Prueba de idoneidad del sistema para el control de calidad

Prueba de idoneidad del sistema para
el control de calidad de Aripiprazol con
LC Agilent 1120 Compact y las columnas
ZORBAX C-18
Nota de aplicación
Cl
Siji Joseph,
Patric Hörth
Cl
O
N
NH
N
H
+
O
O
O
N
H
N
N
BrH2 C
Cl
Cl
Resumen
Equipo Agilent
• LC Agilent 1120 Compact
• Columna ZORBAX Eclipse XDB C18
Área de aplicación
• Industria farmacéutica: QA/QC
El LC Agilent 1120 Compact es el sistema de elección para la cromatografía líquida convencional a escala analítica. Es un LC integrado diseñado para ofrecer sencillez de uso, rendimiento, y fiabilidad. Es adecuado
para el análisis de fármacos debido a tiempos de retención y áreas de pico
sumamente precisos y bajos límites de detección. Esta nota de
aplicación muestra:
• Excelente precisión del tiempo de retención, con una desviación
estándar relativa (RSD) < 0.07%.
• Excelente precisión de área, con RSD < 0.25% para picos separados a nivel
de la línea base.
• Excelente precisión de altura, con RSD < 0.25% para picos separados a
nivel de la línea base.
Introducción
En la industria farmacéutica, la
cromatografía líquida es una herramienta versátil para la separación
de analitos individuales. Se han desarrollado innumerables métodos
para el análisis de HPLC ya que
se ha demostrado que es muy confiable y reproducible en todas las
etapas desde el descubrimiento
del fármaco hasta su fabricación.
Como resultado, es necesario verificar que todo sistema HPLC funcione dentro de un rango aceptable de precisión y exactitud todos
los días.
La prueba de idoneidad del sistema (SST) es una medida del desempeño del instrumento día a
día. Estas pruebas aseguran que el
método y el sistema HPLC pueden
generar resultados de precisión y
exactitud aceptables. El criterio
seleccionado está basado en parámetros cromatográficos críticos
tales como resolución, reproducibilidad en el tiempo de retención,
área y altura de los picos, eficiencia de las columnas y sus variaciones (Desviación estándar) dentro
de límites aceptables, los cuales
se definen durante los experimentos de validación de métodos.
En esta nota de aplicación, nos
enfocamos en este paso de validación final y evaluamos la idoneidad del sistema LC Agilent 1120
Compact para el análisis de
Aripiprazol y sus precursores.
Parte experimental
Equipo
El sistema LC Agilent 1120 Compact
incluye:
• Una bomba de gradiente con
mezclado de baja presión
• Un inyector automático con
bandeja de viales
2
Figura 1
LC Agilent 1120 Compact.
• Un compartimento de columna
para una columna de hasta
250 mm de longitud
• Un detector de longitud de onda
variable (VWD)
El Aripiprazol y los dos materiales
iniciales fueron disueltos en metanol inicialmente (20% del volumen
total de ajuste), y luego se agregó
diluyente hasta las marcas.
Se usó una columna Agilent ZORBAX
Eclipse XDB C18, 5µm, 150 x 4.6 mm
Muestra de idoneidad del sistema:
Se preparó una mezcla de prueba
para la idoneidad del sistema con
10 µg/ml de Aripiprazol y cada una
de las impurezas a 5 µg/ml.
El instrumento fue controlado
con el software de conformidad
Agilent EZChrome Elite Compact.
Compuestos
Hidrocloruro de 1-(2,3-diclorofenil)piperazina (material inicial-1)
y 7-(4-bromobutoxi)-3,4-dihidrocarbostirilo (material inicial-2) son
los dos materiales iniciales para la
síntesis de Aripiprazol. El esquema sintético se muestra en la Figura 2. Para este estudio, los dos materiales iniciales son tratados como
impurezas.
Preparación de las muestras
Preparación de la solución madre:
se prepararon 2 mg/ml de Aripiprazol y 5 mg/ml del material inicial-1 y del material inicial-2 como
soluciones madre individuales.
Parámetros cromatográficos
El método cromatográfico se
configuró para que todos los compuestos fueran separados a nivel
de la línea base. Las condiciones
fueron:
• Muestra: 1-(2,3-diclorofenil) de
piperazina, 7-(4-bromobutoxi)3,4-dihidrocarbostirilo y
Aripiprazol
• Columna: Agilent ZORBAX Eclipse
XDB C18, 5µm, 150 x 4.6 mm
• Fases móviles: A = agua + 0.2%
ácido trifluoroacético (TFA),
B = acetonitrilo + 0.16% TFA
• Flujo: 1.0 ml/minuto
• Gradiente: a 0 minutos 30%B,
a 7 minutos 70%B, luego se
mantiene la relación por otros
dos minutos
• Volumen de inyección: 10 µl
• Inyector automático programado
con un vial de lavado (usando
acetonitrilo) para enjuagar el
exterior de la aguja
• Tiempo de corrida: 9 minutos
• Tiempo posterior: 5 minutos
• Horno de columna: 40 °C
• VWD: 254 nm, anchura de pico
(PW) > 0.05 minutos
• Diluyente/blanco: 60:40 acetonitrilo:agua
Cl
O
N
+
NH
O
N
N
BrH2 C
Al analizar fármacos con detección UV, resulta especialmente importante la precisión de los tiempos de retención. La precisión de
los tiempos de retención y de las
áreas se determinó a partir de las
10 inyecciones repetidas de una
muestra de idoneidad del sistema.
La Figura 4 muestra una superposición de 10 corridas consecutivas.
Los criterios de aceptación para
este estudio de idoneidad del sistema están tabulados en la tabla 2.
Cl
Cl
Figura 2
Estructuras de material inicial-1 y material inicial-2 y el producto Aripiprazol.
Línea
Ubicación
Nombre de la muestra Nº de inyecciones Volumen de inyección (µl)
1
2
3
Vial 1
Vial 2
Vial 3
Blanco
Idoneidad del sistema
Blanco
3
10
1
10
10
10
Tabla 1
Tabla de secuencias.
80
Resultados y discusión
Material inicial-1
Material inicial-2
60
mUA
En la Figura 3, un cromatograma
de ejemplo para la prueba de idoneidad del sistema muestra una
excelente resolución. El tiempo de
separación fue de nueve minutos;
el tiempo total de análisis (incluyendo la vuelta al equilibrio) se
pudo limitar a 14 minutos. La fase
móvil contenía ácido trifluoroacético como modificador, el cual mejoró la retención y la forma de los
picos.
O
N
H
O
N
H
Aripiprazol
Tabla de secuencias
Basada en las recomendaciones
de la ICH (Conferencia internacional sobre la armonización) para
las pruebas de idoneidad del sistema, la tabla de secuencias que aparece como tabla 1 fue configurada en el software de cumplimiento Agilent EZChrom Elite
Compact.
Cl
40
20
0
0
2
4
6
Tiempo [minutos]
8
Figura 3
Cromatograma de Aripiprazol y sus impurezas.
Parámetro
Límite
RSD del tiempo de retención (RT)
RSD del área
Resolución
Asimetría
Platos teóricos
Ancho del pico
< 0.07 %
< 1.00 %
> 2.00
< 2.00
> 2000
< 0.08
minutos
< 0.50 %
RSD de la altura
Tabla 2
Criterios de aceptación.
3
Compuesto
Material inicial-1
Aripiprazol
Material inicial-2
Cantidad
(µg/ml)
5.15
10.1
5.4
RSD de
RT (%)
0.033
0.027
0.021
RSD de
área (%)
0.189
0.129
0.137
PW
Asimetría
Platos
teóricos
NA
17.87
17.48
0.07
0.05
0.06
1.02470
1.14031
1.09432
>14000
>58000
>60000
RSD de
altura (%)
0.228
0.183
0.169
Aprobado
(sí/no)
Sí
Sí
Sí
*N/A = no aplica
80
Los resultados de la prueba de
idoneidad del sistema se muestran
en la Figura 4 y se resumen en la
tabla 3.
60
mUA
Tabla 3
Resultados de la prueba de idoneidad del
sistema.
Estos resultados de la prueba de
idoneidad del sistema para Aripiprazol muestran que LC Agilent
1120 Compact cumple con los rigurosos requisitos de desempeño
para análisis farmacéuticos QA/QC.
Resolución
40
20
Conclusión
Para el análisis de fármacos en
controles de calidad de rutina, es
muy importante tener sistemas LC
sumamente precisos, exactos y
sólidos. Esto permite análisis confiables de fármacos farmacéuticos
y sus impurezas. El sistema LC
Agilent 1120 Compact se adapta
bien para esta aplicación porque
proporciona la calidad de datos
necesaria y está basado en un
diseño sólido probado.
0
2
4
6
Tiempo [minutos]
8
10
Figura 4
Superposición de 10 cromatogramas repetitivos.
Siji Joseph es un científico
de aplicaciones en Agilent
Technologies Life Science
Center en Bangalore, India.
Patric Hörth es químico de
I&D en Agilent Technologies en
Waldbronn, Alemania.
www.agilent.com/chem/1120
© 2008 Agilent Technologies Inc.
Publicado el 1º de junio de 2008
Número de publicación 5989-8333ESMX