2,4DNF) en cada tubo y observar. NO FUNCIONA En caso de que no se observe, calentar a baño maría por 5 minutos. SI FUNCIONA Finalmente, se puede visualizar que todos reaccionan y se forman una precipitación amarilla, en el caso de que saliera negativo se hubiera mantenido el color naranja que es el mismo color del 2,4-DNF. Reación de schiff Colocar 10 gotas de acetaldehído, aldehído, cetona y la muestra problema en cada tubo respectivamente. Añadir 5 gotas de reactivo de SCHIFF (incoloro) y luego 3 gotas de HCl en cada tubo. Finalmente, se puede visualizar que solo reaccionan los aldehídos junto a la muestra problema y cambian a un morado-azul intenso, pero la cetona se mantiene incolora por el mismo reactivo. Informe 9 Hidrolisis básica-alcalina con NaOH: Proceso de saponificación Primera etapa: Pesar 10 gramos de sebo con la ayuda de la luna de reloj y colocarlo junto a 5mL de NaOH en un vaso precipitado de 100mL. En otro vaso precipitado de 600 mL llenar hasta 250 mL con agua destilada y calentarlo en la estufa eléctrica. Colocar el vaso de 100 mL dentro del vaso precipitado de 600 mL a baño maría durante 20 minutos sin sobrepasar los 70°C con constante agitación. Segunda etapa: Añadir 4 mL de NaOH y 5 mL de etanol, seguir calentando por 15 minutos a la misma temperatura y seguir agitando con ayuda de la varilla. Luego volver a colocar 3 mL de NaOH y dejar que la temperatura suba a unos 90 – 95°C manteniéndola por 5 minutos. Finalizado el tiempo, retirar del baño maría. Tercera etapa: Añadir 50 mL de agua caliente que se encuentra en vaso precipitado de 600 mL al vaso precipitado de 100 mL y agitar hasta tener una mezcla homogénea en forma de gel. Luego llenar el vaso precipitado de 250 mL y colocar 25 gramos de NaCl y mezclarlo. Verter el contenido del vaso precipitado de 100 mL a el vaso precipitado de con agitación constante. Se formará el jabón como un sólido blanquecino. Al final colarlo. Informe 10 Ensayo de Molisch: Reconocimiento de glúcidos. Colocar 15 gotas de glucosa, sacarosa, fructuosa, almidón y la muestra problema en cada tubo respectivamente. Añadir 2 gotas de α-naftol y luego colocar de 5 a 10 gotas de ácido sulfúrico en cada tubo. NO FUNCIONA En caso de que no se observe, calentar a baño maría por 5 minutos. FUNCIONA Finalmente, se puede visualizar que todos los tubos reaccionan positivamente formando un anillo morado en la interfase, así reconociendo glúcidos en los compuestos. Ensayo de Fehling: Reconocimiento de azúcares reductores. Añadir 15 gotas de Fehling A y colocar 15 gotas de Fehling B en cinco tubos de ensayo. Colocar en cada tubo 15 gotas de glucosa, sacarosa, fructuosa, almidón y la muestra problema respectivamente. Luego calentar a baño maría por 5 minutos. Finalmente, se puede visualizar que la glucosa, la fructuosa, la sacarosa y la muestra problema reaccionan positivamente cambiando el color a un rojo ladrillo, así reconociendo azúcares reductores que tienen la capacidad de oxidarse. Sin embargo, el almidón no reacciona y se mantiene con un color azul debido a que es un polisacárido y no se puede oxidar. Formación de osazonas: Formación de cristales En un tubo de ensayo añadir glucosa sólida pesada con precisión unos 0.2 g, otros 0,4 g de clorhidrato de fenilhidrazina y 0,6 g de acetato de sodio. Luego colocar 5 mL de agua, ponerlo a baño maría por 1:30 minutos. Después agitar y continuar calentando por 20 minutos. Como resultado se tiene que observar la formación de cristales de color amarillo, estos son conocidos como cristales de osazonas y se forman debido a la reacción del azúcar con la fenilhidrazina. Hidrólisis de sacarosa: En dos tubos adicionar 40 gotas de sacarosa. En el tubo A colocar 1 gota de HCl, calentar a baño maría por 5 minutos y dejar enfriar. Luego añadir 10 gotas de Fehling A y B uno por uno. En el tubo B calentar a baño maría por 5 minutos y dejar enfriar. Luego añadir 10 gotas de Fehling A y B uno por uno. Como resultado positivo se tiene que observar la coloración a rojo ladrillo para la hidrólisis de sacarosa. Hidrólisis de almidón: En un Baker disolver 1 g de almidón en 10 mL de agua fría y disolver la suspensión lechosa en 150 mL de agua caliente. Luego en el Baker añadir 30 gotas de HCl y mantener la flama baja. En el tubo A sacar 1 mL de solución, dejar enfriar y añadir 2 gotas de Lugol. En el tubo B sacar 1 mL de solución y añadir gotas de Fehling A y B respectivamente. Como resultado positivo se puede observar la coloración azul para el reconocimiento del almidón. Como resultado positivo se tiene que observar la coloración a rojo ladrillo para la hidrólisis de almidón. Informe 11 Reacción de ninhidrina: Identificación de α – aminoácidos libres Añadir 15 gotas de glicina, albumina y muestra problema en respectivamente en 3 tubos de ensayo. Luego colocar 2 gotas de solución de ninhidrina a cada uno y calentar los tubos en un Baker a baño maría por 5 minutos. Como resultado se puede visualizar que la glicina reacciona positivamente mostrando una coloración violeta o morado, sin embargo, la albumina y la muestra problema reaccionan negativamente manteniendo su color original. Reacción xantoproteica: Reconocimiento de R anillos aromáticos Colocar 15 gotas de glicina, albúmina, tirosina y la muestra problema en cada tubo respectivamente. Añadir 1 mL o 20 gotas de ácido nítrico concentrado (HNO3) en cada tubo. NO FUNCIONA En caso de que no se observe, calentar a baño maría por 5 minutos. FUNCIONA Finalmente, se puede visualizar que la tirosina, la albumina y la muestra problema reaccionan positivamente presentando un color amarillo oscuro, excepto la glicina que no reacciona. Prueba de Millón: Reconocimiento de restos fenólicos Colocar 15 gotas de tirosina, glicina, albúmina y la muestra problema en cada tubo respectivamente. Añadir 5 a 10 gotas del reactivo de Millón en cada tubo. NO FUNCIONA En caso de que no se observe, calentar a baño maría por 5 minutos. FUNCIONA Finalmente, se puede visualizar que la tirosina y la albúmina reaccionan positivamente dando un color rosado pálido que debería ser un rosa salmón o rojo dependiendo, sin embargo, los que reaccionan negativamente son la glicina y la muestra problema. Prueba para aminoácidos azufrados Colocar 15 gotas de cisteína, glicina, albúmina y la muestra problema en cada tubo respectivamente. Añadir 8 gotas de NaOH al 40% en cada tubo y calentar a baño maría por 5 minutos. Agregar 5 gotas de acetato de plomo al 10%. Finalmente, se puede visualizar que la cisteína y la albúmina reaccionan positivamente dando un marrón oscuro, sin embargo, los que reaccionan negativamente son la glicina y la muestra problema. Reacción de Biuret: Reconocimiento de enlaces peptídicos Colocar 15 gotas de cisteína, glicina, albúmina y la muestra problema en cada tubo respectivamente. Añadir 10 gotas de NaOH al 10% en cada tubo. Agregar 2 gotas de sulfato cúprico (CuSO4) al 1%. Finalmente, se puede visualizar que solo la albúmina reacciona positivamente dando un color violeta claro, sin embargo, los que reaccionan negativamente son la glicina y la muestra problema. Desnaturalización de la albúmina: Colocar 20 gotas de albúmina en 5 tubos. El primer tubo calentar a baño maría. El tercer tubo agregar 20 gotas de ácido clorhídrico (HCl). El segundo tubo agregar 30 gotas de alcohol etílico. Se puede visualizar que la albúmina mediante estos medios sufre una alteración anormal entre las conexiones de sus átomos lo que genera el cambio de color a un sólido blanquecino. El quinto tubo agregar 20 gotas de hidróxido de sodio (NaOH). El cuarto tubo agregar 20 gotas de ácido sulfúrico (H2SO4). Se puede visualizar que la albúmina mediante este medio no sufre una alteración significativa que genere un cambio de color, por lo que, se mantiene transparente.
