Trabajo Práctico: CROMATOGRAFÍA GAS

QUÍMICA ANALÍTICA II – 2015
Trabajo Práctico: CROMATOGRAFÍA GAS-LÍQUIDO. CUANTIFICACIÓN DE DOS SOLVENTES EN UNA
MUESTRA COMERCIAL. USO DE PATRÓN INTERNO.
Introducción
En cromatografía existen ciertos parámetros difíciles de reproducir de experimento en experimento, entre los
que pueden mencionarse las variaciones del caudal del gas transportador y del volumen de muestra que se
inyecta en el cromatógrafo.
Por otra parte, una curva de calibración es válida para la determinación de muestras incógnita si se
mantiene el conjunto de condiciones experimentales bajo las cuales se obtuvo. Por lo tanto, para eliminar el
efecto producido en la señal debido a estas pequeñas variaciones involuntarias, se recurre al método de
patrón interno.
Se llama patrón interno al compuesto, diferente del analito, que se agrega en una cantidad exactamente
conocida a la muestra incógnita y a cada estándar de la curva de calibración. Este compuesto debe reunir
ciertas características básicas: tener una estructura química similar a la del analito y que los tiempos de
retención entre ambos sean cercanos. De este modo, la relación de las áreas entre analito y patrón interno
sirve como parámetro analítico. Esto se debe a que la respuesta relativa del detector, tanto para el analito
como para el patrón interno, es prácticamente constante en un amplio intervalo de condiciones.
Es importante destacar la diferencia que existe entre el método de patrón interno y el método de adición de
patrón. En el primer caso, la sustancia patrón que se introduce es diferente al analito. En el segundo, la
sustancia patrón adicionada es igual al analito.
En este trabajo práctico, como parte de un proceso de control de calidad, se desea cuantificar los
componentes activos de un quitaesmalte de uñas (acetona y acetato de etilo), aplicando cromatografía
gaseosa y realizando curva de calibración con patrón interno.
Objetivo
Cuantificar dos de los componentes de un producto cosmetológico utilizando cromatografía gas-líquido con
patrón interno.
Parte experimental
Instrumento: Cromatógrafo Perkin Elmer Autosystem XL. Columna: capilar PE – 1 (dimetil polisilano).
Longitud: 30 m. Diámetro interno: 0.25 mm. Temperatura máxima (en condición isotérmica): 280 ºC,
Temperatura máxima (con rampa): 300 ºC. Detector: FID. Gas transportador: N2.
Parámetros establecidos: Temperatura detector: 200 ºC. Temperatura del inyector: 170 ºC. Temperatura del
horno: 37 ºC. Volumen de inyección: 1 µL. Relación de split: 99/1. Tiempo de análisis: 3 a 4 minutos por
muestra.
Reactivos y materiales
Estándares de calibración: acetona, acetato de etilo
Matraces de 5,00 mL
Patrón interno: metanol
Micropipeta y tips
1
Muestras de quitaesmalte: Cutex, contiene especialmente acetato de etilo
Pipeta par enrasar
Doreé, contiene especialmente acetona
Microjeringa Hamilton
Agua destilada
Procedimiento
Preparar los estándares de calibración y las muestras de quitaesmalte según se indica en las siguientes
tablas:
Acetona
(%V/V)
Acetato de Etilo
Vol. a
Área
pipetear
integrada
(µL)
acetona
(%V/V)
Metanol (pi)
Vol. a
Área
pipetear
(µL)
(%V/V)
Vol. a
Área
integrada
pipetear
integrada
acetato
(µL)
metanol
E1
1,00
50
0,00
0
1,50
75
E2
0,00
0
2,50
125
1,50
75
E3
0,50
25
0,50
25
1,50
75
E4
1,00
50
1,00
50
1,50
75
E5
1,50
75
1,50
75
1,50
75
E6
2,00
100
2,00
100
1,50
75
Vol. a pipetear
Metanol
Vol. a
Área
Área
Área
de muestra
(pi) (%V/V)
pipetear
integrada
integrada
integrada
(µL)
metanol
acetona
acetato
(µL)
quitaesmalte
200
1,50
75
200
1,50
75
Cutex
quitaesmalte
Doreé
Todas las soluciones se llevan a volumen final de 5,00 mL.
Realizar la cromatografía de cada uno de los estándares y de las muestras de quitaesmalte. Tomar registro
del área.
Procesamiento de datos
Construir las curvas de calibración (una curva para acetona y otra para acetato de etilo). Se grafica (AE/Api)
vs. (CE/Cpi), en donde:
AE: área de pico de solvente para cada estándar
Api: área de pico del patrón interno (metanol)
CE: concentración de solvente para cada estándar
Cpi: concentración del patrón interno (metanol)
Realizar el ajuste lineal de cada curva y en base a ello determinar las concentraciones de los analitos
(acetona y acetato de etilo) en las muestras incógnitas. Informar los resultados en % V/V.
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