Prueba de idoneidad del sistema para el control de calidad

Prueba de idoneidad del sistema para
el control de calidad de Tramadol con
LC Agilent 1120 Compact y las columnas
ZORBAX C-18
Nota de aplicación
Siji Joseph,
Patric Hörth
Columna: ZORBAX Eclipse-C18, 5 µm,
250 x 4.6 mm
6
mUA
4
2
0
3
4
5
6
7
Tiempo [minutos]
8
9
10
Resumen
El LC Agilent 1120 Compact es el sistema de elección para la cromatografía líquida convencional a escala analítica. Es un LC integrado diseñado para ofrecer sencillez de uso, rendimiento, y fiabilidad. Se adapta bien
para el análisis de fármacos debido a tiempos de retención y áreas de
Equipo Agilent
• LC Agilent 1120 Compact
• Columna ZORBAX Eclipse XDB C18
Área de aplicación
• Industria farmacéutica: QA/QC
pico sumamente precisos. Esta nota de aplicación muestra:
• Excelente precisión del tiempo de retención, con una desviación estándar relativa (RSD) < 0.07%.
• Excelente precisión de área, con RSD < 0.25% para picos separados a nivel
de la línea base.
• Excelente precisión de altura, con RSD < 0.25% para picos separados a nivel
de la línea base.
Introducción
La prueba de idoneidad del sistema (SST) es una medida del desempeño del instrumento día a
día. Estas pruebas aseguran que el
método y el sistema HPLC pueden
generar resultados de precisión y
exactitud aceptables. El criterio
seleccionado está basado en parámetros cromatográficos críticos
tales como resolución, reproducibilidad en el tiempo de retención,
área y altura de los picos, eficiencia de la columna y sus variaciones (Desviación estándar) dentro
de límites aceptables, los cuales
se definen durante los experimentos de validación de métodos. Actualmente las mediciones de SST
se han convertido en parte de los
procedimientos analíticos, y también son recomendadas por las
farmacopeas y aceptadas por la
Administración de Drogas y Alimentos (FDA) de los Estados
Unidos.
En esta nota de aplicación, nos
enfocaremos en este paso de validación final y evaluamos la idoneidad del sistema LC Agilent 1120
Compact para el análisis del fármaco analgésico Tramadol y las
posibles impurezas de su producción.
Figura 1
LC Agilent 1120 Compact.
H3C
Br
H3C
CH3
N
N
H
H3C
O
N
+
CH3
H
CH3
CH3
H
OH
OH
Bromoanisol
O
Impureza E (UV inactivo)
H3C
N
CH3
OCH3
OCH3
Tramadol
H3C
N
CH3
Impureza A
H3C
H
N
CH3
H
Parte experimental
Equipo
El sistema LC Agilent 1120
Compact incluye:
• Una bomba de gradiente con
mezclado de baja presión
• Un inyector automático con
bandeja de viales
• Un compartimento de columna
para una columna de hasta
250 mm de longitud
• Un detector de longitud de
onda variable (VWD)
2
OH
OCH3
Impureza B
OCH3
Impureza C
OH
Impureza D
Figura 2
Estructuras de los compuestos de la síntesis de Tramadol.
Se usó una columna ZORBAX
Eclipse XDB C18, 5 µm, 250 x
4.6 mm.
El instrumento fue controlado
con el software de conformidad
Agilent EZChrome Elite Compact.
Estructuras de los compuestos
usados
La Figura 2 muestra la síntesis de
Tramadol, destacando tanto los
materiales iniciales como los posibles subproductos. Este estudio se
concentró en el análisis de todos
Parámetros cromatográficos
El método cromatográfico se configuró para que todos los compuestos fueran separados a nivel de la
línea base. Las condiciones fueron:
• Muestra: Tramadol; impurezas A,
B, C, y D; y 3-bromoanisol
• Columna: ZORBAX Eclipse XDB
C18, 5 µm, 250 x 4.6 mm,
• Fases móviles:
A = agua + 0.2% TFA,
B = acetonitrilo + 0.16% TFA
• Flujo: 1.2 ml/minuto
• Gradiente: a 0 minutos 30%B, a
9 minutos 85%B, luego se mantiene la relación por otros tres
minutos
• Volumen de inyección: 10 µl
• Inyector automático programado
con un vial de lavado (usando
acetonitrilo) para limpiar el exterior de la aguja
• Tiempo de corrida: 12 minutos
• Tiempo posterior: 5 minutos
• Horno de columna: 30 °C
• VWD: 270 nm, ancho de pico
(PW) > 0.05 minutos
• Diluyente/blanco: 30:70 acetonitrilo:agua
Tabla de secuencias
Basada en las recomendaciones
de la ICH (Conferencia internacional sobre la armonización) para
las pruebas de desempaño de ido-
Nombre de la muestra Nº de inyecciones Volumen de inyección (µl)
1
2
3
Vial 1
Vial 2
Vial 3
Blanco
Idoneidad del sistema
Blanco
3
6
1
10
10
10
Tabla 1
Tabla de secuencias.
7.5
5.0
3-Bromo anisol 10.112
10.0
Impureza C 5.072
Impureza B 5.297
12.5
Impureza A 3.332
Tramadol 3.630
15.0
Impureza D 2.498
Muestra de idoneidad del sistema:
Se preparó una mezcla de prueba
para la idoneidad del sistema con
Tramadol a 10 µg/ml y todos los
demás materiales iniciales/impurezas a 5 µg/ml cada uno. Esta mezcla de prueba se inyectó seis veces para el cálculo de la idoneidad
del sistema.
Ubicación
mUA
Preparación de la muestra
Preparación de la solución madre:
2 mg/ml de Tramadol y 5 mg/ml de
cada material inicial (3-bromoanisol) e impurezas A, B, C, y D fueron preparadas como las seis soluciones madre.
Línea
2.5
0.0
0
2
4
6
8
Tiempo [minutos]
10
12
Figura 3
Cromatograma de Tramadol con impurezas y material inicial.
50
40
30
mUA
estos compuestos excepto la impureza E, un material inicial ultravioleta (UV) inactivo.
20
10
0
0
2
4
6
8
Tiempo [minutos]
10
12
Figura 4
Superposición de 6 cromatogramas repetitivos.
neidad del sistema, la tabla de secuencias que aparece como tabla
1 fue configurada en el software
Agilent EZChrom Elite Compact.
3
Resultados y discusión
Compuesto
En la Figura 3, un cromatograma
de ejemplo para la prueba de idoneidad del sistema muestra una
excelente resolución. El tiempo de
separación fue de 12 minutos y el
tiempo total de análisis (incluyendo la vuelta al equilibrio) se pudo
limitar a 17 minutos. La fase móvil
contenía ácido trifluoroacético como modificador, el cual mejoró la
forma de los picos.
Al analizar fármacos con detección
UV, resulta especialmente importante la precisión de los tiempos de
retención. La precisión de los tiempos de retención y de las áreas
se determinó a partir de las seis
inyecciones duplicadas de una
muestra de idoneidad del sistema.
La Figura 4 muestra una superposición de seis análisis consecutivos.
Los criterios de aceptación para
este estudio de idoneidad del sistema están tabulados en la tabla 2.
Parámetro
Límite
RSD del tiempo de retención (RT)
RSD del área
Resolución
Asimetría
Platos teóricos
Ancho del pico
< 0.07 %
< 1.00 %
> 2.00
< 2.00
> 2000
< 0.08
minutos
< 0.50 %
RSD de la altura
Tabla 2
Criterios de aceptación.
Resultados en la columna Agilent TC-C18, 250 x 4.6 mm, 5 µm
Aprobado
Ancho
(sí/no)
Cantidad RSD de RSD de Reso- de Pico Asimetría Platos
RSD de
(µg/ml) RT (%) área (%) lución (min)
teóricos altura (%)
Tramadol
Impureza A
Impureza B
Impureza C
Impureza D
3-Bromoanisol
10.1
5.2
5.3
5.2
5.1
5.2
0.037
0.068
0.013
0.017
0.066
0.008
0.150
0.234
0.191
0.165
0.237
0.212
3.23
8.91
2.47
15.83
NA
45.17
0.05
0.05
0.05
0.05
0.05
0.07
1.16130
1.14739
1.14858
1.17513
1.16080
1.28923
>25000
>20000
>50000
>50000
>11500
>60000
0.207
0.347
0.439
0.199
0.413
0.281
Tabla 3
Resultados de la prueba de idoneidad del sistema.
Sí
Sí
Sí
Sí
Sí
Sí
*NA = no aplica
Los resultados de la prueba de idoneidad del sistema se muestran en
la Figura 4 y se resumen en la tabla 3. Estos resultados de la prueba de idoneidad del sistema para
Tramadol muestran que el LC Agilent
1120 Compact cumple con los rigurosos requisitos de desempeño
para análisis farmacéuticos de
QA/QC.
Conclusión
El LC Agilent 1120 Compact se
adapta especialmente bien a los
QA/QC farmacéuticos porque el
sistema proporciona excelente
precisión para los tiempos de retención y las áreas. En este estudio, la precisión de los tiempos de
retención fue < 0.07% RSD y para
áreas de picos separados a nivel
de la línea base fue < 0.25% RSD.
Siji Joseph es un científico
de aplicaciones en Agilent
Technologies Life Science
Center en Bangalore, India.
Patric Hörth es químico de
I&D en Agilent Technologies en
Waldbronn, Alemania.
www.agilent.com/chem/1120
© 2008 Agilent Technologies Inc.
Publicado el 1º de junio de 2008
Número de publicación 5989-8334ESMX