XIX Verano de la Investigación Científica y Tecnológica del Pacífico CARACTERIZACIÓN FUNCIONAL DE LOS GENES KTR4 Y KTR5 DE Sporothrix Schenckii. Magnolia Michele Rodríguez Jaime, Ciencias Químico Biológicas y Farmacéuticas de la Universidad Autónoma de Nayarit, magmich_1223@hotmail.com. Asesor Dr. Héctor Manuel Mora Montes, Universidad de Guanajuato, hmora@ugto.mx . PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA. Sporothrix schenckii es un hongo patógeno, dimórfico, que infecta humanos y animales, y es el agente causal de la esporotricosis, una micosis subcutánea crónica. La glicosilación de la pared celular de S. schenckii es de gran importancia para los procesos de adhesión, virulencia, integridad de la pared y respuesta inmune del huésped. Esta modificación post-traduccional se lleva a cabo en el aparato de Golgi y en el retículo endoplasmático, donde se adicionan residuos de carbohidratos a proteínas en tránsito, gracias a la acción de enzimas con actividad de transferasa. Los genes involucrados en la glicosilación de proteínas de S. schenckii no han sido caracterizados; por lo que en este proyecto se busca demostrar la función de los genes KTR4 y KTR5 mediante la complementación heteróloga en mutantes de Candida Albicans carentes de genes de la familia KRE2/MNT1, que codifican para manosiltransferasas en el aparato de Golgi. METODOLOGÍA. En experimentos anteriores se realizó la extracción de mRNA de S. schenckii para la síntesis de cDNA, el cual se clonó en el vector TOPO, realizando una transformación en E. coli. Se seleccionaron las clonas positivas, las cuales se subclonaron en el vector pACT1 y se usaron dichas construcciones para transformar en C. Albicans. A partir de estas cepas se obtuvo DNA genómico y se procedió a comprobar cuales contenían los genes KTR5 (1539pb) y KTR4 (1182pb). Las cepas seleccionas se sometieron a un ensayo con el colorante azul Alciano, que tiene afinidad a los carbohidratos con carga negativa, para lo cual se crecieron en medio YPD, posteriormente se ajustó la densidad óptica de las células, utilizándose como controles diferentes mutantes de C. Albicans. CONCLUSIONES. Los resultados del ensayo con azul Alciano demuestran que los genes KTR4 y KTR5 de S. Schenckii complementan las mutantes de C. Albicans, sugiriéndose que son ortólogos funcionales de los miembros de la familia KRE2/MNT1 de C. Albicans. © Programa Interinstitucional para el Fortalecimiento de la Investigación y el Posgrado del Pacífico Agosto 2014