Dra Liliana Cerveta - Enfermedad de Chagas Experimental

Tesis Dra Liliana Cerveta
Título: Enfermedad de Chagas Experimental: Efecto de la Inmunointervención y
la Terapéutica en los Niveles Endógenos de Citoquinas
Año 2003
Lugar de Realización: Servicio de Neonatología de la U.N.C. Laboratorio Servicio
nacional de Chagas Córdoba)
Resumen
El objetivo general de la Tesis fue determinar el perfil de producción de distintas
citoquinas y receptores solubles durante la infección chagásica aguda experimental,
evaluar su relación con la evolución de la infección, y analizar la forma en que ambas
variables son influenciadas por la aplicación de distintas estrategias de inmunización con
T. rangeli o el tratamiento antiparasitario.
Para desarrollar el objetivo planteado se realizaron estudios de sobrevida,
parasitemias, presencia de parásitos en tejidos, producción sistémica de anticuerpos, y
niveles de IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, IL-12, IL-18, TNF-, sRTNFI, sRTNFII e IFN- en
sueros de ratones pertenecientes a los siguientes grupos experimentales:
a) inmunizados con epimatigotes muertos de T. rangeli y posteriormente desafiados con
T. cruzi.
b) infectados con diferentes dosis de T. cruzi.
c) infectados con líneas atenuada y virulenta de T. cruzi.
d) infectados con T. cruzi y sometidos a tratamiento con drogas parasiticidas.
e) inmunizados con epimastigotes vivos de T. rangeli y posteriormente desafiados con T.
cruzi.
Los resultados obtenidos permitieron extraer las siguientes conclusiones:
 Los animales infectados con T. cruzi presentaron niveles sistémicos elevados de
citoquinas proinflamatorias (IL-6, TNF-) y concentraciones de receptores
solubles de TNF- insuficientes para neutralizar la acción perjudicial de dicha
citoquina. Asimismo, se produjo una importante síntesis de IL-10, la cual bloquea
la acción protectora de IFN-, y valores normales de IL-12. Este perfil de
citoquinas y receptores solubles se asoció con mala resolución de la infección.
 Los animales previamente inmunizados modularon la síntesis de citoquinas
proinflamatorias y liberaron mayores cantidades de receptores de TNF-, que
neutralizaron la actividad sistémica perjudicial de dicha citoquina. Además, se
mantuvo la síntesis de IL-10 dentro de valores normales, aumentando la
disponibilidad biológica de IFN-. Asimismo, se incrementó la producción de IL12 o IL-18, dependiendo del inmunógeno utilizado. Este perfil de citoquinas y
receptores solubles acompañó a una resolución favorable de la infección,
revelada por las bajas parasitemias, el alto porcentaje de sobrevida y la ausencia
de lesiones histológicas en el periodo crónico de la enfermedad.
 Se ha demostrado que, en las condiciones ensayadas, no es posible aplicar el
paradigma Th1/Th2 asociado con resistencia/susceptibilidad. Un parásito con
ciclos de vida tanto intra como extracelulares requiere de una respuesta inmune
más compleja, lo que constituye uno de los grandes desafíos con que se enfrenta
la ciencia para luchar contra el agente causal de la enfermedad de Chagas. Debe
tenerse en cuenta, asimismo, que la producción de CK no es exclusiva de las
células Th1 y Th2. De hecho, ha sido demostrado que el curso de la infección está
determinado en gran medida por eventos que ocurren en estadios tempranos,
cuando aun no se ha desencadenado la respuesta inmune adaptativa y donde
tienen un rol crucial otros tipos celulares productores de citoquinas.
• Todos los resultados aquí presentados, determinaciones de citoquinas y
receptores solubles, parasitemias y niveles de anticuerpos, han sido obtenidos en
muestras de sangre periférica. Anteriormente, en nuestro laboratorio, se realizaron
estudios de citoquinas a nivel sistémico en la infección chagásica humana, que
demostraron perfiles particulares de producción en niños infectados. Sería de
interés, para futuros estudios, complementar la información obtenida, tanto en
humanos como a nivel experimental, mediante ensayos destinados a conocer los
fenotipos celulares involucrados en la producción de dichas moleculas y los
eventos inmunológicos que ocurren a nivel de los órganos inmunocompetentes.
Los dos inmunógenos utilizados en el presente trabajo han resultado ser muy
eficientes en su capacidad de proteger a los animales de la infección letal con T.
cruzi, modulando la producción de citoquinas hacia un perfil favorable al
huésped. Con respecto a la inmunización con parásitos vivos, se proyecta
continuar los ensayos con la finalidad de evaluar la capacidad de ese inmunógeno
como candidato para vacunación en animales domésticos (perros y gatos),
considerados reservorios del T. cruzi en areas endémicas, como otra forma de
interrumpir la cadena epidemiológica.
Las ventajas de este inmunógeno sobre el que utiliza los epimastigotes
muertos de T. rangeli administrados con adyuvante es que resulta más fácil de
producir y se administra en una sóla dosis. Además, en estudios comparativos, los
animales inmunizados con el parásito vivo y luego infectados con T. cruzi
presentan parasitemias menores que los inmunizados con las formas muertas. Sin
embargo, desde el punto de vista operativo, resulta dificultoso mantener al
parásito vivo durante períodos prolongados, mientras que se ha demostrado que
las formas muertas pueden ser conservadas por varios meses y ser admistradas sin
pérdida de su capacidad protectora.
En resumen, en el desarrollo del presente trabajo de Tesis se avanzó en el
conocimiento de los eventos inmunológicos y de algunos de los posibles
mecanismos involucrados en la protección y en la patogenia de la Enfermedad de
Chagas experimental, y se diseñó un nuevo modelo de inmunización con formas
vivas avirulentas de T. rangeli.