BD Pseudomonas Agar P

INSTRUCCIONES DE USO –
MEDIOS EN PLACA LISTOS
PARA USAR
PA-257018.02
Rev.: Junio de 2003
BD Pseudomonas Agar P
USO PREVISTO
BD Pseudomonas Agar P (agar P BD para Pseudomonas) se utiliza para la diferenciación de
Pseudomonas aeruginosa a partir de otras pseudomonas basándose en la producción de
piocianina.
PRINCIPIOS Y EXPLICACION DEL PROCEDIMIENTO
Método microbiológico.
BD Pseudomonas Agar P, diseñado conforme a la fórmula descrita por King, Ward y Raney,
ha sido modificado para cumplir con las especificaciones de USP1,2.
En BD Pseudomonas Agar P, Bacto Peptone proporciona el carbono y el nitrógeno necesarios
para el crecimiento bacteriano. Favorece la producción de piocianina al añadirse cloruro de
magnesio y sulfato de potasio, e inhibe la formación de fluoresceína. Ambos pigmentos se
difunden desde las colonias de Pseudomonas al medio en el que crecen. Algunas cepas de
Pseudomonas elaboran ambos pigmentos, mientras que otras producen sólo uno. La piocianina
en este medio es de color azul. El glicerol se utiliza como fuente de energía y también favorece
la producción de piocianina.
Pseudomonas Agar P se menciona en el Bacteriological Analytical Manual de la FDA3. No está
diseñado para ser utilizado como medio de aislamiento para patógenos a partir de muestras
clínicas, pero puede usarse para la diferenciación de aislados obtenidos de muestras clínicas en
otros medios.
REACTIVOS
BD Pseudomonas Agar P
Fórmula* por litro de agua purificada
Bacto Peptone
20,0 g
Cloruro de magnesio
1,4
Sulfato de potasio
10,0
Glicerol
10,0
Bacto Agar
15,0
pH 7,0 ± 0,2
*Ajustada y/o suplementada para satisfacer los criterios de rendimiento.
PRECAUCIONES
. Solamente para uso profesional.
No utilizar las placas si muestran evidencia de contaminación microbiana, decoloración,
deshidratación, grietas o cualquier otro signo de deterioro.
Consultar los procedimientos de manipulación aséptica, riesgos biológicos y desecho del
producto usado en el documento INSTRUCCIONES GENERALES DE USO.
ALMACENAMIENTO Y VIDA UTIL
Al recibir las placas, almacenarlas en un lugar oscuro a una temperatura de 2 – 8 °C, en su
envase original hasta momentos antes de su utilización. Evitar la congelación y el
sobrecalentamiento. Las placas pueden inocularse hasta la fecha de caducidad (véase la
etiqueta del paquete) e incubarse durante los períodos de incubación recomendados.
Las placas de pilas abiertas de 10 unidades almacenadas en un área limpia a una temperatura
de 2 – 8 °C pueden utilizarse durante una semana.
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CONTROL DE CALIDAD DEL USUARIO
Inocular muestras representativas con las cepas siguientes (para obtener los detalles, véase el
documento INSTRUCCIONES GENERALES DE USO). Incubar a 35 ± 2 °C durante 18 – 24 h.
Examinar el crecimiento y las colonias bajo luz ultravioleta de 254 – 260 nm (lámpara de Wood)4.
Cepa de prueba
Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 o
ATCC 9027
Burkholderia cepacia ATCC 25416
Stenotrophomonas maltophilia ATCC 13637
Escherichia coli ATCC 25922
Sin inocular
Resultados del crecimiento
Colonias azul verdosas, pigmento verdoso que
se difunde en el medio circundante;
fluorescencia bajo luz UV
Colonias de color entre beige y verde claro; sin
pigmento; sin fluorescencia bajo luz UV
Colonias de color beige; sin pigmento; sin
fluorescencia bajo luz UV
Colonias de color beige; sin pigmento; sin
fluorescencia bajo luz UV
Ambar claro a medio, con una leve
opalescencia
PROCEDIMIENTO
Materiales suministrados
BD Pseudomonas Agar P (90 placas Stacker de 90 mm). Controladas microbiológicamente.
Material no suministrado
Medios de cultivo auxiliar, reactivos y el equipo de laboratorio que se requiera.
Tipos de muestras
BD Pseudomonas Agar P no está diseñado para ser utilizado como medio de aislamiento de
P. aeruginosa a partir de muestras clínicas, pero puede utilizarse para la diferenciación de
aislados obtenidos de muestras clínicas o materiales no clínicos en otros medios (véase
también CARACTERISTICAS DEL RENDIMIENTO Y LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO).
Procedimiento de análisis
1. Obtener el inóculo de un cultivo puro de 18 – 24 h de la cepa de prueba.
2. Inocular las placas extendiendo la muestra en la superficie.
3. Incubar a 35 ± 2 °C durante 18 – 24 h.
Resultados
Examinar el crecimiento y las colonias bajo luz ultravioleta de 254–260 nm (lámpara de Wood) 4.
Tener cuidado al utilizar la iluminación UV porque podría tener un efecto bactericida.
Asegurarse de que haya buen crecimiento antes de colocar el cultivo bajo luz UV. Un resultado
positivo se indica con un pigmento azul que se difunde en el agar.
CARACTERISTICAS DEL RENDIMIENTO Y LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO
BD Pseudomonas Agar P es un medio estándar de diferenciación de Pseudomonas
aeruginosa de otras pseudomonas y organismos relacionados basándose en la producción de
piocina. No debe utilizarse como medio de solución, pero se usa con cultivos puros de cepas
aisladas de materiales clínicos y no clínicos2-4. Una modificación selectiva de este medio es BD
Pseudomonas Isolation Agar, que puede utilizarse para aislamiento y diferenciación.
De vez en cuando, se encuentran cultivos de Pseudomonas en BD Pseudomonas Agar P que
producen sólo pequeñas cantidades de pigmento en el medio. Si sucede esto, aparece un color
azul verdoso en el medio. En este caso, la confirmación de la presencia de piocianina puede
realizarse mediante la extracción con cloroformo (CHCl3)4.
La formación de colonias no pigmentadas no descarta por completo un aislado de
Pseudomonas aeruginosa. Por tanto, las colonias no pigmentadas en este medio deben
someterse a una identificación bioquímica completa5.
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Una cepa de Pseudomonas productora de piocianina también produce fluoresceína. Por tanto,
debe diferenciarse de otras pseudomonas fluorescentes simples mediante otros métodos. La
temperatura de incubación puede ser un factor determinante, dado que la mayoría de las demás
cepas fluorescentes no crecen a 35 °C. En cambio, crecen a 25 – 30 °C4.
REFERENCIAS
1. King, E. O., M. K. Ward, and D. E. Raney. 1954. Two simple media for the demonstration of
pyocyanin and fluorescein. J. Lab. Clin. Med. 44:301.
2. The United States Pharmacopeia. 1995. The United States Pharmacopeia, 23rd ed. United
States Pharmacopeial Convention, Rockville, MD, USA.
3. Bacteriological Analytical Manual, 8th edition, Revision A. 1998. AOAC International,
Gaithersburg, MD, USA.
4. MacFaddin, J. F. 1985. Media for isolation-cultivation-identification- maintenance of medical
bacteria, vol. 1. Williams & Wilkins, Baltimore, MD, USA.
5. Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). 2003.
Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C.
ENVASE Y DISPONIBILIDAD
BD Pseudomonas Agar P
Nº de cat. 257018
Medios en placa listos para usar, 20 placas
INFORMACIÓN ADICIONAL
Para obtener más información, diríjase a su representante local de BD.
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Tullastrasse 8 – 12
D-69126 Heidelberg/Germany
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 2003 Becton, Dickinson and Company
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