B I O T E C N O L O G I A BIOTECNOLOGIA APLICADA A LA ACUICULTURA Por Igor I. Solar, Instituto de Acuicultura, Facultad de Pesquerías y Oceanografía, Universidad Austral de Chile, Puerto Montt, Chile. D e acuerdo a proyecciones de las Naciones Unidas, la población mundial llegará en el año 2025 a cerca de 8 billones (Fig.1). La disponibilidad de tierras cultivables y el aumento de la eficiencia en la producción de alimento de origen terrestre ha llegado a sus límites. Condiciones geográficas, climáticas, de calidad de suelos y diversos otros usos humanos determinan que los cultivos terrestres serán incapaces de proveer alimento para la siempre creciente población humana. Por otra parte, los océanos y otros ecosistemas dulceacuícolas cubren mas del 70% de la superficie del planeta, y constituyen cerca del 95% del volumen de la biósfera. Se reconoce, por lo tanto, que los ecosistemas acuáticos son una reserva casi 6 A q u a n o t i c i a s / d i c i e m b r e 2 0 0 1 - e n e r o 2 0 0 2 ilimitada de alimentos, substancias de importancia industrial y biomédica, y también una fuente de degradación y dilución de desechos antropogénicos e industriales. Estadísticas de la FAO (año 1999) indican que la producción de alimentos provenientes del medio acuático es cercana a 137 millones de toneladas métricas, de las cuales casi el 31% provienen de actividades de cultivo. La FAO también proyecta que para satisfacer las necesidades de la población humana del 2025, la producción total debería aumentar a 165 millones de toneladas métricas. Este aumento significativo no puede provenir de las capturas de especies silvestres sin causar serios daños a los ecosistemas marinos, lagos y ríos. En consecuencia, el au- B I O T E C N O L O G I A control del sexo, incubación y desarrollo la producción larvario, desarrollo embrionario y metamundial y soPOBLACIÓN MUNDIAL (EN BILLONES) morfosis, nutrición, conversión alimentibrepasando cia y crecimiento, salud, genética, identi(52%) el valor 10 ficación de “stocks”, bancos de genes y de las exportatransgénesis. ciones de harina 9 de pescado y 8 otros productos Inducción de maduración 7 marinos. La mayoría de las especies acuáticas no La producmaduran normalmente en condiciones de 6 ción de alimencautiverio, especialmente cuando las va5 1995 2005 2015 2025 2035 tos acuáticos riables ambientales que condicionan el La población mundial continuará aumentando durante el que pueda satisdesarrollo gonadal y la maduración de gasiglo XXI a una tasa de 90 millones de personas por año. facer efectivametos están alteradas o ausentes. En cierFuente: ONU (1996) mente las necetas circunstancias es necesario acelerar o sidades de la retrasar la maduración, a fin de optimimento en la producción de alimentos de población humana en la primera mitad zar y sincronizar la producción de gameorigen acuático debe necesariamente prodel siglo 21, no puede estar exclusivatos de machos y hembras, de adelantar o venir de un aumento significativo en la mente basada en especies de alto valor y desfasar el desarrollo embrionario y la eficiencia productiva de los cultivos. Los consumo restringido a segmentos de producción de juveniles, o facilitar la hipaíses más populosos del mundo, (Chipoblaciones de mayores recursos. Es nebridización de especies o cepas que difiena, India, Indonesia), o carentes de suficesario expandir la capacidad productiren en sus períodos de maduración. cientes áreas terrestres cultivables (Java a un amplio rango de recursos acuátiEl desarrollo de técnicas de inducción pón), recurren mayormente a la acuiculcos incluyendo algas, peces, moluscos y de maduración ha superado varias etatura para la producción de alimentos crustáceos. Esto sólo se puede lograr a pas. Desde el uso de preparaciones cru(Fig.2). través de amplios esfuerzos en investidas de extractos pituitarios conteniendo En efecto, en 1997, por primera vez la gación en acuicultura en el ámbito gonadotrofinas, preparaciones de gonaproducción mundial de salmón cultivamundial, basados en una sólida base dotrofinas semipurificadas hasta el uso de do sobrepasó la captura total mundial de biotecnológica. compuestos que estimulan la síntesis y salmón silvestre. En el 2000, la salmoniNumerosas áreas en las ciencias biolóliberación de gonadotrofina endógena. Incultura produjo más de 1,1 millones de gicas están participando en el desarrollo vestigaciones sobre los mecanismos fisiotoneladas equivalentes al 61% de la prode técnicas para aumentar la eficiencia y lógicos que regulan la maduración y los ducción total de salmón en el mundo. sustentabilidad de la acuicultura. La mamétodos farmacológicos que permiten su Esta tendencia es especialmente evidenyoría tiene que ver con biotecnologías remanejo en condiciones artificiales han te en Noruega, donde la combinación de productivas, de crecimiento y genética. dado la posibilidad de desarrollar y sinreducción en la disponibilidad de recurEntre las áreas de investigación están la tetizar compuestos bioactivos análogos a sos silvestres y el aumento sostenido de maduración de reproductores, manejo de hormonas de mamíferos o peces, que son los cultivos ha resultado en que la progametos, manipulaciones cromosómicas, efectivos en peces teleósteos. Actualmenducción de salmón del Atlánte, existen varias alternatiFIGURA 2 tico cultivado es 100 veces suvas, usando vehículos inyecPRODUCCIÓN MUNDIAL DE ACUICULTURA 1999 perior a las capturas silvestres. tables o implantables, vía in(TOTAL 33,96 MILLONES TON. MÉTRICAS) En Canadá, la declinación de tramuscular o intraperitolos “stocks” naturales de salneal, e incluso oral. En numón del Atlántico y del Pacímerosas especies de agua China fico ha provocado severas resdulce, especialmente carpas, India tricciones en las capturas de es necesario co-administrar Japón especies silvestres, resultando Indonesia factores antagonistas a la doTailandia en que el valor actual de la pamina (agente inhibitorio Vietnam producción cultivada es supede la liberación de la gonaUSA rior al valor de las capturas dotrofina), a fin de potenciar Noruega Filipinas silvestres. En Chile, el cultivo la liberación de gonadotroOtros de especies salmónidas ha aufina por la pituitaria. EstuFuente: FAO (1999) mentado sostenidamente, aldios recientes investigan (Excluye algas marinas) canzando en el 2000 el 27% de también el uso de ferohorFIGURA 1 d i c i e m b r e 2 0 0 1 - e n e r o 2 0 0 2 /A q u a n o t i c i a s 7 B I O T E C N O L O G I A monas como alternativa natural para estimular la maduración de los peces. A medida que avanza el conocimiento de los aspectos endocrinológicos que regulan la reproducción de organismos acuáticos, podemos esperar que se perfeccionen los métodos para promover la maduración de especies en cautiverio, incluyendo peces y moluscos, y el desarrollo de estrategias reproductivas en crustáceos. Control del sexo En varias especies de peces y en algunos crustáceos, los animales de un sexo poseen mejores características productivas que aquellos del otro sexo. Estas características pueden incluir crecimiento más acelerado, maduración tardía, o ambas. Las hembras de los peces planos, como el turbot, crecen más rápido que los machos. Por otra parte, los machos de los salmónidos maduran en promedio un año antes que las hembras. Los cambios secundarios causados por la maduración reducen el valor de mercado y obligan al productor a cosechar el producto antes de que haya logrado su crecimiento potencial completo. En algunos casos, como en el cultivo de tilapias, el cultivo monosexo, preferentemente machos, permite impedir la reproducción precoz durante la fase de crecimiento. La aplicación de técnicas de control de sexo también es necesaria para el aislamiento reproductivo de organismos genéticamente manipulados, OGMs, impidiendo así interacciones con especies silvestres. El control del sexo en organismos acuáticos cultivados puede ser logrado usando métodos endocrinos, manipulación de complementos cromosómicos o combinación de ambas técnicas. El uso de compuestos androgénicos o estrogénicos en el momento apropiado durante las primeras etapas de desarrollo, permite dirigir la diferenciación sexual de los peces hacia el sexo deseado, sobrepasando la determinación sexual genética. En ciertas especies es también posible usar esteroides sexuales para la inversión sexual de peces, que pueden producir gametos monosexo (carentes de cromosomas que determinan el sexo opuesto), producien- 8 A q u a n o t i c i a s / d i c i e m b r e 2 0 0 1 - do, de esta manera, descendencias para cosecha que no han sido sometidas a tratamiento hormonal. Por ejemplo, el uso de neo-machos (o machos productores de semen que contienen cromosomas generadores de hembras solamente), técnica actualmente en uso en Chile para la producción de poblaciones hembra solamente en truchas y en salmón del Atlántico. El empleo de sondas genéticas para la detección de las secuencias que identifican al cromosoma Y (determinante de masculinidad) ha facilitado la selección de peces según sus características sexuales genéticas (genotipo), independientemente de su sexo funcional o fenotipo. Las técnicas de manipulación de complementos cromosómicos suelen ser usadas en combinación con métodos endocrinos. La inducción de hembras triploides (con tres “sets” completos de cromosomas) permite generar individuos estériles. Salmones y truchas triploides de sexo femenino solamente, han sido ge- selección genética y manejo. Sin embargo, también se ha procurado aumentar el apetito, acelerar el crecimiento y mejorar la tasa de eficiencia en la conversión alimenticia en salmónidos, a través de algunos mecanismos biotecnológicos. Los niveles endógenos de hormona de crecimiento (somatotropina) son inferiores a los necesarios para el máximo crecimiento en la mayoría de los peces, incluyendo los salmónidos. Para contrarrestar esta limitación natural se han realizado investigaciones con enfoque farmacológico, como la administración de factores inhibidores de la somatostatina (que tiene efecto opuesto a la somatocrinina o factor liberador de la hormona de crecimiento). También se ha investigado el uso de compuestos recombinados de hormona del crecimiento de aves y mamíferos, los que han demostrado ser efectivos en peces. Otro compuesto con efecto anabólico que está bajo estudio es el lactógeno placental (aislado de la placenta de bovinos y humanos), FIGURA 3 que ha demosSISTEMA DE PRODUCCIÓN PARA LA GENERACIÓN trado ser altaDE POBLACIÓN TODAS HEMBRAS O TRIPLOIDES mente eficiente TODOS HEMBRA en acelerar el crecimiento y la caAndrógeno pacidad osmoreHembra Hembras gulatoria, faciliPoblación Triploidización Neomachos monosexo tando y aceleranhembra Ovas normales do de esta maneSemen Hembras femenino triploides ra la esmoltificación en salmóniCosecha Peces antes de dos y su rápido hembra Cosecha a madurar conveniencia traslado a jaulas de engorda en el Producción Reproductores ambiente marino. nerados también en Chile con el objeto No obstante la promesa demostrada de optimizar características productivas por las investigaciones en el uso de comy eliminar maduración precoz (Fig. 3). La puestos recombinados para mejorar el esterilización de moluscos cultivados, crecimiento de los peces, aspectos regucomo las ostras, vía inducción de triploilatorios impiden su aplicación en peces día, permite mantener la calidad del proen cultivo destinados al consumo humaducto durante la estación de maduración. no. Cabe considerar que la agencia estadounidense Food and Drugs Administration, FDA, aprobó en 1993 el uso de soCrecimiento matotrofina bovina recombinada para auy conversión alimenticia mentar la producción de leche, lo que poLos mejoramientos de estas caracterísdría facilitar obtener autorización de ticas productivas han sido principalmenagencias regulatorias para el uso de prote enfocados por medio de programas de e n e r o 2 0 0 2 B I O T E C N O L O G I A teínas recombinadas de la familia hormona de crecimiento-prolactina, una vez que las mejores dosis y mecanismos de administración hayan sido determinados y se compruebe su inocuidad para el consumidor humano. Genética molecular y diagnóstico Los procedimientos desarrollados en los últimos años para simplificar estudios, ensayos y diagnósticos en el ámbito molecular, en especial el uso de PCR (reacción en cadena de polimerasa), han permitido aumentar y perfeccionar los estudios basados en diagnóstico de ADN en áreas de genética y reproducción, agentes patógenos y evaluación del estado sanitario de los peces . Entre las aplicaciones en genética y reproducción está la posibilidad de detección de pequeñas variaciones estructurales en el genoma, a fin de determinar cambios resultantes de programas de selección o aumento en los niveles de homocigocidad por consaguineidad. También se han desarrollado técnicas de identificación genómica suficientemente sofisticadas para permitir la detección de salmones escapados de jaulas de cultivo viviendo en el ambiente natural, a fin de evaluar posibles impactos ambientales. Por otra parte, un ensayo basado en PCR para establecer las secuencias nucleotídicas correspondientes al cromosoma Y, permite la rápida detección del sexo genético en varias especies de salmónidos, incluyendo salmón plateado (coho) y rey (chinook), aunque aún no ha sido descrita para trucha y salmón del Atlántico. Los organismos acuáticos cultivados pueden ser afectados por una variedad de patógenos incluyendo virus, bacterias y parásitos. La detección temprana de estas patologías puede ser difícil mientras la carga patogénica es baja y los síntomas de la enfermedad no son evidentes. Sin embargo, técnicas moleculares y pruebas basadas en ADN permiten conocer las secuencias específicas de ciertos patógenos e identificar estas secuencias foráneas en el ADN de los organismos huéspedes y expuestos a infección. En la última década se han desarrollado pruebas de ADN para varios virus y bacgicas como las enzimas endonucleasas de terias, incluyendo los agentes causantes restricción para disectar secuencias de de Necrosis Hematopoyética Infecciosa, ADN en sitios específicos y la utilización IHN; Septicemia Viral Hemorrágica, de plásmidos, o moléculas de ADN cirVHS; Enfermedad Bacteriana del Riñón, culares que pueden sobrevivir en bacteBKD; y Vibrio, entre otros. Recientemenrias y que permiten el transporte de gete, en nuestro país, un equipo de investines, han facilitado la aislación y clonación gadores liderados por la Fundación Ciende secuencias génicas que controlan cacia para la Vida, ha definido las secuenracterísticas comercialmente importantes cias genéticas que caracterizan a la bacen numerosos organismos (Fig. 4). Las teria Piscirickettsia salmonis, agente cautécnicas de microinyección permiten la sal de la enfermedad Síndrome Rickettinserción de estas secuencias, generalsial del Salmón, SRS, lo que permitirá demente al citoplasma, en ovocitos fertilisarrollar una serie de herramientas para zados de organismos receptores. La inel diagnóstico y prevención de esta graserción exitosa del gen al genoma del reve enfermedad. ceptor involucra su integración o incorOtra aplicación de información genéporación en un locus cromosómico, su tica a nivel molecular es el moFIGURA 4 nitoreo de la exDEFINICIONES presión de ciertos genes capaces de responder BIOTECNOLOGIA: La aplicación de ciencia e ingeniería en el a estresores amuso directo o indirecto de organismos vivos como partes o probientales, productos de otros organismos vivos para la producción de bienes y duciendo las llaservicios. madas “proteíORGANISMO ACUATICO GENETICAMENTE MODIFICADO: nas de estrés”. Organismo en el cual el material genético ha sido alterado en una Estas proteínas, forma que no ocurre naturalmente por cruzamiento o recombinaentre las que se ción natural. cuenta la metaORGANISMO TRANSGENICO: Un organismo que lleva en su lotionina, perADN copias de construcciones nuevas de ADN que han sido introducidas mediante tecnología de ADN recombinado. Esto inmiten detectar y cluye el uso de construcciones de la misma especie (insertos homarcar otras mólogos) o transferencias inespecíficas (insertos heterólogos). proteínas celulares dañadas por condiciones ambientales anormales como niveles bajos de oxígeno o metales pesados y otros tóxicos químicos. Las técnicas moleculares permiten también detectar la expresión de genes que codifican enzimas involucradas con la excreción de compuestos orgánicos nocivos como compuestos aromáticos policlorados, PCBs, compuestos aromáticos polinucleados, PAHs, y dioxinas, que pueden provenir de fuentes naturales o industriales. De esta manera es posible determinar si los organismos acuáticos han sido expuestos a contaminación ambiental. Organismos transgénicos El desarrollo de herramientas tecnoló- d i c i e m b r e transmisión o incorporación efectiva en las células germinales del organismo transgénico para su transferencia a la descendencia, y su expresión o funcionamiento en base al control de secuencias reguladoras que controlan su actividad (Fig. 5). Entre los objetivos de la generación de peces transgénicos están la transferencia de fenotipos ventajosos, como la tolerancia a temperaturas bajas, la resistencia a enfermedades o determinadas capacidades metabólicas. Entre los enfoques más investigados y exitosos de la tecnología de transgénicos está el incremento de fenotipos como el aumento de tasas de conversión alimenticia y crecimiento. Otras 2 0 0 1 - e n e r o 2 0 0 2 /A q u a n o t i c i a s 9 B I O T E C N O L O G I A alternativas en consideración para su desarrollo futuro son la reducción o eliminación de fenotipos relacionados con reproducción, como control de la expresión de genes para la síntesis y liberación de gonadotrofinas y enzimas gonadales a fin de retardar o suprimir la maduración indeseada. Finalmente, la tecnología transgénica podría facilitar la creación de organismos con modificación de la composición nutricional de la carne, en particular la relación de los importantes ácidos grasos de las series omega 3 y omega 6. La inducción de organismos acuáticos transgénicos es una biotecnología todavía en experimentación y cuya aplicación a nivel comercial no se estima posible o conveniente en el corto plazo. Diversas consideraciones de carácter ético, ambiental o de percepción de los consumidores en cuanto a la inocuidad de los productos transgénicos reducen el interés del uso de éstos de parte de los productores. 10 A q u a n o t i c i a s / d i c i e m b r e 2 0 0 1 - productos, en respuesta a las LÍNEA GENERACIONAL EN EL PROCESO DE inquietudes de PRODUCCIÓN DE PECES TRANSGÉNICOS agencias guberMicroinyección Evaluar Evaluar por Establecer Producción namentales y de de gene clonado integración transmisión a líneas de de triploides los consumidoy expresión descendencia reproductores transgénicos (fenotipo) transgénicos res. A fin de evitar posibles impactos ambien3n tales será necesario desarrollar y aplicar las más eficientes y riguOvas G0 G1 G2 Producción rosas técnicas de Comercial contención física (Modificado de Donaldson y Devlin 1996) y biológica que impidan interacAntes que la promesa de aumentos imciones reproductivas de transgénicos con portantes en la eficiencia productiva y su organismos silvestres. impacto en la economía de los cultivos FIGURA 5 llegue a realizarse, será necesario el desarrollo y cumplimiento de estrictas regulaciones en relación con aspectos nutricionales, sanitarios y ambientales de los e n e r o 2 0 0 2 Igor I. Solar, Instituto de Acuicultura, Facultad de Pesquerías y Oceanografía, Universidad Austral de Chile, Casilla 1327, Puerto Montt, Chile.