PROCEDIMIENTO PARA LA EMISION DE DOCUMENTOS

DETERMINACIÓN DE GRASA
Método Bligh & Dyer
Sección Química de
Alimentos y Nutrición
ME-711.02-156
Emisión:
12-01-2009
Versión: 1
Actualización:
23-06-2014
Página 1 de 4
1.
OBJETIVO
Obtener la grasa de un alimento homogenizado mediante extracción directa con disolventes en
frío.
2.
CAMPO DE APLICACIÓN Y ALCANCE
Esta técnica será aplicada a muestras de alimentos especialmente para extraer lípidos en frío
para identificación por cromatografía de gases y pruebas de rancidez.
3.
FUNDAMENTO
El método se basa en la homogeneización de alimentos húmedos con metanol y cloroformo en
proporciones tales que forman una fase sencilla miscible con el agua en los alimentos, que al
adicionar posteriormente cloroformo y agua se separan dos fases con los materiales lípidos en
la capa de cloroformo.
4.
DOCUMENTOS DE REFERENCIAS
4.1
Bligh,E.G. and Dyer,W.J. 1959. A rapid method for total lipid extraction and
purification. (Can. J.Biochem.Physiol. 37:911-917.)
4.2
Análisis Químico de Alimentos de Pearson. Egan, H; Kirk R y Sawyer R. Compañía
Editorial Continental, México. 1988.
5.
TERMINOLOGÍA
No aplica
6.
REACTIVOS, INSUMOS Y EQUIPOS
6.1
Reactivos.
6.1.1
Metanol p.a.
6.1.2
Cloroformo p.a.
6.1.3
Hidróxido de potasio p.a.
6.1.4
Éter de petróleo.
6.2
6.2.1
6.2.2
6.2.3
6.2.4
6.2.5
6.2.6
6.2.7
Insumos.
Navecillas.
Tubos para centrífuga 50 mL.
Papel filtro whatman # 1
Micropipeta volumen variable 10000 µL.
Pipeta volumétrica.
Matraz redondo de fondo plano.
Matraz Erlenmeyer 50 mL.
DUEÑO DE PROCESO:
Encargado del Laboratorio
Nutrientes, Aditivos y
Contaminantes
ESTE DOCUMENTO FUERA DE LA INTRANET
O IMPRESO SIN TIMBRE DE “DOCUMENTO
CONTROLADO” SE CONSIDERA COPIA NO
CONTROLADA
APROBADO:
Jefe Subdepartamento
Alimentos y Nutrición
DETERMINACIÓN DE GRASA
Método Bligh & Dyer
Sección Química de
Alimentos y Nutrición
6.3
6.3.1
6.3.2
6.3.3
6.3.4
6.3.5
6.3.6
7.
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Emisión:
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Versión: 1
Actualización:
23-06-2014
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Equipos.
Balanza analítica rango 0,01g.
Homogenizador ultraturrax.
Centrífuga.
Rotavapor.
Estufa.
Vortex.
DESCRIPCIÓN DE ACTIVIDADES
7.1
Muestreo / Muestra
No aplica
7.2
Preparación de Reactivos
No aplica.
7.3
Preparación de curva de calibración
No aplica.
7.4
Preparación de controles
No aplica.
7.5
Preparación de la Muestra
7.5.1
Previo a la determinación de grasa en la muestra, debe ser calculada su humedad
según ME-711.02-023 y registrar en el registro correspondiente.
7.6
Análisis de la muestra o realización de la medición.
7.6.1
Pesar aproximadamente 10 g de muestra y colocar en recipiente adecuado para la
homogeneización.
Agregar agua desionizada en cantidad suficiente para que la proporción final de
agua sea 16 mL.
Agregar 40 mL de metanol.
Agregar 20 mL de cloroformo con pipeta volumétrica y extraer por 2 minutos con
homogenizador.
Agregar nuevamente 20 mL de cloroformo y extraer por 30 segundos con
homogenizador.
Agregar 20 mL de agua y extraer por 30 segundos con homogeneizador ultraturrax.
Distribuir el contenido en tubos de centrífuga de 50 mL y centrifugar por 10 minutos
entre 2000 –2500 rpm.
7.6.2
7.6.3
7.6.4
7.6.5
7.6.6
7.6.7
DETERMINACIÓN DE GRASA
Método Bligh & Dyer
Sección Química de
Alimentos y Nutrición
7.6.8
7.6.9
7.6.10
7.6.11
7.7
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Emisión:
12-01-2009
Versión: 1
Actualización:
23-06-2014
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Extraer la capa inferior de cloroformo con jeringa de cada tubo sin perturbar las
capas flotantes, filtrar por papel plegado y recibir el filtrado en matraz Erlenmeyer de
50 mL.
Tomar una alícuota de 25 mL del filtrado con pipeta volumétrica y trasvasijar a un
matraz redondo de fondo plano de 100 mL previamente secado, pesado y mantenido
en desecador.
Evaporar el cloroformo en rotavapor a 60 °C.
Completar el secado en estufa de vacío a 60 °C por 2 horas. Enfriar en desecador.
Pesar el matraz con la grasa.
Cálculo de Resultados.
A (g/100g) =
A:
P1:
P2:
VT:
Va:
VT * P2 *100
Va * P1
concentración en g/100g (%) de grasa
peso de la muestra
peso de la grasa seca obtenida
volumen total de cloroformo (40 mL)
volumen de la alícuota de cloroformo tomada (25 mL)
7.8
Aseguramiento de la calidad del ensayo.
7.8.1
Para asegurar los resultados del ensayo cada muestra para análisis se realiza en
duplicado.
7.9
Expresión de los Resultados.
7.9.1 Los resultados se expresan en gramos de grasa/100 gramos de muestra.
8.
CONTROL DE REGISTROS
IDENTIFICACION
RESPONSABLE
RG-711.00.078
Registro de
Análisis de análisis
proximal en
alimentos
Profesionales y
Técnicos
Laboratorio de
nutrientes,
Aditivos y
Contaminantes
TIEMPO
5 años
ALMACENAMIENTO
MEDIO
IDENTIFICACION
SOPORTE
Papel
Estante Laboratorio
Nutrientes, Aditivos
y Contaminantes/
Cuadernillo anillado.
RESPONSABLE
5 años.
Destrucción del
documento.
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9.
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CONTROL DE CAMBIOS
VERSION
FECHA
PRINCIPALES
PUNTOS
MODIFICADOS
0
23-06-2014
Todos
10.
RESUMEN DE MODIFICACIONES
Cambio de formato PRT-711.02-156 a
ME-711.02-156
CUADRO DE RESPONSABILIDADES
Ejecuta el método
Técnico de laboratorio
Encargado de laboratorio
11.
No Aplica.
ANEXOS
Elabora el informe de
resultados
Encargado de laboratorio
Aprueba el informe de
resultados
Jefe de Subdepto. Alimentos
y Nutrición