Protocolo s.aureus

RED NACIONAL DE LABORATORIOS DE SALUD PUBLICA
FECHA DE
PUBLICACIÓN:
Noviembre 2016
PROTOCOLO E INFORME ARMONIZADO PARA LA EVALUACIÓN DEL DESEMPEÑO DEL
MÉTODO DE REFERENCIA PARA LA ESTIMACIÓN DE LA CUENTA DE S. aureus. APÉNDICE
NORMATIVO B,
NOM-210-SSA1-2014
PROTOCOLO ARMONIZADO PARA LA
EVALUACIÓN DEL DESEMPEÑO DEL
MÉTODO DE REFERENCIA PARA LA
ESTIMACIÓN DE LA CUENTA DE S.
aureus.
APÉNDICE NORMATIVO B,
NOM-210-SSA1-2014
1
RED NACIONAL DE LABORATORIOS DE SALUD PUBLICA
FECHA DE
PUBLICACIÓN:
Noviembre 2016
PROTOCOLO E INFORME ARMONIZADO PARA LA EVALUACIÓN DEL DESEMPEÑO DEL
MÉTODO DE REFERENCIA PARA LA ESTIMACIÓN DE LA CUENTA DE S. aureus. APÉNDICE
NORMATIVO B,
NOM-210-SSA1-2014
Participaron en la elaboración de este protocolo.
César Omar Gálvez González
Comisión de Control Analítico y Ampliación de
Cobertura.
Coordinador de proyectos analíticos
55 50805200 ext 2022
cgalvez@cofepris. gob.mx
Odilia Hernández Hernández
Laboratorio Estatal Salud Pública Veracruz.
Jefa del Departamentos de Análisis Sanitarios.
229 9811390 Ext: 117
lesp.ohernandez@gmail.com
María Esperanza Rodríguez Parra
Laboratorio Estatal Salud Pública Tamaulipas
Responsable de Laboratorio de Microbiología de Aguas y
Alimentos
834 312 6633
lespt@hotmail.com
Anastasio Palacios Marmolejo
Laboratorio Estatal de Salud Pública de Aguascalientes
449 9775511
anastaciopalacios73@gmail.com
Participaron en la revisión de este protocolo.
Liliana Cano Ramírez
Comisión de Control Analítico y Ampliación de
Cobertura.
Q. Analista
55 50805200 EXT. 2045
lcano@cofepris.gob.mx
Mirella Paredes Salas
Laboratorio Estatal de Salud Pública de Aguascalientes
449 9775511
mireparedes.salas@gmail.com
Autorización
Imelda Rocío Guzmán Cervantes
Comisión de Control Analítico y Ampliación de
Cobertura.
Directora Ejecutiva de Control Analítico
Teléfono: 01 55 50 80 52 00 ext. 2043
irguzman@cofepris.gob.mx
Josefina Gutiérrez Ramírez
Comisión de Control Analítico y Ampliación de
Cobertura.
Directora Ejecutiva de Innovación.
01 55 50 80 52 00 ext. 2005
jgutierrez@cofepris.gob.mx
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PROTOCOLO E INFORME ARMONIZADO PARA LA EVALUACIÓN DEL DESEMPEÑO DEL
MÉTODO DE REFERENCIA PARA LA ESTIMACIÓN DE LA CUENTA DE S. aureus. APÉNDICE
NORMATIVO B,
NOM-210-SSA1-2014
1. OBJETIVO.
Que los miembros de la Red Nacional de Laboratorios realicen de modo armonizado la evaluación del
desempeño del Apéndice B Normativo. Método de referencia para la estimación de la cuenta de S.
aureus, NOM-210-SSA1-2014 mediante la comprobación de los parámetros de desempeño: Repetibilidad,
Reproducibilidad, Recuperación, Sesgo, Selectividad e Incertidumbre.
2. CAMPO DE APLICACIÓN.
Este protocolo armonizado es de aplicación a la Red Nacional de Laboratorios en el proceso de
implementación y autorización inicial del Apéndice B Normativo. Método de referencia para la
estimación de la cuenta de S. aureus, NOM-210-SSA1-2014 para el análisis de los productos de interés.
Puede considerarse un documento externo del sistema de gestión de calidad y por lo tanto no requiere ser
modificado para hacerlo coincidir con los procedimientos internos.
3. MÉTODO DE ENSAYO.
3.1. Apéndice B Normativo. Método de referencia para la estimación de la cuenta de S. aureus, NOM210-SSA1-2014, Productos y Servicios. Métodos de prueba microbiológicos. Determinación de
microorganismos indicadores. Determinación de microorganismos patógenos.
3.2. En el proyecto de modificación de ésta norma se consideran los siguientes cambios:
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MÉTODO DE REFERENCIA PARA LA ESTIMACIÓN DE LA CUENTA DE S. aureus. APÉNDICE
NORMATIVO B,
NOM-210-SSA1-2014
Dice
B.6.4. Invertir las placas e incubar por 44h a
48h a 36ºC ± 1ºC, buscar colonias con
morfología colonial típica: colonias negras,
circulares, brillantes, convexas, lisas, de
diámetro de 1mm a 2mm y muestran una
zona opaca, húmedas y con un halo claro
(debido a la actividad de la lecitinasa)
alrededor de la colonia.
NOTA: En algunas ocasiones cepas que han
sido aisladas de productos congelados o
deshidratados que han sido almacenados por
periodos largos de tiempo, frecuentemente
desarrollan colonias menos negras con
apariencia rugosa y textura seca. Las colonias
atípicas son similares en apariencia pero sin
halo claro alrededor.
B.6.5 Seleccionar las placas que tengan entre
15 y 150 colonias típicas y atípicas de S.
aureus; si no es posible, seleccionar las
placas de las diluciones más altas no obstante
tengan más de 150 colonias. Seleccionar por
muestra 5 colonias típicas para su
confirmación o 5 colonias atípicas, para la
realización de la tinción de Gram, en el caso
de observar bacilos positivos, la colonia se
tomará como negativa para S. aureus, por lo
contrario si se observan cocos se seguirá con
su confirmación.
B.6.6 Cuando las placas tengan menos de 15
colonias típicas se debe agregar la nota de
"valor estimado" al reporte de los resultados.
Debe decir
B.6.4. Invertir las placas e incubar por 24h ± 2h a 36°C ±
1°C, marcar en la base de la placa la posición de las
colonias típicas y atípicas, re-incubar por 24h ± 2h 36°C ±
1°C, marcar en la base de la placa la posición de las
nuevas colonias típicas y atípicas 44h a 48h a 36ºC ± 1ºC,
buscar colonias con morfología colonial típica: colonias
negras, circulares, brillantes, convexas, lisas, de diámetro de
1mm a 2mm y muestran una zona opaca, húmedas y con un
halo claro (debido a la actividad de la lecitinasa) alrededor de
la colonia.
NOTA: En algunas ocasiones cepas que han sido aisladas de
productos congelados o deshidratados que han sido
almacenados por periodos largos de tiempo, frecuentemente
desarrollan colonias menos negras con apariencia rugosa y
textura seca. Las colonias atípicas son similares en
apariencia pero sin halo claro alrededor.
B.6.4.1 Colonias Típicas: colonias negras o grises,
circulares, brillantes, convexas, lisas, de diámetro de 1mm a
1.5mm a las 24h de incubación y 1.5 a 2.5 mm después de
48h de incubación, rodeadas por una zona clara que puede
ser parcialmente opaca. Después de 24 h, en esa zona clara,
se puede observar un halo opalescente en la periferia de las
colonias. Colonias Atípicas: Son colonias de las mismas
dimensiones de las colonias típicas, pueden ser negras
brillantes con o sin un pequeño borde blanco, la zona clara es
muy pequeña o no visible, y el halo opalescente no está o es
apenas visible. También son colonias atípicas las colonias
grises sin zona clara, del mismo tamaño que las colonias
típicas. Hay bacterias de géneros distintos al Staphylococcus,
que pueden dar la morfología colonial típica o atípica, por lo
que la observación microscópica usando una tinción de Gram
puede ayudar en la distinción del género.
B.6.5 Seleccionar las placas que como máximo 300
colonias con 150 colonias típicas y/o atípicas y las dos
diluciones siguientes. Si solo están presentes colonias
típicas, seleccionar por placa por un número de colonias
típicas “Ac” (generalmente 5), Si solo están presentes
colonias atípicas seleccionar un número de colonias atípicas
“Anc”, Si hay de ambos tipos de colonias seleccionar colonias
tanto típicas “Ac” como atípicas “Acn”.
entre 15 y 150 colonias típicas y atípicas de S. aureus; si no
es posible, seleccionar las placas de las diluciones más altas
no obstante tengan más de 150 colonias. Seleccionar por
muestra 5 colonias típicas para su confirmación o 5 colonias
atípicas, para la realización de la tinción de Gram, en el caso
de observar bacilos positivos, la colonia se tomará como
negativa para S. aureus, por lo contrario si se observan cocos
se seguirá con su confirmación.
B.6.6 Cuando las placas de la dilución más baja tengan
menos de 15 colonias típicas y/o atípicas se debe agregar la
nota de "valor estimado" al reporte de los resultados..
Justificación
Se hace la modificación conforme a la
versión vigente de la norma de referencia,
antes se indicaba una sola lectura a las
44h, con la modificación se hacen dos
lecturas, dado que no hay temperaturas
adicionales ni el tiempo total excede al
original, no se crean nuevos requisitos ni
costos para la implementación del método.
La adición del punto B.6.4.1
y la
eliminación de la nota es un cambio que
mejora la redacción, por lo que no se crean
nuevos requisitos, pero se facilita la
ejecución del método.
Se hace la modificación conforme a la
versión vigente de la norma de referencia,
nota es un cambio que mejora la redacción,
por lo que no se crean nuevos requisitos,
pero se facilita la ejecución del método.
La aclaración de la dilución, evita
ambigüedades o confusiones en la
aplicación del método. Al ser una precisión,
no se generan costos adicionales.
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NORMATIVO B,
NOM-210-SSA1-2014
Dice
B.6.8.1 Prueba de coagulasa. Seleccionar y
sembrar cada colonia típica en tubos con
0.5mL de BHI y en tubos con AST. Utilizar
simultáneamente un control positivo de S.
aureus y un control negativo de S.
epidermidis. Incubar a 35°C ± 1ºC en baño de
agua, durante 20h a 24h. Mantener los
cultivos en AST a no más de 27°C ± 1ºC para
pruebas posteriores. Agregar a 0.1mL del
cultivo anterior a 0.3mL de plasma de conejo
con EDTA (a menos que el fabricante indique
otras cantidades). Incubar a 37°C ± 1ºC en
baño de agua y observar periódicamente a
intervalos de 1h durante las primeras 4h a 6h;
si no hay formación de coágulo, observar
hasta las 24h. Considerar la prueba positiva
cuando el coágulo se forma completamente y
es firme al invertir el tubo. En otro caso se
deberán realizar las pruebas auxiliares,
descritas en el punto B.6.9.
B.7.2 Si al menos el 80% de las colonias
típicas seleccionadas fueron coagulasa
positiva y/o termonucleasa positiva tomar el
número total de las colonias contadas como
presuntivas de S. aureus.
Debe decir
B.6.8.1 Prueba de coagulasa. Seleccionar y sembrar cada
colonia seleccionada típica en tubos con 0.5mL de BHI y en
tubos con AST. Utilizar simultáneamente un control positivo
de S. aureus y un control negativo de S. epidermidis. Incubar
a 35°C ó 37°C ± 1ºC en baño de agua, durante 20h a 24h.
Mantener los cultivos en AST a no más de 27°C ± 1ºC para
pruebas posteriores. Agregar a 0.1mL del cultivo anterior a
0.3mL de plasma de conejo con EDTA (a menos que el
fabricante indique otras cantidades). Incubar a 35 o 37°C ±
1ºC en baño de agua y observar periódicamente a intervalos
de 1h durante las primeras 4h a 6h; si no hay formación de
coágulo, observar hasta las 24h. Considerar la prueba
positiva cuando el coágulo se forma completamente y es
firme al invertir el tubo. En otro caso se deberán realizar las
pruebas auxiliares, descritas en el punto B.6.9.
Justificación
Cambio de redacción, para que tenga
relación con la redacción de los párrafos
anteriores. Se aclara que el baño de aguas
e puede usar a 35°C ó 37°C
B.7.2 Si al menos el 80% de las colonias típicas
seleccionadas fueron coagulasa positiva y/o termonucleasa
positiva tomar el número total de las colonias contadas como
presuntivas de S. aureus. Cálculo del número “a” de S.
aureus confirmado por placa.
B.7.2.1 Calcule el número de colonias confirmadas de S.
aureus por placa “a” utilizando la siguiente fórmula
Se hace la modificación conforme a la
versión vigente de la norma de referencia,
y se incluye el subíndice B.7.2.1 mejorando
la redacción del punto.
a=
bc
b nc
x Cc+
xCnc
Ac
Anc
Ac es el número de colonias típicas seleccionadas a
confirmar
Anc es el número de colonias atípicas seleccionadas a
confirmar
bc es el número de colonias típicas confirmadas
bnc es el número de colonias atípicas confirmadas
Cc es el número de colonias típicas contadas en la placa
Cnc es el número de colonias atípicas contadas en la placa
Redondear los resultados a un número entero.
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NORMATIVO B,
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Dice
B.7.3 En otros casos, calcular el número de
colonias presuntivas de S. aureus a partir del
porcentaje obtenido de colonias coagulasa y/o
termonucleasa positivas confirmadas.
Debe decir
B.7.3 En otros casos, calcular el número de colonias
presuntivas de S. aureus a partir del porcentaje obtenido de
colonias coagulasa y/o termonucleasa positivas confirmadas.
Cálculo del número N de S. aureus confirmado por muestra
B.7.3.1 Para las placas con menos de 300 colonias de las
cuales existan menos de 150 colonias típicas y/o atípicas en
dos diluciones consecutivas, calcular el número de S. aureus
por placa como se indica en B.7.2 y calcular el número N
como una medida ponderada de las dos diluciones
sucesivas, usando la siguiente ecuación:
N=
B.7.4 Promediar los resultados de los
duplicados.
Justificación
Se hace la modificación conforme a la
versión vigente de la norma de referencia,
y se incluye el subíndice B.7.3.1 mejorando
la redacción del punto.
∑a
V ( n1+ 0.1n 2 ) d
Σa es la suma de las cuentas encontradas en las placas
V es el número de mL en cada placa, en mL
n1 es el número de placas seleccionado en la primera dilución
n2 es el número de placas seleccionadas en la segunda
dilución
d es el factor de dilución seleccionado en la primer dilución
Redondear los resultados utilizando dos cifras significativas.
B.7.4 Promediar los resultados de los duplicados Reportar los
resultados como el número de S. aureus por mL o g de
producto
Se adapta a la actualización del método y
en coherencia a los puntos anteriores.
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NORMATIVO B,
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Dice
B.7.5 Cuando en dos diluciones consecutivas
se obtienen cuentas entre 15 y 150 colonias
(típicas o atípicas) calcular el número de S.
aureus para cada dilución como se especifica
en los puntos anteriores, calcular la cuenta de
S. aureus considerando el factor de dilución,
calcular el logaritmo en base diez de cada
dilución y realizar la resta de éstos, si la
diferencia entre los logaritmos de las dos
diluciones es menor a 0.3, reportar el
promedio de las dos diluciones. Si por el
contrario la diferencia entre los logaritmos es
mayor a 0.3; reportar el valor más bajo.
Debe decir
B.7.5 Cuando en dos diluciones consecutivas se obtienen
cuentas entre 15 y 150 colonias (típicas o atípicas) calcular el
número de S. aureus para cada dilución como se especifica
en los puntos anteriores, calcular la cuenta de S. aureus
considerando el factor de dilución, calcular el logaritmo en
base diez de cada dilución y realizar la resta de éstos, si la
diferencia entre los logaritmos de las dos diluciones es menor
a 0.3, reportar el promedio de las dos diluciones. Si por el
contrario la diferencia entre los logaritmos es mayor a 0.3;
reportar el valor más bajo.Estimación de las cuentas bajas
B.7.5.1 Si las dos placas de la muestra directa o de la
primera dilución contiene menos de 15 colonias, reportar los
resultados como sigue:
a) Para los productos líquidos, estime el número de S.
aureus por mililitro.
Ne=
Justificación
Se hace la modificación conforme a la
versión vigente de la norma de referencia,
y se incluye el subíndice B.7.5.1 mejorando
la redacción del punto.
∑a
V X2
Ne es el número estimado de colonias confirmadas de S.
aureus
Σa es el número de colonias confirmadas en las dos placas
V es el volumen inoculado en las placas
b) Para otros productos, estime le número de S. aureus por
gramo
Ne=
∑a
V x 2x d
Ne es el número estimado de colonias confirmadas de S.
aureus
Σa es el número de colonias confirmadas en las dos placas
V es el volumen inoculado en las placas
D es el factor de dilución en la primera dilución
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NORMATIVO B,
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Dice
B.7.7 Ejemplo para el cálculo de S. aureus.
Por ejemplo, el 0.1mL del inóculo de la
dilución 10-2 de la muestra da como resultado
65 y 85 colonias típicas por placa.
Ninguna colonia atípica fue identificada en las
placas.
Todas las 5 colonias seleccionadas de la
placa conteniendo 65 colonias fueron
coagulasa y termonucleasa positiva por lo que
las 65 colonias fueron consideradas como S.
aureus.
3 de las 5 colonias seleccionadas de la placa
que contiene 85 colonias fueron coagulasa y
termonucleasa positiva por lo que el 60%, es
decir, 51 colonias son consideradas como S.
aureus.
La cuenta promedio tomando en cuenta solo
las positivas es:
65+51/2 = 58 S. aureus. Redondeando a dos
cifras significativas  60
58 por el inverso del factor de dilución (1/10-2)
es 5800 UFC.
Si se considera que el inóculo fue de 0.1mL
habrá que multiplicar por 10 para obtener
58000 UFC/mL o g según la naturaleza de la
muestra.
También puede aplicarse la siguiente formula:
Debe decir
B.7.7 Ejemplo para el cálculo de S. aureus.
Se inoculó Por ejemplo, el 0.1mL de cada dilución inóculo de
En la dilución 10-2 de la muestra da como resultado se
encuentran 65 y 85 colonias típicas por placa
respectivamente y ninguna colonia atípica en ambas placas.
En la siguiente dilución 10-3 se encontraron 3 y 7 colonias
típicas en cada placa respectivamente y ninguna atípica en
ambas placas.
Se realizaron los siguientes cálculos
De las 65 colonias, se seleccionaron 5 colonias, y las 5
fueron confirmadas como S. aureus. Dando a=65
De las 85 colonias, se seleccionaron 5 colonias, y solo 3
fueron confirmadas como S. aureus. Dando a=51
De las 3 colonias, se probaron las 3 y las 3 fueron
confirmadas como S. aureus. Dando a=3
De las 7 colonias, se probaron 5 y las mismas fueron
confirmadas como S. aureus. Dando a=7
Entonces
N=(65+51+3+7)/ 0.1 (2+ 0.1 (2)) 10-2
N= 126 /0.22 X 10-2
N=57 272
El resultado después del redondeo quedaría como: 5.7 x 10 4
UFC/g
Ninguna colonia atípica fue identificada en las placas.
Todas las 5 colonias seleccionadas de la placa conteniendo
65 colonias fueron coagulasa y termonucleasa positiva por lo
que las 65 colonias fueron consideradas como S. aureus.
3 de las 5 colonias seleccionadas de la placa que contiene 85
colonias fueron coagulasa y termonucleasa positiva por lo
que el 60%, es decir, 51 colonias son consideradas como S.
aureus.
La cuenta promedio tomando en cuenta solo las positivas es:
65+51/2 = 58 S. aureus. Redondeando a dos cifras
significativas  60
58 por el inverso del factor de dilución (1/10-2) es 5800 UFC.
Si se considera que el inóculo fue de 0.1mL habrá que
multiplicar por 10 para obtener 58000 UFC/mL o g según la
naturaleza de la muestra.
También puede aplicarse la siguiente formula:
Justificación
Se hace la modificación conforme a la
versión vigente de la norma de referencia,
la observación se hace para mejorar
redacción
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Dice
Debe decir
B.9.9 Caldo Rojo de Fenol (para B.9.9 Caldo Rojo de Fenol (para fermentación de
fermentación de carbohidratos).
carbohidratos).
B.9.9.1 Fórmula
Seguir las instrucciones de preparación conforme se
Tripticasa o proteona peptona No. 3
10g
describe en C.9.8. sustituyendo ramnosa y xilosa por
NaCl
5g
manitol o glucosa según se requiera
Extracto de carne (opcional).
1g
B.9.9.1 Fórmula
Rojo de fenol (7.2mL de solución de rojo de 0.018g Tripticasa o proteosa proteona peptona No. 3
10g
fenol al 0.25%)
NaCl
5g
Agua destilada
1L
Extracto de carne (opcional).
1g
pH 7.4 ± 0.2.
Rojo de fenol (7.2mL de solución de rojo de fenol al 0.018g
Carbohidrato*
0.25%)
B.9.9.2 Preparación: Disolver los ingredientes Agua destilada
1L
sin el carbohidrato, en 800mL de agua pH 7.4 ± 0.2.
destilada con calentamiento y agitación Carbohidrato*
ocasional. Distribuir en volúmenes de 2mL en B.9.9.2 Preparación: Disolver los ingredientes sin el
tubos de 13mm x 100mm con campana de carbohidrato, en 800mL de agua destilada con calentamiento
Durham. Esterilizar a 121ºC por 15 min y dejar y agitación ocasional. Distribuir en volúmenes de 2mL en
enfriar. Disolver 20g del carbohidrato en tubos de 13mm x 100mm con campana de Durham.
200mL de agua destilada y esterilizar por filtro Esterilizar a 121ºC por 15 min y dejar enfriar. Disolver 20g del
de membrana, adicionar asépticamente 0.5mL carbohidrato en 200mL de agua destilada y esterilizar por
del filtrado a cada tubo con medio esterilizado filtro de membrana, adicionar asépticamente 0.5mL del
y enfriado a menos de 45ºC, agitar filtrado a cada tubo con medio esterilizado y enfriado a
suavemente para mezclar.
menos de 45ºC, agitar suavemente para mezclar.
Justificación
Al eliminar este medio y permitir el uso de
otro medio base permite aprovechar un
solo medio base para dos metodologías,
reflejándose en reducción de costos y
procesamiento.
3.3. Diagrama de flujo.
■ Revisar punto B.8 Ayuda visual de la norma de referencia.
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■
El diagrama de flujo es una representación gráfica del método, en todo momento se debe tener acceso al
método de prueba original.
4. EQUIPOS E INSTRUMENTOS
4.1. Los equipos listados a continuación son los críticos requeridos por el método. En el informe de evaluación
de desempeño deberá completarse la “Tabla equipos de instrumentos empleados”
Nombre
Características
Estado deseado
Balanza
Granataria
Sensibilidad de 0.1 g
Calibración vigente y verificada el día de uso.
Marco de pesas
Clase F1 o E2
10 ó 20 g;
y 100 g ó 200 g ó
500 g
Calibrado
Baño de agua
Temperatura
controlada a 35°C ±
1°C ó 37°C ± 1°C.
Calificada1 35°C ó 37°C ± 1°C, por 24 h mínimo.
Con termómetro calibrado o verificado para realizar la
lectura de la temperatura de la cámara por lo menos dos
veces al día. División mínima de 0.5°C. Adecuadamente
inmerso.2
Incubadora
Temperatura
controlada a 36°C ±
1°C
Calificada 36°C ± 1°C, por 24 h mínimo.
Con termómetro calibrado o verificado para realizar la
lectura de la temperatura de la cámara por lo menos dos
veces al día. División mínima de 0.5°C. Adecuadamente
inmerso.
Homogeneizador
o licuadora
Funcionando
Mantenimiento Vigente.
5. MATERIALES
1 Se entiende que la calificación de los equipos para incubación consiste en un procedimiento interno o externo por el cual se
demuestre, a través del monitoreo en diferentes puntos que la temperatura de la cámara durante un periodo determinado
mantiene una homogeneidad térmica, asegurando las condiciones de incubación de la prueba.
2 Para la medición de la temperatura también se puede utilizar un termógrafo o termocupla trazable
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5.1. El material de trabajo debe ser estéril, cuando no se indique otra cosa, el material esterilizado por calor
seco o calor húmedo se considera estéril hasta por un mes siempre que se mantenga la integridad del
empaque; todo el material debe ser adecuadamente identificado, señalando la fecha de esterilización de
material y la fecha de uso. Se deben anexar evidencias al informe.
5.2. Cuando se use material estéril éste deberá ser evaluado por lote antes de su uso o documentar la
esterilidad mediante certificado de calidad, una vez abierto el empaque los materiales no deben ser
usados después de tres días. Se deben anexar evidencias al informe.
5.3. El material de vidrio re-usado deberá demostrar que fue lavado adecuadamente, mediante registros de
supervisión y demostrar la ausencia de residuos de detergente. Se deben anexar evidencias al informe.
5.4. Los siguientes materiales son de carácter enunciativo, el laboratorio deberá reportar los utilizados y sus
características en el informe.
●
Bolsas estériles para homogeneizador peristáltico o vasos de
licuadora de vidrio o aluminio.
●
Cajas Petri de vidrio o desechable, diámetro de 90mm a 100mm.
●
Cucharas, tenedores y cuchillos estériles para el manejo de la
muestra
●
Frascos de 500 mL con tapa de rosca esterilizables
●
Gradillas para tubo de ensaye esterilizables
●
Mecheros Bunsen o Fisher.
●
Perillas o propipetas.
●
Pipetas estériles de vidrio graduadas con diferentes capacidades:
10 y 5 mL con divisiones de 0.5 mL y 1 mL y con división mínima de 0.1 mL.
●
Micropipetas 100 a 1000 μL calibradas y/o verificadas.
●
Matraces Erlenmeyer con tapón de rosca de 250 mL.
●
Tubos de ensaye de 18 por 150 mm con tapón de rosca.
●
Puntas para micropipetas estériles y desechables.
6. REACTIVOS Y MEDIOS DE CULTIVO (MEDIOS DE CULTIVO, REACTIVOS Y MATERIAL BIOLÓGICO
DE REFERENCIA).
La preparación de los medios de cultivo se debe realizar conforme a las instrucciones del fabricante.
En el informe, se deberán incluir evidencias de la preparación de los medios y su control de calidad.
6.1. MEDIOS DE CULTIVO y REACTIVOS
■
Agar Baird Parker;
■
BHI;
■
Solución reguladora de fosfatos;
■
Agua peptonada;
■
Solución Salina 0.85%;
■
Agar Azul de Toluidina-ADN;
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■
Plasma de Conejo con EDTA;
■
Agua peptonada amortiguada;
■
Peróxido de hidrógeno al 3%;
■
Reactivos para la tinción de Gram;
■
Caldo para la fermentación de carbohidratos.
6.2. CEPAS
■
S. aureus ATCC 6538 ó 25923;
■
Para la prueba de selectividad se pueden escoger cepas que sean interferentes en la determinación como S.
epidermidis ATCC 12228 o Listeria monocytogenes ATCC19115.
7. MUESTRAS
7.1. Para la autorización inicial cada laboratorio deberá realizar la evaluación del desempeño del método con al
menos una matriz del grupo de alimentos prioritario para el laboratorio.
7.2. El laboratorio deberá contar con un programa para realizar la evaluación de desempeño en una matriz por
cada grupo de alimentos.
7.3. En el informe de validación se deberá reportar los criterios para la selección de la matriz inicial
considerando lo siguiente:
Grupo de
alimentos
Tipos de producto
Tipo de producto
recibido en el
laboratorio.
Matriz representativa
mayormente recibida en
el laboratorio.
Prioridad para el
laboratorio. 3
Productos
Cárnicos
Crudo
Procesados
térmicamente
Congelados
Fermentados
Curado
Pate
Reportar en el
informe
Reportar en el informe
Reportar en el informe
Pescado y
Productos de la
pesca
Crudos
Congelados
Reportar en el
informe
Reportar en el informe
Reportar en el informe
Frutas y
Vegetales
Crudos
Reportar en el
informe
Reportar en el informe
Reportar en el informe
Reportar en el informe
Reportar en el informe
Leche y lácteos
Crudos
Congelados
fermentados
Reportar en el
informe
3 Reportar numéricamente indicando 1 para el más prioritario.
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Queso artesanal
Agua
Agua potable
Agua embotellada
Agua de pozo
Hielo
Reportar en el
informe
Reportar en el informe
Reportar en el informe
Otros Productos
Para ser llenado por
cada laboratorio
Reportar en el
informe
Reportar en el informe
Reportar en el informe
7.4. La selección de las muestras debe realizarse con base en las prioridades del laboratorio considerando; la
frecuencia de recepción y los programas prioritarios.
7.5. Para la ejecución de este protocolo es necesario contar con una muestra con cuentas altas de S. aureus, pudiendo ser esta
naturalmente contaminada o fortificada.
7.6. Para la selección de las muestras se deberá contar con aproximadamente 1.5 kg o L de muestra y
almacenar en condiciones adecuadas, dependiendo de la matriz. Además se debe tener trazabilidad de
la muestra por ejemplo: marca, número de lote, fecha de caducidad, para productos como frutas,
vegetales, agua de la llave, se deben contener información de los datos de muestreo o lugar de la compra,
fecha de la compra, etc.
8. DESARROLLO EXPERIMENTAL
Considerando que el método de S. aureus tiene tres etapas; aislamiento y selección de colonias
sospechosas (típicas y atípicas), la confirmación de estas colonias, y el cálculo. Resulta necesario evaluar
la capacidad de cada laboratorio para poder distinguir y seleccionar las colonias sospechosas, que serán
después incluidas en el cálculo de estimación de UFC de S. aureus, lo cual será evaluado por la medición
de la selectividad.
8.1. Ajuste del inóculo del microorganismo de interés.
■
Previo al ensayo de evaluación se debe identificar la dilución adecuada de los microorganismos para
preparar la suspensión de trabajo, en las concentraciones que se indican más adelante.
■
El protocolo de preparación del inóculo puede ser elegido a conveniencia del laboratorio, éste debe
describirse en el informe.
■
Para la preparación del inóculo puede consultarse la “Guía para la Evaluación del Desempeño de Métodos
de Prueba Microbiológicos para el Análisis de Alimentos” (CCAYAC-CR-018).
■
Inocular aproximadamente 1,200,000 UFC en la primera dilución (250mL), para obtener una cuenta
aproximada de 480 UFC en la primera serie de placas, 48 UFC en la segunda y 5 UFC en la tercera.
8.2. Ajuste del inóculo de los microorganismos para la prueba de selectividad.
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NORMATIVO B,
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■
Preparar un inóculo de < 25,000 UFC del microorganismo de interés y >250,000 UFC del microorganismo
interferente.
Tabla 1 Preparación de muestras Repetibilidad, Reproducibilidad, Recuperación, Selectividad, Sesgo e
Incertidumbre.
Parámetro
Analistas
Muestra
Diluciones
decimales
Número de
réplicas
Microorganismo
Verificación de la
muestra
Al menos un
analista
25 g o 25mL
3
3
Sin microorganismo
Repetibilidad
Recuperación
Sesgo
Un analista
10
Staphylococcus aureus
1,200,000 UFC
aproximadamente
10 por
analista o
cada tiempo.
Staphylococcus aureus
1,200,000 UFC
aproximadamente
25 g ó 25 mL por
réplica
Tamaño de Inóculo
Sin inóculo
3 diluciones
Reproducibilidad
Al menos 2 analistas,
o 2 tiempos diferentes
25 g ó 25 mL por
réplica
Staphylococcus aureus
Selectividad
Un analista
25 g ó 25 mL por
réplica
1
10 por
analista
S. epidermidis ATCC
12228
o
Listeria
monocytogenes ATCC
19115
< 25,000 UFC
> 250,000 UFC
8.3. Repetibilidad
■
Medir 10 alícuotas de 25 g o 25 mL de la matriz seleccionada en 225 mL de agua peptonada amortiguada.
■
Inocular cada alícuota con aproximadamente 1,200,000 UFC.
■
Verificar el inóculo utilizando la técnica de vaciado en placa, empleando para el cálculo 6 cajas.
■
Proceder como lo establece el método de prueba correspondiente basado en el Apéndice B Normativo.
■
NOM-210-SSA1-2014.4
Registrar los resultados en el formato del informe.
8.4. Reproducibilidad
■
Un segundo analista simultáneamente con el que realiza repetibilidad ó el mismo en un tiempo diferente,
■
deberá ejecutar lo descrito en repetibilidad.
Registrar los resultados en el formato del informe.
4 Para los cálculos se deberán considerar las modificaciones a la norma.
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NORMATIVO B,
NOM-210-SSA1-2014
8.5. Recuperación
■ Obtener el logaritmo de los resultados obtenidos de las cuentas de S. aureus en la repetibilidad, y calcular
la media de los logaritmos de éstas.
■ Dividir la media del logaritmo de los resultados obtenidos de las cuentas de S. aureus (Vo) entre el
logaritmo de las UFC inoculadas (Ve), y multiplicarlo por 100 para calcular el porcentaje de recuperación
según se indica en el apartado 10.4.
8.6. Sesgo
■ Obtener el sesgo sacando el valor absoluto de la diferencia entre la media del logaritmo de los resultados
obtenidos de las cuentas de S. aureus (Vo) menos el logaritmo de las UFC inoculadas (Ve).
8.7. Selectividad
■
Preparar una dilución de la muestra midiendo 10 alícuotas de 25 g o 25 mL de muestra en 225 mL de de
agua peptonada amortiguada, inocular < 25,000 UFC del microorganismo de interés y >250,000 UFC del
microorganismo interferente, a partir de esta, inocular por extensión en placa dos placas de ABP y
continuar con el método de prueba correspondiente basado en el Apéndice B normativo NOM-210-SSA12014. Simultáneamente verificar ambos inóculos utilizando la técnica de vaciado en placa, empleando para
ello 6 placas con cada cepa.
Proceder como lo establece el método de prueba correspondiente basado en el Apéndice B Normativo.
NOM-210-SSA1-2014.4
Registrar los resultados en el formato del informe.
■
■
9. Resultados
9.1. Registrar resultados en el informe de desempeño.
9.2. Para el cálculo de los resultados se podrá usar el formato CCAYAC-F-731
10. Análisis estadístico
10.1. Repetibilidad
■
Colocar las lecturas obtenidas en el formato del informe, la hoja realizará automáticamente el cálculo.
■
El valor de r se calcula como:
DSR=
r=2.8
√
s
x́
DSR2
n
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Dónde:
s=desviación estándar
r= repetibilidad
DSR=Desviación estándar relativa
n = número de réplicas
x́ = Promedio
10.2. Reproducibilidad
■
Calcular la reproducibilidad utilizando los resultados obtenidos de las 10 réplicas de la prueba de
■
■
repetibilidad de un analista, más los resultados de un segundo analista, o el mismo analista en un segundo
tiempo.
Colocar las lecturas obtenidas en el formato del informe, la hoja realizará automáticamente el cálculo.
El valor de R se calcula como:
√
DSR21 + DSR 22
R=2.8
n
Dónde:
R= Reproducibilidad (por analista)
DSR1=Desviación estándar relativa del analista 1
DSR2=Desviación estándar relativa del analista 2
n= Total de réplicas considerando los dos analistas
10.3. Recuperación
■
Colocar las lecturas obtenidas en el formato del informe, la hoja realizará automáticamente el cálculo.
■
El valor de % de recuperación se calcula como:
% Recuperación= Media del logaritmo de las cuentas x100
Logaritmo de las UFC inoculadas
10.4. Sesgo
■
El sesgo es la diferencia absoluta entre el valor conocido como verdadero y el valor obtenido
■
experimentalmente.
Colocar las lecturas obtenidas en el formato del informe, la hoja realizará automáticamente el cálculo.
El sesgo se calcula como:
Sesgo= [Ve-Vo]
Dónde Ve= valor esperado
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Vo= valor obtenido
10.5. Selectividad
■
Al menos en el 80% de los resultados se obtienen confirmación de S. aureus.
No. de resultados confirmados como S . aureus
S=
× 100
No . de resul tados esperados
Considerando que se requieren 10 réplicas por analista y al menos 1 analista el número
total de resultados esperados debería ser 10.
10.6. Estimación de la incertidumbre
■
Identificar y mencionar las posibles fuentes de incertidumbre.
■
■
Colocar las lecturas obtenidas en el formato del informe, la hoja realizará automáticamente el cálculo.
La incertidumbre expandida U tal como se define por GUM, se deriva de la incertidumbre estándar
combinada uc(y), con un factor de cobertura k elegido en esta especificación técnica como un valor de 2
(que aproximadamente corresponde a un nivel de confianza del 95%.
U = 2 sR
Dónde:
U= Incertidumbre expandida.
YiA
= Son los datos transformados a logaritmo, en log10 (ufc/g) ó log10 (ufc/ml) del analista A
YiB
= Son los datos transformados a logaritmo, en log10 (ufc/g) ó log 10 (ufc/ml) del analista B
n
= 20
11. CRITERIOS DE ACEPTACIÓN
Parámetro
Repetibilidad
Criterio de aceptación
10 Réplicas un analista.
Nivel de fortificación: valor medio
Resultado r < 3
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NORMATIVO B,
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Parámetro
Criterio de aceptación
Reproducibilidad
10 Réplicas por cada analista, 2 analistas.
Nivel de fortificación: valor medio
Resultado R < 3
Recuperación
10 Réplicas, un analista.
Nivel de fortificación valor medio
Resultado entre 90 y 110% log
Sesgo
10 réplicas un analista.
Nivel de fortificación: valor medio
La diferencia absoluta de lo recuperado y lo inoculado es <0.3 log
Selectividad.
10 Réplicas por analista.
Al menos 1 analista.
Nivel de fortificación:
< 10 UFC por placa de microorganismos de interés.
> 100 UFC por placa del microorganismo interferente.
Resultado: confirmación del microorganismo de interés en > 80 % de las
muestras.
Incertidumbre
Especificar el mensurando
Listar las fuentes de incertidumbre
Realizar los cálculos de la incertidumbre expandida.
Referencia: Guía para la Evaluación del Desempeño de Métodos de Prueba Microbiológicos para análisis
de alimentos. CCAYAC-CR-018.
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NORMATIVO B,
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Participaron en la elaboración de este informe
María Esperanza Rodríguez Parra
Laboratorio Estatal Salud Pública
Tamaulipas
Responsable de Laboratorio de
Microbiología de Aguas y Alimentos
834 312 6633
lespt@hotmail.com
Odilia Hernández Hernández
Laboratorio Estatal Salud Pública
Veracruz.
Jefa del Departamentos de Análisis
Sanitarios.
229 9811390 Ext: 117
lesp.ohernandez@gmail.com
Paul Castro
Laboratorio Estatal de Salud Pública
de Baja California Sur.
Aseguramiento de Calidad
ibqpaul@gmail.com
Karina Guerrero Colina
Laboratorio Estatal Salud Pública
Veracruz.
Q. Analista de Análisis Microbiológicos
229 9811390 Ext: 117
qcguerrero@hotmail.com
César Omar Gálvez González
Comisión de Control Analítico y
Ampliación de Cobertura.
Coordinador de la Oficina de Proyectos
Analíticos.
5550805200 ext. 2022
cgalvez@cofepris.gob.mx
Mirella Paredes Salas
Laboratorio Estatal de Salud Pública
de Aguascalientes
449 9775511
mireparedes.salas@gmail.com
Participaron en la revisión de este informe.
Odilia Hernández Hernández
Laboratorio Estatal de Salud Pública
de Veracruz
Jefe de Departamento de Análisis
Sanitarios
(229) 9811390 Ext.117
lesp.ohernandez@gmail.com
IBQ Claudia Lorena Garcia Green
Laboratorio Estatal de Salud Pública
de Baja California Sur.
Maria Esperanza Rodriguez Parra
Laboratorio Estatal Salud Pública Tamaulipas
Responsable de Laboratorio de Microbiología de Aguas y
Alimentos
834 312 6633 lespt@hotmail.com
Geovani Ramírez Hernández
Gerencia de la Red nacional de
laboratorios.
50805200 ext. 2016
gramirez@cofepris.gob.mx
Liliana Areli Cano Ramirez
Comisión de Control Analítico y Ampliación de Cobertura
Coordinadora de Microbiología Sanitaria.
50805200 ext. 2043
lcano@cofepris.gob.mx
Autorización
Imelda Rocio Guzman
Directora Ejecutiva de Control Analítico.
Comisionada de Control Analítico y Ampliación de Cobertura.
Teléfono: 01 55 50 80 52 00 ext 2043
irguzman@cofepris.gob.mx
Josefina Gutiérrez Ramírez
Comisión de Control Analítico y Ampliación de
Cobertura.
Directora Ejecutiva de Innovación.
01 55 50 80 52 00 ext 2005
jgutierrez@cofepris.gob.mx
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1.
OBJETIVO
Reportar los resultados de Repetibilidad, Reproducibilidad, Recuperación, Sesgo, Selectividad e
Incertidumbre, obtenidos en el desarrollo del protocolo armonizado para la evaluación del desempeño del
Método de referencia para la estimación de la cuenta de S. aureus, Apéndice B Normativo. NOM-210SSA1-2014 en la matriz(ces) <<indicar la matriz>> utilizado el método interno <<colocar la clave del
método interno>> .
2.
CAMPO DE APLICACIÓN
Este informe es de aplicación a la Red Nacional de Laboratorios en la implementación y evaluación del
desempeño del Apéndice B Normativo, Método de referencia para la estimación de la cuenta de S.
aureus NOM-210-SSA1-2014.
3.
EQUIPOS E INSTRUMENTOS
Equipo
Descripción:
Estado deseado5
Evidencia del estado.6
Identificación, Marca,
Modelo
Balanza Granataria
Haga clic aquí para
escribir texto.
Verificado el día de
uso y Calibrado7
<<Registro de verificación diaria>>
<<certificado de calibración de la
balanza>>
Marco de pesas
Haga clic aquí para
escribir texto.
Calibrado 7
<<Certificado de calibración>>
Incubadora
36°C ± 1°C
Haga clic aquí para
escribir texto.
Calificada
<<Informe de calificación>>
Instrumento de
medición de
temperatura
Haga clic aquí para
escribir texto.
Calibrado o verificado
<<Informe de calibración o verificación
vigente>>
Baño de agua
35°C ó 37°C ± 1°C
Haga clic aquí para
escribir texto.
Calificado
<<Informe de calificación>>
5 Seguir los criterios de aplicación descritos en http://www.cofepris.gob.mx/TyS/Paginas/TercerosAutorizados.aspx
6Hacer referencia al registro, número de informe de calibración/calificación. Anexar copia de las
evidencias al presente informe.
7 Se recomienda implementar el uso del CCAYAC-CR-13.
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Equipo
Descripción:
Estado deseado
Evidencia del estado.
Identificación, Marca,
Modelo
Instrumento de
medición de
temperatura
Haga clic aquí para
escribir texto.
Calibrado o verificado
<<Informe de calibración o verificación
vigente>>
Homogeneizador
peristáltico, licuadora
Haga clic aquí para
escribir texto.
Mantenimiento
Vigente
<<Evidencia de mantenimiento>>.
Reportó
Supervisó
Firma
4.
Firma
Nombre
Haga clic aquí para escribir texto.
Nombre
Fecha
Haga clic aquí para escribir una fecha.
Fecha
MATERIALES
Material
Descripción
Clave de
Procedimiento
Material
de
vidrio <<Indique qué tipo de material <<Lavado
utiliza, por ejemplo pipetas, varillas material>>.
reutilizable estéril.
de
etc.>>
Material
estéril
desechable <<Indique qué tipo de material <<Verificación de la
utiliza, pipetas, asas, etc.>>
esterilidad de
material>>
Evidencia8
<<Procedimiento de
lavado de material y
control del material
lavado y Registros
de
lavado
de
material
y
su
control.>>
<<Procedimiento y
registros de la
verificación de la
esterilidad o
certificados de
esterilidad del
material>>
8 Cuando se use material esterilizado en el laboratorio, se deberá anexar evidencias de la prueba de
esterilidad realizada al material.
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Reportó
Firma
Nombre
Fecha
5.
Supervisó
Haga clic aquí para escribir texto.
Haga clic aquí para escribir una fecha.
Firma
Nombre
Fecha
Haga clic aquí para escribir texto.
Haga clic aquí para escribir una fecha.
REACTIVOS Y MEDIOS DE CULTIVO
Reactivo o medio de
cultivo
Marca
Lote y caducidad
Resultados de desempeño
y fecha de evaluación.9
Lote de preparación.
Fecha de vida útil del
medio preparado.
Agar Baird Parker
Haga clic aquí
para escribir
texto.
Haga clic aquí para
escribir texto.
Haga clic aquí para escribir
texto.
Haga clic aquí para
escribir texto.
BHI
Haga clic aquí
para escribir
texto.
Haga clic aquí para
escribir texto.
Haga clic aquí para escribir
texto.
Haga clic aquí para
escribir texto.
Solución reguladora de
fosfatos
o
agua
peptonada amortiguada
Haga clic aquí
para escribir
texto.
Haga clic aquí para
escribir texto.
Haga clic aquí para escribir
texto.
Haga clic aquí para
escribir texto.
Solución salina 0.85%
Haga clic aquí
para escribir
texto.
Haga clic aquí para
escribir texto.
Haga clic aquí para escribir
texto.
Haga clic aquí para
escribir texto.
AST
Haga clic aquí
para escribir
texto.
Haga clic aquí para
escribir texto.
Haga clic aquí para escribir
texto.
Haga clic aquí para
escribir texto.
Agar azul de toluidinaADN
Haga clic aquí
para escribir
texto.
Haga clic aquí para
escribir texto.
Haga clic aquí para escribir
texto.
Haga clic aquí para
escribir texto.
Plasma de conejo con
EDTA
Haga clic aquí
para escribir
texto.
Haga clic aquí para
escribir texto.
Haga clic aquí para escribir
texto.
Haga clic aquí para
escribir texto.
9 Enviar evidencia de la preparación y de la evaluación del desempeño los medios utilizados en este
informe.
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Reactivo o medio de
cultivo
Marca
Lote y caducidad
Resultados de desempeño
y fecha de evaluación.
Lote de preparación.
Fecha de vida útil del
medio preparado.
Peróxido de hidrógeno al
3%
Haga clic aquí
para escribir
texto.
Haga clic aquí para
escribir texto.
Haga clic aquí para escribir
texto.
Haga clic aquí para
escribir texto.
Kit para tinción de Gram
Haga clic aquí
para escribir
texto.
Haga clic aquí para
escribir texto.
Haga clic aquí para escribir
texto.
Haga clic aquí para
escribir texto.
Caldo rojo fenol (glucosa
y manitol)
Haga clic aquí
para escribir
texto.
Haga clic aquí para
escribir texto.
Haga clic aquí para escribir
texto.
Haga clic aquí para
escribir texto.
Reportó
Supervisó
Firma
Nombre
Fecha
6.
Firma
Haga clic aquí para escribir texto.
Haga clic aquí para escribir una fecha.
Nombre
Fecha
CEPAS
Cepas utilizadas
ATCC u origen de la Certificado u hoja de identidad y
aseguramiento de calidad
cepa.
Staphylococcus aureus
Haga clic aquí para escribir
texto.
Haga clic aquí para escribir texto.
Staphylococcus epidermidis o
Listeria monocytogenes
Haga clic aquí para escribir
texto.
Haga clic aquí para escribir texto.
Reportó
Firma
Nombre
Fecha
7.
Haga clic aquí para escribir texto.
Haga clic aquí para escribir una fecha.
Supervisó
Firma
Haga clic aquí para escribir texto.
Haga clic aquí para escribir una fecha.
Nombre
Fecha
Haga clic aquí para escribir texto.
Haga clic aquí para escribir una fecha.
MUESTRAS
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7.1.
Criterio de selección de la muestra
En la tabla se indica en una escala de 1 al 5 la prioridad para el laboratorio, donde uno es el más
importante y 5 el menos importante.
Criterio de
selección de la
muestra
Tipos de producto
Tipo de producto
recibido en el
laboratorio.
Matriz
representativa,
mayormente
recibida en el
laboratorio
Productos Cárnicos
Crudo
Procesados
térmicamente
Congelados
Fermentados
Curado
Pate
Reportar en el
informe
Ejemplo
Carne molida
congelada
Ejemplo 4
Crudos
Congelados
Reportar en el
informe
Ejemplo Pescado
refrigerado
Crudos
Congelado
Reportar en el
informe
Ejemplo 2
Pescado y
Productos de la
pesca
Prioridad para el
laboratorio
Ejemplo
Cárnico crudo
Cárnico congelado
Ejemplo
Tilapia
Frutas y Vegetales
Crudos
Mínimamente
procesados
Reportar en el
informe
Ejemplo fruta cruda
No recibe
Reportar en el
informe
Ejemplo
No recibe
Ejemplo 3
Leche y lácteos
Fresco
Crudos
Queso artesanal
Reportar en el
informe
Ejemplo
Queso Fresco
Reportar en el
informe
Ejemplo
Queso fresco
Ejemplo 1
Otros Productos
Para ser llenado por
cada laboratorio
Ejemplo
No aplica
Reportar en el
informe
Ejemplo
No aplica
Ejemplo 5
Muestra Seleccionada Haga clic aquí para escribir
texto.
Cantidad de Muestra Haga clic aquí para escribir
texto.
25
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Noviembre 2016
PROTOCOLO E INFORME ARMONIZADO PARA LA EVALUACIÓN DEL DESEMPEÑO DEL
MÉTODO DE REFERENCIA PARA LA ESTIMACIÓN DE LA CUENTA DE S. aureus. APÉNDICE
NORMATIVO B,
NOM-210-SSA1-2014
Descripción de la muestra (cuando aplique: marca, lote, fecha de caducidad, condiciones de preservación): Haga
clic aquí para escribir texto.
Reportó
Supervisó
Firma
Nombre
Fecha
8.
8.1.
8.1.1.
Firma
Haga clic aquí para escribir texto.
Haga clic aquí para escribir una fecha.
Nombre
Fecha
Haga clic aquí para escribir texto.
Haga clic aquí para escribir una fecha.
DESARROLLO EXPERIMENTAL.
Preparación del Inóculo. (Ver punto 8.1 del protocolo)
Descripción de la preparación del inóculo:
Escriba en esta sección el protocolo empleado, por ejemplo:
Se inoculó una asada de Staphylococcus aureus en 10 mL de Caldo Infusión Cerebro
Corazón, se incubó a 36 o C +/- 1o C por 22 a 24 h. A partir del cultivo se realizaron una
serie de diluciones con solución salina 0.85% hasta llegar a la dilución 10 -9.
Se colocó 1 mL por duplicado en cajas petri de la dilución 10 -7 a 10-9 y se adiciona agar
métodos estándar, se incubó a 36 o C +1o C por 22 a 24 h. Se realizó el conteo en cada
dilución y se realizó el registro de los resultados de la concentración del microorganismo
en cada dilución.
Se seleccionó la dilución con cuentas aproximadamente de 12 X 10 5UFC.
Las diluciones se mantuvieron en refrigeración y no son utilizadas por más 26 h.
Ver resultados en 9.1
Verificación de la muestra.
8.2.1. Descripción de la verificación de la muestra.
<< Describa las actividades para la verificación de la muestra, por ejemplo:
8.2.
Se seleccionó una muestra de queso de rancho, sin número de lote, de 2 kg de peso.
El día 20 de mayo de 2016 se tomaron 3 porciones de 25 g de muestra y se analizaron
siguiendo el método del Apéndice B normativo, utilizando como diluyente agua peptonada
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amortiguada lote 23, las muestras se inocularon en placas de ABP Lote 233 y se
incubaron en la incubadora ID 422 a 36°C por 24h.
El día 21 de mayo se contaron las colonias típicas y atípicas, y se volvieron a incubar por
24h más.
El día 22 de mayo después del tiempo de incubación se volvieron a revisar las placas y se
contaron las nuevas colonias típicas y atípicas, para este protocolo se seleccionó una
colonia típica y una atípica (para S. aureus) de cada placa, de cada dilución, si esta
confirma se continúa con el cálculo, en caso contrario se seleccionan otras 4 y se
someten al proceso de confirmación los registros de anotaron en la bitácora 1 hoja 6 a 12,
las colonias seleccionadas fueron sembradas en AST a 35°C, y caldo BHI incubadas a
35°C en baño de agua.
El dia 23 de mayo con el cultivo en caldo BHI se corrieron la determinación de coagulasa,
incubado a 35°C en el baño de agua ID 229 realizando lecturas cada hora durante las
primeras cuatro horas, y posteriormente hasta 24h. Del mismo cultivo se corrieron las
pruebas de termonucleasa usando el agar azul de toluidina lote 5, incubando a 35°C en
la incubadora ID6, después de 4 horas se reportó como negativo.
El día 24 se leyeron los resultados de la prueba de coagulasa reportando todos los
cultivos como negativo, por lo que todas las porciones de la muestra fueron reportadas
como <100 UFC/g de muestra.
Los resultados se encuentran en el punto 9.2 de este informe>>
8.3. Repetibilidad
<< Describa las actividades para la evaluación de este parámetro.
Ver resultados en 9.3>>
8.4. Reproducibilidad
<< Describa las actividades para la evaluación de este parámetro.
Ver resultados en 9.4>>
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8.5. Selectividad
<< Describa las actividades para la evaluación de este parámetro. Ver resultados en 9.5>>
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9.
Resultados.
Preparación del Inóculo. Registro
<Haga clic aquí para escribir una fecha.>>
9.1.
Fecha de preparación:
Fecha de lectura:
<Haga clic aquí para escribir una fecha.>>
Diluciones
<<10.7>>
Cuenta de colonias
145
UFC/<<mL>>
150
<<10.8>>
160
12
<<10.9>>
18
15
4
1
3
Tamaño de inóculo deseado <<1 200 000 UFC>>
Cálculo:
<< Si en la dilución 10-7 hay 150 UFC/mL
Entonces se puede estimar que
En la dilución 10-6 hay 1 500 UFC/mL
10-5 hay 15 000 UFC/mL
10-4 hay 150 000 UFC/mL
10-3 hay 1 500 000 UFC/mL
Entonces se selecciona la dilución 10-3 donde hay 1 500 000 UFC/mL
1 500 000 UFC --- 1 mL
1 200 000 UFC --- X
X = 0.8 mL
Por lo tanto se usará como inóculo 0.8 mL de las dil 10-3 >>
Reportó
Nombre y <<>>
Nombre
Firma
Firma
Fecha
Fecha
Supervisó
y
<<>>
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9.2.
Resultados de Verificación de la muestra:
9.2.1.
Fecha de preparación de
la
Cantidad pesada por muestra:
réplica 1 <<>>
réplica 2 <<>>
réplica 3 <<>>
Balanza
<<>>
Número de diluciones realizadas
réplica 1 <<>>
réplica 2 <<>>
réplica 3 <<>>
Diluyente
<<Nombre >> <<lote de preparación>>
mL de muestra inoculados por placa
<<0.1>>
Medio de cultivo
<<Nombre >> <<lote de preparación>>
muestra:
Incubación:
Temperatura <<>> Tiempo <<>> Incubadora <<>> Termómetro <<>>
Reportó
Nombre
Firma
Fecha
y
<<>>
Supervisó
Nombre
Firma
Fecha
y
<<>>
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9.2.2 Primera lectura
Fecha:
Placa 1
Réplica 3
Réplica 2
Réplica 1
Dilución
Nombre
Y firma
Fecha
Placa 2
<<10-1>>
<<10-2>>
<<10-3>>
d=
<<10-1>>
<<10-2>>
<<10-3>>
Colonias típicas contadas en la
placa
cc
<<>>
<<>>
<<>>
cc
<<>>
<<>>
<<>>
Colonias atípicas contadas en la
placa
cnc
<<>>
<<>>
<<>>
cnc
<<>>
<<>>
<<>>
Colonias típicas contadas en la
placa
cc
<<>>
<<>>
<<>>
cc
<<>>
<<>>
<<>>
Colonias atípicas contadas en la
placa
cnc
<<>>
<<>>
<<>>
cnc
<<>>
<<>>
<<>>
Colonias típicas contadas en la
placa
cc
<<>>
<<>>
<<>>
cc
<<>>
<<>>
<<>>
Colonias atípicas contadas en
la placa
cnc
<<>>
<<>>
<<>>
cnc
<<>>
<<>>
<<>>
Analista
Haga clic aquí para escribir texto.
Haga clic aquí para escribir una fecha.
Nombre
firma
Fecha
y
Supervisor
Haga clic aquí para escribir texto.
Haga clic aquí para escribir una fecha.
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9.2.3 Segunda lectura
Fecha:
Placa 1
Réplica 3
Réplica 2
Réplica 1
Dilución
Nombre
Y firma
Fecha
Placa 2
<<10-1>>
<<10-2>>
<<10-3>>
d=
<<10-1>>
<<10-2>>
<<10-3>>
Colonias típicas contadas en la
placa
cc
<<>>
<<>>
<<>>
cc
<<>>
<<>>
<<>>
Colonias atípicas contadas en la
placa
cnc
<<>>
<<>>
<<>>
cnc
<<>>
<<>>
<<>>
Colonias típicas contadas en la
placa
cc
<<>>
<<>>
<<>>
cc
<<>>
<<>>
<<>>
Colonias atípicas contadas en la
placa
cnc
<<>>
<<>>
<<>>
cnc
<<>>
<<>>
<<>>
Colonias típicas contadas en la
placa
cc
<<>>
<<>>
<<>>
cc
<<>>
<<>>
<<>>
Colonias atípicas contadas en
la placa
cnc
<<>>
<<>>
<<>>
cnc
<<>>
<<>>
<<>>
Analista
Haga clic aquí para escribir texto.
Haga clic aquí para escribir una fecha.
Nombre
firma
Fecha
y
Supervisor
Haga clic aquí para escribir texto.
Haga clic aquí para escribir una fecha.
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9.2.4 Confirmación10, 11
BHI Lote de preparación <<>>
AST Lote de preparación <<>>
Coagulasa Lote <<>> Fecha de hidratación
Azul de Toluidina Lote de preparación Haga clic aquí para escribir texto.
Bioquímicas Lote <<>> ó Manitol lote <<>> Glucosa lote <<>>
Catalasa Lote <<>>
Baño de agua <<ID>> Temperatura <<°C>> Termómetro <<ID>>
Incubadora <<ID>> Temperatura <<°C>> Termómetro <<ID>>
Muestra
Cepa
Resultado coagulasa
Tiempo de incubación
para coagulasa
Resultado
Termonucleasa
Control
Positivo
S. aureus <ATCC>>
Haga clic aquí para
escribir texto.
Haga clic aquí para
escribir texto.
Haga clic aquí para
escribir texto.
Control
Negativo
S. epidermidis <<ATCC>>
Haga clic aquí para
escribir texto.
Haga clic aquí para
escribir texto.
Haga clic aquí para
escribir texto.
9.2.4.1 Para el registro de resultados de confirmación utilice el formato anexo 13.1 “Registro de resultados
de confirmación” o los formatos internos del laboratorio y anexe al informe la cantidad de formatos
necesarios.
Analista
Nombre
Firma
Fecha
Haga clic aquí para escribir texto.
y
Haga clic aquí para escribir una
fecha.
Supervisor
Nombre
y
firma
Fecha
Haga clic aquí para escribir texto.
Haga clic aquí para escribir una fecha.
10 De las siguientes tabla solo utilice las celdas necesarias, cancela las celdas que no use siguiendo las
buenas prácticas de documentación
11 Las pruebas auxiliares pueden hacerse para apoyar la determinación de coagulasa y termonucleasa.
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9.2.4.2 Para la interpretación de los resultados y cálculos utilice el CCAYAC-F-731 anexe a este informe.
9.2.5 Resumen de resultados.
Réplica
Resultado
1
Haga clic aquí
escribir texto.
para
Haga clic aquí
escribir texto.
para
Haga clic aquí
escribir texto.
para
2
3
Reportó
Nombre
firma
Fecha
Valor esperado
Cumple
☐Muestras no contaminadas:
< 100 UFC/g o <1 UFC/g
☐Muestras naturalmente
contaminadas:☐No aplica
Haga clic aquí para escribir texto.
y
Haga clic aquí para escribir una
fecha.
Supervisó
Nombre
y
firma
Fecha
☐si
☐no
☐no aplica
Haga clic aquí para escribir texto.
Haga clic aquí para escribir una fecha.
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9.3.
Repetibilidad y Reproducibilidad
9.3.1.
Analista 1
Nombre del Analista: <<>> Fecha de inicio de la Prueba <<>>
9.3.1.1. Registro de preparación de la
muestra.
Fecha de preparación de la muestra: <<>>
Identificación de la Balanza <<>>
Número de diluciones realizadas por muestra <<3>>
Diluyente <<Nombre >> <<lote de preparación>>
mL de muestra inoculados por placa <<0.1>>
Medio de cultivo: <<ABP >> <<lote de preparación>>
Por cada muestra registre la cantidad pesada realmente.
Réplica
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
Cantida
d real
pesada
(g)
Haga
clic
aquí
para
escribir
texto.
Haga
clic
aquí
para
escribir
texto.
Haga
clic
aquí
para
escribir
texto.
Haga
clic
aquí
para
escribir
texto.
Haga
clic
aquí
para
escribir
texto.
Haga
clic
aquí
para
escribir
texto.
Haga
clic
aquí
para
escribir
texto.
Haga
clic
aquí
para
escribir
texto.
Haga
clic
aquí
para
escribir
texto.
Haga
clic
aquí
para
escribir
texto.
Reportó
Nombre
firma
Fecha
Haga clic aquí para escribir texto.
y
Haga clic aquí para escribir una
fecha.
Supervisó
Nombre
y
firma
Fecha
Haga clic aquí para escribir texto.
Haga clic aquí para escribir una fecha.
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9.3.1.2. Registro de inoculación de la muestra
y verificación del inóculo.
Fecha de la preparación del inóculo:
<>> Fecha de la verificación:
<>>
Microorganismo: <<>>
mL inoculados a la muestra: <<1 mL>> UFC esperado (teórico) << 1 200 000>> UFC/mL.
9.3.1.3 Verificación del inóculo.
mL inoculados por placa para la cuenta en placa: <<>>
Método de recuento: Vaciado en placa ☐, Extensión en superficie ☐
Medio de cultivo <<AST u otro medio sin inhibidores >> Lote de preparación: <<>>
Incubación:
Temperatura <<>> Tiempo <<>> Incubadora <<>> Termómetro <<>>
Dilución en la que se cuentan < 300 UFC <<>>
Resultados:
Réplica
1
2
3
4
5
6
UFC en la placa 1
<<>>
<<>>
<<>>
<<>>
<<>>
<<>>
UFC en la placa 2
<<>>
<<>>
<<>>
<<>>
<<>>
<<>>
Promedio por réplica.
<<>>
<<>>
<<>>
<<>>
<<>>
<<>>
Promedio de las 6 réplicas
Haga clic aquí para escribir texto.
Valor esperado por g o mL de muestra
Haga clic aquí para escribir texto.
Reportó
Nombre
firma
Fecha
Supervisó
Nombre
y
firma
Fecha
Haga clic aquí para escribir texto.
y
Haga clic aquí para escribir una
fecha.
Haga clic aquí para escribir texto.
Haga clic aquí para escribir una fecha.
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9.3.1.4 Registro de incubación
Temperatura <<>> Tiempo <<>> Incubadora <<>> Termómetro <<>>
Fecha de incubación:
<>>
Reportó
Nombre
firma
Fecha
Haga clic aquí para escribir texto.
y
Haga clic aquí para escribir una
fecha.
Supervisó
Nombre
y
firma
Fecha
Haga clic aquí para escribir texto.
Haga clic aquí para escribir una fecha.
9.3.1.5 Registro de lectura: Utilizando el formato anexo 13.2 “Registros de cuentas” registre el número de
colonias de cada réplica.
9.3.1.6 Confirmación Registre los resultados de confirmación en el formato anexo 13.1 “registro de
resultados de confirmación”.
9.3.1.7 Cálculos Realice el cálculo de UFC por g o mL de muestra utilice el formato CCAYAC-F-731.
9.3.1.8 Resuma los resultados en el punto 9.3.3.
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9.3.2. Analista 2
Nombre del Analista: <<>> Fecha de inicio de la Prueba
<>>
9.3.2.1. Registro de preparación de la
muestra.
Fecha de preparación de la muestra:
<>>
Identificación de la Balanza Haga clic aquí para escribir texto.
Número de diluciones realizadas por muestra <<3>>
Diluyente <<Nombre >> <<lote de preparación>>
mL de muestra inoculados por placa <<0.1>>
Medio de cultivo: <<ABP >> <<lote de preparación>>
Por cada muestra registre la cantidad pesada realmente.
Réplica
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
Cantidad real pesada (g)
<<>>
<<>>
<<>>
<<>>
<<>>
<<>>
<<>>
<<>>
<<>>
<<>>
Reportó
Nombre
firma
Fecha
Haga clic aquí para escribir texto.
y
Haga clic aquí para escribir una
fecha.
Supervisó
Nombre
y
firma
Fecha
Haga clic aquí para escribir texto.
Haga clic aquí para escribir una fecha.
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NORMATIVO B,
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9.3.2.2. Registro de inoculación de la muestra
y verificación del inóculo.
Fecha de la preparación del inóculo: <<>>
Fecha de la verificación: <<>>
Microorganismo: <<>>
mL inoculados a la muestra: <<1 mL>>
UFC esperado (teórico) << 1 200 000>> UFC/mL.
9.3.2.3 Verificación del inóculo.
mL inoculados por placa para la cuenta en placa: <<>>
Método de recuento : Vaciado en placa ☐ , Extensión en superficie ☐,
Medio de cultivo <<AST u otro medio sin inhibidores <<>> Lote de preparación: <<>>
Incubación:
Temperatura <<>> Tiempo <<>> Incubadora <<>> Termómetro <<>>
Dilución en la que se cuentan < 300 UFC <<>>
Resultados:
Réplica
1
2
3
4
5
6
UFC en la placa 1
<<>>
<<>>
<<>>
<<>>
<<>>
<<>>
UFC en la placa 2
<<>>
<<>>
<<>>
<<>>
<<>>
<<>>
Promedio por réplica.
<<>>
<<>>
<<>>
<<>>
<<>>
<<>>
Promedio de las 6 réplicas
Haga clic aquí para escribir texto.
Valor esperado por g o mL de muestra
Haga clic aquí para escribir texto.
Reportó
Nombre
firma
Fecha
Supervisó
Nombre
y
firma
Fecha
Haga clic aquí para escribir texto.
y
Haga clic aquí para escribir una
fecha.
Haga clic aquí para escribir texto.
Haga clic aquí para escribir una fecha.
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NORMATIVO B,
NOM-210-SSA1-2014
9.3.2.4 Registro de incubación
Temperatura <<>> Tiempo <<>> Incubadora <<>> Termómetro <<>>
Fecha de incubación:
<>>
Reportó
Nombre
firma
Fecha
Haga clic aquí para escribir texto.
y
Haga clic aquí para escribir una
fecha.
Supervisó
Nombre
y
firma
Fecha
Haga clic aquí para escribir texto.
Haga clic aquí para escribir una fecha.
9.3.2.5 Registro de lectura: Utilizando el formato anexo 13.2 “Registros de cuentas” registre el número de
colonias de cada réplica.
9.3.2.6 Confirmación Registre los resultados de confirmación en el formato anexo 13.1 “registro de
resultados de confirmación”.
9.3.2.7 Cálculos Realice el cálculo de UFC por g o mL de muestra utilice el formato CCAYAC-F-731.
9.3.2.8
Resuma los resultados en el punto 9.3.3.
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9.3.3 Resumen de resultados de la evaluación del desempeño. 12
Analista 1
Réplica
Analista 2
UFC/g o mL
Log(UFC)
UFC/g o mL
Log(UFC)
Valor esperado
<<>>
<<>>
<<>>
<<>>
1
<<>>
<<>>
<<>>
<<>>
2
<<>>
<<>>
<<>>
<<>>
3
<<>>
<<>>
<<>>
<<>>
4
<<>>
<<>>
<<>>
<<>>
5
<<>>
<<>>
<<>>
<<>>
6
<<>>
<<>>
<<>>
<<>>
7
<<>>
<<>>
<<>>
<<>>
8
<<>>
<<>>
<<>>
<<>>
9
<<>>
<<>>
<<>>
<<>>
10
<<>>
<<>>
<<>>
<<>>
Promedio por analista
<<>>
<<>>
Desviación estándar
por analista
<<>>
<<>>
DSR
<<>>
<<>>
r
<<>>
<<>>
% de recuperación
<<>>
<<>>
Sesgo
<<>>
<<>>
R
<<>>
12 Para la realización de los cálculos puede apoyarse de la siguiente
herramienta.https://docs.google.com/spreadsheets/d/1Abkig3HwxozC-xrT01eU-DK-q-MejFNRCqSkRWeFso/edit?usp=sharing
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9.4. Selectividad.
9.4.1.
Fecha de preparación de la muestra:
Registro de preparación de la muestra.
<>>
Identificación de la Balanza <<>>
Número de diluciones realizadas por muestra <<3>>
Diluyente <<Nombre >> <<lote de preparación>>
mL de muestra inoculados por placa <<0.1>>
Medio de cultivo: <<ABP >> <<lote de preparación>>
Por cada muestra registre la cantidad pesada realmente.
Réplica
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
Cantida
d real
pesada
(g)
<<>>
<<>>
<<>>
<<>>
<<>>
<<>>
<<>>
<<>>
<<>>
<<>>
Reportó
Nombre
firma
Fecha
Haga clic aquí para escribir texto.
y
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fecha.
Supervisó
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firma
Fecha
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9.4.2.
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MÉTODO DE REFERENCIA PARA LA ESTIMACIÓN DE LA CUENTA DE S. aureus. APÉNDICE
NORMATIVO B,
NOM-210-SSA1-2014
9.4.2
Registro de inoculación de la muestra y verificación de los inóculos.
Fecha de la preparación del inóculo:
Fecha de la verificación:
<>>
Fecha de la preparación del inóculo:
<>>
Fecha de la verificación:
<>>
<>>
Microorganismo de interés: <<S. aureus>>
mL inoculados a la muestra: <<1 mL>>
UFC esperado (teórico) << < 10 >> UFC
Microorganismo Interferente: <<>>
mL inoculados a la muestra: <<1 mL>>
UFC esperado (teórico) << >100 >> UFC.
Verificación del inóculo.
mL inoculados por placa para la cuenta en placa: <<>>
Método de recuento : Vaciado en placa ☐, Extensión en
superficie ☐
Medio de cultivo <<AST>> Lote de preparación: <<>>
Incubación:
Temperatura <<>> Tiempo <<>> Incubadora <<>>
Termómetro <<>>
Verificación del inóculo.
mL inoculados por placa para la cuenta en placa: <<>>
Método de recuento : Vaciado en placa ☐, Extensión en
superficie ☐
Medio de cultivo <<AST>> Lote de preparación: <<>>
Incubación:
Temperatura <<>> Tiempo <<>> Incubadora <<>>
Termómetro <<>>
Resultados:
Resultados:
Réplica
1
2
3
4
5
6
Réplica
1
2
3
4
5
6
Dilución
en la que
se
cuentan <
300 UFC
<<>>
<<>>
<<>>
<<>>
<<>>
<<>>
Dilución
en la que
se
cuentan <
300 UFC
<<>>
<<>>
<<>>
<<>>
<<>>
<<>>
UFC en la
placa 1
<<>>
<<>>
<<>>
<<>>
<<>>
<<>>
UFC en la
placa 1
<<>>
<<>>
<<>>
<<>>
<<>>
<<>>
UFC en la
placa 2
<<>>
<<>>
<<>>
<<>>
<<>>
<<>>
UFC en la
placa 2
<<>>
<<>>
<<>>
<<>>
<<>>
<<>>
Promedio
por
réplica
<<>>
<<>>
<<>>
<<>>
<<>>
<<>>
Promedio
por
réplica
<<>>
<<>>
<<>>
<<>>
<<>>
<<>>
Promedio
<<>>
Promedio
<<>>
Valor esperado por g o mL de muestra
Reportó
Nombre
firma
Fecha
<<>>
Haga clic aquí para escribir texto.
y
Haga clic aquí para escribir una
fecha.
Valor esperado por g o mL de muestra
Supervisó
Nombre
y
firma
Fecha
<<>>
Haga clic aquí para escribir texto.
Haga clic aquí para escribir una fecha.
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9.4.2.1. Registro de incubación
Temperatura <<>> Tiempo <<>> Incubadora <<>> Termómetro <<>>
Reportó
Nombre
firma
Fecha
Haga clic aquí para escribir texto.
y
Haga clic aquí para escribir una
fecha.
Supervisó
Nombre
y
firma
Fecha
Haga clic aquí para escribir texto.
Haga clic aquí para escribir una fecha.
9.4.2.2 Lectura Utilizando el formato anexo 13.2 “registros de cuentas” registre el número de colonias de
cada réplica.
9.4.2.3 Confirmación Utilizando el formato anexo 13.1 “registro de resultados de confirmación” anote los
resultados de la confirmación.
9.4.2.4 Cálculos Realice el cálculo de UFC por g o mL de muestra utilice el formato CCAYAC-F-731
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NORMATIVO B,
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9.4.3 Resumen de resultados de selectividad.
Réplica
Cuenta de S. aureus
UFC/g o mL
Log(UFC)
Valor esperado
<<>>
<<>>
1
<<>>
<<>>
2
<<>>
<<>>
3
<<>>
<<>>
4
<<>>
<<>>
5
<<>>
<<>>
6
<<>>
<<>>
7
<<>>
<<>>
8
<<>>
<<>>
9
<<>>
<<>>
10
<<>>
<<>>
Promedio
<<>>
% de recuperación
<<>>
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9.5.
Cálculo de incertidumbre.
Describa los cálculos
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9.6.
Comparación de los resultados obtenidos con los criterios
de aceptación.
Parámetro
Repetibilidad
Resultados
obtenidos
Criterio de aceptación
Dictamen
Analista 1
Haga clic aquí para
escribir texto.
Analista 2
Haga clic aquí para
escribir texto.
r<3
Reproducibilidad
Haga clic aquí para
escribir texto.
R<3
☐Cumple
☐No
cumple
Recuperación
Analista 1
Haga clic aquí para
escribir texto.
Analista 2
Haga clic aquí para
escribir texto.
Entre 90 y 110 log
☐Cumple
☐No
cumple
Sesgo
Analista 1
Haga clic aquí para
escribir texto.
Analista 2
Haga clic aquí para
escribir texto.
Diferencia absoluta entre lo recuperado
e inoculado < 0.3 log
☐ Cumple
☐No
cumple
Selectividad
1 Analista
Haga clic aquí para
escribir texto.
Inóculo confirmado < 25, 000 UFC por placa ☐Cumple
de microorganismos de interés.
☐No
Inóculo confirmado de > 250 000 UFC por cumple
placa del microorganismo interferente.
☐Cumple
☐No
cumple
Resultado: confirmación del microorganismo
de interés en > 80 % de las muestras.
Las recuperaciones deberían estar dentro
del 80%, del valor esperado.
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Parámetro
Incertidumbre
expandida
Resultados
obtenidos
Haga clic aquí para
escribir texto.
Criterio de aceptación
No aplica
Dictamen
No aplica
10. Discusión de los resultados
Por ejemplo:
Los resultados del análisis estadístico realizado, demuestran que al aplicar el método se obtienen
resultados confiables y reproducibles y por tanto se puede utilizar para el análisis de los productos
descritos en este informe.
La presencia de microorganismos interferentes no afecta sustancialmente la recuperación del
microorganismo de interés.
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11. CONCLUSIÓN
☐Al cumplirse todos los criterios de validez se concluye que el Método de Referencia para la
estimación de la cuenta de S. aureus Apéndice B Normativo. NOM-210-SSA1-2014 (Colocar la
clave y nombre del documento que describe el método del laboratorio), al ser aplicado por el
Laboratorio Estatal de Salud Pública de XXXXXXX es adecuado para el análisis del grupo de alimentos
(matriz específica).
☐Al NO cumplirse los criterios de validez (indicar cuales no se han cumplido) se concluye que el
Método
de Referencia para la estimación de la cuenta de S. aureus Apéndice B
Normativo.Apéndice Normativo. NOM-210-SSA1-2014 (Colocar la clave y nombre del
documento que describe el método del laboratorio), al ser aplicado por el Laboratorio Estatal de Salud
Pública de XXXXXXX NO es adecuado para el análisis del grupo de alimentos cárnicos o para la matriz
específica.
12. BIBLIOGRAFÍA
12.1 Norma Oficial Mexicana NOM-210-SSA1-2014, PRODUCTOS Y SERVICIOS. MÉTODOS DE
PRUEBA MICROBIOLÓGICOS. DETERMINACIÓN DE MICROORGANISMOS INDICADORES.
DETERMINACIÓN DE MICROORGANISMOS PATÓGENOS. APÉNDICE B NORMATIVO. Método de
Referencia para la estimación de la cuenta de S. aureus.
12.2 Guía para la Evaluación del Desempeño de Métodos de Prueba Microbiológicos para
análisis de alimentos. CCAYAC-CR-18/2 2016.
13. ANEXOS
13.1 Registros de resultados de confirmación.
13.2 Registros de cuentas.
Anexe copia de las evidencias referidas en el protocolo e informe.
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13.1 “Registro de resultados de confirmación”
Prueba :__________________ <<por ejemplo: verificación de la muestra >>
Replica ___________________<<1, 2, 3 ...n>>
Dilución ____________<< 10-1 >>
Placa:______________ <<1>>
Colonias Típicas
1
2
Colonias Atípicas
3
4
5
1
2
3
4
5
Resultado
coagulasa13
Tiempo de
incubación
Resultado
Termonucleasa14
Gram15
Bioquímica
Catalasa/
Manitol/
Glucosa16
Interpretación17
13 (+) = Positivo ó (-) = negativo
14 (+) = Positivo ó (-) = negativo
15 (+) = Gram Positivo ó (-) = Gram negativo
16 Si se usan bioquímicas colocar (+) = si confirma S. aureus ó (-) = para otro microorganismo, para
catalasa/manitol/glucosa colocar (+) = Positivo ó (-) = negativo, por ejemplo S. aureus sería +/+/+
17 (+) = si confirma S. aureus ó (-)= para otro microorganismo
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13.2 Registros de cuentas
Analista: _________________________
Fecha de incubación: ________________
Fecha de primer lectura: ____________________
Fecha de segunda lectura: ____________________
Replica __________
Dilución
d=
Total de colonias
24h
típicas contadas en la
cc
<<10-3>>
<<10-1>>
Placa 2
<<10-2>>
<<10-3>>
24h
cnc
48h
la placa
Colonias típicas
seleccionadas a
Placa 1
<<10-2>>
48h
placa
Total de colonias
atípicas contadas en
<<10-1>>
Ac
confirmar
Colonias atípicas
seleccionadas a
Anc
confirmar
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