Práctica 15: Aschelmithos Tisulares

PRACTICA #15
ASCHELMINTHOS TISULARES
OBJETIVO DE LA PRACTICA
Que el alumno identifique las estructuras parasitarias inmersas en el tejido,
particularmente en el caso de Trichinella spiralis en carne.
INTRODUCCION.
En patología se observan muchos parásitos tisulares, uno de los más
comunes e importantes es el caso de la Trichinella spiralis . Las larvas del
parásito se observan en los músculos y es importante distinguirlos en su
dimensión y morfología.
Los aschelmintos parásitos humanos quedan incluidos en la Clase Nematoda.
Las especies humanas tisulares humanas importantes son Trichinella,
Strongyloides, Toxocara, Gnathostoma, Wuchereria, Onchocerca, Mansonella,
Brugia, Loa Loa, Dipetalonema, Dracunculus.
Aunque los adultos de algunas especies son intestinales en humanos, las fases
larvarias son tisulares, como en los casos de Ascaris, Necator, Strongyloides.
y Ancylostoma.
MATERIALES Y METODOS.
I. Diagnostico de Trichinella spiralis
1.Observación microscópica de preparaciones fijas de Trichinella spiralis.
Observe bajo el microscopio de luz, ejemplares de adultos montados en
preparaciones fijas. Haga dibujos detallados de los parásitos observados,
con el nombre de sus estructuras y el nombre científico correspondiente de cada
parásito.
2. Haga una visita al rastro o a la escuela de veterinaria, y obtenga
fragmentos de músculos con larvas de Trichinella spiralis (misma fase
que se encuentra en humanos):
2.1. Triquinoscopía:
a) En humanos se emplea la biopsia, que deberá ser tomada de los músculos en
que el paciente presenta mayor dolor; se recomienda que el fragmento sea de
aproximadamente 10 g para poder dividirlo en cuatro porciones, con las que se
realiza.
b) En carne de animales consiste en la inspección visual de pequeñas muestras
de tejido muscular, los sitios de predilección del cerdo son diafragma, lengua y
maseteros.
c) El tejido es comprimido entre 2 vidrios gruesos para la determinación de las
larvas in situ. La Compresión del tejido (triquinoscopía) es entre dos
portaobjetos, que se unen fuertemente con cinta adhesiva transparente para
observar adecuadamente al microscopio. Si es positivo, se ven los quistes con
larvas en su interior o éstos pueden estar calcificados si corresponden a la fase
clínica de estado mayor de 24 meses.
2.2. Digestión artificial de músculo:
Se realiza colocando un fragmento de biopsia en un tubo de ensaye que
contiene pepsina al 0.5% y ácido clorhídrico al 0.7% en agua destilada a 37°C.
Una vez digerido el músculo, se toma con pipeta Pasteur una muestra del fondo,
que se coloca en portaobjetos con su cubreobjetos correspondiente y se lleva al
microscopio. Si es positivo, se observan larvas moviéndose activamente.
Concentración de Pepsina: 1:10.000 N.F. (U.S. National Formulary); correspondiente a 1:12.500
B.P.(British Pharmacopea); correspondiente a 2.000 F.I.P.(Federación Internacional de
Farmacia).
2.3. Xenodiagnóstico.
El fragmento de biopsia se da a comer a una rata joven de laboratorio y al cabo
de 3 a 4 semanas se examina mediante biopsia para detectar larvas en sus
músculos.
2.4. Histopatología.
Se realiza con un fragmento de biopsia, que se procesa con parafina, con las
tecnicas de histología. Se obtienen cortes del tejido en un microtomo y
posteriormente se tiñen con hematoxilina-eosina. Se observan al microscopio y
se buscan las larvas intracelulalres.
2.5. Coproparasitoscópico
La búsqueda de adultos en coproparasitoscópicos generalmente es poco
práctica y difícil por diferentes motivos.
2.6. Los estudios inmunológicos que se pueden utilizar son:
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Intradermorreacción de Bachman. Es de gran utilidad. Se vuelve positiva
a partir de la cuarta semana de infección, permaneciendo así durante
varios años, por lo que no permite diferenciar casos recientes de casos
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antiguos. Hay que correlacionar los resultados con los aspectos clínicos
del paciente y con otra prueba.
Reacción de floculación con bentonita. Es altamente específica; pero la
producción del antígeno es laboriosa, por lo que prácticamente ya no se
utiliza.
Método ELISA. Es altamente sensible: detecta anticuerpos específicos a
partir de la segunda semana de infección.
Hemaglutinación indirecta. Se emplea con frecuencia y es cuantitativa.
Inmunoelectroforesis. Es diagnóstica cuando se presenta el arco 5,
siempre y cuando no hay infección con otras cestodiasis.
También pueden emplearse la inmunofluorescencia indirecta y la
inmunodifusión.
PCR (Polymerase chain reaction)
Discuta la efectividad de los diferentes metodos mencionados
anteriormente para diagnostico de Trichinella.
II. Diagnostico de Filarias, como Onchocerca volvulus
1. En una visita a la escuela veterinaria, obtenga filarias
2. Observación de filarias adultas de Onchocerca volvulus en cortes de
nódulos subcutáneos (Biopsia de piel), o de animales (perros en corazón)
3. Observación de microfilarias en escarificaciones de la piel humana o de
animales y en preparaciones fijas.
4. Esquematice el ciclo de O.volvulus en humanos.
RESULTADOS, DISCUSION Y CONCLUSIONES
Bibliografía
FAO – Red de Helmintologia para America latina y El Caribe. M.T. Peña.
Conferencia Electronica. AÑO 2001. Técnicas de Diagnóstico de Trichinella
Spiralis.
Forbes L.B. & Gajadhar A.A. (1999). A validated Trichinella digestion assay and
an associated sampling and quality assurance system for use in testing pork and
horse meat. J. Food Prot., 62, 1308–1313.