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Thermo Scientific™ Richard-Allan Scientific Chromaview® – Tinción Avanzada
Tinción de Azul de Alcián a pH 2,5
Instrucciones de uso
Análisis técnico
Microtomía
Realice cortes de parafina de 4 a 6 micrones.
Fijación
Formol al 10%, Pen-Fix de Thermo Scientific o Carnoy. Evite fijadores que contengan glutaraldehído para evitar
la tinción no específica del fondo.
Control de calidad
Debe utilizarse un corte de riñón o mucina que contenga tejido (como intestino delgado).
Procedimiento técnico
Protocolo de tinción
1. Desparafinar e hidratar con agua desionizada.
2. Colocar los portaobjetos en solución de tinción de Azul de Alcián a pH 2,5 durante 30 minutos a temperatura ambiente.
3. Enjuagar los cortes con varios cambios de agua desionizada.
4. Tinción nuclear opcional: Tinción de Rojo Nuclear rápido Kernechtrot durante 1 minuto.
5. Enjuagar los cortes con varios cambios de agua desionizada.
6. Deshidratar los cortes con dos cambios de alcohol absoluto durante 1 minuto cada uno.
7. Aclarar los cortes con tres cambios de reactivo aclarante durante 1 minuto cada uno y proceder al montaje.
Protocolo de tinción estándar de Azul de Alcián a pH 2.5, Ácido Periódico Schiff
1. Desparafinar e hidratar con agua desionizada.
2. Colocar los portaobjetos en solución de tinción de Azul de Alcián a pH 2,5 durante 30 minutos, a
temperatura ambiente.
3. Enjuagar los cortes con varios cambios de agua desionizada.
4. Colocar los cortes en una solución de Ácido Periódico (0,5%) durante 5 minutos, a temperatura ambiente.
5. Enjuagar los cortes con varios cambios de agua desionizada.
6. Teñir los cortes en reactivo de Schiff durante 15 minutos.
7. Enjuagar los cortes con agua corriente tibia durante 10 minutos.
8. Enjuagar los cortes con varios cambios de agua desionizada.
9. Tinción nuclear opcional:
a. Hematoxilina 7211 durante 1 minuto.
b. Enjuagar los cortes con varios cambios de agua desionizada.
c. Teñir los cortes en un reactivo azul durante 1 minuto.
d. Enjuagar los cortes con agua corriente durante 1 minuto.
10. Deshidratar los cortes con dos cambios de alcohol absoluto durante 1 minuto cada uno.
11. Aclarar los cortes con tres cambios de reactivo aclarante durante 1 minuto cada uno y proceder al
montaje.
Protocolo de tinción con microondas de Azul de Alcián a pH 2,5, Ácido Periódico Schiff
1. Desparafinar e hidratar con agua desionizada.
2. Colocar los cortes en un recipiente Coplin plástico que contenga solución de tinción de Azul de Alcián a
pH 2,5.
3. Colocar en el microondas durante 25 segundos al 80% de potencia para alcanzar 60 °C.
4. Incubar los cortes durante un minuto más en solución de Azul de Alcián calentada.
5. Enjuagar los cortes con varios cambios de agua desionizada.
6. Colocar los cortes en una solución de Ácido Periódico durante 5 minutos a temperatura ambiente.
7. Enjuagar los cortes con varios cambios de agua desionizada.
8. Colocar los cortes en un recipiente Coplin plástico que contenga reactivo de Schiff.
9. Colocar en el microondas durante 25 segundos al 80% para alcanzar 60 °C.
10. Retirar los cortes del microondas y agitar la solución para equiparar la temperatura.
11. Permitir que los cortes permanezcan en la solución tibia durante 5 minutos más.
12. Enjuagar con agua corriente tibia durante 10 minutos.
13. Enjuagar con agua desionizada durante 1 minuto.
14. Tinción nuclear opcional:
a. Hematoxilina 7211 durante 1 minuto.
b. Enjuagar los cortes con varios cambios de agua desionizada.
c. Teñir los cortes en un reactivo azul durante 1 minuto.
d. Enjuagar los cortes con agua corriente durante 1 minuto.
15. Deshidratar los cortes con dos cambios de alcohol absoluto durante 1 minuto cada uno.
16. Aclarar los cortes con tres cambios de reactivo aclarante durante 1 minuto cada uno y proceder al montaje.
Resultados
Sustancias mucosas ácidas: Azul
Polisacáridos neutros: Magenta
Otras sustancias y mezclas de los elementos mencionados arriba pueden aparecer púrpuras. El color puede
variar de púrpura azulado a violeta.
Núcleos: Azul si se realiza una tinción de contraste opcional con Hematoxilina 7211.
Núcleos: Rojo si se realiza una tinción de contraste con Rojo Nuclear rápido Kernechtrot.
Análisis
La solución de tinción de Azul de Alcián a pH 2,5 debe almacenarse a temperatura ambiente y no debe formar
precipitados de aplicarse los parámetros de almacenamiento recomendados. La solución de tinción de Azul de Alcián a pH 2,5 es solo para uso “In Vitro”. Consulte las Hojas de datos de seguridad de los materiales para conocer
la Información de salud y seguridad. La solución de tinción de Azul de Alcián a pH 2,5 puede volver a filtrarse y
usarse; sin embargo, los reactivos utilizados para la técnica de microondas deben desecharse después de su uso.
Todos los colorantes utilizados en estas formulaciones están certificados por la Biological Stain Commission.
Comentarios técnicos
Permita el tiempo adecuado para lograr una desparafinización y rehidratación completas de los cortes antes de
la tinción. La rehidratación incompleta puede dar lugar a una tinción deficiente con solución de tinción de Azul de
Alcián a pH 2,5. Las frecuencias de microondas varían según el modelo. Puede ser necesario ajustar los niveles
de potencia o los tiempos para lograr los resultados deseados.
Probable modo de acción
El azul de alcián reacciona a compuestos que contienen grupos aniónicos, como sustancias mucosas ácidas y
mucinas ácidas. Con pH 2,5, las sustancias mucosas ácidas, tanto carboxílicas como sulfatadas, se tiñen de azul.
Referencias
1. Bancroft, J.D. y Stevens, A. Theory and Practice of Histological Techniques. Churchill Livingstone, New York, NY,
1977.
2. Sheehan, D.C. y Hrapchak, B.B. Theory and Practice of Histotechnology, 2nd Edition. Mosby, St. Louis, MO,
1980.
3. Thompson, C.C. Selected Histochemical and Histopathological Methods. Springfield, IL, 1966.
4. Lillie, R.D., H.J. Conn’s Biological Stains. Williams & Wilkins, Baltimore, MD, 1972.
5. Carson, F.L. Histotechnology: A Self-Instructional Text, 2nd Edition. ASCP Press, Chicago, 1997.
Información para pedidos
Producto
Tamaño
Solución de tinción de Azul de Alcián a pH 2,5 500 ml
1
88043
Solución de Ácido Periódico (0,5%)
500 ml
1
88016
Reactivo de Schiff
500 ml
1
88017
Solución de tinción de Rojo Nuclear rápido Kernechtrot
125 ml
1
88049
Hematoxilina 7211
473 ml
4 un
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7211