LDH Método Cinético UV Fabricante: RAL TECNICA PARA EL LABORATORIO, S.A. Av. Mare de Déu de Montserrat 51 08970 Sant Joan Despí (Barcelona) - España IVD PARA USO DIAGNÓSTICO IN VITRO CONSERVAR A 2 - 8º C REF GN 42125: GN 42500: GN 4215000: 25/30ºC Método birreactivo: LEER LAS INSTRUCCIONES ANTES DEL USO Referencia: PROCEDIMIENTO: Existen aplicaciones para los principales sistemas automáticos. Longitud de onda: 340 nm Paso óptico: 1 cm Temperatura: 37ºC / 25-30ºC Reacción: cinética decreciente Medida: frente a aire Cont. 37ºC Muestra 20 µL 10 µL R1 de enzima 1000 µL 1000 µL Mezclar, incubar aproximadamente 3 minutos, después añadir: R2 de arranque 250 µL 250 µL Mezclar y leer la absorción después de 1 minuto. Leer de nuevo cada minuto durante 3 minutos y calcular el ∆ Abs/min. medio. Presentación: 5 x 20 mL reactivo 1 + 25 mL reactivo 2 5 x 80 mL reactivo 1 + 100 mL reactivo 2 4 x 50 mL reactivo 1 + 50 mL reactivo 2* (* para autoanalizadores DIRUI) PRINCIPIO DEL METODO: El reactivo LDH de Gernon determina la actividad de LDH en muestras de suero mediante el método optimizado de la DGKC. 25/30ºC Método monorreactivo: CALCULO: Piruvato + NADH + H+------------ÆL-lactato + NAD+ Mediante Factor: Actividad muestra = ∆ Abs/min x Factor La velocidad de disminución de la concentración de NADH es directamente proporcional a la concentración de LDH en la muestra. Factor 340 nm Método Birreactivo Método monorreactivo LDH 37ºC Muestra 20 µL 10 µL R de trabajo 1000 µL 1000 µL Mezclar y leer la absorción después de 1 minuto. Leer de nuevo cada minuto durante 3 minutos y calcular el ∆ Abs/min. 25º/30ºC 10080 8095 SIGNIFICACIÓN CLINICA: La Lactato Deshidrogenasa (LDH) es un enzima que cataliza la interconversión de L-Lactato y Piruvato. La LDH se encuentra en el citoplasma de todos los tejidos, con altas concentraciones en hígado, corazón y músculo esquelético, y bajas concentraciones en eritrocitos, páncreas, riñón y estomago. El incremento de la actividad de la LDH puede deberse a distintas causas: infarto de miocardio, cáncer, enfermedades hepáticas, hematológicas o musculares. Es conveniente efectuar pruebas complementarias de ALP, GOT y GPT para obtener un diagnóstico diferenciado. Mediante Calibrador: [LDH] (U/L) muestra = (∆A/min REACTIVOS: Se encuentran listos para el uso. Reactivo 1: Tampón Imidazol: Piruvato: Reactivo 2: NADH: Rango de medida: muestra / ∆A/min 37ºC 20000 16030 cal) . [LDH] (U/L) cal CALIBRADORES Y CONTROLES: Se recomienda el uso del multicalibrador Biocal (GN 90999) para calibrar la técnica. Se recomienda el uso de los controles Gernorm (GN 90998) y Gerpath (GN 90997) para controlar a dos niveles la técnica. CARACTERÍSTICAS DEL METODO: El test ha sido desarrollado para determinar la actividad de LDH hasta 1450 U/L. Si los valores exceden este límite, diluir la muestra en solución salina (1+9) y multiplicar el resultado obtenido por 10. 4.4 g/L 0.6 mmol/L Especificidad / Interferencias: 0.12 g/L Para trabajar en modo monorreactivo mezclar 4 partes de R1 por una parte de R2. Proteger el monorreactivo de la luz. La estabilidad del monorreactivo es de 2 semanas a 2-8ºC ó 5 días a temperatura ambiente. CONSERVACIÓN: El reactivo es estable hasta fecha de caducidad si se mantiene a 2-8ºC, protegido de la luz y de contaminación. No debe congelarse. Los reactivos deben estar libres de turbidez y de partículas. La absorbancia del blanco (mezcla de reactivo 1 y reactivo 2 a proporciones adecuadas) a 340 nm debe ser superior a 1.0. PRECAUCIONES EN EL MANEJO: El reactivo contiene azida sódica. Evítese cualquier contacto con piel y membranas. No ingerir. Deben tomarse las precauciones necesarias en el uso de reactivos de laboratorio clínico. Deben seguirse las disposiciones locales para la gestión de residuos. MUESTRA: Suero. Debe separarse lo antes posible de los eritrocitos. La utilización de oxalato como anticoagulante puede interferir en el resultado. Estabilidad: 2 días a 2-8ºC. Deben descartarse muestras contaminadas. La hemólisis interfiere con la determinación. Anticoagulantes como el oxalato afectan al resultado. Existen varios medicamentos y sustancias que interfieren con la determinación de la LDH. Sensibilidad / Límite de detección: El límite inferior de detección es 1 U/L. Precisión intra ensayo (n=20): Muestra 1 (U/L): media: 337, SD: 4.63, CV: 1.37% Muestra 2 (U/L): media: 548, SD: 5.11, CV: 0.93% Precisión inter ensayo (n=20): Muestra 1 (U/L): media: 345, SD: 5.27, CV: 1.53% Muestra 2 (U/L): media: 553, SD: 7.68, CV: 1.38% Comparación con otros métodos: Se han analizado 100 muestras utilizando el reactivo de Gernon (y) y otro de un fabricante de la competencia (x). Correlación: r= 0.993; Relación: y = 1.006 x – 1.107 VALORES NORMALES: 120-240 U/L (25ºC), 160-320 U/L (30ºC), 230-460 U/L (37ºC) Cada laboratorio debe definir su propio rango de referencia. BIBLIOGRAFÍA: Tietz N W et al. Clinical Guide to Laboratory Tests, 3rd ed AACC 1995 Burtis A et al. Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 3rd ed AACC 1999 IU/GN/42125/R2/0712 Tel: (+34) 93 480 80 47 Fax: (+34) 93 373 00 92 e-mail: ral@ral-sa.com web: www.ral-sa.com LDH UV Kinetic Method Manufacturer: RAL TECNICA PARA EL LABORATORIO, S.A. Av. Mare de Déu de Montserrat 51 08970 Sant Joan Despí (Barcelona) - Spain IVD FOR IN VITRO DIAGNOSTIC USE STORE AT 2 - 8º C Bireagent method: REF 25/30ºC 37ºC Sample 20 µL 10 µL Reagent 1 1000 µL 1000 µL Mix, incubate for 3 minutes approx, then add: Reagent 2 250 µL 250 µL Mix, read absorbance after 1 minute. Read absorbance again every minute for 3 minutes and calculate the ∆ Abs/min. READ INSTRUCTIONS Reference: PROCEDURE: Application sheets for main automated systems are available on request. Wavelength: 340 nm Optical path: 1 cm Temperature: 37ºC / 25-30ºC Reaction: Kinetic (decreasing absorbance) Measurement: against air Cont. Package: GN 42125: GN 42500: 5 x 20 mL reagent 1 + 25 mL reagent 2 5 x 80 mL reagent 1 + 100 mL reagent 2 GN 4215000: 4 x 50 mL reagent 1 + 50 mL reagent 2* (* for DIRUI autoanalyzers) PRINCIPLE: Gernon LDH reagent quantifies the activity of LDH in samples of serum according to optimized DGKC method: LDH Piruvate + NADH + H+------------ÆL-lactate + NAD+ The amount of LDH in sample is proportional to the rate of decrease of NADH concentration, which is measured by photometer. Monoreagent method: 25/30ºC 37ºC Sample 20 µL 10 µL Monoreagent 1000 µL 1000 µL Mix and read the absorbance after 1 minute. Read absorbance again every minute for 3 minutes and calculate the ∆ Abs/min. CALCULATION: With Factor: Sample activity = ∆ Abs/min x Factor Factor 340 nm Bireagent Method Monoreagent Method 25º/30ºC 10080 8095 With Calibrator: [LDH] (U/L) sample = (∆A/min sample / ∆A/min 37ºC 20000 16030 cal) . [LDH] (U/L) cal SUMMARY: Lactate dehydrogenase (KDH) is an enzyme, consisting of five different isoenzymes which catalyse the interconversion of L-lactate and pyruvate. LDH is present in the cytoplasm of all human tissues with higher concentrations in liver, heart and skeletal muscle, and lower values in erythrocytes, pancreas, kidney and stomach. Increased LDH activities are found in a variety of pathological conditions such as myocardial infarction, cancer, diseases of liver, blood or muscle. However, because of the lack of organ specificity, determination of its isoenzymes or other enzymes such as alkaline phosphatase or ALAT/ASAT is necessary for differential diagnosis. CALIBRATORS AND CONTROLS: It is recommended to use the multicalibrator Biocal (GN 90999) to calibrate the method. For internal quality control Gernorm (GN 90998) and Gerpath (GN 90997) should be assayed with each batch of samples. REAGENTS: Reagents are ready to use. Specificity / Interferences: Reagent 1: Imidazol Buffer: Piruvate: Reagent 2: NADH: PERFORMANCE CHARACTERISTICS: Measuring range: The test has been developed to determine LDH activities up to 1450 U/L. If such value is exceeded the sample should be diluted (1+9) with NaCl solution and results multiplied by 10. Haemolysis interferes with the assay. Anticoagulants like oxalate interfere with the reaction. A list of drugs and other interfering substances have been reported. Sensitivity / Limit of detection: 4.4 g/L 0.6 mmol/L The lower limit of detection is 1 U/L. Precision intra assay (n=20, at 37ºC): 0.12 g/L In case of monoreagent use, mix reagent 1 and reagent 2 in a 4+1 ratio. The stability of monoreagent is 2 weeks at 2-8ºC or 5 days at 15-25ºC. The monoreagent must be protected from light. STORAGE: The reagents are stable up to the end of the indicated month of expiry, if stored at 2-8ºC, protected from light and contamination. Do not freeze reagents. The reagents must be free of turbidity and particles. The blank (mixture of reagent 1 and reagent 2 according to the specified ratio) absorbance at 340 nm should be higher than 1.0. WARNINGS AND PRECAUTIONS: Reagents contain Sodium Azide as preservative. Do not swallow. Avoid contact with skin and mucous membranes. Take the necessary precautions for the use of laboratory reagents. For waste management, please refer to local legal requirements. SPECIMEN: Serum. The serum has to be separated from cells as soon as possible. The use of oxalates as anticoagulants may interfere with the results. Stability: 2 days at 2-8ºC. Discard contaminated specimens. Tel: (+34) 93 480 80 47 Fax: (+34) 93 373 00 92 Sample 1 (U/L): mean: 337, SD: 4.63, CV: 1.37% Sample 2 (U/L): mean: 548, SD: 5.11, CV: 0.93% Precision inter assay (n=20, at 37ºC): Sample 1 (U/L): mean: 345, SD: 5.27, CV: 1.53% Sample 2 (U/L): mean: 553, SD: 7.68, CV: 1.38% Method Comparison: A comparison between Gernon LDH (y) and a commercially available test (x) using 100 samples gave following results: Correlation: r= 0.993; Ratio: y = 1.006 x -1.107 REFERENCE RANGES: 120-240 U/L (25ºC), 160-320 U/L (30ºC), 230-460 U/L (37ºC) Each laboratory should establish its own reference range. LITERATURE: Tietz N W et al. Clinical Guide to Laboratory Tests, 3rd ed AACC 1995 Burtis A et al. Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 3rd ed AACC 1999 IU/GN/42125/R2/0712/EA e-mail: ral@ral-sa.com web: www.ral-sa.com