hbv 5 parameter - Diagnóstica Internacional

HBV 5 PARAMETER
USO DESTINADO
La prueba rápida de HBV 5 parámetros es un inmunoensayo cromatográfico de flujo lateral para la detección cualitativa de HBsAg, HBsAb,
HBeAg, HBeAb y HBCAb en suero o plasma. Se destina a ser utilizado
como una prueba de detección y como una ayuda para el diagnostico de
la infección con el HBV. Cualquier muestra reactiva con el HBV 5 parámetros debe ser confirmada con un método de ensayo alternativo (s) y
los hallazgos clínicos.
INTRODUCCIÓN
El virus de la Hepatitis B (HBV) es la causa más común de viremia persistente y la causa más importante de enfermedad hepática crónica y carcinoma hepatocelular. Clinicamente las infecciones aparentes. Se calcula
que hay 300 millones de portadores crónicos de HBV en el mundo. Las
tasas de transporte varían desde tan poco como 0.3% (Países occidentales) al 20% (Asia, África).
El HBV es un virus DNA Hepatotropico. El núcleo del virus contiene una
DNA polimerasa, antígeno central core (HBcAg) y el antígeno e (HBeAg).
El núcleo del HBV esta encerrado en una capa que contiene lípidos, proteína y carbohidratos, además expresa un antígeno de superficie (HBsAg).
HBsAg es el primer marcador que aparece en la sangre en la hepatitis
B aguda, siendo detectado entre la semana 1 y 2 meses después de la
exposición y de 2 semana a 2 meses antes de la aparición de los síntomas. Simultaneamente con o poco después de la aparición de HBsAg,
aparecen los anticuerpos contra el HBsAg (anti-HBs). Posteriormente se
aparente recuperación completa y su presencia proporciona inmunidad
toda la vida.
El anticuerpo contra el HBcAg (anti.HBc) aparece poco después de HBsAg, mas o menos en el momento en que los niveles sericos de ALT
comienza a subir. Anti-HBc también sigue siendo elevado para toda la
vida y es un marcador útil de la anterior infección por HBV. HBcAg en sí
no circula libremente en el suero de las personas infectadas
HBeAg se ve en la sangre antes de la aparición de la enfermedad clínica
y después de la aparición de HBsAg. HBeAg generalmente desaparece
en unas 2 semanas, mientras que el HBsAg todavía está presente. antiHBe aparece poco después de la desaparición del antígeno y es detectable por hasta 2 años o más después de la resolución de la hepatitis.
La presencia de HBeAg en el suero se correlaciona con un período de
la replicación viral intensa y por lo tanto, la infectividad máxima de los
pacientes.
Clínicamente, el HBsAg, HBsAb, HBeAg, y HBeAb HBcAb son los marcadores importantes en el diagnóstico de la infección por el HBV.
HBV 5 Parameter es una prueba rápida de 5 paneles que puede detectar
HBsAg, HBsAb, HBeAg, HBeAb y HBcAb simultáneamente por personal
inexperto o experto mínimamente, sin necesidad de un equipo de laboratorio.
PRINCIPIO DE LA PRUEBA
HBV 5 Paremeter es un inmunoensayo cromatográfico de flujo lateral
que consta de 5 tiras de prueba del panel incluidas en un casete. Cada
tira del miembro de panel esta compuesto de una superficie absorbente,
oro coloidal conjugado y la membrana de nitrocelulosa (NC membrana),
Cat. IID-1065
VER.1
una tira pre-recubierta con la banda de control (banda C), una prueba de
banda (banda T), y una almohadilla absorbente.
La tira de HBsAg es un anticuerpo basado en un inmunoensayo de sándwich. La almohadilla de conjugado contiene anticuerpos conjugados
anti-HBsAg con oro coloidal pre-recubiertos en la membrana de nitrocelulosa con un anticuerpo monoclonal anti-HBsAg. Cuando un volumen
adecuado de muestra se dispensa en el pocillo de muestra de la tira, la
muestra de ensayo migra por acción capilar a través de la prueba. Si esta
presente HBsAg en la muestra se unen a los conjugados de oro anti-HBsAg, el inmunocomplejo es capturado en la membrana por anticuerpos
pre-recubiertos de anti-HBsAg formando una banda T color borgoña, que
indica un resultado positivo de la prueba de HBsAg. La ausencia de la
banda T sugiere un resultado negativo.
La tira de HBeAg es también anticuerpo basado en un inmunoensayo
sándwich. La prueba utiliza un par de anticuerpos anti-HBeAg para la
detección del antígeno en la muestra de ensayo (véase en el principio
la explicación de HBsAg). Una banda T de color borgoña indica un resultado positivo HBeAg y la ausencia de la banda T sugiere un resultado
negativo.
La tira de HBsAb es un antígeno basado en un inmunoensayo sándwich. La almohadilla con el conjugado contiene HBsAg conjugado con
oro coloidal y la membrana nitrocelulosa este pre-recubierta con HBsAg
no conjugada. Si está presente en la muestra del paciente HBsAb se une
a los conjugados de oro y HBsAg. El inmunocomplejo es capturado en la
membrana por el HBsAg pre-recubierto, formando una banda T de color
borgoña, que indica un resultado positivo de la prueba HBsAb. La ausencia de la banda T sugiere un resultado negativo.
La tira HBeAc es un inmunoensayo competitivo. La almohadilla contiene
anticuerpos anti-HBe conjugados con oro coloidal (HBeAc conjugados) y
la membrana de nitrocelulosa es pre-recubierta con HBeAg. Si los niveles
de HBeAb en la muestra están por debajo de la sensibilidad de la prueba,
el conjugado HBeAb tiene entonces sitios de unión suficientes para enlazar con el recubrimiento HBeAg en la membrana de nitrocelulosa, por
lo tanto la formación de inmunocomplejos conjugados HBeAb-HBeAg
presentan un color borgoña en la banda T, lo que indica un resultado
negativo. Si los niveles de HBeAc en la muestra esta en o por mayor que
la sensibilidad de la prueba, se unirá a HBeAg en la membrana de nitro-
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celulosa, compitiendo la unión de HBeAb conjugado con el HBeAg. Por lo
tanto, la ausencia de la banda T indica un resultado positivo de la prueba.
La tira de HBcAb es también un inmunoensayo competitivo. La almohadilla de conjugado contiene anticuerpos anti-HBc conjugado con oro coloidal y la membrana de nitrocelulosa es pre-recubierta con HBcAg (Véase
el principio HBeAc para la explicación). Una banda T de color borgoña
sugiere un resultado negativo y la ausencia de la banda T indica un resultado positivo.
Todas las tiras del panel presentan un sistema de control de calidad interno que consiste en un anticuerpo IgG de ratón conjugado con oro coloidal
y una membrana de nitrocelulosa pre-recubierta con IgG de cabra antiIgG de ratón (banda C). Cuando un volumen adecuado de muestra de la
prueba se aplica en la muestra y de la tira, una banda C de color borgoña
debe ser siempre visible, independientemente de la evolución del color
en la banda T. De lo contrario, el resultado de la prueba no es válido y la
muestra debe ser analizada de nuevo con un nuevo dispositivo.
REACTIVOS
Materiales abastecidos con el equipo de prueba
1. Cada kit contiene 10 dispositivos de prueba, cada uno sellado en una
bolsa de aluminio con tres elementos en su interior:
a) Un casete dispositivo.
b) Un gotero de plástico
c) Un desecante.
2. Un instructivo.
Materiales requeridos pero no abastecidos
1. Reloj o Timer
ADVERTENCIAS Y PRECAUCIONES PARA LOS USUARIOS
Para uso diagnóstico In vitro
1. Este instructivo debe leerse por completo antes de realizar la prueba.
Si no se sigue el inserto da resultados inexactos.
2. No abra la bolsa sellada, a menos que este listo para llevar a cabo
el ensayo.
3. No utilice dispositivos vencidos.
4. Lleve todos los reactivos a temperatura ambiente (15-30 °C) antes
de su uso.
5. No use los componentes en cualquier otro tipo de equipo de prueba
como un sustituto para los componentes de ese kit.
6. No utilizar muestras de sangre hemolizadas para la prueba.
7. Usar ropa protectora y guantes desechables durante la manipulación
de los reactivos del kit y muestras clínicas. Lávese bien las manos
después de realizar la prueba.
8. Los usuarios de esta prueba deben seguir las precauciones universales del CDC de Estados Unidos para la prevención de la transmisión del VIH, VHB y otros patógenos de transmisión sanguínea.
9. No fumar, ni beber, ni comer en áreas donde las muestras o reactivos
del kit están siendo manejado.
10. Deseche todas las muestras y los materiales utilizados llevados a
cabo en la prueba como residuos de riesgo biológico.
11. Maneje Control Positivo y Negativo en la misma forma que las
muestras de pacientes.
12. Los resultados de las pruebas debe ser leído dentro de los 15 minutos después de que se aplica una muestra al pozo de muestra o
almohadilla del dispositivo. La lectura después de 15 minutos puede
dar resultados erróneos.
13. No lleve a cabo la prueba en una habitación con flujo de aire fuerte,
es decir. ventilador eléctrico o aire acondicionado fuerte.
RECOLECCIÓN Y PREPARACIÓN DEL ESPÉCIMEN
Considere la posibilidad de cualquier material de origen humano como
infecciosos y manejarlos utilizando los procedimientos de bioseguridad
estándar
PLASMA
1. Recolecta la muestra de sangre en un tubo con tapón lavanda, azul
o verde (que contiene EDTA, Citrato o Heparina, respectivamente en
Vacutainer ®) por venopunción.
2. Separar el plasma por centrifugación.
3. Con cuidado, coloque el plasma en un tubo nuevo pre-etiquetado.
SUERO
1. Recolecte la muestra de sangre en un tubo con tapón rojo (que no
contiene anticoagulantes en Vacutainer ®) por venopunción.
2. Permita que la sangre coagule.
3. Separar el suero por centrifugación.
4. Con cuidado, coloque el suero en un nuevo tubo pre-etiquetado.
Las muestras deben ser ensayadas tan pronto como sea posible después
de su recolección. Almacenar las muestras si no van a ser ensayadas
inmediatamente entre 2-8°C.
Almacenar las muestras entre 2-8°C por 5 días. Para tiempos mas largos
las muestras deben congelarse a -20°C.
Evite múltiples ciclos de congelación-descongelación. Antes de la prueba,
lleve las muestras congeladas a temperatura ambiente y mezcle suavemente. Las muestras que contengan partículas visibles, deberán ser
aclaradas por centrifugación antes de la prueba.
PROCEDIMIENTO DEL ENSAYO
• Paso 1: Lleve los componentes del kit y las muestras a temperatura
ambiente si son refrigeradas o congeladas. Mezcle la muestra antes
del ensayo, una vez descongelada.
• Paso 2: Cuando este listo para el ensayo, abra la bolsa en la muesca
y retire el dispositivo. Coloque el dispositivo de prueba en una superficie limpia y plana.
• Paso 3: Asegúrese de identificar el dispositivo con el numero de
identificación de la muestra.
• Paso 4: Llene la pipeta gotero con la muestra. Sosteniendo el gotero
verticalmente, dispensar una gota (60 a 90 µL) de la muestra en el
pocillo de muestra y asegúrese de que no existan burbujas de aire.
Nota: Agregar una gota de solución salina o tampón fosfato salino (tampones comunes utilizados en la clínica, no proporcionado en el kit) en la
muestra, si bien los flujos migratorios no se observan en 30 segundos en
la ventana de resultado, lo que podría ocurrir con una muestra altamente
viscosa.
• Paso 5: Configurar el cronometro
• Paso 6: Los resultados se pueden leer en 15 minutos. Los resultados
positivos pueden ser visibles en tiempos cortos de mínimo 1 minuto.
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No lea el resultado después de 15 minutos. Para evitar confusiones,
deseche el dispositivo de prueba después de interpretar el resultado.
INTERPRETACION DE RESULTADOS
1.- RESULTADO NEGATIVO: Si sólo la banda C se desarrolla en las tiras
de HBsAg, HBsAb, HBeAg, o ambos C y T se desarrollan ya sea en el
HBeAc o la tira de HBcAb, la prueba indica un resultado negativo en el
parámetro que se prueba.
TIRA
BANDA C
BANDA T
HbcAb
VISIBLE
VISIBLE
HBeAb
VISIBLE
VISIBLE
HBeAg
VISIBLE
NO BANDA
HBsAb
VISIBLE
NO BANDA
HBsAg
VISIBLE
NO BANDA
2.- RESULTADO POSITIVO: Si las bandas C y T se desarrollan en HBsAg, HBsAb y HBeAg o sólo la banda C en la tira de HBeAb o HBcAb, la
prueba indica la presencia del parámetro que se prueba. El resultado es
positivo.
TIRA
BANDA C
BANDA T
HbcAb
VISIBLE
NO BANDA
HBeAb
VISIBLE
NO BANDA
HBeAg
VISIBLE
VISIBLE
HBsAb
VISIBLE
VISIBLE
HBsAg
VISIBLE
VISIBLE
Las muestras con resultados positivos deben ser confirmados con un método de ensayo alternativo y resultado clínico antes de una determinación
positiva.
TIRA
BANDA C
BANDA T
HbcAb
NO BANDA
SIN TENER EN CUENTA
HBeAb
NO BANDA
SIN TENER EN CUENTA
HBeAg
NO BANDA
SIN TENER EN CUENTA
HBsAb
NO BANDA
SIN TENER EN CUENTA
HBsAg
NO BANDA
SIN TENER EN CUENTA
Nota: Un parámetro invalidado en particular no afecta la interpretación de los otros parámetros validados.
LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO
1. El procedimiento del análisis y la interpretación de resultados del ensayo deben ser seguidos muy de cerca cuando se prueba la presencia de HBsAg, HBsAb, HBeAg, HBeAb y HBcAb en suero o plasma
humanos individualmente de los sujetos. Si no se sigue el procedimiento pueden obtener resultados inexactos.
2. HBV 5 Parameter es una prueba rápida que se limita a la detección
cualitativa de HBsAg, HBsAb, HBeAg, HBeAb y HBcAb en suero o
plasma humano. La intensidad de la banda de prueba no tiene correlación lineal con el título de anticuerpos en la muestra.
3. Un resultado negativo para un sujeto individual indica la ausencia
detectable de HBsAg, HBsAb, HBeAg, HBeAb y HBcAb en suero o
plasma humano. Sin embargo, un resultado negativo de la prueba no
excluye la posibilidad de exposición a la infección con el HBV.
4. Un resultado negativo puede ocurrir si la cantidad del HBsAg, HBsAb, HBeAg, HBeAc, y HBcAb en la muestra de suero o plasma actualmente está por debajo de los límites de detección del ensayo, o
los anticuerpos que se detectan no están presentes durante la etapa
de enfermedad en la cual la muestra es recolectada
5. Algunas muestras que contienen títulos inusualmente altos de anticuerpos heterófilos o factor reumatoide pueden afectar los resultados
esperados.
6. Los resultados obtenidos con esta prueba sólo deben interpretarse
en conjunto con otros procedimientos de diagnóstico y los hallazgos
clínicos.
REFERENCIAS
1.
Emanuel Rubin and John Farber. The liver and biliary system. Acute viral
hepatitis P 721- 729. Rubin E, Farber JL ed. Pathology 2nd ed. 1994. J.B.
Lippincott, Philadelphia
2.
Kaplan PM, Greenman RL, Gerin JL, Purcell RH, Robinson WS. DNA polymerase associated with human hepatitis B antigen. J Virol. 1973 12(5):995-
3.- INVALIDO: Si no se desarrollo la banda “C”, el ensayo no es valido
independientemente del desarrollo de color en la banda “T” como
se indica a continuación. Repita el ensayo con un nuevo dispositivo.
1005.
3.
Dane DS, Cameron CH, Briggs M. Virus-like particles in serum of patients with
Australiaantigen- associated hepatitis. Lancet. 1970;1(7649):695-8.
4.
Magnius LO, Espmark A. A new antigen complex co-occurring with Australia
antigen. Acta Pathol Microbiol Scand [B] Microbiol Immunol. 1972;80(2):335-7.
FABRICADO POR:
CTK BIOTECH, INC.
6748 NANCY RIDGE DRIVE,
SAN DIEGO, CA 92121, USA
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