Benemérita Universidad Autónoma de Puebla. Facultad de Biología.

Benemérita Universidad Autónoma de Puebla.
Facultad de Biología.
Construcción de un vector de clonación que sobreexprese la Leucíon aminopeptidasa yspll de
Schizosaccharomyces pompe.
Tesis para obtener el título de:
Licenciado en Biología.
Presenta:
Cruz Ramón, Yessica Yazmin.
Asesor:
Herrera Camacho, Irma Pilar.
Puebla, Pue. Marzo 2006.
ÍNDICE
Capítulo I.
Introducción.
Proteínas.
Las lavaduras.
Leucín aminopeptidasas
Justificación.
Objetivos.
Capítulo II
Diseño experimental.
Material y métodos.
Soluciones y métodos de cultivo.
Preparación DNA cromosómico.
Diseño de oligonucleótidos y obtención del mapa de restricción.
Condiciones de PCR.
Extracción de DNA a partir de agarosa.
Digestión pPM082 y banda ape2+.
Precipitación de DNA con sales.
Preparación de Células componentes.
Transformación de las células DH5α.
Digestión del vector pSPLPII.
Amplificaciones.
Transformación de levadura.
Sobreexpresión de la LAPyspll.
Extracción de RNA de levaduras.
RT-PCR.
Análisis densitométrico.
Obtención de extracto soluble.
Determinación de proteínas totales.
Determinación de actividad enzimática.
Capítulo III.
Resultados y discusión.
Diseño de oligonucleótidos.
Amplificación del gen ape2+ por PCR.
Digestión pPM082 y banda ape2+.
Ligación y obtención de pSPLPII.
Transformación de las células DH5α.
Verificación de la construcción pSPLPII.
Obtención de la cepa de levadura sobreproductora 3DlLAPII.
Verificación de la sobreexpresión de la LAPyspll en la cepa 3DlLAPII.
Cuantificación del RNA, de la LAPyspll.
RT-PCR.
Relación expresión-función.
Proteínas totales.
Actividad enzimática.
Conclusiones.
Anexo.
Capítulo IV
Literatura citada.
Introducción:
Schizosaccharomyces pompe, es un eucariote unicelular no patógeno, el cual es un modelo para la
expresión de genes heterólogos, ya que este es un microorganismo comparte características
moleculares, genéticas y bioquímicas con otros organismos eucariotes. S. Pompe presenta dos
sistemas proteolíticos con diferente localización subcelular, uno a nivel citosólico y el otro a nivel
vacuolar.