ALFA AMILASA

ALFA AMILASA
Método Cinético
Fabricante: RAL TECNICA PARA EL LABORATORIO, S.A.
Av. Mare de Déu de Montserrat 51
08970 Sant Joan Despí (Barcelona) - España
IVD
PARA USO DIAGNÓSTICO IN VITRO
CONSERVAR A 2 - 8º C
Método:
LEER LAS INSTRUCCIONES ANTES DEL USO
REF
Referencia:
Muestra/Calibrador
Reactivo
20 µL
1000 µL
Mezclar y leer la absorción después de 30 segundos. Leer de nuevo cada minuto
durante 3 minutos y calcular el ∆ Abs/min medio.
Cont.
CALCULO:
Presentación:
GN 85125:
6 x 25 mL reactivo
GN 8515000:
5 x 50 mL reactivo*
Mediante Factor:
Actividad muestra = ∆ Abs/min x Factor
(* para autoanalizadores DIRUI)
PRINCIPIO DEL METODO:
El reactivo Alfa Amilasa de Gernon determina la actividad de la alfa amilasa en
muestras de suero o plasma mediante el sustrato CNPG3 (2-cloro-4-nitrofenil-α-Dmaltotriósido que es hidrolizado a 2-cloro-4-nitrofenol (CNP) formando 2-cloro-4nitrofenil-α-D- maltósido (CNPG2), maltotriosa (G3) y glucosa (G):
Alfa amilasa
10 CNPG3 -----------------Æ9 CNP + 1 CNPG2 + G3 + G
La velocidad de formación de CNP es proporcional a la concentración de alfa
amilasa en la muestra y se determina fotométricamente.
SIGNIFICACIÓN CLINICA:
La alfa amilasa es una enzima hidrolítica que transforma el almidón en maltosa y
que se sintetiza en el organismo en distintos órganos: la amilasa pancreática es
producida por el páncreas y liberada en el tracto intestinal, la amilasa salival se
sintetiza en las glándulas salivales y secretadas en la saliva.
La actividad de la alfa amilasa se determina principalmente para controlar
enfermedades del páncreas como la pancreatitis aguda o crónica. La alfa amilasa
también se altera en trastornos gastrointestinales y de vesícula biliar.
REACTIVOS:
Se encuentra listo para el uso.
Reactivo:
MES (pH: 6.0):
CNPG3:
Cloruro sódico:
Acetato cálcico:
Tiocianato potásico:
Azida sódica:
PROCEDIMIENTO:
Existen aplicaciones para los principales sistemas automáticos.
Longitud de onda: 405 nm
Paso óptico: 1 cm
Temperatura: 37ºC
Reacción: cinética
Medida: frente a aire
Factor 405 nm (37ºC):
Suero o plasma: 3954
Orina: 7908
Mediante Calibrador:
[Amilasa] (U/L) muestra = (∆A/min
muestra
/ ∆A/min
cal)
. [Amilasa] (U/L)
cal
CALIBRADORES Y CONTROLES:
Se recomienda el uso del multicalibrador Biocal (GN 90999) para calibrar la
técnica.
Se recomienda el uso de los controles Gernorm (GN 90998) y Gerpath (GN 90997)
para controlar a dos niveles la técnica.
CARACTERÍSTICAS DEL METODO:
Rango de medida:
El test ha sido desarrollado para determinar la actividad de amilasa hasta 2000
U/L. Si los valores exceden este límite, diluir la muestra en solución salina (1+1) y
multiplicar el resultado obtenido por 2.
Especificidad / Interferencias:
La hemólisis interfiere con la determinación. La actividad de la alfa amilasa puede
ser inhibida por agentes quelantes como citrato y EDTA.
Existen varios medicamentos y sustancias que interfieren con la determinación de
la alfa amilasa.
Sensibilidad / Límite de detección:
El límite inferior de detección es 1 U/L.
19.5 g/L
1.5 g/L
20.4 g/L
0.95 g/L
87.5 g/L
0.95 g/L
Precisión intra ensayo (n=20, a 37ºC):
Muestra 1 (U/L): media: 61, SD: 1.00, CV: 1.64%
Muestra 2 (U/L): media: 165, SD: 2.44, CV: 1.47%
Precisión inter ensayo (n=20, a 37ºC):
CONSERVACIÓN:
El reactivo es estable hasta fecha de caducidad si se mantiene a 2-8ºC, protegido
de la luz y de contaminación. No debe congelarse.
Una vez abierto, el reactivo es estable 60 días. Debe cerrarse inmediatamente
después de su uso y conservarse siempre a 2-8ºC.
El reactivo debe estar libre de turbidez y de partículas. La absorbancia del blanco
de reactivo a 405 nm debe ser inferior a 0.5.
PRECAUCIONES EN EL MANEJO:
El reactivo contiene azida sódica. Evítese cualquier contacto con piel y
membranas. No ingerir.
El reactivo contiene tiocianato potásico. Evitar inhalación o contacto del reactivo
con la piel y ojos.
Deben tomarse las precauciones necesarias en el uso de reactivos de laboratorio
clínico.
Deben seguirse las disposiciones locales para la gestión de residuos.
MUESTRA:
Suero, plasma heparinizado u orina. Se recomienda realizar la separación de los
hematíes lo antes posible.
Estabilidad: 1 mes a 2-8ºC.
Si se emplea orina, debe ajustarse el pH a 7.0 antes de conservarlo.
Deben descartarse muestras contaminadas.
Muestra 1 (U/L): media: 65, SD: 2.84, CV: 4.36%
Muestra 2 (U/L): media: 172, SD: 4.57, CV: 2.65%
Comparación con otros métodos:
En los estudios comparativos con otros fabricantes no se han descrito diferencias
importantes.
VALORES NORMALES:
Suero o plasma: hasta 90 U/L
Orina: hasta 450 U/L
Cada laboratorio debe definir su propio rango de referencia.
NOTAS:
La actividad de la alfa amilasa depende directamente de la temperatura. Los
valores pueden variar en función de la temperatura de trabajo.
La saliva y el sudor contienen alfa amilasa. Evitar pipetear con la boca y el
contacto del reactivo y del material empleado con la piel.
BIBLIOGRAFÍA:
Tietz N W et al. Clinical Guide to Laboratory Tests, 3rd ed AACC 1995
Burtis A et al. Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 3rd ed AACC 1999
IU/GN/85125/R1/0612
Tel: (+34) 93 480 80 47
Fax: (+34) 93 373 00 92
e-mail: ral@ral-sa.com
web: www.ral-sa.com
ALPHA AMYLASE
Kinetic Method
Manufacturer: RAL TECNICA PARA EL LABORATORIO, S.A.
Av. Mare de Déu de Montserrat 51
08970 Sant Joan Despí (Barcelona) - Spain
IVD
FOR IN VITRO DIAGNOSTIC USE
STORE AT 2 - 8º C
Method:
Sample/Calibrator
Monoreagent
READ INSTRUCTIONS
REF
Reference:
20 µL
1000 µL
Mix, read absorbance after 30 seconds and start stopwatch. Read absorbance
again 1, 2 and 3 minutes thereafter. Calculate the average absorbance difference
per minute.
Cont.
Package:
GN 85125:
6 x 25 mL reagent
GN 8515000:
5 x 50 mL reagent*
CALCULATION:
With Factor:
Sample activity = ∆ Abs/min x Factor
(*for DIRUI autoanalyzers)
PRINCIPLE:
Gernon alpha amylase reagent quantifies the activity of alpha amylase in serum
and plasma samples by using CNPG3 substrate (2-chloro-4-nitrophenyl-α-Dmaltotrioside that is hydrolyzed to 2-chloro-4-nitrophenol (CNP) and forms 2chloro-4-nitrophenyl-α-D- maltoside (CNPG2), maltotriose (G3) and glucose (G)
according to the IFCC (International Federation of Clinical Chemistry) method:
Alpha amylase
10 CNPG3 -----------------Æ9 CNP + 1 CNPG2 + G3 + G
The rate of formation of 2-chloro-4-nitrophenol is the proportional to the catalytic
concentration of alpha amylase in the sample.
SUMMARY:
Alpha amylase is an enzyme that break downs starch into maltose. It is produced
mainly by exocrine pancreas and salivary glands. This determination is made
mainly in diagnosis or to control diseases of the pancreas as acute or chronic
pancreatitis. Bile or gastrointestinal disease might increase the alpha amylase
activity.
REAGENTS:
Reagent is ready to use.
Reagent:
MES (pH: 6.00):
CNPG3:
Sodium chloride:
Calcium acetate:
Potassium thiocyanate:
Sodium azide:
PROCEDURE:
Application sheets for main automated systems are available on request.
Wavelength: 405 nm
Optical path: 1 cm
Temperature: 37ºC
Reaction: Kinetic (decreasing absorbance)
Measurement: against air
Factor 405 nm (37ºC):
Serum or plasma: 3954
Urine: 7908
With Calibrator:
[Amylase] (U/L)
sample
= (∆A/min
sample
/ ∆A/min
cal)
. [Amylase] (U/L)
cal
CALIBRATORS AND CONTROLS:
It is recommended to use the multicalibrator Biocal (GN 90999) to calibrate the
method.
For internal quality control Gernorm (GN 90998) and Gerpath (GN 90997) should
be assayed with each batch of samples.
PERFORMANCE CHARACTERISTICS:
Measuring range:
The test has been developed to determine amylase activities up to 2000 U/L.
If such value is exceeded the sample should be diluted (1+1) with NaCl solution
and results multiplied by 2.
Specificity / Interferences:
Haemolysis interferes with the assay. Chelating agents like EDTA and citrate might
inhibit the activity of alpha amylase.
A list of drugs and other interfering substances have been reported.
Sensitivity / Limit of detection:
The lower limit of detection is 1 U/L.
Precision intra assay (n=20, at 37ºC):
19.5 g/L
1.5 g/L
20.4 g/L
0.95 g/L
87.5 g/L
0.95 g/L
Sample 1 (U/L): mean: 61, SD: 1.00, CV: 1.64%
Sample 2 (U/L): mean: 165, SD: 2.44, CV: 1.47%
Precision inter assay (n=20, at 37ºC):
Sample 1 (U/L): mean: 65, SD: 2.84, CV: 4.36%
Sample 2 (U/L): mean: 172, SD: 4.57, CV: 2.65%
STORAGE:
The reagents are stable up to the end of the indicated month of expiry, if stored at
2-8ºC, protected from light and contamination. Do not freeze reagents.
After opening, the reagent is stable for 60 days when properly capped immediately
after each opening and stored at 2-8ºC.
The reagent must be free of turbidity and particles. The reagent blank absorbance
at 405 nm should be lower than 0.5.
WARNINGS AND PRECAUTIONS:
The reagent contains Sodium Azide as preservative. Do not swallow. Avoid contact
with skin and mucous membranes.
The reagent contains potassium thiocyanate. Avoid inhalation, skin or eyes
contact.
Take the necessary precautions for the use of laboratory reagents.
For waste management, please refer to local legal requirements.
SPECIMEN:
Serum, heparin plasma or urine.
Cells should be removed as soon as possible.
Stability: 1 month at 2-8ºC.
If the sample is urine, adjust pH to approximately 7.0 prior to storage.
Discard contaminated specimens.
Tel: (+34) 93 480 80 47
Fax: (+34) 93 373 00 92
Method Comparison:
The comparison studies
manufacturers reagents.
did
not
show
relevant
differences
with
other
REFERENCE RANGES:
Each laboratory should establish its own reference range.
Serum or plasma: up to 90 U/L
Urine: up to 450 U/L
NOTES:
Alpha amylase activity is temperature dependent. Assays performed at different
temperature will show n apparent increased or decreased level.
Saliva and sweat contain alpha amylase. Avoid mouth pipetting and skin contact
with the reagent or material used.
LITERATURE:
Tietz N W et al. Clinical Guide to Laboratory Tests, 3rd ed AACC 1995
Burtis A et al. Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 3rd ed AACC 1999
IU/GN/85125/R1/0612/EA
e-mail: ral@ral-sa.com
web: www.ral-sa.com