BD Brilliant Green Agar

INSTRUCCIONES DE USO –
MEDIO EN PLACAS LISTO
PARA SU USO
PA-212097.07
Rev.: Oct 2013
BD Brilliant Green Agar
USO PREVISTO
BD Brilliant Green Agar (agar verde brillante) es un medio altamente selectivo utilizado para el
aislamiento de Salmonellae distintas de S. typhi a partir de heces y otras muestras clínicas.
PRINCIPIOS Y EXPLICACION DEL PROCEDIMIENTO
Método microbiológico.
Kristensen et al. fueron los primeros en describir el uso del agar verde brillante para el
aislamiento de Salmonella1. Mas adelante Kauffmann modificó el medio2. Se ha demostrado
que el medio permite la inoculación de inóculos densos en marcos clínicos y no clínicos. El
medio se menciona en la Farmacopea de los Estados Unidos (United States Pharmacopoeia,
USP) en relación con los procedimientos microbiológicos para comprobar la ausencia de
microorganismos específicos—suplementos nutricionales y dietéticos (Microbiological
procedures for absence of specified microorganisms—nutritional and dietary supplements), y se
emplea para el examen de productos lácteos y en manuales de microbiología clínica.3-8.
En BD Brilliant Green Agar los nutrientes los aportan el extracto de levadura y dos peptonas;
la lactosa y sacarosa con rojo fenol forman un sistema de diferenciación para excluir los
fermentadores de lactosa o sacarosa (p. ej. E. coli), mientras que las salmonellas no producen
ácidos a partir de estos azúcares. El verde brillante es el agente selectivo para inhibir la flora
acompañante.
REACTIVOS
Formula* por litro de agua destilada
BD Brilliant Green Agar
Extracto de levadura
3,0 g
Peptona de proteosa Bacto
10,0
Lactosa
10,0
Sacarosa
10,0
Cloruro sódico
5,0
Rojo fenol
0,08
Agar
20,0
Verde brillante
12,5 mg
pH 6,9 +/- 0,2
*Ajustada o suplementada para satisfacer los criterios de rendimiento.
PRECAUCIONES
. Para uso exclusivo por parte de profesionales.
No usar placas que presenten señales de contaminación microbiana, decoloración, desecación,
roturas u otras señales de deterioro.
Consultar en las INSTRUCCIONES GENERALES DE USO los procedimientos de
manipulación aséptica, peligros biológicos y eliminación del producto después de su uso.
ALMACENAMIENTO Y VIDA UTIL
Al recibir las placas, almacenarlas en un lugar oscuro a una temperatura entre 2 y 8 °C,
envueltas en su envase original, hasta justo antes de usarlas. Evitar la congelación y el
calentamiento excesivo. Las placas pueden inocularse hasta su fecha de caducidad (ver la
etiqueta en el paquete) e incubarse durante los períodos de incubación recomendados.
Las placas de grupos de 10 placas ya abiertos pueden usarse durante una semana siempre que
se almacenen en un lugar limpio a una temperatura entre 2 y 8 °C.
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CONTROL DE CALIDAD DEL USUARIO
Inocular muestras representativas con las siguientes cepas (consultar las INSTRUCCIONES
GENERALES DE USO para obtener instrucciones detalladas). Incubar las placas en
condiciones aerobias a una temperatura entre 35 y 37 °C, por un período de 18 a 48 horas.
Cepas
Escherichia coli
ATCC 25922
Enterococcus faecalis
ATCC 29212
Salmonella Abony DSM 4224
Salmonella Typhimurium
ATCC 14028
Sin inocular
Resultados del crecimiento
Crecimiento entre nulo y moderado, colonias entre amarillas
y amarillas verdosas, halo amarillo.
Crecimiento entre nulo y ligero, colonias amarillas con o sin
halo amarillo.
Entre 10 y 100 colonias, colonias blanquecinas, halo rojo
Crecimiento entre bueno y excelente, colonias
blanquecinas, halo rojo
Coloración entre marrón y aceituna
PROCEDIMIENTO
Materiales suministrados
BD Brilliant Green Agar (placas Stacker de 90 mm). Controladas microbiológicamente.
Materiales no suministrados
Medios de cultivo auxiliares, reactivos y equipo de laboratorio que se requiera.
Tipos de muestras
Torundas fecales o rectales de pacientes en quienes se sospecha una infección por especies
de Salmonella distintas de S. typhi (ver también CARACTERÍSTICAS DE RENDIMIENTO Y
LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO). El medio se emplea también para alimentos o
material de origen animal.
Procedimiento de análisis
Hacer un frotis de la muestra directamente o inocular el medio con una cantidad pequeña de
crecimiento proveniente de un medio líquido de enriquecimiento como caldo de tetrationato.
Deben incluirse además uno o dos medios menos selectivos, sobre todo si es baja la
población presente en el material. Hacer un frotis para diluir, incubar las placas en condiciones
aerobias a una temperatura entre 35 y 37 °C, por un período de 42 a 48 horas. Tomar una
lectura de las placas después de un período entre 18 y 24 horas y entre 42 y 48 horas.
Resultados
El aspecto típico de los organismos en BD Brilliant Green Agar es el siguiente:
Microorganismos
Resultados
Salmonella (distinta de S. Typhi y Colonias entre blancas y rojas, rodeadas de zonas rojas
S. Paratyphi)
S. Typhi y S. Paratyphi
Crecimiento nulo, o sólo trazas de éste
Especies de Shigella.
Escherichia coli, Klebsiella y
Enterobacter
Pseudomonas
Bacterias gram-positivas
Crecimiento nulo, o sólo trazas de éste
Colonias entre amarillo y verdoso rodeadas por zonas
amarillo verdosas
Crecimiento nulo, o sólo trazas de éste
Crecimiento nulo, o sólo trazas de éste
CARACTERISTICAS DE RENDIMIENTO Y LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO
BD Brilliant Green Agar es un medio altamente selectivo para el aislamiento de Salmonella,
que permite el aislamiento de dichos organismos incluso a partir de materiales muy
contaminados, incluidas las heces 4-8.
También deberán inocularse con la muestra o el material medios menos selectivos para el
aislamiento de Salmonella, y una placa de agar MacConkey II. Proteus puede asemejarse a
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patógenos entéricos mediante la producción de colonias entre blancas y rojas rodeadas de
zonas rojas.
Aunque crecerán ciertas cepas, BD Brilliant Green Agar no es adecuado para el aislamiento
de Salmonella Typhi y S. Paratyphi.
Ciertas pruebas diagnósticas pueden efectuarse directamente en este medio; no obstante,
para lograr la identificación total se necesitan pruebas bioquímicas y serológicas usando
cultivos puros.
REFERENCIAS
1. Kristensen, M., V. Lester, and A Jurgens. 1925. On the use of trypsinized casein, brom
thymol blue, brom cresol purple, phenol red and brilliant green for bacteriological nutrient
media. Brit. J. Exp. Pathol. 6: 291.
2. Kauffmann, F. 1935. Weitere Erfahrungen mit den kombinierten Anreicherungsverfahren für
Salmonellabacillen. Z. Hyg. Infektionskr. 117: 26.
3. The United States Pharmacopeial Convention. The United States Pharmacopeia-National
formulary, current edition. U.S. Pharmacopeial Convention, Inc., Rockville, Md.
4. Flowers, R.S., W. Andrews, C.W. Donelly, and E. Koenig. 1993. Pathogens in milk and milk
products, p. 103-212. In: R.T. Marshall (ed.). Standard methods for the examination of dairy
5. products, 16th ed. American Public Health Association, Washington DC, USA.
6. Osborn, W.W., and J.L. Stokes. 1955. The determination of Salmonellae in foods. Food and
Drug Laboratories, Ottawa, Canada.
7. MacFaddin, J. 1985. Media for the isolation-cultivation- identification-maintenance of medical
bacteria. Williams and Wilkins, Baltimore, USA.
8. Bopp, C. A., F. W. Brenner, P. I. Fields, J. G. Wells, and N. A. Stockbrine. 2003.
Escherichia, Shigella, and Salmonella. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A.
Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for
Microbiology, Washington, D.C.
ENVASE Y DISPONIBILIDAD
BD Brilliant Green Agar
Nº de cat. 212097
Medio en placas listo para su uso, 20 placas
INFORMACIÓN ADICIONAL
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