Bioquímica hepática (VII) Metabolismo hepático de xenobióticos

Anuncio
Bioquímica hepática
(VII) Metabolismo hepático de xenobióticos.
Las reacciones hepáticas de detoxificación
Prof. J.V. Castell
Al ingerir alimentos, absorbemos muchos
compuestos que no tienen valor nutritivo
para nuestro organismo...
1
INGREDIENTES: Harina de trigo, Agua, Aceite
Vegetal, Levadura, Azúcar, Sal, Suero Lácteo,
Emulgentes (E(E-471 y EE-481), Conservantes (E(E-281
y E 202), Vinagre y Estabilizador (E412).
(E
INGREDIENTES:
FLAN:AZUCAR, FECULA,
ESTABILIZANTES Y
ESPESANTES (E
E-410 EE-407),
407
SAL, VAINILLA Y COLORANTES
ARTIFICIALES AUTORIZADOS
(E(E-102 EE-110).
CARAMELO LIQUIDO:
GLUCOSA LIQUIDA, AZUCAR Y
CONSERVANTE (E(E-211)
2
Algunos de los compuestos ingeridos, podrían
llegar a ser tóxicos si el organismo no los
eliminase y se acumulasen en él...
Lo mismo cabe decir de compuestos
endógenos y exógenos administrados con
fines terapéuticos...
Algunos de los compuestos ingeridos, podrían llegar a ser
tóxicos si el organismo no los eliminase y se acumulasen en él...
ENDOBIOTICOS
TOXICOS
ATOXICOS
XENOBIOTICOS
TERAPEUTICOS
NUTRIENTES
3
Biotransformación…por qué
RESPIRACIÓ
RESPIRACIÓN
Volátiles
LipoLipo-soluble…
soluble…?
XENOBIOTICOS
BIOTRANSFORMACION
Hidro-soluble
ORINA
HECES
SUDOR
Cómo se biotransforman los
xenobióticos...
FASE I
XENOBIOTICOS
ELIMINACIÓN
FASE II
4
El metabolismo de xenobióticos por el hígado...
Xenobió
Xenobiótico (RH)
Fase I
ROH
Fase II
R-O-Conj
Finalidad:
Finalidad: aumentar la
polaridad de las
molé
moléculas,
introduciendo nuevos
grupos funcionales
Finalidad:
Finalidad: aumentar
su solubilidad en
agua, inactivació
inactivación de
su actividad bioló
biológica
Eliminació
Eliminación por la sangre / bilis
Reacció
Reacción de Fase I:
I reacciones en las que se introducen nuevos grupos
funcionales en la molécula aumentando su polaridad y reactividad
Reacció
Reacción de Fase II:
II Conjugación con moléculas endógenas de la célula,
por ej. ácido glucorónico, aumentando notablemente su solubilidad
5
Biotransformació
Biotransformación de xenobió
xenobióticos
Fase I
•Hidroxilación
•Epoxidación
•Desalquilación
•Desaminación
•S- y N-oxidación
Fase II
no
sti
e
t
In Piel
Hígado
Pulmones
Riñón
•Glucuronidación
•Glucosidación
•Sulfatación
•Metilación
•Acetilación
•Conjug. con GSH
•Conjug. con aminoácidos
Vías de eliminación de los metabolitos
Metabolitos
Eliminació
Eliminación
(detoxificación)
• Canalículo biliar
• Sinusoide
Retí
Retículo
endoplá
endoplásmico
Fármaco
Por qué enzimas…?
3. Enzimas microsomales extrahepá
extrahepáticos
(P450, FMN monooxigenasas
1. Enzimas hepá
hepáticos microsomales
(P450, FMN monooxigenasas)
2. Enzimas hepá
hepáticos nono-microsomales:
¾Alcohol/ aldehí
aldehído deshidrogenasa hidrolasas,
reductasas (Fase
(Fase I)
I)
¾Acetil transferasas, sulfato transferasas, GSH
transferasas, glucoronil transferasas (Fase
(Fase II)
II)
6
Reacciones de biotransformación de Fase I
P450
monooxigenasas
Peroxidasas
Deshidrogenasas
NADPH reductasas
Esterasas
FMN oxigenasas
Tipos de reacciones catalizadas por el citocromo P450
Hidroxilación
aromática
Hidroxilación
alifática
N-Dealquilación
O-Dealquilación
Deaminación
N-Oxidación
Sulfoxidación
7
El citocromo P450
” Hemoproteína. Absorbancia a 450 nm (forma Fe++)
” Una cadena de 35-45 KDa y grupo prostético heme
” Asociado a otros componentes en la membrana del
retículo endoplásmico
” Actividad “monooxigenasa”
” Baja especificidad de substrato
Hemoproteínas implicadas en reacciones de oxidación
” Oxigenasas
O2
 R + O2 → RO
OH + H2 O + D
 RH + O2 +DH2 → R-O
Dioxigenasas
Monooxigenasas
” Oxidasas
 RH2 + O2 → R + H2O2 (2 θ )
 2 RH2 + O2 → 2 R + H2O (4 θ )
” Peroxidasas
 ROOH +2DH2 → R-OH + 2 DH + H2O
8
Estequiometría de la actividad
“monooxigenasa” del Citocromo P450
RH + NADPH + H+ + O2 → R-OH + NADP+ + H2O
Origen de los electrones en la reacciones
de oxidación catalizadas por P450
dadores de θ
O2
NAD(P)H
Xenobiótico
(reducido)
P450 Reductasa
P450
FADH
FMNH
Redoxina Fe/S
Xenobiótico
(oxidado)
oxidado)
H2O
9
Reacciones catalizadas por el citocromo P450
O2
dadores de θ
NAD(P)H
Xenobiótico
(reducido)
P450 Reductasa
P450
FADH
FMNH
Xenobiótico
(oxididado)
oxididado)
H2O
Redoxina Fe/S
RH + NADPH + H+ + O2 → R-OH + NADP+ + H2O
OH
Producto
H
Substrato
Fe3+
s
OH
Substrato
P450
n
Fe3+
Fe3+
Substrato
H
P450
P450
e-
r
H
Substrato
Mecanismo de la
catálisis
por el citocromo P450
3+O)
(Fe
(FeO)
P450
P450
CitP450
Reductasa
o
Substrato
Fe2+
H
P450
H2O
H
q
H+
Substrato
Fe2+OOH
Substrato
H+
e-
P450
H
O2
Fe2+ O2
P450
p
Cit-b5
10
Componentes del sistema P450
Citoplasma
NADPH
e-
H2O
O2
Citocromo
P450
reductasa
FMN
e-
Fe2+/Fe3+
FAD
Citocromo b5
P450
R
Retículo endoplásmico
R-OH
Citoplasma
Nomenclatura del P450
” Superfamilia de genes constituida por familias y
subfamilias
FAMILIA:
FAMILIA: homologí
homología del
40% aa
CYP 1 A 2
NUMERO del gen
SUBFAMILIA:
SUBFAMILIA: homologí
homología
del 5555-60 % aa
11
Isoenzimas del Citocromo P450
Familias
1
2
3
5
7
3A3
3A4
3A5 4A9 4B1 4F2
4F3
3A7 4A11
Subfamilias
1A1
4
1B1
1A2
8
11
17
19
21
24
27
21A2
11A1
11B1
11B2
2A6 2B6 2C8 2D6 2E1 2F1
2A7
2C9
2C10
2C18
2C19
Abundancia relativa y variabilidad de los CYPs implicados
en el metabolismo humanos de fármacos y xenobióticos
CYP
1A2
1B1
2A6
2B6
2C
2D6
2E1
3A4
Abundancia
Grado de variabilidad
(% total)
~ 13
<1
~4
<1
~18
Hasta 2.5
Hasta 7
Hasta 28
~40-x
~30 - 100-x
~50-x
25-100-x
>1000-x
~20-x
~20-x
2E
S. Rendic & F.J. DiCarlo, Drug Metab Rev 29:413-80, 1997
12
Los CYPs también se expresan en tejido extrahepático…
CYP
1A1
Tejido
Pulmón, riñón, intestino, piel, placenta…
1B1
2A6
2B6
2C
2D6
2E1
3A
Piel, riñón, próstata, glándula mamaria…
Pulmón, epitelio nasal
Intestino, pulmón
Intestino delgado, laringe, pulmón
Intestino
Pulmón, placenta…
Intestino, pulmón, placenta, feto, utero, riñón
S. Rendic & F.J. DiCarlo, Drug Metab Rev 29:413-80, 1997
Enzimas de Conjugación
• Glucoronidación (UDP-GT)
– 1-naphtol
– morphine
• Conjugación con GSH (GSH-T)
– GSH-Tα (subunidades 1 and 2)
– GSH-Tμ (subunidades 3 and 4)
– GSH-Tπ (subunidad 7)
• Sulfotransferasas
– Phenol ST (ST1A1)
– N-hydroxy acetaminofluorene (ST1C1), estrogen sulfotransferase (ST1E2)
– hydroxyesteroid sulfotransferases (ST 20-21, ST 40-41, ST 60)
13
Reacciones de formació
formación y conjugació
conjugación del ácido glucoró
glucorónico
G1P + UTP → UDP-G
UDP-G → UDP-GA
COOH
Enzima: UGT 1A1
R-OH
OH + UDP-GA →R-O
O-GA
R-COOH
COOH + UDP-GA →R-CO-O
O-GA
COOH
COOH
-R
-COCO-R
Conjugació
Conjugación con GSH y formació
formación de derivados del ácido mercaptú
mercaptúrico
1. Glutation S-transferasa
2. γ-glutamiltranspeptidasa
3. cisteinil glicinase:
4. N-acetil transferasa
14
Conjugación con sulfato
Fosfoadenosil fosfosulfato
(PAPS)
Diferencias en la expresión de genes CYP no polimórficos
CYP2B6
22 20 18 19 21 16 11 7 17 1
5 12 8
3
4 13 6 10 9
2 14
BROD ACTIVITY
(pmol/mg x min)
MROD ACTIVITY
(pmol/mg x min)
CYP1A2
70
60
50
40
30
20
10
0
25
20
15
10
5
0
4
3
1 17 7 12 16 14 2 11 8
TEST ACTIVITY
(pmol/mg x min)
CLZX ACTIVITY
(pmol/mg x min)
40000
30000
20000
10000
0
2 13 3 14 1
8 17 7
Liver Nº
9 19 13 18 5 10 22 20 21
CYP3A4
CYP2E1
4 10 11 9
6
Liver Nº
Patient Nº
6 16 5 19 20 18 21 22
5000
4000
3000
2000
1000
0
1 17 8
7 11 5 10 6
4
9
2 12 16 21 22 19 18 3 20 14
Liver Nº
La variabilidad es mas bien la norma, antes que la excepció
excepción...!
15
Variabilidad del Citocromo P450
GENOTIPO + Factores ambientales = FENOTIPO
Polimorfismos gené
genéticos
 Variabilidad en
• Edad
los niveles de
enzimas
• Sexo
• Raza
 Diferencias en el
• Dieta, estado
nutricional
metabolismo
 Diferencias en la
• Estados
patológicos
farmacociné
farmacocinética
• Inductores
enzimáticos
Un ejemplo: el polimorfismo del CYP2D6
Metabolismo de la debrisoquina
- El 7% de la población muestra una metabolización deficiente
- Herencia autosomal recesiva
- Afecta al metabolismo de 25 fármacos de uso común
% Población
Debrisoquina
CYP2D6
4-Hydroxydebrisoquina
Metabolizadores
Rápidos
Metabolizadores
Lentos
Significantes diferencias en
el metabolismo del fármaco
Debrisoquina 4-hidroxylasa
16
Polimorfismos del P450
Causa del polimorfismo
Consecuencia
”No se expresa el gen
”Defecto parcial
”Alteración funcional
”Varias copias del gen
Ausencia de metabolización
Descenso de la metabolización
Alteración de la especificidad
Aumento de la metabolización
Otros
polimorfismos
frecuentes
Isoenzima P450
Frecuencia de la mutació
mutación
CYP2A6
5%
CYP2C9
20%
CYP2C19
10%
CYP2D6
23%
CYP2E1
2% (*)
Enzimas de Fase II
NAT-1/2
35%
GST(M1/T1/M3/P1/A2)
5-50%
UDP-GT
?
Factores ambientales que influencian la actividad de los CYPs
Nutrición
1A1;1A2;2E1; 3A3; 3A4,5
Tabaco
1A1;1A2
Alcohol
2E1
1A1,1A2; 2A6; 2B6; 2C;
2D6; 3A3, 3A4,5
1A1,1A2; 2A6; 1B; 2E1;
Medioambientales
3A3, 3A4,5
Fármacos
Rojo enzimas relevantes en el metabolismo de fármacos
S. Rendic & F. J. Di Carlo Drug Metab Rev 29: 413-580, 1997
17
Las diferencias en el fenotipo de los enzimas
metabolizantes de fármacos y sus consecuencias
Toxicidad debida a
una dosis excesiva
CYP
Metabolizador lento
Eficacia
terapé
terapéutica
CYP
Normal
Ineficacia
terapé
terapéutica
CYP
Metabolizador rá
rápido
Consecuencias del polimorfismo del CYP
1. Diferencias en la farmacocinética: biodisponibilidad,
vida media
2. Farmacodinámicas: respuesta exagerada, ineficacia
terapéutica
3. Interacciones medicamentosas
4. Producción anormal de metabolitos tóxicos
18
Interacción fármaco-fármaco
?+
A
B
A1 + A2
Fármaco B
Fármaco A
El metabolismo de uno de
los fá
fármacos puede verse
sensiblemente afectado
por la presencia de otro
que comparta el mimo
enzima o grupo de enzimas
para su metabolizació
metabolización
B1 + B2
B
B1 + B2
A
A1 + A2
B
B1 + B2
A
A1 + A2
CONCENTRACIÓN de “A”
Interacción fármaco-fármaco
A+B
Toxicidad
A
Ventana terapé
terapéutica
Ineficacia
TIEMPO
La concentración plasmática del fármaco A puede elevarse en presencia del fármaco B
causando efectos tóxicos
19
Efecto de flavonoides presentes en el zumo de pomelo sobre
el metabolismo de fármacos
5mg + zumo
control
Cl
H
CH 3 O 2 C
CH 3
N
H
Cl
Cl
CO 2 CH 3
3A4
Cl
CO 2 CH 3
CH 3 O 2 C
CH 3
CH 3
N
CH 3
D.G. Bailey, et al.; Br J Clin Pharmacol 1998, 46:101-110
Inhibidores de CYP3A4
HN
H
N
S
N
H
N
Cim etidine
N
N
N
Cl
N
Clotrim azole
Cl
Cl
O
O
O
N
O
N
N
Ketoconazole
H
N
20
El fenómeno de la inducción enzimática
¿Qué es...?
¿Qué trascendencia tiene...?
20
18
16
14
12
10
8
6
4
2
0
M C 2uM
P b 2m M
5
3A
3A
4
1
2
E
6
2D
19
2C
9
2C
6
2A
2
1A
on
tr
ol
R if 5 0 u M
C
Times Induction over control
Induction of MC, Pb, Rif
(Human hepatocytes; incubation 48h)
21
x
B (Cyp 4A)
x
x
PXR
x
x
AhR
PPAR
CAR
x
Hsp90
AhR
x
Sp1
C/EBPα
Arnt
RXR
PXR
RXR
CAR
RXR
PPAR
PPAR
-
x
(Cyp 1A)
x
x
CAR
D
AhR
-
C (Cyp 3A)
Hsp90
A (Cyp 2B)
Cytosol
HNF-1
C/EBPβ
Nucleus
TATAA
HNF-3 C/EBPβ
(LAP)
CYP-promoter
SXR=PXR=PAR=PRR
El fenómeno de la inducción
enzimática: ¿por qué es relevante?
 Si un compuesto actúa como inductor enzimático, la
expresión de ciertos enzimas de biotransformación
aumentará tras la administración repetida del compuesto.
 Cambios en la expresión de enzimas de biotransformación
influyen la farmacocinética de los fármacos
 Un fármaco cuya farmacocinética cambia el el curso de su
administración a un paciente es un fármaco de más dificil
manejo clínico
22
Inducción del P450 - Importancia
Fármacos que inducen su propio metabolismo ó la
biotransformación de otros fármacos en el hombre
Grupo farmacoló
farmacológico
Ejemplos
Analgésicos, antipiréticos y
antiinflamatorios
Antibióticos
Anticonvulsivantes
Antifúngicos
Antilipidémicos
Antimaláricos
Diuréticos
Psicotropos
Sedantes e hipnóticos
Esteroides
Vitaminas
Antipirina
Fenilbutazona
Rifampicina
Carbamazepina, Fenitoina
Griseofulvina
Halofenato
Quinina
Espironolactona
Clorimipramina
Barbitúricos
Testosterona
Vitamina C
Biotransformación =
Detoxificación?
23
Toxicidad como consecuencia del metabolismo...
Xenobió
Xenobiótico (RH)
Phase I
Radicales & ROS
Metabolitos
electrofí
electrofílicos
ROH
Metabolitos tó
tóxicos
Cell toxicity
Phase II
Conjugados
reactivos
R-O-Conj
Metabolitos tó
tóxicos
Toxicidad para las cé
células proximales
Xenobiótico
Bioactivación
Detoxificación
Biotransformació
Biotransformación
Metabolito
nono-reactivo,
menos tó
tóxico
Conjugació
Conjugación
Lípidos
Metabolito
reactivo
Proteí
Proteínas
DNA
Eliminació
Eliminación
Peroxidació
Peroxidación
de lí
lípidos
Desnaturalizació
Desnaturalización Genotoxicidad
Unió
Mutaciones
Unión covalente
24
Paracetamol
NHCOCH3
NHCOCH3
1. Conjugació
Conjugación
sulfato
2. Conjugació
Conjugación
Glucoró
Glucorónico
NHCOCH3
OH
3. Citocromo P450
OSO3H
NCOCH3
OC6H9O6
NHCOCH3
GSH
δ+
NHCOCH3
Unió
Unión Covalente a
proteí
proteínas hepá
hepáticas
SCH2 CHCOOH
O
OH
Acido Mercaptú
Mercaptúrico
N-Acetil-p-benzoquinona imina
Necrosis
Toxicidad hepá
hepática del paracetamol
• El paracetamol (acetaminofeno) es una analgésico muy bien tolerado, y de
toxicidad baja, que sin embargo puede ser fatal tras una sobredosis
• El metabolismo del paracetamol es primariamente a través de su conjugación con
sulfato (1), pero dado que la capacidad del organismo es limitada, si se aumenta la
dosis de fármaco (1-2 g) se formarán también conjugados glucurónicos (2)
• Si hay una sobredosis (>6g), cabe la posibilidad de que el fármaco de oxide (3) por
el CYP2E1, formándose el intermedio reactivo N-Acetil-p-benzoquinona imina
• Este intermedio, más reactivo y tóxico es conjugado con GSH y posteriormente
eliminado como un derivado del ácido mercaptúrico
• En el caso de una sobredosis mayor (>10g), y dado que la capacidad de producción
y conjugación con GSH es limitada, el intermedio reactivo puede reaccionar con
grupos SH de proteínas críticas, modificándolas (inactivándolas) y formando
aductos covalentes
• Ello lleva a una necrosis del hepatocito que se manifiesta como una insuficiencia
hepática fatal
• La administración de precursores de GSH (N-acetilcisteína) previene la toxicidad
25
Descargar