Recordatorio de Proteínas en rumiantes del curso de Nutrición 2013

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PROTEÍNAS EN NUTRICIÓN DE
RUMIANTES
Bibliografía recomendada
• Nutrición Animal. McDonald et al. (2006)
• Nutrición proteica de los rumiantes. E. R. Ørskov. (Ed.
en inglés, 1988).
web: www.fvet.edu.uy/DNA
PROTEÍNAS EN LA NUTRICIÓN DE RUMIANTES
Introducción
Degradación de las mn en el rumen
Métodos de estudio
Factores que la afectan
Digestión de las MN que llegan a intestino
Métodos de estudio
Factores que la afectan
Síntesis de proteína microbiana
PROTEÍNA DEL ALIMENTO
PÉPTIDOS
AA
NH3
AA
PROTEÍNA
MICROBIANA
UREA
Utilización de las MN por el rumiante - Introducción
MN QUE LLEGAN AL DUODENO
ENDÓGENAS
MO
NO DEGRADADAS
(DIETA)
Degradación ruminal de las proteínas
Degradación de las MN en el rumen
PROTEÍNAS
proteasas
POLIPÉPTIDOS
Bacterias: 30-50% de la pob.
Exoenzimas
peptidasas
Protozoos
OLIGOPÉPTIDOS
Holotricos
Entodinomorfos
peptidasas
Endoenzimas
AMINOÁCIDOS
desaminasas
NH3
Esqueletos carbonados
AGV ramificados
Butyrivibrio fibrosolvens
Bacteroides ruminicola
Bacteroides amylophilus
Streptococcus bovis
Hongos
Neocallimastix frontalis
Métodos de estudio de la degradación ruminal
Técnica in situ
fotos
Degradabilidad ruminal
Métodos de estudio de la degradación: Técnica in situ
% de desaparición
100
80
Material bolsas
Muestras molidas, cantidad de
material
60
40
A
Hora 0
20
0
0
20
40
Tiempo (horas)
60
80
% de desaparición
100
Vacas: adaptación, alimentación
3 vacas, 2 períodos
80
60
40
Horarios según muestra
cantidad de muestras/tanda
B
20
0
0
20
40
Tiempo (horas)
60
80
Elize
Degradabilidad ruminal
% de desaparición
100
c (ind)
80
b
60
d = a + b (1-e-kd×t)
40
a
20
0
0
c = 100 - (a+b)
20
40
60
80
Tiempo (horas)
Elize
% de desaparición
h pescado
gluten feed
h girasol
h soja
60
80
100
80
60
40
20
0
0
20
40
Tiempo (horas)
Elize
PROTEÍNAS EN LA NUTRICIÓN DE RUMIANTES
Introducción
Degradación de las mn en el rumen
Métodos de estudio
Factores que la afectan
Digestión de las MN que llegan a intestino
Métodos de estudio
Factores que la afectan
Síntesis de proteína microbiana
Tránsito de la digesta en un rumiante
Rumen: compartimento que retiene los alimentos
Tiempo de retención en rumen
Tasa de pasaje
kp
Tránsito digestivo de partículas: condiciona la
degradación
Alimento
Forraje fresco
Forraje seco
Paja
Semilla
kp (%/h)
2.85
2.56
1.95
3.44
TMP (h)
72.1
72.3
86.9
54.1
Cajarville, 1996
kp
Tránsito digestivo de partículas: condiciona la
degradación
Animal
Función
Mantenimiento
Prod. media (2× mant)
Prod alta (>2× mant)
kp
2 %/h
5 %/h
8 %/h
AFRC, 1995
Factores que afectan la degradabilidad
CARACTERÍSTICAS DE LA PROTEÍNA
Solubilidad: facilita adsorción,“Rubisco”, enalces disulfuro
(zeína), asociaciones a la FND o FAD, presencia de taninos
(lotus, sorgos)
TRATAMIENTOS SOBRE LOS ALIMENTOS
Tratamientos térmicos
Tratamientos químicos (aldehídos, “coating”, taninos, etc)
Tratamientos post-cosecha
TRÁNSITO DIGESTIVO
Tamaño de partícula, densidad
Nivel de ingestión
Utilización de las MN por el rumiante – Degradación ruminal
Efecto del tratamiento térmico sobre la degradación ruminal de la
proteína de soja
120
% N desaparecido
100
80
60
40
20
0
0
5
10
15
20
25
30
h incubación
HS
S
S132
S149
Stern et al , 1985
Utilización de las MN por el rumiante – Degradación ruminal
Efecto del premarchitado y del ensilado de praderas en la degradación
del N
% N desaparecido
85
75
65
55
45
35
0
20
40
60
horas
Fresco
Premarchitado
Silo
Repetto et al. 2002
Degradación in situ de N de praderas. Cada punto representa la
media de 7 pasturas × 3 vacas × 2 repeticiones
disappearance (%)
90
80
70
60
50
40
30
20
10
0
0
20
40
60
80
ruminal incubation (hours)
F
W
S
Repetto et al., 2005
% de desaparición
h pescado
gluten feed
h girasol
h soja
60
80
100
80
60
40
20
0
0
20
40
Tiempo (horas)
Elize
Fraccionamiento de la proteína en el laboratorio
NNP
PB
(N×6.26)
PSOL
NDIN-ADIN
ADIN
NDIN
PROTEÍNA DEL ALIMENTO
PÉPTIDOS
AA
NH3
AA
PROTEÍNA
MICROBIANA
UREA
PROTEÍNAS EN LA NUTRICIÓN DE RUMIANTES
Introducción
Degradación de las mn en el rumen
Métodos de estudio
Factores que la afectan
Digestión de las MN que llegan a intestino
Métodos de estudio
Factores que la afectan
Síntesis de proteína microbiana
Digestión intestinal de las
proteínas
cánulas ruminales y duodenales
Digestibilidad intestinal: bolsas móviles
Hvelplund, 1985
Incubación en rumen: 16 horas
HCl + pepsina
PASAJE POR INTESTINO
Recogida en heces
Incubación en rumen 16 hs (tiempo fijo)
- Congelación, lavado y secado por 48 hs a 65 ºC
- Análisis de materia seca (MS)
- Confección de las bolsas intestinales :
Material : poliamida
Diámetro de poro : 9 a 22 µm
Tamaño : 2 x 3,5 cm
- Llenado con 0.2 g de muestra (residuos de rumen)
- Incubación en solución :
pepsina ( 3 g/l ) y HCL 0.1 N
pH 2 a 38.5 ºC durante 2.5 hs
- Colocación de bolsas por cánula duodenal
- Colección de las bolsas en heces
- Congelado, lavado y secado por 48 hs a 65 ºC
- Análisis de materia seca (MS), materia orgánica (MO),
proteína bruta (PB)
Digestibilidad intestinal de la PB de distintos alimentos medida por
bolsas móviles
100
90
80
70
60
50
40
30
20
10
0
HS
HG
HC
TR
SG
HA
MO
Calsamiglia et al., 1994
Digestibilidad intestinal de AA esenciales
90
digestibilidad intestinal
80
70
60
50
40
30
20
10
0
Treo
Cis
Met
ALIM
Lis
MO
Adaptado de Toullec y Lallès, 1995
Digestibilidad aparente y real de la proteína no degradada
en rumen de forrajes deshidratados en ratas
Temperatura
123ºC
153ºC
P
D Aparente
85.7
88.0
0.029
D Real
90.5
92.6
0.013
Kowalski et al., 1993
Digestión intestinal aparente (medida in vivo) en el intestino delgado de
rumiantes
NNA
Vacas
lactando
Vacas secas
ovinos
AA
Vacas
lactando
Vacas secas
ovinos
n
media
SD
12
0.65
0.04
17
29
0.66
0.64
0.04
0.06
21
0.69
0.05
11
22
0.62
0.70
0.06
0.06
Adaptado de Tamminga y Chen, 2000
Síntesis de proteína microbiana
en el rumen
Utilización de las MN por el rumiante – Síntesis de proteína microbiana
Síntesis de proteína microbiana
Participación de la proteína microbiana en las necesidades totales
según la eficiencia de síntesis (vaca de 25 litros)
98
73
49
20
30
APORTE MICROBIANO
40
NECESIDADES
Adaptado de Stern et al., 1994
Utilización de las MN por el rumiante – Síntesis de proteína microbiana
Contenido en metionina y lisina de algunos alimentos
(adaptado de Vérité y Peyraud, 1990)
% LISINA
% METIONINA
músculo
microorganismo
s
pescado
pasto
afrechillo
soja
Utilización de las MN por el rumiante – Síntesis de proteína microbiana
FACTORES QUE AFECTAN LA MAGNITUD DE LA SÍNTESIS
• DISPONIBILIDAD DE N: depende de la degradabilidad de las MN en rumen
AA, péptidos
NH3 principal (indispensable celulolíticas, origen del 80%
de la prot. bacteriana)
• CANTIDAD DE ENERGÍA DISPONIBLE EN EL RUMEN
MOF: 3/4 de la MOD
Utilización de las MN por el rumiante – Síntesis de proteína microbiana
Concentración de NH3 ruminal necesaria para maximizar la síntesis de proteína
microbiana según distintos autores
Concentración de NH3 (mg/100 ml) Autor
5–8
9
23.5
29
Ortega et al., 1979
Allison, 1970
Annison, 1975
Nikolic et al., 1975
Satter y Slyter, 1974
Okorie et al., 1977
Hume et al., 1970
Mehrez et al., 1977
Miller, 1973
NH3 del 5 al 20 mg/100 ml = crecim. óptimo
PREGUNTAS PARA DISCUTIR LOS RESULTADOS
EXPERIMENTALES MOSTRADOS EN EL GRAFICO
• ¿Cómo caracterizarías la curva de amoníaco en cuanto a:
estabilidad?
niveles medios?
picos máximos y mínimos?
• ¿Cómo es la curva con respecto a las necesidades de los MO?
• ¿Qué relación observas entre la curva de pH y la de amoníaco?
• ¿Encuentras alguna explicación?
Utilización de las MN por el rumiante – Síntesis de proteína microbiana
Dinámica del pH y concentración de NH3 ruminal en vacas a pastoreo
30
6,8
6,6
25
6,4
6,2
6,0
15
5,8
10
pH
NH3
20
5,6
5,4
5
5,2
0
5,0
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24
hora
NH3 media
pH medio
NH3 media general = 20.1 mg/100 ml
Cajarville et al., 2006
Dinámica de las concentraciones de NH3 ruminal de vacas
pastoreando praderas suplementadas con granos
35
20.1 mg/100 ml
N-NH3 (mg/100ml)
30
25
20
15
10
5
0
0
2
4
6
8
10
12
14
16
18
20
22
24
hour
wheat
corn
Cajarville et al., 2005
Utilización de las MN por el rumiante – Síntesis de proteína microbiana
FACTORES QUE AFECTAN LA MAGNITUD DE LA SÍNTESIS
• DISPONIBILIDAD DE N
AA, péptidos
NH3 principal (indispensable celulolíticas, origen del 80% de
la prot. bacteriana)
• CANTIDAD DE ENERGÍA DISPONIBLE EN EL RUMEN
MOF: 3/4 de la MOD
Componentes intracelulares
azúcares
almidones
proteínas degradables
Componentes de la pared celular
fracción degradable
Utilización de las MN por el rumiante – Síntesis de proteína microbiana
población media sintetizada = 145 g PB/kg de MOF
No participan de la MOF:
• materias grasas
• productos de la fermentación (ensilados)
• almidón no degradado
Utilización de las MN por el rumiante – Síntesis de proteína microbiana
PASTURA
HENO
SILO
32 g N Microbiano/kg MOF
23 g N Microbiano/kg MOF
Causas:
Fermentación de azúcares
Asincronía en la disponibilidad de E y N
ARC, 1984
Utilización de las MN por el rumiante – Síntesis de proteína microbiana
Métodos de estudio de la síntesis de proteína microbiana
MÉTODOS DIRECTOS: 2 pasos
Flujo total de proteína en duodeno:
cánulas reentrantes
marcadores de flujo (doble marcaje)
Diferenciación de proteína microbiana: marcadores microbianos
internos: DAPA, ácidos nucleicos, AEP en protozoos
externos: 15N, 35S
MÉTODOS INDIRECTOS:
Alantoína en orina
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