PRACTICA 3 VERIFICACION DE CALIDAD DE CULTIVOS LACTICOS I.- Cultivos lácticos. Los iniciadores bacterianos de aplicación en productos lácteos por la producción del ácido láctico, en una amplitud de temperatura de 10 a 50°C, puede provocar la coagulación ácida al llegar a pH de 4.6 (punto isoeléctrico de la caseína), pero que en el sustrato resultan modificaciones positivas como: - Sabor ácido. - Inhibición de organismos dañinos. - Gelificación de la leche - Reducción de riesgos higiénicos. - Acrecienta la sinéresis. - Reducción del contenido de lactosa. - Formación de aroma, es decir diacetilo, acetoina, acetaldehído. - Producción de gas requerida para la formación de “ojos” en los quesos. - Proteólisis requerida en la maduración de los quesos y para el crecimiento de las bacterias de la leche. - Crecimiento de Propionibacterias y la producción de ácido propiónico. - Formación de pigmentos por crecimiento específico de ciertas especies lácticas. II.- Control de la actividad de los cultivos lácticos La actividad de los cultivos lácticos es muy importante en los procesos lácteos ya que de ésta depende en gran parte el tiempo de proceso y la detección de contaminantes en lo que constituirán los inóculos para la leche. Además muchas fallas de arranque, iniciación o coagulación pueden evitarse si se verifica antes la actividad de los cultivos, especialmente en la industria quesera y de leches acidificadas. Para conocer la actividad en forma sencilla, se utilizan algunas pruebas como las determinaciones de: 2.1.- producción de acidez que según el cultivo puede variar ligeramente los valores de 0.9 a 1.1% de acido láctico para yogur y de 0.7 a 0.8% para cultivos de kéfir, en cambio las temperaturas de trabajo serán de 35 a 37°C para los mesófilicos y de 45 a 48°C para los termofílicos. 2.2.- reducción del azul de metileno Se determina la actividad de acuerdo al tiempo en que se decoloran las dos terceras partes inferiores de la mezcla contenida en el tubo. * actividad muy buena con tiempos de decoloración entre 0 a 30 minutos. * actividad buena con tiempos de decoloración entre 30 a 60 minutos. * actividad entre moderada a mala con tiempos de decoloración entre 60 a 90 minutos. 2.3.- producción de aroma se verifica de presencia del diacetilo o de la acetoína. 2.4.- contaminantes indeseables como microorganismos productores de gas. III.- Materiales y métodos 3.1. Materiales: Muestras: leche fresca fluida, cultivos lácticos para yogur: líquido fresco, liofilizado; cultivos de kéfir fresco o seco. Materiales y equipos de laboratorio: - tubos de ensayo 10x15 - pipeta de 1,2, 5, y 10 ml - frascos de vidrio c/tapa 100 y 200 ml - matraces tipo erlenmeyers - cápsula de porcelana incubador a medio ambiente y otro a 42-45°C - baño maría a 45 a 48°C - balanza analítica - mechero o cocinilla eléctrica - equipo de titulación - fenolftaleína - azul de metileno 5 mg/ml - solución NaOH 0.1N - NaOH 30% - agua oxigenada 20 vol - agua destilada - agua potable Material para el personal - gorro - tapabocas - guantes - mandil blanco 3.2. Métodos Producción de acidez En un tubo de ensayo conteniendo 9 ml de leche descremada libre de inhibidores y esterilizada, se inocula 1 ml de cultivo y se incuba (35 a 37°C mesofílicos o 45 a 48 °C termofílicos) determinando el tiempo en que se forma el gel y evaluando la acidez lograda. Reducción del azul de metileno En un tubo de ensayo se agrega 1 ml de solución de azul de metileno (5mg/ml) y 10 ml de cultivo, se mezcla bien y se incuba en baño maría a 37°C o 48°C en la oscuridad. Se determina la actividad de acuerdo al tiempo en que se decoloran las dos terceras partes inferiores de la mezcla contenida en el tubo. La solución de azul de metileno se prepara diariamente utilizando agua destilada hervida y manteniéndola en la oscuridad. Producción de aroma Se mezclan en una cápsula de porcelana blanca 2.3 ml de cultivo láctico y 2.5 ml de hidróxido de sodio al 30%, manteniéndose en reposo por dos horas. La coloración amarilla significa la presencia de aromatizante diacetilo; la coloración rosa, carmín o rojo naranja la de acetil metil carbinol o acetoína. Contaminación con bacterias productoras de gas Se diluye 1 ml de cultivo láctico con 10 ml de agua potable, y se mezcla con 1 ml de agua oxigenada (de 20 volúmenes) en presencia de luz. El desprendimiento de burbujas de gases móviles indica la contaminación del cultivo por bacterias extrañas. HOJA DE REPORTE DE LOS CONTROLES FISICOQUÍMICOS Y ORGANOLÉPTICOS DE MUESTRAS DE LECHE, CULTIVOS Y REPIQUES MUESTRAS: CODIFICACION: ANALISTA: FECHA: HORA: MUESTRA LECHE MUESTRA STARTER MUESTRA REPIQUE ACIDEZ (°D) DENSIDAD (g/ml) COLOR* OLOR* SABOR* AROMATIZANTE VISCOSIDAD (s) REDUCCION AZUL METILENO (h) CONTAMINANTES PRODUCTORES GAS CALIFICACION CULTIVO __________________ ANALISTA ________________ SUPERVISOR __________________ JEFE CONTROL CALIDAD