TEMAS 26-27 MEDICINA LEGAL II TEMAS 26 Y 27 ESTUDIO DE LAS MANCHAS DE SANGRE Sobre: La Escena La Víctima El sospechoso De: Aspectos físicos. Aspectos químicos. Aspectos serológicos. Da información sobre: Participación de personas y objetos en una acción criminal. Aproximación a la forma en que se llevó a cabo un suceso. Identificación de un cuerpo desconocido. Determinación por análisis toxicológico de la causa de la muerte. Diagnostico de la etiología medicolegal de la muerte. Sistemas de Investigación: 1. Examen Visual y Búsqueda 2. Pruebas de Orientación 3. Pruebas de Confirmación 4. Diagnóstico específico 5. Diagnóstico individual 1. EXAMEN VISUAL Y BÚSQUEDA 1.1 MANCHAS VISIBLES. A) Localización Víctima: Cuerpo, vestidos, cavidades Escena: Suelo, pared, puertas, ventanas... Sospechoso: Cuerpo, ropa... Difícil si: a. Muy pequeñas b. Sobre vestidos oscuros c. Telas, objetos lavados d. Antigüedad y soporte Cambian color de la mancha Página 1 de 8 TEMAS 26-27 MEDICINA LEGAL II B) C) Distribución y aspecto: Naturaleza y localización de la herida Posición de la víctima Movimientos de la víctima Desplazamientos, gestos criminal Según cantidad de sangre y ángulo de caída: 1. MANCHAS POR PROYECCIÓN Lanzamiento de la sangre a distancia Ángulo de impacto de la sangre Textura de la superficie 2. MANCHAS POR ESCURRIMIENTO Deslizamiento de la sangre formando regueros o charcos Estudio de la superficie sobre la que discurre la sangre Información sobre cambios de posición 3. MANCHAS POR CONTACTO Objeto ensangrentado al contacto con sustrato deja impresión Estudio del sustrato Huellas manos/zapatos 4. MANCHAS POR IMPREGNACIÓN Imbibición del sustrato por el líquido En tejidos absorbentes Sangre empapa y forma manchas circulares y uniformes Dimensiones de la mancha Tiempo de permanencia 5. MANCHAS POR LIMPIADURA Mecanismo mixto entre contacto e impregnación Pasada del arma sobre tejido absorbente Manchas rectangulares, no uniformes Disminuye intensidad de color TRASLADO AL LABORATORIO - Asienta sobre tejidos (extender los tejidos, dejarlos secar y envolver en bolsas de papel, etiquetar y remitir). Asienta sobre otro elemento que se pueda trasladar al laboratorio: Trasladar dicho elemento. Sangre líquida: Impregnar un bastoncillo (hisopo), dejar secar y trasladar. Mancha sobre superficie absorbente: Impregnar bastoncillo con agua destilada y arrastrar la mancha. Dejar secar y enviar. Mancha sobre superficie no absorbente (costra): Raspar y empaquetar en papel parafinado y enviar. Página 2 de 8 TEMAS 26-27 MEDICINA LEGAL II 1.2 MANCHAS INVISIBLES - Antigüedad de la mancha. - Factores atmosféricos. - Soporte. - Intentos de lavado - Revelado de las manchas: - Luminol. - Luz forense. LUMINOL.- Es un preparado quimioluminiscente. Emite luz en el transcurso de una reacción química. - Sangre + Luminol + Oxidante Luminiscencia - Se aplica con un nebulizador. - En la oscuridad. - Es posible la repetición de la prueba. Secuencia: - Fotografías. - Recolección de las manchas. - Envío al laboratorio. Sensibilidad.- En muestras que contengan 1 ml. de sangre por cada 300 litros de sangre. - La pequeña cantidad de sangre que revela el Luminol es suficiente para la determinación de ADN. - Es capaz de detectar manchas recientes y muy antiguas. Interpretación de resultados. POSITIVO: - Restos de sangre. - Vegetales y zumos de frutas. - Productos de limpieza y pegamentos. - Pinturas y barnices. Para impedir falsos positivos, análisis espectroscópico de la mancha con el luminol. NEGATIVO: - No es sangre. Que la sangre esté contaminada con productos reductores. - Que la concentración del contaminante sea muy alta y la concentración de la sangre muy pequeña. - Página 3 de 8 TEMAS 26-27 MEDICINA LEGAL II Usos del luminol.2. Detección de la presencia de sangre. Detección de su distribución. Determinación de la edad de restos óseos (a +intensidad, + recientes). No interfiere con la realización de pruebas posteriores. PRUEBAS DE ORIENTACIÓN - Fundamento: - La Hb (Hemoglobina) tiene actividad peroxidasa. - Reactivo que al pasar de la forma reducida a la oxidada, cambie de color. - Reactivos: Bencidina: Azul Fenolftaleina: Rojo Leucomalaquita verde: Verde O-Tolidina y O-Toluidina: Verde azul - El reactivo se debe preparar en el momento. - Conservarlo en nevera. - Reacción de control con manchas preparadas en el laboratorio. - Asegurar la reacción negativa del soporte. Página 4 de 8 TEMAS 26-27 MEDICINA LEGAL II Sensibilidad.- Muy sensibles. Existen diferencias según los investigadores y de las condiciones experimentales en que se hayan determinado. 1/cien mil para la leucomalaquita verde a 1/millón para la fenolftaleina. Resultados. POSITIVO: - La muestra contiene enzimas con actividad peroxidasa (sangre o fibras vegetales). NEGATIVO: - Que no sea sangre. - Contaminada con productos reductores. - No hay datos fiables en los trabajos de investigación que demuestren la inocuidad de los reactivos para análisis posteriores. - Se recomienda la aplicación sobre parte de la muestra (Huella de Taylor). 3. PRUEBAS DE CONFIRMACIÓN. Comprobar la existencia de alguno de los componentes de la sangre: A) Pruebas microscópicas. B) Pruebas microquímicas o cristalográficas. C) Luminiscencia. D) Espectroscópicas. A) Microscópicas. Examen directo de la muestra con Ultropack Examen de la muestra tras someterla a un proceso de aislamiento y tinción de los hematíes y leucocitos (hematíes se rompen) Examen de la muestra tras someterla a un proceso de aislamiento y regeneración de los hematíes . Mejores resultados en superficie plana, forman costra Hematíes en forma de pilas o monedas Página 5 de 8 TEMAS 26-27 MEDICINA LEGAL II B)Microquímicas o cristalográficas Sensibilidad: Poco sensible. No se han podido evidenciar en diluciones mayores a 1/mil Resultados: Positivo: 1. Sangre Negativo: 1. No es sangre 2. Concentración baja 3. Deterioro de la muestra 4. Mala aplicación del método C) Luminiscencia Luz de Word (tipo de luz ultravioleta). Se ilumina la mancha con la luz de Word. Se añade ácido sulfúrico concentrado. Se vuelve a iluminar. Es sangre, si primero no es luminiscente y después si, con una luminiscencia roja-naranja D)Espectroscópicas Espectro de la absorción de la Hb y sus derivados tras la adicción de diferentes reactivos. Hemoglobina (577 y 54º,5 nm) + potasa y piridina – Hematina alcalina (color verde 600) + sulfhidrato de amonio- Hemocromógeno (color naranja 559,5 y 530). 4. DIAGNÓSTICO ESPECÍFICO Establecer si la sangre es o no humana. Estudio de los elementos formes de la sangre. Estudio de la HB: -Cristalográficos. -Espectrográficos. -Diferencias estructurales. Secuencia de aminoácidos. -Diferencia de propiedades físico-químicas. Página 6 de 8 TEMAS 26-27 MEDICINA LEGAL II 5. DIAGNOSTICO INDIVIDUAL A)Métodos serológicos. B)Determinación de enzimas. C)Polimorfismos de ADN. A) -Grupos sanguíneos -Depende de estructuras químicas en la membrana del hematíe (antígenos) -Cada antígeno tiene su anticuerpo con el que reacciona -Observar posible aglutinación de muestra+anticuerpo -Muestra líquida: Unas gotas en portaobjetos -Mancha: Técnica absorción-elución -Sensible y fácil en sangre fresca y líquida -Eficaz en manchas antiguas y poco concentradas -No válida en contaminadas o degradadas B) -Hematíes tienen proteínas (enzimas) -Enzimas presentan poliformismos -Se separan por electroforesis según tamaño y peso -Se distribuyen en población general de forma aleatoria -Estudios sobre la frecuencia estadística de cada forma polimórfica en la población -Grupos enzimáticos eritrocitarios: Fosfoglucomutasa Adenilatoquinasa Fosfatasa ácida Esterasa D Adenosindesaminasa Glucosa-6-fosfato-deshidrogenasa Glioxilasa I C) -Con reactivos se rompen los componentes de la sangre -Tras centrifugación, se separan los leucocitos y se lisan para liberar el ADN -Estudio de amplificación poliformismos específicos de ADN mediante PCR Página 7 de 8 TEMAS 26-27 MEDICINA LEGAL II OTROS PROBLEMAS MÉDICO LEGALES A) Diagnóstico del sexo: Reactivo quinacrina: Luminiscencia de posrción distal de cromosoma Y En la actualidad con ADN B) Diagnóstico de la edad: Estudio de la velocidad de desnaturalización de la Hb Hb + resistente en feto C) Diagnóstico de la región anatómica: Estudio citológico de las células: o Sangre menstrual o Sangre nasal o Sangre aparato respiratorio o Sangre aparato digestivo D) Estudio de la data: Reciente Antigua Factores que modifican la data: humedad, luz, tª Estudiar: o Aspecto o Brillo o Velocidad solubilización Página 8 de 8