Materiales -Placas de petri -Tubos de ensayo -Agar

Materiales
-Placas de petri
-Tubos de ensayo
-Agar
-Mechero
ESTERILIZACIÓN DE LAS PLACAS DE PETRI
Primero, lavamos y secamos bien las placas de petri para esterilizarlas, seguidamente las
envolvemos en papel de aluminio y las introducimos en una olla a presión con cierta cantidad de agua sobre
un soporte y la ponemos al fuego hasta que comience la ebullición, cerramos la olla, le colocamos la válvula
y las dejamos 20 minutos al mínimo. Finalmente, sacamos las placas cerradas y sin que se mojen dejamos
que se enfríen para que después las envolvamos en papel transparente.
ESTERILIZACIÓN DE LOS TUBOS DE ENSAYO
Primero lavamos y secamos los tubos de ensayo, después con un soporte metálico que sirve para
calentar los alimentos sin que toquen el agua, introducimos el soporte en la olla a presión, colocamos los
tubos tumbados sobre el soporte, cerrados con algodón (cuidado de que el agua quede lejos del algodón) y
envueltos en papel de aluminio. Dejamos la olla al fuego hasta que comience la ebullición, cerramos la olla,
le colocamos la válvula y las dejamos 20 minutos al mínimo.
PREPARACIÓN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO
Nuestro medio de cultivo ha sido caldo extraído de un puchero. Hemos elegido este caldo porque
aparte del agua contiene gran cantidad de nutrientes como proteínas y grasas, necesarios para el desarrollo
de las bacterias. Además, filtramos el caldo, después lo volvimos a hervir y posteriormente lo volvimos a
filtrar y colar para quitarle posibles suspensiones o exceso de grasa.
Debéis preparar los dos medios que os indiqué, y añadir la glucosa antes de esterilizarlos.
Posteriormente a este caldo lo enriquecimos con glucosa para que el caldo fuera lo suficientemente
nutritivo. A 250 mL de caldo le añadimos 4g de glucosa, lo que supone una concentración de 1 6g/L.
Además, le echamos 3g de agar para conseguir los medios sólidos.
Para verter el caldo con el agar en las placas y en los tubos necesitamos una zona estéril y para ello
hemos limpiado la mesa con alcohol y teniendo siempre la llama del mechero bunsen cerca para crear una
corriente de convección que evita que los microorganismos del aire entren en nuestros tubos y placas.
Además a la hora de verter tenemos que tener dicha llama cerca para que la contaminación no ocurra.
Para los medios sólidos en placas de petri hemos echado simplemente el caldo enriquecido y con
agar, sin embargo, para realizar los medios sólidos en tubos los hemos inclinado para que nos permitan la
siembra en zig-zag. Del primer caldo de cultivo con seguimos hacer dos medios sólidos en placas petri y tres
medios sólidos inclinados en tubos de ensayo.
Algunas semanas después, al habernos quedado sin caldo para preparar medios líquidos, tuvimos
que volver a preparar un caldo sólo para los medios líquidos. Este caldo lo hicimos añadiéndole azúcar pero
no agar-agar ya que se trataba de un medio líquido.
Para nuestros medios líquidos hemos vertido y conservado este caldo enriquecido en tubos de en
sayo estériles y lo hemos utilizado para sembrar las bacterias que extraemos de los nódulos de tuberculosis
machacados. Posteriormente, a partir de estos tubos con las bacterias hemos ido sembrando en los
diferentes medios sólidos, tanto en placas como en tubos de ensayo.