C-336-docu

OXALIPLATINO ACTIVA AL RECEPTOR DE POTENCIAL TRANSITORIO A1
(TRPA1)
Luis E, López MJ, Fernández-Peña C, Fajardo O, Belmonte C, Viana F.
Instituto de Neurociencias de Alicante, Universidad Miguel Hernández-CSIC
El oxaliplatino es un agente quimioterapéutico utilizado en el tratamiento del
cáncer colorrectal. Empero, entre los efectos secundarios de su administración
destacan la neuropatía periférica aguda (parestesias producidas por exposición a
frío) y una neuropatía periférica crónica. Los mecanismos que originan la
neuropatía inducida por oxaliplatino no se conocen con exactitud, sin embargo,
son cada vez más los trabajos que asocian el efecto neuropático de este fármaco
a una acción sobre la familia de canales iónicos TRP (por sus siglas en inglés,
transient receptor potential). En este sentido, TRPA1 se expresa en una pequeña
subpoblación de neuronas nociceptivas de pequeño y mediano tamaño de los
ganglios raquídeos, donde se ha observado que interviene en la detección de una
variedad de estímulos, que incluyen desde irritantes químicos (aceite de mostaza,
acroleína, nicotina, etc.) hasta estímulos físicos de tipo mecánico y térmico.
Nuestros experimentos tienen por objetivo investigar si el oxaliplatino es capaz de
activar al canal TRPA1 en un sistema de expresión heterólogo.
Los experimentos fueron realizados en una línea de células de ovario de hámster
chino (CHO) que expresan de forma inducible el TRPA1 murino. Para inducir la
expresión del canal se añadió 1 µg/ml de tetraciclina al medio de cultivo. Cómo
células control utilizamos células CHO que no expresaban TRPA1. Para los
registros electrofisiológicos se usó la técnica de patch-clamp en la configuración
de célula completa. Las pipetas de registro (3-5 MΩ) contenían (en mM): 140
NaCl, 5 CsCl, 10 EGTA, 10 HEPES (pH 7.4 ajustado con NaOH). La solución
extracelular contenía (en mM): 140 NaCl, 3 KCl, 2.4 CaCl2, 1.3 MgCl2, 10 HEPES
y 10 de glucosa (pH de 7.4 ajustado con NaOH). Para obtener información sobre
los efectos dependientes de voltaje se usó una rampa de voltaje entre -100 y 100
mV, con una duración de 200 ms.
En experimentos de imagen de calcio con fura-2, el oxaliplatino produjo un
incremento de los niveles de Ca2+ intracelular. Este incremento resultó inhibido por
la aplicación de HC-030031, un antagonista selectivo del canal TRPA1. En células
CHO que expresaban TRPA1, la aplicación extracelular de oxaliplatino (100 µM)
produjo un incremento significativo en la densidad de corriente de 26.5 ± 6.3 pA/pF
en control a 108.7 ± 17.1 pA/pF en presencia de oxaliplatino a un potencial de
membrana de +80 mV (n = 4, P< 0.01). A un valor de potencial de membrana de 80 mV, el oxaliplatino incrementó la densidad de corriente de -9.9 ± 1.6 en control
a -33.2 ± 3.6 pA/pF en presencia de oxaliplatino (n = 4, P< 0.01). La corriente
sensible a oxaliplatino mostró un potencial de reversión de 2.0 ± 0.7 mV (n = 4),
compatible con la activación de una corriente catiónica no selectiva. Finalmente,
las células CHO que no expresaban el canal TRPA1 no respondieron a la
aplicación extracelular de oxaliplatino.
En resumen, estos resultados indican que la activación del canal TRPA1 podría
contribuir a las alteraciones neurosensoriales asociadas a los tratamientos con
oxaliplatino.