Modulo III Diagnostico de Enteroparasitos Metodos de estudio

MÉTODOS DE ESTUDIO DE LAS
ENTEROPARASITOSIS
IMPORTANCIA
2

Diagnóstico de enteroparasitosis sintomáticas,
asintomáticas.

Diagnóstico diferencial de infecciones entéricas.

Diagnóstico diferencial con otras patologías del
aparato digestivo.

Tratamiento específico.

Valoración de respuesta al tratamiento.

Prevención.
ASIST.DRA.MARÍA JOSÉ CABRERA
3
DIAGNÓSTICO
DE ENTEROPARASITOSIS
ETAPAS DEL DIAGNÓSTICO
Pre-analítica
Analítica
Post-analítica
ASIST.DRA.MARÍA JOSÉ CABRERA
DIAGNÓSTICO DE
ENTEROPARASITOSIS
4
MÉTODOS DIRECTOS:

Coproparasitario

Coloraciones

Método de Graham - Espátula adhesiva

Sondeo Duodenal

Biopsia duodenal

Coproantígenos
MÉTODOS INDIRECTOS:

En suero: anticuerpos séricos

Amibiasis invasiva, estrongiloidiasis,fasciolosis,esquistosomiasis, etc
ASIST.DRA.MARÍA JOSÉ CABRERA
ETAPA PRE-ANALÍTICA
ASIST.DRA.MARÍA JOSÉ CABRERA
5
ETAPA PRE-ANALÍTICA
6
Indicaciones del examen parasitario

Pacientes con sintomatología sugestiva; pacientes asintomáticos con
antecedentes epidemiológicos relevantes; control o control post-tratamiento
Solicitud del examen parasitario

Datos filiatorios del paciente

Datos clínicos (síntomas y signos, diagnóstico clínico presuntivo)

Antecedentes personales: inmunosupresión, viajes al exterior

Antecedentes familiares

Antecedentes ambientales (agua potable, saneamiento)

Tratamientos previos anti diarreicos, antiparasitarios, antibióticos etc.
ASIST.DRA.MARÍA JOSÉ CABRERA
ETAPA PRE-ANALÍTICA
7
Indicación de Régimen alimentario

48 a 72 hs antes de realizarse el estudio (libre de frutas,
verduras y grasas dado que estas preparaciones obstaculizan
la visualización microscópica lo que puede conducir a
resultados Falsos Negativos o Falsos Positivos).

Necesario?
Emisión

Espontánea.

No en período menstrual, ni posterior a realización de
estudio radiológico con bario.
ASIST.DRA.MARÍA JOSÉ CABRERA
ETAPA PRE-ANALÍTICA
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Muestra de materia fecal

Aproximadamente 50 grs (tamaño de una nuez) si heces formadas,
o 10 a 15 ml si heces líquidas.

Rotular adecuadamente.

En recipiente de boca ancha, transparente y con tapa de rosca.

Emitidas recientemente o conservadas en heladera hasta 24 horas.

Evitar contaminación con orina para evitar deterioro de los
parásitos.
ASIST.DRA.MARÍA JOSÉ CABRERA
ETAPA ANALÍTICA
ASIST.DRA.MARÍA JOSÉ CABRERA
9
COPROPARASITARIO
10
DEFINICIÓN

Conjunto de técnicas diagnósticas complementarias que permiten la
identificación de la mayoría de las enteroparasitosis causadas por
protozoarios y helmintos intestinales o de aquellos que si bien tienen
una localización tesidual sus huevos se eliminan en las materias fecales.

Se debe tener en cuenta a la hora de su indicación que esta
metodología es útil para protozoarios y helmintos cuyas formas
evolutivas se eliminan con las materias fecales:

Trofozoítos

Quistes

Ooquistes

Huevos

Larvas

Adultos
ASIST.DRA.MARÍA JOSÉ CABRERA
EXAMEN COPROPARASITARIO
SERIADO
11

Se considera que muestras únicas solo permiten un diagnóstico positivo en
un 60% aprox. de las materias fecales con parásitos (debido a que en los
ciclos de los parásitos alternan períodos negativos de eliminación de
quistes) *

Esquemas sobre la secuencia de recolección de materia fecal para realizar el
examen coproparasitario. Los más usados son:

3 muestras seriadas en días alternos

3 muestras separadas por intervalos de una semana entre sí
* Manual de Toma de muestras para estudio Bacteriológico y Micológico.
ASIST.DRA.MARÍA JOSÉ CABRERA
Departamento de Laboratorio Clínico. Hospital de Clínicas. 2004.
EXAMEN MACROSCÓPICO
12

Consistencia: moldeada, pastosa, semilíquida, inhomogénea

Color: marrón, amarillo, macilla, negruzco, verdoso

Olor: “sui generis”, fétido, butírico

Presencia de elementos anormales: sangre, mucus, pus

Presencia de seudoparásitos

Búsqueda de parásitos macroscópicos
ASIST.DRA.MARÍA JOSÉ CABRERA
13
EXAMEN MACROSCÓPICO
ASIST.DRA.MARÍA JOSÉ CABRERA
EXAMEN MACROSCÓPICO
14

En el caso de hallar proglótides de Taenia:

Dejar en agua destilada durante 24hs

Colocar el segmento sobre un recuadro de papel

Comprimir entre dos láminas

Observar las ramificaciones del útero

También se pueden teñir con Carmín Clorhídrico
ASIST.DRA.MARÍA JOSÉ CABRERA
EXAMEN MICROSCÓPICO
15

Examen directo de una pequeña porción de heces frescas

Examen después de aplicar un método de concentración

Examen de frotis o preparaciones permanentes
EXAMEN DIRECTO

Suero Fisiológico

Lugol

Objetivo 10 x

Objetivo 25-40 x

Habitualmente no se emplea objetivo de inmersión

Importante: No diluir demasiado las muestras
ASIST.DRA.MARÍA JOSÉ CABRERA
EXAMEN MICROSCÓPICO
16
DIRECTO EN FRESCO CON SUERO FISIOLÓGICO Y LUGOL
Inconvenientes:

Escaso material, por lo que es necesario la realización de técnicas
de Enriquecimiento o Concentración (Ritchie, Faust, Sheater)
Ventajas:

Movilidad de trofozoítos, células intestinales, células inflamatorias,
mala absorción.
ASIST.DRA.MARÍA JOSÉ CABRERA
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MÉTODOS DE ENRIQUECIMIENTO
O CONCENTRACIÓN
Aumentan el número de parásitos a partir de un volumen conocido.
Procedimientos por
Sedimentación
Procedimientos por Flotación
Procedimientos Biológicos
ASIST.DRA.MARÍA JOSÉ CABRERA
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TÉCNICAS DE ENRIQUECIMIENTO
O CONCENTRACIÓN
MÉTODOS FÍSICOS
o Dilución minuciosa de heces en líquido o solución de densidad:
o Inferior a la de los parásitos (Técnicas de sedimentación)
o Superior a la de los parásitos (Técnicas de flotación)
o Ventajas:
o Realización muy simple
o Precisan poco material
o Inconvenientes:
o Procesos largos
o Exigen mucha manipulación
o No aplicables a series grandes de muestras
ASIST.DRA.MARÍA JOSÉ CABRERA
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MÉTODOS FÍSICOS
SEDIMENTACIÓN
SIMPLE
• Espontánea
ASIST.DRA.MARÍA JOSÉ CABRERA
SEDIMENTACIÓN CENTRIFUGACIÓN
• Ritchie (formol-éter)
• Telemann (éterácido clorhídrico)
• Carles y Barthélémy
(éter-ácido cítrico)
TÉCNICAS DE ENRIQUECIMIENTO
POR SEDIMENTACIÓN
20

Basados en la utilización de suero fisiológico (SF) y otras soluciones de
baja densidad.

Se recuperan huevos, larvas, ooquistes y quistes del fondo de un tubo
en el que se depositan por ser más densos.
SEDIMENTACIÓN SIMPLE

Lentos y poco prácticos

Mayor utilidad para huevos de trematodos
SEDIMENTACIÓN /CENTRIFUGACIÓN

Se destaca el método de Ritchie (con formol y éter o acetato de etilo),
que es el más usado en los laboratorios de nuestro medio
ASIST.DRA.MARÍA JOSÉ CABRERA
21
SEDIMENTACIÓN SIMPLE
o Homogeneizar 2 a 5 gr de heces (10-20 gr) en 10 ml de SF o agua.
o Colocar la dilución en tubo cónico de 50 ml, filtrando a través de gasa.
o Completar el volumen con SF o agua de la canilla.
o Agitar y dejar reposar por 45 minutos.
o Desechar sobrenadante.
o Resuspender con SF o agua de la canilla.
o Dejar sedimentar 45 minutos.
o Desechar sobrenadante.
o Repetir esta operación varias veces, hasta que el sobrenadante quede
transparente.
o Tomar con pipeta el material sedimentado.
o Hacer tres tomas:
o Superficie
o Media altura
ASIST.DRA.MARÍA JOSÉ CABRERA
o Fondo
Sensibilidad 55%
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MÉTODO DE RITCHIE
SEDIMENTACIÓN-CENTRIFUGACIÓN
o Homogeneizar materia fecal con SF (aprox. 25 ml).
o Filtrar suspensión por embudo con triple gasa a tubo de centrífuga de fondo
cónico.
o Centrifugar a 2300 rpm por 1 min, descartar sobrenadante, resuspender con SF
y agitar con varilla de vidrio.
o Centrifugar nuevamente a 2300 rpm por 1 min, repitiendo hasta 3 veces o hasta
obtener un sobrenadante límpido.
o Agregar al sedimento obtenido 3 a 5 ml de formol al 10%, homogeneizando con
varilla o pipeta Pasteur.
o Dejar reposar por 5 min con fines de fijación.
o Agregar 1 ml de éter o acetato de etilo, agitar vigorosamente el tubo tapado
para extraer las grasas.
o Centrifugar tubo a 1500 rpm durante 2 min.
o Descartar sobrenadante y limpiar la boca del tubo con hisopo de algodón.
o Tomar con pipeta el sedimento obtenido .
o Depositar sobre lamina y laminilla con SF y lugol parasitológico.
ASIST.DRA.MARÍA JOSÉ CABRERA
23
MÉTODO DE RITCHIE
Éter
Restos vegetales y
grasa
Formol 10%
Sedimento (Parásitos)
ASIST.DRA.MARÍA JOSÉ CABRERA
24
EQUIPOS COMERCIALES DE
SEDIMENTACIÓN - CENTRIFUGACIÓN
Aspectos comunes
• Unidades de
filtración
• Limpios
• Bioseguridad
ASIST.DRA.MARÍA JOSÉ CABRERA
Diferencias
• Tubos
• Con o sin
conservantes
• Con o sin
surfactante
• Cucharitas
• Hisopos
• Bolsas
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FECAL PARASITE CONCENTRATOR
JUMBO EVERGREEN ®
• Remplaza embudo y gasa.
• Los orificios del filtro permiten pasar larvas, huevos, quistes y retienen la mayor
parte de los desechos fecales.
• Surfactante Tritón x-100, disuelve y disgrega las heces y el mucus.
ASIST.DRA.MARÍA JOSÉ CABRERA
TÉCNICAS DE
ENRIQUECIMIENTO POR
FLOTACIÓN
26
FLOTACIÓN SIMPLE
• Bass
FLOTACIÓN CENTRIFUGACIÓN
• Faust (Sulfato de Zinc)
• Sheater modificado
(azúcar). Para
coccidios
• Bailinger (Éter y
Sulfato de Zinc)
• Quinn (Sulfato de
Magnesio)
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TÉCNICAS DE CONCENTRACIÓN
FLOTACIÓN
Los elementos parasitarios se recogen de la superficie de un
líquido denso al cual ascienden por su menor peso
específico.
Características a considerar:
Densidad solución empleada, densidad de parásitos,
concentración en superficie.
Importante:
• Manipular rápidamente
• Posible alteración en la morfología
de los huevos
Película
superficial
Sulfato Zinc
Sedimento
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MÉTODO DE BAERMANN
TÉCNICAS BIOLÓGICAS DE
CONCENTRACIÓN
Basados en el conocimiento
del ciclo vital del parásito

MÉTODO DE BAERMANN

Apropiado para el diagnóstico de
Estrongiloidiasis (aprovechando la
termofilia e hidrofilia de las larvas
de Strongyloides stercoralis)
ASIST.DRA.MARÍA JOSÉ CABRERA
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MÉTODO HARADA - MORI
TÉCNICAS BIOLÓGICAS DE
CONCENTRACIÓN

Busca embrionar huevos de
trematodes y cestodes.

Larvas de nematodes.

Strongyloides stercoralis
ASIST.DRA.MARÍA JOSÉ CABRERA
30
TÉCNICAS PARA RECUENTO
DE HUEVOS

Intensidad de infección de helmintos transmitidos por el suelo.

Cuantifican el número de huevos por gramo de materia fecal.

Recuento en placa microscópica.

Técnica de Kato – Katz.
ASIST.DRA.MARÍA JOSÉ CABRERA
31
COLORACIONES
Coloraciones temporarias
 Lugol, Clorazol, Tionina
Coloraciones permanentes (Frotis)
 Ziehl Neelsen modificado o Kinyoun para diagnóstico de
coccidiosis intestinales (Criptosporidiosis, Isosporosis,
Ciclosporosis)
 Hematoxilina Férrica para amibiasis
 Tricrómica y Gram Cromotrope para microsporidiosis
ASIST.DRA.MARÍA JOSÉ CABRERA
COLORACIÓN DE KINYOUN
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ZIEHL NEELSEN MODIFICADO EN FRÍO

PARA COCCIDIOS INTESTINALES

Fijación frotis: Metanol por 30 seg

Tinción: 5 min (frío) con solución de Fucsina básica


Fucsina básica 4 g

Fenol 8 g

Etanol (95%) 90 ml

Agua destilada 100 ml
Lavado

Etanol 50%: 3-5 min

Agua corriente

Decoloración: Ácido sulfúrico 1% por 2 min

Contracoloración: Verde de Malaquita o Azul de Metileno por 1-2 min
ASIST.DRA.MARÍA JOSÉ CABRERA
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OTROS EXAMENES DIRECTOS
PARA DIAGNÓSTICO DE
ENTEROPARASITOSIS
EXAMEN DIRECTO DE LÍQUIDO DUODENAL
o Se obtiene por sondeo duodenal o con cápsula entérica o test del cordón o
“Enterotest”
o Observación
o Fresco (directo o tras centrifugación)
o Frotis coloreados
o Utilidad / Rendimiento
o Trofozoítos de Giardia lamblia
o Ooquistes de Isospora y Cryptosporidium
o Huevos de Fasciola hepatica
o Larvas de Strongyloides stercoralis
ASIST.DRA.MARÍA JOSÉ CABRERA
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ELEMENTOS NO PARASITARIOS
EN LAS HECES
o Restos alimenticios semi-digeridos
o Células epiteliales (mucosa intestinal)
o Células sanguíneas
• Leucocitos (úlceras intestinales)
• Macrófagos  amebas patógenas
• Hematíes
o Bacterias
o Hongos
ASIST.DRA.MARÍA JOSÉ CABRERA
35
ELEMENTOS NO PARASITARIOS
EN LAS HECES
Restos alimenticios
o Tejido conjuntivo
o Fibras musculares estriadas (carne)
o Grasas neutras  Glóbulos refringentes tamaño variable
o Ácidos grasos  Agujas finas
o Almidón
o Crudo: Granos en capas concéntricas
o Células reserva amilácea
o Celulosa
o Digerible: Masas celulósicas (células reserva)
o No digerible: Traqueadas, pelos vegetales, polen etc.
ASIST.DRA.MARÍA JOSÉ CABRERA
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ELEMENTOS NO PARASITARIOS
EN LAS HECES
Cristales
o Origen alimentario (oxalato de calcio)
o Endógeno (Ox. calcio, fosfato amónicomagnésico, Charcot-Leyden)
o Medicamentos
ASIST.DRA.MARÍA JOSÉ CABRERA
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MÉTODO DE ESPÁTULA ADHESIVA
TÉCNICA DE GRAHAM
o Oxiurosis o Enterobiosis (Enterobius vermicularis)
o Observación microscópica del material recogido de la zona perianal, por aplicación de
una superficie adhesiva.
o La cinta se dispone sobre un soporte rígido, con la superficie adhesiva hacia el exterior.
o Se aplica varias veces sobre la piel de la región perianal sin introducir en el recto.
o Se envía al laboratorio y se observa al microscopio (10X).
IMPORTANTE
o Realizar la toma de muestra a 1ª hora por la mañana, antes de levantarse de la
cama, durante 3 mañanas consecutivas
ASIST.DRA.MARÍA JOSÉ CABRERA
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MÉTODO DE GRAHAM
DIAGNÓSTICO OXIURIOSIS
ASIST.DRA.MARÍA JOSÉ CABRERA
ETAPA POST-ANALÍTICA
ASIST.DRA.MARÍA JOSÉ CABRERA
39
ETAPA POST-ANALÍTICA
40

Validación

Informe correcto de los resultados

Importancia de la buena comunicación con
el médico clínico

Observaciones, orientaciones y sugerencias
ASIST.DRA.MARÍA JOSÉ CABRERA
METODOLOGÍA
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COLORACIONES
MACROSCÓPICO
• Ziehl Neelsen
• Tricrómica
• H. férrica
• Nematodes
• Platelmintos
ENRIQUECIMIENTO
COPROPARASITARIO
• Quistes de patógenos:
• Primarios
• Oportunistas
• Discutidos
EXAMEN DIRECTO
• Huevos
• Larvas
• Trofozoítos
• B. hominis
ESPÁTULA ADHESIVA
ASIST.DRA.MARÍA JOSÉ CABRERA
COPROANTÍGENOS
• G. lamblia
• Crypto. spp
• E. histolytica
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ORIENTACIÓN CLÍNICA
EOSINOFILIAS:
CPs+EA
DOLOR
ABDOMINAL:
CPs+EA
DIARREA DEL
ADULTO: CP
SÍNTOMAS
INESPECÍFICOS:
CP+EA
CUADROS CLÍNICOS
VINCULADOS A
ENTEROPARASITOSIS
DIARREA DEL
VIAJERO: CP+ZN
INMUNODEPRIMI
DOS CON
DIARREA:
CPs+ZN+TRIC+CA
g+CAcp
ASIST.DRA.MARÍA JOSÉ CABRERA
DIARREA
CRÓNICA CON
MALABSORCIÓN:
CPs+CAg
DIARREA AGUDA
INFANTIL,DIARRE
A PROLONGADA:
CP+ZN
43
MUCHAS GRACIAS
ASIST.DRA.MARÍA JOSÉ CABRERA