Subido por Rodrigo Jiménez Rubalcava

Cuantificacion de azucares por el Metodo de DuBois

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‭UNIVERSIDAD NACIONAL‬
‭AUTÓNOMA DE MÉXICO‬
‭FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES‬
‭ZARAGOZA‬
‭INFORME‬
‭CARRERA DE BIOLOGÍA‬
‭Laboratorio de Investigación Formativa III‬
‭Sección: Biología Molecular de la Célula‬
‭Práctica 3‬
‭Cuantificación de azúcares totales por el método de DuBois‬
‭FOLIO CÓNDOR ZARAGOZA:‬‭20240206‬
‭Grupo: 2302‬
‭Equipo: 5‬
‭Integrantes:‬
‭‬ B
●
‭ eltrán Juárez Brenda Odeth‬
‭●‬ ‭Resendiz Fonseca Daniela‬
‭●‬ ‭Torres Flores Aurora‬
‭Introducción.‬
‭ os‬ ‭carbohidratos‬ ‭son‬ ‭sustancias‬ ‭químicas‬ ‭orgánicas‬ ‭de‬ ‭amplia‬ ‭distribución‬ ‭en‬ ‭la‬
L
‭naturaleza.‬ ‭En‬ ‭las‬ ‭plantas‬ ‭son‬ ‭producidos‬‭por‬‭el‬‭proceso‬‭de‬‭la‬‭fotosíntesis‬‭e‬‭incluyen‬‭a‬‭la‬
‭celulosa‬ ‭como‬ ‭ejemplo‬ ‭de‬ ‭un‬ ‭carbohidrato‬ ‭estructural‬ ‭y‬ ‭al‬ ‭almidón‬ ‭como‬ ‭carbohidrato‬ ‭de‬
‭almacén.‬‭En‬‭las‬‭células‬‭animales‬‭los‬‭carbohidratos‬‭-‬‭en‬‭forma‬‭de‬‭glucosa‬‭o‬‭en‬‭su‬‭polímero‬
‭de‬‭almacén,‬‭el‬‭glucógeno‬‭–‬‭sirven‬‭como‬‭fuente‬‭importante‬‭de‬‭energía‬‭para‬‭las‬‭actividades‬
‭vitales‬‭de‬‭la‬‭mayoría‬‭de‬‭las‬‭especies‬‭vivientes‬‭que‬‭habitan‬‭el‬‭planeta‬‭(Bermudez,‬‭Valmore.‬
‭2007).‬
‭La‬ ‭glucosa‬ ‭es‬ ‭el‬ ‭principal‬ ‭monosacárido‬ ‭en‬ ‭la‬ ‭naturaleza‬ ‭que‬ ‭proporciona‬ ‭energía‬ ‭a‬ ‭las‬
‭células‬ ‭de‬ ‭una‬ ‭amplia‬ ‭gama‬ ‭de‬ ‭organismos,‬ ‭que‬ ‭va‬ ‭desde‬ ‭los‬ ‭más‬ ‭simples‬ ‭como‬ ‭la‬
‭levadura‬‭hasta‬‭los‬‭más‬‭complejos‬‭como‬‭el‬‭ser‬‭humano.‬‭Esto‬‭hace‬‭que‬‭el‬‭transporte‬‭de‬‭este‬
‭azúcar‬‭al‬‭interior‬‭celular‬‭constituya‬‭un‬‭proceso‬‭esencial‬‭para‬‭el‬‭metabolismo‬‭energético‬‭y‬‭en‬
‭consecuencia,‬‭para‬‭los‬‭procesos‬‭que‬‭mantienen‬‭la‬‭vida.‬‭El‬‭transporte‬‭de‬‭la‬‭glucosa‬‭a‬‭través‬
‭de‬ ‭la‬ ‭membrana‬ ‭celular‬ ‭se‬ ‭lleva‬ ‭a‬ ‭cabo‬ ‭por‬ ‭dos‬ ‭familias‬ ‭de‬ ‭proteínas‬ ‭de‬ ‭membrana:‬ ‭los‬
‭transportadores‬ ‭de‬ ‭glucosa‬ ‭acoplados‬ ‭a‬ ‭sodio‬ ‭(SGL‬ ‭T)‬ ‭y‬ ‭las‬ ‭proteínas‬ ‭facilitadoras‬ ‭del‬
‭transporte de glucosa (GLUT), (Catrejon V. 2007).‬
‭Existe‬ ‭una‬ ‭variedad‬ ‭de‬ ‭métodos‬ ‭colorimétricos‬ ‭los‬ ‭cuales‬‭utilizan‬‭reactivos‬‭distintos‬‭como‬
‭antrona,‬ ‭fenol,‬ ‭orcinol‬ ‭o‬ ‭resorcinol.‬ ‭El‬ ‭método‬ ‭colorimétrico‬ ‭para‬ ‭la‬ ‭determinación‬ ‭de‬ ‭la‬
‭concentración‬ ‭de‬ ‭carbohidratos‬ ‭más‬ ‭ampliamente‬ ‭utilizado‬ ‭es‬ ‭el‬ ‭desarrollado‬ ‭por‬ ‭DuBois‬
‭debido‬ ‭a‬ ‭la‬ ‭facilidad‬ ‭del‬ ‭procedimiento,‬ ‭sensibilidad,‬ ‭rapidez‬ ‭de‬ ‭los‬ ‭resultados‬ ‭y‬ ‭por‬ ‭ser‬
‭apropiado‬ ‭para‬ ‭cuantificar‬ ‭diferentes‬ ‭azúcares‬ ‭como‬ ‭monosacáridos,‬ ‭oligosacáridos‬ ‭y‬
‭polisacáridos carbohidratos (Lopez, X. 2017).‬
‭El‬‭método‬‭de‬‭DuBois‬‭et‬‭al.‬‭demostró‬‭ser‬‭simple,‬‭estable‬‭y‬‭reproducible,‬‭logrando‬‭acortar‬‭el‬
‭tiempo‬ ‭necesario‬ ‭para‬ ‭la‬ ‭determinación‬ ‭de‬ ‭carbohidratos‬ ‭comparado‬ ‭con‬ ‭otros‬ ‭métodos‬
‭colorimétricos.‬ ‭Por‬ ‭ejemplo,‬ ‭la‬ ‭cuantificación‬ ‭con‬ ‭antrona‬ ‭es‬ ‭limitada‬ ‭puesto‬ ‭que‬ ‭este‬
‭reactivo‬ ‭es‬ ‭inestable;‬ ‭debido‬ ‭a‬ ‭su‬ ‭degradación‬ ‭y‬ ‭el‬ ‭consecuente‬ ‭oscurecimiento‬ ‭de‬ ‭la‬
‭solución‬‭que‬‭altera‬‭su‬‭lectura‬‭colorimétrica,‬‭además‬‭de‬‭poseer‬‭una‬‭menor‬‭capacidad‬‭en‬‭el‬
‭análisis‬‭de‬‭polisacáridos‬‭conformados‬‭por‬‭mezclas‬‭de‬‭azúcares‬‭.‬‭Por‬‭otra‬‭parte,‬‭el‬‭método‬
‭establecido por Monsigny, utilizando resorcinol‬
‭y‬‭ácido‬‭sulfúrico,‬‭propone‬‭procedimientos‬‭más‬‭complejos‬‭y‬‭de‬‭larga‬‭duración,‬‭presentando‬
‭sensibilidades‬ ‭menores‬ ‭en‬ ‭la‬ ‭lectura‬ ‭de‬ ‭las‬ ‭absorbancias‬ ‭de‬ ‭soluciones‬ ‭acuosas‬ ‭de‬
‭carbohidratos (Lopez, X. 2017).‬
‭Objetivo.‬
‭ eterminar‬ ‭la‬ ‭concentración‬ ‭de‬ ‭azúcares‬ ‭presentes‬ ‭en‬ ‭diferentes‬ ‭muestras‬ ‭de‬ ‭glucosa,‬
D
‭mediante el método DuBois.‬
‭Método.‬
‭ ‬‭Se‬‭preparó‬‭una‬‭solución‬‭blanco‬‭con‬‭200‬‭μl‬‭de‬‭agua‬‭destilada,‬‭y‬‭se‬‭le‬‭agregaron‬‭500‬‭μl‬‭de‬
●
‭fenol, se agitó y posteriormente se agregó 1 ml de ácido sulfúrico concentrado.‬
‭●‬ ‭Se‬ ‭preparó‬ ‭una‬ ‭muestra‬ ‭patrón‬‭de‬‭8‬‭tubos‬‭de‬‭ensaye‬‭con‬ ‭6‬‭mg‬‭de‬‭glucosa‬‭y‬‭15‬‭ml‬‭de‬
‭agua destilada.‬
‭●‬‭Se‬‭prepararon‬‭2‬‭muestras‬‭problema:‬‭A‬‭la‬‭primera‬‭se‬‭le‬‭agregaron‬‭90‬‭μl‬‭de‬‭glucosa,‬‭110‬‭μl‬
‭de‬‭agua‬‭destilada,‬‭500‬‭μl‬‭de‬‭fenol‬‭y‬‭1‬‭ml‬‭de‬‭ácido‬‭sulfúrico,‬‭a‬‭la‬‭segunda‬‭muestra‬‭problema‬
‭se le agrego 110 μl de glucosa, 90 μl de agua destilada y 500 μl de fenol.‬
‭●‬ ‭Posteriormente‬ ‭se‬ ‭agitaron‬ ‭y‬ ‭se‬ ‭le‬ ‭agregó‬ ‭1‬ ‭ml‬ ‭de‬ ‭ácido‬ ‭sulfúrico,‬ ‭se‬ ‭volvió‬ ‭a‬ ‭agitar‬
‭suavemente y se dejó reposar 30 minutos.‬
‭●‬ ‭Se‬ ‭llevaron‬ ‭las‬ ‭muestras‬ ‭problema‬ ‭pasado‬ ‭los‬ ‭30‬ ‭minutos‬ ‭al‬ ‭espectrofotómetro‬ ‭para‬
‭analizar su lectura a 490 nm.‬
‭Resultados‬
‭Se‬ ‭preparó‬ ‭la‬ ‭solución‬ ‭patrón‬ ‭en‬ ‭diferentes‬ ‭concentraciones‬ ‭y‬‭absorbancia‬‭conocida‬‭para‬
r‭ ealizar la curva patrón‬
‭Se‬‭agregó‬‭1‬‭ml‬‭de‬‭ácido‬‭sulfúrico‬‭concentrado‬‭a‬‭una‬‭de‬‭las‬‭muestras‬‭problema‬‭en‬‭campana‬
‭ e extracción deslizando el ácido por las paredes del tubo‬
d
‭Se‬ ‭obtuvo‬ ‭la‬ ‭concentración‬ ‭y‬ ‭absorbancia‬ ‭para‬ ‭realizar‬ ‭la‬ ‭curva‬ ‭patrón.‬ ‭con‬ ‭los‬ ‭datos‬ ‭:‬
‭ lucosa 6 μl / 15 mL de H2SO4 siendo esta la gráfica‬
g
‭TUBO‬
‭CONCENTRACIÓN‬
‭OBSERVANCIA‬
‭1‬
‭0.008‬
‭0.073‬
‭2‬
‭0.016‬
‭0.148‬
‭3‬
‭0.024‬
‭0.179‬
‭4‬
‭0.032‬
‭0.189‬
‭5‬
‭0.040‬
‭0.199‬
‭6‬
‭0.048‬
‭0.349‬
‭7‬
‭0.056‬
‭0.753‬
‭8‬
‭0.064‬
‭0.790‬
‭Tabla1 Tubos de Curva Patrón‬
‭Gráfica 1. Curva Patrón‬
‭ espués‬ ‭se‬ ‭realizó‬ ‭una‬ ‭cuantificación‬ ‭de‬ ‭resultados‬ ‭con‬ ‭los‬ ‭demás‬ ‭equipos‬ ‭con‬ ‭sus‬
D
‭respectivos resultados siendo estos inconclusos en algunos equipos‬
‭Análisis de resultados.‬
‭ n‬‭la‬‭cuantificación‬‭de‬‭la‬‭unión‬‭de‬‭la‬‭glucosa‬‭con‬‭el‬‭fenol‬‭con‬‭nuestras‬‭muestras‬‭problema‬
E
‭por‬ ‭medio‬ ‭del‬ ‭espectrofotómetro‬ ‭obtuvimos‬ ‭como‬ ‭resultado‬ ‭de‬ ‭la‬ ‭muestra‬ ‭1‬ ‭un‬ ‭total‬ ‭de‬
‭0.572 y de la muestra 2 un total de 0.171‬
‭Conclusiones.‬
‭ a‬ ‭cuantificación‬ ‭de‬ ‭azúcares‬ ‭totales‬ ‭se‬ ‭determinó‬ ‭por‬ ‭el‬ ‭método‬ ‭de‬ ‭Dubois‬ ‭utilizando‬
L
‭glucosa‬‭como‬‭estándar‬‭en‬‭dónde‬‭podemos‬‭observar‬‭los‬‭resultados‬‭en‬‭la‬‭tabla‬‭1‬‭observando‬
‭así que la absorbancia aumenta en respuesta a la concentración de las muestras problema.‬
‭Bibliografía‬
‭●‬ ‭BERMUDEZ,‬ ‭Valmore‬ ‭et‬ ‭al.‬ ‭Biología‬ ‭molecular‬ ‭de‬ ‭los‬ ‭transportadores‬ ‭de‬ ‭glucosa:‬
‭clasificación,‬ ‭estructura‬ ‭y‬ ‭distribución.‬ ‭AVFT‬ ‭[online].‬ ‭2007,‬ ‭vol.26,‬ ‭n.2,‬ ‭pp.76-86.‬ ‭ISSN‬
‭0798-0264.‬
‭ ‬ ‭Castrejón‬ ‭V,‬ ‭Carbó‬ ‭R,‬ ‭Martínez‬ ‭M.‬ ‭Mecanismos‬ ‭moleculares‬ ‭que‬ ‭intervienen‬ ‭en‬ ‭el‬
●
‭transporte de la glucosa . Rev Educ Bioquímica. 2007;26(2):49-57.‬
‭●‬ ‭López-Legarda,‬ ‭Xiomara,‬ ‭Taramuel-Gallardo,‬ ‭Andony,‬ ‭Arboleda-Echavarría,‬ ‭Carolina,‬
‭Segura-Sánchez,‬ ‭Freimar,‬ ‭&‬ ‭Restrepo-Betancur,‬ ‭Luis‬ ‭Fernando.‬ ‭(2017).‬ ‭Comparación‬ ‭de‬
‭métodos‬ ‭que‬ ‭utilizan‬ ‭ácido‬ ‭sulfúrico‬ ‭para‬ ‭la‬ ‭determinación‬ ‭de‬ ‭azúcares‬ ‭totales.‬ ‭Revista‬
‭Cubana‬ ‭de‬ ‭Química,‬ ‭29(2),‬ ‭180-198.‬ ‭Recuperado‬ ‭en‬ ‭29‬ ‭de‬ ‭agosto‬ ‭de‬ ‭2023,‬ ‭de‬
‭http://scielo.sld.cu/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S2224-54212017000200‬
‭002&lng=es&tlng=es.‬
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