PRÁCTICA 3.- ANÁLISIS DE RESIDUOS DE PLAGUICIDAS EN HOJAS METODO QuEChERS 1. INTRODUCCIÓN Este método está diseñado para la determinación por cromatografía de gases de residuos de plaguicidas en hojas. Los plaguicidas se extraen con Acetonitrilo y para la determinación y cuantificación de sus residuos se utiliza la cromatografía de gases. 2. MATERIAL Y APARATOS - Tubo centrifuga Falcon de 50 ml. Matraz de fondo redondo de 50ml. Molino material seco. Balanza analítica. Dispensador de disolvente de 15 ml y botella de 2.5 L Centrífuga para tubos Falcon de 50 ml Minicentrífuga para tubos Falcon de 50 ml. Baño-rotavapor. Agitador Vortex (opcional). Espátulas. Horno mufla Cápsulas de porcelana. Pipetas automáticas. Pipetas pasteur. Embudos. Viales de 2 ml con tapón de rosca y septum para inyector automático. Equipos de cromatografía. 3. REACTIVOS - Sulfato magnésico anhidro >98% (MgSO4) PAR PSA (Varian referencia 12213024) Acido acético glacial (HAc) Grado Reactivo. Acetonitrilo (MeCN) PAR con 1% HAc en volumen. Disolución 50 ng/µl de Trifenilfosfato (TPP), en acetonitrilo. Citrato sódico tribasico PAR. Citrato sódico dibásico sexquihidrato - Cloruro sódico (ClNa) PAR Ciclohexano PAR. Disoluciones de patrones de plaguicidas. 4. METODOLOGÍA 4.1. Preparación del Sulfato magnésico anhidro Calentar el Sulfato magnésico anhidro a 500 ºC durante 5 horas en la mufla previo a su uso para eliminar los ftalatos. 4.2. Preparación de la muestra Picar la muestra con molino para material seco y homogeneizarla, guardándola en bote boca ancha de PP de 250 ml. 4.3. Extracción - - - Pesar en tubo Falcon de 50 ml 2 g de muestra. Añadir 10 ml de Acetonitrilo al 1% en HAc, 4 g de MgSO4 activado, 1 g de ClNa, 1 g de Citrato sódico tribasico y 1,5 g de Citrato sódico dibásico sexquihidrato. Tapar el tubo y agitar manualmente durante 30 s. Introducirlos en la centrífuga y centrifugar durante 5 min a 5000 rpm. Se pipetean 2,5 ml de disolvente sobre un nuevo tubo Falcon en el que previamente se han pesado 0,375 g de MgSO4 y 0,063 g de PSA, centrifugando en la mini centrífuga durante 2 min a 5000 rpm. Se toma una alícuota de 1 ml del sobrenadante en un tubo de ensayo y se evapora a sequedad en baño Turbovac. 4.4. Determinación cromatográfica - 5 Se disuelve el residuo con 2 ml de Ciclohexano:Acetato de etilo (9:1) en baño ultrasonidos durante 10 minutos, y se pasa mediante pipeta a un vial de tapón de rosca de 2 ml de inyector automático para su análisis por cromatografía. DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACIÓN Inyectar el extracto y un multipatrón de 0.5 ppm (mg/l) en el CG-MS/MS empleando el Método Practicas. Una vez identificado un compuesto se cuantifica mediante integración del área de éste, comparándola con la de su patrón correspondiente o curvas de integración del método. Los resultados se expresan en mg por Kg o (ppm), que expresan los miligramos del plaguicida contenidos en cada Kg de hojas. La ecuación a utilizar durante la cuantificación es: Am Vip Cp Vf C= Ap Vim P donde: C= Concentración del plaguicida en la muestra (ppm) Am = Area del pico del plaguicida en la muestra Ap = Area del pico del plaguicida en el patrón Vip = Volumen de inyección del patrón (L). Vim = Volumen de inyección de la muestra (L). Cp = Concentración del plaguicida en la disolución patrón (ppm) Vf = Volumen de aforo final (mL). P = Peso, en g, de la muestra. 6 RESULTADOS EXPERIMENTALES PLAGUICIDA DIMETOATO TERBUTIAZINA OXIFLUORFEN DIAZINON METIDATION IDENTIFICADO CONCENTRACION ppm Nota: Adjuntar los cromatogramas obtenidos. 7 CONCLUSIONES A tener en cuenta la información entregada. 8 REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS - Fast and easy multiresidue method employing acetonitrile extraccion/partitioning and “dispersive solid-phase extration” for the determination of pesticide residues in produce. ANASTASSIADES ET AL.: Journal of AOAC International Vol. 86, Nª 2, 2003. - Charles R. Worthing, B.Sc., M.A., D Phil. “The Pesticide Manual”.The British Crop Protection Council.