INSTITUTO DE SALUD PÚBLICA DE CHILE SUBDEPARTAMENTO LABORATORIOS DEL AMBIENTE SECCIÓN QUÍMICA DE ALIMENTOS DETERMINACIÓN DE GRASA Método Bligh y Dyer PRT: 701.04-156 Rev. 0 Pag.1 de 2 1. OBJETIVO Obtener la grasa de un alimento homogeneizado mediante extracción directa con disolventes en frío. 2. CAMPO DE APLICACION Esta técnica será aplicada a muestras de alimentos especialmente para extraer lípidos para identificación por cromatografía de gases y pruebas de rancidez. 3. FUNDAMENTO El método se basa en la homogeneización de alimentos húmedos con metanol y cloroformo en proporciones tales que forman una fase sencilla miscible con el agua en los alimentos, que al adicionar posteriormente cloroformo y agua se separan dos fases con los materiales lípidos en la capa de cloroformo. 4. REFERENCIAS Análisis Químico de Alimentos de Pearson. Egan, H; Kirk R y Sawyer R. Compañia Editorial Continental, México. 1988. 5. TERMINOLOGÍA NA 6. MATERIALES INSUMOS Y EQUIPOS 6.1 MATERIALES Y EQUIPOS 6.1.1 6.1.2 6.1.3 6.1.4 6.1.5 6.1.6 6.1.7 6.1.8 Balanza analítica Ultraturrax Centrífuga Rotavapor Estufa Micropipeta Vórtex Material usual de laboratorio: filtros, vasos, tubos tapa rosca, etc. 6.2 REACTIVOS INSTITUTO DE SALUD PÚBLICA DE CHILE SUBDEPARTAMENTO LABORATORIOS DEL AMBIENTE SECCIÓN QUÍMICA DE ALIMENTOS DETERMINACIÓN DE GRASA Método Bligh y Dyer PRT: 701.04-156 Rev. 0 Pag.2 de 2 6.2.1 6.2.2 6.2.3 6.2.4 7 Metanol p.a. Cloroformo p.a. Hidróxido de potasio p.a. Éter de petróleo DESARROLLO DEL PROCESO 7.1 7.1.1 7.1.2 7.1.3 7.1.4 7.1.5 7.1.6 7.1.7 7.1.8 7.1.11 7.1.12 7.1.13 Preparación de las muestras Homogeneizar la muestra previamente analizada o conocida su humedad. Pesar en vaso precipitado de 250 mL aproximadamente 10 g de muestra exactamente pesados. Agregar agua desionizada en tal cantidad que el total de agua presente sea 16 mL. Agregar 40 mL de metanol Agregar 20,0 mL de cloroformo con pipeta volumétrica, extraer por 2 minutos con ultraturrax Agregar nuevamente 20,0 mL de cloroformo y extraer por 30 segundos con ultraturrax Agregar 20 ml de agua y extraer por 30 segundos con ultraturrax Distribuir el contenido en tubos de centrífuga de 50 mL y centrifugar por 10 minutos a 2000 – 2500 rpm. Extraer con jeringa de 10 mL la capa inferior de cloroformo de cada tubo sin perturbar las capas flotantes, filtrarlo por papel plegado y recibir el filtrado en erlenmayer de 50 mL. Tomar una alícuota de 25,0 mL del filtrado con pipeta volumétrica y trasvasijar a un matraz redondo de fondo plano de 100 mL previamente secado, pesado y mantenido en desecador. Evaporar el cloroformo en rotavapor a 60 °C. Completar el secado en estufa de vacío a 60 °C por 2 horas. Enfriar en desecador Pesar el matraz con la grasa. 7.2 Expresión de resultados 7.1.9 7.1.10 A (g/100g) = A P1 P2 VT Va VT x P2 ----------------------Va x P1 : Concentración en g/100g (%) de grasa : Peso de la muestra : Peso de la grasa seca obtenida : Volumen total de cloroformo (40 mL) : Volumen de la alícuota de cloroformo tomada (25 mL)