APO B Inmunoquant

APO B Inmunoquant
USO DEL PRODUCTO
Para la determinación cuantitativa de apolipoproteína B en suero o plasma. Método Inmunoturbidimétrico.
SIGNIFICACIÓN CLINICA
La apolipoproteína B (Apo B) es la principal apolipoproteína
estrutural asociada con lipoproteínas de muy baja densidad
(VLDL), de baja densidad (LDL) y los quilomicrones. Su principal
función es la secreción de triglicerídeos ricos en lipoproteínas
a partir del intestino, el hígado u otros tejidos. La Apo B existe
en dos formas: apo B-100, principal componente de las LDL,
sintetizada en hígado y excretado al plasma como parte de las
VLDL, y apo B-48, principal componente de los quilomicrones y
sintetizado en intestino.
Diversos estudios mostraron que los individuos con enfermedad
arterial coronaria (EAC) sufren variaciones en las concentraciones de Apo A-I y Apo B semejantes a los cambios en la concentración de HDL e LDL. Además, la concentración de Apo A-I y
Apo B son mejores indicadores que la concentración de LDL y
HDL colesterol.
En hiperbetalipoproteinemia, la concentración de colesterol LDL
es normal o ligeramente baja, mientras que la concentración de
Apo B-100 es muy elevada. La relación entre colesterol LDL y
Apo B-100 es baja en estos pacientes.
Los defectos en la estructura de Apo B y lipoproteínas que la
contienen inhiben la secreción intestinal y hepática de lipoproteínas ricas en triglicéridos. Esto es llamado abetalipoproteinemia o hipobetalipoproteinemia homocigota.
FUNDAMENTO DEL MÉTODO
Los anticuerpos anti-Apo B forman compuestos insolubles con
la Apo B en presencia de macromoléculas (polietilenglicol), ocasionando una turbiedad proporcional a la concentración de ésta
en la muestra, la que puede ser cuantificada fotométricamente.
REACTIVOS PROVISTOS
R1: solución lista para usar.
R2: solución lista para usar.
Composición de los reactivos provistos
R1: PEG 8000 28 g/l em buffer tris 20 mmol/l, pH= 8,3.
R2: Suero de cabra anti-Apo B, en buffer fosfatos 30 mmol/l
pH 7,5
Conservación y estabilidad
Conserve refrigerado (2-8 ºC), no congelar. La estabilidad alcanza la fecha de vencimiento indicada en la caja.
Indicios de inestabilidad o deterioro
La formación de sedimento es signo de deterioro de los reactivos, que deberán descartarse.
REACTIVOS NO PROVISTOS
Multicalibrador Inmunoquant Apoliproteínas: liofilizado para
reconstituir con 1 ml de agua destilada. Provisto separadamente por GT Lab (Códigos 391101 y 391151). Su composición
varía entre lotes. La concentración de los Calibradores está
referenciada al Material de Referencia Certificado WHO/IFCC
SP1-01 (CDC, USA).
MATERIAL NO PROVISTO
- Reloj alarma o cronómetro.
- Material volumétrico para los volúmenes indicados en ENSAYO.
- Espectrofotómetro o fotómetro con cubeta termostatizable a
37ºC para lecturas a 600 nm.
- Solución fisiológica (cloruro de sodio 8.5 g/l).
PRECAUCIÓN Y ADVERTENCIA SOBRE EL USO
- El producto no posee riesgos especiales de manipulación y descarte ya que NO POSEE materiales potencialmente infectivos.
- El producto es exclusivamente para uso “in vitro”.
- La caja y los envases contenidos en este producto no deben ser
reusados, debiendo descartarse como residuos peligrosos una
vez empleados, de acuerdo a la legislación vigente. El personal que manipula los mismos debe ser debidamente capacitado
para su manejo y descarte por la institución o laboratorio que
lo emplea.
MUESTRA
Suero o plasma fresco, recogido con heparina o EDTA como anticoagulantes
Obtenga la muestra de la manera usual. El paquete globular
debe separarse por centrifugación dentro de los 30 minutos.
Aditivos
Solamente el anticoagulante es necesario. Se recomienda el uso
de ANTICOAGULANTE HEMOGRAMA GT Lab, provisto separadamente (Código 46005).
Condiciones de conservación de las muestras
Refrigerador (2-8 ºC): estable 7 días a 2-8 ºC.
Freezer (-20 ºC): estable 3 meses.
Sustancias interferentes
Las muestras con restos de fibrina deben centrifugarse. No utilice muestras altamente hemolizadas o lipémicas. Bilirrubina (40
mg/dl), hemoglobina (500 g/L), lípidos (20 g/L) no interfieren.
Manipulación y descarte
Las muestras de pacientes deben manipularse considerándolas
potencialmente infecciosas, al igual que el material descartable
y los utilizados en el ensayo, que hayan estado en contacto con
las mismas, incluido el papel absorbente. El descarte debe hacerse de acuerdo a la buenas prácticas de laboratorio y a las
regulaciones locales.
Un procedimiento sugerido para descartarlos es el autoclavado
a 121ºC durante una hora y el tratamiento de los líquidos residuales con hipoclorito de sodio durante una hora a una concentración final del 5%.
CALIBRACIÓN
El método se debe recalibrarse con cada lote de reactivos y, al
menos, una vez por mes o cuando los controles están fuera de
especificaciones.
CURVA DE CALIBRACIÓN
Prepare las siguientes diluciones del Calibrador en solución fisiológica como diluyente. Para obtener las concentraciones de cada
dilución, multiplique la concentración del calibrador por el factor
correspondiente indicado en la tabla:
Dilución del calibrador
1
2
3
4
5
6
Calibrador (μl)
--
10
25
50
75
100
100
90
75
50
25
-
0
0.1
0,25
0,5
0,75
1,0
Solución fisiológica (μl)
Factor
ENSAYO (Nota 1)
Condiciones del ensayo:
Longitud de onda: 340 nm, lleve a 0.00 D.O. con agua destilada.
Temperatura: 37ºC
Procedimiento:
Preincube los reactivos a 37ºC.
En una cubeta agregue:
800 µl
R1
Muestra
10 µl
Mezcle y lea la absorbancia (A1)
R2
200 µl
Mezcle y lea la absorbancia (A2) exactamente tras 2 minutos
de agregado R2.
CALCULOS
La concentración de la muestra se calcula por interpolación
de su diferencia (A2–A1) en la curva de calibración descripta
más arriba.
CONTROL DE CALIDAD
Las buenas prácticas de laboratorio recomiendan procesar diariamente muestras control normales y patológicas. Se recomiendas el uso de INMUNOQUANT SUERO CONTROL Nivel 1 y
Nivel 2. Cada laboratorio debe desarrollar su propio control de
calidad interno y acciones correctivas para los casos en que se
excedan los límites de tolerancia aceptables.
SISTEMA ANALITICO
1. Rango dinámico: hasta 250 mg/dl en las condiciones descritas del ensayo. Las muestras con valores superiores deben diluirse con solución fisiológica y reensayarse. El resultado obtenido
debe multiplicarse por la dilución efectuada.
2. Sensibilidad: 1 mg/dl.
3. Efecto prozona: No se observa hasta valores de 280 mg/
dl (Nota 2).
4. Precisión:
Intraensayo
Media mg/dl
51,6
76,9
131,5
SD mg/dl ±
1,794
2,363
2,195
C.V. % ±
3,48
3,07
1,67
Media mg/dl
51,2
76,8
133,6
SD mg/dl ±
1,671
2,10
2,71
C.V. % ±
3,26
2,74
2,03
Interensayo
VALORES DE REFERENCIA
Entre 69 - 105 mg/dl. Es recomendable que cada laboratorio
establezca sus propios valores de referencia.
NOTAS:
1. Los volúmenes de muestra y Reactivo pueden disminuir o
aumentar manteniendo las proporciones esta¬blecidas en Procedimiento. Están disponibles adaptaciones para diferentes
analizadores automáticos.
2. Para evitar valores falsamente disminuidos se recomienda
procesar simultáneamente muestras sin diluir y diluidas al tercio
en solución fisiológica
PRESENTACIONES
Código 51505 (50 ml): 40 ml R1 + 10 ml R2
BIBLIOGRAFIA
1. Clinical Guide to Laboratory Tests, Edited by NW Tietz W B
Saunders Co., Phipladelphia, 483, 1983.
2. Mahley RW et al. J Lipids Res 1984; 25: 1277-1294.
3. Brown MS at al. Science 1986; 232:34-47.
4. Freedman DS et al. N Eng J Med 1986; 315: 721-726.
5. Sakurabayashi I et al. Clinica Chimica Acta 2001; 312: 87-95.
6. Young DS.Effects of disease on clinical laboratory tests, 3th
ed. AACC Pres, 1997.
7. Friedman and Young. Effects of disease on clinical laboratory
tests, 3tn ed. AACC Pres, 1997
INDICACIONES AL CONSUMIDOR
Garantía de Calidad del Producto
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USO PROFESIONAL EXCLUSIVO.
Autorizado por A.N.M.A.T. PM 121-40
Elaborado por GT Laboratorio S.R.L.
Establecimiento Inscripto y Habilitado por ANMAT
Industria y Tecnología Argentina
Dir. Tec: Daniel Gazzola. Bioquímico
Elaborado por: GT Laboratorio s.r.l
Industria y Tecnología Argentina
Código y Fecha de Revisión: 51590000/14