MANUAL DE PROCEDIMIENTOS UNIDAD DE ADMINISTRACIÓN TALLERES Y LABORATORIOS PROGRAMA INDIVIDUAL DE PRÁCTICAS Código: LAB-PO-01-01 Revisión: 1 Página: 1 de 6 CICLO ESCOLAR: 2012- 2013 P NOMBRE DEL DOCENTE: Ing. José Dolores Lira Maas. M.C CARRERA(S): Ingeniería en Industrias SEMESTRE: Alimentarias ASIGNATURA: Sexto Operaciones GRUPO(S): A de PARCIAL: Tercer transferencia de masa NOMBRE DE LABORATORIO O DE LA INSTITUCIÓN EN CASO DE PRÁCTICA EXTERNA: Laboratorio de Biotecnología NÚMERO Y NOMBRE DE LA PRÁCTICA: Practica 3.- Extracción de pigmentos de hojas FECHA Y HORA PROPUESTA DE LA PRÁCTICA: 17 de Junio del 2013 a las 10:00 a 13:00 am. MATERIALES REQUERIDOS: 6 Equipos 5 Tubos gruesos con rosca Chuchillo Tabla para cortar 2 Pipetas de 10 ml 3 Pipetas de 5 ml 3 Vasos precipitados de 100 ml 2 Vasos precipitados de 250 ml Un embudo de decantación Soporte universal Pinzas de embudos de decantación Embudos de cristal Etanol Código: LAB-PO-01-01 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS UNIDAD DE ADMINISTRACIÓN TALLERES Y LABORATORIOS PROGRAMA INDIVIDUAL DE PRÁCTICAS Metanol Gasolina Hojas de árboles (espinaca o hoja de Ramon) Revisión: 1 Página: Para el maestro Un vaso precipitado de 1 L EQUIPO REQUERIDO: 1 Placa de agitación y calentamiento Espectrofotómetro Ing. José Dolores Lira Maas. M.C NOMBRE Y FIRMA DEL DOCENTE. 20- MARZO -2013 FECHA DE ENTREGA 2 de 6 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS UNIDAD DE ADMINISTRACIÓN TALLERES Y LABORATORIOS PROGRAMA INDIVIDUAL DE PRÁCTICAS Código: LAB-PO-01-01 Revisión: 1 Página: 3 de 6 Practica 3.- Extracción de pigmentos de hojas Introducción. El estudio de los compuestos biológicos implica su extracción y separación del material (célula, tejido, órgano, etc.) en que se encuentren. Uno de los abordajes más utilizados para este propósito consiste en el uso de técnicas de cromatografía (proceso de separación de mezclas complejas mediante particiones entre una fase fluida móvil y una fase estacionaria). Otra técnica es la de separación por reparto entre disolventes inmiscible, que permite separar una mezcla de sustancias en función de su solubilidad en distintos compuestos inmiscibles. Como aplicación de estas dos técnicas, en el desarrollo de esta práctica se extraerán 4 tipos de pigmentos vegetales: clorofilas a y b, carotenos y xantofilas. Todos ellos tienen carácter apolar, qunque su graod de polaridad varía en función de su composición química. De esta forma, existe un gradiente de polaridad desde el más apolar al menos apolar. Esta propiedad permite su separación, y su distinto color su identificación. Su color permite también su cuantificación por técnicas expectrofotométricas. MANUAL DE PROCEDIMIENTOS UNIDAD DE ADMINISTRACIÓN TALLERES Y LABORATORIOS PROGRAMA INDIVIDUAL DE PRÁCTICAS Código: LAB-PO-01-01 Revisión: 1 Página: 4 de 6 Finalmente, mediante métodos polarográficos, con la ayuda de un oxímetro (electrodo de oxígeno), se medirá el desprendimiento fotosintético de O2 en un cultivo de cianobacterias (microalgas verde-azuladas). Objetivo: Que el alumno métodos de extracción a través de solventes para l obtención de pigmentos en hojas. Materiales y métodos: Cinco tubos gruesos con rosca Chuchillo Tabla para cortar 2 Pipetas de 10 ml 3 Pipetas de 5 ml 3 Vasos precipitados de 100 ml 2 Vasos precipitados de 250 ml Un embudo de decantación Soporte universal Pinzas de embudos de decantación Embudos de cristal Etanol Metanol Gasolina Hojas de árboles (espinaca o hoja de Ramon) Para el maestro Un vaso precipitado de 1 L Placa de calentamiento Espectrómetro MANUAL DE PROCEDIMIENTOS UNIDAD DE ADMINISTRACIÓN TALLERES Y LABORATORIOS PROGRAMA INDIVIDUAL DE PRÁCTICAS Código: LAB-PO-01-01 Revisión: 1 Página: 5 de 6 Procedimiento: Preparación de la muestra 1.- Trocear la hoja de espinaca. Introducir los trozos en un tubo de ensayo de calibre grueso y añadir 10 mL de etanol. Taparlo con algodón y calentarlo al baño ‘María’ durante aproximadamente 5 min (retirarlo cuando el etanol adquiera un color verde intenso). Verter el etanol con los pigmentos disueltos en otro tubo de ensayo. Proceso de extracción de los pigmentos 1.- Añadir al embudo de decantación (con la llave cerrada) 5 mL de gasolina. 2.- Tomar 5 mL de extracto de pigmentos y añadirlos sobre el embudo de decantación. Se formarán dos fases (A y B). 3.- Añadir 2 mL de agua (o más, hasta que la fase inferior quede sin pigmentos). Desechar la fase inferior (B). 4.- Añadir en el embudo 3 mL de metanol 92% .Se formarán dos fases (C y D). 5.- Recoger ambas fases en sendos tubos de ensayo (usar un tubo de ensayo largo para la fase C) 6.- Añadir al tubo con la fase C 2 mL de KOH-metanólica 30% (p/v) y agitar bien durante 2 min. Se formarán dos fases (E y F). Espectrometría 1. Tomar 0.3 mL del extracto etanólico de pigmentos y añadir 2.7 mL de etanol 2. Medir la DO a 665 nm utilizando etanol como blanco 3. [clorofila a] -1 = D.O.665 nm x 13,14 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS UNIDAD DE ADMINISTRACIÓN TALLERES Y LABORATORIOS PROGRAMA INDIVIDUAL DE PRÁCTICAS Código: LAB-PO-01-01 Revisión: 1 Página: 1. ¿Qué contiene cada una de las fases?¿Por qué esa distribución? 2. ¿Cómo se separarían los pigmentos de la fase D? 6 de 6