a) Método de absorción - inhibición Este método, también podría

a) Método de absorción - inhibición
Este método, también podría denominarse de absorción – dilución, como veremos a
continuación. Consiste en confrontar porciones de las manchas a analizar con suero anti
A y anti B, respectivamente. Paralelamente se debe practicar un ensayo en “blanco”, es
decir, con porciones del soporte sin manchas para eliminar la posibilidad de que
sucedan interacciones inespecíficas que alterarían la interpretación de los resultados.
Una vez superada esta etapa, durante la cual se producirá, si corresponde, la formación
del complejo antígeno – anticuerpo, se procede a diluir la solución del suero tipificador
donde estarán los anticuerpos no reaccionantes con una progresión aritmética, 1/2, 1/4,
1/8, etc. Finalmente se determina el título o concentración de los anticuerpos no
reaccionantes mediante el agregado de gotas de suspensión de glóbulos rojos
determinándose hasta que concentración puede verificarse la formación de aglutinación.
Con los blancos no debiera producirse reacción por lo tanto ese será el título máximo en
donde no hubo “consumo” de anticuerpos originales. De haber en las muestras una
disminución de título esa circunstancia nos estaría indicando la presencia en la muestra
del antígeno respectivo.
Para efectuar el ensayo se requiere una poli cubeta de vidrio transparente, con 4 hileras
de excavaciones, siendo lo ideal que cada hilera conste de un mínimo de 12 pocillos.
En la primera excavación de cada hilera se coloca una alícuota del material a analizar,
blancos y muestras respectivamente (2 y 2). En un par se colocan II gotas de suero anti
A y en el otro de suero anti B, diluidos 1/32. Se tapan las excavaciones con una placa
de vidrio para impedir la concentración por evaporación y se deja un mínimo de 2 horas
en reposo.
El reactivo utilizado aporta anticuerpos que reaccionaran con el antígeno
correspondiente según el diagrama antigénico de la sangre analizada, durante esta
formación los anticuerpos reaccionantes se adhieren firmemente a los antígenos
respectivos de modo que los anticuerpos sobrantes están en menor concentración que la
original, cosa que se respeta por ausencia de antígeno en la muestra, tal como sucede en
los denominados blancos.
Al finalizar el periodo de incubación, se coloca en cada una de las excavaciones
restantes una gota de solución fisiológica y a continuación se transfiere una gota del
líquido de la primera excavación a la segunda, sé homogeniza, se pasa una gota de la
segunda a la tercera, se homogeneiza y así sucesivamente hasta terminar. El resultado
que en cada excavación la concentración es la mitad de la anterior. Siendo la
concentración original de los anticuerpos anti A y anti B, 1/32, quedará 1/64, 1/128,
1/256, 1/512, 1/1024, 1/2048, 1/4096, 1/8192, etc.
Finalmente mediante el agregado de I gota de suspensión de glóbulos rojos lavados A y
B respectivamente a cada excavación se podrá establecer el título o concentración
remanente en cada hilera observando cual es la dilución máxima en la cual se produce
1
aglutinación, es decir acumulo de glóbulos rojos formando el ya mencionado “racimo”.
Como ya dijimos, en los blancos no hay reacción de modo que en esas hileras la
concentración original no estará alterada y por lo tanto allí se observará el mayor título.
Por el contrario, si hubiera interacción antígeno-anticuerpo, el consumo de anticuerpos
que sucedería en dicha reacción, generará una disminución del título respectivo de
anticuerpos A ó B, o ambos, según el caso. Se establece como disminución significativa
un mínimo de dos niveles. Como vemos una disminución del título blanco con respecto
a la muestra, está indicando la presencia de los antígenos correspondientes.
En esta metodología la interpretación de los resultados es la siguiente:
Glóbulos A
Igual título blanco – muestra
Igual título blanco – muestra
Disminución título
Disminución título
Glóbulos B
Igual título blanco – muestra
Disminución título
Igual título blanco – muestra
Disminución título
Resultado
Grupo O
Grupo B
Grupo A
Grupo AB
Glóbulos rojos suspendidos
Glóbulos rojos aglutinados
b) Método de absorción – elución
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En esta técnica el fundamento de la reacción es idéntico a la anterior, nuevamente se
trata de identificar el o los antígenos presentes en la muestra, mediante la confrontación
con los anticuerpos correspondientes.
Para su realización debe disponerse de una placa de plástico transparente, es ideal el
poli carbonato, de modo de poder adherir firmemente una hebra manchada por la sangre
a analizar. Si el material lo tenemos en polvillo, debemos macerarlo en solución
fisiológica y luego transferir a una gasa parte del mismo por impregnación. Utilizando
acetato de celulosa, se logra una disolución parcial del soporte de poli carbonato, en el
material pastoso resultante se inserta la hebra a analizar, en 10-15 minutos por
evaporación del solvente, el polímero recuperará su estado sólido pero ahora con la
hebra insertada en su seno.
Sobre cada muestra se practican ensayos con suero anti A y anti B, de modo que se
requieren dos ejemplares de cada una para los ensayos y un tercero sin macular para la
realización del ensayo en blanco. Por agregado de los sueros anti A y anti B se
producirá la reacción antígeno anticuerpo, si es que los antígenos están presentes, el
período de incubación es de por lo menos 3 hs. a 4 grados centígrados, aunque es
recomendable dejarlos más tiempo en cámara húmeda.
A continuación se procede a un cuidadoso lavado con solución fisiológica a 4 grados
centígrados para arrastrar el material sobrante y finalmente es recomendable la
inmersión de la hoja de poli carbonato en una cuba plástica con sol. fisiológica a esa
temperatura. Todo el exceso de anticuerpos presentes será eliminado durante este
proceso, quedando solamente los anticuerpos que hubieran reaccionado con los
eventuales antígenos presentes.
Una vez finalizado el lavado, se seca el poli carbonato con papel de filtro, se coloca
nuevamente en la cámara húmeda y se agrega sobre cada muestra I gota de suspensión
de glóbulos A y B previamente lavados. El conjunto se coloca ahora con la cámara
húmeda en estufa a 50 grados centígrados, durante 15 minutos En este período se
produce el desdoblamiento del complejo antígeno-anticuerpo, si previamente se hubiera
producido.
Finalmente se retira de la estufa, se agita suavemente, y se observa la presencia o
ausencia de aglutinación en cada caso por observación microscópica.
3
La interpretación de resultados por esta técnica puede efectuarse según el siguiente
cuadro:
Glóbulos A
Aglutinación
Aglutinación
Negativo
Negativo
Glóbulos B
Aglutinación
Negativo
Aglutinación
Negativo
Resultado
Grupo AB
Grupo A
Grupo B
Grupo O
Esta técnica también se utiliza con variantes para determinar el factor Rh en manchas de
sangre seca aunque el método tiene varias modificaciones.
La cantidad de muestra de sangre es mayor debido a la menor concentración de sitios
antigénicos presentes en la membrana de los glóbulos. La temperatura de absorción
debe ser 37 grados centígrados.
El lavado para eliminar el antisuero no absorbido debe ser más cuidadoso y exhaustivo.
La elución debe hacerse en ausencia de glóbulos rojos, porque requiere mayor
temperatura, 60 grados centígrados, durante más tiempo y los hematíes durante esa
exposición perderían su capacidad de aglutinación frente a los antisueros específicos.
Como se utilizan anticuerpos incompletos (Anti D), estos no son capaces de aglutinar
directamente los glóbulos rojos en solución salina, debe tratarse a los mismos con
papaina, que modifica la superficie de los hematíes y contribuye a favorecer la
aglutinación.
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Finalmente factores como el calor, luz solar directa, humedad, embalaje inadecuado y la
antigüedad de la mancha, que no debe superar el mes, disminuyen la posibilidad de
llegar a un resultado certero.
INTERPRETACIÓN GEOMÉTRICA DE LAS MANCHAS DE
SANGRE
La sangre es una de las evidencias más frecuentes e importantes encontradas en la
investigación criminal.
La existencia de sangre nos permitirá:
a) Ubicar la escena del crimen
La identificación de sangre humana perteneciente a un grupo similar al de la víctima,
puede apuntar con precisión al área de búsqueda en el escenario del hecho.
b) Determinar la posible comisión de un crimen
Ocasionalmente, la detección de sangre humana en una ruta, en una vereda, un porche o
un automóvil es la primera indicación de la comisión de un crimen.
c) Identificar el arma empleada
El grupo de sangre humana detectado en un martillo, un cuchillo o un elemento
contundente, puede resultar de considerable valor investigativo.
d) Probar o refutar la coartada de un sospechoso
El hallazgo de sangre humana en un elemento que pertenezca a un sospechoso que
argumenta el origen animal de la misma. La detección de sangre animal puede
desvincular de un hecho a una persona inocente.
e) Eliminar sospechosos
El hecho de demostrar mediante los ensayos correspondientes que las muestras de
sangre levantadas de distintos elementos es diferente a la de objetos secuestrados, puede
facilitar la liberación de un detenido.
5
Información que pueden brindar los ensayos con sangre:
a) Identificación de manchas como correspondientes a sangre
Los análisis químicos y microscópicos se hacen necesarios para identificar
positivamente la sangre. La apariencia o aspecto de este elemento puede variar
enormemente con la antigüedad de manchas y otros factores.
b) Determinación de si se trata de sangre de origen humano o animal
Si es animal, puede especificarse la familia correspondiente.
c) Determinación del grupo de sangre
Si es humana, la sangre puede clasificarse dentro de los cuatro grupos del sistema
internacional ABO. La sangre seca en suficiente cantidad y condiciones, puede
posteriormente ser caracterizada por otro sistema de tipificación, así como también
enzimas y proteínas que pueden ser ensayadas por electroforesis.
La raza de una persona o la antigüedad de una mancha seca, no pueden averiguarse en
forma concluyente a través del estudio de la sangre.
Ante la comisión de un delito en el que surjan huellas o manchas de sangre, debe
tenerse mucho cuidado en el registro de la ubicación, forma, dirección, medida y
superficie del área de impacto de tal elemento. Cuando esta información es aplicada a
las características físicas conocidas de la sangre, el investigador podrá descubrir:
a)
b)
c)
d)
e)
El origen de la sangre
La distancia entre el área de impacto y el origen al momento de la ocurrencia
Tipo y dirección del impacto
Posición de la víctima durante el ataque
Movimiento y dirección del sospechoso y de la víctima durante y después de la
efusión de sangre.
Leyes de la física respecto de los fluidos
Debido a una atracción molecular llamada fuerza de cohesión, una gota de sangre
conserva su forma como si tuviera una cobertura similar a la de un globo. En realidad
esa cobertura está dada por la tensión superficial, principio éste que puede apreciarse en
otros líquidos, como el agua, cuando apoyamos suavemente una hoja de afeitar y no se
sumerge. Sin embargo, si esa hoja de afeitar y no se sumerge. Sin embargo, si esa hoja
de afeitar se coloca sobre la superficie aludida con su filo hacia abajo, se corta o se
anula la tensión superficial y la misma se hunde.
Estos elementos son los que originan la forma circular de la gota de sangre en su caída
libre y evitan además la ruptura en el momento del impacto sobre el piso o cualquier
6
otra superficie. Sin importar la altura de la caída libre, una gota no se romperá cuando la
superficie sea lisa o suave y limpia. Este principio no se mantiene cuando la superficie
es rugosa o actúa alguna otra fuerza o energía.
Durante el estudio de un hecho, el investigador debería tener presentes las siguientes
características conocidas de la sangre:
1) Es de carácter uniforme y puede reproducir patrones o modelos específicos
2) Una gota de esta sustancia es de forma circular durante la caída libre
3) No se rompe, salvo que actúe una fuerza o energía ajena
4) Una gota de sangre posee un volumen de 0,05 mililitros, salvo que se vea
influenciada por alguna fuerza o energía.
5) La velocidad terminal es de 7,65 metros por segundo (± 0,15) en caída libre
6) La mayoría de las gotitas con alta velocidad tienen un diámetro menor de 1mm y
usualmente no se desplazan a más de 1,20 metros.
Distancia y dirección
Para estimar con precisión la distancia desde la cual una gota de sangre ha caído, es
necesario llevar a cabo una serie de experimentos sobre la superficie en cuestión y
analizar los resultados como patrones conocidos para comparar en forma directa con los
que se desconocen.
Determinar la direccionalidad de las gotitas resulta posible, dado que el golpe contra
una superficie en ángulo produce un patrón en forma de lágrima. Ello es provocado por
la ley física de la inercia, vale decir, la resistencia que posee todo cuerpo en movimiento
a toda fuerza que opere sobre él para cambiar su movimiento, dirección o velocidad. De
tal manera, dado que la velocidad se disipa abruptamente debido a la superficie sobre la
cual impacta, la gotita se desvanece poco a poco, con un final puntiagudo de diverso
grado, que depende del ángulo de la superficie. A mayor ángulo, más elongado y
angosto será el patrón de mancha producido. El extremo puntiagudo indica la dirección
de su desplazamiento.
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Gotas secundarias y ángulo de impacto
Las gotitas primarias de sangre pueden producir salpicaduras de abandono más
pequeñas, que señalan por detrás de la fuente. Las gotas más pequeñas se separan de la
principal u original debido la inercia o resistencia a ser detenidas. Las mismas viajan
próximas a la superficie hasta el impacto, produciendo marcas similares a signos de
admiración, cuyas puntas señalan la gota madre.
El goteo de sangre sobre una superficie plana y cercana a la horizontal, producirá
manchas elípticas antes que circulares. A medida que el ángulo decrece, los patrones se
hacen más elongados.
Hay ciertos puntos que recordar cuando se interpretan patrones de manchas de este tipo:
1) El grado de salpicadura lo determina la textura de la superficie y no la distancia
de caída
2) Las manchas en forma de lágrima (extremos puntiagudos) indican la dirección
del recorrido. Las gotitas más pequeñas y más largas exhiben sus extremos
puntiagudos apuntando a las manchas más grandes de donde provienen.
3) Cuanto más pequeñas las gotas, mayor la energía de impacto.
4) El ángulo de impacto de una mancha de sangre puede ser estimado por la
geometría de la mancha.
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Cuando han intervenido armas de fuego y hay evidencia conformada por manchas de
sangre, se aplican las siguientes reglas:
1) La salpicadura hacia tras usualmente se produce en un área comprendida entre la
boca del arma y el blanco, menor a los 7,70cm, cuando se encuentra sangre en el
interior del cañón.
2) Cuanto más grande es el calibre del arma mayor será la profundidad de
penetración de la sangre en el interior del cañón.
3) En las armas con retroceso de corredera (o block de cierre), la penetración y
concentración de las salpicaduras hacia aquellas, será menor que en las que no
poseen tal sistema (por ejemplo, revólveres).
4) Las armas munidas de cartuchos con elevada energía producirán mayor
profundidad de penetración de las salpicaduras, que con la munición común.
5) Cuando se dispara una escopeta de doble caño, con su boca en contacto con el
cuerpo o blanco, se produce una salpicadura considerable en el cañón que no ha
disparado, que puede llegar hasta 12 centímetros.
6) La mayoría de estas salpicaduras de sangre tendrán 1mm, o menos, de diámetro.
Documentación
El propósito de la documentación es demostrar la localización, la dirección, el tamaño,
la forma, la superficie de impacto, el ángulo, el número de manchas y/o el volumen y el
tipo de sangre humana. Sin embargo, reconstruir la cadena de eventos ocurridos en un
determinado escenario, donde se encuentran presentes manchas de sangre de diferente
aspecto, guarda proporción directa con la habilidad y cuidado puestos de manifiesto
mientras se concretan los exámenes correspondientes.
Consecuentemente, en primer lugar deberá buscarse la evidencia física oculta a la vista
o destruida. Contrariamente a los pelos o fibras, las manchas de sangre pueden ser
detectadas fácilmente con luz apropiada y, una vez secas, permanecerán en su lugar en
la mayoría de los casos. Sin embargo, pueden llegar a infectarse si no se toman los
recaudos necesarios, haciendo a veces imposible el análisis respectivo (por ejemplo,
cuando se contaminan con el polvo que procede del espolvoreado empleado para
detectar huellas latentes). La evidencia debe ser convenientemente recogida, envasada o
envuelta, señalizada y preservada.
Es de destacar la importancia de la fotografía para mostrar la localización y relación con
el ambiente, de cada mancha; para ello se deberán obtener acercamientos fotográficos
con referencia métrica, con la película de la cámara paralela a la superficie de que se
trate, previa demarcación perimetral de la huella con cinta o cualquier elemento de color
contrastante. A fin de mostrar la direccionalidad de las salpicaduras o manchas que
evidencien un sendero, se pueden utilizar cintas u otros elementos demarcatorios
apropiados. La convergencia de estas líneas indicará la existencia de un objeto que se
balanceaba u oscilaba.
9
Si las manchas se encuentran sobre un elemento transportable se las podrá llevar al
laboratorio, aunque, en la mayoría de los casos no será necesario si han sido
debidamente documentadas. No deberá olvidarse señalar en cada caso la ubicación
cardinal de cada espécimen para posibilitar su reconstrucción en caso de ser necesario.
Examen de las ropas
De resultar factible, es importante la concreción de un estudio de las ropas que se
supone vestía el sospechoso en el momentos del hecho. Una vez más, la localización,
tamaño y forma, puede, en conjunto, ayudar a probar o refutar la historia de lo que
aconteció. Por ejemplo si la víctima fue pateada repetidamente por el imputado, podrían
encontrarse salpicaduras de sangre de mediana velocidad sobre la porción anteroinferior
de la prenda que cubre el tobillo y la pierna, utilizada en el hecho. También habrá que
asegurarse de observar los zapatos y medias.
De igual manera, lo mismo puede suceder con las prendas que cubran muñecas y
brazos, cuando se han empleado instrumentos de mano.
CLASIFICACIÓN DE LOS PATRONES HEMÁTICOS
En Criminalística, de acuerdo al estado, consistencia, forma y características, las
manchas hemáticas se clasifican en los siguientes tipos de producción: goteo estático,
goteo dinámico, lago hemático, arrastramiento y deslizamiento, salpicadura, proyección,
por contacto y spray.

Goteo estático
Son pequeñas gotas que se dispersan aleatoriamente. Cuando caen perpendiculares al
plano son redondeadas, en cambio cuando caen sobre un ángulo inclinado tienen una
10
especie de “cola” debido a la gravedad. Sus bordes, lisos o estrellados dependen de la
altura de la que cae la gota.
Indican que lo que sea que las produjo (un arma ensangrentada, la víctima, victimario,
etc.) estaba en reposo, ya que a las gotas sólo las afecta la fuerza de gravedad.

Goteo dinámico
En este caso las gotas tienen forma de signo de admiración, donde la punta, o la parte
más angosta de la misma señala la dirección de la que provienen. Las gotas se ven
afectadas por la velocidad del sujeto o elemento ensangrentado.
11

Lago hemático
El lago hemático consta de una gran masa de sangre depositada en el piso o terreno.

Arrastramiento y deslizamiento

Salpicadura
Las manchas por salpicadura se forman cuando una gota, probablemente estática, cae
sobre un charco o una gota de sangre previa y aún en estado líquido, como resultado
gotas más pequeñas o satélites se pueden ver alrededor de esta.
12

Proyección
Las manchas por proyección se crean cuando una fuente de sangre expuesta es sometida
a una acción o fuerza, mayor que la fuerza de gravedad (interna o externamente
producidas).
13

Contacto
Se produce una mancha de la transferencia o del
contacto cuando un objeto con sangre entra en
contacto con un objeto o una superficie que no
tengan sangre.

Spray
El spray es la proyección de alta velocidad de un microgoteado (1mm) que se origina
cuando un arma de fuego es disparada muy cerca de un plano orgánico muy
vascularizado.
14
En cuanto a las manchas de proyección, es interesante mencionar que analizando en
profundidad el patrón hemático encontrado podemos hallar el origen de la proyección.
Generalmente el elemento que provocó el patrón será uno contundente o un arma
blanca, ya que la repetición del acto doloso provocará el patrón de proyección, que
también está dado por una velocidad media a alta.
15
También se hace necesario destacar que en el ambiente de la Criminalística sobre todo,
la ausencia de rastros también puede ser una evidencia. Por ejemplo, si en un mueble
polvoriento encontramos una parte donde hay ausencia de polvo, esto nos indicaría que
en el lugar falta algo. Lo mismo pasa con la sangre. La pérdida de continuidad de una
mancha puede demostrar que allí había algo que ya no está, pudiendo ser un objeto o
una víctima; siendo esto de gran utilidad en los casos donde el cuerpo fue movido de su
posición final.
VIDEOS
https://www.youtube.com/watch?v=8Zr1CJpxjRc
https://www.youtube.com/watch?v=cmoON67ZGJk
https://www.youtube.com/watch?v=8M2pIkB8ABs
https://www.youtube.com/watch?v=UoXfHUm0h1o
https://www.youtube.com/watch?v=zjfdpenl1Rc
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PROVENIENCIA DE LA SANGRE
Existen diferencias significativas entre una herida venosa y una arterial. Ayuda a
entender el origen, el flujo sanguíneo al considerar heridas o lesiones. Como ya hemos
visto, la sangre es llevada al corazón a través de vasos sanguíneos llamados venas y es
bombeada fuera del corazón en vasos sanguíneos grandes llamados arterias. Las heridas
en las venas tienen un flujo de sangre continuo de color rojo oscuro o marrón; en
cambio, las heridas arteriales por su parte, "escupen" sangre roja y brillante. Esto
también nos sirve como primer dato cuando en un lugar del hecho nos encontramos con
manchas hemáticas recientes para empezar a interpretar el hecho y la mecánica del
mismo, ya sea con el cuerpo de la víctima presente en el lugar o no.
RECONOCIMIENTO DE SANGRE POR MEDIO DE LUMINOL
Introducción
La luminiscencia es un fenómeno producido por las moléculas de materia, que al ser lo
suficientemente excitadas, emiten luz visible. Generalmente, la energía proviene de
fuentes externas, como es el caso de la electricidad en las lámparas de neón, o el calor
proveniente de una combustión. Sin embargo, también es posible producir luz por
medio de reacciones químicas, que tienen como ventaja la baja producción de calor,
aunque la emisión es bastante breve. Esta es la llamada luz fría.
Existen distintos modos de producir luz fría. Entre los modos de producción de luz fría,
se encuentran la fluorescencia, y la fosforescencia. La fluorescencia se debe a la
absorción de ondas electromagnéticas de alta frecuencia, y la inmediata emisión de
fotones de frecuencia más baja (léase, luz visible), como por ejemplo, en las lámparas
de ultravioletas. La fosforescencia consiste en la reemisión progresiva de la energía
captada inicialmente por el material, como por ejemplo, en las pantallas de rayos
catódicos. En cambio, la quimioluminiscencia es propia de reacciones donde uno de los
17
reactivos recibe una alta excitación, con la posterior emisión de luz visible. En la
naturaleza se encuentran varias proteínas quimioluminiscentes, como las presentes en
las luciérnagas, los peces de la región abisal, y algunas bacterias. Creadas por el
hombre, hay infinidad de compuestos, pero el más usado en la industria y la
investigación es el luminol (C8H7N3O2. 5-Amino-1,2,3,4-tetrahidro-phtalazin-1,4dion).
Resumen
El luminol es un derivado del ácido ftálico. Se trata de un sólido verdoso poco soluble
que posee la capacidad de enseñar por medio de luz visible, cuando es oxidado. Por esto
es una herramienta muy utilizada en la investigación forense, ya que gracias a sus
propiedades; puede revelar, en solución con un oxidante, hasta los rastros más ínfimos
de sangre, por medio de un brillo azulado. Esta peculiar característica facilita el
reconocimiento de aquellas sustancias oxidantes o sus catalizadores en situaciones que
requieren rapidez y efectividad, tal como la escena de un crimen donde se demanda el
señalamiento de cualquier trazo de sangre.
Pulverizando una solución de luminol en un área sospechosa se reduce
quimioluminiscencia en los lugares en que ha habido sangre, incluso si esta ha sido
lavada y no es perceptible a simple vista.
La reacción del luminol precisa de un medio alcalino, el cual sirve para disolver y
cargar negativamente la molécula. El oxidante, que suele ser Peróxido de Hidrogeno,
libera y reemplaza dos de los Nitrógenos, llevando así a la molécula a el mencionado
estado de excitación.
Finalmente se obtiene el luminol oxidado y cargado, el fotón, y Nitrógeno gaseoso.
Las reacciones de luminol requieren de un catalizador. Usualmente es una sal o metal de
transición, los cuales son muy accesibles. Específicamente en el caso de la sangre, el
Hierro (Fe) de la Hemoglobina es un poderoso catalizador. Las propiedades de la sangre
permiten una excelente optimización de la oxidación del luminol, esta reacción cuenta
18
con la suficiente sensibilidad como para detectar manchas diminutas de sangre, gracias
a que puede reaccionar a 1ppm (parte por millón).
Las confusiones con otra clase de compuestos que puedan dar falsos positivos de sangre
en la escena de un crimen pueden ser desmentidos con la observación cuidadosa del
color e intensidad del brillo, además de la espuma formada en muestras frescas de
sangre.
Este producto químico es una herramienta muy importante en el desarrollo de la
criminalística de campo, especialmente en el rastreo hemático.
En disolución neutra el luminol está preferentemente en forma de Ion dipolar
("zwitterion"). Sin embargo, en disolución alcalina el luminol está en forma de dianión.
Este dianión, va a ser el verdadero reactivo en el proceso que nos interesa.
El dianión del luminol puede oxidarse por el oxígeno molecular para dar un intermedio
quimioluminiscente. Se cree que la reacción tiene lugar de acuerdo con la siguiente
secuencia:
1º El dianión del luminol experimenta una reacción con el oxígeno molecular para
formar un peróxido de estructura desconocida.
2º Este peróxido es inestable y descompone, con la pérdida de nitrógeno, originando el
dianión 3-aminoftalato en un estado electrónicamente excitado.
3º El dianión excitado, para estabilizarse, emite un fotón en forma de luz visible (siendo
éste el responsable de la luz azul que se ve).
El fenómeno por el cual se produce la emisión de luz es el siguiente;
cuando una molécula se encuentra en estado excitado, tiene más energía que la que le
corresponde. Ese exceso de energía provoca que la molécula no sea estable en ese
estado excitado, lo que conlleva que la molécula pierda la energía que le sobra
espontáneamente para volver al estado fundamental (que es el estado energético más
estable de una molécula). Esa pérdida de energía se produce, normalmente, en forma de
radiación electromagnética (luz), como en el caso que nos concierne, o en forma de
calor.
El fenómeno de conversión interna es un proceso por el cual la molécula, que se
encuentra en un estado excitado desde el cual no puede emitir radiación, pasa a otro
estado excitado desde el que ya sí puede hacerlo.
Luminol y sangre
Cuando se empela el luminol para detectar manchas de sangre, lo que ocurre es que el
oxígeno molecular de los glóbulos rojos reacciona con el luminol, produciéndose las
reacciones anteriormente descritas, originando la emisión de luz al desexcitarse el 3aminoftalato.
19
Hemos visto, que para un buen funcionamiento del luminol, éste se debe encontrar en
un medio básico, por lo que a la hora de preparar el spray con luminol, se añadirá
peróxido de hidrógeno (agua oxigenada) y un hidróxido (OH-) para generar el medio
básico y así obtener el dianión de luminol.
Esta reacción de emisión de luz, puede verse catalizada por ciertos elementos o
moléculas, siendo uno de estos catalizadores el hierro. Debido a la presencia de hierro
en la hemoglobina de la sangre, la emisión de luz va a ser más intensa de la que se
obtiene en una reacción de laboratorio sin el empleo de catalizadores, por lo que se va a
favorecer la detección de menor cantidad de sangre.
BLUESTAR
En el año 2000, Jean-Marc Lefebvre-Despeaux, presidente de BlueStar, encargo a Loic
Blum, Ph.D., profesor de bio-química en la Universidad Claude Bernard-Lyon y
director de enzimática e ingeniería biomolecular del laboratorio, encontrar una nueva
fórmula que sería a base de luminol y eliminara todos los numerosos inconvenientes.
Como resultado de ello, Blum descubrió esta nueva fórmula que fue posteriormente
llamado Bluestar® FORENSIC.
Esta nueva formulación ha sido patentada bajo la marca registrada de BLUESTAR®, no
afecta el posterior análisis del ADN y no presenta ningún peligro para el operador, dado
que no es carcinogénico y es biodegradable.
Esto concuerda con los resultados obtenidos con el Luminol, pero la diferencia con el
BLUESTAR® estriba en que dicha formulación da una luminiscencia azulada más
potente y de más larga duración.
20
BLUESTAR® es un nuevo reactivo cuyo objetivo es revelar manchas de sangre que
han sido lavadas, limpiadas ó son invisible a simple vista. El objeto de este producto es
para utilizarlo en un escenario de investigación de un crimen. La formulación de
BLUESTAR® está basada en la quimioluminiscencia. Esta fórmula ha sido calificada
como el revelador más efectivo de sangre humana disponible en el mercado, tanto para
la escena de un crimen como para los departamentos de criminalística. El
BLUESTAR® no altera el ADN de la sangre revelada, lo cual facilita el subsiguiente
análisis del genotipo.
La Química del BlueStar ® FORENSE
Un nuevo luminol basado en la fórmula original BLUESTAR® FORENSIC es un
agente de visualización de sangre, sobre la base de luminol, una molécula que es bien
conocido entre la criminalística forense. La constitución del BlueStar ® ha hecho
posible eliminar los inconvenientes de los elementos asociados al luminol.
Hay que tener en cuenta, que únicamente es ligeramente corrosivo, dado que su pH es
algo superior a 11.
Las manchas invisibles de sangre reaccionan inmediatamente al BLUESTAR®
provocando una intensa reacción azulada luminiscente, visible en la oscuridad
directamente por el ojo humano, a 430nm de Longitud de Onda.
Su sensibilidad evidencia trazas de sangre en cantidades más pequeñas del mínimo
requerido para realizar una tipificación de ADN.
La reacción dura varios minutos y el reactivo de BLUESTAR® pueden pulverizarse
varias veces sobre una misma zona, sin afectar el ADN y tomando fácilmente
evidencias visibles mediante cámaras fotográficas de tipo estándar, lo cual elimina la
necesidad de utilizar equipos sofisticados.
Características más destacables del BlueStar ®










Mayor sensibilidad
Mayor intensidad de luz luminiscente
Mayor duración de la luminiscencia
La luminiscencia no requiere oscuridad total
Puede usarse varias veces sobre una misma muestra
No requiere ningún tipo de equipos especiales para tomar evidencias
fotográficas
No interfiere la tipificación del ADN
Estable a lo largo del tiempo
No es tóxico
Fácil de usar
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COMPARACIÓN DE LUMINOL CON BLUESTAR
Estudio de prueba de Sensibilidad
Procedimiento:
La sangre de un animal de aproximadamente dos (2) años (caballo), almacenada en el
refrigerador, fue utilizada como fuente de sangre. Cuarenta y cinco (45) ml. de agua
destilada fue agregada a seis (6) tubos de cincuenta (50) ml. Cinco (5) ml de sangre
fueron agregados al tubo uno (1) para crear una dilución de 1:10.
Subsecuentemente cinco (5) ml de cada tubo fue transferido al siguiente para crear una
dilución serial. Cada tubo fue mezclado cuidadosamente después de cada transferencia.
La siguiente serie de dilución creada:
- Tubo 1 - 1:10
- Tubo 2 - 1:100
- Tubo 3 - 1:1000
- Tubo 4 - 1:10000
- Tubo 5 - 1:100000
- Tubo 6 - 1:1000000
Cada dilución fue probada con el reactivo Kastle-Meyer antes del uso al substrato y
directamente después del uso de los reactivos en la detección de la sangre, además de la
prueba del reactivo del realce de la sangre.
Las manchas de sangre fueron esparcidas uniformemente sobre la superficie entera de
seis (6) azulejo de cerámicas y permitidas secarse en un ambiente interior normal de
aproximadamente 73 grados Fahrenheit (23° Celsius). Cada azulejo entonces fue
dividido por la mitad usando cinta negra.
El Luminol fue aplicado al lado derecho de cada baldosa de cerámica con un resultado
positivo para las diluciones de 1:10, 1:100, y 1:1,000. Hubo resultados negativos para
las diluciones de 1:10,000, de 1:100,000 y de 1:1, 000,000.
Un análisis de sangre de Kastle-Meyer fue realizado en cada dilución antes y después
del Luminol aplicado con un resultado positivo para las diluciones de 1:10, de 1:100, de
1:1,000, de 1:10,000 y de 1:100,000 (reacción positiva en aproximadamente 5 segundos
antes del uso, poco después de 5 segundos del uso del Luminol las reacciones fueron
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muy débiles). Había un resultado negativo para la dilución de 1:1, 000,000.
El BLUESTAR® FORENSE fue aplicado al lado izquierdo de cada baldosa de
cerámica con un resultado positivo para las diluciones de 1:10, de 1:100, de 1:1,000 y
de 1:10,000. Había resultados negativos para las diluciones de 1:100,000 y de 1:1,
000,000. Una prueba de Kastle-Meyer también fue realizada en cada dilución antes y
después BLUESTAR® FORENSE fue aplicado con un resultado positivo para las
diluciones de 1:10, 1:100, 1:1,000 y uso de 1:10,000 antes y después, y los resultados
positivos en aproximadamente 5 segundos para Kastle-Meyer antes del uso para
1:100,000 con resultados muy débiles. Había un resultado negativo para la dilución de
1:100,000 y de 1:1, 000,000 de BLUESTAR® FORENSE usado.
El BLUESTAR® FORENSE superó al Luminol en esta prueba. Probó ser más sensible
y mucho más brillante que el Luminol.
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