Trabajo presentado

Aislamiento e identificación molecular de cepas bacterianas
procedentes de suelos industriales contaminados
P. García*, P. Pinilla, M. Pirredda, M. Gil-Díaz, M.C. Lobo
Instituto Madrileño de Investigación y Desarrollo Rural, Agrario y Alimentario (IMIDRA).
Finca Experimental “El Encín” A-2, Km 38,2 28800-Alcalá de Henares, Madrid,
España.
*pilar.garcia.gonzalo@madrid.org
La recuperación biológica de suelos contaminados debido a la actividad industrial
requiere del análisis previo de los microorganismos presentes en el emplazamiento a
remediar así como del estudio de su potencial degradativo.
El objetivo de este trabajo es el aislamiento e identificación por métodos moleculares
de cepas bacterianas presentes en cinco emplazamientos afectados por actividades
industriales, contaminados por hidrocarburos y metales pesados.
El aislamiento de cepas bacterianas degradadoras de hidrocarburos se llevó a cabo
mediante incubación de 4 g de muestras de suelo en medio MM a 30ºC durante 15
días. A partir de estas suspensiones se realizaron diluciones seriadas y se sembraron
en placas con medio MM suplementado con diesel (0,2% v/v) así como en placas con
medio MM y como fuente de carbono y energía se agregó naftaleno, fenantreno y
antraceno (2ppm). En total se aislaron 16 colonias, algunas con idéntica morfología en
cultivo en placa.
Para la diferenciación de ribotipos procedentes de los aislamientos se realizó la
amplificación selectiva de la región variable V3 del ADNr 16s con los cebadores 341FGC y 907R y la separación de los productos de PCR por electroforesis en gradiente
desnaturalizante (DGGE). Del conjunto de muestras analizadas se encontraron 8
patrones diferenciados.
A partir del ADN de cada cepa diferenciada se amplificó el gen ARNr 16s con los
cebadores universales 27F y 1392R y los productos de amplificación se secuenciaron
y compararon con otras secuencias en cuatro bases de datos. Con índices de
identidad del 99-100% se determinaron las especies pertenecientes a
bProteobacteria: Ralstonia picketti, Ralstonia eutropha, Massilia aerilata y
Achromobacter xilosoxidans. En la clase g-Proteobacteria se identificaron
Pseudomonas stutzeri, Acinetobacter junii y Enterobacter cloacae y para el phylum
Firmicutes se determinó Staphylococcus epidermis.
Se discute el predominio de miembros del phylum Proteobacteria asociados a suelos
contaminados con hidrocarburos así como el potencial biorremediador de Ralstonia
picketti y Ralstonia eutropha capaces, respectivamente, de crecer en suelos
contaminados por metales pesados y degradar componentes aromáticos clorados.