UMELISA 17OH Progesterona Neonatal Ensayo para el pesquisaje neonatal de la hiperplasia suprarrenal congénita. Autores: González E., Marrero N., Pérez P., Frómeta A., Zulueta O., Martínez L., Herrera D., Castells E., Baloy A., Lugo E. Centro de Inmunoensayo 2002 Regulación de la síntesis de esteroides Hipófisis ACTH Glánd. Suprarrenales Angiotensina Renina Riñón Aldosterona Cortisol Biosíntesis de los esteroides Hiperplasia Suprarrenal Congénita (HSC) ¾ Forma más común de ambigüedad sexual. ¾ Deficiencia en producción de cortisol y aldosterona. ¾ Superproducción de andrógenos. ¾ Se presenta al nacer y afecta el desarrollo sexual. ¾ Deficiencia de 21 hidroxilasa: 90-95 % de casos. ¾ Incidencia: 10 000-15 000. Clasificación de la HSC ¾ Forma Clásica (80 % de los casos) • Perdedores de sales • Virilizantes simples ¾ Forma no clásica o de presentación tardía Presentación clínica de la HSC ¾ Diferentes grados de virilización de genitales externos en hembras. ¾ Crecimiento acelerado y retardo de la pubertad en ambos sexos. ¾Temprana fusión de los epífisis (baja estatura). ¾ Pérdida de sales y riesgo para la vida (Forma clásica). ¾ Hirsutismo e infertilidad (Hembras, forma de presentación tardía). Presentación clínica de la HSC ¾ Hiperpigmentación de los genitales. ¾ Pérdida del apetito. ¾ Letargo y pérdida de peso. ¾ Vómitos y diarreas. ¾ Riesgo incrementado a desarrollar hipoglicemia. Importancia del pesquisaje neonatal de la Hiperplasia Suprarrenal Congénita ¾ Enfermedad potencialmente fatal. ¾El examen físico no siempre resulta efectivo. ¾ Reducción marcada del tiempo de diagnóstico. ¾ Reducción de la morbilidad y mortalidad. ¾ Incidencia relativamente alta de la enfermedad. ¾ Mejoría significativa con un tratamiento temprano. ¾ Existencia de un método simple para el diagnóstico. UMELISA 17OH Progesterona Neonatal Placa de reacción Placa de elución E 10 µl E Discos de 3 mm E Lavado (6 ciclos) 40 uL conjugado 17OHP/F.A E E AcP anti-17OHP 2h a 20-25°C E 10 µl de Sustrato 4-metilumbeliferilfosfato 30 minutos a 20-25°C Lectura, Validación e interpretación de los resultados de las muestras con SUMA® Precisión del ensayo CV CV Intraensayo Interensayo Muestra nmol/L 1 22,4 7,2 9,0 2 50,0 6,9 8,3 3 90,4 4,9 5,6 Exactitud del ensayo Conc Esperada (umol/L) Conc. Obtenida (umol/L) % Recobrado 25 25,8 96,9 50 52 96 100 98,5 101,5 nmol/L 120 Ensayo de Paralelismo 100 M1 M2 80 M3 60 M4 40 20 0 Dil 1:1 Dil 1:2 Dil 1:4 Dil 1:8 Curva de calibración UMELISA 17OHP Neonatal 100,0 F/Fo (%) 80,0 60,0 40,0 20,0 0,0 0 50 100 150 200 Concentración 17OHP (nmol/L) 250 Limite de detección del ensayo La concentración mínima detectable es de 2.5 nmol/L. Se definió como la concentración calculada para la fluorescencia equivalente al calibrador de concentración igual 0 más 2 desviaciones estándar. Estudio de Correlación 50 muestras de neonatos (concentraciones de 17OHP entre 3 y 60 nmol/L) fueron evaluadas empleando el UMELISA 17OHP Neonatal y el estuche comercial de ICN Pharmaceuticals, obteniéndose un coeficiente de correlación de 0.98. Especificidad del ensayo Compuestos RC (%) Progesterona 5,5 17OH Pregnenolona 0,6 Sustancias de Reichstein 0,7 5-pregnenolona < 0,1 5-Pregnenolona-sulfato < 0,1 Dehidroisoandrosterona-3-sulfato < 0,1 Cortisona < 0,1 Dehidroisoandrosterona < 0,1 Estrona < 0,1 Corticosterona < 0,1 β-estradiol < 0,1 Estriol < 0,1 Distribución de frecuencias 350 Frecuencia 300 N= 2077 250 X= 12.4 ± 5.5 nmol/L 200 150 100 50 0 5 15 35 55 75 95 Concentración 17OHP (nmol/L) 115 Consideraciones en el pesquisaje de la hiperplasia suprarrenal congénita ¾ Realizar una adecuada toma de muestra. ¾ El pesquisaje antes de las 2 semanas de edad. ¾ Emplear valores de corte según edad y peso al nacer. ¾ Discriminar entre los diferentes tipos de HSC. ¾ El porcentaje de rellamado para una segunda muestra oscila entre 0.02 y 0.2 % según el programa de pesquisaje. Caso diagnosticado empleando el UMELISA 17OHP Neonatal Diagnosticada en el año 2002 Falo hipertrófico que mide 4.5 cm en erección.. Rebordes labioescrotales rugosos. Se realiza cariotipo: 46XX. Concentración de 17OHP: Superior a 260 nmol/L.