OBTENCIÓN Y CARACTERIZACIÓN DE UN CULTIVO DE CÉLULAS FOLÍCULO ESTELARES DE ADENOHIPÓFISIS DE RATA García-Godínez A, Báez-Luna E, de la Vega MT, Toriz CG, Solano-Agana C, Mendoza-Garrido ME. Departamento de Fisiología Biofísica y Neurociencias del CINVESTAV -IPN El lóbulo anterior de la hipófisis está compuesto por células secretoras y no secretoras. De las células no secretoras, las folículo estelares (FE) son las más numerosas (corresponden al 5-10% del total de las células adenohipofisiarias), son de tipo glial-astrocítico, presentan una forma estelar, extienden prolongaciones citoplasmáticas que se interponen entre células secretoras, y algunas forman folículos; de ahí su nombre. Se sabe que las células FE participan en el mantenimiento y soporte de las células secretoras así como en el control de la secreción hormonal. Las células FE se unen entre sí a través de uniones comunicante, adherentes, desmosomas y solo las que forman los folículos hacen uniones oclusoras (1, 2, 3). De lo anterior se deduce que las células FE son unas células que expresan dos fenotipos, uno fibroblastoide/glial y otro epitelial. A nosotros nos interesa estudiar la organización de los complejos de adhesión así como la organización del citoesqueleto de las células FE. Para ello decidimos utilizar el modelo de cultivo celular, por lo que nuestro primer objetivo fue obtener un cultivo primario de células FE. Separamos a las células FE de las secretoras en función de su mayor adhesividad al sustrato, así como de su capacidad de proliferar en cultivo. De ahí que la suspensión celular se incubó durante 2 h seguido de la remoción de las células poco adheridas a una matriz de colágena I/III. Después de varios días, las células fibroblastoides que proliferaron se levantaron (primer pasaje) para extender el cultivo. Las células del segundo pasaje se sembraron sobre cubre objetos cubiertos con diferentes sustratos de adhesión: colágena I/III ó IV, fibronectina y poli-lisina y se cultivaron con un medio enriquecido con 10% sfb durante 48 h. Para determinar el tipo celular de los cultivos así como la pureza de los mismos se analizó la expresión de los marcadores de las células FE: la proteína S-100β, la GFAP y vimentina. Además, se estudió la organización del citoesqueleto de actina y de la E-cadherina. Estas células tienden a organizarse en forma de cúmulos. Al analizar la expresión de los marcadores de las células FE observamos que a las 24 h del cultivo todavía tenemos células secretoras. Después del segundo pasaje todas las células del cultivo expresan los marcadores. En los cultivos del segundo pasaje se observa que las células extienden prolongaciones citoplasmáticas, hasta que estas encuentran a otra célula FE. En el extremo de las prolongaciones, en el área donde se unen a los cúmulos, se expresa E-cadherina y en forma de malla de gallinero no completa se observa esta proteína de las uniones adherentes en el centro de los cúmulos. Este patrón fue semejante independientemente del sustrato utilizado. La actina filamentosa de las células FE se encuentra organizada en forma de fibras de estrés y se presentan lamelipodios en los extremos de las células aisladas, esto último sugiere que las células se encuentran migrando. De manera interesante encontramos que la proteína S100β se encuentra asociada preferentemente a los microfilamentos y no a los microtúbulos en las células FE. Como conclusión podemos decir que conseguimos un cultivo primario de células FE puro que expresa un fenotipo fibroblastoide y no epitelial. 1. 2. 3. Herbert DC, (1979). Intercellular Junctions in the Rhesus Monkey Pars Distalis. Anat. Rec. 195: 1-6. Morand I, Fonlupt P, Guerrier A, Trouillas J, Calle A, Remy C, Rousset B, Munari-Silem Y. Cell-to-cell communication in the anterior pituitary: evidence for gap junction-mediated exchanges between endocrine cells and folliculostellate cells. Endocrinology. 1996 Aug;137(8):3356-67. Shirasawa N, Mabuchi Y, Sakuma E, Horiuchi O, Yashiro T, Kikuchi M, Hashimoto Y, Tsuruo Y, Herbert DC, Soji T, (2004). Intercellular Communication Within the Rat Anterior Pituitary Gland X: Inmunohistocytochemistry of S-100 and Connexin 43 of Folliculo-Stellate Cells in the Rat Anterior Pituitary Gland. The Anatomical Record Part A, 278A: 462473.