Dx SEROLÓGICO DE DENGUE Y CHICKUNGUNYA

Licda. Yarisel Rodríguez
Mgtra. Dalis Mojica
ICGES/LCRSP
RED NACIONAL DE DENGUE
PROGRAMA DE EVALUACIÓN
EXTERNA DE LA CALIDAD
SUPERVISIONES
PRUEBAS DE
PROFICIENCIA
CONTROL DE
CALIDAD
INDIRECTO
No hay laboratorios de la red
Evaluación de los Kits comerciales para diagnóstico que
ingresen a Panamá (Decreto 148 del 9 de agosto de 1999 (gaceta oficial 23868)
ACCESIBILIDAD
MÉTODOS DIRECTOS
Aislamiento
Viral
Detección del
genoma
Detección de
antígeno
MÉTODOS INDIRECTOS
Serología
IgM
Serología
IgG
CONFIABILIDAD
Guzman et al., Nature Rev, 2011
 MUESTRAS: Suero
Momento de recolección:
- 5 a 21 días
 CADENA DE FRÍO: Muestras <
4 días (4-8ºC) y > 4 días (-20º
C)
 DATOS COMPLETOS :
Formulario único de vigilancia
epidemiológia: (Fecha de
inicio de los síntomas, Fecha
toma de muestra, Historia de
viajes, etc.)
 CONDICIONES DE
BIOSEGURIDAD
 MUESTRAS: Suero (1ml) o
sangre completa (sin aditivos
o con gel)
Momento de recolección:
> 9 días de inicios de
síntomas hasta 45 días
CADENA DE FRÍO: Muestras < 4
días (4-8ºC) y > 4 días (-20º
C)
DATOS COMPLETOS :
Formulario único de
vigilancia epidemiológica
(Fecha de inicio de síntomas,
Fecha toma de muestra,
Historia de viajes, etc.)
CONDICIONES DE
BIOSEGURIDAD
IMPORTANTE EVITAR CICLOS DE CONGELADO Y DESCONGELADO
DE LAS MUESTRAS
 Transmisión de CHIKV: Por picaduras de artrópodos infectados.
Protegerse: ropa, mosquitero impregnado, repelente e insecticida
 CHIKV es un agente de bioriesgo de nivel 3, La viremia es más alta y
se transmite más facilmente que el dengue (sangre-piel). Se considera que se
pueden transmitir por el contacto con animales infectados, sangre, suero,
plasma y tejidos
 Durante toma de muestra y manipulación: Equipo de protección
personal: guantes, bata, mascarilla, lentes protectores o mascara protectora
de rostro. Diagnóstico molecular o de serología: BSL2, aislamiento BSL2* o
BSL3
 Las muestras deben enviadas como material potencialmente
infeccioso, utilizar guantes cuando se manipulan
 Toda muestra sospechosa o todo instrumento en contacto con esas muestras:
descartar en basuras de bioriesgo
IgG
Signos y síntomas
Viremia
IgM
Signos y síntomas
Viremia
Vaughn, 2005
ALGORITMO DE LABORATORIO PARA EL DIAGNÓSTICO DE DENGUE EN LA
RED NACIONAL DE DENGUE
LABORATORIO DE LA RED NACIONAL DE DENGUE
RECIBE PACIENTE CON FORMULARIO COMPLETO
CLASIFICA MUESTRAS
0-3 DÍAS DE SÍNTOMAS
DIAGNÓSTICO VIROLÓGICO
-Detección del AgNS1 - Pacientes
hospitalizados
- Vigilancia del serotipo circulanteEnviar muestra al ICGES
POSITIVO
REPORTAR
4 DÍAS DE SÍNTOMAS*
5-21 DÍAS DE SÍNTOMAS
NO TOMAR MUESTRA Y CITAR
AL PACIENTE PARA TOMARLA
DEL DÍA 5 AL 21 DE INICIO DE
SÍNTOMAS
DETERMINACIÓN DE
ANTICUERPOS IgM/IgG
PRUEBA DE ELISA
NEGATIVO
ENVIAR 10% DE MUESTRAS
PARA CONTROL DE CALIDAD Y
VIGILANCIA VIROLÓGICA AL
ICGES*
CITAR AL PACIENTE
PARA II MUESTRA
EN FASE
CONVALESCIENTE
POSITIVO
REPORTAR
NEGATIVO
ENVIAR 10% DE
REPORTAR
MUESTRAS PARA
CONTROL DEENVIADAS POR LOS LABORATORIOS DE LA RED NACIONAL DE DENGUE AL
MUESTRAS
CALIDAD AL ICGES
INSTITUTO CONMEMORATIVO GORGAS DE ESTUDIOS DE LA SALUD
CLASIFICACIÓN
DE MUESTRAS
*Los casos con sospecha de Dengue Grave deben ser enviados inmediatamente al ICGES previa notificación
a
Epidemiología local y al ICGES.
0-4 DÍAS DE SÍNTOMAS
5-21 DÍAS DE SÍNTOMAS
RT-PCR TIEMPO REAL *
PRUEBAS SEROLÓGICAS
POSITIVO
NEGATIVO
REPORTAR
REPORTAR
CASO
CONFIRMADO
NEGATIVO
REPORTAR
POSITIVO
REPORTAR
CASO
CONFIRMADO
* En caso de agotarse los reactivos para RT-PCR Tiempo Real, las muestras serán analizadas mediante cultivo
celular, del cual se obtienen resultados entre los 14 a 30 días.
Versión 2013
NOTA: Los Laboratorios de la Red enviarán el 10% de muestras Negativas y Positivas para detección de anticuerpos
IgM e IgG y Antígeno NS1, además las muestras agudas para vigilancia virológica de acuerdo a lo establecido en
los lineamientos para la temporada baja y de brote de casos de dengue.
ALGORITMO DE LABORATORIO PARA EL DIAGNÓSTICO DE CHIKUNGUNYA EN EL ICGES
MUESTRAS ENVIADAS POR LAS INSTALACIONES DE SALUD A NIVEL NACIONAL AL
INSTITUTO CONMEMORATIVO GORGAS DE ESTUDIOS DE LA SALUD
CLASIFICACIÓN DE MUESTRAS
0-8 DÍAS DE SÍNTOMAS
Mayor o igual a 9 DÍAS DE SÍNTOMAS
(PRIMERA MUESTRA)
RT-PCR TIEMPO REAL
CHIK V *
POSITIVO
NEGATIVO
REPORTAR
REQUIERE
SEGUNDA
MUESTRA*
CASO
CONFIRMADO
ELISA IgM CASERA PARA CHIKV O COMERCIAL CON R.S
NEGATIVO
REQUIERE SEGUNDA
MUESTRA*
NEGATIVO
REPORTAR
POSITIVO
SOSPECHOSO
POSITIVO
SOSPECHOSO
REQUIERE SEGUNDA
MUESTRA*
NEGATIVO
INDETERMINADO
POSITIVO
CASO
CONFIRMADO
* LA SEGUNDA MUESTRA DEBE OBTENERSE DOS SEMANAS DESPUÉS DE TOMADA LA PRIMERA MUESTRA.
Versión 2014
Standard test: Detección de IgM e IgG
Sencilla
Gran cantidad de sueros
Diagnóstico de rutina
Ampliamente distribuída
Diagnóstico rápido
ELISA (formato más común)
Infección reciente
Serum
MUESTRAS
Saliva
Filter paper
IgM
La prueba de ELISA de captura contra Acs IgM para Dengue utilizada en la red no
distingue entre Infección primaria o secundaria.
Ig G
La prueba de ELISA de captura contra Acs IgG para Dengue utilizada en la red sólo
es positiva en casos de Infección Secundaria.
•
MUESTRAS DEL DÍA 4 NO SE DEBEN PROCESAR EXCEPTO CASOS FATALES , GRAVES U
HOSPITALIZADOS.
•
LOS LINEAMIENTOS DE LABORATORIO SOLO APLICAN PARA LAS MUESTRAS NO PARA
MANEJO CLÍNICO.
•
CONTROL DE CALIDAD (ENVIAR AL ICGES):
– 10% DE MUESTRAS POSITIVAS Y NEGATIVAS EN EL DX DE ACS
– 10% DE POSITIVAS Y 10% DE NEGATIVAS EN EL DX DE NS1
•
VIGILANCIA VIROLÓGICA (ENVIAR AL ICGES):
– EN TEMPORADA BAJA: TODAS LAS MUESTRAS AGUDAS (O-3 DÍAS DE SÍNTOMAS)
– EN BROTE O EPIDEMIA: SÓLO EL % DE MUESTRAS QUE ESTIPULE EPIDEMIOLOGÍA.
•
ES OBLIGATORIO EL USO DEL FORMULARIO UNICO PUES CONTIENE VARIABLES
NECESARIAS PARA LA TOMA DE DECISIONES EN LA REALIZACIÓN DE LAS PRUEBAS DE
LABORATORIO.
•
SE REQUIERE UNA COMUNICACIÓN Y COORDINACIÓN PERMANENTE ENTRE
LABORATORIO, EPIDEMIOLOGÍA Y CLÍNICOS PARA EL ADECUADO USO DE LAS PRUEBAS
Y RECURSOS DE LA INSTALACIÓN.
ELISA IgM DE CAPTURA
-ELISA Casera (Protocolo del CDC)
ELISAs COMERCIALES (IgM, IgG)
-En proceso de registro sanitario
1. Coat With Goat
anti-Human IgM
4°
Overnight
2. Add Patient
Serum @ 1:400
37° @ 1
Hour
• Reacción cruzada posible con otros
alfavirus (Mayaro, EEEV)
• Confirmar muestras positivas con 2nda
muestra (y neutralización en placas)
Neutralization
3. Add Antigen
4° Overnight
HRP
HRP
4. Add HRP antigroup McAb
37° 1 Hour
No neutralization
CHIK IgM Capture ELISA (P/N)
CHIK
VEE
MAY
EEE
12.3
0.89
1.9
1.2
10.6
1.1
1.9
1.3
14.5
1.1
3.1
0.89
20.4
1.5
7.1
1.8
26.6
2.2
1.7
1.5
21.2
2.2
1.2
1.6
15.3
1.6
1.9
2.2
31.3
1.7
2.9
1.8
22
1.8
1.4
1.4
18.8
1.2
1.5
1.1
34.3
1.6
2.8
9.1
Cortesía, Dr. Robert Lanciotii, DVBID, CDC-USA
Colaboración con el CDC
 Cada 15 días se realiza genérico de alfavirus para
muestras con sospecha de dengue que resulten
negativas. Identificación de CHIK
-RT-PCR en tiempo final genérico para Alfavirus (Sanchez-Seco
MP, J Virol Methods 2001;95:153-61)
-Secuenciación y comparación por BLAST
 Diagnóstico diferencial sólo clínicamente indicado
La confirmación etiológica específica de CHICK sólo es
posible por técnicas de laboratorio.
Las plataformas para vigilancia de dengue, permitirán la
detección y vigilancia de CHICK.
Los laboratorios deben implementar y fortalecer la
capacidad básica para la detección viral (limitaciones de
ensayos serológicos)
 La detección de IgM en una sola muestra es presuntiva.
Una vez demostrada la circulación autóctona, no será
necesario confirmar el 100% de los casos.
PAHO/OMS