N Antisera to Human Coagulation Factors and C1 Inhibitor

N Antisera to Human Coagulation Factors and C1 Inhibitor
Intended Use
In vitro diagnostic reagents for the quantitative determination of coagulation factors (fibrinogen, antithrombin III and plasminogen) in human plasma and C1 Inhibitor (C1-inactivator, C1-esterase inhibitor)
in human plasma and serum using the BN* Systems.
Summary and Explanation
Elevated concentrations of fibrinogen in plasma are to be expected in inflammatory processes, after major
trauma or surgery (“acute-phase protein”), and also occur with metastasizing tumours. Diminished plasma
levels of fibrinogen can occur in consumption coagulopathies, e.g. DIC (disseminated intravascular coagulation), primary hyperfibrinolysis, hepatic insufficiency and genetic deficiency. Epidemiological studies
have shown that elevated plasma levels of fibrinogen are associated with an increased risk of arteriosclerosis (1). Diminished levels of antithrombin III are found in DIC, sepsis with DIC, recurrent venous thromboses of the leg, hepatic insufficiency, nephroses, genetic deficiency and in patients receiving oral oestrogenbased contraceptives. Diminished concentrations of antithrombin III involve a higher risk of thromboembolic complications (2).
Elevated plasminogen levels may occur in patients with prostate carcinoma, while diminished values can
be expected to occur in cases of hepatic insufficiency, in the respiratory distress syndrome of the newborn
and in therapeutic fibrinolysis treatment. In general, the immunochemical assay can also provide valuable
additional information when performed in conjunction with measurements of the activity of the individual
coagulation factors (e.g. in substitution or oral anticoagulant therapy). Estimation of the risk of arteriosclerosis via the assay of fibrinogen is possible by immunochemical methods (3).
C1 Inhibitor is an important regulator of the classical pathway of complement activation; it inhibits the
activity of the serine proteases C1s and C1r (4). Measurement of C1 Inhibitor aids in the diagnosis of
hereditary angioneurotic edema (increased blood vessel permeability causing swelling of tissues) and a
rare form of angioedema associated with lymphoma (lymph node cancer). Genetic deficiency of C1 Inhibitor leads to angioneurotic oedema (HANE) (5, 6). Acquired C1 Inhibitor deficiency occurs in diseases of the
B-cell system, which may be associated with depressed C1 Inhibitor levels, e.g. chronic lymphatic leukemia, multiple myeloma and other malignant lymphomas (5).
Principle of the Method
In an immunochemical reaction, the proteins contained in the human plasma or serum sample form
immune complexes with specific antibodies. These complexes scatter a beam of light passed through
the sample. The intensity of the scattered light is proportional to the concentration of the relevant protein
in the sample. The result is evaluated by comparison with a standard of known concentration.
Reagents
Materials provided
N Antiserum to Human Fibrinogen, Code No. OSCA or
N Antiserum to Human Antithrombin III, Code No. OSAY or
N Antiserum to Human Plasminogen, Code No. OSCB or
N Antiserum to Human C1 Inhibitor, Code No. OQEY
1 vial each, containing 2 mL
Composition
N Antisera are liquid animal sera and are produced by immunization of rabbits with highly purified
human fibrinogen, antithrombin III, plasminogen, or C1 Inhibitor. Labile components are removed from
the antisera by a special procedure. Microbial contamination is essentially excluded by filtration and
addition of sodium azide as a preservative (< 1 g/L). After solid phase immunoadsorption, the purified,
specific antisera are specially tested and adjusted for optimal suitability for use on the BN* Systems.
The antibody titers (T) are determined by radial immunodiffusion and are printed on the vial labels. The
titers indicate the quantity of antigen in mg which will be precipitated in an agarose gel by 1 mL of the
corresponding antiserum.
Warnings and Precautions
1. For in vitro diagnostic use.
2. Reagents containing sodium azide must be handled with due caution:
Do not ingest or allow to contact skin or mucous membranes! Sodium azide can form explosive
azides when contacting heavy metals such as copper or lead.
Preparation of Reagents
The N Antisera are ready-for-use as supplied and require no additional preparation.
Storage and Stability
Shelf life at +2 to +8 °C:
see expiration date given on the label;
Stability once opened:
four weeks if stored at +2 to +8 °C securely capped immediately after each use and contamination
(e.g., by microorganisms) is precluded;
During storage, N Antisera can develop precipitates or turbidity which are not caused by microbial contamination and which do not affect their activity. In such cases, the antiserum should be filtered prior to
use. Disposable filters with a pore size of 0.45 µm are suitable for this purpose. Do not freeze.
On-board stability:
five days at 8 each hours or a comparable period of time (maximum 40 hours).
BN* II System: on-board stability may be extended by the use of BN* II Evaporation Stoppers (Code
No. OVLE) as given in the Instruction Manual;
BN ProSpec® System: on-board stability as given in the Instruction Manual.
Materials required but not provided
BN* System
N Protein Standard PY (human), Code No. OUID
N/T Protein Control PY (human), Code No. OWSY
N Reaction Buffer, Code No. OUMS
N Diluent, Code No. OUMT
N Supplementary Reagent/Precipitation, Code No OUMU
BN* II Evaporation Stoppers (optional), Code No. OVLE
Other materials and supplies as described in the respective BN* System Instruction Manual.
Specimens
Suitable samples are both EDTA and citrated human plasma for testing the coagulation factors. C1
Inhibitor can be determined in citrated plasma and human serum. The samples should be as fresh as
possible (stored no more than 8 days at +2 to +8 °C) or stored deep-frozen. Samples can be stored at
below -20 °C for up to 1 year if they are frozen within 24 hours after collection and if repeated freezethaw cycles are avoided. Lipemic samples, or frozen samples which became turbid after thawing, must
be clarified by centrifugation (10 minutes at approximately 15,000 x g) prior to testing. Citrated plasma
is diluted on average by 17% due to the addition of the citrate solution. In the case of plasma from
patients receiving heparin therapy, no interference is to be expected.
Procedure
Notes
1. Consult your BN* System Instruction Manual for details regarding operation of the instrument.
2. The reagents must not be used beyond the expiry date.
3. Allow reagents and samples to equilibrate to room temperature (+15 to +25 °C) before use on the
BN*A/BN* 100 System. This equilibration step is not required prior to testing on the BN* II or BN
ProSpec® System.
Assay Protocols for BN* Systems
The assay protocols are given in the Instruction Manual and software of the instrument. All steps are
performed automatically by the system.
Establishment of the Reference Curve
Reference curves are constructed by multi-point calibration. Serial dilutions of N Protein Standard PY
are automatically prepared by the instrument using N Diluent.
The reference curves can be used for as long as the accuracy control, e.g. N/T Protein Control PY, is
reproduced within their respective confidence intervals. If a different lot of antiserum is used, a new
reference curve must be recorded.
OQEY G09 E0540 (381) H
1
Edition May 2001
Assay of Specimens
Samples are automatically diluted 1:5 (antithrombin III, plasminogen and C1 Inhibitor) or 1:20 (fibrinogen) with N Diluent and measured. If the readings obtained are outside the measuring range, the assay
can be repeated using a higher (antithrombin III, plasminogen, C1 Inhibitor and fibrinogen) or lower
(fibrinogen) dilution of the sample. Refer to BN* System’s Instruction Manual for information on repeat
measurements using other dilutions.
Internal Quality Control
Assay N/T Protein Control PY after each establishment of a reference curve, the first opening of an
antiserum vial as well as with each run of plasma or serum samples. The control is assayed and
evaluated as for patient samples. The assigned values and confidence intervals are listed in the Table
of Assigned Values for the respective control.
Results
The results are evaluated automatically by means of a logit-log function.
Limitations of the Procedure
Turbidity and particles in the sample may interfere with the determination. Therefore, samples containing
particles must be centrifuged prior to testing.
The N Antiserum to Human Fibrinogen also detects fibrinogen degradation products so that the immunochemical assay of fibrinogen should not be used on samples containing such degradation products,
e.g. samples from patients undergoing fibrinolytic therapy (7).
Due to technical manufacturing reasons and/or aged samples, the results obtained for control samples
and interlaboratory survey samples may differ depending on the assay method used. It may therefore
be necessary to assess these results in relation to method-specific target values.
Expected Values
The following reference intervals apply for citrated plasma samples from healthy adults:
Protein
Fibrinogen (8)
Antithrombin III (9)
Plasminogen (10)
2.5th - 97.5th Percentile
1.80 - 3.50 g/L
0.19 - 0.31 g/L
0.06 - 0.25 g/L
C1 Inhibitor: Citrated plasma samples from 399 healthy Central European donors were evaluated. The
reference interval (2.5th to 97.5th percentile) was established to be 0.18 - 0.32 g/L. For N Antiserum to
C1 Inhibitor the evaluation of 370 serum samples yielded a reference interval (2.5th to 97.5th percentile)
of 0.21 - 0.39 g/L.
Nevertheless, each laboratory should determine its own reference intervals since values may vary
depending on the population studied.
Specific Performance Characteristics
Sensitivity
The sensitivity of the assay is established by the lower limit of the reference curve and depends therefore upon the concentrations of the proteins in the N Protein Standard PY. Typical measuring ranges
are given in BN* System’s Instruction Manual.
Specificity
The N Antisera to Human Antithrombin III, Plasminogen and C1 Inhibitor are specific for the respective
protein. The N Antiserum to Human Fibrinogen also detects fibrinogen degradation products (7).
Precision
The following coefficients of variation (CV) were obtained with N Antisera to Human Coagulation Factors and C1 Inhibitor on the BN* System:
Protein
n
Intra-assay
Mean Value
[g/L]
CV
[%]
n
Inter-assay
Mean Value
[g/L]
CV
[%]
Fibrinogen
Antithrombin III
Plasminogen
C1 Inhibitor
30
29
30
30
2.03
0.22
0.094
0.23
2.7
1.5
1.5
1.5
10
10
10
10
2.06
0.21
0.095
0.24
2.6
1.3
3.5
1.6
Method Comparison
Plasma samples were assayed with N Antisera to Human Coagulation Factors and C1 Inhibitor and
serum samples were assayed with N Antiserum to Human C1 Inhibitor on the BN* System (y) and radial
immunodiffusion (x) (Partigen**). Correlation of the results yielded the following data:
Protein
Fibrinogen
Antithrombin III
Plasminogen
C1 Inhibitor
C1 Inhibitor
Number of
Samples
28
30
29
50 plasmas
50 serum samples
Linear Regression
y (BN*) = 1.04 x (RID) + 0.07 g/L
y (BN*) = 0.88 x (RID) + 0.03 g/L
y (BN*) = 0.79 x (RID) + 0.03 g/L
y (BN*) = 0.89 x (RID) + 0.03 g/L
y (BN*) = 0.98 x (RID) + 0.02 g/L
Coefficient
of Correlation
0.99
0.90
0.92
0.95
0.96
Note
The values cited for specific performance characteristics of the test represent typical results and are not
to be regarded as specifications for the N Antiserum to Human Fibrinogen, Antithrombin III, Plasminogen or C1 Inhibitor.
Bibliography
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TH-Books Verlagsgesellschaft, 1998: 794-806.
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Science 1965; 148: 957-58.
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9.Hellio D, Schilliger O, Caces E, et al. Établissement des valeurs de référence de l’ATIII par méthodes de précipitation immunochimique en milieu liquide dans une population francaise.
OPTION/BIO supplément 1994; 121: 5-6.
10.Kraus M. Plasminogen. In: Thomas L, ed. Clinical Laboratory Diagnostics. Frankfurt: TH-Books
Verlagsgesellschaft, 1998: 625-27.
BN ProSpec is a registered trademark of Dade Behring Marburg GmbH in the USA, Germany and other
countries.
* BN is a trademark of Dade Behring Marburg GmbH in the USA.
** Partigen is a registered trademark of Dade Behring Marburg GmbH in Germany and other countries.
Dade Behring Marburg GmbH
Emil-von-Behring-Str. 76
D-35041 Marburg
USA Distributor: Dade Behring Inc.
Newark, DE 19714 U.S.A.
N Antisera gegen HumanGerinnungsfaktoren und C1-Inhibitor
Anwendungsbereich
In-vitro-Diagnostica zur quantitativen Bestimmung von Gerinnungsfaktoren (Fibrinogen, Antithrombin
III, Plasminogen) in Humanplasma und C1-Inhibitor (C1-Inaktivator, C1-Esteraseinhibitor) in Humanplasma und -serum mit den BN* Systemen.
Diagnostische Bedeutung
Erhöhte Konzentrationen von Fibrinogen im Plasma sind bei entzündlichen Prozessen, nach größeren
Traumen oder Operationen (‚Akute Phase-Protein‘) zu erwarten, sie können auch bei metastasierenden
Tumoren auftreten. Eine Erniedrigung des Fibrinogen-Plasmaspiegels kann bei Verbrauchskoagulopathien, z. B. DIC (disseminierte intravasale Gerinnung), primärer Hyperfibrinolyse, Leberinsuffizienz und
genetisch bedingtem Mangel auftreten. Epidemiologische Studien haben gezeigt, daß erhöhte Fibrinogen-Plasmakonzentrationen mit einem erhöhten Arteriosklerose-Risiko einhergehen (1). Eine Antithrombin III-Erniedrigung ist bei DIC, Sepsis mit DIC, rezidivierenden Beinvenenthrombosen, Leberinsuffizienz, Nephrosen, genetisch bedingtem Mangel und bei Einnahme von Kontrazeptiva auf Östrogenbasis zu beobachten. Erniedrigte Antithrombin III-Konzentrationen stellen ein erhöhtes Risiko für
thromboembolische Komplikationen dar (2).
Erhöhte Plasminogen-Spiegel können bei Prostatakarzinom auftreten, während mit erniedrigten Werten
bei Leberinsuffizienz, beim Atemnotsyndrom von Neugeborenen und bei therapeutischer Fibrinolysebehandlung zu rechnen ist. Allgemein kann die immunchemische Bestimmung auch bei zusätzlicher Aktivitätsbestimmung der einzelnen Gerinnungsfaktoren wertvolle Zusatzinformationen (z. B. bei Substitutions- oder oraler Antikoagulantien-Therapie) liefern. Die Bestimmung des Fibrinogens zur Abschätzung
des Arteriosklerose-Risikos ist mit immunchemischen Methoden möglich (3).
C1-Inhibitor ist ein wichtiger Regulator des klassischen Weges der Komplementaktivierung, er hemmt
die Aktivität der Serinproteasen C1s und C1r (4). Die Bestimmung von C1-Inhibitor hilft bei der Diagnose
des hereditären Angioödems (erhöhte Durchlässigkeit der Blutgefäße und dadurch Schwellungen im
Gewebe) sowie des seltenen lymphom-assoziierten Angioödems (Lymphknotenkrebs). Genetisch bedingter Mangel an C1-Inhibitor führt zum angioneurotischen Ödem (HANE) (5, 6). Ein erworbener C1Inhibitor-Mangel tritt bei Erkrankungen des B-Zellsystems auf, die mit einer C1-Inhibitor Erniedrigung
einhergehen können, z. B. chronisch-lymphatische Leukämie, multiples Myelom und andere maligne
Lymphome (5).
Prinzip der Methode
Die im menschlichen Plasma oder Serum enthaltenen Proteine bilden in einer immunchemischen Reaktion mit spezifischen Antikörpern Immunkomplexe, an denen eingestrahltes Licht gestreut wird. Die
Intensität des Streulichts ist abhängig von der Konzentration des jeweiligen Proteins in der Probe. Die
Auswertung erfolgt durch Vergleich mit einem Standard bekannter Konzentration.
Testdurchführung
Hinweise
1. Einzelheiten zur Bedienung der BN* Systeme sind der entsprechenden Bedienungsanleitung zu
entnehmen.
2. Die Reagenzien dürfen nach dem angegebenen Verfalldatum nicht mehr verwendet werden.
3. Reagenzien und Proben sollen vor der Messung am BN*A/BN* 100 System Raumtemperatur (+15
bis +25 °C) erreicht haben. Am BN* II/BN ProSpec® System können auch bei +2 bis +8 °C gelagerte
Reagenzien und Proben direkt zur Bestimmung eingesetzt werden.
Assay-Protokolle an den BN* Systemen
Die Assay-Protokolle sind in der Bedienungsanleitung sowie der Software des jeweiligen Gerätes enthalten. Alle Schritte werden automatisch vom System durchgeführt.
Erstellung der Referenzkurve
Referenzkurven werden über eine Mehrpunktkalibrierung aufgenommen. Für die Erstellung werden
automatisch Verdünnungsreihen des N Protein-Standard PY mit N Diluens hergestellt.
Die Referenzkurven können so lange verwendet werden, wie Richtigkeitskontrollen, z. B. N/T ProteinKontrolle PY, innerhalb der jeweiligen Vertrauensbereiche wiedergefunden wird. Bei Verwendung einer
anderen Antiserum-Charge muß eine neue Referenzkurve aufgenommen werden.
Messung der Patientenproben
Proben werden automatisch 1 : 5 (Antithrombin III, Plasminogen und C1-Inhibitor) bzw. 1 : 20 (Fibrinogen)
mit N Diluens verdünnt und gemessen. Bei Meßwerten, die außerhalb des Meßbereichs liegen, kann die
Messung aus einer höheren (Antithrombin III, Plasminogen und C1-Inhibitor und Fibrinogen) oder einer
niedrigeren Probenverdünnung (Fibrinogen) wiederholt werden. Wiederholungsmessungen aus weiteren
Probenverdünnungen sind in den Bedienungsanleitungen der BN* Systeme beschrieben.
Interne Qualitätskontrolle
Die N/T Protein-Kontrolle PY sollte nach jeder Erstellung einer Referenzkurve, nach erstmaligem Öffnen einer Antiserumabfüllung sowie bei jeder Serie von Plasma- bzw. Serumproben eingesetzt werden. Die Kontrolle wird im Ansatz und bei der Auswertung wie Patientenproben behandelt. Die Sollwerte und Vertrauensbereiche sind der Tabelle der Sollwerte der entsprechenden Kontrolle zu entnehmen.
Berechnung der Analysenergebnisse
Die Auswertung erfolgt automatisch mittels einer Logit-Log-Funktion.
Einschränkungen der Testdurchführung
Trübungen und Partikel in den Proben können die Bestimmung stören. Deshalb sollten Proben, die
Partikel enthalten, vor der Bestimmung zentrifugiert werden.
Das N Antiserum gegen Human-Fibrinogen erfaßt auch Fibrinogen-Spaltprodukte, so daß die immunchemische Fibrinogen-Bestimmung in Proben, die solche Spaltprodukte enthalten, wie z. B. von Patienten unter fibrinolytischer Therapie, nicht angewendet werden sollte (7).
Für Kontroll- und Ringversuchsproben können aufgrund der technischen Herstellung bzw. gealterter
Proben unterschiedliche Ergebnisse in Abhängigkeit von der verwendeten Bestimmungsmethode resultieren. Es kann daher notwendig sein, die Bewertung dieser Ergebnisse an methodenspezifischen
Zielwerten vorzunehmen.
Erwartete Werte
Für Citratplasma gesunder erwachsener Probanden gelten folgende Referenzbereiche:
Reagenzien
Protein
Inhalt der Handelspackung
N Antiserum gegen Human-Fibrinogen, Bestell-Nr. OSCA oder
N Antiserum gegen Human-Antithrombin III, Bestell-Nr. OSAY oder
N Antiserum gegen Human-Plasminogen, Bestell-Nr. OSCB oder
N Antiserum gegen Human-C1-Inhibitor, Bestell-Nr. OQEY
je 1 Flasche mit 2 ml
Zusammensetzung
Die N Antisera sind flüssige, tierische Sera und werden durch Immunisierung von Kaninchen mit hochgereinigtem humanem Fibrinogen, Antithrombin III, Plasminogen bzw. C1-Inhibitor hergestellt. Durch ein
besonderes Stabilisierungsverfahren werden labile Bestandteile aus den Antisera entfernt. Mikrobielle
Verunreinigungen werden durch Filtration und den Zusatz von Natriumazid (< 1 g/l) als Konservierungsmittel weitgehend ausgeschlossen. Die mittels Festphasenimmunadsorption gereinigten, spezifischen
Antisera werden nach besonderer Prüfung so eingestellt, daß eine optimale Eignung für die Verwendung
in den BN* Systemen gewährleistet ist. Die Antikörper-Titer (T) werden in der radialen Immundiffusion
ermittelt und sind auf den Flaschenetiketten ausgedruckt. Sie geben an, wieviel mg des Antigens von 1
ml des jeweiligen Antiserums in einem Agarosegel präzipitiert werden.
Warnungen und Vorsichtsmaßnahmen
1. Nur zur in-vitro-diagnostischen Anwendung.
2. Beim Umgang mit Natriumazid-haltigen In-vitro-Diagnostica ist zu beachten:
Verschlucken und Kontakt mit Haut oder Schleimhäuten vermeiden. Natriumazid kann mit Schwermetallen, wie Kupfer oder Blei, explosive Azide bilden.
Vorbereitung der Reagenzien
Die N Antisera sind gebrauchsfertig und können ohne weitere Vorbehandlung eingesetzt werden.
Haltbarkeit und Lagerungsbedingungen
Lagerungsdauer bei +2 bis +8 °C:
die Haltbarkeit ist auf dem Etikett angegeben;
Stabilität nach Öffnen:
4 Wochen, sofern unmittelbar nach Gebrauch wieder dicht verschlossen bei +2 bis +8 °C gelagert und
eine Kontamination (z. B. durch Mikroorganismen) vermieden wird;
N Antisera können bei Lagerung Ausflockungen oder Trübungen zeigen, die nicht durch mikrobielle
Kontamination verursacht sind und die die Aktivität in keiner Weise beeinträchtigen. In solchen Fällen
sollten die Antisera vor Gebrauch filtriert werden. Dazu eignen sich Einwegfilter mit einem Porendurchmesser von 0,45 µm. Die Reagenzien dürfen nicht eingefroren werden.
Stabilität auf den BN* Systemen:
5 Tage mit jeweils 8 Stunden, oder ein vergleichbarer Zeitraum (maximal 40 Stunden);
BN* II System: die erweiterte Stabilität der Reagenzien bei Verwendung von BN* II Evaporation Stoppers (Bestell-Nr. OVLE) ist der Bedienungsanleitung zu entnehmen;
BN ProSpec® System: die Stabilität der Reagenzien ist der Bedienungsanleitung zu entnehmen.
Zusätzlich benötigte Materialien
BN* System
N Protein-Standard PY (human), Bestell-Nr. OUID
N/T Protein-Kontrolle PY (human), Bestell-Nr. OWSY
N Reaktionspuffer, Bestell-Nr. OUMS
N Diluens, Bestell-Nr. OUMT
N Zusatzreagenz/Präzipitation, Bestell-Nr. OUMU
BN* II Evaporation Stoppers (wahlweise), Bestell-Nr. OVLE
Verbrauchsmaterial und Ausrüstung wie in den Bedienungsanleitungen der BN* Systeme beschrieben.
Untersuchungsmaterial
Für die Bestimmung der Gerinnungsfaktoren kann sowohl EDTA- als auch Citratplasma verwendet
werden. C1-Inhibitor kann in Citratplasma und in Humanserum bestimmt werden. Zur Messung sollen
möglichst frische Proben (maximal 8 Tage bei +2 bis +8 °C aufbewahrt) eingesetzt werden. Werden
Proben innerhalb von 24 Stunden nach Entnahme tiefgefroren, so ist eine Lagerung unterhalb -20 °C
bis zu 1 Jahr möglich, wenn wiederholtes Auftauen und Einfrieren vermieden wird. Lipämische Proben
oder eingefrorene Proben, die nach dem Auftauen trüb sind, müssen vor der Bestimmung durch Zentrifugation (10 min bei ca. 15 000 x g) geklärt werden. Citratplasmen sind durch die Citratlösung um
durchschnittlich 17 % verdünnt. Bei Plasmen von Patienten unter Heparin-Therapie ist keine Störung
zu erwarten.
2,5. - 97,5. Perzentile
Fibrinogen (8)
Antithrombin III (9)
Plasminogen (10)
1,80 - 3,50 g/l
0,19 - 0,31 g/l
0,06 - 0,25 g/l
C1-Inhibitor:
Es wurden Citratplasma-Proben von 399 gesunden Spendern aus Mitteleuropa ausgewertet. Der Referenzbereich (2,5. bis 97,5. Perzentile) betrug 0,18 - 0,32 g/l. Die Auswertung von 370 Serumproben
ergab für N Antiserum gegen C1-Inhibitor einen Referenzbereich (2,5. bis 97,5. Perzentile) von 0,21 0,39 g/l.
Darüber hinaus sollte jedes Labor seine eigenen Referenzbereiche ermitteln, da diese vielen Einflußgrößen unterliegen, die für jedes untersuchte Kollektiv verschieden sein können.
Leistungsmerkmale der Teste
Empfindlichkeit
Die Empfindlichkeit der Bestimmung wird durch die untere Grenze der Referenzkurve festgelegt und
hängt damit von den Konzentrationen der Proteine im N Protein-Standard PY ab. Typische Meßbereiche sind in den Bedienungsanleitungen der BN* Systeme angegeben.
Spezifität
Die N Antisera gegen Human-Antithrombin III, -Plasminogen und -C1-Inhibitor sind spezifisch für das jeweilige Protein. Das N Antiserum gegen Human-Fibrinogen erfaßt auch Fibrinogen-Spaltprodukte (7).
Präzision
Mit den N Antisera gegen Human-Gerinnungsfaktoren und -C1-Inhibitor wurden am BN* System folgende Variationskoeffizienten (VK) ermittelt:
Protein
n
Intra-Assay
Mittelwert
[g/l]
VK
[%]
n
Inter-Assay
Mittelwert
[g/l]
VK
[%]
Fibrinogen
Antithrombin III
Plasminogen
C1-Inhibitor
30
29
30
30
2,03
0,22
0,094
0,23
2,7
1,5
1,5
1,5
10
10
10
10
2,06
0,21
0,095
0,24
2,6
1,3
3,5
1,6
Methodenvergleich
Es wurden Plasmaproben mit den N Antisera gegen Human-Gerinnungsfaktoren und -C1-Inhibitor und
Serumproben mit N Antiserum gegen Human-C1-Inhibitor am BN* System (y) gemessen und vergleichend dazu mit der radialen Immundiffusion (x) (Partigen**) bestimmt. Die Korrelation der Ergebnisse
lieferte folgende Daten:
Protein
Anzahl
der Proben
Lineare Regression
Korrelations
koeffizient
Fibrinogen
Antithrombin III
Plasminogen
C1-Inhibitor
C1-Inhibitor
28
30
29
50 Plasmen
50 Seren
y (BN*) = 1,04 x (RID) + 0,07 g/l
y (BN*) = 0,88 x (RID) + 0,03 g/l
y (BN*) = 0,79 x (RID) + 0,03 g/l
y (BN*) = 0,89 x (RID) + 0,03 g/l
y (BN*) = 0,98 x (RID) + 0,02 g/l
0,99
0,90
0,92
0,95
0,96
Anmerkung
Die angegebenen Werte für die Leistungsmerkmale der Teste stellen typische Ergebnisse dar und sind
nicht als Spezifikation für das N Antiserum gegen Human-Fibrinogen, -Antithrombin III, -Plasminogen
oder –C1-Inhibitor anzusehen.
Literatur
Siehe Seite 1.
BN ProSpec ist ein eingetragenes Warenzeichen der Dade Behring Marburg GmbH in den USA,
Deutschland und anderen Ländern.
*
BN ist ein Warenzeichen der Dade Behring Marburg GmbH in den USA.
** Partigen ist ein eingetragenes Warenzeichen der Dade Behring Marburg GmbH in Deutschland und
anderen Ländern.
Dade Behring Marburg GmbH
Emil-von-Behring-Str. 76
D-35041 Marburg
OQEY G09 E0540 (381) H
2
Ausgabe Mai 2001
N Antisérums anti-Facteurs
de la coagulation et
C1-Inhibiteur humains
Domaines d'utilisation
Réactifs pour la détermination quantitative des facteurs de la coagulation (fibrinogène, antithrombine III
et plasminogène) dans le plasma humain, et du C1-inhibiteur (C1-inactivateur, inhibiteur C1-estérase)
dans le plasma ou le sérum humain, à l'aide des systèmes BN*.
Intérêt diagnostique
Des concentrations augmentées de fibrinogène plasmatique sont observées dans les processus inflammatoires, ainsi qu'après des traumatismes ou des opérations importantes ("protéine de la phase aiguè") ; elles
peuvent également apparaître en cas de tumeurs métastasiques. Une diminution du taux plasmatique de
fibrinogène peut être observée dans les coagulopathies de consommation, par ex. CIVD (coagulation intravasculaire disséminée), en cas d'hyperfibrinolyse primaire, d'insuffisance hépatique ou de déficit d'origine
génétique. Des études épidémiologiques ont montré que les concentrations de fibrinogène plasmatique
augmentées s'accompagnent d'une augmentation du risque d'artériosclérose (1).
On observe une diminution du taux d'antithrombine III en cas de CIVD, de septicémie avec CIVD, de
thrombose veineuse récidivante de la jambe, d'insuffisance hépatique, de néphrose, de déficit d'origine
génétique ou de prise de contraceptifs à base d'oestrogènes. Une concentration diminuée d'antithrombineIII
représente un risque plus élevé de développer des complications thromboemboliques(2).
Le taux de plasminogène peut être augmenté en cas de carcinome de la prostate, alors qu'il est diminué en
cas d'insuffisance hépatique, de syndrome de détresse respiratoire du nouveau-né, ou de traitement fibrinolytique thérapeutique.
D'une manière générale, les dosages immunochimiques, complétés éventuellement par une détermination
d'activité des différents facteurs de la coagulation, peuvent fournir des informations précieuses (par ex. pour
les traitements de substitution ou utilisant des anticoagulants oraux). Le dosage du fibrinogène pour évaluer
le risque d'artériosclérose peut être effectué par méthode immunochimique (3).
Le C1-inhibiteur est un régulateur important de la voie classique de l'activation du complément, dans la
mesure où il inhibe l'activité des protéases de la sérine, le C1s et le C1r (4). Le dosage du C1-inhibiteur est
une aide au diagnostic de l’angio-oedème héréditaire (augmentation de la perméabilité des vaisseaux sanguins entraînant des oedèmes tissulaires) ainsi que du plus rare angio-oedème associé à un lymphome
(cancer des ganglions lymphatiques). Les déficits génétiques en C1-inhibiteur provoquent des oedèmes
angioneurotiques (5, 6). Les déficits acquis en C1-inhibiteur apparaissent dans les maladies du système des
cellules B qui s'accompagnent d'une diminution du C1-inhibiteur, par ex. les leucémies chroniques lymphatiques B, les myélomes multiples ou encore les autres lymphomes malins (5).
Protocoles du test sur les systèmes BN*
Les protocoles sont indiqués dans le manuel d’utilisation et la dernière version du logiciel de chaque
appareil. Toutes les étapes sont effectuées automatiquement par le système.
Établissement des courbes d'étalonnage
Les courbes d'étalonnage sont effectuées selon un étalonnage en plusieurs points. Les séries de dilutions du N Standard Protéines PY sont établies automatiquement avec le N Diluant.
Les courbes d'étalonnage peuvent être utilisées tant que les contrôles d'exactitude, par ex. le N/T
Contrôle Protéines PY, est retrouvé à l'intérieur de son domaine de confiance. Une nouvelle courbe
d'étalonnage doit être établie à chaque changement de lot d'antisérum.
Mesure des échantillons de patients
Les échantillons sont dilués automatiquement au 1/5 (antithrombine III, plasminogène et C1-inhibiteur)
ou au 1/20 (fibrinogène) avec le N Diluant, puis mesurés. Si des valeurs sortent du domaine de mesure, retester les échantillons à une dilution plus élevée (antithrombine III, plasminogène, C1-inhibiteur et
fibrinogène) ou plus basse (fibrinogène). Le protocole pour retester les échantillons à une dilution
différente est décrit dans les manuels d’utilisation des systèmes BN*.
Contrôle de qualité interne
Tester le N/T Contrôle Protéines PY à chaque changement de courbe d’étalonnage ou de flacon
d’antisérum, ainsi qu’à chaque nouvelle série d’échantillons sériques ou plasmatiques. Traiter le contrôle comme un échantillon de patient, aussi bien dans le test que pour l’exploitation des résultats. Les
valeurs théoriques ainsi que les domaines de confiance sont indiqués dans le tableau des valeurs
théoriques.
Calcul des résultats d'analyse
L'exploitation des résultats est effectuée automatiquement à l'aide d'une fonction log-logit.
Limites du test
Les échantillons troubles ou contenant des particules peuvent perturber le test. Dans ce cas, les centrifuger avant le test. Le N Antisérum anti-Fibrinogène humain révèle également les produits de dégradation du fibrinogène, de sorte que le dosage immunochimique du fibrinogène n'est pas adapté aux
échantillons qui contiennent ces produits de dégradation, comme c'est la cas par ex. des patients sous
traitement fibrinolytique (7).
Les échantillons utilisés dans le cadre de contrôles nationaux peuvent, du fait de leur technique de
fabrication ou de leur vieillissement, donner des résultats différents selon la technique de dosage utilisée. Il peut dans ces cas-là être nécessaire d’évaluer les résultats selon des valeurs-cibles spécifiques
à chaque méthode.
Valeurs normales
Valeurs de référence pour plasma citraté d'adultes sains :
Protéine
Fibrinogène (8)
Antithrombine III (9)
Plasminogène (10)
Principe de la méthode
Les protéines contenues dans le sérum ou le plasma humain forment, dans le cadre d’une réaction
immunochimique avec des anticorps spécifiques, des immuncomplexes qui dispersent la lumière projetée. L’intensité de la lumière dispersée est fonction de la concentration de la protéine recherchée dans
l’échantillon. L’exploitation se fait par comparaison avec un standard de concentration connue.
Réactifs
Contenu des conditionnements
N Antisérum anti-Fibrinogène humain, code OSCA ou
N Antisérum anti-Antithrombine III humaine, code OSAY ou
N Antisérum anti-Plasminogène humain, code OSCB ou
N Antisérum anti-C1-Inhibiteur humain, code OQEY
contenant chacun 1 flacon de 2 ml
Composition
Les N Antisérums sont des sérums liquides, d’origine animale, obtenus par immunisation de lapins avec
du fibrinogène, de l’antithrombine III, du plasminogène ou du C1-inhibiteur humain hautement purifié. Un
procédé spécial de stabilisation permet d’éliminer les éléments labiles des antisérums. Une filtration ainsi
que l’addition d’azide de sodium (< 1 g/l) comme conservateur excluent pratiquement toute contamination
microbienne. Les antisérums spécifiques, purifiés par immunoadsorption en phase solide, sont préparés
de façon à garantir des propriétés optimales pour leur utilisation sur les systèmes BN*. Le titre d'anticorps
(T), déterminé par immunodiffusion radiale, est imprimé sur l'étiquette du flacon. Il indique le nombre de
mg d'antigène précipités par 1 ml d'antisérum dans un gel d'agarose.
Mises en garde et précautions d'emploi
1. Ces réactifs ne doivent être utilisés que pour un usage in vitro.
2. Les réactifs contenant de l'azide de sodium doivent être manipulés avec précaution :
ne pas avaler et éviter tout contact avec la peau et les muqueuses. Mis en contact avec des métaux
lourds comme le cuivre ou le plomb, l'azide de sodium peut former un acide explosif.
Préparation des réactifs
Les N Antisérums sont prêts à l'emploi et peuvent être utilisés sans prétraitement.
Stabilités et conditions de conservation
Conservation à +2/+8°C :
La date de péremption est indiquée sur l’étiquette.
Stabilité après ouverture :
4 semaines, à condition de bien refermer les flacons immédiatement après emploi, de les replacer à
+2/+8°C, et d’éviter toute contamination (par ex. microbienne). Les N Antisérums peuvent devenir
troubles ou présenter une floculation, phénomènes qui n’indiquent pas une contamination microbienne
et qui n’influencent en aucune façon leur activité. Dans ces cas-là, les filtrer à l’aide d’un filtre à usage
unique à pores de 0,45 µm de diamètre.
Ne pas les congeler.
Stabilité sur les systèmes BN* :
5 jours à raison de 8 heures par jour, ou durée équivalente (maximum 40 heures).
BN* II : l’utilisation de bouchons anti-évaporation (code OVLE) permet d’allonger la stabilité des réactifs ; se reporter au manuel d’utilisation du système.
BN ProSpec® : pour la stabilité des réactifs, se reporter au manuel d’utilisation du système.
Matériel et autres réactifs nécessaires
Système BN*
N Standard Protéines PY (humain), code OUID
N/T Contrôle Protéines PY (humain), code OWSY
N Tampon de réaction, code OUMS
N Diluant, code OUMT
N Réactif complémentaire/précipitation, code OUMU
Bouchons anti-évaporation pour BN* II, code OVLE (utilisation facultative)
Consommables et matériels complémentaires nécessaires selon les manuels d’utilisation des systèmes BN*.
Pour le dosage des facteurs de la coagulation, on peut utiliser aussi bien des plasmas prélevés sur EDTA
que citratés. Le C1-inhibiteur peut être dosé sur plasma citraté ou sérum humain. Utiliser des échantillons
plasmatiques ou sériques humains de préférence frais (conservés 8 jours maximum à +2/+8°C). Congelés dans les 24 heures qui suivent leur prélèvement, les échantillons peuvent se conserver jusqu’à 1 an à
au moins –20°C ; ne les congeler qu’une seule fois. Les échantillons fortement lipémiques ou devenus
troubles après décongélation doivent être clarifiés par centrifugation (10 min à env. 15 000 g) avant utilisation. Les plasmas citratés se trouvent dilués à env. 17% par la solution citrate. Les plasmas de patients
traités par héparine n’entraînent pas de perturbation des dosages.
Réalisation du test
Remarques
1. Pour plus de détails concernant l’utilisation des systèmes BN*, se reporter au manuel d’utilisation
de l’appareil.
2. Ne pas utiliser les réactifs au-delà de leur date de péremption.
3. Porter réactifs et échantillons à la température ambiante (+15/+25°C) avant leur analyse sur le
système BN*A ou BN* 100. Sur le système BN* II ou BN ProSpec®, ils peuvent être testés directement à +2/+8°C.
OQEY G09 E0540 (381) H
3
C1-inhibiteur:
Les échantillons de plasma citraté de 399 donneurs sains originaires d’Europe centrale ont été testés.
Le domaine de référence (2,5ème au 97,5ème percentile) s’étend de 0,18 à 0,32 g/l. L’exploitation de
370 échantillons sériques testés avec le N Antisérum anti-C1-Inhibiteur a donné un domaine de référence (2,5ème au 97,5ème percentile) allant de 0,21 à 0,39 g/l.
Il est toutefois recommandé à chaque laboratoire d’établir ses propres valeurs de référence, dans la
mesure où les domaines de référence sont soumis à de nombreux facteurs d’influence qui peuvent
varier selon le collectif étudié.
Caractéristiques des tests
Sensibilité
La sensibilité du dosage est déterminée par la limite inférieure de la courbe d’étalonnage, et dépend
donc de la concentration en protéines du N Standard protéines PY.
Les domaines de mesure types sont indiqués dans les manuels d’utilisation des systèmes BN*.
Spécificité
Les N Antisérums anti-Antithrombine III humaine, anti-Plasminogène humain et anti-C1-Inhibiteur humain sont spécifiques de la protéine indiquée. Le N Antisérum anti-Fibrinogène humain révèle également les produits de dégradation du fibrinogène (7).
Précision
Les N Antisérums anti-Facteurs de la coagulation et C1-Inhibiteur humains ont donné les coefficients
de variation (CV) suivants sur les systèmes BN* :
Edition Mai 2001
Protéine
n
répétabilité
valeur moyenne
[g/l]
CV
[%]
n
reproductibilité
valeur moyenne
[g/l]
CV
[%]
Fibrinogène
Antithrombine III
Plasminogène
C1-inhibiteur
30
29
30
30
2,03
0,22
0,094
0,23
2,7
1,5
1,5
1,5
10
10
10
10
2,06
0,21
0,095
0,24
2,6
1,3
3,5
1,6
Comparaison avec une autre méthode
Des échantillons plasmatiques ont été testés avec les N Antisérums anti-Facteurs de la coagulation et
C1-Inhibiteur humains et des échantillons sériques avec le N Antisérum anti-C1-Inhibiteur humain sur
le système BN* (y), en parallèle avec une méthode d’immunodiffusion radiale (Partigen**) (x). La corrélation des résultats a donné les valeurs suivantes :
Protéine
Fibrinogène
Antithrombine III
Plasminogène
C1-Inhibiteur
C1-Inhibiteur
nombre
de échantillons
régression linéaire
coefficient
de corrélation
28
30
29
50 plasmas
50 sériques
y (BN*) = 1,04 x (IDR) + 0,07 g/l
y (BN*) = 0,88 x (IDR) + 0,03 g/l
y (BN*) = 0,79 x (IDR) + 0,03 g/l
y (BN*) = 0,89 x (IDR) + 0,03 g/l
y (BN*) = 0,98 x (IDR) + 0,02 g/l
0,99
0,90
0,92
0,95
0,96
Remarque
Les valeurs indiquées comme caractéristiques des tests représentent des résultats types, et ne doivent
pas être considérées comme des spécifications des N Antisérums anti-Fibrinogène, anti-Antithrombine
III, anti-Plasminogène et anti-C1-Inhibiteur humains.
Littérature
Voir page 1.
BN ProSpec est une marque déposée de Dade Behring Marburg GmbH aux USA, en Allemagne et
dans d’autres pays.
*
Échantillons à tester
2,5ème - 97,5ème percentiles
1,80 - 3,50 g/l
0,19 - 0,31 g/l
0,06 - 0,25 g/l
BN est une marque déposée de Dade Behring Marburg GmbH aux Etats-Unis.
** Partigen est une marque déposée de Dade Behring Marburg GmbH en Allemagne et dans d’autres
pays.
Dade Behring Marburg GmbH
Emil-von-Behring-Str. 76
D-35041 Marburg
N Antisieri anti fattori della
coagulazione umani e
C1-inibitore
Settori d'impiego
Diagnostici in vitro per la determinazione quantitativa dei fattori della coagulazione (fibrinogeno, antitrombina III e plasminogeno) nel plasma umano e del C1-inibitore (C1-inattivatore, C1-esterasi inibitore) nel
plasma e nel siero con i sistemi BN*.
Significato diagnostico
Elevate concentrazioni di fibrinogeno nel plasma si riscontrano in caso di flogosi, dopo gravi traumi o
interventi chirurgici (proteina della fase acuta), ed anche in presenza di tumori metastatizzanti.
Una riduzione dei livelli del fibrinogeno plasmatico può verificarsi in caso di coagulopatie da consumo,
ad es. CID (coagulazione intravascolare disseminata), iperfibrinolisi primaria, insufficienza epatica e
carenza genetica. Studi epidemiologici hanno dimostrato che elevate concentrazioni di fibrinogeno
costituiscono un indice di rischio di aterosclerosi(1).
Valori ridotti di antitrombina III si riscontrano in caso di CID, sepsi con CID, trombosi venose recidivanti
degli arti inferiori, insufficienza epatica, nefrosi, carenza genetica e durante il trattamento con contraccettivi orali a base di estrogeni. Ridotte concentrazioni di antitrombina III costituiscono un elevato rischio di complicanze tromboemboliche(2).
Elevati livelli di plasminogeno possono essere riscontrati in presenza di carcinoma prostatico, mentre
sono previsti valori ridotti in caso di insufficienza epatica, sindrome dispnoica dei neonati e trattamento
fibrinolitico terapeutico.
Generalmente la determinazione immunochimica dei singoli fattori della coagulazione abbinata alla
determinazione dell’attività dei fattori stessi può fornire elementi determinanti (ad esempio nella terapia
sostitutiva o nella terapia con anticoagulanti orali).
E' possibile valutare il grado di rischio aterosclerotico attraverso la determinazione del fibrinogeno con
metodi immunochimici(3).
Il C1-inibitore è un importante regolatore della via classica dell’attivazione del complemento; esso
inibisce l’attività delle serin-esterasi C1s e C1r(4). La valutazione del C1 Inibitore è di supporto nella
diagnosi dell'edema angioneurotico ereditario (aumentata permeabilità dei vasi sanguigni con conseguente tumefazione dei tessuti) e di una rara forma di angioedema associato a linfoma (carcinoma
dei linfonodi). Una carenza genetica di C1-inibitore provoca l’edema angioneurotico (HANE)(5,6). Una
carenza acquisita di C1-inibitore si verifica nelle malattie del sistema linfatico, che possono essere
associate a valori ridotti di C1-inibitore come ad esempio nel caso di leucemia linfatica cronica, mieloma multiplo ed altri linfomi maligni.(5)
Principio del metodo
In una reazione immunochimica, le proteine presenti nel campioni di siero o plasma umano formano
degli immunocomplessi che provocano la dispersione della luce che passa attraverso il campione.
L’intensità della luce dispersa dipende dalla concentrazione della corrispondente proteina nel campione. La valutazione avviene per confronto con uno standard a concentrazione nota.
Reagenti
Contenuto della confezione:
N Antisiero anti-Fibrinogeno umano, codice SCA o
N Antisiero anti-Antitrombina III umana, codice SAY o
N Antisiero anti-Plasminogeno umano, codice SCB o
N-Antisiero anti-C1-inibitore umano, codice QEY
Ogni confezione contiene 1 flacone da 2 mL
Composizione
Gli N antisieri sono sieri liquidi di origine animale, prodotti per immunizzazione di conigli con fibrinogeno, antitrombina III, plasminogeno o C1-inibitore umani altamente purificati. Le componenti labili vengono rimosse dall’antisiero mediante un particolare procedimento.
Le contaminazioni microbiche vengono escluse essenzialmente mediante filtrazione ed aggiunta di
sodio azide (< 1 g/l) come conservante. Gli antisieri specifici, purificati tramite immuno-assorbimento
vengono trattati in modo tale da assicurare un impiego ottimale con i sistemi BN*.
I titoli anticorpali (T) vengono determinati con il metodo della immunodiffusione radiale e sono riportati
sull'etichetta del flacone. Essi indicano quanti mg di antigene vengono precipitati, da 1 mL dell’ antisiero
corrispondente in gel d’agarosio.
Avvertenze e precauzioni
1. Solo per uso diagnostico in vitro.
2. I reagenti contenenti sodio azide devono essere trattati con la dovuta cautela:
Non ingerire ed evitare contatti con la cute e le mucose! La sodio azide a contatto con metalli
pesanti come rame o piombo può formare azidi esplosive.
Preparazione dei reagenti
Gli N Antisieri sono pronti per l'uso e possono essere utilizzati senza alcun pretrattamento.
Conservazione e validità
Stabilità a +2/+8 °C:
vedere la data di scadenza sull’etichetta
Stabilità dopo apertura:
4 settimane, se conservati ben chiusi a+ 2/+ 8°C, evitando contaminazioni (ad es. da microrganismi).
Durante la conservazione, gli ‘N Antisieri possono presentare intorbidamenti o flocculazioni che non
dipendono da contaminazioni microbiche e che non influenzano in alcun modo l’attività. In questo caso
è necessario filtrare l’antisiero prima dell’uso. A questo scopo sono disponibili filtri monouso con pori di
0,45 µm di diametro. Non congelare.
Stabilità sui sistemi BN*:
5 giorni per 8 ore al giorno o periodo di tempo equivalente (massimo 40 ore);
Sistema BN* II: la stabilità dei reagenti può essere aumentata usando gli Evaporation Stoppers per BN*
II (cod. VLE), come indicato nel manuale d’uso.
Sistema BN ProSpec®: la stabilità dei reagenti è indicata nel manuale d’uso.
Altro materiale necessario
Sistema BN*
N Plasma proteine standard PY (umano), codice UID
N/T Plasma di controllo proteine PY (umano), codice WSY
N Tampone di reazione, codice UMS
N Diluente, codice UMT
N Reagente supplementare/precipitante, codice UMU
Evaporation Stoppers per BN* II (opzionale), codice VLE
Materiale di consumo ed accessori come descritto nei manuali d’uso dei sistemi BN*.
Campioni in esame
Per il dosaggio dei fattori della coagulazione, è possibile utilizzare sia campioni con EDTA che
plasma umano citratato. Il C1 inibitore può essere determinato nel plasma citratato e nel siero
umano. I campioni devono essere possibilmente freschi (conservati al massimo per 8 giorni a +2/
+8°C) o conservati congelati. I campioni possono essere conservati a – 20°C per 1 anno se vengono congelati entro 24 ore dal prelievo, evitando ripetuti scongelamenti. I campioni lipemici o congelati, che dopo scongelamento si presentassero torbidi, devono essere chiarificati mediante centrifugazione (10 min. per ca. 15.000 x g) prima del test. Poiché viene aggiunta soluzione di citrato, il
plasma citratato viene diluito in media del 17%. Nel caso di plasma di pazienti sottoposti a terapia
eparinica, non si verifica nessuna alterazione.
Esecuzione del test
Nota:
1. Per informazioni dettagliate fare riferimento al manuale d’uso dei sistemi BN*.
2. Non utilizzare i reagenti oltre la data di scadenza indicata.
3. Prima della determinazione sul sistema BN*A /BN* 100, portare i reagenti ed i campioni a temperatura ambiente (+15/+25°C). Sul sistema BN* II / BN ProSpec® i reagenti possono essere analizzati
direttamente a +2/+8°C.
OQEY G09 E0540 (381) H
4
Edizione Maggio 2001
Schema di esecuzione del test con i sistemi BN*
Gli schemi per l’esecuzione del test sono riportati nei manuali d’uso e nel software dello strumento.
Tutte le fasi sono eseguite automaticamente dallo strumento.
Preparazione della curva di riferimento
Le curve di riferimento vengono allestite mediante una calibrazione a più punti. Per la loro preparazione
vengono realizzate automaticamente diluizioni seriali dell'N Plasma proteine standard PY con l'N diluente.
Le curve di calibrazione sono valide finchè i controlli di accuratezza, ad es. N/T Controllo per proteine
PY, rimangono entro i rispettivi ambiti fiduciali. Quando si utilizza un nuovo lotto di antisiero si deve
allestire una nuova curva di riferimento.
Misurazione dei campioni:
I campioni vengono diluiti automaticamente 1:5 (Antitrombina III, Plasminogeno e C1 Inibitore) o 1:20
(Fibrinogeno) con l’N Diluente e quindi analizzati. Se le letture ottenute si trovano al di fuori dell’ambito
di misura, il test può essere ripetuto usando una diluizione superiore (antitrombina III, plasminogeno,
C1 inibitore e fibrinogeno) o inferiore (fibrinogeno) del campione. Per informazioni sulla ripetizione
della misurazione con altre diluizioni consultare il Manuale d’Uso dei sistemi BN*.
Controllo di qualità interno
L’N/T Controllo Proteine PY deve essere analizzato dopo ogni preparazione delle curve di riferimento,
dopo aver iniziato un nuovo flacone di antisiero e con ogni serie di campioni di siero o plasma. I controlli
sono analizzati e valutati allo stesso modo dei campioni. I valori nominali e gli ambiti fiduciali sono
indicati nella tabella dei valori nominali del relativo controllo.
Calcolo dei risultati
La valutazione viene eseguita automaticamente mediante una funzione logit-log.
Limitazioni della esecuizione del test
I campioni torbidi o contenenti particelle possono interferire con la determinazione. Pertanto i campioni
contenenti particelle devono essere centrifugati prima di essere analizzati. L'N antisiero anti-fibrinogeno umano reagisce anche con i prodotti di degradazione del fibrinogeno, perciò la determinazione
immunochimica del fibrinogeno in campioni che contengono tali prodotti di scissione, ad es. di pazienti
sottoposti a terapia fibrinolitica, non dovrebbe essere effettuata.(7)
Per ragioni tecniche legate alla produzione e/o all’invecchiamento dei campioni, i risultati ottenuti con i
sieri di controllo e con i campioni del controllo di qualità inter-laboratorio possono differire in funzione
del metodo utilizzato. Può quindi essere necessario valutare i risultati ottenuti facendo riferimento ai
valori specifici del metodo utilizzato.
Valori attesi
I seguenti ambito di riferimento nel plasma citratato di adulti sani:
Proteina
Fibrinogeno (8)
Antitrombina III (9)
Plasminogeno (10)
2,5 - 97,5 Percentile
1,80 - 3,50 g/L
0,19 - 0,31 g/L
0,06 - 0,25 g/L
C1 inibitore:
Sono stati analizzati 399 campioni di plasma citratato di donatori sani centroeuropei. L’ambito di riferimento (2,5-97,5 percentile) è risultato compreso fra 0,18 e 0,32 g/l. Per l’N antisiero anti-C1 inibitore,
l’analisi di 370 campioni di siero ha raggiunto un ambito di riferimento (2,5-97,5 percentile) di 0,21-0,39
g/l.
Inoltre, ogni laboratorio dovrebbe determinare i propri intervalli di riferimento, poiché i valori possono
risultare diversi a seconda della popolazione esaminata.
Caratteristiche dei test
Sensibilità
La sensibilità del test viene determinata dal limite inferiore della curva di riferimento e dipende quindi
dalla concentrazione delle proteine nell’ N Proteine Standard PY. Gli ambiti di misura tipici sono riportati
nel manuale d’uso dei sistemi BN*.
Specificità
Gli N Antisieri anti-Antitrombina III, Plasminogeno e C1-Inibitore sono specifici per la relativa proteina. L’NAntisiero anti-Fibrinogeno Umano reagisce anche con i prodotti di degradazione del fibrinogeno (7).
Precisione
I seguenti coefficienti di variazione (CV) sono stati ottenuti con gli N-Antisieri anti-fattori della coagulazione umani e C1 inibitore sul sistema BN*:
Proteina
n.
Intra-assay
Valore medio
[g/L]
CV
[%]
n.
Inter-assay
Valore medio
[g/L]
CV
[%]
Fibrinogeno
Antitrombina III
Plasminogeno
C1 Inhibitore
30
29
30
30
2,03
0,22
0,094
0,23
2,7
1,5
1,5
1,5
10
10
10
10
2,06
0,21
0,095
0,24
2,6
1,3
3,5
1,6
Confronto tra metodi
I campioni di plasma sono stati analizzati con gli N Antisieri anti fattori umani della coagulazione e C1
inibitore ed i campioni di siero con l’N Antisiero anti-C1 inibitore umano sul sistema BN* (y) e con un
metodo di immunodiffusione radiale (x) (Partigen**). La correlazione dei risultati è la seguente:
Proteina
Fibrinogeno
Antitrombina III
Plasminogeno
C1-inhibitore
C1-inhibitore
Nr.dei
campioni
Regressione lineare
Coefficiente
di correlazióne
28
30
29
50 Plasmas
50 Sieri
y (BN*) = 1,04 x (RID) + 0,07 g/L
y (BN*) = 0,88 x (RID) + 0,03 g/L
y (BN*) = 0,79 x (RID) + 0,03 g/L
y (BN*) = 0,89 x (RID) + 0,03 g/L
y (BN*) = 0,98 x (RID) + 0,02 g/L
0,99
0,90
0,92
0,95
0,96
Nota
I valori indicati come caratteristiche del test rappresentano dei risultati tipici e non devono essere considerati come specifiche per gli N Antisieri anti-Fibrinogeno, Antitrombina III, Plasminogeno o C1 inibitore
umani.
Bibliografia
Vedi pagina 1.
BN ProSpec è un marchio registrato della Dade Behring Marburg GmbH negli Stati Uniti, Germania e
altri paesi.
*
BN è un marchio registrato della Dade Behring Marburg GmbH negli Stati Uniti.
** Partigen è un marchio registrato della Dade Behring Marburg GmbH in Germania e negli altri Paesi.
Dade Behring Marburg GmbH
Emil-von-Behring-Str. 76
D-35041 Marburg
N Antisueros contra los factores
de la coagulación humana y
contra el inhibidor de C1
Campos de aplicación
Reactivos de diagnóstico in-vitro para la determinación de los factores de la coagulación (fibrinógeno,
antitrombina III y plasminógeno) humana y el inhibidor de C1 (inactivador de C1, inhibidor de la C1esterasa) en sueros humanos y plasmas humanos utilizando los sistemas BN*.
Significado diagnóstico
Concentraciones elevadas de fibrinógeno pueden aparecer en procesos inflamatorios, después de traumatismos u operaciones importantes ("proteína de la fase aguda"), como también, en tumores metastizantes. Una
disminución de los niveles plasmáticos de fibrinógeno se puede presentar en las coagulopatías de consumo,
por ej. CID (coagulación intravascular diseminada), en hiperfibrinólisis primaria, insuficiencias hepáticas y
deficiencias de origen genético. Estudios epidemiológicos han mostrado que las concentraciones elevadas de
fibrinógeno en plasma se pueden asociar con un riesgo elevado de arteriosclerosis (1).
La disminución de antitrombina III puede observarse en CID, sepsis con CID, trombosis recidivante en las
venas de las piernas, insuficiencia hepática, nefrosis, deficiencias de origen genético y durante tratamientos
con anticonceptivos a base de estrógenos. Concentraciones reducidas de antitrombina III indican un riesgo
elevado de complicaciones tromboembólicas(2).
Niveles elevados de plasminógeno pueden aparecer en el carcinoma de próstata, mientras que valores disminuidos de estos niveles se presentan en insuficiencias hepáticas, síndrome de asfixia en los recién nacidos y
durante tratamientos de la fibrinólis terapéuticas.
En general, la determinación inmunoquímica cuantitativa puede suministrar información complementaria valiosa (por ej. en terapéuticas de sustitución o en terapéuticas de coagulantes orales), aún cuando se efectúe
una determinación adicional de la actividad de cada factor. La determinación de fibrinógeno, por métodos
inmunoquímicos permite estimar el riesgo de arteriosclerosis (3).
El inhibidor de C1 es un regulador muy importante de la vía clásica de la activación del complemento, el cual
inhibe la actividad de las serin-proteasas C1s y C1r(4). La determinación del inhibidor de C1 ayuda a la diagnosis
de angioedemas hereditarios (permeabilidad elevada de los vasos sanguíneos y por consiguiente inflamación
del tejido), así como también, de los casos raros de angioedemas asociados a linfomas (cáncer de los ganglios
linfáticos). Una deficiencia de origen genético del inhibidor de C1 conduce a la aparición del edema anglioneurótico hereditario(HANE)(5,6). Una deficiencia adquirida del inhibidor de C1 se presenta en enfermedades del
sistema celular-B, las cuales pueden tener lugar simultáneamente con una disminución del inhibidor de C1, por
ej., en leucemia linfática crónica B, mieloma múltiple y otros linfomas malignos(5).
Protocolos del test en los sistemas BN*
Los protocolos de elaboración de los ensayos vienen dados en el manual de operaciones, así como en el
software del aparato correspondiente. Todas las etapas son efectuadas automáticamente por el sistema.
Preparación de la curva de referencia:
Las curvas de referencia se hacen sobre una calibración de varios puntos. Para su elaboración se
preparan automáticamente una serie de diluciones del N Proteína-estándar PY con el N diluyente.
Las curvas de referencia pueden ser utilizadas tanto tiempo como sea posible, siempre que al determinar de nuevo de los controles de exactitud, por ej., N/T proteína-controles PY, sus valores se encuentre
de nuevo dentro de los correspondientes rangos de confianza. Al utilizar un nuevo lote de antisuero se
debe preparar una nueva curva de referencia.
Medida de las muestras de pacientes:
Las muestras van a ser automáticamente diluidas 1:5 (antitrombina III, plasminógeno e inhibidor de
C1) o 1:20 (fibrinógeno) con N diluyente y medidas. Para valores que se encuentren por fuera de rango
de medida, se puede repetir la medida a una dilución mayor de la muestra (antitrombina III, plasminógeno e inhibidor de C1 y fibrinógeno) o a una dilución menor de la muestra (fibrinógeno). La repetición
de las medidas a otras diluciones de las muestras viene descrita en el manual de operaciones del
sistema BN*.
Control de calidad interno
Los N/T proteína-controles PY se deben utilizar después de cada elaboración de una curva de referencia, después de abrir un frasco de antisuero por primera vez, así como también, con cada serie de
muestras. Los controles deben manejarse en el test y en la evaluación como las muestras de pacientes. Los valores teóricos y los rangos de confianza se deben tomar de la Tabla de valores teóricos
correspondiente a cada control.
Cálculo de los resultados del análisis
La valoración se efectúa automáticamente mediante una función log-logit.
Limitaciones del Procedimiento
La presencia de turbidez y de partículas en las muestras pueden alterar la determinación. Por lo tanto, las
muestras que contengan partículas deben ser centrifugadas antes de efectuar la determinación. El N
antisuero contra fibrinógeno humano registra también productos de disociación de éste, de manera que
no puede ser utilizado en la determinación inmunoquímica del fibrinógeno en muestras que contengan
estos producto de disociación, como por ej., en pacientes bajo terapia fibrinolítica(7).
Con las muestras control y con las muestras empleadas en estudios en diferentes centros, se pueden
obtener resultados diferentes dependiendo de la técnica de fabricación o del envejecimiento de las
muestras. Por esta razón, es necesario efectuar la valoración de estos resultados en relación con los
valores objetivo específicos del método correspondiente.
Valores esperados
Para las plasmas citratados de sujetos adultos sanos, son válidos los siguientes rango de referencia:
Proteína
Fibrinógeno (8)
Antitrombina III (9)
Plasminógeno (10)
Principio del método
Las proteína contenidas en el plasma o en los sueros humanos forman en una reacción inmunoquímica con anticuerpos específicos inmunocomplejos, los cuales pueden dispersar un rayo de luz incidente. La intensidad de la luz dispersada depende de la correspondiente proteína en la muestra. La valoración se realiza por comparación con un estándar de concentración conocida.
Reactivos
Contenido del envase comercial:
N antisuero contra fibrinógeno-humano, N° de pedido OSCA o
N antisuero contra antitrombina III-humana, N° de pedido OSAY o
N antisuero contra plasminógeno-humano, N° de pedido OSCB o
N antisuero contra el inhibidor de C1-humano, N° de pedido OQEY
1 frasco con 2 ml por cada uno
Composición
Los N antisueros son sueros animales, líquidos, producidos mediante inmunización de conejos con
fibrinógeno, antitrombina III, plasminógeno, o el inhibidor de C1, humanos, de alta pureza. Los componentes lábiles de los antisueros se van a retirar mediante un proceso especial de estabilización. Las
impurezas microbiológicas van a ser excluidas en general por medio de filtración y por la adición de azida de
sodio (< 1 g/l) como medio de conservación. Los antisueros espec’ficos, purificados mediante inmunoadsorción de fase sólida, después de someterse a pruebas especiales se ajustan de tal forma que se
obtenga una óptima capacidad al usando los sistemas BN*. Los títulos de los anticuerpos (T) se obtiene por inmunodifusión radial y vienen dados en la etiqueta del frasco correspondiente. Este valor
indica cuantos mg del antígeno por 1 ml del antisuero se pueden precipitar en un gel de agarosa.
Advertencias y medidas de seguridad
1. Sólo para ser utilizado en diagnósticos in-vitro.
2. En el manejo de diagnósticos in-vitro que contengan azida sódica debe observarse la siguiente regla:
No ingerir y evitar contacto con la piel y mucosas. La azida sódica puede formar azidas explosivas con
metales pesados como cobre o plomo.
Preparación de reactivos
Los N antisueros están listos para ser utilizados y pueden aplicarse sin ningún tratamiento preliminar.
Estabilidad y almacenaje
Tiempo de conservación entre +2 y +8°C:
La fecha de vencimiento viene dada en la etiqueta;
Estabilidad después de abierto:
4 semanas siempre que los frascos después de ser empleados se mantengan entre +2 y +8°C, perfectamente cerrados y se eviten contaminaciones (por ej., por microorganismos);
Los N antisueros pueden presentar durante el almacenamiento floculación o turbidez que no son ocasionadas por contaminación microbiológica y que no influyen de manera alguna en su actividad.En estos
casos los antisueros deben ser filtrados, antes de ser usados. Para esto son apropiados filtros desechables con un diámetro de poro de 0,45 µm. No está permitida su congelación.
Estabilidad en los sistemas BN*:
5 días 8 horas cada día o un período de tiempo comparable (máximo 40 horas);
En el sistema BN* II el aumento de la estabilidad del reactivo, debido al uso del tapón protector de la
evaporación (N° de pedido, OVLE), viene dado en el manual de operaciones del aparato.
La estabilidad de los reactivos en el sistema BN ProSpec® se debe tomar del manual de operaciones.
Materiales adicionales necesarios
Sistema BN*
N Proteína-estándar PY (humana), N° de pedido OUID
N Proteína-control PY (humana), N° de pedido OWSY
N tampón para reacción, N° de pedido OUMS
N diluyente, N° de pedido OUMT
N reactivo adicional/precipitación, N° de pedido OUMU
Tampón protector de evaporación BN* II (opcional), N° de pedido OVLE
Otros materiales y equipos como está descrito en el manual de operaciones respectivos de los sistemas BN*.
Material a investigar
Para la determinación de los factores de la coagulación se pueden usar tanto plasma con EDTA como
con citrato. El inhibidor de C1 se puede determinar en plasmas citratados y en sueros humanos. Para la
medida se deben usar, en lo posible, muestras frescas (almacenadas máximo 8 días entre +2 y +8°C). Si
las muestras se congelan a baja temperatura, dentro de las 24 horas subsiguientes a la toma, se pueden
almacenar por 1 año a -20°C, siempre que se eviten la descongelación y la congelación repetidas.
Muestras lipémicas o muestras congeladas, que estén turbias después de la descongelación, deben ser
aclaradas por centrifugación (10 min. a aprox. 15 000 x g) antes de la determinación. Los plasmas
citratados están diluidos por la solución de citrato en un promedio de un 17%. En plasmas de pacientes
bajo una terapéutica con heparina no se espera ninguna alteración.
Procedimiento
Advertencias:
1. Los detalles sobre el manejo de los sistemas BN* se deben tomar de los correspondientes manuales de operación.
2. Los reactivos no se deben utilizar una vez pasada la fecha de vencimiento.
3. Los reactivos y las muestras tienen que haber alcanzado la temperatura ambiente (entre +15 y
+25°C) antes de ser medidos en los sistemas BN*A/BN* 100. En los sistemas BN* II/BN ProSpec®
los reactivos y las muestras almacenados entre +2 y +8°C se pueden utilizar directamente para la
determinación.
OQEY G09 E0540 (381) H
5
Edición Mayo 2001
2,5 - 97,5 Porcentile
1,80 - 3,50 g/l
0,19 - 0,31 g/l
0,06 - 0,25 g/l
Inhibidor de C1:
Se evaluaron 399 muestras de plasmas citratados de donantes sanos de Europa Central. El rango de
referencia (2,5 hasta 97,5 percentile) fue de 0,18 a 0,32 g/l. La valoración de 370 muestras de sueros
dio para el N Antisuero contra el inhibidor de C1 un rango de referencia (2,5 hasta 97,5 percentile) de
0,21 hasta 0,39 g/l.
Cada laboratorio debe además determinar sus propios rangos de referencia, ya que estos están sujetos a diferentes factores, los cuales pueden ser diferentes para cada colectividad investigada.
Características del test
Sensibilidad
La sensibilidad de la determinación se fija de acuerdo al límite inferior de la curva de referencia y
depende de la concentración de proteínas en el N Proteína estándar PY. Los rangos de medida típicos
vienen dados en el manual de operaciones de los sistemas BN*.
Especificidad
Los N antisueros contra antitrombina III, Plasminógeno y el inhibidor de C1, humanos, son específicos
para la proteína correspondiente. El N antisuero contra el fibrinógeno humano cubre también los productos de degradación del fibrinógeno (7)).
Precisión
Con los N antisueros contra los factores de la coagulación y el inhibidor de C1, humanos, se encontraron los siguientes coeficientes de variación (CV):
Proteína
n
Intra-Assay
promedio
[g/l]
CV
[%]
n
Inter-Assay
promedio
[g/l]
CV
[%]
Fibrinógeno
Antitrombina III
Plasminógeno
Inhibidor de C1
30
29
30
30
2,03
0,22
0,094
0,23
2,7
1,5
1,5
1,5
10
10
10
10
2,06
0,21
0,095
0,24
2,6
1,3
3,5
1,6
Comparación de métodos
Se midieron muestras de plasmas con los N antisueros contra los factores de la coagulación y el
inhibidor de C1, humanos, y muestras de suero con el N antisuero contra el inhibidor de C1,humano,
en el sistema BN* (y) y se compararon con la determinación por inmunodifusión radial (x) (Partigen**).
La correlación de los resultados dio los siguientes datos:
Proteína
Fibrinógeno
Antitrombina III
Plasminógeno
Inhibidor de C1
Inhibidor de C1
Número
de Muestras
Regresión lineal
Coeficiente
de correlación
28
30
29
50 Plasmas
50 Sueros
y (BN*) = 1,04 x (RID) + 0,07 g/l
y (BN*) = 0,88 x (RID) + 0,03 g/l
y (BN*) = 0,79 x (RID) + 0,03 g/l
y (BN*) = 0,89 x (RID) + 0,03 g/l
y (BN*) = 0,98 x (RID) + 0,02 g/l
0,99
0,90
0,92
0,95
0,96
Nota:
Los valores dados para las características del test representan valores típicos y no se deben tomar
como especificaciones para los N antisueros contra fibrinógeno, antitrombina III, plasminógeno o el
inhibidor de C1, humanos.
Bibliografía
Ver página 1.
BN ProSpec es una marca registrada de Dade Behring Marburg GmbH en USA, Alemania y en otros
países.
*
BN es una marca de fábrica de Dade Behring Marburg GmbH en USA.
** Partigen es una marca registrada de Dade Behring Marburg GmbH en Alemania y en otros países.
Dade Behring Marburg GmbH
Emil-von-Behring-Str. 76
D-35041 Marburg
N Antisoros contra os
Factores de Coagulação e
Inibidores C1 Humanos
Campo de aplicação
Reagentes para diagnóstico in vitro para a determinação dos factores de coagulação (fibrinogénio,
antitrombina III e plasminogénio) humana e inibidor de C1 (inactivador de C1, inibidor de C1-esterase)
no soro e plasma humanos, utilizando o Sistemas BN*.
Significado diagnóstico
Podem aparecer concentrações elevadas de fibrinogénio em processos inflamatórios, depois de traumatismos ou intervenções cirúrgicas importantes (“proteína da fase aguda”), assim como em tumores
metastizantes. Uma diminuição dos níveis plasmáticos de fibrinogénio é ocasionada por coagulopatías de consumo, como por exemplo DIC (coagulação intravascular disseminada), em hiperfibrinólisis primária, insuficiências hepáticas e deficiências de origem genética. Estudos epidemiológicos revelaram que concentrações elevadas de fibrinogénio no plasma, estão associadas a um risco elevado de
arteriosclerose(1).
Observa-se uma diminuição das taxas de antitrombina III em caso de DIC, trombose venosa reincidente da perna, insuficiência hepática, nefroses, deficiências de origem genética e durante tratamentos
com anticorpos à base de estrogéneos. Concentrações reduzidas de antitrombina III indicam um risco
mais elevado de complicações tromboembólicas(2).
Níveis elevados de plasminogénio podem aparecer no carcinoma da próstata, assim como os valores
diminuídos destes níveis são indicativos de insuficiências hepáticas, síndrome de asfixia nos recémnascidos e durante tratamentos fibrinóliticos terapêuticos.
De uma maneira geral, as determinações imunoquímicas, complementadas com a determinação da
actividade de diferentes factores de coagulação, podem fornecer informações preciosas (por exemplo
por tratamentos de substituição ou utilizando anticoagulantes orais). A determinação de fibrinogénio
para avaliar o risco de arteriosclerose pode ser efectuada por método imunoquímico(3).
O C1-inibidor é um regulador importante da via clássica de activação do complemento, o qual inibe a
actividade das serina proteases C1s e C1r (4). A determinação do inibidor de C1 ajuda no diagnóstico
de edemas angioneuróticos hereditários (permeabilidade elevada dos vasos sanguíneos e por conseguinte, inflamação do tecido), assim como também, de casos raros de edemas angioneuróticos associados a linfomas (carcinoma dos gânglios linfáticos). Uma deficiência de origem genética do Inibidor
de C1 conduz à revelação do edema anglioneurótico (HANE)(5,6). Uma deficiência adquirida do inibidor
de C1, revela doenças do sistema celular B, as quais podem ter lugar simultaneamente com uma
diminuição do inibidor de C1, por exemplo, em leucemia linfática crónica B, mieloma múltiplo e outros
linfomas malignos(5).
Princípio do método
As proteínas contidas no plasma ou no soro humano formam imunocomplexos com anticorpos específicos numa reacção imunoquímica, que dispersam um feixe de luz incidente. A intensidade da luz
dispersa depende da concentração da respectiva proteína na amostra. A determinação é realizada por
comparação com um padrão de concentração conhecida.
Reagentes
Conteúdo da embalagem
N Antisoro Fibrinogeneo Humano, cód. OSCA ou
N Antisoro Antitrombina III Humana, Cód. OSAY ou
N Antisoro Plasminogeneo Humano, Cód. OSCB ou
N Antisoro contra o Inibidor de C1-humano, Cód. OQEY
Cada embalagem contém 1 frasco de 2 ml.
Composição
Os N Antisoros são soros líquidos de origem animal, produzidos mediante imunização de coelhos com
fibrinogénio, antitrombina III, plasminogénio ou inibidor de C1 altamente purificados. Os componentes
lábeis são retirados dos antisoros utilizando um processo especial de estabilização.
As impurezas microbianas são eliminadas, de forma considerável, através da filtração e da adição de
azida de sódio (< 1 g/l) como conservante. Purificados por imunoadsorção na fase sólida, os anti-soros
específicos são sujeitos a um controlo especial e calibrados de forma a garantirem uma utilização
óptima nos sistemas BN*. Os títulos específicos do anticorpos (T) que são obtidos por imunodifusão
radial, estão indicados no rótulo do frasco correspondente. Este valor indica quantas mg de antigéneo
por 1 ml de antisoro se pode precipitar em gel agarose.
Advertências e medidas de precaução
1. Exclusivamente para diagnóstico in vitro.
2. Os reagentes contêm azida sódica, devem ser manipulados com precaução:
Não ingerir e evitar o contacto com a pele e as mucosas. A azida sódica, em presença de metais
pesados como o cobre ou chumbo, pode formar azidas explosivas.
Preparação dos reagentes
Os N Antisoros estão prontos para utilização e podem ser utilizados sem tratamento preliminar.
Estabilidade e condições de armazenagem
Conservação entre +2 e +8 °C:
A estabilidade está indicada no rótulo;
Estabilidade depois de aberto:
4 semanas desde que os frascos, imediatamente após o uso, sejam firmemente fechados e conservados entre +2 bis +8 °C para evitar a contaminação (p. ex., através de microorganismos);
Em caso de armazenagem, os N antisoros podem apresentar floculações ou turvações que não são
provocadas por contaminação microbiana e não prejudicam, de nenhum modo, a actividade. Nesses
casos, os antisoros deverão ser filtrados antes de serem usados. Para esse efeito, são adequados os
filtros descartáveis com um diâmetro de poros de 0,45 µm. Não congelar.
Estabilidade nos sistemas BN*:
5 dias com 8 horas ou um período de tempo equivalente (máximo de 40 horas);
Sistema BN* II: o aumento da estabilidade dos reagentes em caso de utilização de BN* II Evaporation
Stoppers (N.º de pedido OVLE) deverá ser retirada da instruções de serviço;
Sistema BN ProSpec®: a estabilidade dos reagentes deverá ser retirada das instruções de serviço.
Materiais necessários mas não fornecidos
Sistema BN*
N Standard de proteínas PY (humanas), cód. OUID
N/T Controlo de proteínas PY (humanas), COD. OWSY
N Tampão de Reacção, COD. OUMS
N Diluente, COD. OUMT
N reagente adicional/precipitação, Cód. OUMU
BN* II Evaporation Stoppers (opcionais), N.º de pedido OVLE
Material de consumo e equipamento tal como descrito nas instruções de serviço dos sistemas BN*.
Definição da curva de referência:
A curva de calibração é efectuada segundo uma calibração de vários pontos. As séries de diluições do
N Soro Padrão proteínas PY são efectuadas automaticamente com o N Diluente.
As curvas de calibração podem ser utilizadas tanto tempo quanto é possível, desde que, os controles
de exactidão realizados, por exemplo, com o N/T Controlo de proteínas PY se encontrem dentro dos
valores de intervalo de confiança. Deve ser estabelecida uma nova curva de calibração por cada novo
lote de antisoro.
Medição de amostras de pacientes
As amostras são diluídas e medidas automaticamente a 1 : 5 (antitrombina III, plasminogénio e inibidor
de C1) ou a 1 : 20 (fibrinogénio) com o N Diluente. Para os valores medidos que se encontrem fora do
escalão de medição, a medição pode ser repetida a partir de uma diluição de amostra superior (antitrombina III, plasminogénio e inibidor de C1 e fibrinogénio), ou a partir de uma diluição de amostra
inferior (fibrinogénio). As repetições de medição a partir de outras diluições de amostras estão descritas no manual de utilização dos sistemas BN*.
Controlo de qualidade interno
O N/T Controlo de proteína deverá ser utilizado após a preparação de uma curva de referência, após a
primeira abertura de um frasco de antisoro ou em cada série de amostras de plasma ou de soro. Na
preparação e na avaliação do teste, o controlo é tratado como amostras de paciente. Os valores teóricos e
os escalões de confiança deverão ser retirados da tabela de valores teóricos do controlo respectivo.
Cálculo dos resultados
Os resultados são calculados automaticamente mediante uma função log-logit.
Limitações do procedimento
As turvações e as partículas nas amostras podem perturbar a determinação. Por isso, as amostras
que contêm partículas deverão ser centrifugadas antes da determinação. O N antisoro contra os fibrinogénios humanos também abrange os produtos de dissociação dos fibrinogénios, de modo que não deverá
fazer-se uso da determinação imunoquímica dos fibrinogénios nas amostras que contêm tais produtos de
dissociação, como por exemplo, as dos pacientes sob terapia fibrinolítica (7).
Devido à técnica de fabricação e/ou amostras antigas, os resultados obtidos para o controlo das amostras
e avaliações inter laboratoriais podem diferir dependendo do método de ensaio utilizado. Pode ser necessário avaliar estes resultados em relação aos valores de referência específicos do método.
Valores esperados
Para amostras de plasma de adultos sãos, são válidos os seguintes escalões de referência.
Proteína
2,5 - 97,5% percentil
Fibrinogénio (8)
Antitrombina III (9)
Plasminogénio (10)
1,80 – 3,50 g/l
0,19 – 0,31 g/l
0,06 – 0,25 g/l
Inibidor de C1: Foram avaliadas amostras de plasma citratado de 399 dadores sãos, na Europa Central. O escalão de referência (2,5. bis 97,5 percentil) situou-se entre os 0,18 - 0,32 g/l. A avaliação de
370 amostras de soro, revelou um escalão de referência (2,5 a 97,5 percentil) de 0,21 - 0,39 g/l para
o N Antisoro, em comparação com o inibidor de C1.
Além disso, cada laboratório deverá determinar os seus escalões de referência próprios, já que estes
dependem de muitos factores que podem variar consoante a população examinada.
Características do teste
Sensibilidade
A sensibilidade da determinação é definida pela curva inferior da curva de referência e depende, assim, da concentração das proteínas no N Protein-Standard PY. Os escalões de medição típicos estão
indicados nas instruções de serviço dos sistemas BN*.
Especificidade
Os N antisoros contra a antitrombina III, o plasminogénio e o inibidor de C1 humanos são específicos
para a respectiva proteína. O N Antisoro contra o fibrinogénio humano engloba igualmente os produtos
de degradação do fibrinogénio (7).
Precisão
Com os N Antisoros contra os factores de coagulação humanos e o inibidor de C1 foram determinados
os seguintes coeficientes de variação (CV) no sistema BN*:
Proteína
n
Intra-série
Valor médio
[g/l]
CV
[%]
n
Inter-série
Valor médio
[g/l]
CV
[%]
Fibrinogénio
Antitrombina III
Plasminogénio
Inibidor de C1
30
29
30
30
2,03
0,22
0,094
0,23
2,7
1,5
1,5
1,5
10
10
10
10
2,06
0,21
0,095
0,24
2,6
1,3
3,5
1,6
Comparação de métodos
Foram medidas amostras de plasma com os N Antisoros contra os factores de coagulação humanos e
o inibidor de C1 e amostras séricas com o N antisoro contra o inibidor de C1 humano no sistema BN*
(y) e determinadas, comparativamente, com a imunodifusão radial (x) (Partigen**). A correlação dos
resultados apresenta os seguintes dados:
Proteína
Fibrinogénio
Antitrombina III
Plasminogénio
Inibidor de C1
Inibidor de C1
Procedimento
OQEY G09 E0540 (381) H
6
Edição Maia 2001
y (BN*) = 1,04 x (RID) + 0,07 g/l
y (BN*) = 0,88 x (RID) + 0,03 g/l
y (BN*) = 0,79 x (RID) + 0,03 g/l
y (BN*) = 0,89 x (RID) + 0,03 g/l
y (BN*) = 0,98 x (RID) + 0,02 g/l
Coeficiente
de correlação
0,99
0,90
0,92
0,95
0,96
Bibliografia
Vide a página 1.
BN ProSpec e uma marca registada da Dade Behring Marburg GmbH nos EUA, na Alemanha e
noutros países.
*
BN é uma marca de fábrica da Dade Behring Marburg GmbH nos EUA.
** Partigen e uma marca registada da Dade Behring Marburg GmbH na Alemanha e noutros países.
Dade Behring Marburg GmbH
Emil-von-Behring-Str. 76
D-35041 Marburg
Symbols Key / Symbolschlüssel / Explication des Symboles /
Interpretazione simboli / Clave de los Símbolos / Chave dos Símbolos
Manufactured by / Hergestellt von / Fabriqué par / Prodotto da / Fabricado por
IVD
In Vitro Diagnostic Medical Device / In Vitro Diagnosticum / Dispositif Médical
Diagnostic In Vitro / Dispositivo Medico per Diagnostica In Vitro / Producto sanitario
para Diagnóstico In Vitro
LOT
Lot Number / Chargenbezeichnung / Numéro de Lot / Numero di Lotto / Número de Lote
EXP
Expiration Date / Verfalldatum / Date de Péremtion / data di scadenza / Fecha de
vencimiento / termo da validade
CCYY-MM-DD
1. Os pormenores para a manipulação dos sistemas BN* deverão ser retirados das instruções de
serviço respectivas.
2. Os reagentes não deverão ser mais usados após a data de expiração indicada.
3. Antes da medição no sistema BN*A/BN* 100, é necessário que os reagentes e as amostras tenham
atingido a temperatura ambiente (+15 a +25°C). Os reagentes e as amostras armazenadas entre +2
a +8 °C podem ser utilizadas directamente no sistema BN* II/BN ProSpec® para a determinação.
Protocolos de ensaio nos sistemas BN*
Os protocolos de ensaio estão contidos nas instruções de serviço e no Software do aparelho respectivo. Todos os passos são executados automaticamente pelo sistema.
Regressão linear
Notas
Os valores indicados para as características dos testes representam resultados típicos e não devem
ser considerados como especificação para o N Antisoro contra o fibrinogénio, a antitrombina III, o
plasminogénio ou o inibidor de C1 humanos.
Amostras
Para a determinação dos factores de coagulação podem utilizar-se tanto plasmas EDTA, como plasmas
citratados. O inibidor de C1pode ser determinado em plasmas citratados e em soros humanos. Para a
medição, deverão ser utilizadas, de preferência, amostras frescas (conservar no máx. 8 dias, entre +2
e +8 °C). Se as amostras forem congeladas nas 24 horas subsequentes à colheita, a conservação é
possível até 1 ano, a uma temperatura inferior a -20 °C, se se evitar a repetição da descongelação e da
congelação. As amostras lipémicas ou as amostras congeladas que apresentem turbidez após descongelação, têm de ser clarificadas por centrifugação (10 min. a aprox. 15 000 x g). Devido à solução de
citrato, os plasmas citratados são diluídos em aprox. 17 %, em média. Não é de esperar qualquer
perturbação nos plasmas de pacientes sob terapia de heparina.
N° de
Amostras
28
30
29
50 Plasmas
50 A. séricas
8 C
2 C
Storage Temperature / Lagertemperatur / Température de Conservation / Temperatura
di conservazione / Temperatura de almacenamiento / Temperatura de armazenagem
CE Mark / CE-Zeichen / Marquage CE / Marchio CE / CE Marca / Marca CE
REF
Catalogue Number / Katalog Nummer / Référence / Codice Catalogo / Número de
Catálogo
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d'Utilisation / Istruzioni per l'uso / Consultar Instucciones para el Uso / Consulte as
Instruções de Utilização