Deteccion de marcadores moleculares por PCR

Detección Marcadores
Moleculares por PCR
Dr. Carlos G. Gonzalez Becuar
Virus de Papiloma Humano (VPH)
- El CaCu ocupa los primeros lugares por
muertes por Cancer en Mexico
- Factor principal: VPH tipos de alto riesgo
- Cerca de 35 tipos de VPH se identifican en
lesiones benignas y malignas del tracto
anogenital tanto en hombres como en
mujeres
Virus de Papiloma Humano (VPH)
- INCAN 2009 “En conclusión, fue propuesto
que además de los tipos 16 y 18, los VPH 31,
33, 35 (80% de CaCu)
- 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 68, 73 y 82 deben
de ser considerados oncogénicos
(carcinogénicos) o tipos de “alto-riesgo”;
mientras que los tipos 26, 53 y 56 son
“probablemente de alto-riesgo””
- “ A pesar de la prevalencia de VPH en
mujeres con citologia “normal”, los tipos 16,
18, 31, 52, and 58 son reportados de manera
consistente como los 10 mas comunes (Bruni
et al. 2010)
DETECCION
- Hibridacion de DNA por sonda:
- Fue el primero en ser utilizado, poco
articulos reciente reportan esta
metodologia
- PCR:
- Desarrollado alrededor de 1998,
actulamente utilizado para detectar a
partir de muestras de suero sanguineo y
tejido cervical
DETECCION
- PCR:
- Desarrollado alrededor de 1998,
actulamente utilizado para detectar a
partir de muestras de suero sanguineo y
tejido cervical
PRUEBA “VPH13”
- Detecta: 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51,
52, 56, 58, 59, 68 de VPH.
- Muestra: Suero sanguíneo
- Producto: Kit Comercial
- Tiempo de espera de resultado: 24 48hrs
- Método: PCR con interpretación
mediante Electroforesis en gel de
Agarosa 1.5%
- Ventajas:
- Minima invasividad
- Deteccion de menos de 200
VP/mL de plasma/serum
APLICACIONES
- Prueba de rutina en mujeres con
sospecha de embarazo
- Opcion a prueba de hibridacion
in situ o llamada “prueba
humeda”
- Monitoreo y vigilancia de
pacientes
- Infecto-contagiosos
- Evolucion de lesion o
aparicion de lesion
- Decision terapeutica
DETECCION RNA EN SANGRE
CANCER STEM CELLS
- Comportamiento como
cualquier celula madre
- Capaces de
diferenciacion
- Proliferacion
- Persisten en tumores
- Recaidas
- Metastasis
- Marcadores inicilamente
conocidos en
- Cerebro
- Mama
- Colon
- Ovarios
- Prostata
- Pancreas
ANTECEDENTES DE GENETICA DE CA
DE MAMA
- 1994 se descubrio el primer gen que causa
Cancer de MAMA  BRCA1
- Recientemente
- Demanda sobre empresa por patentar
genes
- Actriz renombrada
- El Cáncer de Mama es una enfermedad
heterogénea
- Diversos tipos histológicos que presentan
diferentes características biológicas y clínicas
- Se ha destacado la presencia de
marcadores:
- P21
- Receptor de Factor de Crecimiento
Epidérmico (EGFR)
- Receptor de Factor de Crecimiento
Epidérmico Humano (HER2)
- Receptor de Progesterona (PR)
- Receptor de Estrógeno (ER)
- Gen de Susceptibilidad a Cáncer de
Mama 1 (BRCA1)
ACTIVIDAD DE GENES
- P21: Gen relacionado con
presentaciones menos agresivas
de CA de Mama
- EGFR: Detección de este gen
permite tratamientos con
respuesta positiva a fármacos
EGFR inhibidores de la tirosin
quinasa (Gefitinib)
- HER2: Se expresa en 20-30% de CA
de Mama en EUA, una de sus
utilidades radica en instauración
de tratamientos como el uso del
fármaco Trastuzumab
ACTIVIDAD DE GENES
- PR: Junto con HER2 y ER se puede
tener valor predictivo de
comportamiento de CA de Mama
- ER: Junto con HER2 y PR se puede
tener valor predictivo de
comportamiento de CA de Mama
- BRCA1: Detección de este gen
permite tratamientos con
respuesta positiva a fármacos
antineoplásicos comunes como
Cisplatino
PRUEBA MAMAPLEX
- Muestra: Suero sanguíneo
- Producto: Kit Comercial
- Tiempo de espera de resultado: 24 48hrs
- Método: PCR Multiplex con
interpretación mediante Electroforesis
en gel de Agarosa 1.5%
- Ventajas:
- Minima invasividad
- Deteccion de la expresion de 6 genes
en una muestra
- Pueden ser detectados por
individual según el tamaño del
amplicon
ANTECEDENTES EN CA DE OVARIO
- Carcinoma epitelial de ovarioa
tiene el peor de los pronosticos
- Asintomatico en estadios
temprano
- Deteccion en > ¾ debido a
lesion avanzada y
metastasis
- Expectativa de vida de 5
años
- 90% en etapas
tempranas
- < 20% avanzado
MARCADORES EN CA DE OVARIO
- CA125 deteccion en 80% de mujeres con CA de
Ovario
- “The inadequacy of CA-125 alone as a
screening test is partially due to the high rate
of false-positive values because serum
elevations may also be caused by a variety of
other conditions including other cancers
(pancreatic, breast, bladder, liver, lung); benign
conditions such as diverticulitis, liver cirrhosis,
endometriosis, uterine fibroids, and benign
ovarian lesions; and physiologic conditions
such as menstruation and pregnancy.”
American Journal of Obstetrics & Gynecology
Volume 199, Issue 3 , Pages 215-223,
September 2008
MARCADORES EN MULTIPLEX DE OVARIO
- CD44
- Celulas Generadoras de Cancer de
Ovario ( 2008 Cancer Research)
- C-MYC
- Amplificado en 30-60% de todos los
casos
- AMACR
- Utilidades para estidificacion FIGO,
determina un pesimo pronostico,
tmbn presente en CA de Prostata y de
Colon
PRUEBA MULTIPLEX DE OVARIO
-
Muestra: Suero sanguíneo
Producto: Kit Comercial
Tiempo de espera de resultado: 24 - 48hrs
Método: PCR Multiplex con interpretación
mediante Electroforesis en gel de Agarosa
1.5%
- Ventajas:
- Minima invasividad
- Deteccion de la expresion de 3 genes en
una muestra
- Pueden ser detectados por individual
según el tamaño del amplicon