ENGLISH ® ISolate Catalog No. 99264 12 x 6 mL, 2 x 50 mL, 2 x 100 mL Ready to Use Density Gradient Medium at Two Concentrations Catalog No. 99275 Stock Solution 100 mL Catalog No. 99306 Concentrate 100 mL REFERENCES Adaniya GK, Jackson KV: Comparison of Percoll® and ISolate® in the Preparation of Semen for use in Assisted Reproductive Technologies. 53rd Annual Meeting of the American Society for Reproductive Medicine, Cincinnati, Ohio; 0-113, 1997. Symbols: Catalog Number Lot Number Tarchala SM, Fahy MM, Hauserman HM, Kallmann K, Volentine K, Radwanska E, Binor Z, Molo MW, Rawlins RG: ISolate® As a New Method of Sperm Separation. 53rd Annual Meeting of the American Society for Reproductive Medicine, Cincinnati, Ohio; P-116, 1998. Miller, KF, Fry KL, Arciaga RL, Falcone T: Semen preparation for in-vitro fertilization using ISolate® results in sperm recovery, fertilization and pregnancy outcomes that are indistinguishable from those obtained with Percoll®. 14th Embryology, Goteborg, Sweden; P-116, 1998. Tarchala SM, Volentine KK, Rawlins RG: A comparison of sperm processing using ISolate® and Pure Sperm™. 14th Annual Meeting of the European Society of Human Reproduction and Embryology, Goteborg, Sweden; R-041, 1998. Sterilized using aseptic processing techniques (filtration) Expiration: Year - Month - Day Caution:See instructions for use European Representative MPIE Schutweg 13A 5145 NP Waalwijk, The Netherlands See instructions for use. Storage Temperature CE Mark 0050 0050 ISolate is a Registered Trademark of Irvine Scientific ® Percoll ® is a Registered Trademark of Pharmacia Biotech, AB Sweden MPIE Schutweg 13a 5145 NP Waalwijk, The Netherlands PRODUCT DESCRIPTION ISolate® is a density gradient medium designed to separate the motile fraction of sperm from seminal fluid. As a two layer gradient system, it effectively reduces cellular contaminants such as dead sperm, white blood cells and miscellaneous debris. The resulting sample contains predominantly motile sperm. ISolate is a membrane filtered, aseptically processed colloidal suspension of silica particles stabilized with covalently bound hydrophilic silane in HEPES-buffered HTF. The sterility assurance level (SAL) is 10-3. ISolate is tested and found negative for pyrogens by rabbit pyrogen test. DIRECTIONS FOR USE Catalog #99264 - READY TO USE COLLOIDAL SILICA AT TWO CONCENTRATIONS (50% and 90%) A. Materials Suggested: ISolate • Irvine Scientific Catalog #99264 (6mL , 50 mL or 100mL vial kit) Sperm Washing Medium • Irvine Scientific Catalog #9983 Sterile, disposable conical centrifuge tubes • Irvine Scientific Catalog #IS-325 Pasteur Pipettes, sterile Centrifuge Incubator, 37°C B. Gradient Preparation: No preliminary dilutions are necessary. Each vial of upper and lower layer gradient is ready for use. Continue to GENERAL PROCEDURE section of product insert. For additional details on the use of these products, each laboratory should consult its own laboratory procedures and protocols which have been specifically developed and optimized for your individual medical program. STORAGE INSTRUCTIONS AND STABILITY Store the unopened containers refrigerated at 2º to 8ºC. Warm to ambient or incubator (37°C) temperature prior to use. Do not freeze or expose to high temperatures. ISolate is stable until the expiration date shown on the box and bottle labels when stored as directed. PRECAUTIONS AND WARNINGS This device is intended to be used by staff trained in assisted reproductive procedures that include the indicated application for which the device is intended. ISolate will appear opaque. This is normal for this product. Do not use any vial of medium which shows evidence of particulate matter or contamination (nonuniform cloudiness). Catalog #99275 - STOCK SOLUTION 90% density gradient medium for use in a one-step procedure or for further dilution. ISolate should be tightly capped when used in a CO2 incubator to avoid pH changes. A.Materials Suggested: ISolate Stock Solution • Irvine Scientific Catalog #99275 Modified Human Tubal Fluid • Irvine Scientific Catalog #90126 Sperm Washing Medium • Irvine Scientific Catalog #9983 Sterile, disposable conical centrifuge tubes • Irvine Scientific Catalog #IS-325 Pasteur Pipettes, sterile Centrifuge Incubator, 37°C This product contains no preservatives, antibiotics, or protein supplements. To avoid problems with contamination, handle using aseptic techniques. B. Gradient Preparation: Two solutions are required to perform the gradient sperm separation method: An upper layer and a lower layer. 1. Upper Layer solution - 50%: a) Take STOCK SOLUTION (Catalog #99275) and pipette 5.6 mL into a sterile centrifuge tube b Add 4.4 mL of Modified Human Tubal Fluid (Catalog #90126) c) Cap tube and invert gently 3-4 times to allow for complete mixing d) Label tube as “UPPER LAYER” 2. Lower Layer solution - 90%: a) Aliquot 10 mL of the STOCK SOLUTION into a sterile centrifuge tube and cap - (No further dilutions necessary - Stock Solution is 90%) b) Label tube as “LOWER LAYER” 3. Continue to GENERAL PROCEDURE section of product insert. (NOTE: 10 mL Upper Layer and 10 mL Lower Layer will process approximately 5 semen samples.) Catalog #99306 - CONCENTRATE Colloidal silica concentrate for further dilution into density gradients; formulated in an isotonic buffer and approximates the density of undiluted Percoll®. ISolate® CONCENTRATE was evaluated according to this package insert at 50% and 90% gradients. Each laboratory may choose to make gradients at different concentrations which should be evaluated for effectiveness. A. Materials Suggested: ISolate® Concentrate • Irvine Scientific Catalog #99306 Modified Human Tubal Fluid • Irvine Scientific Catalog #90126 Sperm Washing Medium • Irvine Scientific Catalog #9983 Sterile, disposable conical centrifuge tubes • Irvine Scientific Catalog #IS-325 Pasteur Pipettes, sterile Centrifuge Incubator, 37°C B. Gradient Preparation: Two solutions are required to perform the gradient sperm separation method: An upper layer and a lower layer. 1.) Upper Layer solution - 50%: a) Take CONCENTRATE (Catalog #99306) and pipette 4.5 mL into a sterile centrifuge tube b) Add 5.5 mL of Modified Human Tubal Fluid (Catalog #90126) c) Cap tube and invert gently 3-4 times to allow for complete mixing d) Label tube as “UPPER LAYER” 2. Lower Layer solution - 90%: a) Take CONCENTRATE (Catalog #99306) and pipette 8.1 mL into a sterile centrifuge tube b) Add 1.9 mL of Modified Human Tubal Fluid (Catalog #90126) c) Cap tube and invert gently 3-4 times to allow for complete mixing d) Label tube as “LOWER LAYER” 3. Continue to GENERAL PROCEDURE section of product insert. Note: The terms 50% and 90% do not represent an actual concentration. The 50% and 90% are relative concentrations based on the previous nomenclature that defined a 1:9 dilution of Percoll® as equal to a 100% working, isotonic solution. GENERAL PROCEDURE The following is a general procedure for a two-step gradient separation of motile sperm from semen. The volume and concentration can be modified to meet each laboratory’s preference (i.e. mini-gradient, cryopreserved semen, three-layer gradient). 1. Bring all media components to room temperature or 37°C. 2. Using a sterile pipette, transfer 1.5 - 2.0 mL of the “LOWER LAYER” into a sterile, disposable, conical centrifuge tube. 3. Using a new sterile pipette, transfer an equal volume of “UPPER LAYER” on top of the “LOWER LAYER”. This is done by contacting the surface of the “LOWER LAYER” at the side of the tube with the tip of the pipette. Carefully dispense the “UPPER LAYER” by spiraling the pipette tip around the circumference of the tube in an upward motion as the level of the “UPPER LAYER” rises. 4. Gently place 1.5 - 2.0 mL of liquefied semen onto the “UPPER LAYER” using a new sterile pipette. 5. Centrifuge for 10-20 minutes at approximately 200 300xg.* Carefully expose the pellet by either aspirating off the “UPPER” and “LOWER LAYERS”, or directly removing the pellet and transferring to a new sterile centrifuge tube. Note: The quality of the sperm sample should be evaluated and taken into consideration when determining the proper centrifugation speed and time. These should be adjusted according to the individual specimen quality for optimization of the procedure. 2511 Daimler Street, Santa Ana, California 92705-5588 Telephone: 1 949 261 7800 • 1 800 437 5706 Fax: 1 949 261 6522 • www.irvinesci.com PN 40558 Rev.10 DEUTSCH 6. Using a new sterile pipette, add 2.0 - 3.0 mL of appropriate washing medium such as Sperm Washing Medium (IS Catalog #9983) or Modified HTF (IS Catalog #90126) with protein supplementation. Resuspend the isolated pellet. Centrifuge (~200xg) for 8 -10 minutes and remove the supernatant. Repeat this step for a second wash. Discard the supernatant and resuspend the pellet using a suitable volume of appropriate medium. The sample is now ready for analysis. In case of damage, do not use. Please discard or return to Manufacturer for replacement. Caution: Federal (U.S.) law restricts this device to sale by or on the order of a physician. Produktbeschreibung ISolate ® ist ein Dichtegradientsmedium [oder Konzentrationgradientsmedium], das fuer das Trennen des freibeweglichen Spermafraktion von der Samenfluessigkeit bestimmt ist. Als ein Gradientssystem mit zwei Schichten verringert es effektiv die zellulaeren Kontaminationsstoffe wie das tote Sperma, die weissen Blutkoerperchen, und andere Rückstaende. Die ergebende Probe enthält überwiegendes freibewegliches Sperma. ISolate ist Membran gefiltert, es ist eine Kolloidsuspension von Kieselpartikel, die aseptisch verarbeitet ist, und stabilisiert mit dem kovalentgebundenen hydrophilen Silan im HEPES-buffered [gepuffertem] HTF. Das Sterilitaetversicherungsniveau [sterility assurance level (SAL)] ist 10 -3 . ISolate wurde durch die Kaninchenpyrogenprobe getestet und wurde negativ von Pyrogen gefunden. GEBRAUCHSANLEITUNG Katalog Nr. 99264 - BETRIEBSFERTIGE KOLLOIDAL SILICA BEI ZWEI KONZENTRATIONEN (50% UND 90%) A. Vorgeschlagene Materialien: ISolate® • Irvine Scientific Katalog Nr. 99264 (6mL, 50mL oder 100mL Phiolesatz) Sperm Washing Medium [Spermaspuelungsmedium] • Irvine Scientific Katalog Nr. 9983 Sterile wegwerfbare konische Zentrifugegläser • Irvine Scientific Katalog Nr. IS-325 Pasteurpipetten, Steriler Zentrifugebrutkasten, 37°C B. Gradientvorbereitung: Keine vorbereitende Verdünnungen sind notwendig Jede Phiole der Oberschichtsgradient und Unterschic tsgradient ist zum Gebrauch bereit. Setzen Sie zum ALLGEMEINEN VERFAHREN Abschnitt des Produ teinsatzes fort. Katalog Nr. 99275 - verdichtete Lösung 90% Density Gradient Medium ist für den Gebrauch in einem Einschrittverfahren oder für weitere Verdünnung. A. Vorgeschlagene Materialen ISolate Stock Solution • Irvine Scientific Katalog Nr. 99275 Modified Human Tubal Fluid • Irvine Scientific Katalog Nr. 90126 Sperm Washing Medium [Spermaspülungsmedium] • Irvine Scientific Katalog #9983 Sterile, wegwerfbare konische Zentrifugegläser • Irvine Scientific Katalog #IS-325 Pasteurpipetten, Steriler Zentrifugebrutkasten, 37°C B. Gradientvorbereitung: Zwei Lösungen werden benoetigt, um die Trennung methode des Spermagradients durchzuführen: Eine Oberschicht und eine Unterschicht 1. Upper Layer solution - 50% [Oberschichtlösung – 50%]: a. Nehmen Sie die STOCK SOLUTION (Katalog Nr. 99275) und pipettieren Sie 5,6 mL in einem sterilen Zentrifugeglas b. Fuegen Sie 4,4 mL Modified Human Tubal Fluid (Katalog Nr. 90126) c. Verschliessen Sie das Zentrifugeglas und kehren Sie es behutsam 3 bis 4 mal um, um eine komplette Mischung zuzulassen. d. Etikettieren Sie das Zentrifugeglas als “OBERSCHICHTt”. 2. Lower Layer solution- 90% [Unterschichtloesung-90%]: a. Aliquotieren Sie 10 mL Stock Solution in einem sterilen Zentrifugeglas und verschliessen Sie es (keine weitere Verduennungen werden benoetigt – Stock Solution ist 90%). b. Etikettieren Sie das Zentrifugeglas als “UNTERSCHICHT” 3. Setzen Sie zum ALLGEMEINEN VERFAHREN Abschnitt des Produkteinsatzes fort. (ANMERKUNG: 10 mL Oberschicht und 10 mL Unterschicht werden ungefaehr 5 Samenproben verarbeiten) Katalog Nr. 99306 – KONZENTRAT Kolloid-Kieselerdekonzentrat ist für weitere Verdünnung zu brauchbare Konzentrationen der Dichtegradienten bestimmt; formuliert in einem isotonischen Puffer und naehert die Dichte von unverdünntem Percoll® an. ISolate KONZENTRAT wurde entsprechend diesem Paketeinsatz bei 50% und 90% Gradient ausgewertet. Jedes Labor kann beschliessen, die Gradienten bei unterschiedlichen Konzentrationen zu bilden, die für die Wirksamkeit ausgewertet werden sollten. A. Vorgeschlagene Materialien ISolate Concentrate • Irvine Scientific Katalog Nr. 99306 Modified Human Tubal Fluid • Irvine Scientific Katalog Nr. 90126 Sperm Washing Medium • Irvine Scientific Katalog Nr. 9983 Steriles, wegwerfbares konisches Zentrifugeglaeser • Irvine Scientific Katalog Nr. IS-325 Pasteurpipetten, Steriler Zentrifugebrutkasten, 37°C B. Gradientvorbereitung: Zwei Lösungen werden benoetigt, um die Trennung methode des Spermagradients durchzuführen: Eine Oberschicht und eine Unterschicht. 1. Oberschichtloesung – 50% a. Nehmen Sie das CONCENTRATE (Katalog Nr. 99306) und pipettieren Sie 4,5 mL in einem sterilen Zentrifugeglas. b. Fuegen Sie 5,5 mL Modified Human Tubal Fluid (Katalog Nr. 90126) hinzu. c. Verschliessen Sie das Zentrifugeglas und kehren Sie sorgfaeltig 3 bis 4 mal um, um eine komplette Mischung zuzulassen. d. Etikettieren Sie das Zentrifugeglas als “OBERSCHICHT”. 2. Unterschichtloesung – 90% a. Nehmen Sie CONCENTRATE (Katalog Nr. 99306) und pipettieren Sie 8,1 mL in einem sterilen Zentrifugeglas b. Fuegen Sie 1,9 mL Modified Human Tubal Fluid (Katalog Nr. 90126) hinzu. c. Verschliessen Sie das Zentrifugeglas und kehren Sie sorgfaeltig 3 bis 4 mal um, um eine komplette Mischung zuzulassen d. Etikettieren Sie das Zentrifugeglas als “UNTERSCHICHT”. 3. Setzen Sie zum ALLGEMEINEN VERFAHREN Abschnitt des Paketeinsatz fort. Anmerkung: Die Bezeichnungen 50% und 90% bedeuten nicht eine tatsächliche Konzentration. Die 50% und die 90% sind die relativen Konzentrationen, die auf der vorherigen Namenklatur basieren. Das bedeuted, dass eine 1:9 Verdünnung von Percoll® is gleichwertig zu einer Funktion 100% der isotonische Loesung ALLGEMEINES VERFAHREN Das folgende ist ein allgemeines Verfahren für eine zweistufige Gradientstrennung des freibeweglichen Sperma vom Samen. Das Volumen und die Konzentration koennen geändert werden, um jedes Labors’ Präferenz zu entsprechen (d.h. Mini-Steigung [oder Mini-Gradient], kaeltekonservierter Samen, Dreischichtsgradient). 1. Die Temperatur von alle Mediumbestandteile sollte bei der Raumtemperatur oder 37°C sein. 2. Mit einer sterilen Pipette uebertragen Sie 1,5 mL bis 2,0 mL der UNTERSCHICHT auf ein steriles konisches Wegwerfzentrifugeglas. 3. Mit einer sterilen Pipette uebertragen Sie ein gleiches Volumen von OBERSCHICHT auf die UNTERSCHICHT. Das wird getan, indem man die Oberflaeche der UNTERSCHICHT mit der Pipettenspitze an der Seite des Zentrifugeglas in Beruehrung kommt. Verteilen Sie sorgfaeltig die “OBERSCHICHT” mit der Pipettenspitze um den Umkreis des Zentrifugeglases in einer aufwaerts Bewegung als das Niveau der OBERSCHICHT steigt. ITALIANO 4. Mit einer neuen sterilen Pipette, fuegen Sie sorgfaeltig 1,5 – 2,0 mL verfluessigter Samen auf die OBERSCHICHT hinzu. 5. Zentrifugierien Sie ungefaehr 200 – 300xg fuer 10 bis 20 Minuten.* Stellen Sie sorgfaeltig die Tablette heraus, entweder indem Sie weg von der “OBERSCHICHT” und von der “UNTERSCHICHT” ansaugen, oder entfernen Sie direkt die Tablette und uebertragen Sie auf ein neues steriles Zentrifugeglas *Anmerkung: Die Qualität der Spermaprobe sollte ausgewertet und in Erwaegung gezogen werden, um die korrekte Zentrifugierungsgeschwindigkeit und Zeit festzustellen. Diese sollten entsprechend der einzelnen Probestückqualität für Optimierung des Verfahrens justiert werden. 6. Mit einer neuen sterilen Pipette, fügen Sie 2,0 - 3,0 mL des passenden Spuelungsmediums wie das Sperm Washing Medium (Irvine Scientific Katalog # 9983) oder Modified HTF (Irvine Scientific Katalog # 90126), mit Proteinergänzung hinzu. Resuspendieren Sie die isolierte Tablette. Zentrifugieren Sie (~200xg) fuer 8 bis 10 Minuten und entfernen Sie den Supernatant. Wiederholen Sie diese Massnahme für eine zweite Spuelung. Werfen Sie den Supernatant weg und resuspendieren Sie die Tablette mit einer ensprechenden Volumen des passenden Medium. Die Probe ist jetzt zur Analyse bereit. Fuer weitere Einzelheiten zum Gebrauch diesen Produkten soll das Labor in seinen eigenen Protokollen nachschlagen, die für die spezifische medizinische Einstellung spezifisch entwickelt und optimiert worden sind. LAGERBEDINGUNGEN UND STABILITAET Bewahren Sie die ungeoeffneten Flaschen bei 2º to 8ºC auf. Wärmen Sie das Medium zur umgebenden oder der Temperatur des Brutkastens (37°C) vor Gebrauch. Frieren Sie es nicht oder stellen Sie es nicht in den hohen Temperaturen heraus. ISolate ist bis zum Verfallsdatum beständig, das auf die Schachtel und Flaschenetikett gezeigt wird. Bewahren Sie das Medium wie angewiesen auf. VORSICHTSMASSNAHMEN UND WARNUNGEN Diese Vorrichtung ist für die Anwendung durch Personal vorgesehen, das in Verfahren ausgebildet wurde, welche die für diese Vorrichtung angegebene zugelassene Anwendung beinhalten. ISolate wird undurchlässig aussehen. Das ist normal fuer dieses Produkt. Benutzen Sie keine Phiole des Mediums, wenn es Beweis der Feststoffe oder Kontamination (uneinheitliche Truebung) gibt. ISolate sollte fest mit einer Kappe bedeckt werden, wenn es in einem CO2 Brutkasten verwendet wird, um die pHVeränderungen zu vermeiden. Dieses Produkt enthält keine Konservierungsmittel, Antibiotika oder Proteinergänzungen. Um die Verschmutzung zu vermeiden, muss das Produkt mit aseptischer Methode benutzt werden. Im Schadensfalle, verwenden Sie das Medium nicht. Bitte werfen Sie es weg oder senden Sie zum Hersteller fuer Austausch zurück. ORSICHT: Nach US-Bundesgesetz darf dieses Gerät nur von oder auf Antrag von einem Arzt verkauft werden. DESCRIZIONE DEL PRODOTTO ISolateâ è un terreno di gradiente di densità preparato per dividire la frazione mobile di sperma dal fluido seminale. Come sistema gradiente di due strati, il terreno riduce effetivamente i contaminanti cellulari come sperma morti, cellule di sangue bianco e detriti miscellani. Il campione che risulta contiene sperma con preponderanza mobile. ISolate è un suspensione colloidale di particelle di silice stabilizzato con silane hidrofilico legato covalentamente in HTF pulito con HEPES che è filtrato su membrana e preparato in condizioni di sterilità. Il livello di sicurezza di sterilità(SAL) è 10-3. ISolate è analizzato e trovato di non avere pirogeni via il test pirogene di coniglio. ESPAÑOL 5. Centrifugare per 10 – 20 minuti approssimativamente a 200 – 300xg.* Esporre attentamente la tavoletta con il levare degli “STRATI SUPERIORI ED INFERIORI” via aspirazione, o con il allontanamento diretto della tavoletta ed il trasferimento a un tubo centrifugo sterilizzato. DESCRIPCIÓN DEL PRODUCTO El ISolate® es un medio de gradiente de densidades diseñado para separar la fracción móvil de esperma del fluido seminal. Como un sistema de gradiente de dos capas, reduce eficazmente los contaminantes celulares como espermatozoides muertos, leucocitos y otros restos. *Nota: La qualità del campione di sperm dovrebbe essere valutata e dovrebbe essere considerata quando se determina la velocità e tempo di centrifugazione propri. Questi dovrebbero essere aggiustati secondo la qualità del campione individuale per l’ottimizzazione della procedura. El ISolate es una suspensión coloidal de partículas de sílice estabilizada con silano hidrofílico unido covalentemente en HTF tamponado con HEPES, que ha sido filtrada a través de membrana y procesada en condiciones asépticas. El nivel de garantía de esterilidad (SAL) es de 10-3. El ISolate ha sido testado para pirógenos con resultados negativos por el test de pirógenos en conejo. ISTRUZIONI PER L’ USO Catalogo # 99264 – SILICE COLLOIDALE PRONTO PER USO A DUE CONCENTRAZIONI (50% E 90%) A. Materie Suggerite: ISolate • Catalogo di Irvine Scientific # 99264 (arrezzatura/ cassetta di fiala di 6mL, 50mL o arrezzatura di fiala di 100 mL Terreno di Sciaquio di Sperma • Catalogo d’Irvine Scientific #9983 Tubi buttabili conici centrifugi • Catalogo d’Irvine Scientific #IS-325 Pipette Pasteur, sterilizzate Centrifugo Incubatore, 37° C 6. Usando una nuova pipetta sterilizatta, aggiungere da 2.0 a 3.0 mL di sostanza di spruzzetta appropriata come Sostanza di Spruzzetta di Sperma (IS Catalogo #9983) o HTF Modificato (ISCatalogo #9963) con integrazione di proteina . Risospendere la pallina isolata. Centrifugare (~200xg) per 8 -10 minuti e toglie il supernatante. Ripetere questo passo per una seconda spruzzetta. Butare il supernatante ed risospendere la pallina usando un volume conveniente di sostanza appropriata. Il campione è adesso pronto per l’analisi. B. Preparazione Gradiente: Le diluzioni preliminarie non sono necessarie. Ogni fiala di gradiente di strato superiore ed Inferiore è pronto per l’uso. Prosegui a sezione di PROC DURA GENERALE del l’inserzione del prodotto. ISTRUZIONI DI STOCCAGIO E STABILITA Stoccare i contenitori non aperti refrigerati da 2° C a 8° C. Catalogo #99275 – Soluzione di Sostegno (Stock) 90% terreno di gradiente di densità per uso in una procedura di uno stado o per ulteriore diluzione. Non congelare o esporre a temperature alte. A. Materie Suggerite: Soluzione di Sostegno d’ISolate • Catalogo d’Irvine Scientific #99275 Fluido Tubarico Umano Modificato • Catalogo d’Irvine Scientific #90126 Terreno di Sciaquio di Sperma • Catalogo d’Irvine Scientific #9983 Tubi buttabili conici centrifugi • Catalogo d’Irvine Scientific #IS-325 Pipette Pasteur, sterilizzate Centrifugo Incubatore, 37° C B. Preparazione Gradiente: Si richiede due soluzioni per eseguire il metodo di separazione di sperma gradiente: uno strato superiore e uno strato inferiore. 1. Soluzione di Strato Superiore – 50%: a) Mettere SOLUZIONE DI SOSTEGNO(STOCK SOLUTION) –(Catalogo #99275) e una pipetta di 5.6 mL in un tubo centrifugo sterilizzato b) Aggiungere 4.4 mL di Fluido Tubarico Umano Modificato(Catalogo #90126) c) Chiudere il tubo e capovolgere gentilmente per permettere miscuglio completo. d) Classificare il tubo come “STRATO SUPERIORE” 2. Soluzione di Strato Inferiore – 90%: a) Aliquotare 10 mL della SOLUZIONE DI SOSTEGNO(STOCK SOLUTION–Catalogo #99275) in un tubo e coperchio di centrifugo sterilizzato – (No ulteriori diluzioni sono necessari – Soluzione di Sostegno è 90%) b) Classificare il tubo come “STRATO INFERIORE” 3. Prosegui a sezione di PROCEDURA GENERALE dell’inserzione del prodotto. (APPUNTO: 10 mL DI STRATO SUPERIORE E DI S T R ATO I N F E R I O R E T R AT TA N N O APPROSSIMATIVAMENTE 5 CAMPIONI DI SPERMA). Catalogo #99306 – Concentrato Concentrazione di silice colloidale per ulteriore diluzione a gradienti di densità; formulato in un tampone isotonico(isotonic) e approssima la densità di Percollâ. Concentrato d’ISolate fù valutato in accordo con questa inserzione di pachetto gradienti di 50% e 90%. Ogni laboratorio puo scegliere per produrre gradienti a concentrazioni differenti che devono essere evaluati per efficacia. A. Materie Suggerite: Concentrato d’ISolate • Catalogo d’Irvine Scientific #99306 Fluido Tubarico Umano Modificato • Catalogo d’Irvine Scientific #90126 Terreno di Sciaquio di Sperma • Catalogo d’Irvine Scientific #9983 Tubi buttabili conici centrifugi • Catalogo d’Irvine Scientific #IS-325 Pipette Pasteur, sterilizzate Centrifugo Incubatore, 37° C B. Preparazione Gradiente: Si richiede due soluzioni per eseguire il metodo di separazione di sperma gradiente: uno strato superiore e uno strato inferiore. 1. Soluzione di Strato Superiore – 50%: a) Mettere CONCENTRATO (Catalogo # 99306) e pipetta di 4.5 mL in un tubo centrifugo sterilizzato b) Aggiungere 5.5 mL di Fluido Tubarico Umano Modificato(Catalogo #90126) c) Coprire il tubo e capovolgere gentilmente 3 o 4 volte per miscuglio completo. d) Classificare tubo come “STRATO SUPERIORE” 2. Soluzione di Strato Inferiore – 90% a) Mettere CONCENTRATO (Catalogo # 99306) e pipetta di 8.1 mL in un tubocentrifugo sterilizzato b) Aggiungere 1.9 mL di Fluido Tubarico Umano Modificato(Catalogo #90126) c) Coprire il tubo e capovolgere gentilmente 3 o 4 volte per miscuglio completo d) Classificare il tubo come “STRATO INFERIORE” 3. Prosegui a sezione di PROCEDURA GENERALE dell’nserzione del prodotto. APPUNTO: I TERMINI 50% E 90% N O N R A P P R E S E N TA N N O U N A C O N C E N T R A Z I O N E E F F E T I VA . L E 50% E 90% SONO CONCENTRAZIONI RELATIVE BASATE ALLA NOMENCLATURA PRECEDENTE CHE DEFINI(ACCENT) UNA DILUZIONE DI PERCOLLâ DI 1:9 UGUALE A UNA SOLUZIONE OPERANTE, ISOTONICA DI 100%. C O N S I D E R A Z I O N I D I T R AT TA M E N T I SPECIALI Il seguente è una procedura generale per una seperazione gradiente di due strati di sperma mobile(motile sperm) dallo sperma(semen). Il volume e concentrazione possono essere modificati per soddisfare ogni preferenza del laboratorio(per esempio mini-gradiente, sperma criopreservata, gradiente di tre-strati). 1. Alzare tutti i componenti di terreno a temperatura ambientale o 37°C. 2. Utilizzando una pipetta sterilizzata, trasferire 1.5 – 2.0 mL del “STRATO INFERIORE” a un tubo centrifugo, buttabile, conico, sterilizzato. 3. Utilizzando una nuova pipetta sterilizzata, trasferire lo stesso volume di “STRATO SUPERIORE” sopra allo “STRATO INFERIORE”. Questo è fatto via toccare la superficie dello “STRATO INFERIORE” al lato/ fianco del tubo con la punta della pipetta. Dispensi attentamente lo “STRATO SUPERIORE” via girare a spirale la punta della pipetta attorno alla circonferenza del tubo in movimento ascendente come il livello dello “STRATO SUPERIORE” alza. 4. Mettere gentilmente 1.5 – 2.0 mL di sperma liquificata sopra lo “STRATO SUPERIORE” utilizzando una pipetta nuova, sterilizzata. Per ulteriori dettagl sull’uso de queste prodotti, il laboratorio dovrebbe consultare le sue protocolli/tecniche standard che sono statti specificamente fatti ed ottimizzatti per la sua impianto. Riscaldare a temperatura ambientale o temperatura d’incubatore(incubator) – (37° C) prima dell’uso. Quando sono stoccate direttamente, ISolate è stabile fino alla data di scadenza mostrata sulle etichette della bottiglia e della scatola. PRECAUZIONI E AVVERTIMENTI Questo dispositivo è previsto per l’uso da parte di personale addestrato nelle procedure che comprendono le applicazioni indicate per le quali il dispositivo è previsto. ISolate si vede opaco. Questo è normale per questo prodotto. Non usare qualsiasi fiale o terreno che ha evidenza di sostanze particolari o contaminazione (torbidezza non uniforme). ISolate deve essere chiuso strettamente quando è utilizzato in un incubatore CO2 per evitare cambi di pH. Questo prodotto non contiene preservativi, antibiotici, o supplementi di proteina. Per evitare contaminazione, il prodotto deve essere utilizzato con tecniche assetiche. IN CASO DI DANNO, NON USARE. PER FAVORE ELIMINARE O REGRESSALO ALLA MANIFATTURA PER SOSTITUZIONE. CAUTELA: La legge federale (U.S.) se limita questo meccanismo/prodotto a la vendita da o sull’ordine di un medico o dottore. INSTRUCCIONES DE USO Nº de Catálogo 99264 – SÍLICE COLOIDAL LISTA PARA USAR A DOS CONCENTRACIONES (50% y 90%) A. Material sugerido: ISolate • Irvine Scientific, Nº catálogo 99264 (kit de viales de 6mL, 50mL o kit de viales de 100mL) Medio de lavado de esperma • Irvine Scientific, Nº catálogo 9983 Tubos de centrífuga cónicos estériles y desechables • Irvine Scientific, Nº catálogo IS-325 Pipetas Pasteur estériles Centrífuga Incubador a 37ºC B. Preparación del gradiente: No son necesarias diluciones preliminares. Cada vial de capa de gradiente superior e inferior está lista para usar. Continue con la sección “PROCEDIMIENTOS GENERALES” Nº de Catálogo 99275 – SOLUCIÓN STOCK Medio de gradiente de densidades al 90% para ser utilizado en protocolos de un solo paso o para posteriores diluciones. A. Material sugerido: ISolate - Solución Stock • Irvine Scientific, Nº Cat. 99275 Medio HTF modificado • Irvine Scientific, Nº Cat. 90126 Medio de lavado de esperma • Irvine Scientific, Nº Cat. 9983 Tubos de centrífuga cónicos estériles y desechables • Irvine Scientific, Nº Cat. IS-325 Pipetas Pasteur estériles Centrífuga Incubador a 37ºC B. Preparación del gradiente: Para llevar a cabo una separación de esperma por gradiente se necesitan dos soluciones: la capa superiory la capa inferior. 1. Solución de la capa superior: 50% a. Coger la SOLUCIÓN STOCK (Nº Cat. 99275) y pipetear 5,6mL en un tubo de centrífuga estéril. b. Añadir 4,4 mL de HTF modificado (Nº Cat. 90126) c. Tapar el tubo e invertir suavemente 3 o 4 veces para permitir una mezcla completa. d. Etiquetar el tubo como “capa superior”. 2. Solución de la capa inferior: 90% a. Alicuotar 10mL de la SOLUCIÓN STOCK en un tubo estéril de centrífuga y taparlo. (No se necesitan más diluciones. La solución stock está al 90%). b. Etiquetar el tubo como “CAPA INFERIOR”. 3. Continúe en la sección de “PROCEDIMIENTOS GENERALES”. FRANÇAIS Nota: la calidad de la muestra de esperma debe ser evaluada y tomada en consideración para determinar el tiempo y la velocidad adecuados de centrifugación. Estos parámetros deben ajustarse conforme a la calidad individual de la muestra para optimizar el el proceso. * 6. Utilizando una nueva pipeta estéril, añadir 2.0 – 3.0 mL de un medio de lavado adecuado como el Medio de Lavado de Esperma (IS Nº Cat 9983) o HTF modificado (IS Nº Cat 90126) son suplemento proteico. Resuspender el sedimento. Centrifugar (aprox. 200xg) 8-10 minutos y descartar el sobrenadante. Repetir este paso para un segundo lavado. Descartar el sobrenadante y resuspender el sedimento utilizando un volumen adecuado de medio. La muestra está lista para el análisis. Para más detalles sobre la utilización de estos productos, consulte los protocolos de trabajo de su propio laboratorio, los cuales han sido desarrollados y especialmente optimizados de acuerdo a su programa médico particular. INSTRUCCIONES DE ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD Conserve las botellas no abiertas refrigeradas entre 2ºC y 8ºC. Atempere a temperatura ambiente o en un incubador (37ºC) antes de su uso. No congele ni exponga a temperaturas elevadas. El ISolate es estable hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta de la botella y de la caja, siempre que se conserve de acuerdo a las instrucciones recomendadas. PRECAUCIONES Y ADVERTENCIAS Este dispositivo debe ser utilizado por personal capacitado en procedimientos que incluyan la aplicación prevista para el mismo. El ISolate tiene un aspecto opaco. Esto es normal en este producto. No utilice ningún vial de medio con evidencias de contener partículas o contaminación (turbidez no homogénea). Los viales de ISolate deben estar herméticamente cerrados cuando se usen en un incubador de CO2 para evitar cambios de pH. Este medio no contiene conservantes, ni antibióticos ni suplementos proteicos. Para evitar contaminaciones, manipule el producto en condiciones de esterilidad. En caso de alteración del medio, no lo utilice. Por favor, descártelo o devuélvalo al fabricante para que lo reemplace. PRECAUCIÓN: Las leyes federales (U.S.) restringen la venta de este producto a la prescripción de un facultativo. Description du produit ISolate® est un gradient de densité conçu pour séparer la fraction des spermatozoïdes mobiles du plasma séminale. Système gradient à deux couches, il réduit efficacement les contaminations cellulaires telles que les spermatozoïdes morts, les globules blancs et les débris divers. Il en résulte une fraction de sperme contenant essentiellement les spermatozoïdes mobiles. ISolate, stérilisé par filtration, est une suspension colloïdale de particules de silice stabilisés par une liaison covalente au silane hydrophile, dans du milieu HTF tamponné au HEPES. Le niveau de stérilité de la solution est de 10-3 (Sterility Assurance Level). ISolate a été trouvé non-pyrogène par le “rabbit pyrogen test”. Conseils d’utilisation Référence 99264, Gradient de densité à deux concentrations 50% et 90%, prêt à l’utilisation A. Matériel suggéré : ISolate • % Irvine Scientific, référence 99264 (kit de 6 ml, 50mL ou de 100ml) Milieu de lavage du sperme • % Irvine Scientific, référence 9983 Tubes coniques pour centrifugeuse, jetables, stériles • % Irvine Scientific, référence IS-325 Pipettes Pasteur, stériles Centrifugeuse Etuve, 37°C B. Préparation du gradient : Pas de dilution préalable nécessaire. Chaque flacon de gradient supérieur et inférieur est prêt à l’utilisation. Aller à la section “Procédure générale” de cette notice. Référence 99275, Solution mère Milieu de gradient de densité à 90%, à utiliser dans le protocole à une étape ou pour des dilutions ultérieures. A. Matériel suggéré : ISolate, solution mère • % Irvine Scientific, référence 99275 Fluide tubulaire humain modifié • % Irvine Scientific, référence 90126 Milieu de lavage du sperme • % Irvine Scientific, référence 9983 Tubes coniques pour centrifugeuse, jetables, stériles • % Irvine Scientific, référence IS-325 Pipettes Pasteur, stériles Centrifugeuse Etuve, 37°C B. Préparation du gradient : Deux solutions sont requises pour réaliser la séparation des spermatozoïdes par la méthode de gradient de densité : une couche supérieure et une couche inférieure. 1. Solution pour la couche supérieure – 50% a. Prélever dans un tube conique stérile 5,6 ml de la solution mère (réf. 99275), b. Ajouter 4,4 ml de fluide tubulaire humain modifié (réf. 90126) c. Bouchonner le tube et le retourner 3-4 fois pour permettre un mélange complet d. Marquer ce tube “couche supérieure” 2. Solution pour la couche inférieure – 90% a. Prélever dans un tube conique stérile 10 ml de la solution mère (réf. 99275) (pas de dilution nécessaire, la solution mère est à 90%) b. Marquer ce tube “couche inférieure” 3. Aller à la section “Procédure générale” de cette notice (Remarque : 10 ml de couche supérieure et 10 ml de couche inférieure permettront de traiter approximativement 5 prélèvements de sperme) Nº de Catálogo 99306 – CONCENTRADO Concentrado de sílice coloidal para posteriores diluciones en gradientes de densidad; formulado en un tampón isotónico, se aproxima a la densidad del Percoll sin diluir. El ISolate Concentrado ha sido evaluado en gradientes del 50% y 90% de acuerdo a este Información de producto. Cada laboratorio puede elegir preparar los gradientes a concentraciones diferentes, previa comprobación de su efectividad. Référence 99306, Concentré Suspension colloïdale de silice concentrée à diluer pour former des gradients de densité ; formulé comme un tampon isotonique dont la densité est approximativement la même que celle du Percoll® non dilué. Le concentré ISolate® a été évalué pour cette notice par des gradients de 50% et 90%. Chaque laboratoire pourrait choisir de faire des gradients de différentes concentrations. l’efficacité de ces derniers doit être évaluée. A. Material sugerido: ISolate - Concentrado • Irvine Scientific, Nº Cat. 99306 Medio HTF modificado • Irvine Scientific, Nº Cat. 90126 Medio de lavado de esperma • Irvine Scientific, Nº Cat. 9983 Tubos de centrífuga cónicos estériles y desechables • Irvine Scientific, Nº Cat. IS-325 Pipetas Pasteur estériles Centrífuga Incubador a 37ºC A. Matériel suggéré : ISolate, Concentré • % Irvine Scientific, référence 99306 Fluide tubulaire humain modifié • % Irvine Scientific, référence 90126 Milieu de lavage du sperme • % Irvine Scientific, référence 9983 Tubes coniques pour centrifugeuse, jetables, stériles • % Irvine Scientific, référence IS-325 Pipettes Pasteur, stériles Centrifugeuse Etuve, 37°C B. Preparación del gradiente: Para llevar a cabo una separación de esperma por gradi ente se necesitan dos soluciones: la capa superior y la capa inferior. 1. Solución de la capa superior: 50% a. Coger el CONCENTRADO (Nº Cat. 99306) y pipetear 4,5 mL en un tubo de centrífuga estéril. b. Añadir 5,5 mL de HTF modificado (Nº Cat. 90126) c. Tapar el tubo e invertir suavemente 3 o 4 veces para permitir una mezcla completa. d. Etiquetar el tubo como “CAPA SUPERIOR”. 2. Solución de la capa inferior: 90% a. Coger el CONCENTRADO (Nº Cat. 99306) y pipetear 8,1 mL en un tubo de centrífuga estéril. b. Añadir 1,9 mL de HTF modificado (Nº Cat. 90126) c. Tapar el tubo e invertir suavemente 3 o 4 veces para permitir una mezcla completa. d. Etiquetar el tubo como “CAPA INFERIOR”. 3. Continúe en la sección de “PROCEDIMIENTOS GENERALES”. B. Préparation du gradient : Deux solutions sont requises pour réaliser la séparation des spermatozoïdes par la méthode de gradient de densité : une couche supérieure et une couche inférieure. 1. Solution pour la couche supérieure – 50% a. Prélever dans un tube conique stérile 4,5 ml de la solution CONCENTRE (réf. 99306) b. Ajouter 5,5 ml de fluide tubulaire humain modifié (réf. 90126) c. Bouchonner le tube et le retourner 3-4 fois pour permettre un mélange complet d. Marquer ce tube “couche supérieure” 2. Solution pour la couche inférieure – 90% a. Prélever dans un tube conique stérile 8,1 ml de la solution CONCENTRE (réf. 99306) b. Ajouter 1,9 ml de fluide tubulaire humain modifié (réf. 90126) c. Bouchonner le tube et le retourner 3-4 fois pour permettre un mélange complet d. Marquer ce tube “couche inférieure” 3. Aller à la section “Procédure générale” de cette notice Nota: Los términos 50% y 90% no equivalen a una co centración real. El 50 % y el 90% son concentraciones relativas basadas en una nomenclatura anterior que definía una solución 1:9 de Percoll® como una solución de trabajo isotónica al 100%. PROCEDIMIENTOS GENERALES El protocolo que aquí se describe es un procedimiento general para separar del semen la fracción móvil de esperma a través de un gradiente. El volumen y la concentración se pueden modificar para adecuarse a las preferencias de cada laboratorio (p.ej. mini-gradiente, semen criopreservado, gradiente de 3 capas). 1. Atemperar todos los medios a temperatura ambiente o a 37ºC. 2. Utilizando una pipeta estéril, transferir 1,5 – 2,0 mL de medio de la “CAPA INFERIOR” a un tubo de centrífuga cónico, estéril y desechable. 3. Utilizando otra pipeta estéril, transferir un volumen igual al del paso 1 de la “CAPA SUPERIOR” a la parte superior de la “CAPA INFERIOR”. Para ello, colocar con la punta de la pipeta en la parte superior de la capa tocando la pared del tubo. Dispensar con mucho cuidado la “CAPA SUPERIOR” moviendo la pipeta en círculos alrededor de la circunferencia del tubo subiendo a medida que se aumenta la “CAPA INFERIOR”. 4. Coloque suavemente 1,5 – 2,0 mL de semen licuado sobre la “CAPA SUPERIOR” con otra pipeta estéril. 5. Centrifugar durante 10-20 minutos a 200-300 x g*. Con mucho cuidado, aspirar y desechar las capas inferior y superior o bien. Remarque : les termes 50% et 90% ne représentent pas des concentrations réelles. Les 50% et 90% sont des concentrations relatives basées sur la précédente nomenclature qui a défini la dilution 1:9 du Percoll® comme étant égale à 100% de solution isotonique. Procédure générale Ce qui suit est une méthode générale de séparation par gradient de densité des spermatozoïdes mobiles du plasma séminale. Les volumes et les concentrations peuvent être modifiés pour répondre aux préférences de chaque laboratoire (ex. Mini gradient, sperme congelé, gradient à trois couches). 1. Amener tous les milieux à température ambiante ou les préchauffer à 37°C. 2. A l’aide d’une pipette stérile, transférer 1,5 – 2,0 ml de la ‘couche inférieure’ dans un tube conique pour centrifugeuse, jetable, stérile. 3. A l’aide d’une nouvelle pipette stérile, transférer un volume équivalent (1,5 – 2,0 ml) de la ‘couche supérieure’ et la déposer au-dessus de la ‘couche inférieure’. Ceci est réalisé en touchant la surface de la ‘couche inférieure’ par le bout de la pipette. Répartir soigneusement la ‘couche supérieure’ en tournant la pipette autour de la paroi du tube dans un mouvement ascendant à mesure que la ‘couche supérieure’ monte. 4. Soigneusement placer 1,5 – 2,0 ml de sperme liquéfié sur la ‘couche supérieure’ en utilisant une nouvelle pipette stérile. 5. Centrifuger à 200-300xg* pendant 10-20 minutes *Remarque: la qualité du prélèvement du sperme doit être évaluée et prise en considération lors de la détermination de la durée et de la vitesse de centrifugation appropriées. Pour une optimisation de la procédure, ces dernières doivent être ajustées selon la qualité de chaque prélèvement. 6. A l’aide d’une nouvelle pipette stérile, ajouter 2,0 –3,0 ml d’un milieu de lavage adéquat comme le milieu de lavage du sperme (IS réf. 9983) ou le milieu HTF modifié (IS réf. 90126) supplémenté en protéines. Resuspendre le culot de centrifugation. Centrifuger (~200xg) pendant 8-10 minutes et aspirer le surnageant. Répéter cette étape (deuxième lavage). Aspirer le surnageant et resuspendre le culot dans le volume désiré d’un milieu adéquat. Le prélèvement est maintenant prêt à l’analyse. Pour plus de détails sur l’utilisation de ce produit, chaque laboratoire doit consulter ses propres procédures et protocoles standards spécialement développés et optimisés pour chaque établissement médical particulier. C onsignes de conservation et stabilité Conserver les flacons non entamés réfrigérés entre 2 et 8°C. Amener à température ambiante ou préchauffer à 37°C (dans une étuve) avant utilisation. Ne pas congeler ou exposer à des températures élevées. Conservé comme indiqué ci-dessus, ISolate est stable jusqu’à la date d’expiration indiquée sur la boite et les étiquettes des flacons. Précautions et mise en garde Ce dispositif est destiné à une utilisation par un personnel formé aux procédures comprenant l’application indiquée pour laquelle le dispositif est destiné. ISolate apparaîtra opaque. Ceci est normal pour ce produit. N’utiliser aucun flacon de milieu s’il contient des particules ou s’il est contaminé (non uniformément trouble). Lors de l’incubation de ISolate dans une étuve à CO2, les flacons doivent être bien fermés pour éviter les changements de pH. Ce produit ne contient ni conservateurs, ni antibiotiques, ni supplément protéiques. Pour éviter les contaminations, il doit être manipulé stérilement. ATTENTION : La loi fédérale limite la vente de ce dispositif aux médecins ou sur ordre d’un médecin. ENGLISH ® ISolate Catalog No. 99264 12 x 6 mL, 2 x 50 mL, 2 x 100 mL Ready to Use Density Gradient Medium at Two Concentrations Catalog No. 99275 Stock Solution 100 mL Catalog No. 99306 Concentrate 100 mL REFERENCES Adaniya GK, Jackson KV: Comparison of Percoll® and ISolate® in the Preparation of Semen for use in Assisted Reproductive Technologies. 53rd Annual Meeting of the American Society for Reproductive Medicine, Cincinnati, Ohio; 0-113, 1997. Symbols: Catalog Number Lot Number Tarchala SM, Fahy MM, Hauserman HM, Kallmann K, Volentine K, Radwanska E, Binor Z, Molo MW, Rawlins RG: ISolate® As a New Method of Sperm Separation. 53rd Annual Meeting of the American Society for Reproductive Medicine, Cincinnati, Ohio; P-116, 1998. Miller, KF, Fry KL, Arciaga RL, Falcone T: Semen preparation for in-vitro fertilization using ISolate® results in sperm recovery, fertilization and pregnancy outcomes that are indistinguishable from those obtained with Percoll®. 14th Embryology, Goteborg, Sweden; P-116, 1998. Tarchala SM, Volentine KK, Rawlins RG: A comparison of sperm processing using ISolate® and Pure Sperm™. 14th Annual Meeting of the European Society of Human Reproduction and Embryology, Goteborg, Sweden; R-041, 1998. Sterilized using aseptic processing techniques (filtration) Expiration: Year - Month - Day Caution:See instructions for use European Representative MPIE Schutweg 13A 5145 NP Waalwijk, The Netherlands See instructions for use. Storage Temperature CE Mark 0050 0050 ISolate is a Registered Trademark of Irvine Scientific ® Percoll ® is a Registered Trademark of Pharmacia Biotech, AB Sweden MPIE Schutweg 13a 5145 NP Waalwijk, The Netherlands PRODUCT DESCRIPTION ISolate® is a density gradient medium designed to separate the motile fraction of sperm from seminal fluid. As a two layer gradient system, it effectively reduces cellular contaminants such as dead sperm, white blood cells and miscellaneous debris. The resulting sample contains predominantly motile sperm. ISolate is a membrane filtered, aseptically processed colloidal suspension of silica particles stabilized with covalently bound hydrophilic silane in HEPES-buffered HTF. The sterility assurance level (SAL) is 10-3. ISolate is tested and found negative for pyrogens by rabbit pyrogen test. DIRECTIONS FOR USE Catalog #99264 - READY TO USE COLLOIDAL SILICA AT TWO CONCENTRATIONS (50% and 90%) A. Materials Suggested: ISolate • Irvine Scientific Catalog #99264 (6mL , 50 mL or 100mL vial kit) Sperm Washing Medium • Irvine Scientific Catalog #9983 Sterile, disposable conical centrifuge tubes • Irvine Scientific Catalog #IS-325 Pasteur Pipettes, sterile Centrifuge Incubator, 37°C B. Gradient Preparation: No preliminary dilutions are necessary. Each vial of upper and lower layer gradient is ready for use. Continue to GENERAL PROCEDURE section of product insert. For additional details on the use of these products, each laboratory should consult its own laboratory procedures and protocols which have been specifically developed and optimized for your individual medical program. STORAGE INSTRUCTIONS AND STABILITY Store the unopened containers refrigerated at 2º to 8ºC. Warm to ambient or incubator (37°C) temperature prior to use. Do not freeze or expose to high temperatures. ISolate is stable until the expiration date shown on the box and bottle labels when stored as directed. PRECAUTIONS AND WARNINGS This device is intended to be used by staff trained in assisted reproductive procedures that include the indicated application for which the device is intended. ISolate will appear opaque. This is normal for this product. Do not use any vial of medium which shows evidence of particulate matter or contamination (nonuniform cloudiness). Catalog #99275 - STOCK SOLUTION 90% density gradient medium for use in a one-step procedure or for further dilution. ISolate should be tightly capped when used in a CO2 incubator to avoid pH changes. A.Materials Suggested: ISolate Stock Solution • Irvine Scientific Catalog #99275 Modified Human Tubal Fluid • Irvine Scientific Catalog #90126 Sperm Washing Medium • Irvine Scientific Catalog #9983 Sterile, disposable conical centrifuge tubes • Irvine Scientific Catalog #IS-325 Pasteur Pipettes, sterile Centrifuge Incubator, 37°C This product contains no preservatives, antibiotics, or protein supplements. To avoid problems with contamination, handle using aseptic techniques. B. Gradient Preparation: Two solutions are required to perform the gradient sperm separation method: An upper layer and a lower layer. 1. Upper Layer solution - 50%: a) Take STOCK SOLUTION (Catalog #99275) and pipette 5.6 mL into a sterile centrifuge tube b Add 4.4 mL of Modified Human Tubal Fluid (Catalog #90126) c) Cap tube and invert gently 3-4 times to allow for complete mixing d) Label tube as “UPPER LAYER” 2. Lower Layer solution - 90%: a) Aliquot 10 mL of the STOCK SOLUTION into a sterile centrifuge tube and cap - (No further dilutions necessary - Stock Solution is 90%) b) Label tube as “LOWER LAYER” 3. Continue to GENERAL PROCEDURE section of product insert. (NOTE: 10 mL Upper Layer and 10 mL Lower Layer will process approximately 5 semen samples.) Catalog #99306 - CONCENTRATE Colloidal silica concentrate for further dilution into density gradients; formulated in an isotonic buffer and approximates the density of undiluted Percoll®. ISolate® CONCENTRATE was evaluated according to this package insert at 50% and 90% gradients. Each laboratory may choose to make gradients at different concentrations which should be evaluated for effectiveness. A. Materials Suggested: ISolate® Concentrate • Irvine Scientific Catalog #99306 Modified Human Tubal Fluid • Irvine Scientific Catalog #90126 Sperm Washing Medium • Irvine Scientific Catalog #9983 Sterile, disposable conical centrifuge tubes • Irvine Scientific Catalog #IS-325 Pasteur Pipettes, sterile Centrifuge Incubator, 37°C B. Gradient Preparation: Two solutions are required to perform the gradient sperm separation method: An upper layer and a lower layer. 1.) Upper Layer solution - 50%: a) Take CONCENTRATE (Catalog #99306) and pipette 4.5 mL into a sterile centrifuge tube b) Add 5.5 mL of Modified Human Tubal Fluid (Catalog #90126) c) Cap tube and invert gently 3-4 times to allow for complete mixing d) Label tube as “UPPER LAYER” 2. Lower Layer solution - 90%: a) Take CONCENTRATE (Catalog #99306) and pipette 8.1 mL into a sterile centrifuge tube b) Add 1.9 mL of Modified Human Tubal Fluid (Catalog #90126) c) Cap tube and invert gently 3-4 times to allow for complete mixing d) Label tube as “LOWER LAYER” 3. Continue to GENERAL PROCEDURE section of product insert. Note: The terms 50% and 90% do not represent an actual concentration. The 50% and 90% are relative concentrations based on the previous nomenclature that defined a 1:9 dilution of Percoll® as equal to a 100% working, isotonic solution. GENERAL PROCEDURE The following is a general procedure for a two-step gradient separation of motile sperm from semen. The volume and concentration can be modified to meet each laboratory’s preference (i.e. mini-gradient, cryopreserved semen, three-layer gradient). 1. Bring all media components to room temperature or 37°C. 2. Using a sterile pipette, transfer 1.5 - 2.0 mL of the “LOWER LAYER” into a sterile, disposable, conical centrifuge tube. 3. Using a new sterile pipette, transfer an equal volume of “UPPER LAYER” on top of the “LOWER LAYER”. This is done by contacting the surface of the “LOWER LAYER” at the side of the tube with the tip of the pipette. Carefully dispense the “UPPER LAYER” by spiraling the pipette tip around the circumference of the tube in an upward motion as the level of the “UPPER LAYER” rises. 4. Gently place 1.5 - 2.0 mL of liquefied semen onto the “UPPER LAYER” using a new sterile pipette. 5. Centrifuge for 10-20 minutes at approximately 200 300xg.* Carefully expose the pellet by either aspirating off the “UPPER” and “LOWER LAYERS”, or directly removing the pellet and transferring to a new sterile centrifuge tube. Note: The quality of the sperm sample should be evaluated and taken into consideration when determining the proper centrifugation speed and time. These should be adjusted according to the individual specimen quality for optimization of the procedure. 2511 Daimler Street, Santa Ana, California 92705-5588 Telephone: 1 949 261 7800 • 1 800 437 5706 Fax: 1 949 261 6522 • www.irvinesci.com PN 40558 Rev.10 DEUTSCH 6. Using a new sterile pipette, add 2.0 - 3.0 mL of appropriate washing medium such as Sperm Washing Medium (IS Catalog #9983) or Modified HTF (IS Catalog #90126) with protein supplementation. Resuspend the isolated pellet. Centrifuge (~200xg) for 8 -10 minutes and remove the supernatant. Repeat this step for a second wash. Discard the supernatant and resuspend the pellet using a suitable volume of appropriate medium. The sample is now ready for analysis. In case of damage, do not use. Please discard or return to Manufacturer for replacement. Caution: Federal (U.S.) law restricts this device to sale by or on the order of a physician. Produktbeschreibung ISolate ® ist ein Dichtegradientsmedium [oder Konzentrationgradientsmedium], das fuer das Trennen des freibeweglichen Spermafraktion von der Samenfluessigkeit bestimmt ist. Als ein Gradientssystem mit zwei Schichten verringert es effektiv die zellulaeren Kontaminationsstoffe wie das tote Sperma, die weissen Blutkoerperchen, und andere Rückstaende. Die ergebende Probe enthält überwiegendes freibewegliches Sperma. ISolate ist Membran gefiltert, es ist eine Kolloidsuspension von Kieselpartikel, die aseptisch verarbeitet ist, und stabilisiert mit dem kovalentgebundenen hydrophilen Silan im HEPES-buffered [gepuffertem] HTF. Das Sterilitaetversicherungsniveau [sterility assurance level (SAL)] ist 10 -3 . ISolate wurde durch die Kaninchenpyrogenprobe getestet und wurde negativ von Pyrogen gefunden. GEBRAUCHSANLEITUNG Katalog Nr. 99264 - BETRIEBSFERTIGE KOLLOIDAL SILICA BEI ZWEI KONZENTRATIONEN (50% UND 90%) A. Vorgeschlagene Materialien: ISolate® • Irvine Scientific Katalog Nr. 99264 (6mL, 50mL oder 100mL Phiolesatz) Sperm Washing Medium [Spermaspuelungsmedium] • Irvine Scientific Katalog Nr. 9983 Sterile wegwerfbare konische Zentrifugegläser • Irvine Scientific Katalog Nr. IS-325 Pasteurpipetten, Steriler Zentrifugebrutkasten, 37°C B. Gradientvorbereitung: Keine vorbereitende Verdünnungen sind notwendig Jede Phiole der Oberschichtsgradient und Unterschic tsgradient ist zum Gebrauch bereit. Setzen Sie zum ALLGEMEINEN VERFAHREN Abschnitt des Produ teinsatzes fort. Katalog Nr. 99275 - verdichtete Lösung 90% Density Gradient Medium ist für den Gebrauch in einem Einschrittverfahren oder für weitere Verdünnung. A. Vorgeschlagene Materialen ISolate Stock Solution • Irvine Scientific Katalog Nr. 99275 Modified Human Tubal Fluid • Irvine Scientific Katalog Nr. 90126 Sperm Washing Medium [Spermaspülungsmedium] • Irvine Scientific Katalog #9983 Sterile, wegwerfbare konische Zentrifugegläser • Irvine Scientific Katalog #IS-325 Pasteurpipetten, Steriler Zentrifugebrutkasten, 37°C B. Gradientvorbereitung: Zwei Lösungen werden benoetigt, um die Trennung methode des Spermagradients durchzuführen: Eine Oberschicht und eine Unterschicht 1. Upper Layer solution - 50% [Oberschichtlösung – 50%]: a. Nehmen Sie die STOCK SOLUTION (Katalog Nr. 99275) und pipettieren Sie 5,6 mL in einem sterilen Zentrifugeglas b. Fuegen Sie 4,4 mL Modified Human Tubal Fluid (Katalog Nr. 90126) c. Verschliessen Sie das Zentrifugeglas und kehren Sie es behutsam 3 bis 4 mal um, um eine komplette Mischung zuzulassen. d. Etikettieren Sie das Zentrifugeglas als “OBERSCHICHTt”. 2. Lower Layer solution- 90% [Unterschichtloesung-90%]: a. Aliquotieren Sie 10 mL Stock Solution in einem sterilen Zentrifugeglas und verschliessen Sie es (keine weitere Verduennungen werden benoetigt – Stock Solution ist 90%). b. Etikettieren Sie das Zentrifugeglas als “UNTERSCHICHT” 3. Setzen Sie zum ALLGEMEINEN VERFAHREN Abschnitt des Produkteinsatzes fort. (ANMERKUNG: 10 mL Oberschicht und 10 mL Unterschicht werden ungefaehr 5 Samenproben verarbeiten) Katalog Nr. 99306 – KONZENTRAT Kolloid-Kieselerdekonzentrat ist für weitere Verdünnung zu brauchbare Konzentrationen der Dichtegradienten bestimmt; formuliert in einem isotonischen Puffer und naehert die Dichte von unverdünntem Percoll® an. ISolate KONZENTRAT wurde entsprechend diesem Paketeinsatz bei 50% und 90% Gradient ausgewertet. Jedes Labor kann beschliessen, die Gradienten bei unterschiedlichen Konzentrationen zu bilden, die für die Wirksamkeit ausgewertet werden sollten. A. Vorgeschlagene Materialien ISolate Concentrate • Irvine Scientific Katalog Nr. 99306 Modified Human Tubal Fluid • Irvine Scientific Katalog Nr. 90126 Sperm Washing Medium • Irvine Scientific Katalog Nr. 9983 Steriles, wegwerfbares konisches Zentrifugeglaeser • Irvine Scientific Katalog Nr. IS-325 Pasteurpipetten, Steriler Zentrifugebrutkasten, 37°C B. Gradientvorbereitung: Zwei Lösungen werden benoetigt, um die Trennung methode des Spermagradients durchzuführen: Eine Oberschicht und eine Unterschicht. 1. Oberschichtloesung – 50% a. Nehmen Sie das CONCENTRATE (Katalog Nr. 99306) und pipettieren Sie 4,5 mL in einem sterilen Zentrifugeglas. b. Fuegen Sie 5,5 mL Modified Human Tubal Fluid (Katalog Nr. 90126) hinzu. c. Verschliessen Sie das Zentrifugeglas und kehren Sie sorgfaeltig 3 bis 4 mal um, um eine komplette Mischung zuzulassen. d. Etikettieren Sie das Zentrifugeglas als “OBERSCHICHT”. 2. Unterschichtloesung – 90% a. Nehmen Sie CONCENTRATE (Katalog Nr. 99306) und pipettieren Sie 8,1 mL in einem sterilen Zentrifugeglas b. Fuegen Sie 1,9 mL Modified Human Tubal Fluid (Katalog Nr. 90126) hinzu. c. Verschliessen Sie das Zentrifugeglas und kehren Sie sorgfaeltig 3 bis 4 mal um, um eine komplette Mischung zuzulassen d. Etikettieren Sie das Zentrifugeglas als “UNTERSCHICHT”. 3. Setzen Sie zum ALLGEMEINEN VERFAHREN Abschnitt des Paketeinsatz fort. Anmerkung: Die Bezeichnungen 50% und 90% bedeuten nicht eine tatsächliche Konzentration. Die 50% und die 90% sind die relativen Konzentrationen, die auf der vorherigen Namenklatur basieren. Das bedeuted, dass eine 1:9 Verdünnung von Percoll® is gleichwertig zu einer Funktion 100% der isotonische Loesung ALLGEMEINES VERFAHREN Das folgende ist ein allgemeines Verfahren für eine zweistufige Gradientstrennung des freibeweglichen Sperma vom Samen. Das Volumen und die Konzentration koennen geändert werden, um jedes Labors’ Präferenz zu entsprechen (d.h. Mini-Steigung [oder Mini-Gradient], kaeltekonservierter Samen, Dreischichtsgradient). 1. Die Temperatur von alle Mediumbestandteile sollte bei der Raumtemperatur oder 37°C sein. 2. Mit einer sterilen Pipette uebertragen Sie 1,5 mL bis 2,0 mL der UNTERSCHICHT auf ein steriles konisches Wegwerfzentrifugeglas. 3. Mit einer sterilen Pipette uebertragen Sie ein gleiches Volumen von OBERSCHICHT auf die UNTERSCHICHT. Das wird getan, indem man die Oberflaeche der UNTERSCHICHT mit der Pipettenspitze an der Seite des Zentrifugeglas in Beruehrung kommt. Verteilen Sie sorgfaeltig die “OBERSCHICHT” mit der Pipettenspitze um den Umkreis des Zentrifugeglases in einer aufwaerts Bewegung als das Niveau der OBERSCHICHT steigt. ITALIANO 4. Mit einer neuen sterilen Pipette, fuegen Sie sorgfaeltig 1,5 – 2,0 mL verfluessigter Samen auf die OBERSCHICHT hinzu. 5. Zentrifugierien Sie ungefaehr 200 – 300xg fuer 10 bis 20 Minuten.* Stellen Sie sorgfaeltig die Tablette heraus, entweder indem Sie weg von der “OBERSCHICHT” und von der “UNTERSCHICHT” ansaugen, oder entfernen Sie direkt die Tablette und uebertragen Sie auf ein neues steriles Zentrifugeglas *Anmerkung: Die Qualität der Spermaprobe sollte ausgewertet und in Erwaegung gezogen werden, um die korrekte Zentrifugierungsgeschwindigkeit und Zeit festzustellen. Diese sollten entsprechend der einzelnen Probestückqualität für Optimierung des Verfahrens justiert werden. 6. Mit einer neuen sterilen Pipette, fügen Sie 2,0 - 3,0 mL des passenden Spuelungsmediums wie das Sperm Washing Medium (Irvine Scientific Katalog # 9983) oder Modified HTF (Irvine Scientific Katalog # 90126), mit Proteinergänzung hinzu. Resuspendieren Sie die isolierte Tablette. Zentrifugieren Sie (~200xg) fuer 8 bis 10 Minuten und entfernen Sie den Supernatant. Wiederholen Sie diese Massnahme für eine zweite Spuelung. Werfen Sie den Supernatant weg und resuspendieren Sie die Tablette mit einer ensprechenden Volumen des passenden Medium. Die Probe ist jetzt zur Analyse bereit. Fuer weitere Einzelheiten zum Gebrauch diesen Produkten soll das Labor in seinen eigenen Protokollen nachschlagen, die für die spezifische medizinische Einstellung spezifisch entwickelt und optimiert worden sind. LAGERBEDINGUNGEN UND STABILITAET Bewahren Sie die ungeoeffneten Flaschen bei 2º to 8ºC auf. Wärmen Sie das Medium zur umgebenden oder der Temperatur des Brutkastens (37°C) vor Gebrauch. Frieren Sie es nicht oder stellen Sie es nicht in den hohen Temperaturen heraus. ISolate ist bis zum Verfallsdatum beständig, das auf die Schachtel und Flaschenetikett gezeigt wird. Bewahren Sie das Medium wie angewiesen auf. VORSICHTSMASSNAHMEN UND WARNUNGEN Diese Vorrichtung ist für die Anwendung durch Personal vorgesehen, das in Verfahren ausgebildet wurde, welche die für diese Vorrichtung angegebene zugelassene Anwendung beinhalten. ISolate wird undurchlässig aussehen. Das ist normal fuer dieses Produkt. Benutzen Sie keine Phiole des Mediums, wenn es Beweis der Feststoffe oder Kontamination (uneinheitliche Truebung) gibt. ISolate sollte fest mit einer Kappe bedeckt werden, wenn es in einem CO2 Brutkasten verwendet wird, um die pHVeränderungen zu vermeiden. Dieses Produkt enthält keine Konservierungsmittel, Antibiotika oder Proteinergänzungen. Um die Verschmutzung zu vermeiden, muss das Produkt mit aseptischer Methode benutzt werden. Im Schadensfalle, verwenden Sie das Medium nicht. Bitte werfen Sie es weg oder senden Sie zum Hersteller fuer Austausch zurück. ORSICHT: Nach US-Bundesgesetz darf dieses Gerät nur von oder auf Antrag von einem Arzt verkauft werden. DESCRIZIONE DEL PRODOTTO ISolateâ è un terreno di gradiente di densità preparato per dividire la frazione mobile di sperma dal fluido seminale. Come sistema gradiente di due strati, il terreno riduce effetivamente i contaminanti cellulari come sperma morti, cellule di sangue bianco e detriti miscellani. Il campione che risulta contiene sperma con preponderanza mobile. ISolate è un suspensione colloidale di particelle di silice stabilizzato con silane hidrofilico legato covalentamente in HTF pulito con HEPES che è filtrato su membrana e preparato in condizioni di sterilità. Il livello di sicurezza di sterilità(SAL) è 10-3. ISolate è analizzato e trovato di non avere pirogeni via il test pirogene di coniglio. ESPAÑOL 5. Centrifugare per 10 – 20 minuti approssimativamente a 200 – 300xg.* Esporre attentamente la tavoletta con il levare degli “STRATI SUPERIORI ED INFERIORI” via aspirazione, o con il allontanamento diretto della tavoletta ed il trasferimento a un tubo centrifugo sterilizzato. DESCRIPCIÓN DEL PRODUCTO El ISolate® es un medio de gradiente de densidades diseñado para separar la fracción móvil de esperma del fluido seminal. Como un sistema de gradiente de dos capas, reduce eficazmente los contaminantes celulares como espermatozoides muertos, leucocitos y otros restos. *Nota: La qualità del campione di sperm dovrebbe essere valutata e dovrebbe essere considerata quando se determina la velocità e tempo di centrifugazione propri. Questi dovrebbero essere aggiustati secondo la qualità del campione individuale per l’ottimizzazione della procedura. El ISolate es una suspensión coloidal de partículas de sílice estabilizada con silano hidrofílico unido covalentemente en HTF tamponado con HEPES, que ha sido filtrada a través de membrana y procesada en condiciones asépticas. El nivel de garantía de esterilidad (SAL) es de 10-3. El ISolate ha sido testado para pirógenos con resultados negativos por el test de pirógenos en conejo. ISTRUZIONI PER L’ USO Catalogo # 99264 – SILICE COLLOIDALE PRONTO PER USO A DUE CONCENTRAZIONI (50% E 90%) A. Materie Suggerite: ISolate • Catalogo di Irvine Scientific # 99264 (arrezzatura/ cassetta di fiala di 6mL, 50mL o arrezzatura di fiala di 100 mL Terreno di Sciaquio di Sperma • Catalogo d’Irvine Scientific #9983 Tubi buttabili conici centrifugi • Catalogo d’Irvine Scientific #IS-325 Pipette Pasteur, sterilizzate Centrifugo Incubatore, 37° C 6. Usando una nuova pipetta sterilizatta, aggiungere da 2.0 a 3.0 mL di sostanza di spruzzetta appropriata come Sostanza di Spruzzetta di Sperma (IS Catalogo #9983) o HTF Modificato (ISCatalogo #9963) con integrazione di proteina . Risospendere la pallina isolata. Centrifugare (~200xg) per 8 -10 minuti e toglie il supernatante. Ripetere questo passo per una seconda spruzzetta. Butare il supernatante ed risospendere la pallina usando un volume conveniente di sostanza appropriata. Il campione è adesso pronto per l’analisi. B. Preparazione Gradiente: Le diluzioni preliminarie non sono necessarie. Ogni fiala di gradiente di strato superiore ed Inferiore è pronto per l’uso. Prosegui a sezione di PROC DURA GENERALE del l’inserzione del prodotto. ISTRUZIONI DI STOCCAGIO E STABILITA Stoccare i contenitori non aperti refrigerati da 2° C a 8° C. Catalogo #99275 – Soluzione di Sostegno (Stock) 90% terreno di gradiente di densità per uso in una procedura di uno stado o per ulteriore diluzione. Non congelare o esporre a temperature alte. A. Materie Suggerite: Soluzione di Sostegno d’ISolate • Catalogo d’Irvine Scientific #99275 Fluido Tubarico Umano Modificato • Catalogo d’Irvine Scientific #90126 Terreno di Sciaquio di Sperma • Catalogo d’Irvine Scientific #9983 Tubi buttabili conici centrifugi • Catalogo d’Irvine Scientific #IS-325 Pipette Pasteur, sterilizzate Centrifugo Incubatore, 37° C B. Preparazione Gradiente: Si richiede due soluzioni per eseguire il metodo di separazione di sperma gradiente: uno strato superiore e uno strato inferiore. 1. Soluzione di Strato Superiore – 50%: a) Mettere SOLUZIONE DI SOSTEGNO(STOCK SOLUTION) –(Catalogo #99275) e una pipetta di 5.6 mL in un tubo centrifugo sterilizzato b) Aggiungere 4.4 mL di Fluido Tubarico Umano Modificato(Catalogo #90126) c) Chiudere il tubo e capovolgere gentilmente per permettere miscuglio completo. d) Classificare il tubo come “STRATO SUPERIORE” 2. Soluzione di Strato Inferiore – 90%: a) Aliquotare 10 mL della SOLUZIONE DI SOSTEGNO(STOCK SOLUTION–Catalogo #99275) in un tubo e coperchio di centrifugo sterilizzato – (No ulteriori diluzioni sono necessari – Soluzione di Sostegno è 90%) b) Classificare il tubo come “STRATO INFERIORE” 3. Prosegui a sezione di PROCEDURA GENERALE dell’inserzione del prodotto. (APPUNTO: 10 mL DI STRATO SUPERIORE E DI S T R ATO I N F E R I O R E T R AT TA N N O APPROSSIMATIVAMENTE 5 CAMPIONI DI SPERMA). Catalogo #99306 – Concentrato Concentrazione di silice colloidale per ulteriore diluzione a gradienti di densità; formulato in un tampone isotonico(isotonic) e approssima la densità di Percollâ. Concentrato d’ISolate fù valutato in accordo con questa inserzione di pachetto gradienti di 50% e 90%. Ogni laboratorio puo scegliere per produrre gradienti a concentrazioni differenti che devono essere evaluati per efficacia. A. Materie Suggerite: Concentrato d’ISolate • Catalogo d’Irvine Scientific #99306 Fluido Tubarico Umano Modificato • Catalogo d’Irvine Scientific #90126 Terreno di Sciaquio di Sperma • Catalogo d’Irvine Scientific #9983 Tubi buttabili conici centrifugi • Catalogo d’Irvine Scientific #IS-325 Pipette Pasteur, sterilizzate Centrifugo Incubatore, 37° C B. Preparazione Gradiente: Si richiede due soluzioni per eseguire il metodo di separazione di sperma gradiente: uno strato superiore e uno strato inferiore. 1. Soluzione di Strato Superiore – 50%: a) Mettere CONCENTRATO (Catalogo # 99306) e pipetta di 4.5 mL in un tubo centrifugo sterilizzato b) Aggiungere 5.5 mL di Fluido Tubarico Umano Modificato(Catalogo #90126) c) Coprire il tubo e capovolgere gentilmente 3 o 4 volte per miscuglio completo. d) Classificare tubo come “STRATO SUPERIORE” 2. Soluzione di Strato Inferiore – 90% a) Mettere CONCENTRATO (Catalogo # 99306) e pipetta di 8.1 mL in un tubocentrifugo sterilizzato b) Aggiungere 1.9 mL di Fluido Tubarico Umano Modificato(Catalogo #90126) c) Coprire il tubo e capovolgere gentilmente 3 o 4 volte per miscuglio completo d) Classificare il tubo come “STRATO INFERIORE” 3. Prosegui a sezione di PROCEDURA GENERALE dell’nserzione del prodotto. APPUNTO: I TERMINI 50% E 90% N O N R A P P R E S E N TA N N O U N A C O N C E N T R A Z I O N E E F F E T I VA . L E 50% E 90% SONO CONCENTRAZIONI RELATIVE BASATE ALLA NOMENCLATURA PRECEDENTE CHE DEFINI(ACCENT) UNA DILUZIONE DI PERCOLLâ DI 1:9 UGUALE A UNA SOLUZIONE OPERANTE, ISOTONICA DI 100%. C O N S I D E R A Z I O N I D I T R AT TA M E N T I SPECIALI Il seguente è una procedura generale per una seperazione gradiente di due strati di sperma mobile(motile sperm) dallo sperma(semen). Il volume e concentrazione possono essere modificati per soddisfare ogni preferenza del laboratorio(per esempio mini-gradiente, sperma criopreservata, gradiente di tre-strati). 1. Alzare tutti i componenti di terreno a temperatura ambientale o 37°C. 2. Utilizzando una pipetta sterilizzata, trasferire 1.5 – 2.0 mL del “STRATO INFERIORE” a un tubo centrifugo, buttabile, conico, sterilizzato. 3. Utilizzando una nuova pipetta sterilizzata, trasferire lo stesso volume di “STRATO SUPERIORE” sopra allo “STRATO INFERIORE”. Questo è fatto via toccare la superficie dello “STRATO INFERIORE” al lato/ fianco del tubo con la punta della pipetta. Dispensi attentamente lo “STRATO SUPERIORE” via girare a spirale la punta della pipetta attorno alla circonferenza del tubo in movimento ascendente come il livello dello “STRATO SUPERIORE” alza. 4. Mettere gentilmente 1.5 – 2.0 mL di sperma liquificata sopra lo “STRATO SUPERIORE” utilizzando una pipetta nuova, sterilizzata. Per ulteriori dettagl sull’uso de queste prodotti, il laboratorio dovrebbe consultare le sue protocolli/tecniche standard che sono statti specificamente fatti ed ottimizzatti per la sua impianto. Riscaldare a temperatura ambientale o temperatura d’incubatore(incubator) – (37° C) prima dell’uso. Quando sono stoccate direttamente, ISolate è stabile fino alla data di scadenza mostrata sulle etichette della bottiglia e della scatola. PRECAUZIONI E AVVERTIMENTI Questo dispositivo è previsto per l’uso da parte di personale addestrato nelle procedure che comprendono le applicazioni indicate per le quali il dispositivo è previsto. ISolate si vede opaco. Questo è normale per questo prodotto. Non usare qualsiasi fiale o terreno che ha evidenza di sostanze particolari o contaminazione (torbidezza non uniforme). ISolate deve essere chiuso strettamente quando è utilizzato in un incubatore CO2 per evitare cambi di pH. Questo prodotto non contiene preservativi, antibiotici, o supplementi di proteina. Per evitare contaminazione, il prodotto deve essere utilizzato con tecniche assetiche. IN CASO DI DANNO, NON USARE. PER FAVORE ELIMINARE O REGRESSALO ALLA MANIFATTURA PER SOSTITUZIONE. CAUTELA: La legge federale (U.S.) se limita questo meccanismo/prodotto a la vendita da o sull’ordine di un medico o dottore. INSTRUCCIONES DE USO Nº de Catálogo 99264 – SÍLICE COLOIDAL LISTA PARA USAR A DOS CONCENTRACIONES (50% y 90%) A. Material sugerido: ISolate • Irvine Scientific, Nº catálogo 99264 (kit de viales de 6mL, 50mL o kit de viales de 100mL) Medio de lavado de esperma • Irvine Scientific, Nº catálogo 9983 Tubos de centrífuga cónicos estériles y desechables • Irvine Scientific, Nº catálogo IS-325 Pipetas Pasteur estériles Centrífuga Incubador a 37ºC B. Preparación del gradiente: No son necesarias diluciones preliminares. Cada vial de capa de gradiente superior e inferior está lista para usar. Continue con la sección “PROCEDIMIENTOS GENERALES” Nº de Catálogo 99275 – SOLUCIÓN STOCK Medio de gradiente de densidades al 90% para ser utilizado en protocolos de un solo paso o para posteriores diluciones. A. Material sugerido: ISolate - Solución Stock • Irvine Scientific, Nº Cat. 99275 Medio HTF modificado • Irvine Scientific, Nº Cat. 90126 Medio de lavado de esperma • Irvine Scientific, Nº Cat. 9983 Tubos de centrífuga cónicos estériles y desechables • Irvine Scientific, Nº Cat. IS-325 Pipetas Pasteur estériles Centrífuga Incubador a 37ºC B. Preparación del gradiente: Para llevar a cabo una separación de esperma por gradiente se necesitan dos soluciones: la capa superiory la capa inferior. 1. Solución de la capa superior: 50% a. Coger la SOLUCIÓN STOCK (Nº Cat. 99275) y pipetear 5,6mL en un tubo de centrífuga estéril. b. Añadir 4,4 mL de HTF modificado (Nº Cat. 90126) c. Tapar el tubo e invertir suavemente 3 o 4 veces para permitir una mezcla completa. d. Etiquetar el tubo como “capa superior”. 2. Solución de la capa inferior: 90% a. Alicuotar 10mL de la SOLUCIÓN STOCK en un tubo estéril de centrífuga y taparlo. (No se necesitan más diluciones. La solución stock está al 90%). b. Etiquetar el tubo como “CAPA INFERIOR”. 3. Continúe en la sección de “PROCEDIMIENTOS GENERALES”. FRANÇAIS Nota: la calidad de la muestra de esperma debe ser evaluada y tomada en consideración para determinar el tiempo y la velocidad adecuados de centrifugación. Estos parámetros deben ajustarse conforme a la calidad individual de la muestra para optimizar el el proceso. * 6. Utilizando una nueva pipeta estéril, añadir 2.0 – 3.0 mL de un medio de lavado adecuado como el Medio de Lavado de Esperma (IS Nº Cat 9983) o HTF modificado (IS Nº Cat 90126) son suplemento proteico. Resuspender el sedimento. Centrifugar (aprox. 200xg) 8-10 minutos y descartar el sobrenadante. Repetir este paso para un segundo lavado. Descartar el sobrenadante y resuspender el sedimento utilizando un volumen adecuado de medio. La muestra está lista para el análisis. Para más detalles sobre la utilización de estos productos, consulte los protocolos de trabajo de su propio laboratorio, los cuales han sido desarrollados y especialmente optimizados de acuerdo a su programa médico particular. INSTRUCCIONES DE ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD Conserve las botellas no abiertas refrigeradas entre 2ºC y 8ºC. Atempere a temperatura ambiente o en un incubador (37ºC) antes de su uso. No congele ni exponga a temperaturas elevadas. El ISolate es estable hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta de la botella y de la caja, siempre que se conserve de acuerdo a las instrucciones recomendadas. PRECAUCIONES Y ADVERTENCIAS Este dispositivo debe ser utilizado por personal capacitado en procedimientos que incluyan la aplicación prevista para el mismo. El ISolate tiene un aspecto opaco. Esto es normal en este producto. No utilice ningún vial de medio con evidencias de contener partículas o contaminación (turbidez no homogénea). Los viales de ISolate deben estar herméticamente cerrados cuando se usen en un incubador de CO2 para evitar cambios de pH. Este medio no contiene conservantes, ni antibióticos ni suplementos proteicos. Para evitar contaminaciones, manipule el producto en condiciones de esterilidad. En caso de alteración del medio, no lo utilice. Por favor, descártelo o devuélvalo al fabricante para que lo reemplace. PRECAUCIÓN: Las leyes federales (U.S.) restringen la venta de este producto a la prescripción de un facultativo. Description du produit ISolate® est un gradient de densité conçu pour séparer la fraction des spermatozoïdes mobiles du plasma séminale. Système gradient à deux couches, il réduit efficacement les contaminations cellulaires telles que les spermatozoïdes morts, les globules blancs et les débris divers. Il en résulte une fraction de sperme contenant essentiellement les spermatozoïdes mobiles. ISolate, stérilisé par filtration, est une suspension colloïdale de particules de silice stabilisés par une liaison covalente au silane hydrophile, dans du milieu HTF tamponné au HEPES. Le niveau de stérilité de la solution est de 10-3 (Sterility Assurance Level). ISolate a été trouvé non-pyrogène par le “rabbit pyrogen test”. Conseils d’utilisation Référence 99264, Gradient de densité à deux concentrations 50% et 90%, prêt à l’utilisation A. Matériel suggéré : ISolate • % Irvine Scientific, référence 99264 (kit de 6 ml, 50mL ou de 100ml) Milieu de lavage du sperme • % Irvine Scientific, référence 9983 Tubes coniques pour centrifugeuse, jetables, stériles • % Irvine Scientific, référence IS-325 Pipettes Pasteur, stériles Centrifugeuse Etuve, 37°C B. Préparation du gradient : Pas de dilution préalable nécessaire. Chaque flacon de gradient supérieur et inférieur est prêt à l’utilisation. Aller à la section “Procédure générale” de cette notice. Référence 99275, Solution mère Milieu de gradient de densité à 90%, à utiliser dans le protocole à une étape ou pour des dilutions ultérieures. A. Matériel suggéré : ISolate, solution mère • % Irvine Scientific, référence 99275 Fluide tubulaire humain modifié • % Irvine Scientific, référence 90126 Milieu de lavage du sperme • % Irvine Scientific, référence 9983 Tubes coniques pour centrifugeuse, jetables, stériles • % Irvine Scientific, référence IS-325 Pipettes Pasteur, stériles Centrifugeuse Etuve, 37°C B. Préparation du gradient : Deux solutions sont requises pour réaliser la séparation des spermatozoïdes par la méthode de gradient de densité : une couche supérieure et une couche inférieure. 1. Solution pour la couche supérieure – 50% a. Prélever dans un tube conique stérile 5,6 ml de la solution mère (réf. 99275), b. Ajouter 4,4 ml de fluide tubulaire humain modifié (réf. 90126) c. Bouchonner le tube et le retourner 3-4 fois pour permettre un mélange complet d. Marquer ce tube “couche supérieure” 2. Solution pour la couche inférieure – 90% a. Prélever dans un tube conique stérile 10 ml de la solution mère (réf. 99275) (pas de dilution nécessaire, la solution mère est à 90%) b. Marquer ce tube “couche inférieure” 3. Aller à la section “Procédure générale” de cette notice (Remarque : 10 ml de couche supérieure et 10 ml de couche inférieure permettront de traiter approximativement 5 prélèvements de sperme) Nº de Catálogo 99306 – CONCENTRADO Concentrado de sílice coloidal para posteriores diluciones en gradientes de densidad; formulado en un tampón isotónico, se aproxima a la densidad del Percoll sin diluir. El ISolate Concentrado ha sido evaluado en gradientes del 50% y 90% de acuerdo a este Información de producto. Cada laboratorio puede elegir preparar los gradientes a concentraciones diferentes, previa comprobación de su efectividad. Référence 99306, Concentré Suspension colloïdale de silice concentrée à diluer pour former des gradients de densité ; formulé comme un tampon isotonique dont la densité est approximativement la même que celle du Percoll® non dilué. Le concentré ISolate® a été évalué pour cette notice par des gradients de 50% et 90%. Chaque laboratoire pourrait choisir de faire des gradients de différentes concentrations. l’efficacité de ces derniers doit être évaluée. A. Material sugerido: ISolate - Concentrado • Irvine Scientific, Nº Cat. 99306 Medio HTF modificado • Irvine Scientific, Nº Cat. 90126 Medio de lavado de esperma • Irvine Scientific, Nº Cat. 9983 Tubos de centrífuga cónicos estériles y desechables • Irvine Scientific, Nº Cat. IS-325 Pipetas Pasteur estériles Centrífuga Incubador a 37ºC A. Matériel suggéré : ISolate, Concentré • % Irvine Scientific, référence 99306 Fluide tubulaire humain modifié • % Irvine Scientific, référence 90126 Milieu de lavage du sperme • % Irvine Scientific, référence 9983 Tubes coniques pour centrifugeuse, jetables, stériles • % Irvine Scientific, référence IS-325 Pipettes Pasteur, stériles Centrifugeuse Etuve, 37°C B. Preparación del gradiente: Para llevar a cabo una separación de esperma por gradi ente se necesitan dos soluciones: la capa superior y la capa inferior. 1. Solución de la capa superior: 50% a. Coger el CONCENTRADO (Nº Cat. 99306) y pipetear 4,5 mL en un tubo de centrífuga estéril. b. Añadir 5,5 mL de HTF modificado (Nº Cat. 90126) c. Tapar el tubo e invertir suavemente 3 o 4 veces para permitir una mezcla completa. d. Etiquetar el tubo como “CAPA SUPERIOR”. 2. Solución de la capa inferior: 90% a. Coger el CONCENTRADO (Nº Cat. 99306) y pipetear 8,1 mL en un tubo de centrífuga estéril. b. Añadir 1,9 mL de HTF modificado (Nº Cat. 90126) c. Tapar el tubo e invertir suavemente 3 o 4 veces para permitir una mezcla completa. d. Etiquetar el tubo como “CAPA INFERIOR”. 3. Continúe en la sección de “PROCEDIMIENTOS GENERALES”. B. Préparation du gradient : Deux solutions sont requises pour réaliser la séparation des spermatozoïdes par la méthode de gradient de densité : une couche supérieure et une couche inférieure. 1. Solution pour la couche supérieure – 50% a. Prélever dans un tube conique stérile 4,5 ml de la solution CONCENTRE (réf. 99306) b. Ajouter 5,5 ml de fluide tubulaire humain modifié (réf. 90126) c. Bouchonner le tube et le retourner 3-4 fois pour permettre un mélange complet d. Marquer ce tube “couche supérieure” 2. Solution pour la couche inférieure – 90% a. Prélever dans un tube conique stérile 8,1 ml de la solution CONCENTRE (réf. 99306) b. Ajouter 1,9 ml de fluide tubulaire humain modifié (réf. 90126) c. Bouchonner le tube et le retourner 3-4 fois pour permettre un mélange complet d. Marquer ce tube “couche inférieure” 3. Aller à la section “Procédure générale” de cette notice Nota: Los términos 50% y 90% no equivalen a una co centración real. El 50 % y el 90% son concentraciones relativas basadas en una nomenclatura anterior que definía una solución 1:9 de Percoll® como una solución de trabajo isotónica al 100%. PROCEDIMIENTOS GENERALES El protocolo que aquí se describe es un procedimiento general para separar del semen la fracción móvil de esperma a través de un gradiente. El volumen y la concentración se pueden modificar para adecuarse a las preferencias de cada laboratorio (p.ej. mini-gradiente, semen criopreservado, gradiente de 3 capas). 1. Atemperar todos los medios a temperatura ambiente o a 37ºC. 2. Utilizando una pipeta estéril, transferir 1,5 – 2,0 mL de medio de la “CAPA INFERIOR” a un tubo de centrífuga cónico, estéril y desechable. 3. Utilizando otra pipeta estéril, transferir un volumen igual al del paso 1 de la “CAPA SUPERIOR” a la parte superior de la “CAPA INFERIOR”. Para ello, colocar con la punta de la pipeta en la parte superior de la capa tocando la pared del tubo. Dispensar con mucho cuidado la “CAPA SUPERIOR” moviendo la pipeta en círculos alrededor de la circunferencia del tubo subiendo a medida que se aumenta la “CAPA INFERIOR”. 4. Coloque suavemente 1,5 – 2,0 mL de semen licuado sobre la “CAPA SUPERIOR” con otra pipeta estéril. 5. Centrifugar durante 10-20 minutos a 200-300 x g*. Con mucho cuidado, aspirar y desechar las capas inferior y superior o bien. Remarque : les termes 50% et 90% ne représentent pas des concentrations réelles. Les 50% et 90% sont des concentrations relatives basées sur la précédente nomenclature qui a défini la dilution 1:9 du Percoll® comme étant égale à 100% de solution isotonique. Procédure générale Ce qui suit est une méthode générale de séparation par gradient de densité des spermatozoïdes mobiles du plasma séminale. Les volumes et les concentrations peuvent être modifiés pour répondre aux préférences de chaque laboratoire (ex. Mini gradient, sperme congelé, gradient à trois couches). 1. Amener tous les milieux à température ambiante ou les préchauffer à 37°C. 2. A l’aide d’une pipette stérile, transférer 1,5 – 2,0 ml de la ‘couche inférieure’ dans un tube conique pour centrifugeuse, jetable, stérile. 3. A l’aide d’une nouvelle pipette stérile, transférer un volume équivalent (1,5 – 2,0 ml) de la ‘couche supérieure’ et la déposer au-dessus de la ‘couche inférieure’. Ceci est réalisé en touchant la surface de la ‘couche inférieure’ par le bout de la pipette. Répartir soigneusement la ‘couche supérieure’ en tournant la pipette autour de la paroi du tube dans un mouvement ascendant à mesure que la ‘couche supérieure’ monte. 4. Soigneusement placer 1,5 – 2,0 ml de sperme liquéfié sur la ‘couche supérieure’ en utilisant une nouvelle pipette stérile. 5. Centrifuger à 200-300xg* pendant 10-20 minutes *Remarque: la qualité du prélèvement du sperme doit être évaluée et prise en considération lors de la détermination de la durée et de la vitesse de centrifugation appropriées. Pour une optimisation de la procédure, ces dernières doivent être ajustées selon la qualité de chaque prélèvement. 6. A l’aide d’une nouvelle pipette stérile, ajouter 2,0 –3,0 ml d’un milieu de lavage adéquat comme le milieu de lavage du sperme (IS réf. 9983) ou le milieu HTF modifié (IS réf. 90126) supplémenté en protéines. Resuspendre le culot de centrifugation. Centrifuger (~200xg) pendant 8-10 minutes et aspirer le surnageant. Répéter cette étape (deuxième lavage). Aspirer le surnageant et resuspendre le culot dans le volume désiré d’un milieu adéquat. Le prélèvement est maintenant prêt à l’analyse. Pour plus de détails sur l’utilisation de ce produit, chaque laboratoire doit consulter ses propres procédures et protocoles standards spécialement développés et optimisés pour chaque établissement médical particulier. C onsignes de conservation et stabilité Conserver les flacons non entamés réfrigérés entre 2 et 8°C. Amener à température ambiante ou préchauffer à 37°C (dans une étuve) avant utilisation. Ne pas congeler ou exposer à des températures élevées. Conservé comme indiqué ci-dessus, ISolate est stable jusqu’à la date d’expiration indiquée sur la boite et les étiquettes des flacons. Précautions et mise en garde Ce dispositif est destiné à une utilisation par un personnel formé aux procédures comprenant l’application indiquée pour laquelle le dispositif est destiné. ISolate apparaîtra opaque. Ceci est normal pour ce produit. N’utiliser aucun flacon de milieu s’il contient des particules ou s’il est contaminé (non uniformément trouble). Lors de l’incubation de ISolate dans une étuve à CO2, les flacons doivent être bien fermés pour éviter les changements de pH. Ce produit ne contient ni conservateurs, ni antibiotiques, ni supplément protéiques. Pour éviter les contaminations, il doit être manipulé stérilement. ATTENTION : La loi fédérale limite la vente de ce dispositif aux médecins ou sur ordre d’un médecin. ENGLISH ® ISolate Catalog No. 99264 12 x 6 mL, 2 x 50 mL, 2 x 100 mL Ready to Use Density Gradient Medium at Two Concentrations Catalog No. 99275 Stock Solution 100 mL Catalog No. 99306 Concentrate 100 mL REFERENCES Adaniya GK, Jackson KV: Comparison of Percoll® and ISolate® in the Preparation of Semen for use in Assisted Reproductive Technologies. 53rd Annual Meeting of the American Society for Reproductive Medicine, Cincinnati, Ohio; 0-113, 1997. Symbols: Catalog Number Lot Number Tarchala SM, Fahy MM, Hauserman HM, Kallmann K, Volentine K, Radwanska E, Binor Z, Molo MW, Rawlins RG: ISolate® As a New Method of Sperm Separation. 53rd Annual Meeting of the American Society for Reproductive Medicine, Cincinnati, Ohio; P-116, 1998. Miller, KF, Fry KL, Arciaga RL, Falcone T: Semen preparation for in-vitro fertilization using ISolate® results in sperm recovery, fertilization and pregnancy outcomes that are indistinguishable from those obtained with Percoll®. 14th Embryology, Goteborg, Sweden; P-116, 1998. Tarchala SM, Volentine KK, Rawlins RG: A comparison of sperm processing using ISolate® and Pure Sperm™. 14th Annual Meeting of the European Society of Human Reproduction and Embryology, Goteborg, Sweden; R-041, 1998. Sterilized using aseptic processing techniques (filtration) Expiration: Year - Month - Day Caution:See instructions for use European Representative MPIE Schutweg 13A 5145 NP Waalwijk, The Netherlands See instructions for use. Storage Temperature CE Mark 0050 0050 ISolate is a Registered Trademark of Irvine Scientific ® Percoll ® is a Registered Trademark of Pharmacia Biotech, AB Sweden MPIE Schutweg 13a 5145 NP Waalwijk, The Netherlands PRODUCT DESCRIPTION ISolate® is a density gradient medium designed to separate the motile fraction of sperm from seminal fluid. As a two layer gradient system, it effectively reduces cellular contaminants such as dead sperm, white blood cells and miscellaneous debris. The resulting sample contains predominantly motile sperm. ISolate is a membrane filtered, aseptically processed colloidal suspension of silica particles stabilized with covalently bound hydrophilic silane in HEPES-buffered HTF. The sterility assurance level (SAL) is 10-3. ISolate is tested and found negative for pyrogens by rabbit pyrogen test. DIRECTIONS FOR USE Catalog #99264 - READY TO USE COLLOIDAL SILICA AT TWO CONCENTRATIONS (50% and 90%) A. Materials Suggested: ISolate • Irvine Scientific Catalog #99264 (6mL , 50 mL or 100mL vial kit) Sperm Washing Medium • Irvine Scientific Catalog #9983 Sterile, disposable conical centrifuge tubes • Irvine Scientific Catalog #IS-325 Pasteur Pipettes, sterile Centrifuge Incubator, 37°C B. Gradient Preparation: No preliminary dilutions are necessary. Each vial of upper and lower layer gradient is ready for use. Continue to GENERAL PROCEDURE section of product insert. For additional details on the use of these products, each laboratory should consult its own laboratory procedures and protocols which have been specifically developed and optimized for your individual medical program. STORAGE INSTRUCTIONS AND STABILITY Store the unopened containers refrigerated at 2º to 8ºC. Warm to ambient or incubator (37°C) temperature prior to use. Do not freeze or expose to high temperatures. ISolate is stable until the expiration date shown on the box and bottle labels when stored as directed. PRECAUTIONS AND WARNINGS This device is intended to be used by staff trained in assisted reproductive procedures that include the indicated application for which the device is intended. ISolate will appear opaque. This is normal for this product. Do not use any vial of medium which shows evidence of particulate matter or contamination (nonuniform cloudiness). Catalog #99275 - STOCK SOLUTION 90% density gradient medium for use in a one-step procedure or for further dilution. ISolate should be tightly capped when used in a CO2 incubator to avoid pH changes. A.Materials Suggested: ISolate Stock Solution • Irvine Scientific Catalog #99275 Modified Human Tubal Fluid • Irvine Scientific Catalog #90126 Sperm Washing Medium • Irvine Scientific Catalog #9983 Sterile, disposable conical centrifuge tubes • Irvine Scientific Catalog #IS-325 Pasteur Pipettes, sterile Centrifuge Incubator, 37°C This product contains no preservatives, antibiotics, or protein supplements. To avoid problems with contamination, handle using aseptic techniques. B. Gradient Preparation: Two solutions are required to perform the gradient sperm separation method: An upper layer and a lower layer. 1. Upper Layer solution - 50%: a) Take STOCK SOLUTION (Catalog #99275) and pipette 5.6 mL into a sterile centrifuge tube b Add 4.4 mL of Modified Human Tubal Fluid (Catalog #90126) c) Cap tube and invert gently 3-4 times to allow for complete mixing d) Label tube as “UPPER LAYER” 2. Lower Layer solution - 90%: a) Aliquot 10 mL of the STOCK SOLUTION into a sterile centrifuge tube and cap - (No further dilutions necessary - Stock Solution is 90%) b) Label tube as “LOWER LAYER” 3. Continue to GENERAL PROCEDURE section of product insert. (NOTE: 10 mL Upper Layer and 10 mL Lower Layer will process approximately 5 semen samples.) Catalog #99306 - CONCENTRATE Colloidal silica concentrate for further dilution into density gradients; formulated in an isotonic buffer and approximates the density of undiluted Percoll®. ISolate® CONCENTRATE was evaluated according to this package insert at 50% and 90% gradients. Each laboratory may choose to make gradients at different concentrations which should be evaluated for effectiveness. A. Materials Suggested: ISolate® Concentrate • Irvine Scientific Catalog #99306 Modified Human Tubal Fluid • Irvine Scientific Catalog #90126 Sperm Washing Medium • Irvine Scientific Catalog #9983 Sterile, disposable conical centrifuge tubes • Irvine Scientific Catalog #IS-325 Pasteur Pipettes, sterile Centrifuge Incubator, 37°C B. Gradient Preparation: Two solutions are required to perform the gradient sperm separation method: An upper layer and a lower layer. 1.) Upper Layer solution - 50%: a) Take CONCENTRATE (Catalog #99306) and pipette 4.5 mL into a sterile centrifuge tube b) Add 5.5 mL of Modified Human Tubal Fluid (Catalog #90126) c) Cap tube and invert gently 3-4 times to allow for complete mixing d) Label tube as “UPPER LAYER” 2. Lower Layer solution - 90%: a) Take CONCENTRATE (Catalog #99306) and pipette 8.1 mL into a sterile centrifuge tube b) Add 1.9 mL of Modified Human Tubal Fluid (Catalog #90126) c) Cap tube and invert gently 3-4 times to allow for complete mixing d) Label tube as “LOWER LAYER” 3. Continue to GENERAL PROCEDURE section of product insert. Note: The terms 50% and 90% do not represent an actual concentration. The 50% and 90% are relative concentrations based on the previous nomenclature that defined a 1:9 dilution of Percoll® as equal to a 100% working, isotonic solution. GENERAL PROCEDURE The following is a general procedure for a two-step gradient separation of motile sperm from semen. The volume and concentration can be modified to meet each laboratory’s preference (i.e. mini-gradient, cryopreserved semen, three-layer gradient). 1. Bring all media components to room temperature or 37°C. 2. Using a sterile pipette, transfer 1.5 - 2.0 mL of the “LOWER LAYER” into a sterile, disposable, conical centrifuge tube. 3. Using a new sterile pipette, transfer an equal volume of “UPPER LAYER” on top of the “LOWER LAYER”. This is done by contacting the surface of the “LOWER LAYER” at the side of the tube with the tip of the pipette. Carefully dispense the “UPPER LAYER” by spiraling the pipette tip around the circumference of the tube in an upward motion as the level of the “UPPER LAYER” rises. 4. Gently place 1.5 - 2.0 mL of liquefied semen onto the “UPPER LAYER” using a new sterile pipette. 5. Centrifuge for 10-20 minutes at approximately 200 300xg.* Carefully expose the pellet by either aspirating off the “UPPER” and “LOWER LAYERS”, or directly removing the pellet and transferring to a new sterile centrifuge tube. Note: The quality of the sperm sample should be evaluated and taken into consideration when determining the proper centrifugation speed and time. These should be adjusted according to the individual specimen quality for optimization of the procedure. 2511 Daimler Street, Santa Ana, California 92705-5588 Telephone: 1 949 261 7800 • 1 800 437 5706 Fax: 1 949 261 6522 • www.irvinesci.com PN 40558 Rev.10 DEUTSCH 6. Using a new sterile pipette, add 2.0 - 3.0 mL of appropriate washing medium such as Sperm Washing Medium (IS Catalog #9983) or Modified HTF (IS Catalog #90126) with protein supplementation. Resuspend the isolated pellet. Centrifuge (~200xg) for 8 -10 minutes and remove the supernatant. Repeat this step for a second wash. Discard the supernatant and resuspend the pellet using a suitable volume of appropriate medium. The sample is now ready for analysis. In case of damage, do not use. Please discard or return to Manufacturer for replacement. Caution: Federal (U.S.) law restricts this device to sale by or on the order of a physician. Produktbeschreibung ISolate ® ist ein Dichtegradientsmedium [oder Konzentrationgradientsmedium], das fuer das Trennen des freibeweglichen Spermafraktion von der Samenfluessigkeit bestimmt ist. Als ein Gradientssystem mit zwei Schichten verringert es effektiv die zellulaeren Kontaminationsstoffe wie das tote Sperma, die weissen Blutkoerperchen, und andere Rückstaende. Die ergebende Probe enthält überwiegendes freibewegliches Sperma. ISolate ist Membran gefiltert, es ist eine Kolloidsuspension von Kieselpartikel, die aseptisch verarbeitet ist, und stabilisiert mit dem kovalentgebundenen hydrophilen Silan im HEPES-buffered [gepuffertem] HTF. Das Sterilitaetversicherungsniveau [sterility assurance level (SAL)] ist 10 -3 . ISolate wurde durch die Kaninchenpyrogenprobe getestet und wurde negativ von Pyrogen gefunden. GEBRAUCHSANLEITUNG Katalog Nr. 99264 - BETRIEBSFERTIGE KOLLOIDAL SILICA BEI ZWEI KONZENTRATIONEN (50% UND 90%) A. Vorgeschlagene Materialien: ISolate® • Irvine Scientific Katalog Nr. 99264 (6mL, 50mL oder 100mL Phiolesatz) Sperm Washing Medium [Spermaspuelungsmedium] • Irvine Scientific Katalog Nr. 9983 Sterile wegwerfbare konische Zentrifugegläser • Irvine Scientific Katalog Nr. IS-325 Pasteurpipetten, Steriler Zentrifugebrutkasten, 37°C B. Gradientvorbereitung: Keine vorbereitende Verdünnungen sind notwendig Jede Phiole der Oberschichtsgradient und Unterschic tsgradient ist zum Gebrauch bereit. Setzen Sie zum ALLGEMEINEN VERFAHREN Abschnitt des Produ teinsatzes fort. Katalog Nr. 99275 - verdichtete Lösung 90% Density Gradient Medium ist für den Gebrauch in einem Einschrittverfahren oder für weitere Verdünnung. A. Vorgeschlagene Materialen ISolate Stock Solution • Irvine Scientific Katalog Nr. 99275 Modified Human Tubal Fluid • Irvine Scientific Katalog Nr. 90126 Sperm Washing Medium [Spermaspülungsmedium] • Irvine Scientific Katalog #9983 Sterile, wegwerfbare konische Zentrifugegläser • Irvine Scientific Katalog #IS-325 Pasteurpipetten, Steriler Zentrifugebrutkasten, 37°C B. Gradientvorbereitung: Zwei Lösungen werden benoetigt, um die Trennung methode des Spermagradients durchzuführen: Eine Oberschicht und eine Unterschicht 1. Upper Layer solution - 50% [Oberschichtlösung – 50%]: a. Nehmen Sie die STOCK SOLUTION (Katalog Nr. 99275) und pipettieren Sie 5,6 mL in einem sterilen Zentrifugeglas b. Fuegen Sie 4,4 mL Modified Human Tubal Fluid (Katalog Nr. 90126) c. Verschliessen Sie das Zentrifugeglas und kehren Sie es behutsam 3 bis 4 mal um, um eine komplette Mischung zuzulassen. d. Etikettieren Sie das Zentrifugeglas als “OBERSCHICHTt”. 2. Lower Layer solution- 90% [Unterschichtloesung-90%]: a. Aliquotieren Sie 10 mL Stock Solution in einem sterilen Zentrifugeglas und verschliessen Sie es (keine weitere Verduennungen werden benoetigt – Stock Solution ist 90%). b. Etikettieren Sie das Zentrifugeglas als “UNTERSCHICHT” 3. Setzen Sie zum ALLGEMEINEN VERFAHREN Abschnitt des Produkteinsatzes fort. (ANMERKUNG: 10 mL Oberschicht und 10 mL Unterschicht werden ungefaehr 5 Samenproben verarbeiten) Katalog Nr. 99306 – KONZENTRAT Kolloid-Kieselerdekonzentrat ist für weitere Verdünnung zu brauchbare Konzentrationen der Dichtegradienten bestimmt; formuliert in einem isotonischen Puffer und naehert die Dichte von unverdünntem Percoll® an. ISolate KONZENTRAT wurde entsprechend diesem Paketeinsatz bei 50% und 90% Gradient ausgewertet. Jedes Labor kann beschliessen, die Gradienten bei unterschiedlichen Konzentrationen zu bilden, die für die Wirksamkeit ausgewertet werden sollten. A. Vorgeschlagene Materialien ISolate Concentrate • Irvine Scientific Katalog Nr. 99306 Modified Human Tubal Fluid • Irvine Scientific Katalog Nr. 90126 Sperm Washing Medium • Irvine Scientific Katalog Nr. 9983 Steriles, wegwerfbares konisches Zentrifugeglaeser • Irvine Scientific Katalog Nr. IS-325 Pasteurpipetten, Steriler Zentrifugebrutkasten, 37°C B. Gradientvorbereitung: Zwei Lösungen werden benoetigt, um die Trennung methode des Spermagradients durchzuführen: Eine Oberschicht und eine Unterschicht. 1. Oberschichtloesung – 50% a. Nehmen Sie das CONCENTRATE (Katalog Nr. 99306) und pipettieren Sie 4,5 mL in einem sterilen Zentrifugeglas. b. Fuegen Sie 5,5 mL Modified Human Tubal Fluid (Katalog Nr. 90126) hinzu. c. Verschliessen Sie das Zentrifugeglas und kehren Sie sorgfaeltig 3 bis 4 mal um, um eine komplette Mischung zuzulassen. d. Etikettieren Sie das Zentrifugeglas als “OBERSCHICHT”. 2. Unterschichtloesung – 90% a. Nehmen Sie CONCENTRATE (Katalog Nr. 99306) und pipettieren Sie 8,1 mL in einem sterilen Zentrifugeglas b. Fuegen Sie 1,9 mL Modified Human Tubal Fluid (Katalog Nr. 90126) hinzu. c. Verschliessen Sie das Zentrifugeglas und kehren Sie sorgfaeltig 3 bis 4 mal um, um eine komplette Mischung zuzulassen d. Etikettieren Sie das Zentrifugeglas als “UNTERSCHICHT”. 3. Setzen Sie zum ALLGEMEINEN VERFAHREN Abschnitt des Paketeinsatz fort. Anmerkung: Die Bezeichnungen 50% und 90% bedeuten nicht eine tatsächliche Konzentration. Die 50% und die 90% sind die relativen Konzentrationen, die auf der vorherigen Namenklatur basieren. Das bedeuted, dass eine 1:9 Verdünnung von Percoll® is gleichwertig zu einer Funktion 100% der isotonische Loesung ALLGEMEINES VERFAHREN Das folgende ist ein allgemeines Verfahren für eine zweistufige Gradientstrennung des freibeweglichen Sperma vom Samen. Das Volumen und die Konzentration koennen geändert werden, um jedes Labors’ Präferenz zu entsprechen (d.h. Mini-Steigung [oder Mini-Gradient], kaeltekonservierter Samen, Dreischichtsgradient). 1. Die Temperatur von alle Mediumbestandteile sollte bei der Raumtemperatur oder 37°C sein. 2. Mit einer sterilen Pipette uebertragen Sie 1,5 mL bis 2,0 mL der UNTERSCHICHT auf ein steriles konisches Wegwerfzentrifugeglas. 3. Mit einer sterilen Pipette uebertragen Sie ein gleiches Volumen von OBERSCHICHT auf die UNTERSCHICHT. Das wird getan, indem man die Oberflaeche der UNTERSCHICHT mit der Pipettenspitze an der Seite des Zentrifugeglas in Beruehrung kommt. Verteilen Sie sorgfaeltig die “OBERSCHICHT” mit der Pipettenspitze um den Umkreis des Zentrifugeglases in einer aufwaerts Bewegung als das Niveau der OBERSCHICHT steigt. ITALIANO 4. Mit einer neuen sterilen Pipette, fuegen Sie sorgfaeltig 1,5 – 2,0 mL verfluessigter Samen auf die OBERSCHICHT hinzu. 5. Zentrifugierien Sie ungefaehr 200 – 300xg fuer 10 bis 20 Minuten.* Stellen Sie sorgfaeltig die Tablette heraus, entweder indem Sie weg von der “OBERSCHICHT” und von der “UNTERSCHICHT” ansaugen, oder entfernen Sie direkt die Tablette und uebertragen Sie auf ein neues steriles Zentrifugeglas *Anmerkung: Die Qualität der Spermaprobe sollte ausgewertet und in Erwaegung gezogen werden, um die korrekte Zentrifugierungsgeschwindigkeit und Zeit festzustellen. Diese sollten entsprechend der einzelnen Probestückqualität für Optimierung des Verfahrens justiert werden. 6. Mit einer neuen sterilen Pipette, fügen Sie 2,0 - 3,0 mL des passenden Spuelungsmediums wie das Sperm Washing Medium (Irvine Scientific Katalog # 9983) oder Modified HTF (Irvine Scientific Katalog # 90126), mit Proteinergänzung hinzu. Resuspendieren Sie die isolierte Tablette. Zentrifugieren Sie (~200xg) fuer 8 bis 10 Minuten und entfernen Sie den Supernatant. Wiederholen Sie diese Massnahme für eine zweite Spuelung. Werfen Sie den Supernatant weg und resuspendieren Sie die Tablette mit einer ensprechenden Volumen des passenden Medium. Die Probe ist jetzt zur Analyse bereit. Fuer weitere Einzelheiten zum Gebrauch diesen Produkten soll das Labor in seinen eigenen Protokollen nachschlagen, die für die spezifische medizinische Einstellung spezifisch entwickelt und optimiert worden sind. LAGERBEDINGUNGEN UND STABILITAET Bewahren Sie die ungeoeffneten Flaschen bei 2º to 8ºC auf. Wärmen Sie das Medium zur umgebenden oder der Temperatur des Brutkastens (37°C) vor Gebrauch. Frieren Sie es nicht oder stellen Sie es nicht in den hohen Temperaturen heraus. ISolate ist bis zum Verfallsdatum beständig, das auf die Schachtel und Flaschenetikett gezeigt wird. Bewahren Sie das Medium wie angewiesen auf. VORSICHTSMASSNAHMEN UND WARNUNGEN Diese Vorrichtung ist für die Anwendung durch Personal vorgesehen, das in Verfahren ausgebildet wurde, welche die für diese Vorrichtung angegebene zugelassene Anwendung beinhalten. ISolate wird undurchlässig aussehen. Das ist normal fuer dieses Produkt. Benutzen Sie keine Phiole des Mediums, wenn es Beweis der Feststoffe oder Kontamination (uneinheitliche Truebung) gibt. ISolate sollte fest mit einer Kappe bedeckt werden, wenn es in einem CO2 Brutkasten verwendet wird, um die pHVeränderungen zu vermeiden. Dieses Produkt enthält keine Konservierungsmittel, Antibiotika oder Proteinergänzungen. Um die Verschmutzung zu vermeiden, muss das Produkt mit aseptischer Methode benutzt werden. Im Schadensfalle, verwenden Sie das Medium nicht. Bitte werfen Sie es weg oder senden Sie zum Hersteller fuer Austausch zurück. ORSICHT: Nach US-Bundesgesetz darf dieses Gerät nur von oder auf Antrag von einem Arzt verkauft werden. DESCRIZIONE DEL PRODOTTO ISolateâ è un terreno di gradiente di densità preparato per dividire la frazione mobile di sperma dal fluido seminale. Come sistema gradiente di due strati, il terreno riduce effetivamente i contaminanti cellulari come sperma morti, cellule di sangue bianco e detriti miscellani. Il campione che risulta contiene sperma con preponderanza mobile. ISolate è un suspensione colloidale di particelle di silice stabilizzato con silane hidrofilico legato covalentamente in HTF pulito con HEPES che è filtrato su membrana e preparato in condizioni di sterilità. Il livello di sicurezza di sterilità(SAL) è 10-3. ISolate è analizzato e trovato di non avere pirogeni via il test pirogene di coniglio. ESPAÑOL 5. Centrifugare per 10 – 20 minuti approssimativamente a 200 – 300xg.* Esporre attentamente la tavoletta con il levare degli “STRATI SUPERIORI ED INFERIORI” via aspirazione, o con il allontanamento diretto della tavoletta ed il trasferimento a un tubo centrifugo sterilizzato. DESCRIPCIÓN DEL PRODUCTO El ISolate® es un medio de gradiente de densidades diseñado para separar la fracción móvil de esperma del fluido seminal. Como un sistema de gradiente de dos capas, reduce eficazmente los contaminantes celulares como espermatozoides muertos, leucocitos y otros restos. *Nota: La qualità del campione di sperm dovrebbe essere valutata e dovrebbe essere considerata quando se determina la velocità e tempo di centrifugazione propri. Questi dovrebbero essere aggiustati secondo la qualità del campione individuale per l’ottimizzazione della procedura. El ISolate es una suspensión coloidal de partículas de sílice estabilizada con silano hidrofílico unido covalentemente en HTF tamponado con HEPES, que ha sido filtrada a través de membrana y procesada en condiciones asépticas. El nivel de garantía de esterilidad (SAL) es de 10-3. El ISolate ha sido testado para pirógenos con resultados negativos por el test de pirógenos en conejo. ISTRUZIONI PER L’ USO Catalogo # 99264 – SILICE COLLOIDALE PRONTO PER USO A DUE CONCENTRAZIONI (50% E 90%) A. Materie Suggerite: ISolate • Catalogo di Irvine Scientific # 99264 (arrezzatura/ cassetta di fiala di 6mL, 50mL o arrezzatura di fiala di 100 mL Terreno di Sciaquio di Sperma • Catalogo d’Irvine Scientific #9983 Tubi buttabili conici centrifugi • Catalogo d’Irvine Scientific #IS-325 Pipette Pasteur, sterilizzate Centrifugo Incubatore, 37° C 6. Usando una nuova pipetta sterilizatta, aggiungere da 2.0 a 3.0 mL di sostanza di spruzzetta appropriata come Sostanza di Spruzzetta di Sperma (IS Catalogo #9983) o HTF Modificato (ISCatalogo #9963) con integrazione di proteina . Risospendere la pallina isolata. Centrifugare (~200xg) per 8 -10 minuti e toglie il supernatante. Ripetere questo passo per una seconda spruzzetta. Butare il supernatante ed risospendere la pallina usando un volume conveniente di sostanza appropriata. Il campione è adesso pronto per l’analisi. B. Preparazione Gradiente: Le diluzioni preliminarie non sono necessarie. Ogni fiala di gradiente di strato superiore ed Inferiore è pronto per l’uso. Prosegui a sezione di PROC DURA GENERALE del l’inserzione del prodotto. ISTRUZIONI DI STOCCAGIO E STABILITA Stoccare i contenitori non aperti refrigerati da 2° C a 8° C. Catalogo #99275 – Soluzione di Sostegno (Stock) 90% terreno di gradiente di densità per uso in una procedura di uno stado o per ulteriore diluzione. Non congelare o esporre a temperature alte. A. Materie Suggerite: Soluzione di Sostegno d’ISolate • Catalogo d’Irvine Scientific #99275 Fluido Tubarico Umano Modificato • Catalogo d’Irvine Scientific #90126 Terreno di Sciaquio di Sperma • Catalogo d’Irvine Scientific #9983 Tubi buttabili conici centrifugi • Catalogo d’Irvine Scientific #IS-325 Pipette Pasteur, sterilizzate Centrifugo Incubatore, 37° C B. Preparazione Gradiente: Si richiede due soluzioni per eseguire il metodo di separazione di sperma gradiente: uno strato superiore e uno strato inferiore. 1. Soluzione di Strato Superiore – 50%: a) Mettere SOLUZIONE DI SOSTEGNO(STOCK SOLUTION) –(Catalogo #99275) e una pipetta di 5.6 mL in un tubo centrifugo sterilizzato b) Aggiungere 4.4 mL di Fluido Tubarico Umano Modificato(Catalogo #90126) c) Chiudere il tubo e capovolgere gentilmente per permettere miscuglio completo. d) Classificare il tubo come “STRATO SUPERIORE” 2. Soluzione di Strato Inferiore – 90%: a) Aliquotare 10 mL della SOLUZIONE DI SOSTEGNO(STOCK SOLUTION–Catalogo #99275) in un tubo e coperchio di centrifugo sterilizzato – (No ulteriori diluzioni sono necessari – Soluzione di Sostegno è 90%) b) Classificare il tubo come “STRATO INFERIORE” 3. Prosegui a sezione di PROCEDURA GENERALE dell’inserzione del prodotto. (APPUNTO: 10 mL DI STRATO SUPERIORE E DI S T R ATO I N F E R I O R E T R AT TA N N O APPROSSIMATIVAMENTE 5 CAMPIONI DI SPERMA). Catalogo #99306 – Concentrato Concentrazione di silice colloidale per ulteriore diluzione a gradienti di densità; formulato in un tampone isotonico(isotonic) e approssima la densità di Percollâ. Concentrato d’ISolate fù valutato in accordo con questa inserzione di pachetto gradienti di 50% e 90%. Ogni laboratorio puo scegliere per produrre gradienti a concentrazioni differenti che devono essere evaluati per efficacia. A. Materie Suggerite: Concentrato d’ISolate • Catalogo d’Irvine Scientific #99306 Fluido Tubarico Umano Modificato • Catalogo d’Irvine Scientific #90126 Terreno di Sciaquio di Sperma • Catalogo d’Irvine Scientific #9983 Tubi buttabili conici centrifugi • Catalogo d’Irvine Scientific #IS-325 Pipette Pasteur, sterilizzate Centrifugo Incubatore, 37° C B. Preparazione Gradiente: Si richiede due soluzioni per eseguire il metodo di separazione di sperma gradiente: uno strato superiore e uno strato inferiore. 1. Soluzione di Strato Superiore – 50%: a) Mettere CONCENTRATO (Catalogo # 99306) e pipetta di 4.5 mL in un tubo centrifugo sterilizzato b) Aggiungere 5.5 mL di Fluido Tubarico Umano Modificato(Catalogo #90126) c) Coprire il tubo e capovolgere gentilmente 3 o 4 volte per miscuglio completo. d) Classificare tubo come “STRATO SUPERIORE” 2. Soluzione di Strato Inferiore – 90% a) Mettere CONCENTRATO (Catalogo # 99306) e pipetta di 8.1 mL in un tubocentrifugo sterilizzato b) Aggiungere 1.9 mL di Fluido Tubarico Umano Modificato(Catalogo #90126) c) Coprire il tubo e capovolgere gentilmente 3 o 4 volte per miscuglio completo d) Classificare il tubo come “STRATO INFERIORE” 3. Prosegui a sezione di PROCEDURA GENERALE dell’nserzione del prodotto. APPUNTO: I TERMINI 50% E 90% N O N R A P P R E S E N TA N N O U N A C O N C E N T R A Z I O N E E F F E T I VA . L E 50% E 90% SONO CONCENTRAZIONI RELATIVE BASATE ALLA NOMENCLATURA PRECEDENTE CHE DEFINI(ACCENT) UNA DILUZIONE DI PERCOLLâ DI 1:9 UGUALE A UNA SOLUZIONE OPERANTE, ISOTONICA DI 100%. C O N S I D E R A Z I O N I D I T R AT TA M E N T I SPECIALI Il seguente è una procedura generale per una seperazione gradiente di due strati di sperma mobile(motile sperm) dallo sperma(semen). Il volume e concentrazione possono essere modificati per soddisfare ogni preferenza del laboratorio(per esempio mini-gradiente, sperma criopreservata, gradiente di tre-strati). 1. Alzare tutti i componenti di terreno a temperatura ambientale o 37°C. 2. Utilizzando una pipetta sterilizzata, trasferire 1.5 – 2.0 mL del “STRATO INFERIORE” a un tubo centrifugo, buttabile, conico, sterilizzato. 3. Utilizzando una nuova pipetta sterilizzata, trasferire lo stesso volume di “STRATO SUPERIORE” sopra allo “STRATO INFERIORE”. Questo è fatto via toccare la superficie dello “STRATO INFERIORE” al lato/ fianco del tubo con la punta della pipetta. Dispensi attentamente lo “STRATO SUPERIORE” via girare a spirale la punta della pipetta attorno alla circonferenza del tubo in movimento ascendente come il livello dello “STRATO SUPERIORE” alza. 4. Mettere gentilmente 1.5 – 2.0 mL di sperma liquificata sopra lo “STRATO SUPERIORE” utilizzando una pipetta nuova, sterilizzata. Per ulteriori dettagl sull’uso de queste prodotti, il laboratorio dovrebbe consultare le sue protocolli/tecniche standard che sono statti specificamente fatti ed ottimizzatti per la sua impianto. Riscaldare a temperatura ambientale o temperatura d’incubatore(incubator) – (37° C) prima dell’uso. Quando sono stoccate direttamente, ISolate è stabile fino alla data di scadenza mostrata sulle etichette della bottiglia e della scatola. PRECAUZIONI E AVVERTIMENTI Questo dispositivo è previsto per l’uso da parte di personale addestrato nelle procedure che comprendono le applicazioni indicate per le quali il dispositivo è previsto. ISolate si vede opaco. Questo è normale per questo prodotto. Non usare qualsiasi fiale o terreno che ha evidenza di sostanze particolari o contaminazione (torbidezza non uniforme). ISolate deve essere chiuso strettamente quando è utilizzato in un incubatore CO2 per evitare cambi di pH. Questo prodotto non contiene preservativi, antibiotici, o supplementi di proteina. Per evitare contaminazione, il prodotto deve essere utilizzato con tecniche assetiche. IN CASO DI DANNO, NON USARE. PER FAVORE ELIMINARE O REGRESSALO ALLA MANIFATTURA PER SOSTITUZIONE. CAUTELA: La legge federale (U.S.) se limita questo meccanismo/prodotto a la vendita da o sull’ordine di un medico o dottore. INSTRUCCIONES DE USO Nº de Catálogo 99264 – SÍLICE COLOIDAL LISTA PARA USAR A DOS CONCENTRACIONES (50% y 90%) A. Material sugerido: ISolate • Irvine Scientific, Nº catálogo 99264 (kit de viales de 6mL, 50mL o kit de viales de 100mL) Medio de lavado de esperma • Irvine Scientific, Nº catálogo 9983 Tubos de centrífuga cónicos estériles y desechables • Irvine Scientific, Nº catálogo IS-325 Pipetas Pasteur estériles Centrífuga Incubador a 37ºC B. Preparación del gradiente: No son necesarias diluciones preliminares. Cada vial de capa de gradiente superior e inferior está lista para usar. Continue con la sección “PROCEDIMIENTOS GENERALES” Nº de Catálogo 99275 – SOLUCIÓN STOCK Medio de gradiente de densidades al 90% para ser utilizado en protocolos de un solo paso o para posteriores diluciones. A. Material sugerido: ISolate - Solución Stock • Irvine Scientific, Nº Cat. 99275 Medio HTF modificado • Irvine Scientific, Nº Cat. 90126 Medio de lavado de esperma • Irvine Scientific, Nº Cat. 9983 Tubos de centrífuga cónicos estériles y desechables • Irvine Scientific, Nº Cat. IS-325 Pipetas Pasteur estériles Centrífuga Incubador a 37ºC B. Preparación del gradiente: Para llevar a cabo una separación de esperma por gradiente se necesitan dos soluciones: la capa superiory la capa inferior. 1. Solución de la capa superior: 50% a. Coger la SOLUCIÓN STOCK (Nº Cat. 99275) y pipetear 5,6mL en un tubo de centrífuga estéril. b. Añadir 4,4 mL de HTF modificado (Nº Cat. 90126) c. Tapar el tubo e invertir suavemente 3 o 4 veces para permitir una mezcla completa. d. Etiquetar el tubo como “capa superior”. 2. Solución de la capa inferior: 90% a. Alicuotar 10mL de la SOLUCIÓN STOCK en un tubo estéril de centrífuga y taparlo. (No se necesitan más diluciones. La solución stock está al 90%). b. Etiquetar el tubo como “CAPA INFERIOR”. 3. Continúe en la sección de “PROCEDIMIENTOS GENERALES”. FRANÇAIS Nota: la calidad de la muestra de esperma debe ser evaluada y tomada en consideración para determinar el tiempo y la velocidad adecuados de centrifugación. Estos parámetros deben ajustarse conforme a la calidad individual de la muestra para optimizar el el proceso. * 6. Utilizando una nueva pipeta estéril, añadir 2.0 – 3.0 mL de un medio de lavado adecuado como el Medio de Lavado de Esperma (IS Nº Cat 9983) o HTF modificado (IS Nº Cat 90126) son suplemento proteico. Resuspender el sedimento. Centrifugar (aprox. 200xg) 8-10 minutos y descartar el sobrenadante. Repetir este paso para un segundo lavado. Descartar el sobrenadante y resuspender el sedimento utilizando un volumen adecuado de medio. La muestra está lista para el análisis. Para más detalles sobre la utilización de estos productos, consulte los protocolos de trabajo de su propio laboratorio, los cuales han sido desarrollados y especialmente optimizados de acuerdo a su programa médico particular. INSTRUCCIONES DE ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD Conserve las botellas no abiertas refrigeradas entre 2ºC y 8ºC. Atempere a temperatura ambiente o en un incubador (37ºC) antes de su uso. No congele ni exponga a temperaturas elevadas. El ISolate es estable hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta de la botella y de la caja, siempre que se conserve de acuerdo a las instrucciones recomendadas. PRECAUCIONES Y ADVERTENCIAS Este dispositivo debe ser utilizado por personal capacitado en procedimientos que incluyan la aplicación prevista para el mismo. El ISolate tiene un aspecto opaco. Esto es normal en este producto. No utilice ningún vial de medio con evidencias de contener partículas o contaminación (turbidez no homogénea). Los viales de ISolate deben estar herméticamente cerrados cuando se usen en un incubador de CO2 para evitar cambios de pH. Este medio no contiene conservantes, ni antibióticos ni suplementos proteicos. Para evitar contaminaciones, manipule el producto en condiciones de esterilidad. En caso de alteración del medio, no lo utilice. Por favor, descártelo o devuélvalo al fabricante para que lo reemplace. PRECAUCIÓN: Las leyes federales (U.S.) restringen la venta de este producto a la prescripción de un facultativo. Description du produit ISolate® est un gradient de densité conçu pour séparer la fraction des spermatozoïdes mobiles du plasma séminale. Système gradient à deux couches, il réduit efficacement les contaminations cellulaires telles que les spermatozoïdes morts, les globules blancs et les débris divers. Il en résulte une fraction de sperme contenant essentiellement les spermatozoïdes mobiles. ISolate, stérilisé par filtration, est une suspension colloïdale de particules de silice stabilisés par une liaison covalente au silane hydrophile, dans du milieu HTF tamponné au HEPES. Le niveau de stérilité de la solution est de 10-3 (Sterility Assurance Level). ISolate a été trouvé non-pyrogène par le “rabbit pyrogen test”. Conseils d’utilisation Référence 99264, Gradient de densité à deux concentrations 50% et 90%, prêt à l’utilisation A. Matériel suggéré : ISolate • % Irvine Scientific, référence 99264 (kit de 6 ml, 50mL ou de 100ml) Milieu de lavage du sperme • % Irvine Scientific, référence 9983 Tubes coniques pour centrifugeuse, jetables, stériles • % Irvine Scientific, référence IS-325 Pipettes Pasteur, stériles Centrifugeuse Etuve, 37°C B. Préparation du gradient : Pas de dilution préalable nécessaire. Chaque flacon de gradient supérieur et inférieur est prêt à l’utilisation. Aller à la section “Procédure générale” de cette notice. Référence 99275, Solution mère Milieu de gradient de densité à 90%, à utiliser dans le protocole à une étape ou pour des dilutions ultérieures. A. Matériel suggéré : ISolate, solution mère • % Irvine Scientific, référence 99275 Fluide tubulaire humain modifié • % Irvine Scientific, référence 90126 Milieu de lavage du sperme • % Irvine Scientific, référence 9983 Tubes coniques pour centrifugeuse, jetables, stériles • % Irvine Scientific, référence IS-325 Pipettes Pasteur, stériles Centrifugeuse Etuve, 37°C B. Préparation du gradient : Deux solutions sont requises pour réaliser la séparation des spermatozoïdes par la méthode de gradient de densité : une couche supérieure et une couche inférieure. 1. Solution pour la couche supérieure – 50% a. Prélever dans un tube conique stérile 5,6 ml de la solution mère (réf. 99275), b. Ajouter 4,4 ml de fluide tubulaire humain modifié (réf. 90126) c. Bouchonner le tube et le retourner 3-4 fois pour permettre un mélange complet d. Marquer ce tube “couche supérieure” 2. Solution pour la couche inférieure – 90% a. Prélever dans un tube conique stérile 10 ml de la solution mère (réf. 99275) (pas de dilution nécessaire, la solution mère est à 90%) b. Marquer ce tube “couche inférieure” 3. Aller à la section “Procédure générale” de cette notice (Remarque : 10 ml de couche supérieure et 10 ml de couche inférieure permettront de traiter approximativement 5 prélèvements de sperme) Nº de Catálogo 99306 – CONCENTRADO Concentrado de sílice coloidal para posteriores diluciones en gradientes de densidad; formulado en un tampón isotónico, se aproxima a la densidad del Percoll sin diluir. El ISolate Concentrado ha sido evaluado en gradientes del 50% y 90% de acuerdo a este Información de producto. Cada laboratorio puede elegir preparar los gradientes a concentraciones diferentes, previa comprobación de su efectividad. Référence 99306, Concentré Suspension colloïdale de silice concentrée à diluer pour former des gradients de densité ; formulé comme un tampon isotonique dont la densité est approximativement la même que celle du Percoll® non dilué. Le concentré ISolate® a été évalué pour cette notice par des gradients de 50% et 90%. Chaque laboratoire pourrait choisir de faire des gradients de différentes concentrations. l’efficacité de ces derniers doit être évaluée. A. Material sugerido: ISolate - Concentrado • Irvine Scientific, Nº Cat. 99306 Medio HTF modificado • Irvine Scientific, Nº Cat. 90126 Medio de lavado de esperma • Irvine Scientific, Nº Cat. 9983 Tubos de centrífuga cónicos estériles y desechables • Irvine Scientific, Nº Cat. IS-325 Pipetas Pasteur estériles Centrífuga Incubador a 37ºC A. Matériel suggéré : ISolate, Concentré • % Irvine Scientific, référence 99306 Fluide tubulaire humain modifié • % Irvine Scientific, référence 90126 Milieu de lavage du sperme • % Irvine Scientific, référence 9983 Tubes coniques pour centrifugeuse, jetables, stériles • % Irvine Scientific, référence IS-325 Pipettes Pasteur, stériles Centrifugeuse Etuve, 37°C B. Preparación del gradiente: Para llevar a cabo una separación de esperma por gradi ente se necesitan dos soluciones: la capa superior y la capa inferior. 1. Solución de la capa superior: 50% a. Coger el CONCENTRADO (Nº Cat. 99306) y pipetear 4,5 mL en un tubo de centrífuga estéril. b. Añadir 5,5 mL de HTF modificado (Nº Cat. 90126) c. Tapar el tubo e invertir suavemente 3 o 4 veces para permitir una mezcla completa. d. Etiquetar el tubo como “CAPA SUPERIOR”. 2. Solución de la capa inferior: 90% a. Coger el CONCENTRADO (Nº Cat. 99306) y pipetear 8,1 mL en un tubo de centrífuga estéril. b. Añadir 1,9 mL de HTF modificado (Nº Cat. 90126) c. Tapar el tubo e invertir suavemente 3 o 4 veces para permitir una mezcla completa. d. Etiquetar el tubo como “CAPA INFERIOR”. 3. Continúe en la sección de “PROCEDIMIENTOS GENERALES”. B. Préparation du gradient : Deux solutions sont requises pour réaliser la séparation des spermatozoïdes par la méthode de gradient de densité : une couche supérieure et une couche inférieure. 1. Solution pour la couche supérieure – 50% a. Prélever dans un tube conique stérile 4,5 ml de la solution CONCENTRE (réf. 99306) b. Ajouter 5,5 ml de fluide tubulaire humain modifié (réf. 90126) c. Bouchonner le tube et le retourner 3-4 fois pour permettre un mélange complet d. Marquer ce tube “couche supérieure” 2. Solution pour la couche inférieure – 90% a. Prélever dans un tube conique stérile 8,1 ml de la solution CONCENTRE (réf. 99306) b. Ajouter 1,9 ml de fluide tubulaire humain modifié (réf. 90126) c. Bouchonner le tube et le retourner 3-4 fois pour permettre un mélange complet d. Marquer ce tube “couche inférieure” 3. Aller à la section “Procédure générale” de cette notice Nota: Los términos 50% y 90% no equivalen a una co centración real. El 50 % y el 90% son concentraciones relativas basadas en una nomenclatura anterior que definía una solución 1:9 de Percoll® como una solución de trabajo isotónica al 100%. PROCEDIMIENTOS GENERALES El protocolo que aquí se describe es un procedimiento general para separar del semen la fracción móvil de esperma a través de un gradiente. El volumen y la concentración se pueden modificar para adecuarse a las preferencias de cada laboratorio (p.ej. mini-gradiente, semen criopreservado, gradiente de 3 capas). 1. Atemperar todos los medios a temperatura ambiente o a 37ºC. 2. Utilizando una pipeta estéril, transferir 1,5 – 2,0 mL de medio de la “CAPA INFERIOR” a un tubo de centrífuga cónico, estéril y desechable. 3. Utilizando otra pipeta estéril, transferir un volumen igual al del paso 1 de la “CAPA SUPERIOR” a la parte superior de la “CAPA INFERIOR”. Para ello, colocar con la punta de la pipeta en la parte superior de la capa tocando la pared del tubo. Dispensar con mucho cuidado la “CAPA SUPERIOR” moviendo la pipeta en círculos alrededor de la circunferencia del tubo subiendo a medida que se aumenta la “CAPA INFERIOR”. 4. Coloque suavemente 1,5 – 2,0 mL de semen licuado sobre la “CAPA SUPERIOR” con otra pipeta estéril. 5. Centrifugar durante 10-20 minutos a 200-300 x g*. Con mucho cuidado, aspirar y desechar las capas inferior y superior o bien. Remarque : les termes 50% et 90% ne représentent pas des concentrations réelles. Les 50% et 90% sont des concentrations relatives basées sur la précédente nomenclature qui a défini la dilution 1:9 du Percoll® comme étant égale à 100% de solution isotonique. Procédure générale Ce qui suit est une méthode générale de séparation par gradient de densité des spermatozoïdes mobiles du plasma séminale. Les volumes et les concentrations peuvent être modifiés pour répondre aux préférences de chaque laboratoire (ex. Mini gradient, sperme congelé, gradient à trois couches). 1. Amener tous les milieux à température ambiante ou les préchauffer à 37°C. 2. A l’aide d’une pipette stérile, transférer 1,5 – 2,0 ml de la ‘couche inférieure’ dans un tube conique pour centrifugeuse, jetable, stérile. 3. A l’aide d’une nouvelle pipette stérile, transférer un volume équivalent (1,5 – 2,0 ml) de la ‘couche supérieure’ et la déposer au-dessus de la ‘couche inférieure’. Ceci est réalisé en touchant la surface de la ‘couche inférieure’ par le bout de la pipette. Répartir soigneusement la ‘couche supérieure’ en tournant la pipette autour de la paroi du tube dans un mouvement ascendant à mesure que la ‘couche supérieure’ monte. 4. Soigneusement placer 1,5 – 2,0 ml de sperme liquéfié sur la ‘couche supérieure’ en utilisant une nouvelle pipette stérile. 5. Centrifuger à 200-300xg* pendant 10-20 minutes *Remarque: la qualité du prélèvement du sperme doit être évaluée et prise en considération lors de la détermination de la durée et de la vitesse de centrifugation appropriées. Pour une optimisation de la procédure, ces dernières doivent être ajustées selon la qualité de chaque prélèvement. 6. A l’aide d’une nouvelle pipette stérile, ajouter 2,0 –3,0 ml d’un milieu de lavage adéquat comme le milieu de lavage du sperme (IS réf. 9983) ou le milieu HTF modifié (IS réf. 90126) supplémenté en protéines. Resuspendre le culot de centrifugation. Centrifuger (~200xg) pendant 8-10 minutes et aspirer le surnageant. Répéter cette étape (deuxième lavage). Aspirer le surnageant et resuspendre le culot dans le volume désiré d’un milieu adéquat. Le prélèvement est maintenant prêt à l’analyse. Pour plus de détails sur l’utilisation de ce produit, chaque laboratoire doit consulter ses propres procédures et protocoles standards spécialement développés et optimisés pour chaque établissement médical particulier. C onsignes de conservation et stabilité Conserver les flacons non entamés réfrigérés entre 2 et 8°C. Amener à température ambiante ou préchauffer à 37°C (dans une étuve) avant utilisation. Ne pas congeler ou exposer à des températures élevées. Conservé comme indiqué ci-dessus, ISolate est stable jusqu’à la date d’expiration indiquée sur la boite et les étiquettes des flacons. Précautions et mise en garde Ce dispositif est destiné à une utilisation par un personnel formé aux procédures comprenant l’application indiquée pour laquelle le dispositif est destiné. ISolate apparaîtra opaque. Ceci est normal pour ce produit. N’utiliser aucun flacon de milieu s’il contient des particules ou s’il est contaminé (non uniformément trouble). Lors de l’incubation de ISolate dans une étuve à CO2, les flacons doivent être bien fermés pour éviter les changements de pH. Ce produit ne contient ni conservateurs, ni antibiotiques, ni supplément protéiques. Pour éviter les contaminations, il doit être manipulé stérilement. ATTENTION : La loi fédérale limite la vente de ce dispositif aux médecins ou sur ordre d’un médecin. ENGLISH ® ISolate Catalog No. 99264 12 x 6 mL, 2 x 50 mL, 2 x 100 mL Ready to Use Density Gradient Medium at Two Concentrations Catalog No. 99275 Stock Solution 100 mL Catalog No. 99306 Concentrate 100 mL REFERENCES Adaniya GK, Jackson KV: Comparison of Percoll® and ISolate® in the Preparation of Semen for use in Assisted Reproductive Technologies. 53rd Annual Meeting of the American Society for Reproductive Medicine, Cincinnati, Ohio; 0-113, 1997. Symbols: Catalog Number Lot Number Tarchala SM, Fahy MM, Hauserman HM, Kallmann K, Volentine K, Radwanska E, Binor Z, Molo MW, Rawlins RG: ISolate® As a New Method of Sperm Separation. 53rd Annual Meeting of the American Society for Reproductive Medicine, Cincinnati, Ohio; P-116, 1998. Miller, KF, Fry KL, Arciaga RL, Falcone T: Semen preparation for in-vitro fertilization using ISolate® results in sperm recovery, fertilization and pregnancy outcomes that are indistinguishable from those obtained with Percoll®. 14th Embryology, Goteborg, Sweden; P-116, 1998. Tarchala SM, Volentine KK, Rawlins RG: A comparison of sperm processing using ISolate® and Pure Sperm™. 14th Annual Meeting of the European Society of Human Reproduction and Embryology, Goteborg, Sweden; R-041, 1998. Sterilized using aseptic processing techniques (filtration) Expiration: Year - Month - Day Caution:See instructions for use European Representative MPIE Schutweg 13A 5145 NP Waalwijk, The Netherlands See instructions for use. Storage Temperature CE Mark 0050 0050 ISolate is a Registered Trademark of Irvine Scientific ® Percoll ® is a Registered Trademark of Pharmacia Biotech, AB Sweden MPIE Schutweg 13a 5145 NP Waalwijk, The Netherlands PRODUCT DESCRIPTION ISolate® is a density gradient medium designed to separate the motile fraction of sperm from seminal fluid. As a two layer gradient system, it effectively reduces cellular contaminants such as dead sperm, white blood cells and miscellaneous debris. The resulting sample contains predominantly motile sperm. ISolate is a membrane filtered, aseptically processed colloidal suspension of silica particles stabilized with covalently bound hydrophilic silane in HEPES-buffered HTF. The sterility assurance level (SAL) is 10-3. ISolate is tested and found negative for pyrogens by rabbit pyrogen test. DIRECTIONS FOR USE Catalog #99264 - READY TO USE COLLOIDAL SILICA AT TWO CONCENTRATIONS (50% and 90%) A. Materials Suggested: ISolate • Irvine Scientific Catalog #99264 (6mL , 50 mL or 100mL vial kit) Sperm Washing Medium • Irvine Scientific Catalog #9983 Sterile, disposable conical centrifuge tubes • Irvine Scientific Catalog #IS-325 Pasteur Pipettes, sterile Centrifuge Incubator, 37°C B. Gradient Preparation: No preliminary dilutions are necessary. Each vial of upper and lower layer gradient is ready for use. Continue to GENERAL PROCEDURE section of product insert. For additional details on the use of these products, each laboratory should consult its own laboratory procedures and protocols which have been specifically developed and optimized for your individual medical program. STORAGE INSTRUCTIONS AND STABILITY Store the unopened containers refrigerated at 2º to 8ºC. Warm to ambient or incubator (37°C) temperature prior to use. Do not freeze or expose to high temperatures. ISolate is stable until the expiration date shown on the box and bottle labels when stored as directed. PRECAUTIONS AND WARNINGS This device is intended to be used by staff trained in assisted reproductive procedures that include the indicated application for which the device is intended. ISolate will appear opaque. This is normal for this product. Do not use any vial of medium which shows evidence of particulate matter or contamination (nonuniform cloudiness). Catalog #99275 - STOCK SOLUTION 90% density gradient medium for use in a one-step procedure or for further dilution. ISolate should be tightly capped when used in a CO2 incubator to avoid pH changes. A.Materials Suggested: ISolate Stock Solution • Irvine Scientific Catalog #99275 Modified Human Tubal Fluid • Irvine Scientific Catalog #90126 Sperm Washing Medium • Irvine Scientific Catalog #9983 Sterile, disposable conical centrifuge tubes • Irvine Scientific Catalog #IS-325 Pasteur Pipettes, sterile Centrifuge Incubator, 37°C This product contains no preservatives, antibiotics, or protein supplements. To avoid problems with contamination, handle using aseptic techniques. B. Gradient Preparation: Two solutions are required to perform the gradient sperm separation method: An upper layer and a lower layer. 1. Upper Layer solution - 50%: a) Take STOCK SOLUTION (Catalog #99275) and pipette 5.6 mL into a sterile centrifuge tube b Add 4.4 mL of Modified Human Tubal Fluid (Catalog #90126) c) Cap tube and invert gently 3-4 times to allow for complete mixing d) Label tube as “UPPER LAYER” 2. Lower Layer solution - 90%: a) Aliquot 10 mL of the STOCK SOLUTION into a sterile centrifuge tube and cap - (No further dilutions necessary - Stock Solution is 90%) b) Label tube as “LOWER LAYER” 3. Continue to GENERAL PROCEDURE section of product insert. (NOTE: 10 mL Upper Layer and 10 mL Lower Layer will process approximately 5 semen samples.) Catalog #99306 - CONCENTRATE Colloidal silica concentrate for further dilution into density gradients; formulated in an isotonic buffer and approximates the density of undiluted Percoll®. ISolate® CONCENTRATE was evaluated according to this package insert at 50% and 90% gradients. Each laboratory may choose to make gradients at different concentrations which should be evaluated for effectiveness. A. Materials Suggested: ISolate® Concentrate • Irvine Scientific Catalog #99306 Modified Human Tubal Fluid • Irvine Scientific Catalog #90126 Sperm Washing Medium • Irvine Scientific Catalog #9983 Sterile, disposable conical centrifuge tubes • Irvine Scientific Catalog #IS-325 Pasteur Pipettes, sterile Centrifuge Incubator, 37°C B. Gradient Preparation: Two solutions are required to perform the gradient sperm separation method: An upper layer and a lower layer. 1.) Upper Layer solution - 50%: a) Take CONCENTRATE (Catalog #99306) and pipette 4.5 mL into a sterile centrifuge tube b) Add 5.5 mL of Modified Human Tubal Fluid (Catalog #90126) c) Cap tube and invert gently 3-4 times to allow for complete mixing d) Label tube as “UPPER LAYER” 2. Lower Layer solution - 90%: a) Take CONCENTRATE (Catalog #99306) and pipette 8.1 mL into a sterile centrifuge tube b) Add 1.9 mL of Modified Human Tubal Fluid (Catalog #90126) c) Cap tube and invert gently 3-4 times to allow for complete mixing d) Label tube as “LOWER LAYER” 3. Continue to GENERAL PROCEDURE section of product insert. Note: The terms 50% and 90% do not represent an actual concentration. The 50% and 90% are relative concentrations based on the previous nomenclature that defined a 1:9 dilution of Percoll® as equal to a 100% working, isotonic solution. GENERAL PROCEDURE The following is a general procedure for a two-step gradient separation of motile sperm from semen. The volume and concentration can be modified to meet each laboratory’s preference (i.e. mini-gradient, cryopreserved semen, three-layer gradient). 1. Bring all media components to room temperature or 37°C. 2. Using a sterile pipette, transfer 1.5 - 2.0 mL of the “LOWER LAYER” into a sterile, disposable, conical centrifuge tube. 3. Using a new sterile pipette, transfer an equal volume of “UPPER LAYER” on top of the “LOWER LAYER”. This is done by contacting the surface of the “LOWER LAYER” at the side of the tube with the tip of the pipette. Carefully dispense the “UPPER LAYER” by spiraling the pipette tip around the circumference of the tube in an upward motion as the level of the “UPPER LAYER” rises. 4. Gently place 1.5 - 2.0 mL of liquefied semen onto the “UPPER LAYER” using a new sterile pipette. 5. Centrifuge for 10-20 minutes at approximately 200 300xg.* Carefully expose the pellet by either aspirating off the “UPPER” and “LOWER LAYERS”, or directly removing the pellet and transferring to a new sterile centrifuge tube. Note: The quality of the sperm sample should be evaluated and taken into consideration when determining the proper centrifugation speed and time. These should be adjusted according to the individual specimen quality for optimization of the procedure. 2511 Daimler Street, Santa Ana, California 92705-5588 Telephone: 1 949 261 7800 • 1 800 437 5706 Fax: 1 949 261 6522 • www.irvinesci.com PN 40558 Rev.10 DEUTSCH 6. Using a new sterile pipette, add 2.0 - 3.0 mL of appropriate washing medium such as Sperm Washing Medium (IS Catalog #9983) or Modified HTF (IS Catalog #90126) with protein supplementation. Resuspend the isolated pellet. Centrifuge (~200xg) for 8 -10 minutes and remove the supernatant. Repeat this step for a second wash. Discard the supernatant and resuspend the pellet using a suitable volume of appropriate medium. The sample is now ready for analysis. In case of damage, do not use. Please discard or return to Manufacturer for replacement. Caution: Federal (U.S.) law restricts this device to sale by or on the order of a physician. Produktbeschreibung ISolate ® ist ein Dichtegradientsmedium [oder Konzentrationgradientsmedium], das fuer das Trennen des freibeweglichen Spermafraktion von der Samenfluessigkeit bestimmt ist. Als ein Gradientssystem mit zwei Schichten verringert es effektiv die zellulaeren Kontaminationsstoffe wie das tote Sperma, die weissen Blutkoerperchen, und andere Rückstaende. Die ergebende Probe enthält überwiegendes freibewegliches Sperma. ISolate ist Membran gefiltert, es ist eine Kolloidsuspension von Kieselpartikel, die aseptisch verarbeitet ist, und stabilisiert mit dem kovalentgebundenen hydrophilen Silan im HEPES-buffered [gepuffertem] HTF. Das Sterilitaetversicherungsniveau [sterility assurance level (SAL)] ist 10 -3 . ISolate wurde durch die Kaninchenpyrogenprobe getestet und wurde negativ von Pyrogen gefunden. GEBRAUCHSANLEITUNG Katalog Nr. 99264 - BETRIEBSFERTIGE KOLLOIDAL SILICA BEI ZWEI KONZENTRATIONEN (50% UND 90%) A. Vorgeschlagene Materialien: ISolate® • Irvine Scientific Katalog Nr. 99264 (6mL, 50mL oder 100mL Phiolesatz) Sperm Washing Medium [Spermaspuelungsmedium] • Irvine Scientific Katalog Nr. 9983 Sterile wegwerfbare konische Zentrifugegläser • Irvine Scientific Katalog Nr. IS-325 Pasteurpipetten, Steriler Zentrifugebrutkasten, 37°C B. Gradientvorbereitung: Keine vorbereitende Verdünnungen sind notwendig Jede Phiole der Oberschichtsgradient und Unterschic tsgradient ist zum Gebrauch bereit. Setzen Sie zum ALLGEMEINEN VERFAHREN Abschnitt des Produ teinsatzes fort. Katalog Nr. 99275 - verdichtete Lösung 90% Density Gradient Medium ist für den Gebrauch in einem Einschrittverfahren oder für weitere Verdünnung. A. Vorgeschlagene Materialen ISolate Stock Solution • Irvine Scientific Katalog Nr. 99275 Modified Human Tubal Fluid • Irvine Scientific Katalog Nr. 90126 Sperm Washing Medium [Spermaspülungsmedium] • Irvine Scientific Katalog #9983 Sterile, wegwerfbare konische Zentrifugegläser • Irvine Scientific Katalog #IS-325 Pasteurpipetten, Steriler Zentrifugebrutkasten, 37°C B. Gradientvorbereitung: Zwei Lösungen werden benoetigt, um die Trennung methode des Spermagradients durchzuführen: Eine Oberschicht und eine Unterschicht 1. Upper Layer solution - 50% [Oberschichtlösung – 50%]: a. Nehmen Sie die STOCK SOLUTION (Katalog Nr. 99275) und pipettieren Sie 5,6 mL in einem sterilen Zentrifugeglas b. Fuegen Sie 4,4 mL Modified Human Tubal Fluid (Katalog Nr. 90126) c. Verschliessen Sie das Zentrifugeglas und kehren Sie es behutsam 3 bis 4 mal um, um eine komplette Mischung zuzulassen. d. Etikettieren Sie das Zentrifugeglas als “OBERSCHICHTt”. 2. Lower Layer solution- 90% [Unterschichtloesung-90%]: a. Aliquotieren Sie 10 mL Stock Solution in einem sterilen Zentrifugeglas und verschliessen Sie es (keine weitere Verduennungen werden benoetigt – Stock Solution ist 90%). b. Etikettieren Sie das Zentrifugeglas als “UNTERSCHICHT” 3. Setzen Sie zum ALLGEMEINEN VERFAHREN Abschnitt des Produkteinsatzes fort. (ANMERKUNG: 10 mL Oberschicht und 10 mL Unterschicht werden ungefaehr 5 Samenproben verarbeiten) Katalog Nr. 99306 – KONZENTRAT Kolloid-Kieselerdekonzentrat ist für weitere Verdünnung zu brauchbare Konzentrationen der Dichtegradienten bestimmt; formuliert in einem isotonischen Puffer und naehert die Dichte von unverdünntem Percoll® an. ISolate KONZENTRAT wurde entsprechend diesem Paketeinsatz bei 50% und 90% Gradient ausgewertet. Jedes Labor kann beschliessen, die Gradienten bei unterschiedlichen Konzentrationen zu bilden, die für die Wirksamkeit ausgewertet werden sollten. A. Vorgeschlagene Materialien ISolate Concentrate • Irvine Scientific Katalog Nr. 99306 Modified Human Tubal Fluid • Irvine Scientific Katalog Nr. 90126 Sperm Washing Medium • Irvine Scientific Katalog Nr. 9983 Steriles, wegwerfbares konisches Zentrifugeglaeser • Irvine Scientific Katalog Nr. IS-325 Pasteurpipetten, Steriler Zentrifugebrutkasten, 37°C B. Gradientvorbereitung: Zwei Lösungen werden benoetigt, um die Trennung methode des Spermagradients durchzuführen: Eine Oberschicht und eine Unterschicht. 1. Oberschichtloesung – 50% a. Nehmen Sie das CONCENTRATE (Katalog Nr. 99306) und pipettieren Sie 4,5 mL in einem sterilen Zentrifugeglas. b. Fuegen Sie 5,5 mL Modified Human Tubal Fluid (Katalog Nr. 90126) hinzu. c. Verschliessen Sie das Zentrifugeglas und kehren Sie sorgfaeltig 3 bis 4 mal um, um eine komplette Mischung zuzulassen. d. Etikettieren Sie das Zentrifugeglas als “OBERSCHICHT”. 2. Unterschichtloesung – 90% a. Nehmen Sie CONCENTRATE (Katalog Nr. 99306) und pipettieren Sie 8,1 mL in einem sterilen Zentrifugeglas b. Fuegen Sie 1,9 mL Modified Human Tubal Fluid (Katalog Nr. 90126) hinzu. c. Verschliessen Sie das Zentrifugeglas und kehren Sie sorgfaeltig 3 bis 4 mal um, um eine komplette Mischung zuzulassen d. Etikettieren Sie das Zentrifugeglas als “UNTERSCHICHT”. 3. Setzen Sie zum ALLGEMEINEN VERFAHREN Abschnitt des Paketeinsatz fort. Anmerkung: Die Bezeichnungen 50% und 90% bedeuten nicht eine tatsächliche Konzentration. Die 50% und die 90% sind die relativen Konzentrationen, die auf der vorherigen Namenklatur basieren. Das bedeuted, dass eine 1:9 Verdünnung von Percoll® is gleichwertig zu einer Funktion 100% der isotonische Loesung ALLGEMEINES VERFAHREN Das folgende ist ein allgemeines Verfahren für eine zweistufige Gradientstrennung des freibeweglichen Sperma vom Samen. Das Volumen und die Konzentration koennen geändert werden, um jedes Labors’ Präferenz zu entsprechen (d.h. Mini-Steigung [oder Mini-Gradient], kaeltekonservierter Samen, Dreischichtsgradient). 1. Die Temperatur von alle Mediumbestandteile sollte bei der Raumtemperatur oder 37°C sein. 2. Mit einer sterilen Pipette uebertragen Sie 1,5 mL bis 2,0 mL der UNTERSCHICHT auf ein steriles konisches Wegwerfzentrifugeglas. 3. Mit einer sterilen Pipette uebertragen Sie ein gleiches Volumen von OBERSCHICHT auf die UNTERSCHICHT. Das wird getan, indem man die Oberflaeche der UNTERSCHICHT mit der Pipettenspitze an der Seite des Zentrifugeglas in Beruehrung kommt. Verteilen Sie sorgfaeltig die “OBERSCHICHT” mit der Pipettenspitze um den Umkreis des Zentrifugeglases in einer aufwaerts Bewegung als das Niveau der OBERSCHICHT steigt. ITALIANO 4. Mit einer neuen sterilen Pipette, fuegen Sie sorgfaeltig 1,5 – 2,0 mL verfluessigter Samen auf die OBERSCHICHT hinzu. 5. Zentrifugierien Sie ungefaehr 200 – 300xg fuer 10 bis 20 Minuten.* Stellen Sie sorgfaeltig die Tablette heraus, entweder indem Sie weg von der “OBERSCHICHT” und von der “UNTERSCHICHT” ansaugen, oder entfernen Sie direkt die Tablette und uebertragen Sie auf ein neues steriles Zentrifugeglas *Anmerkung: Die Qualität der Spermaprobe sollte ausgewertet und in Erwaegung gezogen werden, um die korrekte Zentrifugierungsgeschwindigkeit und Zeit festzustellen. Diese sollten entsprechend der einzelnen Probestückqualität für Optimierung des Verfahrens justiert werden. 6. Mit einer neuen sterilen Pipette, fügen Sie 2,0 - 3,0 mL des passenden Spuelungsmediums wie das Sperm Washing Medium (Irvine Scientific Katalog # 9983) oder Modified HTF (Irvine Scientific Katalog # 90126), mit Proteinergänzung hinzu. Resuspendieren Sie die isolierte Tablette. Zentrifugieren Sie (~200xg) fuer 8 bis 10 Minuten und entfernen Sie den Supernatant. Wiederholen Sie diese Massnahme für eine zweite Spuelung. Werfen Sie den Supernatant weg und resuspendieren Sie die Tablette mit einer ensprechenden Volumen des passenden Medium. Die Probe ist jetzt zur Analyse bereit. Fuer weitere Einzelheiten zum Gebrauch diesen Produkten soll das Labor in seinen eigenen Protokollen nachschlagen, die für die spezifische medizinische Einstellung spezifisch entwickelt und optimiert worden sind. LAGERBEDINGUNGEN UND STABILITAET Bewahren Sie die ungeoeffneten Flaschen bei 2º to 8ºC auf. Wärmen Sie das Medium zur umgebenden oder der Temperatur des Brutkastens (37°C) vor Gebrauch. Frieren Sie es nicht oder stellen Sie es nicht in den hohen Temperaturen heraus. ISolate ist bis zum Verfallsdatum beständig, das auf die Schachtel und Flaschenetikett gezeigt wird. Bewahren Sie das Medium wie angewiesen auf. VORSICHTSMASSNAHMEN UND WARNUNGEN Diese Vorrichtung ist für die Anwendung durch Personal vorgesehen, das in Verfahren ausgebildet wurde, welche die für diese Vorrichtung angegebene zugelassene Anwendung beinhalten. ISolate wird undurchlässig aussehen. Das ist normal fuer dieses Produkt. Benutzen Sie keine Phiole des Mediums, wenn es Beweis der Feststoffe oder Kontamination (uneinheitliche Truebung) gibt. ISolate sollte fest mit einer Kappe bedeckt werden, wenn es in einem CO2 Brutkasten verwendet wird, um die pHVeränderungen zu vermeiden. Dieses Produkt enthält keine Konservierungsmittel, Antibiotika oder Proteinergänzungen. Um die Verschmutzung zu vermeiden, muss das Produkt mit aseptischer Methode benutzt werden. Im Schadensfalle, verwenden Sie das Medium nicht. Bitte werfen Sie es weg oder senden Sie zum Hersteller fuer Austausch zurück. ORSICHT: Nach US-Bundesgesetz darf dieses Gerät nur von oder auf Antrag von einem Arzt verkauft werden. DESCRIZIONE DEL PRODOTTO ISolateâ è un terreno di gradiente di densità preparato per dividire la frazione mobile di sperma dal fluido seminale. Come sistema gradiente di due strati, il terreno riduce effetivamente i contaminanti cellulari come sperma morti, cellule di sangue bianco e detriti miscellani. Il campione che risulta contiene sperma con preponderanza mobile. ISolate è un suspensione colloidale di particelle di silice stabilizzato con silane hidrofilico legato covalentamente in HTF pulito con HEPES che è filtrato su membrana e preparato in condizioni di sterilità. Il livello di sicurezza di sterilità(SAL) è 10-3. ISolate è analizzato e trovato di non avere pirogeni via il test pirogene di coniglio. ESPAÑOL 5. Centrifugare per 10 – 20 minuti approssimativamente a 200 – 300xg.* Esporre attentamente la tavoletta con il levare degli “STRATI SUPERIORI ED INFERIORI” via aspirazione, o con il allontanamento diretto della tavoletta ed il trasferimento a un tubo centrifugo sterilizzato. DESCRIPCIÓN DEL PRODUCTO El ISolate® es un medio de gradiente de densidades diseñado para separar la fracción móvil de esperma del fluido seminal. Como un sistema de gradiente de dos capas, reduce eficazmente los contaminantes celulares como espermatozoides muertos, leucocitos y otros restos. *Nota: La qualità del campione di sperm dovrebbe essere valutata e dovrebbe essere considerata quando se determina la velocità e tempo di centrifugazione propri. Questi dovrebbero essere aggiustati secondo la qualità del campione individuale per l’ottimizzazione della procedura. El ISolate es una suspensión coloidal de partículas de sílice estabilizada con silano hidrofílico unido covalentemente en HTF tamponado con HEPES, que ha sido filtrada a través de membrana y procesada en condiciones asépticas. El nivel de garantía de esterilidad (SAL) es de 10-3. El ISolate ha sido testado para pirógenos con resultados negativos por el test de pirógenos en conejo. ISTRUZIONI PER L’ USO Catalogo # 99264 – SILICE COLLOIDALE PRONTO PER USO A DUE CONCENTRAZIONI (50% E 90%) A. Materie Suggerite: ISolate • Catalogo di Irvine Scientific # 99264 (arrezzatura/ cassetta di fiala di 6mL, 50mL o arrezzatura di fiala di 100 mL Terreno di Sciaquio di Sperma • Catalogo d’Irvine Scientific #9983 Tubi buttabili conici centrifugi • Catalogo d’Irvine Scientific #IS-325 Pipette Pasteur, sterilizzate Centrifugo Incubatore, 37° C 6. Usando una nuova pipetta sterilizatta, aggiungere da 2.0 a 3.0 mL di sostanza di spruzzetta appropriata come Sostanza di Spruzzetta di Sperma (IS Catalogo #9983) o HTF Modificato (ISCatalogo #9963) con integrazione di proteina . Risospendere la pallina isolata. Centrifugare (~200xg) per 8 -10 minuti e toglie il supernatante. Ripetere questo passo per una seconda spruzzetta. Butare il supernatante ed risospendere la pallina usando un volume conveniente di sostanza appropriata. Il campione è adesso pronto per l’analisi. B. Preparazione Gradiente: Le diluzioni preliminarie non sono necessarie. Ogni fiala di gradiente di strato superiore ed Inferiore è pronto per l’uso. Prosegui a sezione di PROC DURA GENERALE del l’inserzione del prodotto. ISTRUZIONI DI STOCCAGIO E STABILITA Stoccare i contenitori non aperti refrigerati da 2° C a 8° C. Catalogo #99275 – Soluzione di Sostegno (Stock) 90% terreno di gradiente di densità per uso in una procedura di uno stado o per ulteriore diluzione. Non congelare o esporre a temperature alte. A. Materie Suggerite: Soluzione di Sostegno d’ISolate • Catalogo d’Irvine Scientific #99275 Fluido Tubarico Umano Modificato • Catalogo d’Irvine Scientific #90126 Terreno di Sciaquio di Sperma • Catalogo d’Irvine Scientific #9983 Tubi buttabili conici centrifugi • Catalogo d’Irvine Scientific #IS-325 Pipette Pasteur, sterilizzate Centrifugo Incubatore, 37° C B. Preparazione Gradiente: Si richiede due soluzioni per eseguire il metodo di separazione di sperma gradiente: uno strato superiore e uno strato inferiore. 1. Soluzione di Strato Superiore – 50%: a) Mettere SOLUZIONE DI SOSTEGNO(STOCK SOLUTION) –(Catalogo #99275) e una pipetta di 5.6 mL in un tubo centrifugo sterilizzato b) Aggiungere 4.4 mL di Fluido Tubarico Umano Modificato(Catalogo #90126) c) Chiudere il tubo e capovolgere gentilmente per permettere miscuglio completo. d) Classificare il tubo come “STRATO SUPERIORE” 2. Soluzione di Strato Inferiore – 90%: a) Aliquotare 10 mL della SOLUZIONE DI SOSTEGNO(STOCK SOLUTION–Catalogo #99275) in un tubo e coperchio di centrifugo sterilizzato – (No ulteriori diluzioni sono necessari – Soluzione di Sostegno è 90%) b) Classificare il tubo come “STRATO INFERIORE” 3. Prosegui a sezione di PROCEDURA GENERALE dell’inserzione del prodotto. (APPUNTO: 10 mL DI STRATO SUPERIORE E DI S T R ATO I N F E R I O R E T R AT TA N N O APPROSSIMATIVAMENTE 5 CAMPIONI DI SPERMA). Catalogo #99306 – Concentrato Concentrazione di silice colloidale per ulteriore diluzione a gradienti di densità; formulato in un tampone isotonico(isotonic) e approssima la densità di Percollâ. Concentrato d’ISolate fù valutato in accordo con questa inserzione di pachetto gradienti di 50% e 90%. Ogni laboratorio puo scegliere per produrre gradienti a concentrazioni differenti che devono essere evaluati per efficacia. A. Materie Suggerite: Concentrato d’ISolate • Catalogo d’Irvine Scientific #99306 Fluido Tubarico Umano Modificato • Catalogo d’Irvine Scientific #90126 Terreno di Sciaquio di Sperma • Catalogo d’Irvine Scientific #9983 Tubi buttabili conici centrifugi • Catalogo d’Irvine Scientific #IS-325 Pipette Pasteur, sterilizzate Centrifugo Incubatore, 37° C B. Preparazione Gradiente: Si richiede due soluzioni per eseguire il metodo di separazione di sperma gradiente: uno strato superiore e uno strato inferiore. 1. Soluzione di Strato Superiore – 50%: a) Mettere CONCENTRATO (Catalogo # 99306) e pipetta di 4.5 mL in un tubo centrifugo sterilizzato b) Aggiungere 5.5 mL di Fluido Tubarico Umano Modificato(Catalogo #90126) c) Coprire il tubo e capovolgere gentilmente 3 o 4 volte per miscuglio completo. d) Classificare tubo come “STRATO SUPERIORE” 2. Soluzione di Strato Inferiore – 90% a) Mettere CONCENTRATO (Catalogo # 99306) e pipetta di 8.1 mL in un tubocentrifugo sterilizzato b) Aggiungere 1.9 mL di Fluido Tubarico Umano Modificato(Catalogo #90126) c) Coprire il tubo e capovolgere gentilmente 3 o 4 volte per miscuglio completo d) Classificare il tubo come “STRATO INFERIORE” 3. Prosegui a sezione di PROCEDURA GENERALE dell’nserzione del prodotto. APPUNTO: I TERMINI 50% E 90% N O N R A P P R E S E N TA N N O U N A C O N C E N T R A Z I O N E E F F E T I VA . L E 50% E 90% SONO CONCENTRAZIONI RELATIVE BASATE ALLA NOMENCLATURA PRECEDENTE CHE DEFINI(ACCENT) UNA DILUZIONE DI PERCOLLâ DI 1:9 UGUALE A UNA SOLUZIONE OPERANTE, ISOTONICA DI 100%. C O N S I D E R A Z I O N I D I T R AT TA M E N T I SPECIALI Il seguente è una procedura generale per una seperazione gradiente di due strati di sperma mobile(motile sperm) dallo sperma(semen). Il volume e concentrazione possono essere modificati per soddisfare ogni preferenza del laboratorio(per esempio mini-gradiente, sperma criopreservata, gradiente di tre-strati). 1. Alzare tutti i componenti di terreno a temperatura ambientale o 37°C. 2. Utilizzando una pipetta sterilizzata, trasferire 1.5 – 2.0 mL del “STRATO INFERIORE” a un tubo centrifugo, buttabile, conico, sterilizzato. 3. Utilizzando una nuova pipetta sterilizzata, trasferire lo stesso volume di “STRATO SUPERIORE” sopra allo “STRATO INFERIORE”. Questo è fatto via toccare la superficie dello “STRATO INFERIORE” al lato/ fianco del tubo con la punta della pipetta. Dispensi attentamente lo “STRATO SUPERIORE” via girare a spirale la punta della pipetta attorno alla circonferenza del tubo in movimento ascendente come il livello dello “STRATO SUPERIORE” alza. 4. Mettere gentilmente 1.5 – 2.0 mL di sperma liquificata sopra lo “STRATO SUPERIORE” utilizzando una pipetta nuova, sterilizzata. Per ulteriori dettagl sull’uso de queste prodotti, il laboratorio dovrebbe consultare le sue protocolli/tecniche standard che sono statti specificamente fatti ed ottimizzatti per la sua impianto. Riscaldare a temperatura ambientale o temperatura d’incubatore(incubator) – (37° C) prima dell’uso. Quando sono stoccate direttamente, ISolate è stabile fino alla data di scadenza mostrata sulle etichette della bottiglia e della scatola. PRECAUZIONI E AVVERTIMENTI Questo dispositivo è previsto per l’uso da parte di personale addestrato nelle procedure che comprendono le applicazioni indicate per le quali il dispositivo è previsto. ISolate si vede opaco. Questo è normale per questo prodotto. Non usare qualsiasi fiale o terreno che ha evidenza di sostanze particolari o contaminazione (torbidezza non uniforme). ISolate deve essere chiuso strettamente quando è utilizzato in un incubatore CO2 per evitare cambi di pH. Questo prodotto non contiene preservativi, antibiotici, o supplementi di proteina. Per evitare contaminazione, il prodotto deve essere utilizzato con tecniche assetiche. IN CASO DI DANNO, NON USARE. PER FAVORE ELIMINARE O REGRESSALO ALLA MANIFATTURA PER SOSTITUZIONE. CAUTELA: La legge federale (U.S.) se limita questo meccanismo/prodotto a la vendita da o sull’ordine di un medico o dottore. INSTRUCCIONES DE USO Nº de Catálogo 99264 – SÍLICE COLOIDAL LISTA PARA USAR A DOS CONCENTRACIONES (50% y 90%) A. Material sugerido: ISolate • Irvine Scientific, Nº catálogo 99264 (kit de viales de 6mL, 50mL o kit de viales de 100mL) Medio de lavado de esperma • Irvine Scientific, Nº catálogo 9983 Tubos de centrífuga cónicos estériles y desechables • Irvine Scientific, Nº catálogo IS-325 Pipetas Pasteur estériles Centrífuga Incubador a 37ºC B. Preparación del gradiente: No son necesarias diluciones preliminares. Cada vial de capa de gradiente superior e inferior está lista para usar. Continue con la sección “PROCEDIMIENTOS GENERALES” Nº de Catálogo 99275 – SOLUCIÓN STOCK Medio de gradiente de densidades al 90% para ser utilizado en protocolos de un solo paso o para posteriores diluciones. A. Material sugerido: ISolate - Solución Stock • Irvine Scientific, Nº Cat. 99275 Medio HTF modificado • Irvine Scientific, Nº Cat. 90126 Medio de lavado de esperma • Irvine Scientific, Nº Cat. 9983 Tubos de centrífuga cónicos estériles y desechables • Irvine Scientific, Nº Cat. IS-325 Pipetas Pasteur estériles Centrífuga Incubador a 37ºC B. Preparación del gradiente: Para llevar a cabo una separación de esperma por gradiente se necesitan dos soluciones: la capa superiory la capa inferior. 1. Solución de la capa superior: 50% a. Coger la SOLUCIÓN STOCK (Nº Cat. 99275) y pipetear 5,6mL en un tubo de centrífuga estéril. b. Añadir 4,4 mL de HTF modificado (Nº Cat. 90126) c. Tapar el tubo e invertir suavemente 3 o 4 veces para permitir una mezcla completa. d. Etiquetar el tubo como “capa superior”. 2. Solución de la capa inferior: 90% a. Alicuotar 10mL de la SOLUCIÓN STOCK en un tubo estéril de centrífuga y taparlo. (No se necesitan más diluciones. La solución stock está al 90%). b. Etiquetar el tubo como “CAPA INFERIOR”. 3. Continúe en la sección de “PROCEDIMIENTOS GENERALES”. FRANÇAIS Nota: la calidad de la muestra de esperma debe ser evaluada y tomada en consideración para determinar el tiempo y la velocidad adecuados de centrifugación. Estos parámetros deben ajustarse conforme a la calidad individual de la muestra para optimizar el el proceso. * 6. Utilizando una nueva pipeta estéril, añadir 2.0 – 3.0 mL de un medio de lavado adecuado como el Medio de Lavado de Esperma (IS Nº Cat 9983) o HTF modificado (IS Nº Cat 90126) son suplemento proteico. Resuspender el sedimento. Centrifugar (aprox. 200xg) 8-10 minutos y descartar el sobrenadante. Repetir este paso para un segundo lavado. Descartar el sobrenadante y resuspender el sedimento utilizando un volumen adecuado de medio. La muestra está lista para el análisis. Para más detalles sobre la utilización de estos productos, consulte los protocolos de trabajo de su propio laboratorio, los cuales han sido desarrollados y especialmente optimizados de acuerdo a su programa médico particular. INSTRUCCIONES DE ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD Conserve las botellas no abiertas refrigeradas entre 2ºC y 8ºC. Atempere a temperatura ambiente o en un incubador (37ºC) antes de su uso. No congele ni exponga a temperaturas elevadas. El ISolate es estable hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta de la botella y de la caja, siempre que se conserve de acuerdo a las instrucciones recomendadas. PRECAUCIONES Y ADVERTENCIAS Este dispositivo debe ser utilizado por personal capacitado en procedimientos que incluyan la aplicación prevista para el mismo. El ISolate tiene un aspecto opaco. Esto es normal en este producto. No utilice ningún vial de medio con evidencias de contener partículas o contaminación (turbidez no homogénea). Los viales de ISolate deben estar herméticamente cerrados cuando se usen en un incubador de CO2 para evitar cambios de pH. Este medio no contiene conservantes, ni antibióticos ni suplementos proteicos. Para evitar contaminaciones, manipule el producto en condiciones de esterilidad. En caso de alteración del medio, no lo utilice. Por favor, descártelo o devuélvalo al fabricante para que lo reemplace. PRECAUCIÓN: Las leyes federales (U.S.) restringen la venta de este producto a la prescripción de un facultativo. Description du produit ISolate® est un gradient de densité conçu pour séparer la fraction des spermatozoïdes mobiles du plasma séminale. Système gradient à deux couches, il réduit efficacement les contaminations cellulaires telles que les spermatozoïdes morts, les globules blancs et les débris divers. Il en résulte une fraction de sperme contenant essentiellement les spermatozoïdes mobiles. ISolate, stérilisé par filtration, est une suspension colloïdale de particules de silice stabilisés par une liaison covalente au silane hydrophile, dans du milieu HTF tamponné au HEPES. Le niveau de stérilité de la solution est de 10-3 (Sterility Assurance Level). ISolate a été trouvé non-pyrogène par le “rabbit pyrogen test”. Conseils d’utilisation Référence 99264, Gradient de densité à deux concentrations 50% et 90%, prêt à l’utilisation A. Matériel suggéré : ISolate • % Irvine Scientific, référence 99264 (kit de 6 ml, 50mL ou de 100ml) Milieu de lavage du sperme • % Irvine Scientific, référence 9983 Tubes coniques pour centrifugeuse, jetables, stériles • % Irvine Scientific, référence IS-325 Pipettes Pasteur, stériles Centrifugeuse Etuve, 37°C B. Préparation du gradient : Pas de dilution préalable nécessaire. Chaque flacon de gradient supérieur et inférieur est prêt à l’utilisation. Aller à la section “Procédure générale” de cette notice. Référence 99275, Solution mère Milieu de gradient de densité à 90%, à utiliser dans le protocole à une étape ou pour des dilutions ultérieures. A. Matériel suggéré : ISolate, solution mère • % Irvine Scientific, référence 99275 Fluide tubulaire humain modifié • % Irvine Scientific, référence 90126 Milieu de lavage du sperme • % Irvine Scientific, référence 9983 Tubes coniques pour centrifugeuse, jetables, stériles • % Irvine Scientific, référence IS-325 Pipettes Pasteur, stériles Centrifugeuse Etuve, 37°C B. Préparation du gradient : Deux solutions sont requises pour réaliser la séparation des spermatozoïdes par la méthode de gradient de densité : une couche supérieure et une couche inférieure. 1. Solution pour la couche supérieure – 50% a. Prélever dans un tube conique stérile 5,6 ml de la solution mère (réf. 99275), b. Ajouter 4,4 ml de fluide tubulaire humain modifié (réf. 90126) c. Bouchonner le tube et le retourner 3-4 fois pour permettre un mélange complet d. Marquer ce tube “couche supérieure” 2. Solution pour la couche inférieure – 90% a. Prélever dans un tube conique stérile 10 ml de la solution mère (réf. 99275) (pas de dilution nécessaire, la solution mère est à 90%) b. Marquer ce tube “couche inférieure” 3. Aller à la section “Procédure générale” de cette notice (Remarque : 10 ml de couche supérieure et 10 ml de couche inférieure permettront de traiter approximativement 5 prélèvements de sperme) Nº de Catálogo 99306 – CONCENTRADO Concentrado de sílice coloidal para posteriores diluciones en gradientes de densidad; formulado en un tampón isotónico, se aproxima a la densidad del Percoll sin diluir. El ISolate Concentrado ha sido evaluado en gradientes del 50% y 90% de acuerdo a este Información de producto. Cada laboratorio puede elegir preparar los gradientes a concentraciones diferentes, previa comprobación de su efectividad. Référence 99306, Concentré Suspension colloïdale de silice concentrée à diluer pour former des gradients de densité ; formulé comme un tampon isotonique dont la densité est approximativement la même que celle du Percoll® non dilué. Le concentré ISolate® a été évalué pour cette notice par des gradients de 50% et 90%. Chaque laboratoire pourrait choisir de faire des gradients de différentes concentrations. l’efficacité de ces derniers doit être évaluée. A. Material sugerido: ISolate - Concentrado • Irvine Scientific, Nº Cat. 99306 Medio HTF modificado • Irvine Scientific, Nº Cat. 90126 Medio de lavado de esperma • Irvine Scientific, Nº Cat. 9983 Tubos de centrífuga cónicos estériles y desechables • Irvine Scientific, Nº Cat. IS-325 Pipetas Pasteur estériles Centrífuga Incubador a 37ºC A. Matériel suggéré : ISolate, Concentré • % Irvine Scientific, référence 99306 Fluide tubulaire humain modifié • % Irvine Scientific, référence 90126 Milieu de lavage du sperme • % Irvine Scientific, référence 9983 Tubes coniques pour centrifugeuse, jetables, stériles • % Irvine Scientific, référence IS-325 Pipettes Pasteur, stériles Centrifugeuse Etuve, 37°C B. Preparación del gradiente: Para llevar a cabo una separación de esperma por gradi ente se necesitan dos soluciones: la capa superior y la capa inferior. 1. Solución de la capa superior: 50% a. Coger el CONCENTRADO (Nº Cat. 99306) y pipetear 4,5 mL en un tubo de centrífuga estéril. b. Añadir 5,5 mL de HTF modificado (Nº Cat. 90126) c. Tapar el tubo e invertir suavemente 3 o 4 veces para permitir una mezcla completa. d. Etiquetar el tubo como “CAPA SUPERIOR”. 2. Solución de la capa inferior: 90% a. Coger el CONCENTRADO (Nº Cat. 99306) y pipetear 8,1 mL en un tubo de centrífuga estéril. b. Añadir 1,9 mL de HTF modificado (Nº Cat. 90126) c. Tapar el tubo e invertir suavemente 3 o 4 veces para permitir una mezcla completa. d. Etiquetar el tubo como “CAPA INFERIOR”. 3. Continúe en la sección de “PROCEDIMIENTOS GENERALES”. B. Préparation du gradient : Deux solutions sont requises pour réaliser la séparation des spermatozoïdes par la méthode de gradient de densité : une couche supérieure et une couche inférieure. 1. Solution pour la couche supérieure – 50% a. Prélever dans un tube conique stérile 4,5 ml de la solution CONCENTRE (réf. 99306) b. Ajouter 5,5 ml de fluide tubulaire humain modifié (réf. 90126) c. Bouchonner le tube et le retourner 3-4 fois pour permettre un mélange complet d. Marquer ce tube “couche supérieure” 2. Solution pour la couche inférieure – 90% a. Prélever dans un tube conique stérile 8,1 ml de la solution CONCENTRE (réf. 99306) b. Ajouter 1,9 ml de fluide tubulaire humain modifié (réf. 90126) c. Bouchonner le tube et le retourner 3-4 fois pour permettre un mélange complet d. Marquer ce tube “couche inférieure” 3. Aller à la section “Procédure générale” de cette notice Nota: Los términos 50% y 90% no equivalen a una co centración real. El 50 % y el 90% son concentraciones relativas basadas en una nomenclatura anterior que definía una solución 1:9 de Percoll® como una solución de trabajo isotónica al 100%. PROCEDIMIENTOS GENERALES El protocolo que aquí se describe es un procedimiento general para separar del semen la fracción móvil de esperma a través de un gradiente. El volumen y la concentración se pueden modificar para adecuarse a las preferencias de cada laboratorio (p.ej. mini-gradiente, semen criopreservado, gradiente de 3 capas). 1. Atemperar todos los medios a temperatura ambiente o a 37ºC. 2. Utilizando una pipeta estéril, transferir 1,5 – 2,0 mL de medio de la “CAPA INFERIOR” a un tubo de centrífuga cónico, estéril y desechable. 3. Utilizando otra pipeta estéril, transferir un volumen igual al del paso 1 de la “CAPA SUPERIOR” a la parte superior de la “CAPA INFERIOR”. Para ello, colocar con la punta de la pipeta en la parte superior de la capa tocando la pared del tubo. Dispensar con mucho cuidado la “CAPA SUPERIOR” moviendo la pipeta en círculos alrededor de la circunferencia del tubo subiendo a medida que se aumenta la “CAPA INFERIOR”. 4. Coloque suavemente 1,5 – 2,0 mL de semen licuado sobre la “CAPA SUPERIOR” con otra pipeta estéril. 5. Centrifugar durante 10-20 minutos a 200-300 x g*. Con mucho cuidado, aspirar y desechar las capas inferior y superior o bien. Remarque : les termes 50% et 90% ne représentent pas des concentrations réelles. Les 50% et 90% sont des concentrations relatives basées sur la précédente nomenclature qui a défini la dilution 1:9 du Percoll® comme étant égale à 100% de solution isotonique. Procédure générale Ce qui suit est une méthode générale de séparation par gradient de densité des spermatozoïdes mobiles du plasma séminale. Les volumes et les concentrations peuvent être modifiés pour répondre aux préférences de chaque laboratoire (ex. Mini gradient, sperme congelé, gradient à trois couches). 1. Amener tous les milieux à température ambiante ou les préchauffer à 37°C. 2. A l’aide d’une pipette stérile, transférer 1,5 – 2,0 ml de la ‘couche inférieure’ dans un tube conique pour centrifugeuse, jetable, stérile. 3. A l’aide d’une nouvelle pipette stérile, transférer un volume équivalent (1,5 – 2,0 ml) de la ‘couche supérieure’ et la déposer au-dessus de la ‘couche inférieure’. Ceci est réalisé en touchant la surface de la ‘couche inférieure’ par le bout de la pipette. Répartir soigneusement la ‘couche supérieure’ en tournant la pipette autour de la paroi du tube dans un mouvement ascendant à mesure que la ‘couche supérieure’ monte. 4. Soigneusement placer 1,5 – 2,0 ml de sperme liquéfié sur la ‘couche supérieure’ en utilisant une nouvelle pipette stérile. 5. Centrifuger à 200-300xg* pendant 10-20 minutes *Remarque: la qualité du prélèvement du sperme doit être évaluée et prise en considération lors de la détermination de la durée et de la vitesse de centrifugation appropriées. Pour une optimisation de la procédure, ces dernières doivent être ajustées selon la qualité de chaque prélèvement. 6. A l’aide d’une nouvelle pipette stérile, ajouter 2,0 –3,0 ml d’un milieu de lavage adéquat comme le milieu de lavage du sperme (IS réf. 9983) ou le milieu HTF modifié (IS réf. 90126) supplémenté en protéines. Resuspendre le culot de centrifugation. Centrifuger (~200xg) pendant 8-10 minutes et aspirer le surnageant. Répéter cette étape (deuxième lavage). Aspirer le surnageant et resuspendre le culot dans le volume désiré d’un milieu adéquat. Le prélèvement est maintenant prêt à l’analyse. Pour plus de détails sur l’utilisation de ce produit, chaque laboratoire doit consulter ses propres procédures et protocoles standards spécialement développés et optimisés pour chaque établissement médical particulier. C onsignes de conservation et stabilité Conserver les flacons non entamés réfrigérés entre 2 et 8°C. Amener à température ambiante ou préchauffer à 37°C (dans une étuve) avant utilisation. Ne pas congeler ou exposer à des températures élevées. Conservé comme indiqué ci-dessus, ISolate est stable jusqu’à la date d’expiration indiquée sur la boite et les étiquettes des flacons. Précautions et mise en garde Ce dispositif est destiné à une utilisation par un personnel formé aux procédures comprenant l’application indiquée pour laquelle le dispositif est destiné. ISolate apparaîtra opaque. Ceci est normal pour ce produit. N’utiliser aucun flacon de milieu s’il contient des particules ou s’il est contaminé (non uniformément trouble). Lors de l’incubation de ISolate dans une étuve à CO2, les flacons doivent être bien fermés pour éviter les changements de pH. Ce produit ne contient ni conservateurs, ni antibiotiques, ni supplément protéiques. Pour éviter les contaminations, il doit être manipulé stérilement. ATTENTION : La loi fédérale limite la vente de ce dispositif aux médecins ou sur ordre d’un médecin. ENGLISH ® ISolate Catalog No. 99264 12 x 6 mL, 2 x 50 mL, 2 x 100 mL Ready to Use Density Gradient Medium at Two Concentrations Catalog No. 99275 Stock Solution 100 mL Catalog No. 99306 Concentrate 100 mL REFERENCES Adaniya GK, Jackson KV: Comparison of Percoll® and ISolate® in the Preparation of Semen for use in Assisted Reproductive Technologies. 53rd Annual Meeting of the American Society for Reproductive Medicine, Cincinnati, Ohio; 0-113, 1997. Symbols: Catalog Number Lot Number Tarchala SM, Fahy MM, Hauserman HM, Kallmann K, Volentine K, Radwanska E, Binor Z, Molo MW, Rawlins RG: ISolate® As a New Method of Sperm Separation. 53rd Annual Meeting of the American Society for Reproductive Medicine, Cincinnati, Ohio; P-116, 1998. Miller, KF, Fry KL, Arciaga RL, Falcone T: Semen preparation for in-vitro fertilization using ISolate® results in sperm recovery, fertilization and pregnancy outcomes that are indistinguishable from those obtained with Percoll®. 14th Embryology, Goteborg, Sweden; P-116, 1998. Tarchala SM, Volentine KK, Rawlins RG: A comparison of sperm processing using ISolate® and Pure Sperm™. 14th Annual Meeting of the European Society of Human Reproduction and Embryology, Goteborg, Sweden; R-041, 1998. Sterilized using aseptic processing techniques (filtration) Expiration: Year - Month - Day Caution:See instructions for use European Representative MPIE Schutweg 13A 5145 NP Waalwijk, The Netherlands See instructions for use. Storage Temperature CE Mark 0050 0050 ISolate is a Registered Trademark of Irvine Scientific ® Percoll ® is a Registered Trademark of Pharmacia Biotech, AB Sweden MPIE Schutweg 13a 5145 NP Waalwijk, The Netherlands PRODUCT DESCRIPTION ISolate® is a density gradient medium designed to separate the motile fraction of sperm from seminal fluid. As a two layer gradient system, it effectively reduces cellular contaminants such as dead sperm, white blood cells and miscellaneous debris. The resulting sample contains predominantly motile sperm. ISolate is a membrane filtered, aseptically processed colloidal suspension of silica particles stabilized with covalently bound hydrophilic silane in HEPES-buffered HTF. The sterility assurance level (SAL) is 10-3. ISolate is tested and found negative for pyrogens by rabbit pyrogen test. DIRECTIONS FOR USE Catalog #99264 - READY TO USE COLLOIDAL SILICA AT TWO CONCENTRATIONS (50% and 90%) A. Materials Suggested: ISolate • Irvine Scientific Catalog #99264 (6mL , 50 mL or 100mL vial kit) Sperm Washing Medium • Irvine Scientific Catalog #9983 Sterile, disposable conical centrifuge tubes • Irvine Scientific Catalog #IS-325 Pasteur Pipettes, sterile Centrifuge Incubator, 37°C B. Gradient Preparation: No preliminary dilutions are necessary. Each vial of upper and lower layer gradient is ready for use. Continue to GENERAL PROCEDURE section of product insert. For additional details on the use of these products, each laboratory should consult its own laboratory procedures and protocols which have been specifically developed and optimized for your individual medical program. STORAGE INSTRUCTIONS AND STABILITY Store the unopened containers refrigerated at 2º to 8ºC. Warm to ambient or incubator (37°C) temperature prior to use. Do not freeze or expose to high temperatures. ISolate is stable until the expiration date shown on the box and bottle labels when stored as directed. PRECAUTIONS AND WARNINGS This device is intended to be used by staff trained in assisted reproductive procedures that include the indicated application for which the device is intended. ISolate will appear opaque. This is normal for this product. Do not use any vial of medium which shows evidence of particulate matter or contamination (nonuniform cloudiness). Catalog #99275 - STOCK SOLUTION 90% density gradient medium for use in a one-step procedure or for further dilution. ISolate should be tightly capped when used in a CO2 incubator to avoid pH changes. A.Materials Suggested: ISolate Stock Solution • Irvine Scientific Catalog #99275 Modified Human Tubal Fluid • Irvine Scientific Catalog #90126 Sperm Washing Medium • Irvine Scientific Catalog #9983 Sterile, disposable conical centrifuge tubes • Irvine Scientific Catalog #IS-325 Pasteur Pipettes, sterile Centrifuge Incubator, 37°C This product contains no preservatives, antibiotics, or protein supplements. To avoid problems with contamination, handle using aseptic techniques. B. Gradient Preparation: Two solutions are required to perform the gradient sperm separation method: An upper layer and a lower layer. 1. Upper Layer solution - 50%: a) Take STOCK SOLUTION (Catalog #99275) and pipette 5.6 mL into a sterile centrifuge tube b Add 4.4 mL of Modified Human Tubal Fluid (Catalog #90126) c) Cap tube and invert gently 3-4 times to allow for complete mixing d) Label tube as “UPPER LAYER” 2. Lower Layer solution - 90%: a) Aliquot 10 mL of the STOCK SOLUTION into a sterile centrifuge tube and cap - (No further dilutions necessary - Stock Solution is 90%) b) Label tube as “LOWER LAYER” 3. Continue to GENERAL PROCEDURE section of product insert. (NOTE: 10 mL Upper Layer and 10 mL Lower Layer will process approximately 5 semen samples.) Catalog #99306 - CONCENTRATE Colloidal silica concentrate for further dilution into density gradients; formulated in an isotonic buffer and approximates the density of undiluted Percoll®. ISolate® CONCENTRATE was evaluated according to this package insert at 50% and 90% gradients. Each laboratory may choose to make gradients at different concentrations which should be evaluated for effectiveness. A. Materials Suggested: ISolate® Concentrate • Irvine Scientific Catalog #99306 Modified Human Tubal Fluid • Irvine Scientific Catalog #90126 Sperm Washing Medium • Irvine Scientific Catalog #9983 Sterile, disposable conical centrifuge tubes • Irvine Scientific Catalog #IS-325 Pasteur Pipettes, sterile Centrifuge Incubator, 37°C B. Gradient Preparation: Two solutions are required to perform the gradient sperm separation method: An upper layer and a lower layer. 1.) Upper Layer solution - 50%: a) Take CONCENTRATE (Catalog #99306) and pipette 4.5 mL into a sterile centrifuge tube b) Add 5.5 mL of Modified Human Tubal Fluid (Catalog #90126) c) Cap tube and invert gently 3-4 times to allow for complete mixing d) Label tube as “UPPER LAYER” 2. Lower Layer solution - 90%: a) Take CONCENTRATE (Catalog #99306) and pipette 8.1 mL into a sterile centrifuge tube b) Add 1.9 mL of Modified Human Tubal Fluid (Catalog #90126) c) Cap tube and invert gently 3-4 times to allow for complete mixing d) Label tube as “LOWER LAYER” 3. Continue to GENERAL PROCEDURE section of product insert. Note: The terms 50% and 90% do not represent an actual concentration. The 50% and 90% are relative concentrations based on the previous nomenclature that defined a 1:9 dilution of Percoll® as equal to a 100% working, isotonic solution. GENERAL PROCEDURE The following is a general procedure for a two-step gradient separation of motile sperm from semen. The volume and concentration can be modified to meet each laboratory’s preference (i.e. mini-gradient, cryopreserved semen, three-layer gradient). 1. Bring all media components to room temperature or 37°C. 2. Using a sterile pipette, transfer 1.5 - 2.0 mL of the “LOWER LAYER” into a sterile, disposable, conical centrifuge tube. 3. Using a new sterile pipette, transfer an equal volume of “UPPER LAYER” on top of the “LOWER LAYER”. This is done by contacting the surface of the “LOWER LAYER” at the side of the tube with the tip of the pipette. Carefully dispense the “UPPER LAYER” by spiraling the pipette tip around the circumference of the tube in an upward motion as the level of the “UPPER LAYER” rises. 4. Gently place 1.5 - 2.0 mL of liquefied semen onto the “UPPER LAYER” using a new sterile pipette. 5. Centrifuge for 10-20 minutes at approximately 200 300xg.* Carefully expose the pellet by either aspirating off the “UPPER” and “LOWER LAYERS”, or directly removing the pellet and transferring to a new sterile centrifuge tube. Note: The quality of the sperm sample should be evaluated and taken into consideration when determining the proper centrifugation speed and time. These should be adjusted according to the individual specimen quality for optimization of the procedure. 2511 Daimler Street, Santa Ana, California 92705-5588 Telephone: 1 949 261 7800 • 1 800 437 5706 Fax: 1 949 261 6522 • www.irvinesci.com PN 40558 Rev.10 DEUTSCH 6. Using a new sterile pipette, add 2.0 - 3.0 mL of appropriate washing medium such as Sperm Washing Medium (IS Catalog #9983) or Modified HTF (IS Catalog #90126) with protein supplementation. Resuspend the isolated pellet. Centrifuge (~200xg) for 8 -10 minutes and remove the supernatant. Repeat this step for a second wash. Discard the supernatant and resuspend the pellet using a suitable volume of appropriate medium. The sample is now ready for analysis. In case of damage, do not use. Please discard or return to Manufacturer for replacement. Caution: Federal (U.S.) law restricts this device to sale by or on the order of a physician. Produktbeschreibung ISolate ® ist ein Dichtegradientsmedium [oder Konzentrationgradientsmedium], das fuer das Trennen des freibeweglichen Spermafraktion von der Samenfluessigkeit bestimmt ist. Als ein Gradientssystem mit zwei Schichten verringert es effektiv die zellulaeren Kontaminationsstoffe wie das tote Sperma, die weissen Blutkoerperchen, und andere Rückstaende. Die ergebende Probe enthält überwiegendes freibewegliches Sperma. ISolate ist Membran gefiltert, es ist eine Kolloidsuspension von Kieselpartikel, die aseptisch verarbeitet ist, und stabilisiert mit dem kovalentgebundenen hydrophilen Silan im HEPES-buffered [gepuffertem] HTF. Das Sterilitaetversicherungsniveau [sterility assurance level (SAL)] ist 10 -3 . ISolate wurde durch die Kaninchenpyrogenprobe getestet und wurde negativ von Pyrogen gefunden. GEBRAUCHSANLEITUNG Katalog Nr. 99264 - BETRIEBSFERTIGE KOLLOIDAL SILICA BEI ZWEI KONZENTRATIONEN (50% UND 90%) A. Vorgeschlagene Materialien: ISolate® • Irvine Scientific Katalog Nr. 99264 (6mL, 50mL oder 100mL Phiolesatz) Sperm Washing Medium [Spermaspuelungsmedium] • Irvine Scientific Katalog Nr. 9983 Sterile wegwerfbare konische Zentrifugegläser • Irvine Scientific Katalog Nr. IS-325 Pasteurpipetten, Steriler Zentrifugebrutkasten, 37°C B. Gradientvorbereitung: Keine vorbereitende Verdünnungen sind notwendig Jede Phiole der Oberschichtsgradient und Unterschic tsgradient ist zum Gebrauch bereit. Setzen Sie zum ALLGEMEINEN VERFAHREN Abschnitt des Produ teinsatzes fort. Katalog Nr. 99275 - verdichtete Lösung 90% Density Gradient Medium ist für den Gebrauch in einem Einschrittverfahren oder für weitere Verdünnung. A. Vorgeschlagene Materialen ISolate Stock Solution • Irvine Scientific Katalog Nr. 99275 Modified Human Tubal Fluid • Irvine Scientific Katalog Nr. 90126 Sperm Washing Medium [Spermaspülungsmedium] • Irvine Scientific Katalog #9983 Sterile, wegwerfbare konische Zentrifugegläser • Irvine Scientific Katalog #IS-325 Pasteurpipetten, Steriler Zentrifugebrutkasten, 37°C B. Gradientvorbereitung: Zwei Lösungen werden benoetigt, um die Trennung methode des Spermagradients durchzuführen: Eine Oberschicht und eine Unterschicht 1. Upper Layer solution - 50% [Oberschichtlösung – 50%]: a. Nehmen Sie die STOCK SOLUTION (Katalog Nr. 99275) und pipettieren Sie 5,6 mL in einem sterilen Zentrifugeglas b. Fuegen Sie 4,4 mL Modified Human Tubal Fluid (Katalog Nr. 90126) c. Verschliessen Sie das Zentrifugeglas und kehren Sie es behutsam 3 bis 4 mal um, um eine komplette Mischung zuzulassen. d. Etikettieren Sie das Zentrifugeglas als “OBERSCHICHTt”. 2. Lower Layer solution- 90% [Unterschichtloesung-90%]: a. Aliquotieren Sie 10 mL Stock Solution in einem sterilen Zentrifugeglas und verschliessen Sie es (keine weitere Verduennungen werden benoetigt – Stock Solution ist 90%). b. Etikettieren Sie das Zentrifugeglas als “UNTERSCHICHT” 3. Setzen Sie zum ALLGEMEINEN VERFAHREN Abschnitt des Produkteinsatzes fort. (ANMERKUNG: 10 mL Oberschicht und 10 mL Unterschicht werden ungefaehr 5 Samenproben verarbeiten) Katalog Nr. 99306 – KONZENTRAT Kolloid-Kieselerdekonzentrat ist für weitere Verdünnung zu brauchbare Konzentrationen der Dichtegradienten bestimmt; formuliert in einem isotonischen Puffer und naehert die Dichte von unverdünntem Percoll® an. ISolate KONZENTRAT wurde entsprechend diesem Paketeinsatz bei 50% und 90% Gradient ausgewertet. Jedes Labor kann beschliessen, die Gradienten bei unterschiedlichen Konzentrationen zu bilden, die für die Wirksamkeit ausgewertet werden sollten. A. Vorgeschlagene Materialien ISolate Concentrate • Irvine Scientific Katalog Nr. 99306 Modified Human Tubal Fluid • Irvine Scientific Katalog Nr. 90126 Sperm Washing Medium • Irvine Scientific Katalog Nr. 9983 Steriles, wegwerfbares konisches Zentrifugeglaeser • Irvine Scientific Katalog Nr. IS-325 Pasteurpipetten, Steriler Zentrifugebrutkasten, 37°C B. Gradientvorbereitung: Zwei Lösungen werden benoetigt, um die Trennung methode des Spermagradients durchzuführen: Eine Oberschicht und eine Unterschicht. 1. Oberschichtloesung – 50% a. Nehmen Sie das CONCENTRATE (Katalog Nr. 99306) und pipettieren Sie 4,5 mL in einem sterilen Zentrifugeglas. b. Fuegen Sie 5,5 mL Modified Human Tubal Fluid (Katalog Nr. 90126) hinzu. c. Verschliessen Sie das Zentrifugeglas und kehren Sie sorgfaeltig 3 bis 4 mal um, um eine komplette Mischung zuzulassen. d. Etikettieren Sie das Zentrifugeglas als “OBERSCHICHT”. 2. Unterschichtloesung – 90% a. Nehmen Sie CONCENTRATE (Katalog Nr. 99306) und pipettieren Sie 8,1 mL in einem sterilen Zentrifugeglas b. Fuegen Sie 1,9 mL Modified Human Tubal Fluid (Katalog Nr. 90126) hinzu. c. Verschliessen Sie das Zentrifugeglas und kehren Sie sorgfaeltig 3 bis 4 mal um, um eine komplette Mischung zuzulassen d. Etikettieren Sie das Zentrifugeglas als “UNTERSCHICHT”. 3. Setzen Sie zum ALLGEMEINEN VERFAHREN Abschnitt des Paketeinsatz fort. Anmerkung: Die Bezeichnungen 50% und 90% bedeuten nicht eine tatsächliche Konzentration. Die 50% und die 90% sind die relativen Konzentrationen, die auf der vorherigen Namenklatur basieren. Das bedeuted, dass eine 1:9 Verdünnung von Percoll® is gleichwertig zu einer Funktion 100% der isotonische Loesung ALLGEMEINES VERFAHREN Das folgende ist ein allgemeines Verfahren für eine zweistufige Gradientstrennung des freibeweglichen Sperma vom Samen. Das Volumen und die Konzentration koennen geändert werden, um jedes Labors’ Präferenz zu entsprechen (d.h. Mini-Steigung [oder Mini-Gradient], kaeltekonservierter Samen, Dreischichtsgradient). 1. Die Temperatur von alle Mediumbestandteile sollte bei der Raumtemperatur oder 37°C sein. 2. Mit einer sterilen Pipette uebertragen Sie 1,5 mL bis 2,0 mL der UNTERSCHICHT auf ein steriles konisches Wegwerfzentrifugeglas. 3. Mit einer sterilen Pipette uebertragen Sie ein gleiches Volumen von OBERSCHICHT auf die UNTERSCHICHT. Das wird getan, indem man die Oberflaeche der UNTERSCHICHT mit der Pipettenspitze an der Seite des Zentrifugeglas in Beruehrung kommt. Verteilen Sie sorgfaeltig die “OBERSCHICHT” mit der Pipettenspitze um den Umkreis des Zentrifugeglases in einer aufwaerts Bewegung als das Niveau der OBERSCHICHT steigt. ITALIANO 4. Mit einer neuen sterilen Pipette, fuegen Sie sorgfaeltig 1,5 – 2,0 mL verfluessigter Samen auf die OBERSCHICHT hinzu. 5. Zentrifugierien Sie ungefaehr 200 – 300xg fuer 10 bis 20 Minuten.* Stellen Sie sorgfaeltig die Tablette heraus, entweder indem Sie weg von der “OBERSCHICHT” und von der “UNTERSCHICHT” ansaugen, oder entfernen Sie direkt die Tablette und uebertragen Sie auf ein neues steriles Zentrifugeglas *Anmerkung: Die Qualität der Spermaprobe sollte ausgewertet und in Erwaegung gezogen werden, um die korrekte Zentrifugierungsgeschwindigkeit und Zeit festzustellen. Diese sollten entsprechend der einzelnen Probestückqualität für Optimierung des Verfahrens justiert werden. 6. Mit einer neuen sterilen Pipette, fügen Sie 2,0 - 3,0 mL des passenden Spuelungsmediums wie das Sperm Washing Medium (Irvine Scientific Katalog # 9983) oder Modified HTF (Irvine Scientific Katalog # 90126), mit Proteinergänzung hinzu. Resuspendieren Sie die isolierte Tablette. Zentrifugieren Sie (~200xg) fuer 8 bis 10 Minuten und entfernen Sie den Supernatant. Wiederholen Sie diese Massnahme für eine zweite Spuelung. Werfen Sie den Supernatant weg und resuspendieren Sie die Tablette mit einer ensprechenden Volumen des passenden Medium. Die Probe ist jetzt zur Analyse bereit. Fuer weitere Einzelheiten zum Gebrauch diesen Produkten soll das Labor in seinen eigenen Protokollen nachschlagen, die für die spezifische medizinische Einstellung spezifisch entwickelt und optimiert worden sind. LAGERBEDINGUNGEN UND STABILITAET Bewahren Sie die ungeoeffneten Flaschen bei 2º to 8ºC auf. Wärmen Sie das Medium zur umgebenden oder der Temperatur des Brutkastens (37°C) vor Gebrauch. Frieren Sie es nicht oder stellen Sie es nicht in den hohen Temperaturen heraus. ISolate ist bis zum Verfallsdatum beständig, das auf die Schachtel und Flaschenetikett gezeigt wird. Bewahren Sie das Medium wie angewiesen auf. VORSICHTSMASSNAHMEN UND WARNUNGEN Diese Vorrichtung ist für die Anwendung durch Personal vorgesehen, das in Verfahren ausgebildet wurde, welche die für diese Vorrichtung angegebene zugelassene Anwendung beinhalten. ISolate wird undurchlässig aussehen. Das ist normal fuer dieses Produkt. Benutzen Sie keine Phiole des Mediums, wenn es Beweis der Feststoffe oder Kontamination (uneinheitliche Truebung) gibt. ISolate sollte fest mit einer Kappe bedeckt werden, wenn es in einem CO2 Brutkasten verwendet wird, um die pHVeränderungen zu vermeiden. Dieses Produkt enthält keine Konservierungsmittel, Antibiotika oder Proteinergänzungen. Um die Verschmutzung zu vermeiden, muss das Produkt mit aseptischer Methode benutzt werden. Im Schadensfalle, verwenden Sie das Medium nicht. Bitte werfen Sie es weg oder senden Sie zum Hersteller fuer Austausch zurück. ORSICHT: Nach US-Bundesgesetz darf dieses Gerät nur von oder auf Antrag von einem Arzt verkauft werden. DESCRIZIONE DEL PRODOTTO ISolateâ è un terreno di gradiente di densità preparato per dividire la frazione mobile di sperma dal fluido seminale. Come sistema gradiente di due strati, il terreno riduce effetivamente i contaminanti cellulari come sperma morti, cellule di sangue bianco e detriti miscellani. Il campione che risulta contiene sperma con preponderanza mobile. ISolate è un suspensione colloidale di particelle di silice stabilizzato con silane hidrofilico legato covalentamente in HTF pulito con HEPES che è filtrato su membrana e preparato in condizioni di sterilità. Il livello di sicurezza di sterilità(SAL) è 10-3. ISolate è analizzato e trovato di non avere pirogeni via il test pirogene di coniglio. ESPAÑOL 5. Centrifugare per 10 – 20 minuti approssimativamente a 200 – 300xg.* Esporre attentamente la tavoletta con il levare degli “STRATI SUPERIORI ED INFERIORI” via aspirazione, o con il allontanamento diretto della tavoletta ed il trasferimento a un tubo centrifugo sterilizzato. DESCRIPCIÓN DEL PRODUCTO El ISolate® es un medio de gradiente de densidades diseñado para separar la fracción móvil de esperma del fluido seminal. Como un sistema de gradiente de dos capas, reduce eficazmente los contaminantes celulares como espermatozoides muertos, leucocitos y otros restos. *Nota: La qualità del campione di sperm dovrebbe essere valutata e dovrebbe essere considerata quando se determina la velocità e tempo di centrifugazione propri. Questi dovrebbero essere aggiustati secondo la qualità del campione individuale per l’ottimizzazione della procedura. El ISolate es una suspensión coloidal de partículas de sílice estabilizada con silano hidrofílico unido covalentemente en HTF tamponado con HEPES, que ha sido filtrada a través de membrana y procesada en condiciones asépticas. El nivel de garantía de esterilidad (SAL) es de 10-3. El ISolate ha sido testado para pirógenos con resultados negativos por el test de pirógenos en conejo. ISTRUZIONI PER L’ USO Catalogo # 99264 – SILICE COLLOIDALE PRONTO PER USO A DUE CONCENTRAZIONI (50% E 90%) A. Materie Suggerite: ISolate • Catalogo di Irvine Scientific # 99264 (arrezzatura/ cassetta di fiala di 6mL, 50mL o arrezzatura di fiala di 100 mL Terreno di Sciaquio di Sperma • Catalogo d’Irvine Scientific #9983 Tubi buttabili conici centrifugi • Catalogo d’Irvine Scientific #IS-325 Pipette Pasteur, sterilizzate Centrifugo Incubatore, 37° C 6. Usando una nuova pipetta sterilizatta, aggiungere da 2.0 a 3.0 mL di sostanza di spruzzetta appropriata come Sostanza di Spruzzetta di Sperma (IS Catalogo #9983) o HTF Modificato (ISCatalogo #9963) con integrazione di proteina . Risospendere la pallina isolata. Centrifugare (~200xg) per 8 -10 minuti e toglie il supernatante. Ripetere questo passo per una seconda spruzzetta. Butare il supernatante ed risospendere la pallina usando un volume conveniente di sostanza appropriata. Il campione è adesso pronto per l’analisi. B. Preparazione Gradiente: Le diluzioni preliminarie non sono necessarie. Ogni fiala di gradiente di strato superiore ed Inferiore è pronto per l’uso. Prosegui a sezione di PROC DURA GENERALE del l’inserzione del prodotto. ISTRUZIONI DI STOCCAGIO E STABILITA Stoccare i contenitori non aperti refrigerati da 2° C a 8° C. Catalogo #99275 – Soluzione di Sostegno (Stock) 90% terreno di gradiente di densità per uso in una procedura di uno stado o per ulteriore diluzione. Non congelare o esporre a temperature alte. A. Materie Suggerite: Soluzione di Sostegno d’ISolate • Catalogo d’Irvine Scientific #99275 Fluido Tubarico Umano Modificato • Catalogo d’Irvine Scientific #90126 Terreno di Sciaquio di Sperma • Catalogo d’Irvine Scientific #9983 Tubi buttabili conici centrifugi • Catalogo d’Irvine Scientific #IS-325 Pipette Pasteur, sterilizzate Centrifugo Incubatore, 37° C B. Preparazione Gradiente: Si richiede due soluzioni per eseguire il metodo di separazione di sperma gradiente: uno strato superiore e uno strato inferiore. 1. Soluzione di Strato Superiore – 50%: a) Mettere SOLUZIONE DI SOSTEGNO(STOCK SOLUTION) –(Catalogo #99275) e una pipetta di 5.6 mL in un tubo centrifugo sterilizzato b) Aggiungere 4.4 mL di Fluido Tubarico Umano Modificato(Catalogo #90126) c) Chiudere il tubo e capovolgere gentilmente per permettere miscuglio completo. d) Classificare il tubo come “STRATO SUPERIORE” 2. Soluzione di Strato Inferiore – 90%: a) Aliquotare 10 mL della SOLUZIONE DI SOSTEGNO(STOCK SOLUTION–Catalogo #99275) in un tubo e coperchio di centrifugo sterilizzato – (No ulteriori diluzioni sono necessari – Soluzione di Sostegno è 90%) b) Classificare il tubo come “STRATO INFERIORE” 3. Prosegui a sezione di PROCEDURA GENERALE dell’inserzione del prodotto. (APPUNTO: 10 mL DI STRATO SUPERIORE E DI S T R ATO I N F E R I O R E T R AT TA N N O APPROSSIMATIVAMENTE 5 CAMPIONI DI SPERMA). Catalogo #99306 – Concentrato Concentrazione di silice colloidale per ulteriore diluzione a gradienti di densità; formulato in un tampone isotonico(isotonic) e approssima la densità di Percollâ. Concentrato d’ISolate fù valutato in accordo con questa inserzione di pachetto gradienti di 50% e 90%. Ogni laboratorio puo scegliere per produrre gradienti a concentrazioni differenti che devono essere evaluati per efficacia. A. Materie Suggerite: Concentrato d’ISolate • Catalogo d’Irvine Scientific #99306 Fluido Tubarico Umano Modificato • Catalogo d’Irvine Scientific #90126 Terreno di Sciaquio di Sperma • Catalogo d’Irvine Scientific #9983 Tubi buttabili conici centrifugi • Catalogo d’Irvine Scientific #IS-325 Pipette Pasteur, sterilizzate Centrifugo Incubatore, 37° C B. Preparazione Gradiente: Si richiede due soluzioni per eseguire il metodo di separazione di sperma gradiente: uno strato superiore e uno strato inferiore. 1. Soluzione di Strato Superiore – 50%: a) Mettere CONCENTRATO (Catalogo # 99306) e pipetta di 4.5 mL in un tubo centrifugo sterilizzato b) Aggiungere 5.5 mL di Fluido Tubarico Umano Modificato(Catalogo #90126) c) Coprire il tubo e capovolgere gentilmente 3 o 4 volte per miscuglio completo. d) Classificare tubo come “STRATO SUPERIORE” 2. Soluzione di Strato Inferiore – 90% a) Mettere CONCENTRATO (Catalogo # 99306) e pipetta di 8.1 mL in un tubocentrifugo sterilizzato b) Aggiungere 1.9 mL di Fluido Tubarico Umano Modificato(Catalogo #90126) c) Coprire il tubo e capovolgere gentilmente 3 o 4 volte per miscuglio completo d) Classificare il tubo come “STRATO INFERIORE” 3. Prosegui a sezione di PROCEDURA GENERALE dell’nserzione del prodotto. APPUNTO: I TERMINI 50% E 90% N O N R A P P R E S E N TA N N O U N A C O N C E N T R A Z I O N E E F F E T I VA . L E 50% E 90% SONO CONCENTRAZIONI RELATIVE BASATE ALLA NOMENCLATURA PRECEDENTE CHE DEFINI(ACCENT) UNA DILUZIONE DI PERCOLLâ DI 1:9 UGUALE A UNA SOLUZIONE OPERANTE, ISOTONICA DI 100%. C O N S I D E R A Z I O N I D I T R AT TA M E N T I SPECIALI Il seguente è una procedura generale per una seperazione gradiente di due strati di sperma mobile(motile sperm) dallo sperma(semen). Il volume e concentrazione possono essere modificati per soddisfare ogni preferenza del laboratorio(per esempio mini-gradiente, sperma criopreservata, gradiente di tre-strati). 1. Alzare tutti i componenti di terreno a temperatura ambientale o 37°C. 2. Utilizzando una pipetta sterilizzata, trasferire 1.5 – 2.0 mL del “STRATO INFERIORE” a un tubo centrifugo, buttabile, conico, sterilizzato. 3. Utilizzando una nuova pipetta sterilizzata, trasferire lo stesso volume di “STRATO SUPERIORE” sopra allo “STRATO INFERIORE”. Questo è fatto via toccare la superficie dello “STRATO INFERIORE” al lato/ fianco del tubo con la punta della pipetta. Dispensi attentamente lo “STRATO SUPERIORE” via girare a spirale la punta della pipetta attorno alla circonferenza del tubo in movimento ascendente come il livello dello “STRATO SUPERIORE” alza. 4. Mettere gentilmente 1.5 – 2.0 mL di sperma liquificata sopra lo “STRATO SUPERIORE” utilizzando una pipetta nuova, sterilizzata. Per ulteriori dettagl sull’uso de queste prodotti, il laboratorio dovrebbe consultare le sue protocolli/tecniche standard che sono statti specificamente fatti ed ottimizzatti per la sua impianto. Riscaldare a temperatura ambientale o temperatura d’incubatore(incubator) – (37° C) prima dell’uso. Quando sono stoccate direttamente, ISolate è stabile fino alla data di scadenza mostrata sulle etichette della bottiglia e della scatola. PRECAUZIONI E AVVERTIMENTI Questo dispositivo è previsto per l’uso da parte di personale addestrato nelle procedure che comprendono le applicazioni indicate per le quali il dispositivo è previsto. ISolate si vede opaco. Questo è normale per questo prodotto. Non usare qualsiasi fiale o terreno che ha evidenza di sostanze particolari o contaminazione (torbidezza non uniforme). ISolate deve essere chiuso strettamente quando è utilizzato in un incubatore CO2 per evitare cambi di pH. Questo prodotto non contiene preservativi, antibiotici, o supplementi di proteina. Per evitare contaminazione, il prodotto deve essere utilizzato con tecniche assetiche. IN CASO DI DANNO, NON USARE. PER FAVORE ELIMINARE O REGRESSALO ALLA MANIFATTURA PER SOSTITUZIONE. CAUTELA: La legge federale (U.S.) se limita questo meccanismo/prodotto a la vendita da o sull’ordine di un medico o dottore. INSTRUCCIONES DE USO Nº de Catálogo 99264 – SÍLICE COLOIDAL LISTA PARA USAR A DOS CONCENTRACIONES (50% y 90%) A. Material sugerido: ISolate • Irvine Scientific, Nº catálogo 99264 (kit de viales de 6mL, 50mL o kit de viales de 100mL) Medio de lavado de esperma • Irvine Scientific, Nº catálogo 9983 Tubos de centrífuga cónicos estériles y desechables • Irvine Scientific, Nº catálogo IS-325 Pipetas Pasteur estériles Centrífuga Incubador a 37ºC B. Preparación del gradiente: No son necesarias diluciones preliminares. Cada vial de capa de gradiente superior e inferior está lista para usar. Continue con la sección “PROCEDIMIENTOS GENERALES” Nº de Catálogo 99275 – SOLUCIÓN STOCK Medio de gradiente de densidades al 90% para ser utilizado en protocolos de un solo paso o para posteriores diluciones. A. Material sugerido: ISolate - Solución Stock • Irvine Scientific, Nº Cat. 99275 Medio HTF modificado • Irvine Scientific, Nº Cat. 90126 Medio de lavado de esperma • Irvine Scientific, Nº Cat. 9983 Tubos de centrífuga cónicos estériles y desechables • Irvine Scientific, Nº Cat. IS-325 Pipetas Pasteur estériles Centrífuga Incubador a 37ºC B. Preparación del gradiente: Para llevar a cabo una separación de esperma por gradiente se necesitan dos soluciones: la capa superiory la capa inferior. 1. Solución de la capa superior: 50% a. Coger la SOLUCIÓN STOCK (Nº Cat. 99275) y pipetear 5,6mL en un tubo de centrífuga estéril. b. Añadir 4,4 mL de HTF modificado (Nº Cat. 90126) c. Tapar el tubo e invertir suavemente 3 o 4 veces para permitir una mezcla completa. d. Etiquetar el tubo como “capa superior”. 2. Solución de la capa inferior: 90% a. Alicuotar 10mL de la SOLUCIÓN STOCK en un tubo estéril de centrífuga y taparlo. (No se necesitan más diluciones. La solución stock está al 90%). b. Etiquetar el tubo como “CAPA INFERIOR”. 3. Continúe en la sección de “PROCEDIMIENTOS GENERALES”. FRANÇAIS Nota: la calidad de la muestra de esperma debe ser evaluada y tomada en consideración para determinar el tiempo y la velocidad adecuados de centrifugación. Estos parámetros deben ajustarse conforme a la calidad individual de la muestra para optimizar el el proceso. * 6. Utilizando una nueva pipeta estéril, añadir 2.0 – 3.0 mL de un medio de lavado adecuado como el Medio de Lavado de Esperma (IS Nº Cat 9983) o HTF modificado (IS Nº Cat 90126) son suplemento proteico. Resuspender el sedimento. Centrifugar (aprox. 200xg) 8-10 minutos y descartar el sobrenadante. Repetir este paso para un segundo lavado. Descartar el sobrenadante y resuspender el sedimento utilizando un volumen adecuado de medio. La muestra está lista para el análisis. Para más detalles sobre la utilización de estos productos, consulte los protocolos de trabajo de su propio laboratorio, los cuales han sido desarrollados y especialmente optimizados de acuerdo a su programa médico particular. INSTRUCCIONES DE ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD Conserve las botellas no abiertas refrigeradas entre 2ºC y 8ºC. Atempere a temperatura ambiente o en un incubador (37ºC) antes de su uso. No congele ni exponga a temperaturas elevadas. El ISolate es estable hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta de la botella y de la caja, siempre que se conserve de acuerdo a las instrucciones recomendadas. PRECAUCIONES Y ADVERTENCIAS Este dispositivo debe ser utilizado por personal capacitado en procedimientos que incluyan la aplicación prevista para el mismo. El ISolate tiene un aspecto opaco. Esto es normal en este producto. No utilice ningún vial de medio con evidencias de contener partículas o contaminación (turbidez no homogénea). Los viales de ISolate deben estar herméticamente cerrados cuando se usen en un incubador de CO2 para evitar cambios de pH. Este medio no contiene conservantes, ni antibióticos ni suplementos proteicos. Para evitar contaminaciones, manipule el producto en condiciones de esterilidad. En caso de alteración del medio, no lo utilice. Por favor, descártelo o devuélvalo al fabricante para que lo reemplace. PRECAUCIÓN: Las leyes federales (U.S.) restringen la venta de este producto a la prescripción de un facultativo. Description du produit ISolate® est un gradient de densité conçu pour séparer la fraction des spermatozoïdes mobiles du plasma séminale. Système gradient à deux couches, il réduit efficacement les contaminations cellulaires telles que les spermatozoïdes morts, les globules blancs et les débris divers. Il en résulte une fraction de sperme contenant essentiellement les spermatozoïdes mobiles. ISolate, stérilisé par filtration, est une suspension colloïdale de particules de silice stabilisés par une liaison covalente au silane hydrophile, dans du milieu HTF tamponné au HEPES. Le niveau de stérilité de la solution est de 10-3 (Sterility Assurance Level). ISolate a été trouvé non-pyrogène par le “rabbit pyrogen test”. Conseils d’utilisation Référence 99264, Gradient de densité à deux concentrations 50% et 90%, prêt à l’utilisation A. Matériel suggéré : ISolate • % Irvine Scientific, référence 99264 (kit de 6 ml, 50mL ou de 100ml) Milieu de lavage du sperme • % Irvine Scientific, référence 9983 Tubes coniques pour centrifugeuse, jetables, stériles • % Irvine Scientific, référence IS-325 Pipettes Pasteur, stériles Centrifugeuse Etuve, 37°C B. Préparation du gradient : Pas de dilution préalable nécessaire. Chaque flacon de gradient supérieur et inférieur est prêt à l’utilisation. Aller à la section “Procédure générale” de cette notice. Référence 99275, Solution mère Milieu de gradient de densité à 90%, à utiliser dans le protocole à une étape ou pour des dilutions ultérieures. A. Matériel suggéré : ISolate, solution mère • % Irvine Scientific, référence 99275 Fluide tubulaire humain modifié • % Irvine Scientific, référence 90126 Milieu de lavage du sperme • % Irvine Scientific, référence 9983 Tubes coniques pour centrifugeuse, jetables, stériles • % Irvine Scientific, référence IS-325 Pipettes Pasteur, stériles Centrifugeuse Etuve, 37°C B. Préparation du gradient : Deux solutions sont requises pour réaliser la séparation des spermatozoïdes par la méthode de gradient de densité : une couche supérieure et une couche inférieure. 1. Solution pour la couche supérieure – 50% a. Prélever dans un tube conique stérile 5,6 ml de la solution mère (réf. 99275), b. Ajouter 4,4 ml de fluide tubulaire humain modifié (réf. 90126) c. Bouchonner le tube et le retourner 3-4 fois pour permettre un mélange complet d. Marquer ce tube “couche supérieure” 2. Solution pour la couche inférieure – 90% a. Prélever dans un tube conique stérile 10 ml de la solution mère (réf. 99275) (pas de dilution nécessaire, la solution mère est à 90%) b. Marquer ce tube “couche inférieure” 3. Aller à la section “Procédure générale” de cette notice (Remarque : 10 ml de couche supérieure et 10 ml de couche inférieure permettront de traiter approximativement 5 prélèvements de sperme) Nº de Catálogo 99306 – CONCENTRADO Concentrado de sílice coloidal para posteriores diluciones en gradientes de densidad; formulado en un tampón isotónico, se aproxima a la densidad del Percoll sin diluir. El ISolate Concentrado ha sido evaluado en gradientes del 50% y 90% de acuerdo a este Información de producto. Cada laboratorio puede elegir preparar los gradientes a concentraciones diferentes, previa comprobación de su efectividad. Référence 99306, Concentré Suspension colloïdale de silice concentrée à diluer pour former des gradients de densité ; formulé comme un tampon isotonique dont la densité est approximativement la même que celle du Percoll® non dilué. Le concentré ISolate® a été évalué pour cette notice par des gradients de 50% et 90%. Chaque laboratoire pourrait choisir de faire des gradients de différentes concentrations. l’efficacité de ces derniers doit être évaluée. A. Material sugerido: ISolate - Concentrado • Irvine Scientific, Nº Cat. 99306 Medio HTF modificado • Irvine Scientific, Nº Cat. 90126 Medio de lavado de esperma • Irvine Scientific, Nº Cat. 9983 Tubos de centrífuga cónicos estériles y desechables • Irvine Scientific, Nº Cat. IS-325 Pipetas Pasteur estériles Centrífuga Incubador a 37ºC A. Matériel suggéré : ISolate, Concentré • % Irvine Scientific, référence 99306 Fluide tubulaire humain modifié • % Irvine Scientific, référence 90126 Milieu de lavage du sperme • % Irvine Scientific, référence 9983 Tubes coniques pour centrifugeuse, jetables, stériles • % Irvine Scientific, référence IS-325 Pipettes Pasteur, stériles Centrifugeuse Etuve, 37°C B. Preparación del gradiente: Para llevar a cabo una separación de esperma por gradi ente se necesitan dos soluciones: la capa superior y la capa inferior. 1. Solución de la capa superior: 50% a. Coger el CONCENTRADO (Nº Cat. 99306) y pipetear 4,5 mL en un tubo de centrífuga estéril. b. Añadir 5,5 mL de HTF modificado (Nº Cat. 90126) c. Tapar el tubo e invertir suavemente 3 o 4 veces para permitir una mezcla completa. d. Etiquetar el tubo como “CAPA SUPERIOR”. 2. Solución de la capa inferior: 90% a. Coger el CONCENTRADO (Nº Cat. 99306) y pipetear 8,1 mL en un tubo de centrífuga estéril. b. Añadir 1,9 mL de HTF modificado (Nº Cat. 90126) c. Tapar el tubo e invertir suavemente 3 o 4 veces para permitir una mezcla completa. d. Etiquetar el tubo como “CAPA INFERIOR”. 3. Continúe en la sección de “PROCEDIMIENTOS GENERALES”. B. Préparation du gradient : Deux solutions sont requises pour réaliser la séparation des spermatozoïdes par la méthode de gradient de densité : une couche supérieure et une couche inférieure. 1. Solution pour la couche supérieure – 50% a. Prélever dans un tube conique stérile 4,5 ml de la solution CONCENTRE (réf. 99306) b. Ajouter 5,5 ml de fluide tubulaire humain modifié (réf. 90126) c. Bouchonner le tube et le retourner 3-4 fois pour permettre un mélange complet d. Marquer ce tube “couche supérieure” 2. Solution pour la couche inférieure – 90% a. Prélever dans un tube conique stérile 8,1 ml de la solution CONCENTRE (réf. 99306) b. Ajouter 1,9 ml de fluide tubulaire humain modifié (réf. 90126) c. Bouchonner le tube et le retourner 3-4 fois pour permettre un mélange complet d. Marquer ce tube “couche inférieure” 3. Aller à la section “Procédure générale” de cette notice Nota: Los términos 50% y 90% no equivalen a una co centración real. El 50 % y el 90% son concentraciones relativas basadas en una nomenclatura anterior que definía una solución 1:9 de Percoll® como una solución de trabajo isotónica al 100%. PROCEDIMIENTOS GENERALES El protocolo que aquí se describe es un procedimiento general para separar del semen la fracción móvil de esperma a través de un gradiente. El volumen y la concentración se pueden modificar para adecuarse a las preferencias de cada laboratorio (p.ej. mini-gradiente, semen criopreservado, gradiente de 3 capas). 1. Atemperar todos los medios a temperatura ambiente o a 37ºC. 2. Utilizando una pipeta estéril, transferir 1,5 – 2,0 mL de medio de la “CAPA INFERIOR” a un tubo de centrífuga cónico, estéril y desechable. 3. Utilizando otra pipeta estéril, transferir un volumen igual al del paso 1 de la “CAPA SUPERIOR” a la parte superior de la “CAPA INFERIOR”. Para ello, colocar con la punta de la pipeta en la parte superior de la capa tocando la pared del tubo. Dispensar con mucho cuidado la “CAPA SUPERIOR” moviendo la pipeta en círculos alrededor de la circunferencia del tubo subiendo a medida que se aumenta la “CAPA INFERIOR”. 4. Coloque suavemente 1,5 – 2,0 mL de semen licuado sobre la “CAPA SUPERIOR” con otra pipeta estéril. 5. Centrifugar durante 10-20 minutos a 200-300 x g*. Con mucho cuidado, aspirar y desechar las capas inferior y superior o bien. Remarque : les termes 50% et 90% ne représentent pas des concentrations réelles. Les 50% et 90% sont des concentrations relatives basées sur la précédente nomenclature qui a défini la dilution 1:9 du Percoll® comme étant égale à 100% de solution isotonique. Procédure générale Ce qui suit est une méthode générale de séparation par gradient de densité des spermatozoïdes mobiles du plasma séminale. Les volumes et les concentrations peuvent être modifiés pour répondre aux préférences de chaque laboratoire (ex. Mini gradient, sperme congelé, gradient à trois couches). 1. Amener tous les milieux à température ambiante ou les préchauffer à 37°C. 2. A l’aide d’une pipette stérile, transférer 1,5 – 2,0 ml de la ‘couche inférieure’ dans un tube conique pour centrifugeuse, jetable, stérile. 3. A l’aide d’une nouvelle pipette stérile, transférer un volume équivalent (1,5 – 2,0 ml) de la ‘couche supérieure’ et la déposer au-dessus de la ‘couche inférieure’. Ceci est réalisé en touchant la surface de la ‘couche inférieure’ par le bout de la pipette. Répartir soigneusement la ‘couche supérieure’ en tournant la pipette autour de la paroi du tube dans un mouvement ascendant à mesure que la ‘couche supérieure’ monte. 4. Soigneusement placer 1,5 – 2,0 ml de sperme liquéfié sur la ‘couche supérieure’ en utilisant une nouvelle pipette stérile. 5. Centrifuger à 200-300xg* pendant 10-20 minutes *Remarque: la qualité du prélèvement du sperme doit être évaluée et prise en considération lors de la détermination de la durée et de la vitesse de centrifugation appropriées. Pour une optimisation de la procédure, ces dernières doivent être ajustées selon la qualité de chaque prélèvement. 6. A l’aide d’une nouvelle pipette stérile, ajouter 2,0 –3,0 ml d’un milieu de lavage adéquat comme le milieu de lavage du sperme (IS réf. 9983) ou le milieu HTF modifié (IS réf. 90126) supplémenté en protéines. Resuspendre le culot de centrifugation. Centrifuger (~200xg) pendant 8-10 minutes et aspirer le surnageant. Répéter cette étape (deuxième lavage). Aspirer le surnageant et resuspendre le culot dans le volume désiré d’un milieu adéquat. Le prélèvement est maintenant prêt à l’analyse. Pour plus de détails sur l’utilisation de ce produit, chaque laboratoire doit consulter ses propres procédures et protocoles standards spécialement développés et optimisés pour chaque établissement médical particulier. C onsignes de conservation et stabilité Conserver les flacons non entamés réfrigérés entre 2 et 8°C. Amener à température ambiante ou préchauffer à 37°C (dans une étuve) avant utilisation. Ne pas congeler ou exposer à des températures élevées. Conservé comme indiqué ci-dessus, ISolate est stable jusqu’à la date d’expiration indiquée sur la boite et les étiquettes des flacons. Précautions et mise en garde Ce dispositif est destiné à une utilisation par un personnel formé aux procédures comprenant l’application indiquée pour laquelle le dispositif est destiné. ISolate apparaîtra opaque. Ceci est normal pour ce produit. N’utiliser aucun flacon de milieu s’il contient des particules ou s’il est contaminé (non uniformément trouble). Lors de l’incubation de ISolate dans une étuve à CO2, les flacons doivent être bien fermés pour éviter les changements de pH. Ce produit ne contient ni conservateurs, ni antibiotiques, ni supplément protéiques. Pour éviter les contaminations, il doit être manipulé stérilement. ATTENTION : La loi fédérale limite la vente de ce dispositif aux médecins ou sur ordre d’un médecin. ENGLISH ® ISolate Catalog No. 99264 12 x 6 mL, 2 x 50 mL, 2 x 100 mL Ready to Use Density Gradient Medium at Two Concentrations Catalog No. 99275 Stock Solution 100 mL Catalog No. 99306 Concentrate 100 mL REFERENCES Adaniya GK, Jackson KV: Comparison of Percoll® and ISolate® in the Preparation of Semen for use in Assisted Reproductive Technologies. 53rd Annual Meeting of the American Society for Reproductive Medicine, Cincinnati, Ohio; 0-113, 1997. Symbols: Catalog Number Lot Number Tarchala SM, Fahy MM, Hauserman HM, Kallmann K, Volentine K, Radwanska E, Binor Z, Molo MW, Rawlins RG: ISolate® As a New Method of Sperm Separation. 53rd Annual Meeting of the American Society for Reproductive Medicine, Cincinnati, Ohio; P-116, 1998. Miller, KF, Fry KL, Arciaga RL, Falcone T: Semen preparation for in-vitro fertilization using ISolate® results in sperm recovery, fertilization and pregnancy outcomes that are indistinguishable from those obtained with Percoll®. 14th Embryology, Goteborg, Sweden; P-116, 1998. Tarchala SM, Volentine KK, Rawlins RG: A comparison of sperm processing using ISolate® and Pure Sperm™. 14th Annual Meeting of the European Society of Human Reproduction and Embryology, Goteborg, Sweden; R-041, 1998. Sterilized using aseptic processing techniques (filtration) Expiration: Year - Month - Day Caution:See instructions for use European Representative MPIE Schutweg 13A 5145 NP Waalwijk, The Netherlands See instructions for use. Storage Temperature CE Mark 0050 0050 ISolate is a Registered Trademark of Irvine Scientific ® Percoll ® is a Registered Trademark of Pharmacia Biotech, AB Sweden MPIE Schutweg 13a 5145 NP Waalwijk, The Netherlands PRODUCT DESCRIPTION ISolate® is a density gradient medium designed to separate the motile fraction of sperm from seminal fluid. As a two layer gradient system, it effectively reduces cellular contaminants such as dead sperm, white blood cells and miscellaneous debris. The resulting sample contains predominantly motile sperm. ISolate is a membrane filtered, aseptically processed colloidal suspension of silica particles stabilized with covalently bound hydrophilic silane in HEPES-buffered HTF. The sterility assurance level (SAL) is 10-3. ISolate is tested and found negative for pyrogens by rabbit pyrogen test. DIRECTIONS FOR USE Catalog #99264 - READY TO USE COLLOIDAL SILICA AT TWO CONCENTRATIONS (50% and 90%) A. Materials Suggested: ISolate • Irvine Scientific Catalog #99264 (6mL , 50 mL or 100mL vial kit) Sperm Washing Medium • Irvine Scientific Catalog #9983 Sterile, disposable conical centrifuge tubes • Irvine Scientific Catalog #IS-325 Pasteur Pipettes, sterile Centrifuge Incubator, 37°C B. Gradient Preparation: No preliminary dilutions are necessary. Each vial of upper and lower layer gradient is ready for use. Continue to GENERAL PROCEDURE section of product insert. For additional details on the use of these products, each laboratory should consult its own laboratory procedures and protocols which have been specifically developed and optimized for your individual medical program. STORAGE INSTRUCTIONS AND STABILITY Store the unopened containers refrigerated at 2º to 8ºC. Warm to ambient or incubator (37°C) temperature prior to use. Do not freeze or expose to high temperatures. ISolate is stable until the expiration date shown on the box and bottle labels when stored as directed. PRECAUTIONS AND WARNINGS This device is intended to be used by staff trained in assisted reproductive procedures that include the indicated application for which the device is intended. ISolate will appear opaque. This is normal for this product. Do not use any vial of medium which shows evidence of particulate matter or contamination (nonuniform cloudiness). Catalog #99275 - STOCK SOLUTION 90% density gradient medium for use in a one-step procedure or for further dilution. ISolate should be tightly capped when used in a CO2 incubator to avoid pH changes. A.Materials Suggested: ISolate Stock Solution • Irvine Scientific Catalog #99275 Modified Human Tubal Fluid • Irvine Scientific Catalog #90126 Sperm Washing Medium • Irvine Scientific Catalog #9983 Sterile, disposable conical centrifuge tubes • Irvine Scientific Catalog #IS-325 Pasteur Pipettes, sterile Centrifuge Incubator, 37°C This product contains no preservatives, antibiotics, or protein supplements. To avoid problems with contamination, handle using aseptic techniques. B. Gradient Preparation: Two solutions are required to perform the gradient sperm separation method: An upper layer and a lower layer. 1. Upper Layer solution - 50%: a) Take STOCK SOLUTION (Catalog #99275) and pipette 5.6 mL into a sterile centrifuge tube b Add 4.4 mL of Modified Human Tubal Fluid (Catalog #90126) c) Cap tube and invert gently 3-4 times to allow for complete mixing d) Label tube as “UPPER LAYER” 2. Lower Layer solution - 90%: a) Aliquot 10 mL of the STOCK SOLUTION into a sterile centrifuge tube and cap - (No further dilutions necessary - Stock Solution is 90%) b) Label tube as “LOWER LAYER” 3. Continue to GENERAL PROCEDURE section of product insert. (NOTE: 10 mL Upper Layer and 10 mL Lower Layer will process approximately 5 semen samples.) Catalog #99306 - CONCENTRATE Colloidal silica concentrate for further dilution into density gradients; formulated in an isotonic buffer and approximates the density of undiluted Percoll®. ISolate® CONCENTRATE was evaluated according to this package insert at 50% and 90% gradients. Each laboratory may choose to make gradients at different concentrations which should be evaluated for effectiveness. A. Materials Suggested: ISolate® Concentrate • Irvine Scientific Catalog #99306 Modified Human Tubal Fluid • Irvine Scientific Catalog #90126 Sperm Washing Medium • Irvine Scientific Catalog #9983 Sterile, disposable conical centrifuge tubes • Irvine Scientific Catalog #IS-325 Pasteur Pipettes, sterile Centrifuge Incubator, 37°C B. Gradient Preparation: Two solutions are required to perform the gradient sperm separation method: An upper layer and a lower layer. 1.) Upper Layer solution - 50%: a) Take CONCENTRATE (Catalog #99306) and pipette 4.5 mL into a sterile centrifuge tube b) Add 5.5 mL of Modified Human Tubal Fluid (Catalog #90126) c) Cap tube and invert gently 3-4 times to allow for complete mixing d) Label tube as “UPPER LAYER” 2. Lower Layer solution - 90%: a) Take CONCENTRATE (Catalog #99306) and pipette 8.1 mL into a sterile centrifuge tube b) Add 1.9 mL of Modified Human Tubal Fluid (Catalog #90126) c) Cap tube and invert gently 3-4 times to allow for complete mixing d) Label tube as “LOWER LAYER” 3. Continue to GENERAL PROCEDURE section of product insert. Note: The terms 50% and 90% do not represent an actual concentration. The 50% and 90% are relative concentrations based on the previous nomenclature that defined a 1:9 dilution of Percoll® as equal to a 100% working, isotonic solution. GENERAL PROCEDURE The following is a general procedure for a two-step gradient separation of motile sperm from semen. The volume and concentration can be modified to meet each laboratory’s preference (i.e. mini-gradient, cryopreserved semen, three-layer gradient). 1. Bring all media components to room temperature or 37°C. 2. Using a sterile pipette, transfer 1.5 - 2.0 mL of the “LOWER LAYER” into a sterile, disposable, conical centrifuge tube. 3. Using a new sterile pipette, transfer an equal volume of “UPPER LAYER” on top of the “LOWER LAYER”. This is done by contacting the surface of the “LOWER LAYER” at the side of the tube with the tip of the pipette. Carefully dispense the “UPPER LAYER” by spiraling the pipette tip around the circumference of the tube in an upward motion as the level of the “UPPER LAYER” rises. 4. Gently place 1.5 - 2.0 mL of liquefied semen onto the “UPPER LAYER” using a new sterile pipette. 5. Centrifuge for 10-20 minutes at approximately 200 300xg.* Carefully expose the pellet by either aspirating off the “UPPER” and “LOWER LAYERS”, or directly removing the pellet and transferring to a new sterile centrifuge tube. Note: The quality of the sperm sample should be evaluated and taken into consideration when determining the proper centrifugation speed and time. These should be adjusted according to the individual specimen quality for optimization of the procedure. 2511 Daimler Street, Santa Ana, California 92705-5588 Telephone: 1 949 261 7800 • 1 800 437 5706 Fax: 1 949 261 6522 • www.irvinesci.com PN 40558 Rev.10 DEUTSCH 6. Using a new sterile pipette, add 2.0 - 3.0 mL of appropriate washing medium such as Sperm Washing Medium (IS Catalog #9983) or Modified HTF (IS Catalog #90126) with protein supplementation. Resuspend the isolated pellet. Centrifuge (~200xg) for 8 -10 minutes and remove the supernatant. Repeat this step for a second wash. Discard the supernatant and resuspend the pellet using a suitable volume of appropriate medium. The sample is now ready for analysis. In case of damage, do not use. Please discard or return to Manufacturer for replacement. Caution: Federal (U.S.) law restricts this device to sale by or on the order of a physician. Produktbeschreibung ISolate ® ist ein Dichtegradientsmedium [oder Konzentrationgradientsmedium], das fuer das Trennen des freibeweglichen Spermafraktion von der Samenfluessigkeit bestimmt ist. Als ein Gradientssystem mit zwei Schichten verringert es effektiv die zellulaeren Kontaminationsstoffe wie das tote Sperma, die weissen Blutkoerperchen, und andere Rückstaende. Die ergebende Probe enthält überwiegendes freibewegliches Sperma. ISolate ist Membran gefiltert, es ist eine Kolloidsuspension von Kieselpartikel, die aseptisch verarbeitet ist, und stabilisiert mit dem kovalentgebundenen hydrophilen Silan im HEPES-buffered [gepuffertem] HTF. Das Sterilitaetversicherungsniveau [sterility assurance level (SAL)] ist 10 -3 . ISolate wurde durch die Kaninchenpyrogenprobe getestet und wurde negativ von Pyrogen gefunden. GEBRAUCHSANLEITUNG Katalog Nr. 99264 - BETRIEBSFERTIGE KOLLOIDAL SILICA BEI ZWEI KONZENTRATIONEN (50% UND 90%) A. Vorgeschlagene Materialien: ISolate® • Irvine Scientific Katalog Nr. 99264 (6mL, 50mL oder 100mL Phiolesatz) Sperm Washing Medium [Spermaspuelungsmedium] • Irvine Scientific Katalog Nr. 9983 Sterile wegwerfbare konische Zentrifugegläser • Irvine Scientific Katalog Nr. IS-325 Pasteurpipetten, Steriler Zentrifugebrutkasten, 37°C B. Gradientvorbereitung: Keine vorbereitende Verdünnungen sind notwendig Jede Phiole der Oberschichtsgradient und Unterschic tsgradient ist zum Gebrauch bereit. Setzen Sie zum ALLGEMEINEN VERFAHREN Abschnitt des Produ teinsatzes fort. Katalog Nr. 99275 - verdichtete Lösung 90% Density Gradient Medium ist für den Gebrauch in einem Einschrittverfahren oder für weitere Verdünnung. A. Vorgeschlagene Materialen ISolate Stock Solution • Irvine Scientific Katalog Nr. 99275 Modified Human Tubal Fluid • Irvine Scientific Katalog Nr. 90126 Sperm Washing Medium [Spermaspülungsmedium] • Irvine Scientific Katalog #9983 Sterile, wegwerfbare konische Zentrifugegläser • Irvine Scientific Katalog #IS-325 Pasteurpipetten, Steriler Zentrifugebrutkasten, 37°C B. Gradientvorbereitung: Zwei Lösungen werden benoetigt, um die Trennung methode des Spermagradients durchzuführen: Eine Oberschicht und eine Unterschicht 1. Upper Layer solution - 50% [Oberschichtlösung – 50%]: a. Nehmen Sie die STOCK SOLUTION (Katalog Nr. 99275) und pipettieren Sie 5,6 mL in einem sterilen Zentrifugeglas b. Fuegen Sie 4,4 mL Modified Human Tubal Fluid (Katalog Nr. 90126) c. Verschliessen Sie das Zentrifugeglas und kehren Sie es behutsam 3 bis 4 mal um, um eine komplette Mischung zuzulassen. d. Etikettieren Sie das Zentrifugeglas als “OBERSCHICHTt”. 2. Lower Layer solution- 90% [Unterschichtloesung-90%]: a. Aliquotieren Sie 10 mL Stock Solution in einem sterilen Zentrifugeglas und verschliessen Sie es (keine weitere Verduennungen werden benoetigt – Stock Solution ist 90%). b. Etikettieren Sie das Zentrifugeglas als “UNTERSCHICHT” 3. Setzen Sie zum ALLGEMEINEN VERFAHREN Abschnitt des Produkteinsatzes fort. (ANMERKUNG: 10 mL Oberschicht und 10 mL Unterschicht werden ungefaehr 5 Samenproben verarbeiten) Katalog Nr. 99306 – KONZENTRAT Kolloid-Kieselerdekonzentrat ist für weitere Verdünnung zu brauchbare Konzentrationen der Dichtegradienten bestimmt; formuliert in einem isotonischen Puffer und naehert die Dichte von unverdünntem Percoll® an. ISolate KONZENTRAT wurde entsprechend diesem Paketeinsatz bei 50% und 90% Gradient ausgewertet. Jedes Labor kann beschliessen, die Gradienten bei unterschiedlichen Konzentrationen zu bilden, die für die Wirksamkeit ausgewertet werden sollten. A. Vorgeschlagene Materialien ISolate Concentrate • Irvine Scientific Katalog Nr. 99306 Modified Human Tubal Fluid • Irvine Scientific Katalog Nr. 90126 Sperm Washing Medium • Irvine Scientific Katalog Nr. 9983 Steriles, wegwerfbares konisches Zentrifugeglaeser • Irvine Scientific Katalog Nr. IS-325 Pasteurpipetten, Steriler Zentrifugebrutkasten, 37°C B. Gradientvorbereitung: Zwei Lösungen werden benoetigt, um die Trennung methode des Spermagradients durchzuführen: Eine Oberschicht und eine Unterschicht. 1. Oberschichtloesung – 50% a. Nehmen Sie das CONCENTRATE (Katalog Nr. 99306) und pipettieren Sie 4,5 mL in einem sterilen Zentrifugeglas. b. Fuegen Sie 5,5 mL Modified Human Tubal Fluid (Katalog Nr. 90126) hinzu. c. Verschliessen Sie das Zentrifugeglas und kehren Sie sorgfaeltig 3 bis 4 mal um, um eine komplette Mischung zuzulassen. d. Etikettieren Sie das Zentrifugeglas als “OBERSCHICHT”. 2. Unterschichtloesung – 90% a. Nehmen Sie CONCENTRATE (Katalog Nr. 99306) und pipettieren Sie 8,1 mL in einem sterilen Zentrifugeglas b. Fuegen Sie 1,9 mL Modified Human Tubal Fluid (Katalog Nr. 90126) hinzu. c. Verschliessen Sie das Zentrifugeglas und kehren Sie sorgfaeltig 3 bis 4 mal um, um eine komplette Mischung zuzulassen d. Etikettieren Sie das Zentrifugeglas als “UNTERSCHICHT”. 3. Setzen Sie zum ALLGEMEINEN VERFAHREN Abschnitt des Paketeinsatz fort. Anmerkung: Die Bezeichnungen 50% und 90% bedeuten nicht eine tatsächliche Konzentration. Die 50% und die 90% sind die relativen Konzentrationen, die auf der vorherigen Namenklatur basieren. Das bedeuted, dass eine 1:9 Verdünnung von Percoll® is gleichwertig zu einer Funktion 100% der isotonische Loesung ALLGEMEINES VERFAHREN Das folgende ist ein allgemeines Verfahren für eine zweistufige Gradientstrennung des freibeweglichen Sperma vom Samen. Das Volumen und die Konzentration koennen geändert werden, um jedes Labors’ Präferenz zu entsprechen (d.h. Mini-Steigung [oder Mini-Gradient], kaeltekonservierter Samen, Dreischichtsgradient). 1. Die Temperatur von alle Mediumbestandteile sollte bei der Raumtemperatur oder 37°C sein. 2. Mit einer sterilen Pipette uebertragen Sie 1,5 mL bis 2,0 mL der UNTERSCHICHT auf ein steriles konisches Wegwerfzentrifugeglas. 3. Mit einer sterilen Pipette uebertragen Sie ein gleiches Volumen von OBERSCHICHT auf die UNTERSCHICHT. Das wird getan, indem man die Oberflaeche der UNTERSCHICHT mit der Pipettenspitze an der Seite des Zentrifugeglas in Beruehrung kommt. Verteilen Sie sorgfaeltig die “OBERSCHICHT” mit der Pipettenspitze um den Umkreis des Zentrifugeglases in einer aufwaerts Bewegung als das Niveau der OBERSCHICHT steigt. ITALIANO 4. Mit einer neuen sterilen Pipette, fuegen Sie sorgfaeltig 1,5 – 2,0 mL verfluessigter Samen auf die OBERSCHICHT hinzu. 5. Zentrifugierien Sie ungefaehr 200 – 300xg fuer 10 bis 20 Minuten.* Stellen Sie sorgfaeltig die Tablette heraus, entweder indem Sie weg von der “OBERSCHICHT” und von der “UNTERSCHICHT” ansaugen, oder entfernen Sie direkt die Tablette und uebertragen Sie auf ein neues steriles Zentrifugeglas *Anmerkung: Die Qualität der Spermaprobe sollte ausgewertet und in Erwaegung gezogen werden, um die korrekte Zentrifugierungsgeschwindigkeit und Zeit festzustellen. Diese sollten entsprechend der einzelnen Probestückqualität für Optimierung des Verfahrens justiert werden. 6. Mit einer neuen sterilen Pipette, fügen Sie 2,0 - 3,0 mL des passenden Spuelungsmediums wie das Sperm Washing Medium (Irvine Scientific Katalog # 9983) oder Modified HTF (Irvine Scientific Katalog # 90126), mit Proteinergänzung hinzu. Resuspendieren Sie die isolierte Tablette. Zentrifugieren Sie (~200xg) fuer 8 bis 10 Minuten und entfernen Sie den Supernatant. Wiederholen Sie diese Massnahme für eine zweite Spuelung. Werfen Sie den Supernatant weg und resuspendieren Sie die Tablette mit einer ensprechenden Volumen des passenden Medium. Die Probe ist jetzt zur Analyse bereit. Fuer weitere Einzelheiten zum Gebrauch diesen Produkten soll das Labor in seinen eigenen Protokollen nachschlagen, die für die spezifische medizinische Einstellung spezifisch entwickelt und optimiert worden sind. LAGERBEDINGUNGEN UND STABILITAET Bewahren Sie die ungeoeffneten Flaschen bei 2º to 8ºC auf. Wärmen Sie das Medium zur umgebenden oder der Temperatur des Brutkastens (37°C) vor Gebrauch. Frieren Sie es nicht oder stellen Sie es nicht in den hohen Temperaturen heraus. ISolate ist bis zum Verfallsdatum beständig, das auf die Schachtel und Flaschenetikett gezeigt wird. Bewahren Sie das Medium wie angewiesen auf. VORSICHTSMASSNAHMEN UND WARNUNGEN Diese Vorrichtung ist für die Anwendung durch Personal vorgesehen, das in Verfahren ausgebildet wurde, welche die für diese Vorrichtung angegebene zugelassene Anwendung beinhalten. ISolate wird undurchlässig aussehen. Das ist normal fuer dieses Produkt. Benutzen Sie keine Phiole des Mediums, wenn es Beweis der Feststoffe oder Kontamination (uneinheitliche Truebung) gibt. ISolate sollte fest mit einer Kappe bedeckt werden, wenn es in einem CO2 Brutkasten verwendet wird, um die pHVeränderungen zu vermeiden. Dieses Produkt enthält keine Konservierungsmittel, Antibiotika oder Proteinergänzungen. Um die Verschmutzung zu vermeiden, muss das Produkt mit aseptischer Methode benutzt werden. Im Schadensfalle, verwenden Sie das Medium nicht. Bitte werfen Sie es weg oder senden Sie zum Hersteller fuer Austausch zurück. ORSICHT: Nach US-Bundesgesetz darf dieses Gerät nur von oder auf Antrag von einem Arzt verkauft werden. DESCRIZIONE DEL PRODOTTO ISolateâ è un terreno di gradiente di densità preparato per dividire la frazione mobile di sperma dal fluido seminale. Come sistema gradiente di due strati, il terreno riduce effetivamente i contaminanti cellulari come sperma morti, cellule di sangue bianco e detriti miscellani. Il campione che risulta contiene sperma con preponderanza mobile. ISolate è un suspensione colloidale di particelle di silice stabilizzato con silane hidrofilico legato covalentamente in HTF pulito con HEPES che è filtrato su membrana e preparato in condizioni di sterilità. Il livello di sicurezza di sterilità(SAL) è 10-3. ISolate è analizzato e trovato di non avere pirogeni via il test pirogene di coniglio. ESPAÑOL 5. Centrifugare per 10 – 20 minuti approssimativamente a 200 – 300xg.* Esporre attentamente la tavoletta con il levare degli “STRATI SUPERIORI ED INFERIORI” via aspirazione, o con il allontanamento diretto della tavoletta ed il trasferimento a un tubo centrifugo sterilizzato. DESCRIPCIÓN DEL PRODUCTO El ISolate® es un medio de gradiente de densidades diseñado para separar la fracción móvil de esperma del fluido seminal. Como un sistema de gradiente de dos capas, reduce eficazmente los contaminantes celulares como espermatozoides muertos, leucocitos y otros restos. *Nota: La qualità del campione di sperm dovrebbe essere valutata e dovrebbe essere considerata quando se determina la velocità e tempo di centrifugazione propri. Questi dovrebbero essere aggiustati secondo la qualità del campione individuale per l’ottimizzazione della procedura. El ISolate es una suspensión coloidal de partículas de sílice estabilizada con silano hidrofílico unido covalentemente en HTF tamponado con HEPES, que ha sido filtrada a través de membrana y procesada en condiciones asépticas. El nivel de garantía de esterilidad (SAL) es de 10-3. El ISolate ha sido testado para pirógenos con resultados negativos por el test de pirógenos en conejo. ISTRUZIONI PER L’ USO Catalogo # 99264 – SILICE COLLOIDALE PRONTO PER USO A DUE CONCENTRAZIONI (50% E 90%) A. Materie Suggerite: ISolate • Catalogo di Irvine Scientific # 99264 (arrezzatura/ cassetta di fiala di 6mL, 50mL o arrezzatura di fiala di 100 mL Terreno di Sciaquio di Sperma • Catalogo d’Irvine Scientific #9983 Tubi buttabili conici centrifugi • Catalogo d’Irvine Scientific #IS-325 Pipette Pasteur, sterilizzate Centrifugo Incubatore, 37° C 6. Usando una nuova pipetta sterilizatta, aggiungere da 2.0 a 3.0 mL di sostanza di spruzzetta appropriata come Sostanza di Spruzzetta di Sperma (IS Catalogo #9983) o HTF Modificato (ISCatalogo #9963) con integrazione di proteina . Risospendere la pallina isolata. Centrifugare (~200xg) per 8 -10 minuti e toglie il supernatante. Ripetere questo passo per una seconda spruzzetta. Butare il supernatante ed risospendere la pallina usando un volume conveniente di sostanza appropriata. Il campione è adesso pronto per l’analisi. B. Preparazione Gradiente: Le diluzioni preliminarie non sono necessarie. Ogni fiala di gradiente di strato superiore ed Inferiore è pronto per l’uso. Prosegui a sezione di PROC DURA GENERALE del l’inserzione del prodotto. ISTRUZIONI DI STOCCAGIO E STABILITA Stoccare i contenitori non aperti refrigerati da 2° C a 8° C. Catalogo #99275 – Soluzione di Sostegno (Stock) 90% terreno di gradiente di densità per uso in una procedura di uno stado o per ulteriore diluzione. Non congelare o esporre a temperature alte. A. Materie Suggerite: Soluzione di Sostegno d’ISolate • Catalogo d’Irvine Scientific #99275 Fluido Tubarico Umano Modificato • Catalogo d’Irvine Scientific #90126 Terreno di Sciaquio di Sperma • Catalogo d’Irvine Scientific #9983 Tubi buttabili conici centrifugi • Catalogo d’Irvine Scientific #IS-325 Pipette Pasteur, sterilizzate Centrifugo Incubatore, 37° C B. Preparazione Gradiente: Si richiede due soluzioni per eseguire il metodo di separazione di sperma gradiente: uno strato superiore e uno strato inferiore. 1. Soluzione di Strato Superiore – 50%: a) Mettere SOLUZIONE DI SOSTEGNO(STOCK SOLUTION) –(Catalogo #99275) e una pipetta di 5.6 mL in un tubo centrifugo sterilizzato b) Aggiungere 4.4 mL di Fluido Tubarico Umano Modificato(Catalogo #90126) c) Chiudere il tubo e capovolgere gentilmente per permettere miscuglio completo. d) Classificare il tubo come “STRATO SUPERIORE” 2. Soluzione di Strato Inferiore – 90%: a) Aliquotare 10 mL della SOLUZIONE DI SOSTEGNO(STOCK SOLUTION–Catalogo #99275) in un tubo e coperchio di centrifugo sterilizzato – (No ulteriori diluzioni sono necessari – Soluzione di Sostegno è 90%) b) Classificare il tubo come “STRATO INFERIORE” 3. Prosegui a sezione di PROCEDURA GENERALE dell’inserzione del prodotto. (APPUNTO: 10 mL DI STRATO SUPERIORE E DI S T R ATO I N F E R I O R E T R AT TA N N O APPROSSIMATIVAMENTE 5 CAMPIONI DI SPERMA). Catalogo #99306 – Concentrato Concentrazione di silice colloidale per ulteriore diluzione a gradienti di densità; formulato in un tampone isotonico(isotonic) e approssima la densità di Percollâ. Concentrato d’ISolate fù valutato in accordo con questa inserzione di pachetto gradienti di 50% e 90%. Ogni laboratorio puo scegliere per produrre gradienti a concentrazioni differenti che devono essere evaluati per efficacia. A. Materie Suggerite: Concentrato d’ISolate • Catalogo d’Irvine Scientific #99306 Fluido Tubarico Umano Modificato • Catalogo d’Irvine Scientific #90126 Terreno di Sciaquio di Sperma • Catalogo d’Irvine Scientific #9983 Tubi buttabili conici centrifugi • Catalogo d’Irvine Scientific #IS-325 Pipette Pasteur, sterilizzate Centrifugo Incubatore, 37° C B. Preparazione Gradiente: Si richiede due soluzioni per eseguire il metodo di separazione di sperma gradiente: uno strato superiore e uno strato inferiore. 1. Soluzione di Strato Superiore – 50%: a) Mettere CONCENTRATO (Catalogo # 99306) e pipetta di 4.5 mL in un tubo centrifugo sterilizzato b) Aggiungere 5.5 mL di Fluido Tubarico Umano Modificato(Catalogo #90126) c) Coprire il tubo e capovolgere gentilmente 3 o 4 volte per miscuglio completo. d) Classificare tubo come “STRATO SUPERIORE” 2. Soluzione di Strato Inferiore – 90% a) Mettere CONCENTRATO (Catalogo # 99306) e pipetta di 8.1 mL in un tubocentrifugo sterilizzato b) Aggiungere 1.9 mL di Fluido Tubarico Umano Modificato(Catalogo #90126) c) Coprire il tubo e capovolgere gentilmente 3 o 4 volte per miscuglio completo d) Classificare il tubo come “STRATO INFERIORE” 3. Prosegui a sezione di PROCEDURA GENERALE dell’nserzione del prodotto. APPUNTO: I TERMINI 50% E 90% N O N R A P P R E S E N TA N N O U N A C O N C E N T R A Z I O N E E F F E T I VA . L E 50% E 90% SONO CONCENTRAZIONI RELATIVE BASATE ALLA NOMENCLATURA PRECEDENTE CHE DEFINI(ACCENT) UNA DILUZIONE DI PERCOLLâ DI 1:9 UGUALE A UNA SOLUZIONE OPERANTE, ISOTONICA DI 100%. C O N S I D E R A Z I O N I D I T R AT TA M E N T I SPECIALI Il seguente è una procedura generale per una seperazione gradiente di due strati di sperma mobile(motile sperm) dallo sperma(semen). Il volume e concentrazione possono essere modificati per soddisfare ogni preferenza del laboratorio(per esempio mini-gradiente, sperma criopreservata, gradiente di tre-strati). 1. Alzare tutti i componenti di terreno a temperatura ambientale o 37°C. 2. Utilizzando una pipetta sterilizzata, trasferire 1.5 – 2.0 mL del “STRATO INFERIORE” a un tubo centrifugo, buttabile, conico, sterilizzato. 3. Utilizzando una nuova pipetta sterilizzata, trasferire lo stesso volume di “STRATO SUPERIORE” sopra allo “STRATO INFERIORE”. Questo è fatto via toccare la superficie dello “STRATO INFERIORE” al lato/ fianco del tubo con la punta della pipetta. Dispensi attentamente lo “STRATO SUPERIORE” via girare a spirale la punta della pipetta attorno alla circonferenza del tubo in movimento ascendente come il livello dello “STRATO SUPERIORE” alza. 4. Mettere gentilmente 1.5 – 2.0 mL di sperma liquificata sopra lo “STRATO SUPERIORE” utilizzando una pipetta nuova, sterilizzata. Per ulteriori dettagl sull’uso de queste prodotti, il laboratorio dovrebbe consultare le sue protocolli/tecniche standard che sono statti specificamente fatti ed ottimizzatti per la sua impianto. Riscaldare a temperatura ambientale o temperatura d’incubatore(incubator) – (37° C) prima dell’uso. Quando sono stoccate direttamente, ISolate è stabile fino alla data di scadenza mostrata sulle etichette della bottiglia e della scatola. PRECAUZIONI E AVVERTIMENTI Questo dispositivo è previsto per l’uso da parte di personale addestrato nelle procedure che comprendono le applicazioni indicate per le quali il dispositivo è previsto. ISolate si vede opaco. Questo è normale per questo prodotto. Non usare qualsiasi fiale o terreno che ha evidenza di sostanze particolari o contaminazione (torbidezza non uniforme). ISolate deve essere chiuso strettamente quando è utilizzato in un incubatore CO2 per evitare cambi di pH. Questo prodotto non contiene preservativi, antibiotici, o supplementi di proteina. Per evitare contaminazione, il prodotto deve essere utilizzato con tecniche assetiche. IN CASO DI DANNO, NON USARE. PER FAVORE ELIMINARE O REGRESSALO ALLA MANIFATTURA PER SOSTITUZIONE. CAUTELA: La legge federale (U.S.) se limita questo meccanismo/prodotto a la vendita da o sull’ordine di un medico o dottore. INSTRUCCIONES DE USO Nº de Catálogo 99264 – SÍLICE COLOIDAL LISTA PARA USAR A DOS CONCENTRACIONES (50% y 90%) A. Material sugerido: ISolate • Irvine Scientific, Nº catálogo 99264 (kit de viales de 6mL, 50mL o kit de viales de 100mL) Medio de lavado de esperma • Irvine Scientific, Nº catálogo 9983 Tubos de centrífuga cónicos estériles y desechables • Irvine Scientific, Nº catálogo IS-325 Pipetas Pasteur estériles Centrífuga Incubador a 37ºC B. Preparación del gradiente: No son necesarias diluciones preliminares. Cada vial de capa de gradiente superior e inferior está lista para usar. Continue con la sección “PROCEDIMIENTOS GENERALES” Nº de Catálogo 99275 – SOLUCIÓN STOCK Medio de gradiente de densidades al 90% para ser utilizado en protocolos de un solo paso o para posteriores diluciones. A. Material sugerido: ISolate - Solución Stock • Irvine Scientific, Nº Cat. 99275 Medio HTF modificado • Irvine Scientific, Nº Cat. 90126 Medio de lavado de esperma • Irvine Scientific, Nº Cat. 9983 Tubos de centrífuga cónicos estériles y desechables • Irvine Scientific, Nº Cat. IS-325 Pipetas Pasteur estériles Centrífuga Incubador a 37ºC B. Preparación del gradiente: Para llevar a cabo una separación de esperma por gradiente se necesitan dos soluciones: la capa superiory la capa inferior. 1. Solución de la capa superior: 50% a. Coger la SOLUCIÓN STOCK (Nº Cat. 99275) y pipetear 5,6mL en un tubo de centrífuga estéril. b. Añadir 4,4 mL de HTF modificado (Nº Cat. 90126) c. Tapar el tubo e invertir suavemente 3 o 4 veces para permitir una mezcla completa. d. Etiquetar el tubo como “capa superior”. 2. Solución de la capa inferior: 90% a. Alicuotar 10mL de la SOLUCIÓN STOCK en un tubo estéril de centrífuga y taparlo. (No se necesitan más diluciones. La solución stock está al 90%). b. Etiquetar el tubo como “CAPA INFERIOR”. 3. Continúe en la sección de “PROCEDIMIENTOS GENERALES”. FRANÇAIS Nota: la calidad de la muestra de esperma debe ser evaluada y tomada en consideración para determinar el tiempo y la velocidad adecuados de centrifugación. Estos parámetros deben ajustarse conforme a la calidad individual de la muestra para optimizar el el proceso. * 6. Utilizando una nueva pipeta estéril, añadir 2.0 – 3.0 mL de un medio de lavado adecuado como el Medio de Lavado de Esperma (IS Nº Cat 9983) o HTF modificado (IS Nº Cat 90126) son suplemento proteico. Resuspender el sedimento. Centrifugar (aprox. 200xg) 8-10 minutos y descartar el sobrenadante. Repetir este paso para un segundo lavado. Descartar el sobrenadante y resuspender el sedimento utilizando un volumen adecuado de medio. La muestra está lista para el análisis. Para más detalles sobre la utilización de estos productos, consulte los protocolos de trabajo de su propio laboratorio, los cuales han sido desarrollados y especialmente optimizados de acuerdo a su programa médico particular. INSTRUCCIONES DE ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD Conserve las botellas no abiertas refrigeradas entre 2ºC y 8ºC. Atempere a temperatura ambiente o en un incubador (37ºC) antes de su uso. No congele ni exponga a temperaturas elevadas. El ISolate es estable hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta de la botella y de la caja, siempre que se conserve de acuerdo a las instrucciones recomendadas. PRECAUCIONES Y ADVERTENCIAS Este dispositivo debe ser utilizado por personal capacitado en procedimientos que incluyan la aplicación prevista para el mismo. El ISolate tiene un aspecto opaco. Esto es normal en este producto. No utilice ningún vial de medio con evidencias de contener partículas o contaminación (turbidez no homogénea). Los viales de ISolate deben estar herméticamente cerrados cuando se usen en un incubador de CO2 para evitar cambios de pH. Este medio no contiene conservantes, ni antibióticos ni suplementos proteicos. Para evitar contaminaciones, manipule el producto en condiciones de esterilidad. En caso de alteración del medio, no lo utilice. Por favor, descártelo o devuélvalo al fabricante para que lo reemplace. PRECAUCIÓN: Las leyes federales (U.S.) restringen la venta de este producto a la prescripción de un facultativo. Description du produit ISolate® est un gradient de densité conçu pour séparer la fraction des spermatozoïdes mobiles du plasma séminale. Système gradient à deux couches, il réduit efficacement les contaminations cellulaires telles que les spermatozoïdes morts, les globules blancs et les débris divers. Il en résulte une fraction de sperme contenant essentiellement les spermatozoïdes mobiles. ISolate, stérilisé par filtration, est une suspension colloïdale de particules de silice stabilisés par une liaison covalente au silane hydrophile, dans du milieu HTF tamponné au HEPES. Le niveau de stérilité de la solution est de 10-3 (Sterility Assurance Level). ISolate a été trouvé non-pyrogène par le “rabbit pyrogen test”. Conseils d’utilisation Référence 99264, Gradient de densité à deux concentrations 50% et 90%, prêt à l’utilisation A. Matériel suggéré : ISolate • % Irvine Scientific, référence 99264 (kit de 6 ml, 50mL ou de 100ml) Milieu de lavage du sperme • % Irvine Scientific, référence 9983 Tubes coniques pour centrifugeuse, jetables, stériles • % Irvine Scientific, référence IS-325 Pipettes Pasteur, stériles Centrifugeuse Etuve, 37°C B. Préparation du gradient : Pas de dilution préalable nécessaire. Chaque flacon de gradient supérieur et inférieur est prêt à l’utilisation. Aller à la section “Procédure générale” de cette notice. Référence 99275, Solution mère Milieu de gradient de densité à 90%, à utiliser dans le protocole à une étape ou pour des dilutions ultérieures. A. Matériel suggéré : ISolate, solution mère • % Irvine Scientific, référence 99275 Fluide tubulaire humain modifié • % Irvine Scientific, référence 90126 Milieu de lavage du sperme • % Irvine Scientific, référence 9983 Tubes coniques pour centrifugeuse, jetables, stériles • % Irvine Scientific, référence IS-325 Pipettes Pasteur, stériles Centrifugeuse Etuve, 37°C B. Préparation du gradient : Deux solutions sont requises pour réaliser la séparation des spermatozoïdes par la méthode de gradient de densité : une couche supérieure et une couche inférieure. 1. Solution pour la couche supérieure – 50% a. Prélever dans un tube conique stérile 5,6 ml de la solution mère (réf. 99275), b. Ajouter 4,4 ml de fluide tubulaire humain modifié (réf. 90126) c. Bouchonner le tube et le retourner 3-4 fois pour permettre un mélange complet d. Marquer ce tube “couche supérieure” 2. Solution pour la couche inférieure – 90% a. Prélever dans un tube conique stérile 10 ml de la solution mère (réf. 99275) (pas de dilution nécessaire, la solution mère est à 90%) b. Marquer ce tube “couche inférieure” 3. Aller à la section “Procédure générale” de cette notice (Remarque : 10 ml de couche supérieure et 10 ml de couche inférieure permettront de traiter approximativement 5 prélèvements de sperme) Nº de Catálogo 99306 – CONCENTRADO Concentrado de sílice coloidal para posteriores diluciones en gradientes de densidad; formulado en un tampón isotónico, se aproxima a la densidad del Percoll sin diluir. El ISolate Concentrado ha sido evaluado en gradientes del 50% y 90% de acuerdo a este Información de producto. Cada laboratorio puede elegir preparar los gradientes a concentraciones diferentes, previa comprobación de su efectividad. Référence 99306, Concentré Suspension colloïdale de silice concentrée à diluer pour former des gradients de densité ; formulé comme un tampon isotonique dont la densité est approximativement la même que celle du Percoll® non dilué. Le concentré ISolate® a été évalué pour cette notice par des gradients de 50% et 90%. Chaque laboratoire pourrait choisir de faire des gradients de différentes concentrations. l’efficacité de ces derniers doit être évaluée. A. Material sugerido: ISolate - Concentrado • Irvine Scientific, Nº Cat. 99306 Medio HTF modificado • Irvine Scientific, Nº Cat. 90126 Medio de lavado de esperma • Irvine Scientific, Nº Cat. 9983 Tubos de centrífuga cónicos estériles y desechables • Irvine Scientific, Nº Cat. IS-325 Pipetas Pasteur estériles Centrífuga Incubador a 37ºC A. Matériel suggéré : ISolate, Concentré • % Irvine Scientific, référence 99306 Fluide tubulaire humain modifié • % Irvine Scientific, référence 90126 Milieu de lavage du sperme • % Irvine Scientific, référence 9983 Tubes coniques pour centrifugeuse, jetables, stériles • % Irvine Scientific, référence IS-325 Pipettes Pasteur, stériles Centrifugeuse Etuve, 37°C B. Preparación del gradiente: Para llevar a cabo una separación de esperma por gradi ente se necesitan dos soluciones: la capa superior y la capa inferior. 1. Solución de la capa superior: 50% a. Coger el CONCENTRADO (Nº Cat. 99306) y pipetear 4,5 mL en un tubo de centrífuga estéril. b. Añadir 5,5 mL de HTF modificado (Nº Cat. 90126) c. Tapar el tubo e invertir suavemente 3 o 4 veces para permitir una mezcla completa. d. Etiquetar el tubo como “CAPA SUPERIOR”. 2. Solución de la capa inferior: 90% a. Coger el CONCENTRADO (Nº Cat. 99306) y pipetear 8,1 mL en un tubo de centrífuga estéril. b. Añadir 1,9 mL de HTF modificado (Nº Cat. 90126) c. Tapar el tubo e invertir suavemente 3 o 4 veces para permitir una mezcla completa. d. Etiquetar el tubo como “CAPA INFERIOR”. 3. Continúe en la sección de “PROCEDIMIENTOS GENERALES”. B. Préparation du gradient : Deux solutions sont requises pour réaliser la séparation des spermatozoïdes par la méthode de gradient de densité : une couche supérieure et une couche inférieure. 1. Solution pour la couche supérieure – 50% a. Prélever dans un tube conique stérile 4,5 ml de la solution CONCENTRE (réf. 99306) b. Ajouter 5,5 ml de fluide tubulaire humain modifié (réf. 90126) c. Bouchonner le tube et le retourner 3-4 fois pour permettre un mélange complet d. Marquer ce tube “couche supérieure” 2. Solution pour la couche inférieure – 90% a. Prélever dans un tube conique stérile 8,1 ml de la solution CONCENTRE (réf. 99306) b. Ajouter 1,9 ml de fluide tubulaire humain modifié (réf. 90126) c. Bouchonner le tube et le retourner 3-4 fois pour permettre un mélange complet d. Marquer ce tube “couche inférieure” 3. Aller à la section “Procédure générale” de cette notice Nota: Los términos 50% y 90% no equivalen a una co centración real. El 50 % y el 90% son concentraciones relativas basadas en una nomenclatura anterior que definía una solución 1:9 de Percoll® como una solución de trabajo isotónica al 100%. PROCEDIMIENTOS GENERALES El protocolo que aquí se describe es un procedimiento general para separar del semen la fracción móvil de esperma a través de un gradiente. El volumen y la concentración se pueden modificar para adecuarse a las preferencias de cada laboratorio (p.ej. mini-gradiente, semen criopreservado, gradiente de 3 capas). 1. Atemperar todos los medios a temperatura ambiente o a 37ºC. 2. Utilizando una pipeta estéril, transferir 1,5 – 2,0 mL de medio de la “CAPA INFERIOR” a un tubo de centrífuga cónico, estéril y desechable. 3. Utilizando otra pipeta estéril, transferir un volumen igual al del paso 1 de la “CAPA SUPERIOR” a la parte superior de la “CAPA INFERIOR”. Para ello, colocar con la punta de la pipeta en la parte superior de la capa tocando la pared del tubo. Dispensar con mucho cuidado la “CAPA SUPERIOR” moviendo la pipeta en círculos alrededor de la circunferencia del tubo subiendo a medida que se aumenta la “CAPA INFERIOR”. 4. Coloque suavemente 1,5 – 2,0 mL de semen licuado sobre la “CAPA SUPERIOR” con otra pipeta estéril. 5. Centrifugar durante 10-20 minutos a 200-300 x g*. Con mucho cuidado, aspirar y desechar las capas inferior y superior o bien. Remarque : les termes 50% et 90% ne représentent pas des concentrations réelles. Les 50% et 90% sont des concentrations relatives basées sur la précédente nomenclature qui a défini la dilution 1:9 du Percoll® comme étant égale à 100% de solution isotonique. Procédure générale Ce qui suit est une méthode générale de séparation par gradient de densité des spermatozoïdes mobiles du plasma séminale. Les volumes et les concentrations peuvent être modifiés pour répondre aux préférences de chaque laboratoire (ex. Mini gradient, sperme congelé, gradient à trois couches). 1. Amener tous les milieux à température ambiante ou les préchauffer à 37°C. 2. A l’aide d’une pipette stérile, transférer 1,5 – 2,0 ml de la ‘couche inférieure’ dans un tube conique pour centrifugeuse, jetable, stérile. 3. A l’aide d’une nouvelle pipette stérile, transférer un volume équivalent (1,5 – 2,0 ml) de la ‘couche supérieure’ et la déposer au-dessus de la ‘couche inférieure’. Ceci est réalisé en touchant la surface de la ‘couche inférieure’ par le bout de la pipette. Répartir soigneusement la ‘couche supérieure’ en tournant la pipette autour de la paroi du tube dans un mouvement ascendant à mesure que la ‘couche supérieure’ monte. 4. Soigneusement placer 1,5 – 2,0 ml de sperme liquéfié sur la ‘couche supérieure’ en utilisant une nouvelle pipette stérile. 5. Centrifuger à 200-300xg* pendant 10-20 minutes *Remarque: la qualité du prélèvement du sperme doit être évaluée et prise en considération lors de la détermination de la durée et de la vitesse de centrifugation appropriées. Pour une optimisation de la procédure, ces dernières doivent être ajustées selon la qualité de chaque prélèvement. 6. A l’aide d’une nouvelle pipette stérile, ajouter 2,0 –3,0 ml d’un milieu de lavage adéquat comme le milieu de lavage du sperme (IS réf. 9983) ou le milieu HTF modifié (IS réf. 90126) supplémenté en protéines. Resuspendre le culot de centrifugation. Centrifuger (~200xg) pendant 8-10 minutes et aspirer le surnageant. Répéter cette étape (deuxième lavage). Aspirer le surnageant et resuspendre le culot dans le volume désiré d’un milieu adéquat. Le prélèvement est maintenant prêt à l’analyse. Pour plus de détails sur l’utilisation de ce produit, chaque laboratoire doit consulter ses propres procédures et protocoles standards spécialement développés et optimisés pour chaque établissement médical particulier. C onsignes de conservation et stabilité Conserver les flacons non entamés réfrigérés entre 2 et 8°C. Amener à température ambiante ou préchauffer à 37°C (dans une étuve) avant utilisation. Ne pas congeler ou exposer à des températures élevées. Conservé comme indiqué ci-dessus, ISolate est stable jusqu’à la date d’expiration indiquée sur la boite et les étiquettes des flacons. Précautions et mise en garde Ce dispositif est destiné à une utilisation par un personnel formé aux procédures comprenant l’application indiquée pour laquelle le dispositif est destiné. ISolate apparaîtra opaque. Ceci est normal pour ce produit. N’utiliser aucun flacon de milieu s’il contient des particules ou s’il est contaminé (non uniformément trouble). Lors de l’incubation de ISolate dans une étuve à CO2, les flacons doivent être bien fermés pour éviter les changements de pH. Ce produit ne contient ni conservateurs, ni antibiotiques, ni supplément protéiques. Pour éviter les contaminations, il doit être manipulé stérilement. ATTENTION : La loi fédérale limite la vente de ce dispositif aux médecins ou sur ordre d’un médecin. O ISolate é uma suspensão coloidal de partículas de sílica estabilizada com silano hidrofílico unido covalentemente em HTF tamponado com HEPES, que foi filtrado através de membrana e processado em condições estéreis. O nivel de garantia de esterilidade (SAL) é de 10-3. O ISolate foi testado para pirogénios com resultados negativos pelo teste de pirogénios no coelho. INSTRUÇÕES DE UTILIZAÇÃO Nº de Catálogo 99264 – SÍLICA COLOIDAL P R O N TA PA R A U T I L I Z A R A D U A S CONCENTRAÇÕES (50% E 90%) A. Material sugerido: ISolate • Irvine Scientific, Nº catálogo 99264 (kit de recipientes de6mL, 50mL ou kit de recipientes de 100mL) Meio de lavagem dos espermatozóides • Irvine Scientific, Nº catálogo 9983 Tubos de centrífuga cónicos estéreis e descartáveis • Irvine Scientific, Nº catálogo IS-325 Pipetas Pasteur, estéreis Centrífuga Incubadora a 37ºC B. Preparação do gradiente: Não são necessárias diluições preliminares. Cada recipiente de camada de gradiente superior e inferior está pronta para utilizar. Continue com a secção “PROCEDIMENTOS GERAIS” Nº de Catálogo 99275 – SOLUÇÃO STOCK Meio de gradiente de densidade a 90% para ser utilizado em protocolos de uma só etapa ou para posteriores diluições. A. Material sugerido: ISolate - Solução Stock • Irvine Scientific, Nº Cat. 99275 Meio HTF modificado • Irvine Scientific, Nº Cat. 90126 Meio de lavagem dos espermatozóides • Irvine Scientific, Nº Cat. 9983 Tubos de centrífuga cónicos estéreis e descartáveis • Irvine Scientific, Nº Cat. IS-325 Pipetas Pasteur, estéreis Centrífuga Incubadora a 37ºC B. Preparação do gradiente: Para levar a cabo uma separação de espermatozóides por gradiente necessitam-se de duas soluções: a camada superior e a camada inferior. 1. Solução da camada superior: 50% a. Pipetar da SOLUÇÃO STOCK (Nº Cat. 99275) 5,6mL para um tubo de centrífuga estéril. b. Adicionar 4,4 mL de HTF modificado (Nº Cat. 90126) c. Tapar o tubo e inverter suavemente 3 ou 4 vezes para permitir uma mistura completa. d. Etiquetar o tubo como “CAMADA SUPERIOR”. 2. Solução da camada inferior: 90% a. Inserir uma alíquota de 10mL da SOLUÇÃO STOCK num tubo estéril de centrífuga e tapá-lo. (Não são necessárias mais diluições. A solução stock está a 90%). b. Etiquetar o tubo como “CAMADA INFERIOR”. 3. Continuar na secção de “PROCEDIMENTOS GERAIS”. (Nota: 10 ml da “CAMADA SUPERIOR” e 10 ml da “CAMADA INFERIOR” processam aproximadamente 5 amostras de sémen) Nº de Catálogo 99306 – CONCENTRADO Concentrado de sílica coloidal para posteriores diluições em gradientes de densidade; formulado num tampão isotónico, aproxima-se da densidade do Percoll não diluído. O ISolate Concentrado foi avaliado em gradientes de 50% e 90% de acordo com este folheto informativo de produto. Cada laboratório pode escolher preparar os gradientes a concentrações diferentes, os quais devem ser previamente avaliados para a sua eficácia. A. Material sugerido: ISolate - Concentrado • Irvine Scientific, Nº Cat. 99306 Meio HTF modificado • Irvine Scientific, Nº Cat. 90126 Meio de lavagem dos espermatozóides • Irvine Scientific, Nº Cat. 9983 Tubos de centrífuga cónicos estéreis e descartáveis • Irvine Scientific, Nº Cat. IS-325 Pipetas Pasteur, estéreis Centrífuga Incubadora a 37ºC B. Preparação do gradiente: Para levar a cabo uma separação de espermatozóides por gradiente necessitam-se de duas soluções: a camada superior e a camada inferior. 1. Solução da camada superior: 50% a. Pipetar 4,5 mL do CONCENTRADO (Nº Cat. 99306) para um tubo de centrífuga estéril. b. Adicionar 5,5 mL de HTF modificado (Nº Cat. 90126) c. Tapar o tubo e inverter suavemente 3 ou 4 vezes para permitir uma mistura completa. d. Etiquetar o tubo como “CAMADA SUPERIOR”. 2. Solução da camada inferior: 90% a. Pipetar 8,1 mL do CONCENTRADO (Nº Cat. 99306) para um tubo de centrífuga estéril. b. Adicionar 1,9 mL de HTF modificado (Nº Cat. 90126) c. Tapar o tubo e inverter suavemente 3 ou 4 vezes para permitir uma mistura completa. d. Etiquetar o tubo como “CAMADA INFERIOR”. 3. Continue na secção de “PROCEDIMENTOS GERAIS”. Nota: Os valores 50% e 90% não representam uma conc tração real. Os valores 50% e 90% são concentrações relativas baseadas numa nomenclatura anterior que definia uma solução 1:9 de Percoll® como uma solução de trabalho isotónica a 100%. PROCEDIMENTOS GERAIS O protocolo que aqui se descreve é um procedimento geral para separar do sémen a fracção móvel dos espermatozoides através de um gradiente. O volume e a concentração podem-se modificar para ajustar-se às preferências de cada laboratório (p.ex. mini-gradiente, sémen crioconservado, gradiente de 3 camadas). 1. Coloque todos os meios à temperatura ambiente ou a 37ºC. 2. Utilizando uma pipeta estéril, transferir 1,5 – 2,0 mL de meio da “CAMADA INFERIOR” para um tubo de centrífuga cónico, estéril e descartável. 3. Utilizando outra pipeta estéril, transferir um volume igual ao do passo 1 de “CAMADA SUPERIOR” para a “CAMADA INFERIOR”. Para isso, colocar a ponta da pipeta na parte superior da “CAMADA INFERIOR” tocando na parede do tubo. Distribuir cuidadosamente a “CAMADA SUPERIOR” movendo a pipeta em círculos em redor da circunferência do tubo subindo à medida que aumenta o nível da “CAMADA SUPERIOR”. 4. Coloque suavemente 1,5 – 2,0 mL de sémen liquefeito sobre a “CAMADA SUPERIOR” com outra pipeta estéril. ČESKY ΕΛΛΗΝΙΚΆ PORTUGUÊS Descrição do Produto O ISolate ® é um meio de gradiente de densidades concebido para separar a fracção móvel do espermatozóide do fluído seminal. Como um sistema de gradiente de duas camadas, reduz eficazmente os contaminantes celulares como espermatozóides mortos, leucócitos e outros restos. 5. Centrifugar durante 10-20 minutos a 200-300 x g*. Cuidadosamente, exponha o sedimento quer através da aspiração das “CAMADAS SUPERIORES E INFERIORES”, ou directamente removendo o sedimento e transferindo-o para um novo tubo de centrífuga estéril. * Nota: a qualidade da amostra de espermatozóides deve ser avaliada e tomada em consideração para determinar o tempo e a velocidade de centrifugação adequadas. Estes parâmetros devem ajustar-se conforme a qualidade individual da amostra para optimizar o processo. 6. Utilizando uma nova pipeta estéril, adicionar 2.0 – 3.0 mL de meio de lavagem adequado como o Meio de Lavagem de Espermatozóides (IS Nº Cat 9983) ou HTF modificado (IS Nº Cat 90126) com suplemento proteico. Ressuspender o sedimento. Centrifugar (aprox. 200xg) 8-10 minutos e descartar o sobrenadante. Repetir este passo para numa segunda lavagem. Descartar o sobrenadante e ressuspender o sedimento utilizando um volume adequado de meio. A amostra está pronta para análise. Para detalhes adicionais sobre a utilização destes produtos, o laboratório deve consultar os seus próprios procedimentos padrão e protocolos que foram especificamente desenvolvidos e optimizados para a sua instituição. I N S T R U Ç Õ E S D E C O N S E R VA Ç Ã O E ESTABILIDADE Conserve os recipientes fechados refrigerados entre 2ºC e 8ºC. Aqueça à temperatura ambiente ou numa incubadora (37ºC) antes de utilizar. Não congele ou exponha a temperaturas altas. O ISolate é estável até à data de expiração indicada no rótulo do recipiente, sempre que seja conservado de acordo com as instruções recomendadas. PRECAUÇÕES E ADVERTÊNCIAS Este dispositivo deve ser utilizado por funcionários treinados em procedimentos aos quais se destina. O ISolate tem um aspecto opaco. Isto é normal para este produto. Não utilize nenhum recipiente de meio com evidências de conter partículas ou contaminação (turvação não homogénea). Os recipientes de ISolate devem estar hermeticamente fechados quando se utilizar uma incubadora de CO2 para evitar alterações de pH. Este meio não contém conservantes, antibióticos nem suplementos proteicos. Para evitar contaminações, manipule o produto em condições de esterilidade. E m caso de alteração do meio, não o utilize. Por favor, descarte-o o devolva-o ao fabricante para que seja substituído. CUIDADO: As leis federais dos EUA, restringem a venda deste dispositivo, apenas a médicos ou por sua prescrição. ΠΕΡΙΓΡΑΦΗ ΠΡΟΪΟΝΤΟΣ Το ISolate® είναι ένα μέσο κλίσης πυκνότητας σχεδιασμένο για διαχωρισμό του κινητικού κλάσματος του σπέρματος από το σπερματικό υγρό. Ως σύστημα κλίσης δύο στρωμάτων, μειώνει δραστικά τις κυτταρικές μολυσματικές ουσίες, όπως το νεκρό σπέρμα, τα λευκά αιμοσφαίρια και διάφορα υπολείμματα.Το δείγμα που προκύπτει περιέχει κυρίως κινητικό σπέρμα. Το ISolate είναι ένα φιλτραρισμένο με μεμβράνη, ασηπτικά επεξεργασμένο κολλοειδές αιώρημα από μόρια πυρίτιας σταθεροποιημένα με υδρόφιλο σιλάνιο με ισοσθενή δεσμό σε HEPES-ρυθμιστικό HTF. Το επίπεδο διασφάλισης αποστείρωσης (SAL) είναι 10-3. Το ISolate έχει ελεγχθεί και αποδειχθεί αρνητικό για πυρετογόνα από την εξέταση πυρετογόνων σε λαγούς. ΟΔΗΓΙΕΣ ΧΡΗΣΗΣ Αρ. Καταλόγου 99264 – ΕΤΟΙΜΗ ΓΙΑ ΧΡΗΣΗ ΚΟΛΛΟΕΙΔΗΣ ΠΥΡΙΤΙΑ ΣΕ ΔΥΟ ΣΥΓΚΕΝΤΡΩΣΕΙΣ (50% και 90%) A. Προτεινόμενα Υλικά: ISolate • Irvine Scientific Κατάλογος #99264 (6ml, 50ml ή 100 ml κιτ φιαλιδίων) Sperm Washing Medium • Irvine Scientific Κατάλογος #9983 Αποστειρωμένοι, κωνικοί σωλήνες φυγόκεντρου μιας χρήσης • Irvine Scientific Κατάλογος #IS-325 Πιπέτες Παστέρ, αποστειρωμένες Φυγόκεντρος Επωαστήρας, 37°C B. Προετοιμασία Κλίσης: Δεν χρειάζονται προκαταρκτικά διαλύματα. Κάθε φιαλίδιο κλίσης άνω και κάτω στρώματος είναι έτοιμο για χρήση. Προχωρήστε στο μέρος της ΓΕΝΙΚΗΣ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑΣ του φυλλαδίου του προϊόντος. Αρ. Καταλόγου 99275 - STOCK SOLUTION 90% πυκνότητας μέσο κλίσης για χρήση σε διαδικασία ενός βήματος ή για περαιτέρω διάλυση. A. Προτεινόμενα Υλικά: ISolate Stock Solution • Irvine Scientific Κατάλογος #99275 Modified Human Tubal Fluid • Irvine Scientific Κατάλογος #90126 Sperm Washing Medium • Irvine Scientific Κατάλογος #9983 Αποστειρωμένοι, κωνικοί σωλήνες φυγόκεντρου μιας χρήσης • Irvine Scientific Κατάλογος #IS-325 Πιπέτες Παστέρ, αποστειρωμένες Φυγόκεντρος Επωαστήρας, 37°C B. Προετοιμασία Κλίσης: Χρειάζονται δύο διαλύματα για την μέθοδο διαχωρισμού σπέρματος κλίσης: Ένα άνω και ένα κάτω στρώμα. Πάνω και κάτω στρώμα. 1.) Διάλυμα Άνω Στρώματος - 50%: α) Πάρτε STOCK SOLUTION (αρ. Καταλόγου 99275) και πιπεταρίστε 5.6 ml σε αποστειρωμένο σωλήνα φυγόκεντρου β) Προσθέστε 4.4 ml από Modified Human Tubal Fluid (αρ. Καταλόγου 90126) γ) Κλείστε τον σωλήνα και αναποδογυρίστε το απαλά 3-4 φορές για να επιτραπεί η πλήρης ανάδευση δ) Αναγράψτε στην ετικέτα του σωλήνα «ΑΝΩ ΣΤΡΩΜΑ» 2. Διάλυμα Κάτω Στρώματος - 90%: α) Υποπολλαπλασιάστε 10 ml του STOCK SOLUTION σε αποστειρωμένο σωλήνα φυγόκεντρου και σφραγίστε το – (Δεν χρειάζονται άλλες διαλύσεις - STOCK SOLUTION είναι 90%) β) Βάλτε ετικέτα στον σωλήνα ως «ΚΑΤΩ ΣΤΡΩΜΑ» 3. Συνεχίστε στο τμήμα ΓΕΝΙΚΗ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑ του φυλλαδίου του προϊόντος. (ΣΗΜΕΙΩΣΗ: 10 ml Άνω Στρώματος και 10 ml Κάτω Στρώματος, επεξεργάζονται κατά προσέγγιση 5 δείγματα σπέρματος.) Αρ. Καταλόγου 99306 - CONCENTRATE Συμπύκνωμα κολλοειδούς πυρίτιας για περαιτέρω διάλυση σε κλίσεις πυκνότητας. Σχηματίζεται σε ισοτονικό ρυθμιστικό διάλυμα και προσεγγίζει την πυκνότητα μη αραιωμένου Percoll®. Το ISolate® CONCENTRATE αξιολογήθηκε σύμφωνα με αυτό το φυλλάδιο συσκευασίας σε κλίσεις 50% και 90% . Κάθε εργαστήριο μπορεί να επιλέξει να δημιουργήσει κλίσεις με διαφορετικές συγκεντρώσεις που θα πρέπει να αξιολογηθούν για αποτελεσματικότητα. A. Προτεινόμενα Υλικά: ISolate® Συμπύκνωμα • Irvine Scientific Κατάλογος #99306 Modified Human Tubal Fluid • Irvine Scientific Κατάλογος #90126 Sperm Washing Medium • Irvine Scientific Κατάλογος #9983 Αποστειρωμένοι, κωνικοί σωλήνες φυγόκεντρου μιας χρήσης • Irvine Scientific Κατάλογος #IS-325 Πιπέτες Παστέρ, αποστειρωμένες Φυγόκεντρος Επωαστήρας, 37°C B. Προετοιμασία Κλίσης: Χρειάζονται δύο διαλύματα για την μέθοδο διαχωρισμού σπέρματος κλίσης: Ένα άνω και ένα κάτω στρώμα. 1. Διάλυμα Άνω Στρώματος - 50%: α) Πάρτε CONCENTRATE (αρ. Καταλόγου 99306) και πιπεταρίστε 4.5 ml σε αποστειρωμένο σωλήνα φυγόκεντρου β) Προσθέστε 5.5 ml από Modified Human Tubal Fluid (αρ. Καταλόγου 90126) γ) Κλείστε τον σωλήνα και αναποδογυρίστε το απαλά 3-4 φορές για να επιτραπεί η πλήρης ανάδευση δ) Αναγράψτε στην ετικέτα του σωλήνα «ΑΝΩ ΣΤΡΩΜΑ» 2. Διάλυμα Κάτω Στρώματος - 90%: α) Πάρτε CONCENTRATE (αρ. Καταλόγου 99306) και πιπεταρίστε 8.1 ml σε αποστειρωμένο σωλήνα φυγόκεντρου β) Προσθέστε 1.9 ml από Modified Human Tubal Fluid (αρ. Καταλόγου 90126) γ) Κλείστε τον σωλήνα και αναποδογυρίστε το απαλά 3-4 φορές για να επιτραπεί η πλήρης ανάδευση δ) Αναγράψτε στην ετικέτα του σωλήνα «ΚΑΤΩ ΣΤΡΩΜΑ» 3. Συνεχίστε στο τμήμα ΓΕΝΙΚΗ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑ του φυλλαδίου του προϊόντος. (ΣΗΜΕΙΩΣΗ: 10 ml Άνω Στρώματος και 10 ml Κάτω Στρώματος, επεξεργάζονται κατά προσέγγιση 5 δείγματα σπέρματος.) Σημείωση: Οι όροι 50% και 90% δεν αναφέρονται σε πραγματική συγκέντρωση. Τα 50% και 90% είναι σχετικές συγκεντρώσεις βασισμένες στην προηγούμενη ονοματολογία που όριζε διάλυμα 1:9 από Percoll® ως ίσο με 100% λειτουργικό, ισοτονικό διάλυμα. ΓΕΝΙΚΗ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑ Παρακάτω ακολουθεί η γενική διαδικασία για διαχωρισμό κλίσης δύο βημάτων του κινητού σπερματοζωαρίου από το σπέρμα. Ο όγκος και η συγκέντρωση μπορούν να τροποποιηθούν για να ανταποκρίνονται στις εργαστηριακές προτιμήσεις (δηλ. μινι-κλίση, κρυοσυντηρημένο σπέρμα, κλίση τριών στρωμάτων). 1. Φέρτε όλα τα εξαρτήματα των μέσων σε θερμοκρασία δωματίου ή στους 37°C. 2. Χρησιμοποιώντας αποστειρωμένη πιπέτα, μεταφέρετε 1.5 - 2.0 ml του «ΚΑΤΩ ΣΤΡΩΜΑΤΟΣ» σε αποστειρωμένο, μίας χρήσης, κωνικό φυγόκεντρο σωλήνα. 3. Χρησιμοποιώντας μια νέα αποστειρωμένη πιπέτα, μεταφέρετε ίσο όγκο «ΠΑΝΩ ΣΤΡΩΜΑΤΟΣ» πάνω από το «ΚΑΤΩ ΣΤΡΩΜΑ». Αυτό γίνεται με επαφή της επιφάνειας του «ΚΑΤΩ ΣΤΡΩΜΑΤΟΣ» στο πλάι του σωλήνα με την άκρη της πιπέτας. Διαχύστε προσεκτικά το «ΑΝΩ ΣΤΡΩΜΑ» στροβιλίζοντας την άκρη της πιπέτας γύρω από την περιφέρεια του σωλήνα με κινήσεις προς τα πάνω, καθώς το επίπεδο του «ΑΝΩ ΣΤΡΩΜΑΤΟΣ» ανυψώνεται. 4. Τοποθετήστε απαλά 1.5 - 2.0 ml ρευστοποιημένου σπέρματος στο «ΠΑΝΩ ΣΤΡΩΜΑ» χρησιμοποιώντας νέα αποστειρωμένη πιπέτα. 5. Τοποθετήστε για φυγοκέντρηση για 10-20 λεπτά σε περίπου 200 - 300xg.* Εκθέστε προσεκτικά το συσσωμάτωμα είτε με αναρρόφηση του «ΑΝΩ» και «ΚΑΤΩ ΣΤΡΩΜΑΤΟΣ» ή με άμεση αφαίρεση του και μεταφορά σε νέο αποστειρωμένο σωλήνα φυγόκεντρου. *Σημείωση: Η ποιότητα του δείγματος σπέρματος θα πρέπει να αξιολογείται και να λαμβάνεται υπόψη στον καθορισμό της σωστής ταχύτητας και του χρόνου φυγοκέντρησης. Θα πρέπει να προσαρμοστούν σύμφωνα με την ξεχωριστή ποιότητα δείγματος για βελτιστοποίηση της διαδικασίας. 6. Χρησιμοποιώντας νέα αποστειρωμένη πιπέτα, προσθέστε 2.0 - 3.0 ml κατάλληλου μέσου έκπλυσης όπως το Sperm Washing Medium (IS αρ. Καταλόγου 9983) ή Modified HTF (IS αρ. Καταλόγου 90126) με συμπλήρωμα πρωτεϊνών. Αιωρείστε ξανά το απομονωμένο συσσωμάτωμα. Υποβάλλετε σε φυγοκέντρηση (~200xg) για 8 -10 λεπτά και αφαιρέστε το υπερκείμενο υγρό. Επαναλάβετε αυτό το βήμα για δεύτερη έκπλυση. Απορρίψτε το υπερκείμενο υγρό και αιωρείστε ξανά το συσσωμάτωμα χρησιμοποιώντας κατάλληλο όγκο του κατάλληλου μέσου. Το δείγμα είναι πλέον έτοιμο για ανάλυση. Pro dodatečné podrobnosti o použití těchto výrobků by každá laboratoř měla konzultovat vlastní laboratorní metody a protokoly, které byly vytvořeny a optimalizovány zvlášť pro váš konkrétní zdravotnický program. ΟΔΗΓΙΕΣ ΦΥΛΑΞΗΣ ΚΑΙ ΣΤΑΘΕΡΟΤΗΤΑ Φυλάσσετε τα κλειστά δοχεία σε ψύξη στους 2º έως 8ºC. Θερμάνετε σε θερμοκρασία περιβάλλοντος ή επωαστήρα (37°C) πριν τη χρήση. Μην ψύχετε ή εκθέτετε σε υψηλές θερμοκρασίες. Το ISolate παραμένει σταθερό μέχρι την ημερομηνία λήξης που αναγράφεται στις ετικέτες του κουτιού και των φιαλών, όταν φυλάσσεται σύμφωνα με τις οδηγίες. ΠΡΟΦΥΛΑΞΕΙΣ ΚΑΙ ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΕΙΣ Η συσκευή αυτή προορίζεται για χρήση από προσωπικό που έχει εκπαιδευτεί σε διαδικασίες που περιλαμβάνουν τη συγκεκριμένη εφαρμογή για την οποία προορίζεται η συσκευή. Το ISolate έχει αδιαφανή εμφάνιση. Αυτό είναι φυσιολογικό για το συγκεκριμένο προϊόν. Μην κάνετε χρήση φιαλιδίου μέσου που παρουσιάζει ύπαρξη σωματιδίων ή μολυσματικών ουσιών (μη ενιαία θολότητας). Το ISolate πρέπει να είναι καλά κλειστό όταν χρησιμοποιείται σε επωαστήρα CO2, για να αποφεύγονται οι αλλαγές pH. Το προϊόν δεν περιέχει συντηρητικά, αντιβιοτικά ή συμπληρώματα πρωτεϊνών. Για να αποφύγετε προβλήματα μόλυνσης, χρησιμοποιήστε ασηπτικές τεχνικές. Σε περίπτωση ζημιάς, μην χρησιμοποιείτε. Παρακαλούμε απορρίψτε ή επιστρέψτε στον Παρασκευαστή για αντικατάσταση. ΠΡΟΣΟΧΗ: Η ομοσπονδιακή (Η.Π.Α.) νομοθεσία περιορίζει αυτή τη συσκευή σε πώληση από ή κατά εντολή γιατρού. POPIS VÝROBKU ISolate® je médium gradientu hustoty zhotovené na oddělení motilní frakce spermií ze semenné kapaliny. Protože je to dvouvrstevný gradientní systém, efektivně snižuje buňkovou kontaminaci jako např. odumřelé spermie, bílé krevní buňky a jiné nečistoty. Výsledný vzorek obsahuje většinou motilní spermie. ISolate asepticky zpracovaná koloidní suspenze křemíkových částic, filtrovaná přes membránu a stabilizovaná kovalentně vázaným hydrofilním silanem v pufrovaném HEPES HTF. Hladina zaručené sterilizace (SAL) je 10-3. ISolate bylo testováno a shledáno negativním na pyrogeny při pyrogenním testu provedeném na laboratorním králíkovi. NÁVOD K POUŽITÍ Kat. č. 99264 – KOLOIDNÍ KŘEMÍK VE DVOU KONCENTRACÍCH (50 % a 90 %) K OKAMŽITÉMU POUŽITÍ A. Doporučený materiál: ISolate • Irvine Scientific Katalog #99264 (sada 6ml, 50ml nebo 100 ml ampulek ) Sperm Washing Medium • Irvine Scientific Katalog #9983 Sterilní kónické odstředivkové trubičky • Irvine Scientific Katalog #IS-325 Sterilní pipety Pasteur Odstředivka Inkubátor, 37 °C B. Příprava gradientu: Žádné předběžné ředění není nutné. Každá ampulka gradientu horní a spodní vrstvy je připravena na použití. Pokračujte až po část příbalového letáku nazvanou OBECNÁ METODA. Kat. č. #99275 - ZÁSOBNÍ ROZTOK Médium s 90% gradientem hustoty na použití v jednokrokové proceduře nebo na další ředění. A. Doporučený materiál: ISolate STOCK SOLUTION • Irvine Scientific Katalog #99275 Modified Human Tubal Fluid • Irvine Scientific Katalog #90126 Sperm Washing Medium • Irvine Scientific Katalog #9983 Sterilní kónické odstředivkové trubičky • Irvine Scientific Katalog #IS-325 Sterilní pipety Pasteur Odstředivka Inkubátor, 37 °C B. Příprava gradientu: Jsou potřeba dva roztoky na provedení metody gradientní separace spermií: horní vrstvy a spodní vrstvy. Horní vrstva a spodní vrstva. 1. Roztok horní vrstvy – 50 %: a.) Napipetujte 5,6 ml koncentrátu CONCENTRATE (kat. č. 99275) do sterilní odstředivkové trubičky. b) Přidejte 4,4 ml Modified Human Tubal Fluid (kat. č. 90126) c) Zazátkujte zkumavku a opatrně ji převraťte 3-4krát, aby došlo k celkovému promíchání. d) Označte trubičku „HORNÍ VRSTVA“ 2. Roztok spodní vrstvy – 90 %: a) Nadávkujte alikvotní podíl 10 ml roztoku STOCK SOLUTION do sterilní odstředivkové trubičky se zátkou – (Dalšího ředění není třeba - STOCK SOLUTION je 90%) b) Označte trubičku “SPODNÍ VRSTVA“ 3. Pokračujte až po část příbalového letáku výrobku nazvanou ZÁKLADNÍ POSTUP. (POZNÁMKA: 10 ml Horní vrstvy a 10 ml Spodní vrstvy zpracuje přibližně 5 vzorků sperma.) Kat. č. #99306 - KONCENTRÁT Koncentrát koloidního křemíku pro další ředění na gradienty hustoty; je formulován v izotonickém pufru a má přibližnou hustotu neředěného přípravku Percoll®. ISolate® CONCENTRATE byl hodnocen podle tohoto příbalového letáku při 50% a 90% gradientech. Každá laboratoř si může zvolit vytvoření gradientů různých koncentrací, jejichž efektivnost by měla být ohodnocena. A. Doporučený materiál: Koncentrát ISolate® • Irvine Scientific Katalog #99306 Modified Human Tubal Fluid • Irvine Scientific Katalog #90126 Sperm Washing Medium • Irvine Scientific Katalog #9983 Sterilní kónické odstředivkové trubičky • Irvine Scientific Katalog #IS-325 Sterilní pipety Pasteur Odstředivka Inkubátor, 37 °C B. Příprava gradientu: Jsou potřeba dva roztoky na provedení metody gradientní separace spermií: horní vrstvy a spodní vrstvy. 1. Roztok horní vrstvy – 50 %: a) Napipetujte 4,5 ml CONCENTRATE (kat. č. 99306) do sterilní odstředivkové trubičky. b) Přidejte 5,5 ml Modified Human Tubal Fluid (kat. č. 90126) c) Zazátkujte zkumavku a opatrně ji převraťte 3-4krát, aby došlo k celkovému promíchání. d) Označte trubičku „HORNÍ VRSTVA“ 2. Roztok spodní vrstvy – 90 %: a) Napipetujte 8,1 ml CONCENTRATE (kat. č. 99306) do sterilní odstředivkové trubičky. b) Přidejte 1,9 ml Modified Human Tubal Fluid (kat. č. 90126) c) Zazátkujte zkumavku a opatrně ji převraťte 3-4krát, aby došlo k celkovému promíchání. d) Označte trubičku „SPODNÍ VRSTVA“ 3. Pokračujte až po část příbalového letáku výrobku nazvanou ZÁKLADNÍ POSTUP. (POZNÁMKA: 10 ml Horní vrstvy a 10 ml Spodní vrstvy zpracuje přibližně 5 vzorků sperma.) Poznámka: Hodnoty 50 % a 90 % nepředstavují skutečné koncentrace. 5 0% a 90 % jsou relativní koncentrace založené na dřívější terminologii, která definovala poměr 1:9 ředění přípravku Percoll ® jako rovnající se 100% účinnému isotonickému roztoku. OBECNÁ METODA Následující je obecný postup na dvoukrokovou gradientní separaci motilní spermie od spermatu. Objem a koncentrace mohou být upraveny, aby splňovaly preference každé laboratoře (např. mini-gradient, kryoprezervované semeno, trojvrstevní gradient). 1. Vytemperujte všechny složky média na pokojovou teplotu nebo na 37 °C. 2. Pomocí sterilní pipety převeďte 1,5 – 2,0 ml „SPODNÍ VRSTVY“ do sterilní, kónické odstředivkové trubičky na jedno použití. 3. Pomocí nové sterilní pipety převeďte stejný objem „HORNÍ VRSTVY“ na horní část „SPODNÍ VRSTVY“. Provádí se to dotykem povrchu „SPODNÍ VRSTVY” na straně zkumavky hrotem pipety. Opatrně dávkujte „HORNÍ VRSTVU“ kroužením hrotu pipety kolem obvodu trubičky pohybem směrem nahoru zatímco se hladina „HORNÍ VRSTVY“ bude zvedat. 4. Opatrně umístěte 1,5 – 2,0 ml zkapalněného spermatu do „HORNÍ VRSTVY“ pomocí nové sterilní pipety. 5. Odstřeďte 10-20 minut při odstředivé síle kolem 200 300xg.* Opatrně odhalte granuli buď aspirací „HORNÍ“ a „SPODNÍ VRSTVY“ nebo vyjměte granuli přímo a přeneste ji do nové sterilní odstředivkové trubičky. *Poznámka: Kvalita vzorku spermií by měla být zhodnocena a brána v úvahu při určování správné rychlosti odstředivky a doby odstředění. Měly by být upraveny podle kvality individuálních vzorků pro optimalizaci procedury. 6. Pomocí nové sterilní pipety přidejte 2,0 – 3,0 ml mycího média jako např. Sperm Washing Medium (IS kat. č. 9983) nebo Modified HTF (IS kat. č. 90126) s proteinovým suplementem. Resuspendujte separovanou granuli. Odstřeďte (~200xg) po dobu 8 -10 minut a odeberte supernatant. Zopakujte tento krok pro druhé promytí. Odstraňte supernatant a resuspendujte granuli pomocí vhodného objemového množství náležitého média. Vzorek je nyní připraven pro analýzu. Pro dodatečné podrobnosti o použití těchto výrobků by každá laboratoř měla konzultovat vlastní laboratorní metody a protokoly, které byly vytvořeny a optimalizovány zvlášť pro váš konkrétní zdravotnický program. POKYNY PRO SKLADOVÁNÍ A STÁLOST Skladujte neotevřené nádoby v lednici při 2 º až 8 ºC. Ohřejte na okolní teplotu nebo na teplotu inkubátoru (37 °C) před použitím. Nezmrazujte a nevystavujte vysokým teplotám. Při doporučeném skladování je ISolate stabilní do expirační doby, která je vyznačena na štítcích kartónu a láhve. VAROVÁNÍ A BEZPEČNOSTNÍ OPATŘENÍ Zařízení bylo určeno pro použití školeným personálem při zákrocích, které zahrnují indikovanou aplikaci, pro kterou je zařízení určeno. ISolate se bude jevit neprůhledné. Je to pro tento výrobek normální. Nepoužívejte žádné ampulky média, které jeví známky přítomnosti částic hmoty nebo nečistot (nerovnoměrně zakalené). ISolate by mělo být těsně uzavřeno, pokud bude používáno v CO2 inkubátoru, aby se předešlo změnám pH . Tento výrobek neobsahuje žádné konzervační látky, antibiotika, ani protein nebo jiné suplementy. Vyhněte se problémům kontaminace, při práci dodržujte aseptické metody. V případě poškození nepoužívejte. Likvidujte nebo zašlete výrobci na výměnu. POZOR: Federální zákony USA omezují prodej tohoto zařízení pouze na lékaře nebo na jeho předpis. ISolate er en membranfiltreret, aseptisk behandlet kolloid suspension af silicapartikler stabiliseret med kovalent bundet hydrofilt silan i HEPES-bufret HTF. Sterilitetssikringsniveauet (SAL) er 10-3. ISolate er blevet testet med en kaninpyrogentest og fundet pyrogentfrit. BRUGSANVISNING Katalognr. 99264 – BRUGSKLART KOLLOID SILIKA I TO KONCENTRATIONER (50 % og 90 %) A. Anbefalede materialer: ISolate • Irvine Scientific katalognr. 99264 (sæt med 6 ml, 50ml- eller 100 ml-hætteglas) Sperm Washing Medium • Irvine Scientific katalognr. 9983 Sterile, koniske centrifugerør til engangsbrug • Irvine Scientific katalognr. IS-325 Pasteurpipetter, sterile Centrifuge Inkubator, 37 ºC B. Forberedelse af gradientopløsning: Forudgående fortynding er ikke nødvendig. Hvert hætteglas med øverste eller underste lag gradient er klar til brug. Forsæt med afsnittet GENEREL PROCEDURE på indlægssedlen. Katalognr. 99275 – STOCK SOLUTION Medium med 90 % densitetsgradient til brug i en ét-trinsprocedure eller til yderligere fortynding. A. Anbefalede materialer: ISolate Stock Solution • Irvine Scientific katalognr. 99275 Modified Human Tubal Fluid • Irvine Scientific katalognr. 90126 Sperm Washing Medium • Irvine Scientific katalognr. 9983 Sterile, koniske centrifugerør til engangsbrug • Irvine Scientific katalognr. IS-325 Pasteurpipetter, sterile Centrifuge Inkubator, 37 ºC B. Forberedelse af gradientopløsning: Der kræves to opløsninger til at udføre gradientseparation af sæd: Et øverste lag og et nederste lag. 1. Opløsning i øverste lag - 50 %. a) Tag STOCK SOLUTION (katalognr. 99275) og pipetter 5,6 ml ned i et sterilt centrifugerør b) Tilsæt 4,4 ml Modified Human Tubal Fluid (katalognr. 90126) c) Sæt låg på røret og vend det forsigtigt 3-4 gange for at blande helt d) Skriv “ØVERSTE LAG” på rørets etiket 2. Opløsning i nederste lag - 90 %. a) Tag 10 ml STOCK SOLUTION op i et sterilt centrifugerør og sæt låg på - (det er ikke nødvendigt at fortynde yderligere - STOCK SOLUTION er 90 %) b) Skriv “NEDERSTE LAG” på rørets etiket 3. Forsæt med afsnittet GENEREL PROCEDURE på indlægssedlen. (BEMÆRK: 10 ml af det øverste lag og 10 ml af det nederste lag kan behandle ca. 5 sædprøver). 6. Brug en ny, steril pipette og tilsæt 2,0-3,0 ml af et passende vaskemedium såsom Sperm Washing Medium (IS katalognr. 9983) eller Modified HTF (IS katalognr. 90126) med tilsat protein. Resuspender de isolerede sædceller (pellet). Centrifuger (~ 200 xg) i 8-10 minutter og fjern supernatanten. Gentag dette trin og vask en gang til. Bortskaf supernatanten og resuspender sædcellerne (pellet) vha. en egnet volumen af passende medium. Prøven er nu klar til analysering. For yderligere oplysninger om brug af disse produkter skal hvert laboratorium henvise til egne procedurer og protokoller, som er blevet specifikt udviklet og optimeret til laboratoriets eget, medicinske program. ANVISNINGER ANG OPBEVARING OG STABILITET Uåbnede beholdere opbevares nedkølet ved 2-8 ºC. Opvarm til stuetemeperatur eller inkubatortemperatur (37 °C) inden brug. Må ikke nedfryses eller udsættes for høje temperaturer. ISolate er stabilt indtil udløbsdatoen på æskens og flaskens etiket, når det opbevares som anvist. FORHOLDSREGLER OG ADVARSLER Dette udstyr er beregnet til brug af personale, der er uddannet i procedurer, der inkluderer den indicerede anvendelse, som dette udstyr er beregnet til. ISolate er uigennemsigtigt. Det er normalt for dette produkt. Anvend ikke hætteglas med medium, der indeholder partikler eller viser tegn på at være kontamineret (uensartede uklarheder). Låget på ISolate skal sidde tæt til, hvis det skal bruges i en CO2-inkubator, for at undgå ændringer i pH-værdien. Dette produkt indeholder ingen konserveringsmidler, antibiotika eller proteinsupplementer. Undgå problemer med kontamination ved at bruge aseptiske teknikker. Må ikke anvendes i tilfælde af beskadigelse. Bortskaf eller returner til producenten med henblik på udskiftning. FORSIGTIG: Ifølge amerikansk lov (USA) må dette produkt kun sælges af eller efter ordination af en læge. TUOTTEEN KUVAUS ISolate ® on tiheysgradienttiliuos, jota käytetään erottamaan motiilien siittiöiden osa siemennesteestä. Kaksikerroksisena gradienttijärjestelmänä se tehokkaasti vähentää solukontaminantteja, kuten kuolleita siittiöitä, valkoisia verisoluja ja vastaavia jätteitä. Tuloksena saatu näyte sisältää pääasiassa motiileja siittiöitä. ISolate – HEPES on kalvosuodatettu ja aseptisesti käsitelty kolloidisuspensio, jossa silikahiukkaset on stabiloitu kovalenttisidoksessa hydrofiilisen silaanin kanssa HEPESpuskuroidussa HTF:ssä. Steriilisyystaso (SAL) on 10-3. ISolate on testattu ja todettu pyrogeeneille negatiiviseksi kanin pyrogeenitestissä. KÄYTTÖOHJEET L u e t t e l o n r o 9 9 2 6 4 - K Ä Y T T ÖVA L M I S KOLLOIDINEN SILIKA KAHDESSA PITOISUUDESSA (50 % ja 90 %) A. Suositellut materiaalit: ISolates • Irvine Scientific luettelonro 99264 (6ml:n, 50ml tai 100 ml:n pullopakkaus) Sperm Washing Medium • Irvine Scientific luettelonro 9983 Steriilit kertakäyttöiset kartiomaiset sentrifugiputket • Irvine Scientific luettelonro IS-325 Pasteur -pipetit, steriilit Sentrifugi Inkubaattori, 37 °C B. Gradientin valmistus: Alustavia laimennuksia ei tarvita. Kukin ylemmän tai alemman kerroksen gradienttipullo on käyttövalmis. Siirry tuote-esitteen osaan YLEISET TOIMENPITEET. Luettelonro 99275 - STOCK SOLUTION 90 %:n tiheysgradienttinen ravintoliuos, jota käytetään yksivaiheisessa toimenpiteessä tai lisälaimennuksessa. A. Suositellut materiaalit: ISolate STOCK SOLUTION • Irvine Scientific luettelonro 99275 Modified Human Tubal Fluid • Irvine Scientific luettelonro 90126 Sperm Washing Medium • Irvine Scientific luettelonro 9983 Steriilit kertakäyttöiset kartiomaiset sentrifugiputket • Irvine Scientific luettelonro IS-325 Pasteur -pipetit, steriilit Sentrifugi Inkubaattori, 37 °C B. Gradientin valmistus: Siittiöiden gradienttierotteluun tarvitaan kaksi liuosta: ylempi kerros ja alempi kerros. 1. Ylemmän kerroksen liuos 50 %. a) Ota STOCK SOLUTIONia (luettelonro 99275) ja pipetoi 5,6 ml steriiliin sentrifugiputkeen. b) Lisää 4,4 ml Modified Human Tubal Fluidia (luettelonro 90126). c) Sulje putki ja käännä se varovasti ylösalaisin 3 - 4 kertaa, jotta se saa täysin sekoittua. d) Merkitse putkeen “YLEMPI KERROS” 2. Alemman kerroksen liuos – 90 %. a) Jaa tasan 10 ml STOCK SOLUTIONia steriiliin sentrifugiputkeen ja sulje se – (Lisälaimennuksia ei tarvita -STOCK SOLUTION on 90-prosenttista). b) Merkitse putkeen “ALEMPI KERROS” 3. Jatka tuote-esitteen osaan YLEISET TOIMEN PITEET. (HUOM: 10 ml ylempää ja 10 ml alempaa kerrosta riittää noin 5:n siemennestenäytteen käsittelyyn.) Katalognr. 99306 – CONCENTRATE Koncentrat af kolloid silika til yderligere fortynding i densitetsgradienter; formuleret i en isotonisk buffer og svarende til densiteten af ufortyndet Percoll®. ISolate® CONCENTRATE er blevet evalueret ifølge denne indlægsseddel ved 50 % og 90 % gradienter. Hvert laboratorium kan vælge at lave gradienter i forskellige koncentrationer, som bør evalueres med henblik på effektivitet. Luettelonro 99306 - CONCENTRATE Kolloidisilikatiiviste, jolla saadaan aikaan laimennus tiheysgradientteihin; formuloitu isotonisessa puskurissa ja vastaa suunnilleen laimentamattoman Percoll®in tiheyttä. ISolate® CONCENTRATE on arvioitu pakkauksen esitteen mukaisesti 50 %- ja 90 %-gradienttia vastaaviksi. Kukin laboratorio voi valmistaa gradientteja eri pitoisuuksilla, joiden tehokkuus tulee arvioida. A. Anbefalede materialer: ISolate® koncentrat • Irvine Scientific katalognr. 99306 Modified Human Tubal Fluid • Irvine Scientific katalognr. 90126 Sperm Washing Medium • Irvine Scientific katalognr. 9983 Sterile, koniske centrifugerør til engangsbrug • Irvine Scientific katalognr. IS-325 Pasteurpipetter, sterile Centrifuge Inkubator, 37 ºC A. Suositellut materiaalit: ISolate® -tiiviste • Irvine Scientific luettelonro 99306 Modified Human Tubal Fluid • Irvine Scientific luettelonro 90126 Sperm Washing Medium • Irvine Scientific luettelonro 9983 Steriilit kertakäyttöiset kartiomaiset sentrifugiputket • Irvine Scientific luettelonro IS-325 Pasteur -pipetit, steriilit Sentrifugi Inkubaattori, 37 °C B. Forberedelse af gradientopløsning: Der kræves to opløsninger til at udføre gradientseparation af sæd: Et øverste lag og et nederste lag. 1. Opløsning i øverste lag - 50 %. a) Tag CONCENTRATE (katalognr. 99306) og pipetter 4,5 ml ned i et sterilt centrifugerør b) Tilsæt 5,5 ml Modified Human Tubal Fluid (katalognr. 90126) c) Sæt låg på røret og vend det forsigtigt 3-4 gange for at blande helt d) Skriv “ØVERSTE LAG” på rørets etiket 2. Opløsning i nederste lag - 90 %. a) Tag CONCENTRATE (katalognr. 99306) og pipetter 8,1 ml ned i et sterilt centrifugerør b) Tilsæt 1,9 ml Modified Human Tubal Fluid (katalognr. 90126) c) Sæt låg på røret og vend det forsigtigt 3-4 gange for at blande helt d) Skriv “NEDERSTE LAG” på rørets etiket 3. Forsæt med afsnittet GENEREL PROCEDURE på indlægssedlen. (BEMÆRK: 10 ml af det øverste lag og 10 ml af det nederste lag kan behandle ca. 5 sædprøver). B. Gradientin valmistus: Siittiöiden gradienttierotteluun tarvitaan kaksi liuosta: ylempi kerros ja alempi kerros. 1. Ylemmän kerroksen liuos - 50 %. a) Ota CONCENTRATE:a (luettelonro 99306) ja pipetoi 4,5 ml steriiliin sentrifugiputkeen. b) Lisää 5,5 ml Modified Human Tubal Fluidia (luettelonro 90126). c) Sulje putki ja käännä se varovasti ylösalaisin 3 - 4 kertaa, jotta se saa täysin sekoittua. d) Merkitse putkeen “YLEMPI KERROS” 2. Alemman kerroksen liuos – 90 %. a) Ota CONCENTRATE:a (luettelonro 99306) ja pipetoi 8,1 ml steriiliin sentrifugiputkeen b) Lisää 1,9 ml Modified Human Tubal Fluidia (luettelonro 90126). c) Sulje putki ja käännä se varovasti ylösalaisin 3 - 4 kertaa, jotta se saa täysin sekoittua. d) Merkitse putkeen “ALEMPI KERROS” 3. Jatka tuote-esitteen osaan YLEISET TOIMEN PITEET. (HUOM: 10 ml ylempää ja 10 ml alempaa kerrosta riittää noin 5:n siemennestenäytteen käsittelyyn.) Bemærk: Betegnelserne 50 % og 90 % angiver ikke en faktisk koncentration. 50 % og 90 % er relative koncentrationer baseret på det tidligere nomenklatur, der definerede en 1:9 fortynding af Percoll® som svarende til en 100 % isotonisk arbejdsopløsning. GENEREL PROCEDURE Følgende er en generel procedure for en gradientseparation af motile sædceller fra sædvæsken. Volumenen og koncentrationen kan modificeres i henhold til hvert enkelt laboratories præferencer (dvs. minigradient, cryopreserveret sæd, gradient i tre lag). 1. Bring alle mediekomponenter til stuetemperatur eller 37 °C. 2. Brug en steril pipette og overfør 1,5-2,0 ml af det “NEDERSTE LAG” til et sterilt, konisk centrifugerør til engangsbrug. 3. Brug en ny, steril pipette og overfør en tilsvarende volumen af “ØVERSTE LAG” oven på “NEDERSTE LAG”. Det gøres ved at berøre overfladen af det “UNDERSTE LAG” i siden af røret med pipettespidsen. Dispenser forsigtigt det “ØVERSTE LAG” ved at føre pipettespidsen i en opadgående spiralbevægelse mod rørets inderside efterhånden, som niveauet af det “ØVERSTE LAG” stiger. 4. Placer forsigtigt 1,5-2,0 ml flydende sæd oven på “ØVERSTE LAG” med en ny, steril pipette. 5. Centrifuger i 10-20 minutter ved ca. 200-300 x g.* Eksponer forsigtigt sædcellerne (pellet) ved enten at aspirere det “ØVERSTE” og “UNDERSTE” lag væk, eller direkte ved at fjerne sædcellerne og overføre dem til et nyt, sterilt centrifugerør. Bemærk: Kvaliteten af sædprøven skal evalueres og tages i betragtning, når den korrekte centrifugeringshastighed og -tid skal fastslås. Disse skal justeres i henhold til den enkelte sædprøves kvalitet med henblik på optimering af proceduren. LATVISKI SUOMI DANSK PRODUKTBESKRIVELSE ISolate® er et densitetsgradientmedium, der er fremstillet til at separere de motile sædceller fra sædvæsken. Som et gradientsystem i to lag reducerer det effektivt cellulære kontaminanter såsom død sæd, leukocytter og diverse restmaterialer. Den færdige prøve indeholder hovedsageligt motile sædceller. Huom: Termit 50 % ja 90 % eivät edusta todellista pitoisuutta. 50- ja 90-prosenttiset pitoisuudet ovat suhteellisia ja perustuvat aiempaan luokitukseen, jossa 1:9 laimennus Percoll®illa on määritelty 100 %:sti toimivaa isotonista liuosta vastaavaksi. YLEISET TOIMENPITEET Seuraavassa annetaan yleiset ohjeet kaksivaiheiseen siittiöiden siemennesteestä erottamiseen gradientin avulla. Tilavuutta ja pitoisuutta voidaan muunnella kunkin laboratorion toivomusten mukaan (so. minigradientti, kylmäsäilötty siemenneste, kolmikerroksinen gradientti). 1. Anna kaikkien ravintoliuosainesosien saavuttaa huoneenlämpötila tai 37 °C. 2. Steriiliä pipettiä käyttäen siirrä1,5 – 2,0 ml “ALEMPAA KERROSTA” steriiliin kertakäyttöiseen kartiomaiseen sentrifugiputkeen. 3. Siirrä steriilillä pipetillä sama tilavuus ”YLEMPÄÄ KERROSTA” ”ALEMMAN KERROKSEN” päälle. Tämä tapahtuu koskettamalla pipetin kärjellä ”ALEMMAN KERROKSEN” pintaa putken reunalla. Tyhjennä “YLEMPI KERROS” varovasti kiertäen pipetin kärkeä ympäri putkea yläsuuntaan samalla kun “YLEMMÄN KERROKSEN” taso nousee. 4. Aseta varovasti 1,5 – 2,0 ml nestemäistä siemennestettä “YLEMMÄLLE KERROKSELLE” uudella steriilillä pipetillä. 5. Linkoa 10 - 20 minuuttia asetuksella 200 – 300 x g.* Paljasta pelletti varovasti joko aspiroimalla se “YLEMMÄSTÄ” ja “ALEMMASTA KERROKSESTA” tai poistamalla pelletti suoraan ja siirtämällä se uuteen steriiliin sentrifugiputkeen. *Huom: Siittiönäytteen laatu tulee arvioida ja ottaa huomioon niiden linkoamisen tarkoituksenmukaista nopeutta ja kestoa määritettäessä. Näitä tulee säädellä yksittäisen näytteen laadun mukaisesti toimenpiteen optimoimiseksi. 6. Käyttäen uutta steriiliä pipettiä lisää 2,0 – 3,0 ml sopivaa pesuainetta, kuten Sperm Washing Medium (IS luettelonro 9983) tai Modified HTF (IS luettelonro 90126) proteiinilisineen. Upota eristetty pelletti uudelleen. Linkoa se (~ 200 x g) 8 -10 minuuttia ja poista pintaneste. Toista tämä vaihe uutta pesua varten. Hävitä pintaneste ja suspendoi pelletti uudelleen käyttäen asianmukaista ravintoliuosta sopivassa tilavuudessa. Näyte on nyt valmis analysoitavaksi. PRODUKTA APRAKSTS ISolate® blīvuma gradienta barotnes ir materiāls, kas paredzēts spermatozoīdu motilo frakciju atdalīšanai no sēklas šķidruma. Kā divslāņu gradientu sistēma tā efektīvi mazina šūnu izraisītas kontaminācijas iespējas, piemēram, kontamināciju ar nedzīviem spermatozoīdiem, baltajiem asinsķermenīšiem un dažādām pārpalikumšūnām. Rezultātā iegūtais paraugs galvenokārt satur kustīgus spermatozoīdus. Lisätietoja näiden tuotteiden käytöstä kunkin laboratorion tulee hakea omista menettelyohjeistaan ja protokollista, jotka on erityisesti kehitetty ja optimoitu paikallista lääkinnällistä ohjelmaa varten. ISolate ir caur membrānu filtrēta un aseptiski apstrādāta koloidāla silīcija dioksīda daļiņu suspensija, kas stabilizēta ar kovalenti piesaistītu hidrofīlu silānu HEPES buferētā HTF. Sterilitātes nodrošināšanas līmenis (SAL) ir 10-3. ISolate ir testēts, un ir konstatēts, ka tas ir negatīvs attiecībā uz pirogēnām baktērijām pirogēno baktēriju testā trušiem. SÄILYTYSOHJEET JA STABILITEETTI Avaamattomat säiliöt säilytettävä kylmässä, 2 – 8 ºC. Lämmitä ympäristölämpöön tai inkubaattorin lämpötilaan (37 °C) ennen käyttöä. Ei saa jäädyttää tai altistaa korkeille lämpötiloille. ISolate on stabiili pakkaukseen ja pullojen etiketteihin merkittyyn eräpäivään saakka ohjeiden mukaisesti säilytettynä. VAROITUKSIA JA VAROTOIMENPITEITÄ Tämä laite on tarkoitettu sellaisten henkilöiden käytettäväksi, jotka on koulutettu suorittamaan toimenpiteitä, joihin kuuluu laitteen käyttötarkoituksen mukainen asianmukainen käyttö. ISolate näyttää läpinäkymättömältä. Tämä on tuotteelle normaalia. Älä käytä ravintoliuospulloa, jossa näkyy hiukkasia tai saastumista (epätasaista sameutta). ISolaten korkin tulee olla tiiviisti kiinni, kun sitä käytetään hiilidioksidi-inkubaattorissa pH-muutosten välttämiseksi. Tässä tuotteessa ei ole säilöntäaineita, antibiootteja eikä proteiinilisäaineita. Kontaminaatio-ongelmat vältetään aseptisella käsittelytekniikalla. Jos pakkaus on vahingoittunut, älä käytä sitä. Hävitä tuote tai palauta se valmistajalle vaihdettavaksi. VAROITUS: Yhdysvaltain liittovaltion laki rajoittaa tämän välineen myynnin vain lääkärin toimesta tai määräyksestä tapahtuvaksi. LIETOŠANAS NORĀDĪJUMI Kataloga Nr. 99264 – LIETOŠANAI GATAVS KOLOIDĀLS SILĪCIJA DIOKSĪDS DIVĀS KONCENTRĀCIJĀS (50% un 90%) A. Ieteicamie materiāli: ISolate • Irvine Scientific kataloga Nr. 99264 (6ml, 50ml vai 100 ml flakonu komplekts) Sperm Washing Medium • Irvine Scientific kataloga Nr. 9983 Sterili, koniski vienreizējās lietošanas centrifūgas stobriņi • Irvine Scientific kataloga Nr. IS-325 Pastēra pipetes, sterilas Centrifūga Inkubators, 37°C B. Gradienta sagatavošana: Nav nepieciešama iepriekšēja atšķaidīšana. Katrs flakons ar augšējā un apakšējā slāņa gradientu ir gatavs lietošanai. Pārejiet pie izstrādājuma ieliktnī aprakstītās VISPĀRĒJĀS PROCEDŪRAS. Kataloga Nr. - 99275 - STOCK SOLUTION 90% specifiska barotne izmantošanai tūlītējā procedūrā vai atšķaidīšanai turpmāk. A. Ieteicamie materiāli: ISolate STOCK SOLUTION •Irvine Scientific kataloga Nr. 99275 Modified Human Tubal Fluid •Irvine Scientific kataloga Nr. 90126 Sperm Washing Medium •Irvine Scientific kataloga Nr. 9983 Sterili, koniski vienreizējās lietošanas centrifūgas stobriņi •Irvine Scientific kataloga Nr. IS-325 Pastēra pipetes, sterilas Centrifūga Inkubators, 37°C B. Gradienta sagatavošana: Lai lietotu spermatozoīda atdalīšanas metodi gradientā, nepieciešami divi šķīdumi: augšējais slānis un apakšējais slānis. 1. Augšējā slāņa šķīdums – 50%: a) Ievietojiet CONCENTRATE (kataloga Nr. 99275) un pipeti 5,6 ml sterilā centrifūgas stobriņā. b) Pievienojiet 4,4 ml Modified Human Tubal Fluid (kataloga Nr. 90126) c) Uzlieciet stobriņam aizbāzni un uzmanīgi apvērsiet 3-4 reizes, lai saturam ļautu pilnībā sajaukties. d) Piestipriniet stobriņam uzlīmi „AUGŠĒJAIS SLĀNIS” 2. Apakšējā slāņa šķīdums – 90%: a) Iedaliet 10 ml STOCK SOLUTION sterilā centrifūgas stobriņā un uzlieciet aizbāzni (Turpmāka atšķaidīšana nav nepieciešama – STOCK SOLUTION ir 90%). b) Piestipriniet stobriņam uzlīmi „APAKŠĒJAIS SLĀNIS” 3. Pārejiet pie produkta ieliktnī aprakstītās VISPĀRĒJĀS PROCEDŪRAS. (PIEZĪME: ar 10 ml augšējā slāņa un 10 ml apakšējā slāņa šķīdumu iespējams apstrādāt apmēram 5 spermas paraugus.) Kataloga Nr. 99306 - CONCENTRATE Koloidāls silīcija dioksīda koncentrāts turpmākai atšķaidīšanai blīvuma gradientos, tā sastāvā ir izotonisks buferis un tam piemīt aptuvenais neatšķaidīta Percoll® blīvums. Saskaņā ar šo iepakojuma ieliktni ISolate® CONCENTRATE ir ticis novērtēts 50% un 90% gradientā. Katra laboratorija var izvēlēties veidot atšķirīgu koncentrāciju gradientus, kuri jāizvērtē attiecībā uz efektivitāti. A. Ieteicamie materiāli: ISolate® koncentrāts •Irvine Scientific kataloga Nr. 99306 Modified Human Tubal Fluid •Irvine Scientific kataloga Nr. 90126 Sperm Washing Medium •Irvine Scientific kataloga Nr. 9983 Sterili, koniski vienreizējās lietošanas centrifūgas stobriņi •Irvine Scientific kataloga Nr. IS-325 Pastēra pipetes, sterilas Centrifūga Inkubators, 37°C B. Gradienta sagatavošana: Lai lietotu spermatozoīda atdalīšanas metodi gradientā, nepieciešami divi šķīdumi: augšējais slānis un apakšējais slānis. 1. Augšējā slāņa šķīdums – 50%: a) Ievietojiet CONCENTRATE (kataloga Nr. 99306) un pipeti 4.5 ml sterilā centrifūgas stobriņā. b) Pievienojiet 5,5 ml Modified Human Tubal Fluid (kataloga Nr. 90126) c) Uzlieciet stobriņam aizbāzni un uzmanīgi apvērsiet 3-4 reizes, lai saturam ļautu pilnībā sajaukties. d) Piestipriniet stobriņam uzlīmi „AUGŠĒJAIS SLĀNIS” 2. Apakšējā slāņa šķīdums – 90%: a) Ievietojiet CONCENTRATE (kataloga Nr. 99306) un pipeti 8,1 ml sterilā centrifūgas stobriņā. b) Pievienojiet 1,9 ml Modified Human Tubal Fluid (kataloga Nr. 90126) c) Uzlieciet stobriņam aizbāzni un uzmanīgi apvērsiet 3-4 reizes, lai saturam ļautu pilnībā sajaukties. d) Piestipriniet stobriņam uzlīmi „APAKŠĒJAIS SLĀNIS” 3. Pārejiet pie produkta ieliktnī aprakstītās ISPĀRĒJĀS PROCEDŪRAS. (PIEZĪME: ar 10 ml augšējā slāņa un 10 ml apakšējā slāņa šķīdumu iespējams apstrādāt apmēram 5 spermas paraugus.) Piezīme: Apzīmējumi 50% un 90% nenorāda faktisko koncentrāciju. 50% un 90% ir relatīvas koncentrācijas, kas pamatojas uz iepriekšējo nomenklatūru, kas definēja Percoll® atšķaidīšanu1:9 kā līdzvērtīgu 100% iedarbīgam, izotoniskam šķīdumam. VISPĀRĒJĀ PROCEDŪRA Turpmāk minētā ir vispārpieņemta procedūra izolēšanai gradientā divos posmos, atdalot kustīgu spermatozoīdu no spermas. Daudzumu un koncentrāciju iespējams mainīt, lai tos varētu izmantot atbilstoši laboratorijas galvenajiem mērķiem (t. i., kā mini-gradientu, ar kriokonservēto spermu, kā trīsslāņu gradientu). 1. Nodrošiniet, ka visu barotnes sastāvdaļu temperatūra ir sasniegusi istabas temperatūras līmeni vai 37°C. 2. Izmantojot sterilu pipeti, pārnesiet 1,5-2,0 ml “APAKŠĒJĀ SLĀŅA” uz sterilu, vienreizējās lietošanas, konisku centrifūgas stobriņu. 3. Izmantojot jaunu sterilu pipeti, pārnesiet to pašu daudzumu „AUGŠĒJĀ SLĀŅA” uz „APAKŠĒJĀ SLĀŅA” augšdaļu. To veic, ar pipetes galu pieskaroties „APAKŠĒJAM SLĀNIM” no stobriņa puses. Uzmanīgi izpiliniet „AUGŠĒJO SLĀNI”, spirālveidīgi virpinot pipetes galu pa stobriņa perimetru augšupejošas kustības veidā, „AUGŠĒJĀ SLĀŅA” līmenim paaugstinoties. 4. Ar jaunas sterilas pipetes palīdzību uzmanīgi ievietojiet 1,5-2,0 ml sašķidrinātas spermas „AUGŠĒJĀ SLĀNĪ”. 5. Centrifugējiet 10-20 minūtes ar apmēram 200-300 g paātrinājumu.* Uzmanīgi atdaliet lodīti, atvelkot nost „AUGŠĒJO” un ”APAKŠĒJO SLĀNI” vai tieši izņemot lodīti un pārnesot to uz citu sterilu centrifūgas stobriņu. *Piezīme: Spermatozoīda parauga kvalitāte jāizvērtē un jāņem vērā, nosakot atbilstošo centrifugēšanas ātrumu un ilgumu. Lai procedūru optimizētu, šos parametrus vajadzētu pielāgot atbilstoši atsevišķā parauga kvalitātei. 6. Izmantojot jaunu sterilu pipeti, pievienojiet 2,0-3,0 ml piemērota skalošanas materiāla, piemēram, Sperm Washing Medium (IS kataloga Nr. 9983) vai Modified HTF (IS kataloga Nr. 90126) ar proteīna papildinājumu. Suspendējiet atkārtoti izolēto lodīti. Centrifugējiet (ar ~200 g paātrinājumu) 8-10 minūtes un atdaliet supernatantu. Atkārtojiet šo soli, lai veiktu otru skalošanu. Novāciet supernatantu un no jauna suspendējiet lodīti, izmantojot atbilstošu piemērotas barotnes daudzumu. Tagad paraugs ir sagatavots analīzes veikšanai. Lai uzzinātu papildu informāciju par šo produktu lietošanu, katrai laboratorijai jāiepazīstas ar tajā noteiktajām procedūrām un protokoliem, kas īpaši izstrādāti un optimizēti individuālas medicīniskas programmas veikšanai. UZGLABĀŠANAS NORĀDĪJUMI UN STABILITĀTE Neatvērtus konteinerus uzglabāt atdzesētus no 2º līdz 8º C temperatūrā. Pirms lietošanas sasildiet līdz apkārtējās vides vai inkubatora (37°C) temperatūrai. Nesaldēt un nepakļaut augstu temperatūru iedarbībai. Uzglabājot, kā norādīts, ISolate saglabā stabilitāti līdz derīguma termiņam, kas norādīts uz kastes un uz pudeļu marķējuma. PIESARDZĪBAS PASĀKUMI UN BRĪDINĀJUMI Šo ierīci ir paredzēts izmantot personālam, kas ir apmācīts tādu procedūru veikšanai, kuras ietver norādīto izmantošanu, kurai šī ierīce ir paredzēta. ISolate izskatīsies necaurspīdīgs. Šim produktam tas ir normāli. Nelietot nevienu flakonu ar barotni, kurā saskatāmas vielas daļiņas vai piesārņojums (neviendabīgs duļķainums). ISolate cieši jānoslēdz ar aizbāzni, lietojot CO2 inkubatorā, lai nepieļautu pH līmeņa izmaiņas. Šis produkts nesatur konservantus, antibiotikas vai proteīna piedevas. Lai izvairītos no kontaminācijas problēmām, rīkojoties izmantojiet aseptiskas tehnikas. Ja bojāts, nelietot. Lūdzu, likvidējiet vai nosūtiet atpakaļ ražotājam atvietošanai. BRĪDINĀJUMS: Federālie (ASV) likumi pieļauj šīs ierīces tirdzniecību vienīgi ārstiem vai ar viņu norīkojumu. O ISolate é uma suspensão coloidal de partículas de sílica estabilizada com silano hidrofílico unido covalentemente em HTF tamponado com HEPES, que foi filtrado através de membrana e processado em condições estéreis. O nivel de garantia de esterilidade (SAL) é de 10-3. O ISolate foi testado para pirogénios com resultados negativos pelo teste de pirogénios no coelho. INSTRUÇÕES DE UTILIZAÇÃO Nº de Catálogo 99264 – SÍLICA COLOIDAL P R O N TA PA R A U T I L I Z A R A D U A S CONCENTRAÇÕES (50% E 90%) A. Material sugerido: ISolate • Irvine Scientific, Nº catálogo 99264 (kit de recipientes de6mL, 50mL ou kit de recipientes de 100mL) Meio de lavagem dos espermatozóides • Irvine Scientific, Nº catálogo 9983 Tubos de centrífuga cónicos estéreis e descartáveis • Irvine Scientific, Nº catálogo IS-325 Pipetas Pasteur, estéreis Centrífuga Incubadora a 37ºC B. Preparação do gradiente: Não são necessárias diluições preliminares. Cada recipiente de camada de gradiente superior e inferior está pronta para utilizar. Continue com a secção “PROCEDIMENTOS GERAIS” Nº de Catálogo 99275 – SOLUÇÃO STOCK Meio de gradiente de densidade a 90% para ser utilizado em protocolos de uma só etapa ou para posteriores diluições. A. Material sugerido: ISolate - Solução Stock • Irvine Scientific, Nº Cat. 99275 Meio HTF modificado • Irvine Scientific, Nº Cat. 90126 Meio de lavagem dos espermatozóides • Irvine Scientific, Nº Cat. 9983 Tubos de centrífuga cónicos estéreis e descartáveis • Irvine Scientific, Nº Cat. IS-325 Pipetas Pasteur, estéreis Centrífuga Incubadora a 37ºC B. Preparação do gradiente: Para levar a cabo uma separação de espermatozóides por gradiente necessitam-se de duas soluções: a camada superior e a camada inferior. 1. Solução da camada superior: 50% a. Pipetar da SOLUÇÃO STOCK (Nº Cat. 99275) 5,6mL para um tubo de centrífuga estéril. b. Adicionar 4,4 mL de HTF modificado (Nº Cat. 90126) c. Tapar o tubo e inverter suavemente 3 ou 4 vezes para permitir uma mistura completa. d. Etiquetar o tubo como “CAMADA SUPERIOR”. 2. Solução da camada inferior: 90% a. Inserir uma alíquota de 10mL da SOLUÇÃO STOCK num tubo estéril de centrífuga e tapá-lo. (Não são necessárias mais diluições. A solução stock está a 90%). b. Etiquetar o tubo como “CAMADA INFERIOR”. 3. Continuar na secção de “PROCEDIMENTOS GERAIS”. (Nota: 10 ml da “CAMADA SUPERIOR” e 10 ml da “CAMADA INFERIOR” processam aproximadamente 5 amostras de sémen) Nº de Catálogo 99306 – CONCENTRADO Concentrado de sílica coloidal para posteriores diluições em gradientes de densidade; formulado num tampão isotónico, aproxima-se da densidade do Percoll não diluído. O ISolate Concentrado foi avaliado em gradientes de 50% e 90% de acordo com este folheto informativo de produto. Cada laboratório pode escolher preparar os gradientes a concentrações diferentes, os quais devem ser previamente avaliados para a sua eficácia. A. Material sugerido: ISolate - Concentrado • Irvine Scientific, Nº Cat. 99306 Meio HTF modificado • Irvine Scientific, Nº Cat. 90126 Meio de lavagem dos espermatozóides • Irvine Scientific, Nº Cat. 9983 Tubos de centrífuga cónicos estéreis e descartáveis • Irvine Scientific, Nº Cat. IS-325 Pipetas Pasteur, estéreis Centrífuga Incubadora a 37ºC B. Preparação do gradiente: Para levar a cabo uma separação de espermatozóides por gradiente necessitam-se de duas soluções: a camada superior e a camada inferior. 1. Solução da camada superior: 50% a. Pipetar 4,5 mL do CONCENTRADO (Nº Cat. 99306) para um tubo de centrífuga estéril. b. Adicionar 5,5 mL de HTF modificado (Nº Cat. 90126) c. Tapar o tubo e inverter suavemente 3 ou 4 vezes para permitir uma mistura completa. d. Etiquetar o tubo como “CAMADA SUPERIOR”. 2. Solução da camada inferior: 90% a. Pipetar 8,1 mL do CONCENTRADO (Nº Cat. 99306) para um tubo de centrífuga estéril. b. Adicionar 1,9 mL de HTF modificado (Nº Cat. 90126) c. Tapar o tubo e inverter suavemente 3 ou 4 vezes para permitir uma mistura completa. d. Etiquetar o tubo como “CAMADA INFERIOR”. 3. Continue na secção de “PROCEDIMENTOS GERAIS”. Nota: Os valores 50% e 90% não representam uma conc tração real. Os valores 50% e 90% são concentrações relativas baseadas numa nomenclatura anterior que definia uma solução 1:9 de Percoll® como uma solução de trabalho isotónica a 100%. PROCEDIMENTOS GERAIS O protocolo que aqui se descreve é um procedimento geral para separar do sémen a fracção móvel dos espermatozoides através de um gradiente. O volume e a concentração podem-se modificar para ajustar-se às preferências de cada laboratório (p.ex. mini-gradiente, sémen crioconservado, gradiente de 3 camadas). 1. Coloque todos os meios à temperatura ambiente ou a 37ºC. 2. Utilizando uma pipeta estéril, transferir 1,5 – 2,0 mL de meio da “CAMADA INFERIOR” para um tubo de centrífuga cónico, estéril e descartável. 3. Utilizando outra pipeta estéril, transferir um volume igual ao do passo 1 de “CAMADA SUPERIOR” para a “CAMADA INFERIOR”. Para isso, colocar a ponta da pipeta na parte superior da “CAMADA INFERIOR” tocando na parede do tubo. Distribuir cuidadosamente a “CAMADA SUPERIOR” movendo a pipeta em círculos em redor da circunferência do tubo subindo à medida que aumenta o nível da “CAMADA SUPERIOR”. 4. Coloque suavemente 1,5 – 2,0 mL de sémen liquefeito sobre a “CAMADA SUPERIOR” com outra pipeta estéril. ČESKY ΕΛΛΗΝΙΚΆ PORTUGUÊS Descrição do Produto O ISolate ® é um meio de gradiente de densidades concebido para separar a fracção móvel do espermatozóide do fluído seminal. Como um sistema de gradiente de duas camadas, reduz eficazmente os contaminantes celulares como espermatozóides mortos, leucócitos e outros restos. 5. Centrifugar durante 10-20 minutos a 200-300 x g*. Cuidadosamente, exponha o sedimento quer através da aspiração das “CAMADAS SUPERIORES E INFERIORES”, ou directamente removendo o sedimento e transferindo-o para um novo tubo de centrífuga estéril. * Nota: a qualidade da amostra de espermatozóides deve ser avaliada e tomada em consideração para determinar o tempo e a velocidade de centrifugação adequadas. Estes parâmetros devem ajustar-se conforme a qualidade individual da amostra para optimizar o processo. 6. Utilizando uma nova pipeta estéril, adicionar 2.0 – 3.0 mL de meio de lavagem adequado como o Meio de Lavagem de Espermatozóides (IS Nº Cat 9983) ou HTF modificado (IS Nº Cat 90126) com suplemento proteico. Ressuspender o sedimento. Centrifugar (aprox. 200xg) 8-10 minutos e descartar o sobrenadante. Repetir este passo para numa segunda lavagem. Descartar o sobrenadante e ressuspender o sedimento utilizando um volume adequado de meio. A amostra está pronta para análise. Para detalhes adicionais sobre a utilização destes produtos, o laboratório deve consultar os seus próprios procedimentos padrão e protocolos que foram especificamente desenvolvidos e optimizados para a sua instituição. I N S T R U Ç Õ E S D E C O N S E R VA Ç Ã O E ESTABILIDADE Conserve os recipientes fechados refrigerados entre 2ºC e 8ºC. Aqueça à temperatura ambiente ou numa incubadora (37ºC) antes de utilizar. Não congele ou exponha a temperaturas altas. O ISolate é estável até à data de expiração indicada no rótulo do recipiente, sempre que seja conservado de acordo com as instruções recomendadas. PRECAUÇÕES E ADVERTÊNCIAS Este dispositivo deve ser utilizado por funcionários treinados em procedimentos aos quais se destina. O ISolate tem um aspecto opaco. Isto é normal para este produto. Não utilize nenhum recipiente de meio com evidências de conter partículas ou contaminação (turvação não homogénea). Os recipientes de ISolate devem estar hermeticamente fechados quando se utilizar uma incubadora de CO2 para evitar alterações de pH. Este meio não contém conservantes, antibióticos nem suplementos proteicos. Para evitar contaminações, manipule o produto em condições de esterilidade. E m caso de alteração do meio, não o utilize. Por favor, descarte-o o devolva-o ao fabricante para que seja substituído. CUIDADO: As leis federais dos EUA, restringem a venda deste dispositivo, apenas a médicos ou por sua prescrição. ΠΕΡΙΓΡΑΦΗ ΠΡΟΪΟΝΤΟΣ Το ISolate® είναι ένα μέσο κλίσης πυκνότητας σχεδιασμένο για διαχωρισμό του κινητικού κλάσματος του σπέρματος από το σπερματικό υγρό. Ως σύστημα κλίσης δύο στρωμάτων, μειώνει δραστικά τις κυτταρικές μολυσματικές ουσίες, όπως το νεκρό σπέρμα, τα λευκά αιμοσφαίρια και διάφορα υπολείμματα.Το δείγμα που προκύπτει περιέχει κυρίως κινητικό σπέρμα. Το ISolate είναι ένα φιλτραρισμένο με μεμβράνη, ασηπτικά επεξεργασμένο κολλοειδές αιώρημα από μόρια πυρίτιας σταθεροποιημένα με υδρόφιλο σιλάνιο με ισοσθενή δεσμό σε HEPES-ρυθμιστικό HTF. Το επίπεδο διασφάλισης αποστείρωσης (SAL) είναι 10-3. Το ISolate έχει ελεγχθεί και αποδειχθεί αρνητικό για πυρετογόνα από την εξέταση πυρετογόνων σε λαγούς. ΟΔΗΓΙΕΣ ΧΡΗΣΗΣ Αρ. Καταλόγου 99264 – ΕΤΟΙΜΗ ΓΙΑ ΧΡΗΣΗ ΚΟΛΛΟΕΙΔΗΣ ΠΥΡΙΤΙΑ ΣΕ ΔΥΟ ΣΥΓΚΕΝΤΡΩΣΕΙΣ (50% και 90%) A. Προτεινόμενα Υλικά: ISolate • Irvine Scientific Κατάλογος #99264 (6ml, 50ml ή 100 ml κιτ φιαλιδίων) Sperm Washing Medium • Irvine Scientific Κατάλογος #9983 Αποστειρωμένοι, κωνικοί σωλήνες φυγόκεντρου μιας χρήσης • Irvine Scientific Κατάλογος #IS-325 Πιπέτες Παστέρ, αποστειρωμένες Φυγόκεντρος Επωαστήρας, 37°C B. Προετοιμασία Κλίσης: Δεν χρειάζονται προκαταρκτικά διαλύματα. Κάθε φιαλίδιο κλίσης άνω και κάτω στρώματος είναι έτοιμο για χρήση. Προχωρήστε στο μέρος της ΓΕΝΙΚΗΣ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑΣ του φυλλαδίου του προϊόντος. Αρ. Καταλόγου 99275 - STOCK SOLUTION 90% πυκνότητας μέσο κλίσης για χρήση σε διαδικασία ενός βήματος ή για περαιτέρω διάλυση. A. Προτεινόμενα Υλικά: ISolate Stock Solution • Irvine Scientific Κατάλογος #99275 Modified Human Tubal Fluid • Irvine Scientific Κατάλογος #90126 Sperm Washing Medium • Irvine Scientific Κατάλογος #9983 Αποστειρωμένοι, κωνικοί σωλήνες φυγόκεντρου μιας χρήσης • Irvine Scientific Κατάλογος #IS-325 Πιπέτες Παστέρ, αποστειρωμένες Φυγόκεντρος Επωαστήρας, 37°C B. Προετοιμασία Κλίσης: Χρειάζονται δύο διαλύματα για την μέθοδο διαχωρισμού σπέρματος κλίσης: Ένα άνω και ένα κάτω στρώμα. Πάνω και κάτω στρώμα. 1.) Διάλυμα Άνω Στρώματος - 50%: α) Πάρτε STOCK SOLUTION (αρ. Καταλόγου 99275) και πιπεταρίστε 5.6 ml σε αποστειρωμένο σωλήνα φυγόκεντρου β) Προσθέστε 4.4 ml από Modified Human Tubal Fluid (αρ. Καταλόγου 90126) γ) Κλείστε τον σωλήνα και αναποδογυρίστε το απαλά 3-4 φορές για να επιτραπεί η πλήρης ανάδευση δ) Αναγράψτε στην ετικέτα του σωλήνα «ΑΝΩ ΣΤΡΩΜΑ» 2. Διάλυμα Κάτω Στρώματος - 90%: α) Υποπολλαπλασιάστε 10 ml του STOCK SOLUTION σε αποστειρωμένο σωλήνα φυγόκεντρου και σφραγίστε το – (Δεν χρειάζονται άλλες διαλύσεις - STOCK SOLUTION είναι 90%) β) Βάλτε ετικέτα στον σωλήνα ως «ΚΑΤΩ ΣΤΡΩΜΑ» 3. Συνεχίστε στο τμήμα ΓΕΝΙΚΗ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑ του φυλλαδίου του προϊόντος. (ΣΗΜΕΙΩΣΗ: 10 ml Άνω Στρώματος και 10 ml Κάτω Στρώματος, επεξεργάζονται κατά προσέγγιση 5 δείγματα σπέρματος.) Αρ. Καταλόγου 99306 - CONCENTRATE Συμπύκνωμα κολλοειδούς πυρίτιας για περαιτέρω διάλυση σε κλίσεις πυκνότητας. Σχηματίζεται σε ισοτονικό ρυθμιστικό διάλυμα και προσεγγίζει την πυκνότητα μη αραιωμένου Percoll®. Το ISolate® CONCENTRATE αξιολογήθηκε σύμφωνα με αυτό το φυλλάδιο συσκευασίας σε κλίσεις 50% και 90% . Κάθε εργαστήριο μπορεί να επιλέξει να δημιουργήσει κλίσεις με διαφορετικές συγκεντρώσεις που θα πρέπει να αξιολογηθούν για αποτελεσματικότητα. A. Προτεινόμενα Υλικά: ISolate® Συμπύκνωμα • Irvine Scientific Κατάλογος #99306 Modified Human Tubal Fluid • Irvine Scientific Κατάλογος #90126 Sperm Washing Medium • Irvine Scientific Κατάλογος #9983 Αποστειρωμένοι, κωνικοί σωλήνες φυγόκεντρου μιας χρήσης • Irvine Scientific Κατάλογος #IS-325 Πιπέτες Παστέρ, αποστειρωμένες Φυγόκεντρος Επωαστήρας, 37°C B. Προετοιμασία Κλίσης: Χρειάζονται δύο διαλύματα για την μέθοδο διαχωρισμού σπέρματος κλίσης: Ένα άνω και ένα κάτω στρώμα. 1. Διάλυμα Άνω Στρώματος - 50%: α) Πάρτε CONCENTRATE (αρ. Καταλόγου 99306) και πιπεταρίστε 4.5 ml σε αποστειρωμένο σωλήνα φυγόκεντρου β) Προσθέστε 5.5 ml από Modified Human Tubal Fluid (αρ. Καταλόγου 90126) γ) Κλείστε τον σωλήνα και αναποδογυρίστε το απαλά 3-4 φορές για να επιτραπεί η πλήρης ανάδευση δ) Αναγράψτε στην ετικέτα του σωλήνα «ΑΝΩ ΣΤΡΩΜΑ» 2. Διάλυμα Κάτω Στρώματος - 90%: α) Πάρτε CONCENTRATE (αρ. Καταλόγου 99306) και πιπεταρίστε 8.1 ml σε αποστειρωμένο σωλήνα φυγόκεντρου β) Προσθέστε 1.9 ml από Modified Human Tubal Fluid (αρ. Καταλόγου 90126) γ) Κλείστε τον σωλήνα και αναποδογυρίστε το απαλά 3-4 φορές για να επιτραπεί η πλήρης ανάδευση δ) Αναγράψτε στην ετικέτα του σωλήνα «ΚΑΤΩ ΣΤΡΩΜΑ» 3. Συνεχίστε στο τμήμα ΓΕΝΙΚΗ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑ του φυλλαδίου του προϊόντος. (ΣΗΜΕΙΩΣΗ: 10 ml Άνω Στρώματος και 10 ml Κάτω Στρώματος, επεξεργάζονται κατά προσέγγιση 5 δείγματα σπέρματος.) Σημείωση: Οι όροι 50% και 90% δεν αναφέρονται σε πραγματική συγκέντρωση. Τα 50% και 90% είναι σχετικές συγκεντρώσεις βασισμένες στην προηγούμενη ονοματολογία που όριζε διάλυμα 1:9 από Percoll® ως ίσο με 100% λειτουργικό, ισοτονικό διάλυμα. ΓΕΝΙΚΗ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑ Παρακάτω ακολουθεί η γενική διαδικασία για διαχωρισμό κλίσης δύο βημάτων του κινητού σπερματοζωαρίου από το σπέρμα. Ο όγκος και η συγκέντρωση μπορούν να τροποποιηθούν για να ανταποκρίνονται στις εργαστηριακές προτιμήσεις (δηλ. μινι-κλίση, κρυοσυντηρημένο σπέρμα, κλίση τριών στρωμάτων). 1. Φέρτε όλα τα εξαρτήματα των μέσων σε θερμοκρασία δωματίου ή στους 37°C. 2. Χρησιμοποιώντας αποστειρωμένη πιπέτα, μεταφέρετε 1.5 - 2.0 ml του «ΚΑΤΩ ΣΤΡΩΜΑΤΟΣ» σε αποστειρωμένο, μίας χρήσης, κωνικό φυγόκεντρο σωλήνα. 3. Χρησιμοποιώντας μια νέα αποστειρωμένη πιπέτα, μεταφέρετε ίσο όγκο «ΠΑΝΩ ΣΤΡΩΜΑΤΟΣ» πάνω από το «ΚΑΤΩ ΣΤΡΩΜΑ». Αυτό γίνεται με επαφή της επιφάνειας του «ΚΑΤΩ ΣΤΡΩΜΑΤΟΣ» στο πλάι του σωλήνα με την άκρη της πιπέτας. Διαχύστε προσεκτικά το «ΑΝΩ ΣΤΡΩΜΑ» στροβιλίζοντας την άκρη της πιπέτας γύρω από την περιφέρεια του σωλήνα με κινήσεις προς τα πάνω, καθώς το επίπεδο του «ΑΝΩ ΣΤΡΩΜΑΤΟΣ» ανυψώνεται. 4. Τοποθετήστε απαλά 1.5 - 2.0 ml ρευστοποιημένου σπέρματος στο «ΠΑΝΩ ΣΤΡΩΜΑ» χρησιμοποιώντας νέα αποστειρωμένη πιπέτα. 5. Τοποθετήστε για φυγοκέντρηση για 10-20 λεπτά σε περίπου 200 - 300xg.* Εκθέστε προσεκτικά το συσσωμάτωμα είτε με αναρρόφηση του «ΑΝΩ» και «ΚΑΤΩ ΣΤΡΩΜΑΤΟΣ» ή με άμεση αφαίρεση του και μεταφορά σε νέο αποστειρωμένο σωλήνα φυγόκεντρου. *Σημείωση: Η ποιότητα του δείγματος σπέρματος θα πρέπει να αξιολογείται και να λαμβάνεται υπόψη στον καθορισμό της σωστής ταχύτητας και του χρόνου φυγοκέντρησης. Θα πρέπει να προσαρμοστούν σύμφωνα με την ξεχωριστή ποιότητα δείγματος για βελτιστοποίηση της διαδικασίας. 6. Χρησιμοποιώντας νέα αποστειρωμένη πιπέτα, προσθέστε 2.0 - 3.0 ml κατάλληλου μέσου έκπλυσης όπως το Sperm Washing Medium (IS αρ. Καταλόγου 9983) ή Modified HTF (IS αρ. Καταλόγου 90126) με συμπλήρωμα πρωτεϊνών. Αιωρείστε ξανά το απομονωμένο συσσωμάτωμα. Υποβάλλετε σε φυγοκέντρηση (~200xg) για 8 -10 λεπτά και αφαιρέστε το υπερκείμενο υγρό. Επαναλάβετε αυτό το βήμα για δεύτερη έκπλυση. Απορρίψτε το υπερκείμενο υγρό και αιωρείστε ξανά το συσσωμάτωμα χρησιμοποιώντας κατάλληλο όγκο του κατάλληλου μέσου. Το δείγμα είναι πλέον έτοιμο για ανάλυση. Pro dodatečné podrobnosti o použití těchto výrobků by každá laboratoř měla konzultovat vlastní laboratorní metody a protokoly, které byly vytvořeny a optimalizovány zvlášť pro váš konkrétní zdravotnický program. ΟΔΗΓΙΕΣ ΦΥΛΑΞΗΣ ΚΑΙ ΣΤΑΘΕΡΟΤΗΤΑ Φυλάσσετε τα κλειστά δοχεία σε ψύξη στους 2º έως 8ºC. Θερμάνετε σε θερμοκρασία περιβάλλοντος ή επωαστήρα (37°C) πριν τη χρήση. Μην ψύχετε ή εκθέτετε σε υψηλές θερμοκρασίες. Το ISolate παραμένει σταθερό μέχρι την ημερομηνία λήξης που αναγράφεται στις ετικέτες του κουτιού και των φιαλών, όταν φυλάσσεται σύμφωνα με τις οδηγίες. ΠΡΟΦΥΛΑΞΕΙΣ ΚΑΙ ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΕΙΣ Η συσκευή αυτή προορίζεται για χρήση από προσωπικό που έχει εκπαιδευτεί σε διαδικασίες που περιλαμβάνουν τη συγκεκριμένη εφαρμογή για την οποία προορίζεται η συσκευή. Το ISolate έχει αδιαφανή εμφάνιση. Αυτό είναι φυσιολογικό για το συγκεκριμένο προϊόν. Μην κάνετε χρήση φιαλιδίου μέσου που παρουσιάζει ύπαρξη σωματιδίων ή μολυσματικών ουσιών (μη ενιαία θολότητας). Το ISolate πρέπει να είναι καλά κλειστό όταν χρησιμοποιείται σε επωαστήρα CO2, για να αποφεύγονται οι αλλαγές pH. Το προϊόν δεν περιέχει συντηρητικά, αντιβιοτικά ή συμπληρώματα πρωτεϊνών. Για να αποφύγετε προβλήματα μόλυνσης, χρησιμοποιήστε ασηπτικές τεχνικές. Σε περίπτωση ζημιάς, μην χρησιμοποιείτε. Παρακαλούμε απορρίψτε ή επιστρέψτε στον Παρασκευαστή για αντικατάσταση. ΠΡΟΣΟΧΗ: Η ομοσπονδιακή (Η.Π.Α.) νομοθεσία περιορίζει αυτή τη συσκευή σε πώληση από ή κατά εντολή γιατρού. POPIS VÝROBKU ISolate® je médium gradientu hustoty zhotovené na oddělení motilní frakce spermií ze semenné kapaliny. Protože je to dvouvrstevný gradientní systém, efektivně snižuje buňkovou kontaminaci jako např. odumřelé spermie, bílé krevní buňky a jiné nečistoty. Výsledný vzorek obsahuje většinou motilní spermie. ISolate asepticky zpracovaná koloidní suspenze křemíkových částic, filtrovaná přes membránu a stabilizovaná kovalentně vázaným hydrofilním silanem v pufrovaném HEPES HTF. Hladina zaručené sterilizace (SAL) je 10-3. ISolate bylo testováno a shledáno negativním na pyrogeny při pyrogenním testu provedeném na laboratorním králíkovi. NÁVOD K POUŽITÍ Kat. č. 99264 – KOLOIDNÍ KŘEMÍK VE DVOU KONCENTRACÍCH (50 % a 90 %) K OKAMŽITÉMU POUŽITÍ A. Doporučený materiál: ISolate • Irvine Scientific Katalog #99264 (sada 6ml, 50ml nebo 100 ml ampulek ) Sperm Washing Medium • Irvine Scientific Katalog #9983 Sterilní kónické odstředivkové trubičky • Irvine Scientific Katalog #IS-325 Sterilní pipety Pasteur Odstředivka Inkubátor, 37 °C B. Příprava gradientu: Žádné předběžné ředění není nutné. Každá ampulka gradientu horní a spodní vrstvy je připravena na použití. Pokračujte až po část příbalového letáku nazvanou OBECNÁ METODA. Kat. č. #99275 - ZÁSOBNÍ ROZTOK Médium s 90% gradientem hustoty na použití v jednokrokové proceduře nebo na další ředění. A. Doporučený materiál: ISolate STOCK SOLUTION • Irvine Scientific Katalog #99275 Modified Human Tubal Fluid • Irvine Scientific Katalog #90126 Sperm Washing Medium • Irvine Scientific Katalog #9983 Sterilní kónické odstředivkové trubičky • Irvine Scientific Katalog #IS-325 Sterilní pipety Pasteur Odstředivka Inkubátor, 37 °C B. Příprava gradientu: Jsou potřeba dva roztoky na provedení metody gradientní separace spermií: horní vrstvy a spodní vrstvy. Horní vrstva a spodní vrstva. 1. Roztok horní vrstvy – 50 %: a.) Napipetujte 5,6 ml koncentrátu CONCENTRATE (kat. č. 99275) do sterilní odstředivkové trubičky. b) Přidejte 4,4 ml Modified Human Tubal Fluid (kat. č. 90126) c) Zazátkujte zkumavku a opatrně ji převraťte 3-4krát, aby došlo k celkovému promíchání. d) Označte trubičku „HORNÍ VRSTVA“ 2. Roztok spodní vrstvy – 90 %: a) Nadávkujte alikvotní podíl 10 ml roztoku STOCK SOLUTION do sterilní odstředivkové trubičky se zátkou – (Dalšího ředění není třeba - STOCK SOLUTION je 90%) b) Označte trubičku “SPODNÍ VRSTVA“ 3. Pokračujte až po část příbalového letáku výrobku nazvanou ZÁKLADNÍ POSTUP. (POZNÁMKA: 10 ml Horní vrstvy a 10 ml Spodní vrstvy zpracuje přibližně 5 vzorků sperma.) Kat. č. #99306 - KONCENTRÁT Koncentrát koloidního křemíku pro další ředění na gradienty hustoty; je formulován v izotonickém pufru a má přibližnou hustotu neředěného přípravku Percoll®. ISolate® CONCENTRATE byl hodnocen podle tohoto příbalového letáku při 50% a 90% gradientech. Každá laboratoř si může zvolit vytvoření gradientů různých koncentrací, jejichž efektivnost by měla být ohodnocena. A. Doporučený materiál: Koncentrát ISolate® • Irvine Scientific Katalog #99306 Modified Human Tubal Fluid • Irvine Scientific Katalog #90126 Sperm Washing Medium • Irvine Scientific Katalog #9983 Sterilní kónické odstředivkové trubičky • Irvine Scientific Katalog #IS-325 Sterilní pipety Pasteur Odstředivka Inkubátor, 37 °C B. Příprava gradientu: Jsou potřeba dva roztoky na provedení metody gradientní separace spermií: horní vrstvy a spodní vrstvy. 1. Roztok horní vrstvy – 50 %: a) Napipetujte 4,5 ml CONCENTRATE (kat. č. 99306) do sterilní odstředivkové trubičky. b) Přidejte 5,5 ml Modified Human Tubal Fluid (kat. č. 90126) c) Zazátkujte zkumavku a opatrně ji převraťte 3-4krát, aby došlo k celkovému promíchání. d) Označte trubičku „HORNÍ VRSTVA“ 2. Roztok spodní vrstvy – 90 %: a) Napipetujte 8,1 ml CONCENTRATE (kat. č. 99306) do sterilní odstředivkové trubičky. b) Přidejte 1,9 ml Modified Human Tubal Fluid (kat. č. 90126) c) Zazátkujte zkumavku a opatrně ji převraťte 3-4krát, aby došlo k celkovému promíchání. d) Označte trubičku „SPODNÍ VRSTVA“ 3. Pokračujte až po část příbalového letáku výrobku nazvanou ZÁKLADNÍ POSTUP. (POZNÁMKA: 10 ml Horní vrstvy a 10 ml Spodní vrstvy zpracuje přibližně 5 vzorků sperma.) Poznámka: Hodnoty 50 % a 90 % nepředstavují skutečné koncentrace. 5 0% a 90 % jsou relativní koncentrace založené na dřívější terminologii, která definovala poměr 1:9 ředění přípravku Percoll ® jako rovnající se 100% účinnému isotonickému roztoku. OBECNÁ METODA Následující je obecný postup na dvoukrokovou gradientní separaci motilní spermie od spermatu. Objem a koncentrace mohou být upraveny, aby splňovaly preference každé laboratoře (např. mini-gradient, kryoprezervované semeno, trojvrstevní gradient). 1. Vytemperujte všechny složky média na pokojovou teplotu nebo na 37 °C. 2. Pomocí sterilní pipety převeďte 1,5 – 2,0 ml „SPODNÍ VRSTVY“ do sterilní, kónické odstředivkové trubičky na jedno použití. 3. Pomocí nové sterilní pipety převeďte stejný objem „HORNÍ VRSTVY“ na horní část „SPODNÍ VRSTVY“. Provádí se to dotykem povrchu „SPODNÍ VRSTVY” na straně zkumavky hrotem pipety. Opatrně dávkujte „HORNÍ VRSTVU“ kroužením hrotu pipety kolem obvodu trubičky pohybem směrem nahoru zatímco se hladina „HORNÍ VRSTVY“ bude zvedat. 4. Opatrně umístěte 1,5 – 2,0 ml zkapalněného spermatu do „HORNÍ VRSTVY“ pomocí nové sterilní pipety. 5. Odstřeďte 10-20 minut při odstředivé síle kolem 200 300xg.* Opatrně odhalte granuli buď aspirací „HORNÍ“ a „SPODNÍ VRSTVY“ nebo vyjměte granuli přímo a přeneste ji do nové sterilní odstředivkové trubičky. *Poznámka: Kvalita vzorku spermií by měla být zhodnocena a brána v úvahu při určování správné rychlosti odstředivky a doby odstředění. Měly by být upraveny podle kvality individuálních vzorků pro optimalizaci procedury. 6. Pomocí nové sterilní pipety přidejte 2,0 – 3,0 ml mycího média jako např. Sperm Washing Medium (IS kat. č. 9983) nebo Modified HTF (IS kat. č. 90126) s proteinovým suplementem. Resuspendujte separovanou granuli. Odstřeďte (~200xg) po dobu 8 -10 minut a odeberte supernatant. Zopakujte tento krok pro druhé promytí. Odstraňte supernatant a resuspendujte granuli pomocí vhodného objemového množství náležitého média. Vzorek je nyní připraven pro analýzu. Pro dodatečné podrobnosti o použití těchto výrobků by každá laboratoř měla konzultovat vlastní laboratorní metody a protokoly, které byly vytvořeny a optimalizovány zvlášť pro váš konkrétní zdravotnický program. POKYNY PRO SKLADOVÁNÍ A STÁLOST Skladujte neotevřené nádoby v lednici při 2 º až 8 ºC. Ohřejte na okolní teplotu nebo na teplotu inkubátoru (37 °C) před použitím. Nezmrazujte a nevystavujte vysokým teplotám. Při doporučeném skladování je ISolate stabilní do expirační doby, která je vyznačena na štítcích kartónu a láhve. VAROVÁNÍ A BEZPEČNOSTNÍ OPATŘENÍ Zařízení bylo určeno pro použití školeným personálem při zákrocích, které zahrnují indikovanou aplikaci, pro kterou je zařízení určeno. ISolate se bude jevit neprůhledné. Je to pro tento výrobek normální. Nepoužívejte žádné ampulky média, které jeví známky přítomnosti částic hmoty nebo nečistot (nerovnoměrně zakalené). ISolate by mělo být těsně uzavřeno, pokud bude používáno v CO2 inkubátoru, aby se předešlo změnám pH . Tento výrobek neobsahuje žádné konzervační látky, antibiotika, ani protein nebo jiné suplementy. Vyhněte se problémům kontaminace, při práci dodržujte aseptické metody. V případě poškození nepoužívejte. Likvidujte nebo zašlete výrobci na výměnu. POZOR: Federální zákony USA omezují prodej tohoto zařízení pouze na lékaře nebo na jeho předpis. ISolate er en membranfiltreret, aseptisk behandlet kolloid suspension af silicapartikler stabiliseret med kovalent bundet hydrofilt silan i HEPES-bufret HTF. Sterilitetssikringsniveauet (SAL) er 10-3. ISolate er blevet testet med en kaninpyrogentest og fundet pyrogentfrit. BRUGSANVISNING Katalognr. 99264 – BRUGSKLART KOLLOID SILIKA I TO KONCENTRATIONER (50 % og 90 %) A. Anbefalede materialer: ISolate • Irvine Scientific katalognr. 99264 (sæt med 6 ml, 50ml- eller 100 ml-hætteglas) Sperm Washing Medium • Irvine Scientific katalognr. 9983 Sterile, koniske centrifugerør til engangsbrug • Irvine Scientific katalognr. IS-325 Pasteurpipetter, sterile Centrifuge Inkubator, 37 ºC B. Forberedelse af gradientopløsning: Forudgående fortynding er ikke nødvendig. Hvert hætteglas med øverste eller underste lag gradient er klar til brug. Forsæt med afsnittet GENEREL PROCEDURE på indlægssedlen. Katalognr. 99275 – STOCK SOLUTION Medium med 90 % densitetsgradient til brug i en ét-trinsprocedure eller til yderligere fortynding. A. Anbefalede materialer: ISolate Stock Solution • Irvine Scientific katalognr. 99275 Modified Human Tubal Fluid • Irvine Scientific katalognr. 90126 Sperm Washing Medium • Irvine Scientific katalognr. 9983 Sterile, koniske centrifugerør til engangsbrug • Irvine Scientific katalognr. IS-325 Pasteurpipetter, sterile Centrifuge Inkubator, 37 ºC B. Forberedelse af gradientopløsning: Der kræves to opløsninger til at udføre gradientseparation af sæd: Et øverste lag og et nederste lag. 1. Opløsning i øverste lag - 50 %. a) Tag STOCK SOLUTION (katalognr. 99275) og pipetter 5,6 ml ned i et sterilt centrifugerør b) Tilsæt 4,4 ml Modified Human Tubal Fluid (katalognr. 90126) c) Sæt låg på røret og vend det forsigtigt 3-4 gange for at blande helt d) Skriv “ØVERSTE LAG” på rørets etiket 2. Opløsning i nederste lag - 90 %. a) Tag 10 ml STOCK SOLUTION op i et sterilt centrifugerør og sæt låg på - (det er ikke nødvendigt at fortynde yderligere - STOCK SOLUTION er 90 %) b) Skriv “NEDERSTE LAG” på rørets etiket 3. Forsæt med afsnittet GENEREL PROCEDURE på indlægssedlen. (BEMÆRK: 10 ml af det øverste lag og 10 ml af det nederste lag kan behandle ca. 5 sædprøver). 6. Brug en ny, steril pipette og tilsæt 2,0-3,0 ml af et passende vaskemedium såsom Sperm Washing Medium (IS katalognr. 9983) eller Modified HTF (IS katalognr. 90126) med tilsat protein. Resuspender de isolerede sædceller (pellet). Centrifuger (~ 200 xg) i 8-10 minutter og fjern supernatanten. Gentag dette trin og vask en gang til. Bortskaf supernatanten og resuspender sædcellerne (pellet) vha. en egnet volumen af passende medium. Prøven er nu klar til analysering. For yderligere oplysninger om brug af disse produkter skal hvert laboratorium henvise til egne procedurer og protokoller, som er blevet specifikt udviklet og optimeret til laboratoriets eget, medicinske program. ANVISNINGER ANG OPBEVARING OG STABILITET Uåbnede beholdere opbevares nedkølet ved 2-8 ºC. Opvarm til stuetemeperatur eller inkubatortemperatur (37 °C) inden brug. Må ikke nedfryses eller udsættes for høje temperaturer. ISolate er stabilt indtil udløbsdatoen på æskens og flaskens etiket, når det opbevares som anvist. FORHOLDSREGLER OG ADVARSLER Dette udstyr er beregnet til brug af personale, der er uddannet i procedurer, der inkluderer den indicerede anvendelse, som dette udstyr er beregnet til. ISolate er uigennemsigtigt. Det er normalt for dette produkt. Anvend ikke hætteglas med medium, der indeholder partikler eller viser tegn på at være kontamineret (uensartede uklarheder). Låget på ISolate skal sidde tæt til, hvis det skal bruges i en CO2-inkubator, for at undgå ændringer i pH-værdien. Dette produkt indeholder ingen konserveringsmidler, antibiotika eller proteinsupplementer. Undgå problemer med kontamination ved at bruge aseptiske teknikker. Må ikke anvendes i tilfælde af beskadigelse. Bortskaf eller returner til producenten med henblik på udskiftning. FORSIGTIG: Ifølge amerikansk lov (USA) må dette produkt kun sælges af eller efter ordination af en læge. TUOTTEEN KUVAUS ISolate ® on tiheysgradienttiliuos, jota käytetään erottamaan motiilien siittiöiden osa siemennesteestä. Kaksikerroksisena gradienttijärjestelmänä se tehokkaasti vähentää solukontaminantteja, kuten kuolleita siittiöitä, valkoisia verisoluja ja vastaavia jätteitä. Tuloksena saatu näyte sisältää pääasiassa motiileja siittiöitä. ISolate – HEPES on kalvosuodatettu ja aseptisesti käsitelty kolloidisuspensio, jossa silikahiukkaset on stabiloitu kovalenttisidoksessa hydrofiilisen silaanin kanssa HEPESpuskuroidussa HTF:ssä. Steriilisyystaso (SAL) on 10-3. ISolate on testattu ja todettu pyrogeeneille negatiiviseksi kanin pyrogeenitestissä. KÄYTTÖOHJEET L u e t t e l o n r o 9 9 2 6 4 - K Ä Y T T ÖVA L M I S KOLLOIDINEN SILIKA KAHDESSA PITOISUUDESSA (50 % ja 90 %) A. Suositellut materiaalit: ISolates • Irvine Scientific luettelonro 99264 (6ml:n, 50ml tai 100 ml:n pullopakkaus) Sperm Washing Medium • Irvine Scientific luettelonro 9983 Steriilit kertakäyttöiset kartiomaiset sentrifugiputket • Irvine Scientific luettelonro IS-325 Pasteur -pipetit, steriilit Sentrifugi Inkubaattori, 37 °C B. Gradientin valmistus: Alustavia laimennuksia ei tarvita. Kukin ylemmän tai alemman kerroksen gradienttipullo on käyttövalmis. Siirry tuote-esitteen osaan YLEISET TOIMENPITEET. Luettelonro 99275 - STOCK SOLUTION 90 %:n tiheysgradienttinen ravintoliuos, jota käytetään yksivaiheisessa toimenpiteessä tai lisälaimennuksessa. A. Suositellut materiaalit: ISolate STOCK SOLUTION • Irvine Scientific luettelonro 99275 Modified Human Tubal Fluid • Irvine Scientific luettelonro 90126 Sperm Washing Medium • Irvine Scientific luettelonro 9983 Steriilit kertakäyttöiset kartiomaiset sentrifugiputket • Irvine Scientific luettelonro IS-325 Pasteur -pipetit, steriilit Sentrifugi Inkubaattori, 37 °C B. Gradientin valmistus: Siittiöiden gradienttierotteluun tarvitaan kaksi liuosta: ylempi kerros ja alempi kerros. 1. Ylemmän kerroksen liuos 50 %. a) Ota STOCK SOLUTIONia (luettelonro 99275) ja pipetoi 5,6 ml steriiliin sentrifugiputkeen. b) Lisää 4,4 ml Modified Human Tubal Fluidia (luettelonro 90126). c) Sulje putki ja käännä se varovasti ylösalaisin 3 - 4 kertaa, jotta se saa täysin sekoittua. d) Merkitse putkeen “YLEMPI KERROS” 2. Alemman kerroksen liuos – 90 %. a) Jaa tasan 10 ml STOCK SOLUTIONia steriiliin sentrifugiputkeen ja sulje se – (Lisälaimennuksia ei tarvita -STOCK SOLUTION on 90-prosenttista). b) Merkitse putkeen “ALEMPI KERROS” 3. Jatka tuote-esitteen osaan YLEISET TOIMEN PITEET. (HUOM: 10 ml ylempää ja 10 ml alempaa kerrosta riittää noin 5:n siemennestenäytteen käsittelyyn.) Katalognr. 99306 – CONCENTRATE Koncentrat af kolloid silika til yderligere fortynding i densitetsgradienter; formuleret i en isotonisk buffer og svarende til densiteten af ufortyndet Percoll®. ISolate® CONCENTRATE er blevet evalueret ifølge denne indlægsseddel ved 50 % og 90 % gradienter. Hvert laboratorium kan vælge at lave gradienter i forskellige koncentrationer, som bør evalueres med henblik på effektivitet. Luettelonro 99306 - CONCENTRATE Kolloidisilikatiiviste, jolla saadaan aikaan laimennus tiheysgradientteihin; formuloitu isotonisessa puskurissa ja vastaa suunnilleen laimentamattoman Percoll®in tiheyttä. ISolate® CONCENTRATE on arvioitu pakkauksen esitteen mukaisesti 50 %- ja 90 %-gradienttia vastaaviksi. Kukin laboratorio voi valmistaa gradientteja eri pitoisuuksilla, joiden tehokkuus tulee arvioida. A. Anbefalede materialer: ISolate® koncentrat • Irvine Scientific katalognr. 99306 Modified Human Tubal Fluid • Irvine Scientific katalognr. 90126 Sperm Washing Medium • Irvine Scientific katalognr. 9983 Sterile, koniske centrifugerør til engangsbrug • Irvine Scientific katalognr. IS-325 Pasteurpipetter, sterile Centrifuge Inkubator, 37 ºC A. Suositellut materiaalit: ISolate® -tiiviste • Irvine Scientific luettelonro 99306 Modified Human Tubal Fluid • Irvine Scientific luettelonro 90126 Sperm Washing Medium • Irvine Scientific luettelonro 9983 Steriilit kertakäyttöiset kartiomaiset sentrifugiputket • Irvine Scientific luettelonro IS-325 Pasteur -pipetit, steriilit Sentrifugi Inkubaattori, 37 °C B. Forberedelse af gradientopløsning: Der kræves to opløsninger til at udføre gradientseparation af sæd: Et øverste lag og et nederste lag. 1. Opløsning i øverste lag - 50 %. a) Tag CONCENTRATE (katalognr. 99306) og pipetter 4,5 ml ned i et sterilt centrifugerør b) Tilsæt 5,5 ml Modified Human Tubal Fluid (katalognr. 90126) c) Sæt låg på røret og vend det forsigtigt 3-4 gange for at blande helt d) Skriv “ØVERSTE LAG” på rørets etiket 2. Opløsning i nederste lag - 90 %. a) Tag CONCENTRATE (katalognr. 99306) og pipetter 8,1 ml ned i et sterilt centrifugerør b) Tilsæt 1,9 ml Modified Human Tubal Fluid (katalognr. 90126) c) Sæt låg på røret og vend det forsigtigt 3-4 gange for at blande helt d) Skriv “NEDERSTE LAG” på rørets etiket 3. Forsæt med afsnittet GENEREL PROCEDURE på indlægssedlen. (BEMÆRK: 10 ml af det øverste lag og 10 ml af det nederste lag kan behandle ca. 5 sædprøver). B. Gradientin valmistus: Siittiöiden gradienttierotteluun tarvitaan kaksi liuosta: ylempi kerros ja alempi kerros. 1. Ylemmän kerroksen liuos - 50 %. a) Ota CONCENTRATE:a (luettelonro 99306) ja pipetoi 4,5 ml steriiliin sentrifugiputkeen. b) Lisää 5,5 ml Modified Human Tubal Fluidia (luettelonro 90126). c) Sulje putki ja käännä se varovasti ylösalaisin 3 - 4 kertaa, jotta se saa täysin sekoittua. d) Merkitse putkeen “YLEMPI KERROS” 2. Alemman kerroksen liuos – 90 %. a) Ota CONCENTRATE:a (luettelonro 99306) ja pipetoi 8,1 ml steriiliin sentrifugiputkeen b) Lisää 1,9 ml Modified Human Tubal Fluidia (luettelonro 90126). c) Sulje putki ja käännä se varovasti ylösalaisin 3 - 4 kertaa, jotta se saa täysin sekoittua. d) Merkitse putkeen “ALEMPI KERROS” 3. Jatka tuote-esitteen osaan YLEISET TOIMEN PITEET. (HUOM: 10 ml ylempää ja 10 ml alempaa kerrosta riittää noin 5:n siemennestenäytteen käsittelyyn.) Bemærk: Betegnelserne 50 % og 90 % angiver ikke en faktisk koncentration. 50 % og 90 % er relative koncentrationer baseret på det tidligere nomenklatur, der definerede en 1:9 fortynding af Percoll® som svarende til en 100 % isotonisk arbejdsopløsning. GENEREL PROCEDURE Følgende er en generel procedure for en gradientseparation af motile sædceller fra sædvæsken. Volumenen og koncentrationen kan modificeres i henhold til hvert enkelt laboratories præferencer (dvs. minigradient, cryopreserveret sæd, gradient i tre lag). 1. Bring alle mediekomponenter til stuetemperatur eller 37 °C. 2. Brug en steril pipette og overfør 1,5-2,0 ml af det “NEDERSTE LAG” til et sterilt, konisk centrifugerør til engangsbrug. 3. Brug en ny, steril pipette og overfør en tilsvarende volumen af “ØVERSTE LAG” oven på “NEDERSTE LAG”. Det gøres ved at berøre overfladen af det “UNDERSTE LAG” i siden af røret med pipettespidsen. Dispenser forsigtigt det “ØVERSTE LAG” ved at føre pipettespidsen i en opadgående spiralbevægelse mod rørets inderside efterhånden, som niveauet af det “ØVERSTE LAG” stiger. 4. Placer forsigtigt 1,5-2,0 ml flydende sæd oven på “ØVERSTE LAG” med en ny, steril pipette. 5. Centrifuger i 10-20 minutter ved ca. 200-300 x g.* Eksponer forsigtigt sædcellerne (pellet) ved enten at aspirere det “ØVERSTE” og “UNDERSTE” lag væk, eller direkte ved at fjerne sædcellerne og overføre dem til et nyt, sterilt centrifugerør. Bemærk: Kvaliteten af sædprøven skal evalueres og tages i betragtning, når den korrekte centrifugeringshastighed og -tid skal fastslås. Disse skal justeres i henhold til den enkelte sædprøves kvalitet med henblik på optimering af proceduren. LATVISKI SUOMI DANSK PRODUKTBESKRIVELSE ISolate® er et densitetsgradientmedium, der er fremstillet til at separere de motile sædceller fra sædvæsken. Som et gradientsystem i to lag reducerer det effektivt cellulære kontaminanter såsom død sæd, leukocytter og diverse restmaterialer. Den færdige prøve indeholder hovedsageligt motile sædceller. Huom: Termit 50 % ja 90 % eivät edusta todellista pitoisuutta. 50- ja 90-prosenttiset pitoisuudet ovat suhteellisia ja perustuvat aiempaan luokitukseen, jossa 1:9 laimennus Percoll®illa on määritelty 100 %:sti toimivaa isotonista liuosta vastaavaksi. YLEISET TOIMENPITEET Seuraavassa annetaan yleiset ohjeet kaksivaiheiseen siittiöiden siemennesteestä erottamiseen gradientin avulla. Tilavuutta ja pitoisuutta voidaan muunnella kunkin laboratorion toivomusten mukaan (so. minigradientti, kylmäsäilötty siemenneste, kolmikerroksinen gradientti). 1. Anna kaikkien ravintoliuosainesosien saavuttaa huoneenlämpötila tai 37 °C. 2. Steriiliä pipettiä käyttäen siirrä1,5 – 2,0 ml “ALEMPAA KERROSTA” steriiliin kertakäyttöiseen kartiomaiseen sentrifugiputkeen. 3. Siirrä steriilillä pipetillä sama tilavuus ”YLEMPÄÄ KERROSTA” ”ALEMMAN KERROKSEN” päälle. Tämä tapahtuu koskettamalla pipetin kärjellä ”ALEMMAN KERROKSEN” pintaa putken reunalla. Tyhjennä “YLEMPI KERROS” varovasti kiertäen pipetin kärkeä ympäri putkea yläsuuntaan samalla kun “YLEMMÄN KERROKSEN” taso nousee. 4. Aseta varovasti 1,5 – 2,0 ml nestemäistä siemennestettä “YLEMMÄLLE KERROKSELLE” uudella steriilillä pipetillä. 5. Linkoa 10 - 20 minuuttia asetuksella 200 – 300 x g.* Paljasta pelletti varovasti joko aspiroimalla se “YLEMMÄSTÄ” ja “ALEMMASTA KERROKSESTA” tai poistamalla pelletti suoraan ja siirtämällä se uuteen steriiliin sentrifugiputkeen. *Huom: Siittiönäytteen laatu tulee arvioida ja ottaa huomioon niiden linkoamisen tarkoituksenmukaista nopeutta ja kestoa määritettäessä. Näitä tulee säädellä yksittäisen näytteen laadun mukaisesti toimenpiteen optimoimiseksi. 6. Käyttäen uutta steriiliä pipettiä lisää 2,0 – 3,0 ml sopivaa pesuainetta, kuten Sperm Washing Medium (IS luettelonro 9983) tai Modified HTF (IS luettelonro 90126) proteiinilisineen. Upota eristetty pelletti uudelleen. Linkoa se (~ 200 x g) 8 -10 minuuttia ja poista pintaneste. Toista tämä vaihe uutta pesua varten. Hävitä pintaneste ja suspendoi pelletti uudelleen käyttäen asianmukaista ravintoliuosta sopivassa tilavuudessa. Näyte on nyt valmis analysoitavaksi. PRODUKTA APRAKSTS ISolate® blīvuma gradienta barotnes ir materiāls, kas paredzēts spermatozoīdu motilo frakciju atdalīšanai no sēklas šķidruma. Kā divslāņu gradientu sistēma tā efektīvi mazina šūnu izraisītas kontaminācijas iespējas, piemēram, kontamināciju ar nedzīviem spermatozoīdiem, baltajiem asinsķermenīšiem un dažādām pārpalikumšūnām. Rezultātā iegūtais paraugs galvenokārt satur kustīgus spermatozoīdus. Lisätietoja näiden tuotteiden käytöstä kunkin laboratorion tulee hakea omista menettelyohjeistaan ja protokollista, jotka on erityisesti kehitetty ja optimoitu paikallista lääkinnällistä ohjelmaa varten. ISolate ir caur membrānu filtrēta un aseptiski apstrādāta koloidāla silīcija dioksīda daļiņu suspensija, kas stabilizēta ar kovalenti piesaistītu hidrofīlu silānu HEPES buferētā HTF. Sterilitātes nodrošināšanas līmenis (SAL) ir 10-3. ISolate ir testēts, un ir konstatēts, ka tas ir negatīvs attiecībā uz pirogēnām baktērijām pirogēno baktēriju testā trušiem. SÄILYTYSOHJEET JA STABILITEETTI Avaamattomat säiliöt säilytettävä kylmässä, 2 – 8 ºC. Lämmitä ympäristölämpöön tai inkubaattorin lämpötilaan (37 °C) ennen käyttöä. Ei saa jäädyttää tai altistaa korkeille lämpötiloille. ISolate on stabiili pakkaukseen ja pullojen etiketteihin merkittyyn eräpäivään saakka ohjeiden mukaisesti säilytettynä. VAROITUKSIA JA VAROTOIMENPITEITÄ Tämä laite on tarkoitettu sellaisten henkilöiden käytettäväksi, jotka on koulutettu suorittamaan toimenpiteitä, joihin kuuluu laitteen käyttötarkoituksen mukainen asianmukainen käyttö. ISolate näyttää läpinäkymättömältä. Tämä on tuotteelle normaalia. Älä käytä ravintoliuospulloa, jossa näkyy hiukkasia tai saastumista (epätasaista sameutta). ISolaten korkin tulee olla tiiviisti kiinni, kun sitä käytetään hiilidioksidi-inkubaattorissa pH-muutosten välttämiseksi. Tässä tuotteessa ei ole säilöntäaineita, antibiootteja eikä proteiinilisäaineita. Kontaminaatio-ongelmat vältetään aseptisella käsittelytekniikalla. Jos pakkaus on vahingoittunut, älä käytä sitä. Hävitä tuote tai palauta se valmistajalle vaihdettavaksi. VAROITUS: Yhdysvaltain liittovaltion laki rajoittaa tämän välineen myynnin vain lääkärin toimesta tai määräyksestä tapahtuvaksi. LIETOŠANAS NORĀDĪJUMI Kataloga Nr. 99264 – LIETOŠANAI GATAVS KOLOIDĀLS SILĪCIJA DIOKSĪDS DIVĀS KONCENTRĀCIJĀS (50% un 90%) A. Ieteicamie materiāli: ISolate • Irvine Scientific kataloga Nr. 99264 (6ml, 50ml vai 100 ml flakonu komplekts) Sperm Washing Medium • Irvine Scientific kataloga Nr. 9983 Sterili, koniski vienreizējās lietošanas centrifūgas stobriņi • Irvine Scientific kataloga Nr. IS-325 Pastēra pipetes, sterilas Centrifūga Inkubators, 37°C B. Gradienta sagatavošana: Nav nepieciešama iepriekšēja atšķaidīšana. Katrs flakons ar augšējā un apakšējā slāņa gradientu ir gatavs lietošanai. Pārejiet pie izstrādājuma ieliktnī aprakstītās VISPĀRĒJĀS PROCEDŪRAS. Kataloga Nr. - 99275 - STOCK SOLUTION 90% specifiska barotne izmantošanai tūlītējā procedūrā vai atšķaidīšanai turpmāk. A. Ieteicamie materiāli: ISolate STOCK SOLUTION •Irvine Scientific kataloga Nr. 99275 Modified Human Tubal Fluid •Irvine Scientific kataloga Nr. 90126 Sperm Washing Medium •Irvine Scientific kataloga Nr. 9983 Sterili, koniski vienreizējās lietošanas centrifūgas stobriņi •Irvine Scientific kataloga Nr. IS-325 Pastēra pipetes, sterilas Centrifūga Inkubators, 37°C B. Gradienta sagatavošana: Lai lietotu spermatozoīda atdalīšanas metodi gradientā, nepieciešami divi šķīdumi: augšējais slānis un apakšējais slānis. 1. Augšējā slāņa šķīdums – 50%: a) Ievietojiet CONCENTRATE (kataloga Nr. 99275) un pipeti 5,6 ml sterilā centrifūgas stobriņā. b) Pievienojiet 4,4 ml Modified Human Tubal Fluid (kataloga Nr. 90126) c) Uzlieciet stobriņam aizbāzni un uzmanīgi apvērsiet 3-4 reizes, lai saturam ļautu pilnībā sajaukties. d) Piestipriniet stobriņam uzlīmi „AUGŠĒJAIS SLĀNIS” 2. Apakšējā slāņa šķīdums – 90%: a) Iedaliet 10 ml STOCK SOLUTION sterilā centrifūgas stobriņā un uzlieciet aizbāzni (Turpmāka atšķaidīšana nav nepieciešama – STOCK SOLUTION ir 90%). b) Piestipriniet stobriņam uzlīmi „APAKŠĒJAIS SLĀNIS” 3. Pārejiet pie produkta ieliktnī aprakstītās VISPĀRĒJĀS PROCEDŪRAS. (PIEZĪME: ar 10 ml augšējā slāņa un 10 ml apakšējā slāņa šķīdumu iespējams apstrādāt apmēram 5 spermas paraugus.) Kataloga Nr. 99306 - CONCENTRATE Koloidāls silīcija dioksīda koncentrāts turpmākai atšķaidīšanai blīvuma gradientos, tā sastāvā ir izotonisks buferis un tam piemīt aptuvenais neatšķaidīta Percoll® blīvums. Saskaņā ar šo iepakojuma ieliktni ISolate® CONCENTRATE ir ticis novērtēts 50% un 90% gradientā. Katra laboratorija var izvēlēties veidot atšķirīgu koncentrāciju gradientus, kuri jāizvērtē attiecībā uz efektivitāti. A. Ieteicamie materiāli: ISolate® koncentrāts •Irvine Scientific kataloga Nr. 99306 Modified Human Tubal Fluid •Irvine Scientific kataloga Nr. 90126 Sperm Washing Medium •Irvine Scientific kataloga Nr. 9983 Sterili, koniski vienreizējās lietošanas centrifūgas stobriņi •Irvine Scientific kataloga Nr. IS-325 Pastēra pipetes, sterilas Centrifūga Inkubators, 37°C B. Gradienta sagatavošana: Lai lietotu spermatozoīda atdalīšanas metodi gradientā, nepieciešami divi šķīdumi: augšējais slānis un apakšējais slānis. 1. Augšējā slāņa šķīdums – 50%: a) Ievietojiet CONCENTRATE (kataloga Nr. 99306) un pipeti 4.5 ml sterilā centrifūgas stobriņā. b) Pievienojiet 5,5 ml Modified Human Tubal Fluid (kataloga Nr. 90126) c) Uzlieciet stobriņam aizbāzni un uzmanīgi apvērsiet 3-4 reizes, lai saturam ļautu pilnībā sajaukties. d) Piestipriniet stobriņam uzlīmi „AUGŠĒJAIS SLĀNIS” 2. Apakšējā slāņa šķīdums – 90%: a) Ievietojiet CONCENTRATE (kataloga Nr. 99306) un pipeti 8,1 ml sterilā centrifūgas stobriņā. b) Pievienojiet 1,9 ml Modified Human Tubal Fluid (kataloga Nr. 90126) c) Uzlieciet stobriņam aizbāzni un uzmanīgi apvērsiet 3-4 reizes, lai saturam ļautu pilnībā sajaukties. d) Piestipriniet stobriņam uzlīmi „APAKŠĒJAIS SLĀNIS” 3. Pārejiet pie produkta ieliktnī aprakstītās ISPĀRĒJĀS PROCEDŪRAS. (PIEZĪME: ar 10 ml augšējā slāņa un 10 ml apakšējā slāņa šķīdumu iespējams apstrādāt apmēram 5 spermas paraugus.) Piezīme: Apzīmējumi 50% un 90% nenorāda faktisko koncentrāciju. 50% un 90% ir relatīvas koncentrācijas, kas pamatojas uz iepriekšējo nomenklatūru, kas definēja Percoll® atšķaidīšanu1:9 kā līdzvērtīgu 100% iedarbīgam, izotoniskam šķīdumam. VISPĀRĒJĀ PROCEDŪRA Turpmāk minētā ir vispārpieņemta procedūra izolēšanai gradientā divos posmos, atdalot kustīgu spermatozoīdu no spermas. Daudzumu un koncentrāciju iespējams mainīt, lai tos varētu izmantot atbilstoši laboratorijas galvenajiem mērķiem (t. i., kā mini-gradientu, ar kriokonservēto spermu, kā trīsslāņu gradientu). 1. Nodrošiniet, ka visu barotnes sastāvdaļu temperatūra ir sasniegusi istabas temperatūras līmeni vai 37°C. 2. Izmantojot sterilu pipeti, pārnesiet 1,5-2,0 ml “APAKŠĒJĀ SLĀŅA” uz sterilu, vienreizējās lietošanas, konisku centrifūgas stobriņu. 3. Izmantojot jaunu sterilu pipeti, pārnesiet to pašu daudzumu „AUGŠĒJĀ SLĀŅA” uz „APAKŠĒJĀ SLĀŅA” augšdaļu. To veic, ar pipetes galu pieskaroties „APAKŠĒJAM SLĀNIM” no stobriņa puses. Uzmanīgi izpiliniet „AUGŠĒJO SLĀNI”, spirālveidīgi virpinot pipetes galu pa stobriņa perimetru augšupejošas kustības veidā, „AUGŠĒJĀ SLĀŅA” līmenim paaugstinoties. 4. Ar jaunas sterilas pipetes palīdzību uzmanīgi ievietojiet 1,5-2,0 ml sašķidrinātas spermas „AUGŠĒJĀ SLĀNĪ”. 5. Centrifugējiet 10-20 minūtes ar apmēram 200-300 g paātrinājumu.* Uzmanīgi atdaliet lodīti, atvelkot nost „AUGŠĒJO” un ”APAKŠĒJO SLĀNI” vai tieši izņemot lodīti un pārnesot to uz citu sterilu centrifūgas stobriņu. *Piezīme: Spermatozoīda parauga kvalitāte jāizvērtē un jāņem vērā, nosakot atbilstošo centrifugēšanas ātrumu un ilgumu. Lai procedūru optimizētu, šos parametrus vajadzētu pielāgot atbilstoši atsevišķā parauga kvalitātei. 6. Izmantojot jaunu sterilu pipeti, pievienojiet 2,0-3,0 ml piemērota skalošanas materiāla, piemēram, Sperm Washing Medium (IS kataloga Nr. 9983) vai Modified HTF (IS kataloga Nr. 90126) ar proteīna papildinājumu. Suspendējiet atkārtoti izolēto lodīti. Centrifugējiet (ar ~200 g paātrinājumu) 8-10 minūtes un atdaliet supernatantu. Atkārtojiet šo soli, lai veiktu otru skalošanu. Novāciet supernatantu un no jauna suspendējiet lodīti, izmantojot atbilstošu piemērotas barotnes daudzumu. Tagad paraugs ir sagatavots analīzes veikšanai. Lai uzzinātu papildu informāciju par šo produktu lietošanu, katrai laboratorijai jāiepazīstas ar tajā noteiktajām procedūrām un protokoliem, kas īpaši izstrādāti un optimizēti individuālas medicīniskas programmas veikšanai. UZGLABĀŠANAS NORĀDĪJUMI UN STABILITĀTE Neatvērtus konteinerus uzglabāt atdzesētus no 2º līdz 8º C temperatūrā. Pirms lietošanas sasildiet līdz apkārtējās vides vai inkubatora (37°C) temperatūrai. Nesaldēt un nepakļaut augstu temperatūru iedarbībai. Uzglabājot, kā norādīts, ISolate saglabā stabilitāti līdz derīguma termiņam, kas norādīts uz kastes un uz pudeļu marķējuma. PIESARDZĪBAS PASĀKUMI UN BRĪDINĀJUMI Šo ierīci ir paredzēts izmantot personālam, kas ir apmācīts tādu procedūru veikšanai, kuras ietver norādīto izmantošanu, kurai šī ierīce ir paredzēta. ISolate izskatīsies necaurspīdīgs. Šim produktam tas ir normāli. Nelietot nevienu flakonu ar barotni, kurā saskatāmas vielas daļiņas vai piesārņojums (neviendabīgs duļķainums). ISolate cieši jānoslēdz ar aizbāzni, lietojot CO2 inkubatorā, lai nepieļautu pH līmeņa izmaiņas. Šis produkts nesatur konservantus, antibiotikas vai proteīna piedevas. Lai izvairītos no kontaminācijas problēmām, rīkojoties izmantojiet aseptiskas tehnikas. Ja bojāts, nelietot. Lūdzu, likvidējiet vai nosūtiet atpakaļ ražotājam atvietošanai. BRĪDINĀJUMS: Federālie (ASV) likumi pieļauj šīs ierīces tirdzniecību vienīgi ārstiem vai ar viņu norīkojumu. O ISolate é uma suspensão coloidal de partículas de sílica estabilizada com silano hidrofílico unido covalentemente em HTF tamponado com HEPES, que foi filtrado através de membrana e processado em condições estéreis. O nivel de garantia de esterilidade (SAL) é de 10-3. O ISolate foi testado para pirogénios com resultados negativos pelo teste de pirogénios no coelho. INSTRUÇÕES DE UTILIZAÇÃO Nº de Catálogo 99264 – SÍLICA COLOIDAL P R O N TA PA R A U T I L I Z A R A D U A S CONCENTRAÇÕES (50% E 90%) A. Material sugerido: ISolate • Irvine Scientific, Nº catálogo 99264 (kit de recipientes de6mL, 50mL ou kit de recipientes de 100mL) Meio de lavagem dos espermatozóides • Irvine Scientific, Nº catálogo 9983 Tubos de centrífuga cónicos estéreis e descartáveis • Irvine Scientific, Nº catálogo IS-325 Pipetas Pasteur, estéreis Centrífuga Incubadora a 37ºC B. Preparação do gradiente: Não são necessárias diluições preliminares. Cada recipiente de camada de gradiente superior e inferior está pronta para utilizar. Continue com a secção “PROCEDIMENTOS GERAIS” Nº de Catálogo 99275 – SOLUÇÃO STOCK Meio de gradiente de densidade a 90% para ser utilizado em protocolos de uma só etapa ou para posteriores diluições. A. Material sugerido: ISolate - Solução Stock • Irvine Scientific, Nº Cat. 99275 Meio HTF modificado • Irvine Scientific, Nº Cat. 90126 Meio de lavagem dos espermatozóides • Irvine Scientific, Nº Cat. 9983 Tubos de centrífuga cónicos estéreis e descartáveis • Irvine Scientific, Nº Cat. IS-325 Pipetas Pasteur, estéreis Centrífuga Incubadora a 37ºC B. Preparação do gradiente: Para levar a cabo uma separação de espermatozóides por gradiente necessitam-se de duas soluções: a camada superior e a camada inferior. 1. Solução da camada superior: 50% a. Pipetar da SOLUÇÃO STOCK (Nº Cat. 99275) 5,6mL para um tubo de centrífuga estéril. b. Adicionar 4,4 mL de HTF modificado (Nº Cat. 90126) c. Tapar o tubo e inverter suavemente 3 ou 4 vezes para permitir uma mistura completa. d. Etiquetar o tubo como “CAMADA SUPERIOR”. 2. Solução da camada inferior: 90% a. Inserir uma alíquota de 10mL da SOLUÇÃO STOCK num tubo estéril de centrífuga e tapá-lo. (Não são necessárias mais diluições. A solução stock está a 90%). b. Etiquetar o tubo como “CAMADA INFERIOR”. 3. Continuar na secção de “PROCEDIMENTOS GERAIS”. (Nota: 10 ml da “CAMADA SUPERIOR” e 10 ml da “CAMADA INFERIOR” processam aproximadamente 5 amostras de sémen) Nº de Catálogo 99306 – CONCENTRADO Concentrado de sílica coloidal para posteriores diluições em gradientes de densidade; formulado num tampão isotónico, aproxima-se da densidade do Percoll não diluído. O ISolate Concentrado foi avaliado em gradientes de 50% e 90% de acordo com este folheto informativo de produto. Cada laboratório pode escolher preparar os gradientes a concentrações diferentes, os quais devem ser previamente avaliados para a sua eficácia. A. Material sugerido: ISolate - Concentrado • Irvine Scientific, Nº Cat. 99306 Meio HTF modificado • Irvine Scientific, Nº Cat. 90126 Meio de lavagem dos espermatozóides • Irvine Scientific, Nº Cat. 9983 Tubos de centrífuga cónicos estéreis e descartáveis • Irvine Scientific, Nº Cat. IS-325 Pipetas Pasteur, estéreis Centrífuga Incubadora a 37ºC B. Preparação do gradiente: Para levar a cabo uma separação de espermatozóides por gradiente necessitam-se de duas soluções: a camada superior e a camada inferior. 1. Solução da camada superior: 50% a. Pipetar 4,5 mL do CONCENTRADO (Nº Cat. 99306) para um tubo de centrífuga estéril. b. Adicionar 5,5 mL de HTF modificado (Nº Cat. 90126) c. Tapar o tubo e inverter suavemente 3 ou 4 vezes para permitir uma mistura completa. d. Etiquetar o tubo como “CAMADA SUPERIOR”. 2. Solução da camada inferior: 90% a. Pipetar 8,1 mL do CONCENTRADO (Nº Cat. 99306) para um tubo de centrífuga estéril. b. Adicionar 1,9 mL de HTF modificado (Nº Cat. 90126) c. Tapar o tubo e inverter suavemente 3 ou 4 vezes para permitir uma mistura completa. d. Etiquetar o tubo como “CAMADA INFERIOR”. 3. Continue na secção de “PROCEDIMENTOS GERAIS”. Nota: Os valores 50% e 90% não representam uma conc tração real. Os valores 50% e 90% são concentrações relativas baseadas numa nomenclatura anterior que definia uma solução 1:9 de Percoll® como uma solução de trabalho isotónica a 100%. PROCEDIMENTOS GERAIS O protocolo que aqui se descreve é um procedimento geral para separar do sémen a fracção móvel dos espermatozoides através de um gradiente. O volume e a concentração podem-se modificar para ajustar-se às preferências de cada laboratório (p.ex. mini-gradiente, sémen crioconservado, gradiente de 3 camadas). 1. Coloque todos os meios à temperatura ambiente ou a 37ºC. 2. Utilizando uma pipeta estéril, transferir 1,5 – 2,0 mL de meio da “CAMADA INFERIOR” para um tubo de centrífuga cónico, estéril e descartável. 3. Utilizando outra pipeta estéril, transferir um volume igual ao do passo 1 de “CAMADA SUPERIOR” para a “CAMADA INFERIOR”. Para isso, colocar a ponta da pipeta na parte superior da “CAMADA INFERIOR” tocando na parede do tubo. Distribuir cuidadosamente a “CAMADA SUPERIOR” movendo a pipeta em círculos em redor da circunferência do tubo subindo à medida que aumenta o nível da “CAMADA SUPERIOR”. 4. Coloque suavemente 1,5 – 2,0 mL de sémen liquefeito sobre a “CAMADA SUPERIOR” com outra pipeta estéril. ČESKY ΕΛΛΗΝΙΚΆ PORTUGUÊS Descrição do Produto O ISolate ® é um meio de gradiente de densidades concebido para separar a fracção móvel do espermatozóide do fluído seminal. Como um sistema de gradiente de duas camadas, reduz eficazmente os contaminantes celulares como espermatozóides mortos, leucócitos e outros restos. 5. Centrifugar durante 10-20 minutos a 200-300 x g*. Cuidadosamente, exponha o sedimento quer através da aspiração das “CAMADAS SUPERIORES E INFERIORES”, ou directamente removendo o sedimento e transferindo-o para um novo tubo de centrífuga estéril. * Nota: a qualidade da amostra de espermatozóides deve ser avaliada e tomada em consideração para determinar o tempo e a velocidade de centrifugação adequadas. Estes parâmetros devem ajustar-se conforme a qualidade individual da amostra para optimizar o processo. 6. Utilizando uma nova pipeta estéril, adicionar 2.0 – 3.0 mL de meio de lavagem adequado como o Meio de Lavagem de Espermatozóides (IS Nº Cat 9983) ou HTF modificado (IS Nº Cat 90126) com suplemento proteico. Ressuspender o sedimento. Centrifugar (aprox. 200xg) 8-10 minutos e descartar o sobrenadante. Repetir este passo para numa segunda lavagem. Descartar o sobrenadante e ressuspender o sedimento utilizando um volume adequado de meio. A amostra está pronta para análise. Para detalhes adicionais sobre a utilização destes produtos, o laboratório deve consultar os seus próprios procedimentos padrão e protocolos que foram especificamente desenvolvidos e optimizados para a sua instituição. I N S T R U Ç Õ E S D E C O N S E R VA Ç Ã O E ESTABILIDADE Conserve os recipientes fechados refrigerados entre 2ºC e 8ºC. Aqueça à temperatura ambiente ou numa incubadora (37ºC) antes de utilizar. Não congele ou exponha a temperaturas altas. O ISolate é estável até à data de expiração indicada no rótulo do recipiente, sempre que seja conservado de acordo com as instruções recomendadas. PRECAUÇÕES E ADVERTÊNCIAS Este dispositivo deve ser utilizado por funcionários treinados em procedimentos aos quais se destina. O ISolate tem um aspecto opaco. Isto é normal para este produto. Não utilize nenhum recipiente de meio com evidências de conter partículas ou contaminação (turvação não homogénea). Os recipientes de ISolate devem estar hermeticamente fechados quando se utilizar uma incubadora de CO2 para evitar alterações de pH. Este meio não contém conservantes, antibióticos nem suplementos proteicos. Para evitar contaminações, manipule o produto em condições de esterilidade. E m caso de alteração do meio, não o utilize. Por favor, descarte-o o devolva-o ao fabricante para que seja substituído. CUIDADO: As leis federais dos EUA, restringem a venda deste dispositivo, apenas a médicos ou por sua prescrição. ΠΕΡΙΓΡΑΦΗ ΠΡΟΪΟΝΤΟΣ Το ISolate® είναι ένα μέσο κλίσης πυκνότητας σχεδιασμένο για διαχωρισμό του κινητικού κλάσματος του σπέρματος από το σπερματικό υγρό. Ως σύστημα κλίσης δύο στρωμάτων, μειώνει δραστικά τις κυτταρικές μολυσματικές ουσίες, όπως το νεκρό σπέρμα, τα λευκά αιμοσφαίρια και διάφορα υπολείμματα.Το δείγμα που προκύπτει περιέχει κυρίως κινητικό σπέρμα. Το ISolate είναι ένα φιλτραρισμένο με μεμβράνη, ασηπτικά επεξεργασμένο κολλοειδές αιώρημα από μόρια πυρίτιας σταθεροποιημένα με υδρόφιλο σιλάνιο με ισοσθενή δεσμό σε HEPES-ρυθμιστικό HTF. Το επίπεδο διασφάλισης αποστείρωσης (SAL) είναι 10-3. Το ISolate έχει ελεγχθεί και αποδειχθεί αρνητικό για πυρετογόνα από την εξέταση πυρετογόνων σε λαγούς. ΟΔΗΓΙΕΣ ΧΡΗΣΗΣ Αρ. Καταλόγου 99264 – ΕΤΟΙΜΗ ΓΙΑ ΧΡΗΣΗ ΚΟΛΛΟΕΙΔΗΣ ΠΥΡΙΤΙΑ ΣΕ ΔΥΟ ΣΥΓΚΕΝΤΡΩΣΕΙΣ (50% και 90%) A. Προτεινόμενα Υλικά: ISolate • Irvine Scientific Κατάλογος #99264 (6ml, 50ml ή 100 ml κιτ φιαλιδίων) Sperm Washing Medium • Irvine Scientific Κατάλογος #9983 Αποστειρωμένοι, κωνικοί σωλήνες φυγόκεντρου μιας χρήσης • Irvine Scientific Κατάλογος #IS-325 Πιπέτες Παστέρ, αποστειρωμένες Φυγόκεντρος Επωαστήρας, 37°C B. Προετοιμασία Κλίσης: Δεν χρειάζονται προκαταρκτικά διαλύματα. Κάθε φιαλίδιο κλίσης άνω και κάτω στρώματος είναι έτοιμο για χρήση. Προχωρήστε στο μέρος της ΓΕΝΙΚΗΣ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑΣ του φυλλαδίου του προϊόντος. Αρ. Καταλόγου 99275 - STOCK SOLUTION 90% πυκνότητας μέσο κλίσης για χρήση σε διαδικασία ενός βήματος ή για περαιτέρω διάλυση. A. Προτεινόμενα Υλικά: ISolate Stock Solution • Irvine Scientific Κατάλογος #99275 Modified Human Tubal Fluid • Irvine Scientific Κατάλογος #90126 Sperm Washing Medium • Irvine Scientific Κατάλογος #9983 Αποστειρωμένοι, κωνικοί σωλήνες φυγόκεντρου μιας χρήσης • Irvine Scientific Κατάλογος #IS-325 Πιπέτες Παστέρ, αποστειρωμένες Φυγόκεντρος Επωαστήρας, 37°C B. Προετοιμασία Κλίσης: Χρειάζονται δύο διαλύματα για την μέθοδο διαχωρισμού σπέρματος κλίσης: Ένα άνω και ένα κάτω στρώμα. Πάνω και κάτω στρώμα. 1.) Διάλυμα Άνω Στρώματος - 50%: α) Πάρτε STOCK SOLUTION (αρ. Καταλόγου 99275) και πιπεταρίστε 5.6 ml σε αποστειρωμένο σωλήνα φυγόκεντρου β) Προσθέστε 4.4 ml από Modified Human Tubal Fluid (αρ. Καταλόγου 90126) γ) Κλείστε τον σωλήνα και αναποδογυρίστε το απαλά 3-4 φορές για να επιτραπεί η πλήρης ανάδευση δ) Αναγράψτε στην ετικέτα του σωλήνα «ΑΝΩ ΣΤΡΩΜΑ» 2. Διάλυμα Κάτω Στρώματος - 90%: α) Υποπολλαπλασιάστε 10 ml του STOCK SOLUTION σε αποστειρωμένο σωλήνα φυγόκεντρου και σφραγίστε το – (Δεν χρειάζονται άλλες διαλύσεις - STOCK SOLUTION είναι 90%) β) Βάλτε ετικέτα στον σωλήνα ως «ΚΑΤΩ ΣΤΡΩΜΑ» 3. Συνεχίστε στο τμήμα ΓΕΝΙΚΗ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑ του φυλλαδίου του προϊόντος. (ΣΗΜΕΙΩΣΗ: 10 ml Άνω Στρώματος και 10 ml Κάτω Στρώματος, επεξεργάζονται κατά προσέγγιση 5 δείγματα σπέρματος.) Αρ. Καταλόγου 99306 - CONCENTRATE Συμπύκνωμα κολλοειδούς πυρίτιας για περαιτέρω διάλυση σε κλίσεις πυκνότητας. Σχηματίζεται σε ισοτονικό ρυθμιστικό διάλυμα και προσεγγίζει την πυκνότητα μη αραιωμένου Percoll®. Το ISolate® CONCENTRATE αξιολογήθηκε σύμφωνα με αυτό το φυλλάδιο συσκευασίας σε κλίσεις 50% και 90% . Κάθε εργαστήριο μπορεί να επιλέξει να δημιουργήσει κλίσεις με διαφορετικές συγκεντρώσεις που θα πρέπει να αξιολογηθούν για αποτελεσματικότητα. A. Προτεινόμενα Υλικά: ISolate® Συμπύκνωμα • Irvine Scientific Κατάλογος #99306 Modified Human Tubal Fluid • Irvine Scientific Κατάλογος #90126 Sperm Washing Medium • Irvine Scientific Κατάλογος #9983 Αποστειρωμένοι, κωνικοί σωλήνες φυγόκεντρου μιας χρήσης • Irvine Scientific Κατάλογος #IS-325 Πιπέτες Παστέρ, αποστειρωμένες Φυγόκεντρος Επωαστήρας, 37°C B. Προετοιμασία Κλίσης: Χρειάζονται δύο διαλύματα για την μέθοδο διαχωρισμού σπέρματος κλίσης: Ένα άνω και ένα κάτω στρώμα. 1. Διάλυμα Άνω Στρώματος - 50%: α) Πάρτε CONCENTRATE (αρ. Καταλόγου 99306) και πιπεταρίστε 4.5 ml σε αποστειρωμένο σωλήνα φυγόκεντρου β) Προσθέστε 5.5 ml από Modified Human Tubal Fluid (αρ. Καταλόγου 90126) γ) Κλείστε τον σωλήνα και αναποδογυρίστε το απαλά 3-4 φορές για να επιτραπεί η πλήρης ανάδευση δ) Αναγράψτε στην ετικέτα του σωλήνα «ΑΝΩ ΣΤΡΩΜΑ» 2. Διάλυμα Κάτω Στρώματος - 90%: α) Πάρτε CONCENTRATE (αρ. Καταλόγου 99306) και πιπεταρίστε 8.1 ml σε αποστειρωμένο σωλήνα φυγόκεντρου β) Προσθέστε 1.9 ml από Modified Human Tubal Fluid (αρ. Καταλόγου 90126) γ) Κλείστε τον σωλήνα και αναποδογυρίστε το απαλά 3-4 φορές για να επιτραπεί η πλήρης ανάδευση δ) Αναγράψτε στην ετικέτα του σωλήνα «ΚΑΤΩ ΣΤΡΩΜΑ» 3. Συνεχίστε στο τμήμα ΓΕΝΙΚΗ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑ του φυλλαδίου του προϊόντος. (ΣΗΜΕΙΩΣΗ: 10 ml Άνω Στρώματος και 10 ml Κάτω Στρώματος, επεξεργάζονται κατά προσέγγιση 5 δείγματα σπέρματος.) Σημείωση: Οι όροι 50% και 90% δεν αναφέρονται σε πραγματική συγκέντρωση. Τα 50% και 90% είναι σχετικές συγκεντρώσεις βασισμένες στην προηγούμενη ονοματολογία που όριζε διάλυμα 1:9 από Percoll® ως ίσο με 100% λειτουργικό, ισοτονικό διάλυμα. ΓΕΝΙΚΗ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑ Παρακάτω ακολουθεί η γενική διαδικασία για διαχωρισμό κλίσης δύο βημάτων του κινητού σπερματοζωαρίου από το σπέρμα. Ο όγκος και η συγκέντρωση μπορούν να τροποποιηθούν για να ανταποκρίνονται στις εργαστηριακές προτιμήσεις (δηλ. μινι-κλίση, κρυοσυντηρημένο σπέρμα, κλίση τριών στρωμάτων). 1. Φέρτε όλα τα εξαρτήματα των μέσων σε θερμοκρασία δωματίου ή στους 37°C. 2. Χρησιμοποιώντας αποστειρωμένη πιπέτα, μεταφέρετε 1.5 - 2.0 ml του «ΚΑΤΩ ΣΤΡΩΜΑΤΟΣ» σε αποστειρωμένο, μίας χρήσης, κωνικό φυγόκεντρο σωλήνα. 3. Χρησιμοποιώντας μια νέα αποστειρωμένη πιπέτα, μεταφέρετε ίσο όγκο «ΠΑΝΩ ΣΤΡΩΜΑΤΟΣ» πάνω από το «ΚΑΤΩ ΣΤΡΩΜΑ». Αυτό γίνεται με επαφή της επιφάνειας του «ΚΑΤΩ ΣΤΡΩΜΑΤΟΣ» στο πλάι του σωλήνα με την άκρη της πιπέτας. Διαχύστε προσεκτικά το «ΑΝΩ ΣΤΡΩΜΑ» στροβιλίζοντας την άκρη της πιπέτας γύρω από την περιφέρεια του σωλήνα με κινήσεις προς τα πάνω, καθώς το επίπεδο του «ΑΝΩ ΣΤΡΩΜΑΤΟΣ» ανυψώνεται. 4. Τοποθετήστε απαλά 1.5 - 2.0 ml ρευστοποιημένου σπέρματος στο «ΠΑΝΩ ΣΤΡΩΜΑ» χρησιμοποιώντας νέα αποστειρωμένη πιπέτα. 5. Τοποθετήστε για φυγοκέντρηση για 10-20 λεπτά σε περίπου 200 - 300xg.* Εκθέστε προσεκτικά το συσσωμάτωμα είτε με αναρρόφηση του «ΑΝΩ» και «ΚΑΤΩ ΣΤΡΩΜΑΤΟΣ» ή με άμεση αφαίρεση του και μεταφορά σε νέο αποστειρωμένο σωλήνα φυγόκεντρου. *Σημείωση: Η ποιότητα του δείγματος σπέρματος θα πρέπει να αξιολογείται και να λαμβάνεται υπόψη στον καθορισμό της σωστής ταχύτητας και του χρόνου φυγοκέντρησης. Θα πρέπει να προσαρμοστούν σύμφωνα με την ξεχωριστή ποιότητα δείγματος για βελτιστοποίηση της διαδικασίας. 6. Χρησιμοποιώντας νέα αποστειρωμένη πιπέτα, προσθέστε 2.0 - 3.0 ml κατάλληλου μέσου έκπλυσης όπως το Sperm Washing Medium (IS αρ. Καταλόγου 9983) ή Modified HTF (IS αρ. Καταλόγου 90126) με συμπλήρωμα πρωτεϊνών. Αιωρείστε ξανά το απομονωμένο συσσωμάτωμα. Υποβάλλετε σε φυγοκέντρηση (~200xg) για 8 -10 λεπτά και αφαιρέστε το υπερκείμενο υγρό. Επαναλάβετε αυτό το βήμα για δεύτερη έκπλυση. Απορρίψτε το υπερκείμενο υγρό και αιωρείστε ξανά το συσσωμάτωμα χρησιμοποιώντας κατάλληλο όγκο του κατάλληλου μέσου. Το δείγμα είναι πλέον έτοιμο για ανάλυση. Pro dodatečné podrobnosti o použití těchto výrobků by každá laboratoř měla konzultovat vlastní laboratorní metody a protokoly, které byly vytvořeny a optimalizovány zvlášť pro váš konkrétní zdravotnický program. ΟΔΗΓΙΕΣ ΦΥΛΑΞΗΣ ΚΑΙ ΣΤΑΘΕΡΟΤΗΤΑ Φυλάσσετε τα κλειστά δοχεία σε ψύξη στους 2º έως 8ºC. Θερμάνετε σε θερμοκρασία περιβάλλοντος ή επωαστήρα (37°C) πριν τη χρήση. Μην ψύχετε ή εκθέτετε σε υψηλές θερμοκρασίες. Το ISolate παραμένει σταθερό μέχρι την ημερομηνία λήξης που αναγράφεται στις ετικέτες του κουτιού και των φιαλών, όταν φυλάσσεται σύμφωνα με τις οδηγίες. ΠΡΟΦΥΛΑΞΕΙΣ ΚΑΙ ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΕΙΣ Η συσκευή αυτή προορίζεται για χρήση από προσωπικό που έχει εκπαιδευτεί σε διαδικασίες που περιλαμβάνουν τη συγκεκριμένη εφαρμογή για την οποία προορίζεται η συσκευή. Το ISolate έχει αδιαφανή εμφάνιση. Αυτό είναι φυσιολογικό για το συγκεκριμένο προϊόν. Μην κάνετε χρήση φιαλιδίου μέσου που παρουσιάζει ύπαρξη σωματιδίων ή μολυσματικών ουσιών (μη ενιαία θολότητας). Το ISolate πρέπει να είναι καλά κλειστό όταν χρησιμοποιείται σε επωαστήρα CO2, για να αποφεύγονται οι αλλαγές pH. Το προϊόν δεν περιέχει συντηρητικά, αντιβιοτικά ή συμπληρώματα πρωτεϊνών. Για να αποφύγετε προβλήματα μόλυνσης, χρησιμοποιήστε ασηπτικές τεχνικές. Σε περίπτωση ζημιάς, μην χρησιμοποιείτε. Παρακαλούμε απορρίψτε ή επιστρέψτε στον Παρασκευαστή για αντικατάσταση. ΠΡΟΣΟΧΗ: Η ομοσπονδιακή (Η.Π.Α.) νομοθεσία περιορίζει αυτή τη συσκευή σε πώληση από ή κατά εντολή γιατρού. POPIS VÝROBKU ISolate® je médium gradientu hustoty zhotovené na oddělení motilní frakce spermií ze semenné kapaliny. Protože je to dvouvrstevný gradientní systém, efektivně snižuje buňkovou kontaminaci jako např. odumřelé spermie, bílé krevní buňky a jiné nečistoty. Výsledný vzorek obsahuje většinou motilní spermie. ISolate asepticky zpracovaná koloidní suspenze křemíkových částic, filtrovaná přes membránu a stabilizovaná kovalentně vázaným hydrofilním silanem v pufrovaném HEPES HTF. Hladina zaručené sterilizace (SAL) je 10-3. ISolate bylo testováno a shledáno negativním na pyrogeny při pyrogenním testu provedeném na laboratorním králíkovi. NÁVOD K POUŽITÍ Kat. č. 99264 – KOLOIDNÍ KŘEMÍK VE DVOU KONCENTRACÍCH (50 % a 90 %) K OKAMŽITÉMU POUŽITÍ A. Doporučený materiál: ISolate • Irvine Scientific Katalog #99264 (sada 6ml, 50ml nebo 100 ml ampulek ) Sperm Washing Medium • Irvine Scientific Katalog #9983 Sterilní kónické odstředivkové trubičky • Irvine Scientific Katalog #IS-325 Sterilní pipety Pasteur Odstředivka Inkubátor, 37 °C B. Příprava gradientu: Žádné předběžné ředění není nutné. Každá ampulka gradientu horní a spodní vrstvy je připravena na použití. Pokračujte až po část příbalového letáku nazvanou OBECNÁ METODA. Kat. č. #99275 - ZÁSOBNÍ ROZTOK Médium s 90% gradientem hustoty na použití v jednokrokové proceduře nebo na další ředění. A. Doporučený materiál: ISolate STOCK SOLUTION • Irvine Scientific Katalog #99275 Modified Human Tubal Fluid • Irvine Scientific Katalog #90126 Sperm Washing Medium • Irvine Scientific Katalog #9983 Sterilní kónické odstředivkové trubičky • Irvine Scientific Katalog #IS-325 Sterilní pipety Pasteur Odstředivka Inkubátor, 37 °C B. Příprava gradientu: Jsou potřeba dva roztoky na provedení metody gradientní separace spermií: horní vrstvy a spodní vrstvy. Horní vrstva a spodní vrstva. 1. Roztok horní vrstvy – 50 %: a.) Napipetujte 5,6 ml koncentrátu CONCENTRATE (kat. č. 99275) do sterilní odstředivkové trubičky. b) Přidejte 4,4 ml Modified Human Tubal Fluid (kat. č. 90126) c) Zazátkujte zkumavku a opatrně ji převraťte 3-4krát, aby došlo k celkovému promíchání. d) Označte trubičku „HORNÍ VRSTVA“ 2. Roztok spodní vrstvy – 90 %: a) Nadávkujte alikvotní podíl 10 ml roztoku STOCK SOLUTION do sterilní odstředivkové trubičky se zátkou – (Dalšího ředění není třeba - STOCK SOLUTION je 90%) b) Označte trubičku “SPODNÍ VRSTVA“ 3. Pokračujte až po část příbalového letáku výrobku nazvanou ZÁKLADNÍ POSTUP. (POZNÁMKA: 10 ml Horní vrstvy a 10 ml Spodní vrstvy zpracuje přibližně 5 vzorků sperma.) Kat. č. #99306 - KONCENTRÁT Koncentrát koloidního křemíku pro další ředění na gradienty hustoty; je formulován v izotonickém pufru a má přibližnou hustotu neředěného přípravku Percoll®. ISolate® CONCENTRATE byl hodnocen podle tohoto příbalového letáku při 50% a 90% gradientech. Každá laboratoř si může zvolit vytvoření gradientů různých koncentrací, jejichž efektivnost by měla být ohodnocena. A. Doporučený materiál: Koncentrát ISolate® • Irvine Scientific Katalog #99306 Modified Human Tubal Fluid • Irvine Scientific Katalog #90126 Sperm Washing Medium • Irvine Scientific Katalog #9983 Sterilní kónické odstředivkové trubičky • Irvine Scientific Katalog #IS-325 Sterilní pipety Pasteur Odstředivka Inkubátor, 37 °C B. Příprava gradientu: Jsou potřeba dva roztoky na provedení metody gradientní separace spermií: horní vrstvy a spodní vrstvy. 1. Roztok horní vrstvy – 50 %: a) Napipetujte 4,5 ml CONCENTRATE (kat. č. 99306) do sterilní odstředivkové trubičky. b) Přidejte 5,5 ml Modified Human Tubal Fluid (kat. č. 90126) c) Zazátkujte zkumavku a opatrně ji převraťte 3-4krát, aby došlo k celkovému promíchání. d) Označte trubičku „HORNÍ VRSTVA“ 2. Roztok spodní vrstvy – 90 %: a) Napipetujte 8,1 ml CONCENTRATE (kat. č. 99306) do sterilní odstředivkové trubičky. b) Přidejte 1,9 ml Modified Human Tubal Fluid (kat. č. 90126) c) Zazátkujte zkumavku a opatrně ji převraťte 3-4krát, aby došlo k celkovému promíchání. d) Označte trubičku „SPODNÍ VRSTVA“ 3. Pokračujte až po část příbalového letáku výrobku nazvanou ZÁKLADNÍ POSTUP. (POZNÁMKA: 10 ml Horní vrstvy a 10 ml Spodní vrstvy zpracuje přibližně 5 vzorků sperma.) Poznámka: Hodnoty 50 % a 90 % nepředstavují skutečné koncentrace. 5 0% a 90 % jsou relativní koncentrace založené na dřívější terminologii, která definovala poměr 1:9 ředění přípravku Percoll ® jako rovnající se 100% účinnému isotonickému roztoku. OBECNÁ METODA Následující je obecný postup na dvoukrokovou gradientní separaci motilní spermie od spermatu. Objem a koncentrace mohou být upraveny, aby splňovaly preference každé laboratoře (např. mini-gradient, kryoprezervované semeno, trojvrstevní gradient). 1. Vytemperujte všechny složky média na pokojovou teplotu nebo na 37 °C. 2. Pomocí sterilní pipety převeďte 1,5 – 2,0 ml „SPODNÍ VRSTVY“ do sterilní, kónické odstředivkové trubičky na jedno použití. 3. Pomocí nové sterilní pipety převeďte stejný objem „HORNÍ VRSTVY“ na horní část „SPODNÍ VRSTVY“. Provádí se to dotykem povrchu „SPODNÍ VRSTVY” na straně zkumavky hrotem pipety. Opatrně dávkujte „HORNÍ VRSTVU“ kroužením hrotu pipety kolem obvodu trubičky pohybem směrem nahoru zatímco se hladina „HORNÍ VRSTVY“ bude zvedat. 4. Opatrně umístěte 1,5 – 2,0 ml zkapalněného spermatu do „HORNÍ VRSTVY“ pomocí nové sterilní pipety. 5. Odstřeďte 10-20 minut při odstředivé síle kolem 200 300xg.* Opatrně odhalte granuli buď aspirací „HORNÍ“ a „SPODNÍ VRSTVY“ nebo vyjměte granuli přímo a přeneste ji do nové sterilní odstředivkové trubičky. *Poznámka: Kvalita vzorku spermií by měla být zhodnocena a brána v úvahu při určování správné rychlosti odstředivky a doby odstředění. Měly by být upraveny podle kvality individuálních vzorků pro optimalizaci procedury. 6. Pomocí nové sterilní pipety přidejte 2,0 – 3,0 ml mycího média jako např. Sperm Washing Medium (IS kat. č. 9983) nebo Modified HTF (IS kat. č. 90126) s proteinovým suplementem. Resuspendujte separovanou granuli. Odstřeďte (~200xg) po dobu 8 -10 minut a odeberte supernatant. Zopakujte tento krok pro druhé promytí. Odstraňte supernatant a resuspendujte granuli pomocí vhodného objemového množství náležitého média. Vzorek je nyní připraven pro analýzu. Pro dodatečné podrobnosti o použití těchto výrobků by každá laboratoř měla konzultovat vlastní laboratorní metody a protokoly, které byly vytvořeny a optimalizovány zvlášť pro váš konkrétní zdravotnický program. POKYNY PRO SKLADOVÁNÍ A STÁLOST Skladujte neotevřené nádoby v lednici při 2 º až 8 ºC. Ohřejte na okolní teplotu nebo na teplotu inkubátoru (37 °C) před použitím. Nezmrazujte a nevystavujte vysokým teplotám. Při doporučeném skladování je ISolate stabilní do expirační doby, která je vyznačena na štítcích kartónu a láhve. VAROVÁNÍ A BEZPEČNOSTNÍ OPATŘENÍ Zařízení bylo určeno pro použití školeným personálem při zákrocích, které zahrnují indikovanou aplikaci, pro kterou je zařízení určeno. ISolate se bude jevit neprůhledné. Je to pro tento výrobek normální. Nepoužívejte žádné ampulky média, které jeví známky přítomnosti částic hmoty nebo nečistot (nerovnoměrně zakalené). ISolate by mělo být těsně uzavřeno, pokud bude používáno v CO2 inkubátoru, aby se předešlo změnám pH . Tento výrobek neobsahuje žádné konzervační látky, antibiotika, ani protein nebo jiné suplementy. Vyhněte se problémům kontaminace, při práci dodržujte aseptické metody. V případě poškození nepoužívejte. Likvidujte nebo zašlete výrobci na výměnu. POZOR: Federální zákony USA omezují prodej tohoto zařízení pouze na lékaře nebo na jeho předpis. ISolate er en membranfiltreret, aseptisk behandlet kolloid suspension af silicapartikler stabiliseret med kovalent bundet hydrofilt silan i HEPES-bufret HTF. Sterilitetssikringsniveauet (SAL) er 10-3. ISolate er blevet testet med en kaninpyrogentest og fundet pyrogentfrit. BRUGSANVISNING Katalognr. 99264 – BRUGSKLART KOLLOID SILIKA I TO KONCENTRATIONER (50 % og 90 %) A. Anbefalede materialer: ISolate • Irvine Scientific katalognr. 99264 (sæt med 6 ml, 50ml- eller 100 ml-hætteglas) Sperm Washing Medium • Irvine Scientific katalognr. 9983 Sterile, koniske centrifugerør til engangsbrug • Irvine Scientific katalognr. IS-325 Pasteurpipetter, sterile Centrifuge Inkubator, 37 ºC B. Forberedelse af gradientopløsning: Forudgående fortynding er ikke nødvendig. Hvert hætteglas med øverste eller underste lag gradient er klar til brug. Forsæt med afsnittet GENEREL PROCEDURE på indlægssedlen. Katalognr. 99275 – STOCK SOLUTION Medium med 90 % densitetsgradient til brug i en ét-trinsprocedure eller til yderligere fortynding. A. Anbefalede materialer: ISolate Stock Solution • Irvine Scientific katalognr. 99275 Modified Human Tubal Fluid • Irvine Scientific katalognr. 90126 Sperm Washing Medium • Irvine Scientific katalognr. 9983 Sterile, koniske centrifugerør til engangsbrug • Irvine Scientific katalognr. IS-325 Pasteurpipetter, sterile Centrifuge Inkubator, 37 ºC B. Forberedelse af gradientopløsning: Der kræves to opløsninger til at udføre gradientseparation af sæd: Et øverste lag og et nederste lag. 1. Opløsning i øverste lag - 50 %. a) Tag STOCK SOLUTION (katalognr. 99275) og pipetter 5,6 ml ned i et sterilt centrifugerør b) Tilsæt 4,4 ml Modified Human Tubal Fluid (katalognr. 90126) c) Sæt låg på røret og vend det forsigtigt 3-4 gange for at blande helt d) Skriv “ØVERSTE LAG” på rørets etiket 2. Opløsning i nederste lag - 90 %. a) Tag 10 ml STOCK SOLUTION op i et sterilt centrifugerør og sæt låg på - (det er ikke nødvendigt at fortynde yderligere - STOCK SOLUTION er 90 %) b) Skriv “NEDERSTE LAG” på rørets etiket 3. Forsæt med afsnittet GENEREL PROCEDURE på indlægssedlen. (BEMÆRK: 10 ml af det øverste lag og 10 ml af det nederste lag kan behandle ca. 5 sædprøver). 6. Brug en ny, steril pipette og tilsæt 2,0-3,0 ml af et passende vaskemedium såsom Sperm Washing Medium (IS katalognr. 9983) eller Modified HTF (IS katalognr. 90126) med tilsat protein. Resuspender de isolerede sædceller (pellet). Centrifuger (~ 200 xg) i 8-10 minutter og fjern supernatanten. Gentag dette trin og vask en gang til. Bortskaf supernatanten og resuspender sædcellerne (pellet) vha. en egnet volumen af passende medium. Prøven er nu klar til analysering. For yderligere oplysninger om brug af disse produkter skal hvert laboratorium henvise til egne procedurer og protokoller, som er blevet specifikt udviklet og optimeret til laboratoriets eget, medicinske program. ANVISNINGER ANG OPBEVARING OG STABILITET Uåbnede beholdere opbevares nedkølet ved 2-8 ºC. Opvarm til stuetemeperatur eller inkubatortemperatur (37 °C) inden brug. Må ikke nedfryses eller udsættes for høje temperaturer. ISolate er stabilt indtil udløbsdatoen på æskens og flaskens etiket, når det opbevares som anvist. FORHOLDSREGLER OG ADVARSLER Dette udstyr er beregnet til brug af personale, der er uddannet i procedurer, der inkluderer den indicerede anvendelse, som dette udstyr er beregnet til. ISolate er uigennemsigtigt. Det er normalt for dette produkt. Anvend ikke hætteglas med medium, der indeholder partikler eller viser tegn på at være kontamineret (uensartede uklarheder). Låget på ISolate skal sidde tæt til, hvis det skal bruges i en CO2-inkubator, for at undgå ændringer i pH-værdien. Dette produkt indeholder ingen konserveringsmidler, antibiotika eller proteinsupplementer. Undgå problemer med kontamination ved at bruge aseptiske teknikker. Må ikke anvendes i tilfælde af beskadigelse. Bortskaf eller returner til producenten med henblik på udskiftning. FORSIGTIG: Ifølge amerikansk lov (USA) må dette produkt kun sælges af eller efter ordination af en læge. TUOTTEEN KUVAUS ISolate ® on tiheysgradienttiliuos, jota käytetään erottamaan motiilien siittiöiden osa siemennesteestä. Kaksikerroksisena gradienttijärjestelmänä se tehokkaasti vähentää solukontaminantteja, kuten kuolleita siittiöitä, valkoisia verisoluja ja vastaavia jätteitä. Tuloksena saatu näyte sisältää pääasiassa motiileja siittiöitä. ISolate – HEPES on kalvosuodatettu ja aseptisesti käsitelty kolloidisuspensio, jossa silikahiukkaset on stabiloitu kovalenttisidoksessa hydrofiilisen silaanin kanssa HEPESpuskuroidussa HTF:ssä. Steriilisyystaso (SAL) on 10-3. ISolate on testattu ja todettu pyrogeeneille negatiiviseksi kanin pyrogeenitestissä. KÄYTTÖOHJEET L u e t t e l o n r o 9 9 2 6 4 - K Ä Y T T ÖVA L M I S KOLLOIDINEN SILIKA KAHDESSA PITOISUUDESSA (50 % ja 90 %) A. Suositellut materiaalit: ISolates • Irvine Scientific luettelonro 99264 (6ml:n, 50ml tai 100 ml:n pullopakkaus) Sperm Washing Medium • Irvine Scientific luettelonro 9983 Steriilit kertakäyttöiset kartiomaiset sentrifugiputket • Irvine Scientific luettelonro IS-325 Pasteur -pipetit, steriilit Sentrifugi Inkubaattori, 37 °C B. Gradientin valmistus: Alustavia laimennuksia ei tarvita. Kukin ylemmän tai alemman kerroksen gradienttipullo on käyttövalmis. Siirry tuote-esitteen osaan YLEISET TOIMENPITEET. Luettelonro 99275 - STOCK SOLUTION 90 %:n tiheysgradienttinen ravintoliuos, jota käytetään yksivaiheisessa toimenpiteessä tai lisälaimennuksessa. A. Suositellut materiaalit: ISolate STOCK SOLUTION • Irvine Scientific luettelonro 99275 Modified Human Tubal Fluid • Irvine Scientific luettelonro 90126 Sperm Washing Medium • Irvine Scientific luettelonro 9983 Steriilit kertakäyttöiset kartiomaiset sentrifugiputket • Irvine Scientific luettelonro IS-325 Pasteur -pipetit, steriilit Sentrifugi Inkubaattori, 37 °C B. Gradientin valmistus: Siittiöiden gradienttierotteluun tarvitaan kaksi liuosta: ylempi kerros ja alempi kerros. 1. Ylemmän kerroksen liuos 50 %. a) Ota STOCK SOLUTIONia (luettelonro 99275) ja pipetoi 5,6 ml steriiliin sentrifugiputkeen. b) Lisää 4,4 ml Modified Human Tubal Fluidia (luettelonro 90126). c) Sulje putki ja käännä se varovasti ylösalaisin 3 - 4 kertaa, jotta se saa täysin sekoittua. d) Merkitse putkeen “YLEMPI KERROS” 2. Alemman kerroksen liuos – 90 %. a) Jaa tasan 10 ml STOCK SOLUTIONia steriiliin sentrifugiputkeen ja sulje se – (Lisälaimennuksia ei tarvita -STOCK SOLUTION on 90-prosenttista). b) Merkitse putkeen “ALEMPI KERROS” 3. Jatka tuote-esitteen osaan YLEISET TOIMEN PITEET. (HUOM: 10 ml ylempää ja 10 ml alempaa kerrosta riittää noin 5:n siemennestenäytteen käsittelyyn.) Katalognr. 99306 – CONCENTRATE Koncentrat af kolloid silika til yderligere fortynding i densitetsgradienter; formuleret i en isotonisk buffer og svarende til densiteten af ufortyndet Percoll®. ISolate® CONCENTRATE er blevet evalueret ifølge denne indlægsseddel ved 50 % og 90 % gradienter. Hvert laboratorium kan vælge at lave gradienter i forskellige koncentrationer, som bør evalueres med henblik på effektivitet. Luettelonro 99306 - CONCENTRATE Kolloidisilikatiiviste, jolla saadaan aikaan laimennus tiheysgradientteihin; formuloitu isotonisessa puskurissa ja vastaa suunnilleen laimentamattoman Percoll®in tiheyttä. ISolate® CONCENTRATE on arvioitu pakkauksen esitteen mukaisesti 50 %- ja 90 %-gradienttia vastaaviksi. Kukin laboratorio voi valmistaa gradientteja eri pitoisuuksilla, joiden tehokkuus tulee arvioida. A. Anbefalede materialer: ISolate® koncentrat • Irvine Scientific katalognr. 99306 Modified Human Tubal Fluid • Irvine Scientific katalognr. 90126 Sperm Washing Medium • Irvine Scientific katalognr. 9983 Sterile, koniske centrifugerør til engangsbrug • Irvine Scientific katalognr. IS-325 Pasteurpipetter, sterile Centrifuge Inkubator, 37 ºC A. Suositellut materiaalit: ISolate® -tiiviste • Irvine Scientific luettelonro 99306 Modified Human Tubal Fluid • Irvine Scientific luettelonro 90126 Sperm Washing Medium • Irvine Scientific luettelonro 9983 Steriilit kertakäyttöiset kartiomaiset sentrifugiputket • Irvine Scientific luettelonro IS-325 Pasteur -pipetit, steriilit Sentrifugi Inkubaattori, 37 °C B. Forberedelse af gradientopløsning: Der kræves to opløsninger til at udføre gradientseparation af sæd: Et øverste lag og et nederste lag. 1. Opløsning i øverste lag - 50 %. a) Tag CONCENTRATE (katalognr. 99306) og pipetter 4,5 ml ned i et sterilt centrifugerør b) Tilsæt 5,5 ml Modified Human Tubal Fluid (katalognr. 90126) c) Sæt låg på røret og vend det forsigtigt 3-4 gange for at blande helt d) Skriv “ØVERSTE LAG” på rørets etiket 2. Opløsning i nederste lag - 90 %. a) Tag CONCENTRATE (katalognr. 99306) og pipetter 8,1 ml ned i et sterilt centrifugerør b) Tilsæt 1,9 ml Modified Human Tubal Fluid (katalognr. 90126) c) Sæt låg på røret og vend det forsigtigt 3-4 gange for at blande helt d) Skriv “NEDERSTE LAG” på rørets etiket 3. Forsæt med afsnittet GENEREL PROCEDURE på indlægssedlen. (BEMÆRK: 10 ml af det øverste lag og 10 ml af det nederste lag kan behandle ca. 5 sædprøver). B. Gradientin valmistus: Siittiöiden gradienttierotteluun tarvitaan kaksi liuosta: ylempi kerros ja alempi kerros. 1. Ylemmän kerroksen liuos - 50 %. a) Ota CONCENTRATE:a (luettelonro 99306) ja pipetoi 4,5 ml steriiliin sentrifugiputkeen. b) Lisää 5,5 ml Modified Human Tubal Fluidia (luettelonro 90126). c) Sulje putki ja käännä se varovasti ylösalaisin 3 - 4 kertaa, jotta se saa täysin sekoittua. d) Merkitse putkeen “YLEMPI KERROS” 2. Alemman kerroksen liuos – 90 %. a) Ota CONCENTRATE:a (luettelonro 99306) ja pipetoi 8,1 ml steriiliin sentrifugiputkeen b) Lisää 1,9 ml Modified Human Tubal Fluidia (luettelonro 90126). c) Sulje putki ja käännä se varovasti ylösalaisin 3 - 4 kertaa, jotta se saa täysin sekoittua. d) Merkitse putkeen “ALEMPI KERROS” 3. Jatka tuote-esitteen osaan YLEISET TOIMEN PITEET. (HUOM: 10 ml ylempää ja 10 ml alempaa kerrosta riittää noin 5:n siemennestenäytteen käsittelyyn.) Bemærk: Betegnelserne 50 % og 90 % angiver ikke en faktisk koncentration. 50 % og 90 % er relative koncentrationer baseret på det tidligere nomenklatur, der definerede en 1:9 fortynding af Percoll® som svarende til en 100 % isotonisk arbejdsopløsning. GENEREL PROCEDURE Følgende er en generel procedure for en gradientseparation af motile sædceller fra sædvæsken. Volumenen og koncentrationen kan modificeres i henhold til hvert enkelt laboratories præferencer (dvs. minigradient, cryopreserveret sæd, gradient i tre lag). 1. Bring alle mediekomponenter til stuetemperatur eller 37 °C. 2. Brug en steril pipette og overfør 1,5-2,0 ml af det “NEDERSTE LAG” til et sterilt, konisk centrifugerør til engangsbrug. 3. Brug en ny, steril pipette og overfør en tilsvarende volumen af “ØVERSTE LAG” oven på “NEDERSTE LAG”. Det gøres ved at berøre overfladen af det “UNDERSTE LAG” i siden af røret med pipettespidsen. Dispenser forsigtigt det “ØVERSTE LAG” ved at føre pipettespidsen i en opadgående spiralbevægelse mod rørets inderside efterhånden, som niveauet af det “ØVERSTE LAG” stiger. 4. Placer forsigtigt 1,5-2,0 ml flydende sæd oven på “ØVERSTE LAG” med en ny, steril pipette. 5. Centrifuger i 10-20 minutter ved ca. 200-300 x g.* Eksponer forsigtigt sædcellerne (pellet) ved enten at aspirere det “ØVERSTE” og “UNDERSTE” lag væk, eller direkte ved at fjerne sædcellerne og overføre dem til et nyt, sterilt centrifugerør. Bemærk: Kvaliteten af sædprøven skal evalueres og tages i betragtning, når den korrekte centrifugeringshastighed og -tid skal fastslås. Disse skal justeres i henhold til den enkelte sædprøves kvalitet med henblik på optimering af proceduren. LATVISKI SUOMI DANSK PRODUKTBESKRIVELSE ISolate® er et densitetsgradientmedium, der er fremstillet til at separere de motile sædceller fra sædvæsken. Som et gradientsystem i to lag reducerer det effektivt cellulære kontaminanter såsom død sæd, leukocytter og diverse restmaterialer. Den færdige prøve indeholder hovedsageligt motile sædceller. Huom: Termit 50 % ja 90 % eivät edusta todellista pitoisuutta. 50- ja 90-prosenttiset pitoisuudet ovat suhteellisia ja perustuvat aiempaan luokitukseen, jossa 1:9 laimennus Percoll®illa on määritelty 100 %:sti toimivaa isotonista liuosta vastaavaksi. YLEISET TOIMENPITEET Seuraavassa annetaan yleiset ohjeet kaksivaiheiseen siittiöiden siemennesteestä erottamiseen gradientin avulla. Tilavuutta ja pitoisuutta voidaan muunnella kunkin laboratorion toivomusten mukaan (so. minigradientti, kylmäsäilötty siemenneste, kolmikerroksinen gradientti). 1. Anna kaikkien ravintoliuosainesosien saavuttaa huoneenlämpötila tai 37 °C. 2. Steriiliä pipettiä käyttäen siirrä1,5 – 2,0 ml “ALEMPAA KERROSTA” steriiliin kertakäyttöiseen kartiomaiseen sentrifugiputkeen. 3. Siirrä steriilillä pipetillä sama tilavuus ”YLEMPÄÄ KERROSTA” ”ALEMMAN KERROKSEN” päälle. Tämä tapahtuu koskettamalla pipetin kärjellä ”ALEMMAN KERROKSEN” pintaa putken reunalla. Tyhjennä “YLEMPI KERROS” varovasti kiertäen pipetin kärkeä ympäri putkea yläsuuntaan samalla kun “YLEMMÄN KERROKSEN” taso nousee. 4. Aseta varovasti 1,5 – 2,0 ml nestemäistä siemennestettä “YLEMMÄLLE KERROKSELLE” uudella steriilillä pipetillä. 5. Linkoa 10 - 20 minuuttia asetuksella 200 – 300 x g.* Paljasta pelletti varovasti joko aspiroimalla se “YLEMMÄSTÄ” ja “ALEMMASTA KERROKSESTA” tai poistamalla pelletti suoraan ja siirtämällä se uuteen steriiliin sentrifugiputkeen. *Huom: Siittiönäytteen laatu tulee arvioida ja ottaa huomioon niiden linkoamisen tarkoituksenmukaista nopeutta ja kestoa määritettäessä. Näitä tulee säädellä yksittäisen näytteen laadun mukaisesti toimenpiteen optimoimiseksi. 6. Käyttäen uutta steriiliä pipettiä lisää 2,0 – 3,0 ml sopivaa pesuainetta, kuten Sperm Washing Medium (IS luettelonro 9983) tai Modified HTF (IS luettelonro 90126) proteiinilisineen. Upota eristetty pelletti uudelleen. Linkoa se (~ 200 x g) 8 -10 minuuttia ja poista pintaneste. Toista tämä vaihe uutta pesua varten. Hävitä pintaneste ja suspendoi pelletti uudelleen käyttäen asianmukaista ravintoliuosta sopivassa tilavuudessa. Näyte on nyt valmis analysoitavaksi. PRODUKTA APRAKSTS ISolate® blīvuma gradienta barotnes ir materiāls, kas paredzēts spermatozoīdu motilo frakciju atdalīšanai no sēklas šķidruma. Kā divslāņu gradientu sistēma tā efektīvi mazina šūnu izraisītas kontaminācijas iespējas, piemēram, kontamināciju ar nedzīviem spermatozoīdiem, baltajiem asinsķermenīšiem un dažādām pārpalikumšūnām. Rezultātā iegūtais paraugs galvenokārt satur kustīgus spermatozoīdus. Lisätietoja näiden tuotteiden käytöstä kunkin laboratorion tulee hakea omista menettelyohjeistaan ja protokollista, jotka on erityisesti kehitetty ja optimoitu paikallista lääkinnällistä ohjelmaa varten. ISolate ir caur membrānu filtrēta un aseptiski apstrādāta koloidāla silīcija dioksīda daļiņu suspensija, kas stabilizēta ar kovalenti piesaistītu hidrofīlu silānu HEPES buferētā HTF. Sterilitātes nodrošināšanas līmenis (SAL) ir 10-3. ISolate ir testēts, un ir konstatēts, ka tas ir negatīvs attiecībā uz pirogēnām baktērijām pirogēno baktēriju testā trušiem. SÄILYTYSOHJEET JA STABILITEETTI Avaamattomat säiliöt säilytettävä kylmässä, 2 – 8 ºC. Lämmitä ympäristölämpöön tai inkubaattorin lämpötilaan (37 °C) ennen käyttöä. Ei saa jäädyttää tai altistaa korkeille lämpötiloille. ISolate on stabiili pakkaukseen ja pullojen etiketteihin merkittyyn eräpäivään saakka ohjeiden mukaisesti säilytettynä. VAROITUKSIA JA VAROTOIMENPITEITÄ Tämä laite on tarkoitettu sellaisten henkilöiden käytettäväksi, jotka on koulutettu suorittamaan toimenpiteitä, joihin kuuluu laitteen käyttötarkoituksen mukainen asianmukainen käyttö. ISolate näyttää läpinäkymättömältä. Tämä on tuotteelle normaalia. Älä käytä ravintoliuospulloa, jossa näkyy hiukkasia tai saastumista (epätasaista sameutta). ISolaten korkin tulee olla tiiviisti kiinni, kun sitä käytetään hiilidioksidi-inkubaattorissa pH-muutosten välttämiseksi. Tässä tuotteessa ei ole säilöntäaineita, antibiootteja eikä proteiinilisäaineita. Kontaminaatio-ongelmat vältetään aseptisella käsittelytekniikalla. Jos pakkaus on vahingoittunut, älä käytä sitä. Hävitä tuote tai palauta se valmistajalle vaihdettavaksi. VAROITUS: Yhdysvaltain liittovaltion laki rajoittaa tämän välineen myynnin vain lääkärin toimesta tai määräyksestä tapahtuvaksi. LIETOŠANAS NORĀDĪJUMI Kataloga Nr. 99264 – LIETOŠANAI GATAVS KOLOIDĀLS SILĪCIJA DIOKSĪDS DIVĀS KONCENTRĀCIJĀS (50% un 90%) A. Ieteicamie materiāli: ISolate • Irvine Scientific kataloga Nr. 99264 (6ml, 50ml vai 100 ml flakonu komplekts) Sperm Washing Medium • Irvine Scientific kataloga Nr. 9983 Sterili, koniski vienreizējās lietošanas centrifūgas stobriņi • Irvine Scientific kataloga Nr. IS-325 Pastēra pipetes, sterilas Centrifūga Inkubators, 37°C B. Gradienta sagatavošana: Nav nepieciešama iepriekšēja atšķaidīšana. Katrs flakons ar augšējā un apakšējā slāņa gradientu ir gatavs lietošanai. Pārejiet pie izstrādājuma ieliktnī aprakstītās VISPĀRĒJĀS PROCEDŪRAS. Kataloga Nr. - 99275 - STOCK SOLUTION 90% specifiska barotne izmantošanai tūlītējā procedūrā vai atšķaidīšanai turpmāk. A. Ieteicamie materiāli: ISolate STOCK SOLUTION •Irvine Scientific kataloga Nr. 99275 Modified Human Tubal Fluid •Irvine Scientific kataloga Nr. 90126 Sperm Washing Medium •Irvine Scientific kataloga Nr. 9983 Sterili, koniski vienreizējās lietošanas centrifūgas stobriņi •Irvine Scientific kataloga Nr. IS-325 Pastēra pipetes, sterilas Centrifūga Inkubators, 37°C B. Gradienta sagatavošana: Lai lietotu spermatozoīda atdalīšanas metodi gradientā, nepieciešami divi šķīdumi: augšējais slānis un apakšējais slānis. 1. Augšējā slāņa šķīdums – 50%: a) Ievietojiet CONCENTRATE (kataloga Nr. 99275) un pipeti 5,6 ml sterilā centrifūgas stobriņā. b) Pievienojiet 4,4 ml Modified Human Tubal Fluid (kataloga Nr. 90126) c) Uzlieciet stobriņam aizbāzni un uzmanīgi apvērsiet 3-4 reizes, lai saturam ļautu pilnībā sajaukties. d) Piestipriniet stobriņam uzlīmi „AUGŠĒJAIS SLĀNIS” 2. Apakšējā slāņa šķīdums – 90%: a) Iedaliet 10 ml STOCK SOLUTION sterilā centrifūgas stobriņā un uzlieciet aizbāzni (Turpmāka atšķaidīšana nav nepieciešama – STOCK SOLUTION ir 90%). b) Piestipriniet stobriņam uzlīmi „APAKŠĒJAIS SLĀNIS” 3. Pārejiet pie produkta ieliktnī aprakstītās VISPĀRĒJĀS PROCEDŪRAS. (PIEZĪME: ar 10 ml augšējā slāņa un 10 ml apakšējā slāņa šķīdumu iespējams apstrādāt apmēram 5 spermas paraugus.) Kataloga Nr. 99306 - CONCENTRATE Koloidāls silīcija dioksīda koncentrāts turpmākai atšķaidīšanai blīvuma gradientos, tā sastāvā ir izotonisks buferis un tam piemīt aptuvenais neatšķaidīta Percoll® blīvums. Saskaņā ar šo iepakojuma ieliktni ISolate® CONCENTRATE ir ticis novērtēts 50% un 90% gradientā. Katra laboratorija var izvēlēties veidot atšķirīgu koncentrāciju gradientus, kuri jāizvērtē attiecībā uz efektivitāti. A. Ieteicamie materiāli: ISolate® koncentrāts •Irvine Scientific kataloga Nr. 99306 Modified Human Tubal Fluid •Irvine Scientific kataloga Nr. 90126 Sperm Washing Medium •Irvine Scientific kataloga Nr. 9983 Sterili, koniski vienreizējās lietošanas centrifūgas stobriņi •Irvine Scientific kataloga Nr. IS-325 Pastēra pipetes, sterilas Centrifūga Inkubators, 37°C B. Gradienta sagatavošana: Lai lietotu spermatozoīda atdalīšanas metodi gradientā, nepieciešami divi šķīdumi: augšējais slānis un apakšējais slānis. 1. Augšējā slāņa šķīdums – 50%: a) Ievietojiet CONCENTRATE (kataloga Nr. 99306) un pipeti 4.5 ml sterilā centrifūgas stobriņā. b) Pievienojiet 5,5 ml Modified Human Tubal Fluid (kataloga Nr. 90126) c) Uzlieciet stobriņam aizbāzni un uzmanīgi apvērsiet 3-4 reizes, lai saturam ļautu pilnībā sajaukties. d) Piestipriniet stobriņam uzlīmi „AUGŠĒJAIS SLĀNIS” 2. Apakšējā slāņa šķīdums – 90%: a) Ievietojiet CONCENTRATE (kataloga Nr. 99306) un pipeti 8,1 ml sterilā centrifūgas stobriņā. b) Pievienojiet 1,9 ml Modified Human Tubal Fluid (kataloga Nr. 90126) c) Uzlieciet stobriņam aizbāzni un uzmanīgi apvērsiet 3-4 reizes, lai saturam ļautu pilnībā sajaukties. d) Piestipriniet stobriņam uzlīmi „APAKŠĒJAIS SLĀNIS” 3. Pārejiet pie produkta ieliktnī aprakstītās ISPĀRĒJĀS PROCEDŪRAS. (PIEZĪME: ar 10 ml augšējā slāņa un 10 ml apakšējā slāņa šķīdumu iespējams apstrādāt apmēram 5 spermas paraugus.) Piezīme: Apzīmējumi 50% un 90% nenorāda faktisko koncentrāciju. 50% un 90% ir relatīvas koncentrācijas, kas pamatojas uz iepriekšējo nomenklatūru, kas definēja Percoll® atšķaidīšanu1:9 kā līdzvērtīgu 100% iedarbīgam, izotoniskam šķīdumam. VISPĀRĒJĀ PROCEDŪRA Turpmāk minētā ir vispārpieņemta procedūra izolēšanai gradientā divos posmos, atdalot kustīgu spermatozoīdu no spermas. Daudzumu un koncentrāciju iespējams mainīt, lai tos varētu izmantot atbilstoši laboratorijas galvenajiem mērķiem (t. i., kā mini-gradientu, ar kriokonservēto spermu, kā trīsslāņu gradientu). 1. Nodrošiniet, ka visu barotnes sastāvdaļu temperatūra ir sasniegusi istabas temperatūras līmeni vai 37°C. 2. Izmantojot sterilu pipeti, pārnesiet 1,5-2,0 ml “APAKŠĒJĀ SLĀŅA” uz sterilu, vienreizējās lietošanas, konisku centrifūgas stobriņu. 3. Izmantojot jaunu sterilu pipeti, pārnesiet to pašu daudzumu „AUGŠĒJĀ SLĀŅA” uz „APAKŠĒJĀ SLĀŅA” augšdaļu. To veic, ar pipetes galu pieskaroties „APAKŠĒJAM SLĀNIM” no stobriņa puses. Uzmanīgi izpiliniet „AUGŠĒJO SLĀNI”, spirālveidīgi virpinot pipetes galu pa stobriņa perimetru augšupejošas kustības veidā, „AUGŠĒJĀ SLĀŅA” līmenim paaugstinoties. 4. Ar jaunas sterilas pipetes palīdzību uzmanīgi ievietojiet 1,5-2,0 ml sašķidrinātas spermas „AUGŠĒJĀ SLĀNĪ”. 5. Centrifugējiet 10-20 minūtes ar apmēram 200-300 g paātrinājumu.* Uzmanīgi atdaliet lodīti, atvelkot nost „AUGŠĒJO” un ”APAKŠĒJO SLĀNI” vai tieši izņemot lodīti un pārnesot to uz citu sterilu centrifūgas stobriņu. *Piezīme: Spermatozoīda parauga kvalitāte jāizvērtē un jāņem vērā, nosakot atbilstošo centrifugēšanas ātrumu un ilgumu. Lai procedūru optimizētu, šos parametrus vajadzētu pielāgot atbilstoši atsevišķā parauga kvalitātei. 6. Izmantojot jaunu sterilu pipeti, pievienojiet 2,0-3,0 ml piemērota skalošanas materiāla, piemēram, Sperm Washing Medium (IS kataloga Nr. 9983) vai Modified HTF (IS kataloga Nr. 90126) ar proteīna papildinājumu. Suspendējiet atkārtoti izolēto lodīti. Centrifugējiet (ar ~200 g paātrinājumu) 8-10 minūtes un atdaliet supernatantu. Atkārtojiet šo soli, lai veiktu otru skalošanu. Novāciet supernatantu un no jauna suspendējiet lodīti, izmantojot atbilstošu piemērotas barotnes daudzumu. Tagad paraugs ir sagatavots analīzes veikšanai. Lai uzzinātu papildu informāciju par šo produktu lietošanu, katrai laboratorijai jāiepazīstas ar tajā noteiktajām procedūrām un protokoliem, kas īpaši izstrādāti un optimizēti individuālas medicīniskas programmas veikšanai. UZGLABĀŠANAS NORĀDĪJUMI UN STABILITĀTE Neatvērtus konteinerus uzglabāt atdzesētus no 2º līdz 8º C temperatūrā. Pirms lietošanas sasildiet līdz apkārtējās vides vai inkubatora (37°C) temperatūrai. Nesaldēt un nepakļaut augstu temperatūru iedarbībai. Uzglabājot, kā norādīts, ISolate saglabā stabilitāti līdz derīguma termiņam, kas norādīts uz kastes un uz pudeļu marķējuma. PIESARDZĪBAS PASĀKUMI UN BRĪDINĀJUMI Šo ierīci ir paredzēts izmantot personālam, kas ir apmācīts tādu procedūru veikšanai, kuras ietver norādīto izmantošanu, kurai šī ierīce ir paredzēta. ISolate izskatīsies necaurspīdīgs. Šim produktam tas ir normāli. Nelietot nevienu flakonu ar barotni, kurā saskatāmas vielas daļiņas vai piesārņojums (neviendabīgs duļķainums). ISolate cieši jānoslēdz ar aizbāzni, lietojot CO2 inkubatorā, lai nepieļautu pH līmeņa izmaiņas. Šis produkts nesatur konservantus, antibiotikas vai proteīna piedevas. Lai izvairītos no kontaminācijas problēmām, rīkojoties izmantojiet aseptiskas tehnikas. Ja bojāts, nelietot. Lūdzu, likvidējiet vai nosūtiet atpakaļ ražotājam atvietošanai. BRĪDINĀJUMS: Federālie (ASV) likumi pieļauj šīs ierīces tirdzniecību vienīgi ārstiem vai ar viņu norīkojumu. O ISolate é uma suspensão coloidal de partículas de sílica estabilizada com silano hidrofílico unido covalentemente em HTF tamponado com HEPES, que foi filtrado através de membrana e processado em condições estéreis. O nivel de garantia de esterilidade (SAL) é de 10-3. O ISolate foi testado para pirogénios com resultados negativos pelo teste de pirogénios no coelho. INSTRUÇÕES DE UTILIZAÇÃO Nº de Catálogo 99264 – SÍLICA COLOIDAL P R O N TA PA R A U T I L I Z A R A D U A S CONCENTRAÇÕES (50% E 90%) A. Material sugerido: ISolate • Irvine Scientific, Nº catálogo 99264 (kit de recipientes de6mL, 50mL ou kit de recipientes de 100mL) Meio de lavagem dos espermatozóides • Irvine Scientific, Nº catálogo 9983 Tubos de centrífuga cónicos estéreis e descartáveis • Irvine Scientific, Nº catálogo IS-325 Pipetas Pasteur, estéreis Centrífuga Incubadora a 37ºC B. Preparação do gradiente: Não são necessárias diluições preliminares. Cada recipiente de camada de gradiente superior e inferior está pronta para utilizar. Continue com a secção “PROCEDIMENTOS GERAIS” Nº de Catálogo 99275 – SOLUÇÃO STOCK Meio de gradiente de densidade a 90% para ser utilizado em protocolos de uma só etapa ou para posteriores diluições. A. Material sugerido: ISolate - Solução Stock • Irvine Scientific, Nº Cat. 99275 Meio HTF modificado • Irvine Scientific, Nº Cat. 90126 Meio de lavagem dos espermatozóides • Irvine Scientific, Nº Cat. 9983 Tubos de centrífuga cónicos estéreis e descartáveis • Irvine Scientific, Nº Cat. IS-325 Pipetas Pasteur, estéreis Centrífuga Incubadora a 37ºC B. Preparação do gradiente: Para levar a cabo uma separação de espermatozóides por gradiente necessitam-se de duas soluções: a camada superior e a camada inferior. 1. Solução da camada superior: 50% a. Pipetar da SOLUÇÃO STOCK (Nº Cat. 99275) 5,6mL para um tubo de centrífuga estéril. b. Adicionar 4,4 mL de HTF modificado (Nº Cat. 90126) c. Tapar o tubo e inverter suavemente 3 ou 4 vezes para permitir uma mistura completa. d. Etiquetar o tubo como “CAMADA SUPERIOR”. 2. Solução da camada inferior: 90% a. Inserir uma alíquota de 10mL da SOLUÇÃO STOCK num tubo estéril de centrífuga e tapá-lo. (Não são necessárias mais diluições. A solução stock está a 90%). b. Etiquetar o tubo como “CAMADA INFERIOR”. 3. Continuar na secção de “PROCEDIMENTOS GERAIS”. (Nota: 10 ml da “CAMADA SUPERIOR” e 10 ml da “CAMADA INFERIOR” processam aproximadamente 5 amostras de sémen) Nº de Catálogo 99306 – CONCENTRADO Concentrado de sílica coloidal para posteriores diluições em gradientes de densidade; formulado num tampão isotónico, aproxima-se da densidade do Percoll não diluído. O ISolate Concentrado foi avaliado em gradientes de 50% e 90% de acordo com este folheto informativo de produto. Cada laboratório pode escolher preparar os gradientes a concentrações diferentes, os quais devem ser previamente avaliados para a sua eficácia. A. Material sugerido: ISolate - Concentrado • Irvine Scientific, Nº Cat. 99306 Meio HTF modificado • Irvine Scientific, Nº Cat. 90126 Meio de lavagem dos espermatozóides • Irvine Scientific, Nº Cat. 9983 Tubos de centrífuga cónicos estéreis e descartáveis • Irvine Scientific, Nº Cat. IS-325 Pipetas Pasteur, estéreis Centrífuga Incubadora a 37ºC B. Preparação do gradiente: Para levar a cabo uma separação de espermatozóides por gradiente necessitam-se de duas soluções: a camada superior e a camada inferior. 1. Solução da camada superior: 50% a. Pipetar 4,5 mL do CONCENTRADO (Nº Cat. 99306) para um tubo de centrífuga estéril. b. Adicionar 5,5 mL de HTF modificado (Nº Cat. 90126) c. Tapar o tubo e inverter suavemente 3 ou 4 vezes para permitir uma mistura completa. d. Etiquetar o tubo como “CAMADA SUPERIOR”. 2. Solução da camada inferior: 90% a. Pipetar 8,1 mL do CONCENTRADO (Nº Cat. 99306) para um tubo de centrífuga estéril. b. Adicionar 1,9 mL de HTF modificado (Nº Cat. 90126) c. Tapar o tubo e inverter suavemente 3 ou 4 vezes para permitir uma mistura completa. d. Etiquetar o tubo como “CAMADA INFERIOR”. 3. Continue na secção de “PROCEDIMENTOS GERAIS”. Nota: Os valores 50% e 90% não representam uma conc tração real. Os valores 50% e 90% são concentrações relativas baseadas numa nomenclatura anterior que definia uma solução 1:9 de Percoll® como uma solução de trabalho isotónica a 100%. PROCEDIMENTOS GERAIS O protocolo que aqui se descreve é um procedimento geral para separar do sémen a fracção móvel dos espermatozoides através de um gradiente. O volume e a concentração podem-se modificar para ajustar-se às preferências de cada laboratório (p.ex. mini-gradiente, sémen crioconservado, gradiente de 3 camadas). 1. Coloque todos os meios à temperatura ambiente ou a 37ºC. 2. Utilizando uma pipeta estéril, transferir 1,5 – 2,0 mL de meio da “CAMADA INFERIOR” para um tubo de centrífuga cónico, estéril e descartável. 3. Utilizando outra pipeta estéril, transferir um volume igual ao do passo 1 de “CAMADA SUPERIOR” para a “CAMADA INFERIOR”. Para isso, colocar a ponta da pipeta na parte superior da “CAMADA INFERIOR” tocando na parede do tubo. Distribuir cuidadosamente a “CAMADA SUPERIOR” movendo a pipeta em círculos em redor da circunferência do tubo subindo à medida que aumenta o nível da “CAMADA SUPERIOR”. 4. Coloque suavemente 1,5 – 2,0 mL de sémen liquefeito sobre a “CAMADA SUPERIOR” com outra pipeta estéril. ČESKY ΕΛΛΗΝΙΚΆ PORTUGUÊS Descrição do Produto O ISolate ® é um meio de gradiente de densidades concebido para separar a fracção móvel do espermatozóide do fluído seminal. Como um sistema de gradiente de duas camadas, reduz eficazmente os contaminantes celulares como espermatozóides mortos, leucócitos e outros restos. 5. Centrifugar durante 10-20 minutos a 200-300 x g*. Cuidadosamente, exponha o sedimento quer através da aspiração das “CAMADAS SUPERIORES E INFERIORES”, ou directamente removendo o sedimento e transferindo-o para um novo tubo de centrífuga estéril. * Nota: a qualidade da amostra de espermatozóides deve ser avaliada e tomada em consideração para determinar o tempo e a velocidade de centrifugação adequadas. Estes parâmetros devem ajustar-se conforme a qualidade individual da amostra para optimizar o processo. 6. Utilizando uma nova pipeta estéril, adicionar 2.0 – 3.0 mL de meio de lavagem adequado como o Meio de Lavagem de Espermatozóides (IS Nº Cat 9983) ou HTF modificado (IS Nº Cat 90126) com suplemento proteico. Ressuspender o sedimento. Centrifugar (aprox. 200xg) 8-10 minutos e descartar o sobrenadante. Repetir este passo para numa segunda lavagem. Descartar o sobrenadante e ressuspender o sedimento utilizando um volume adequado de meio. A amostra está pronta para análise. Para detalhes adicionais sobre a utilização destes produtos, o laboratório deve consultar os seus próprios procedimentos padrão e protocolos que foram especificamente desenvolvidos e optimizados para a sua instituição. I N S T R U Ç Õ E S D E C O N S E R VA Ç Ã O E ESTABILIDADE Conserve os recipientes fechados refrigerados entre 2ºC e 8ºC. Aqueça à temperatura ambiente ou numa incubadora (37ºC) antes de utilizar. Não congele ou exponha a temperaturas altas. O ISolate é estável até à data de expiração indicada no rótulo do recipiente, sempre que seja conservado de acordo com as instruções recomendadas. PRECAUÇÕES E ADVERTÊNCIAS Este dispositivo deve ser utilizado por funcionários treinados em procedimentos aos quais se destina. O ISolate tem um aspecto opaco. Isto é normal para este produto. Não utilize nenhum recipiente de meio com evidências de conter partículas ou contaminação (turvação não homogénea). Os recipientes de ISolate devem estar hermeticamente fechados quando se utilizar uma incubadora de CO2 para evitar alterações de pH. Este meio não contém conservantes, antibióticos nem suplementos proteicos. Para evitar contaminações, manipule o produto em condições de esterilidade. E m caso de alteração do meio, não o utilize. Por favor, descarte-o o devolva-o ao fabricante para que seja substituído. CUIDADO: As leis federais dos EUA, restringem a venda deste dispositivo, apenas a médicos ou por sua prescrição. ΠΕΡΙΓΡΑΦΗ ΠΡΟΪΟΝΤΟΣ Το ISolate® είναι ένα μέσο κλίσης πυκνότητας σχεδιασμένο για διαχωρισμό του κινητικού κλάσματος του σπέρματος από το σπερματικό υγρό. Ως σύστημα κλίσης δύο στρωμάτων, μειώνει δραστικά τις κυτταρικές μολυσματικές ουσίες, όπως το νεκρό σπέρμα, τα λευκά αιμοσφαίρια και διάφορα υπολείμματα.Το δείγμα που προκύπτει περιέχει κυρίως κινητικό σπέρμα. Το ISolate είναι ένα φιλτραρισμένο με μεμβράνη, ασηπτικά επεξεργασμένο κολλοειδές αιώρημα από μόρια πυρίτιας σταθεροποιημένα με υδρόφιλο σιλάνιο με ισοσθενή δεσμό σε HEPES-ρυθμιστικό HTF. Το επίπεδο διασφάλισης αποστείρωσης (SAL) είναι 10-3. Το ISolate έχει ελεγχθεί και αποδειχθεί αρνητικό για πυρετογόνα από την εξέταση πυρετογόνων σε λαγούς. ΟΔΗΓΙΕΣ ΧΡΗΣΗΣ Αρ. Καταλόγου 99264 – ΕΤΟΙΜΗ ΓΙΑ ΧΡΗΣΗ ΚΟΛΛΟΕΙΔΗΣ ΠΥΡΙΤΙΑ ΣΕ ΔΥΟ ΣΥΓΚΕΝΤΡΩΣΕΙΣ (50% και 90%) A. Προτεινόμενα Υλικά: ISolate • Irvine Scientific Κατάλογος #99264 (6ml, 50ml ή 100 ml κιτ φιαλιδίων) Sperm Washing Medium • Irvine Scientific Κατάλογος #9983 Αποστειρωμένοι, κωνικοί σωλήνες φυγόκεντρου μιας χρήσης • Irvine Scientific Κατάλογος #IS-325 Πιπέτες Παστέρ, αποστειρωμένες Φυγόκεντρος Επωαστήρας, 37°C B. Προετοιμασία Κλίσης: Δεν χρειάζονται προκαταρκτικά διαλύματα. Κάθε φιαλίδιο κλίσης άνω και κάτω στρώματος είναι έτοιμο για χρήση. Προχωρήστε στο μέρος της ΓΕΝΙΚΗΣ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑΣ του φυλλαδίου του προϊόντος. Αρ. Καταλόγου 99275 - STOCK SOLUTION 90% πυκνότητας μέσο κλίσης για χρήση σε διαδικασία ενός βήματος ή για περαιτέρω διάλυση. A. Προτεινόμενα Υλικά: ISolate Stock Solution • Irvine Scientific Κατάλογος #99275 Modified Human Tubal Fluid • Irvine Scientific Κατάλογος #90126 Sperm Washing Medium • Irvine Scientific Κατάλογος #9983 Αποστειρωμένοι, κωνικοί σωλήνες φυγόκεντρου μιας χρήσης • Irvine Scientific Κατάλογος #IS-325 Πιπέτες Παστέρ, αποστειρωμένες Φυγόκεντρος Επωαστήρας, 37°C B. Προετοιμασία Κλίσης: Χρειάζονται δύο διαλύματα για την μέθοδο διαχωρισμού σπέρματος κλίσης: Ένα άνω και ένα κάτω στρώμα. Πάνω και κάτω στρώμα. 1.) Διάλυμα Άνω Στρώματος - 50%: α) Πάρτε STOCK SOLUTION (αρ. Καταλόγου 99275) και πιπεταρίστε 5.6 ml σε αποστειρωμένο σωλήνα φυγόκεντρου β) Προσθέστε 4.4 ml από Modified Human Tubal Fluid (αρ. Καταλόγου 90126) γ) Κλείστε τον σωλήνα και αναποδογυρίστε το απαλά 3-4 φορές για να επιτραπεί η πλήρης ανάδευση δ) Αναγράψτε στην ετικέτα του σωλήνα «ΑΝΩ ΣΤΡΩΜΑ» 2. Διάλυμα Κάτω Στρώματος - 90%: α) Υποπολλαπλασιάστε 10 ml του STOCK SOLUTION σε αποστειρωμένο σωλήνα φυγόκεντρου και σφραγίστε το – (Δεν χρειάζονται άλλες διαλύσεις - STOCK SOLUTION είναι 90%) β) Βάλτε ετικέτα στον σωλήνα ως «ΚΑΤΩ ΣΤΡΩΜΑ» 3. Συνεχίστε στο τμήμα ΓΕΝΙΚΗ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑ του φυλλαδίου του προϊόντος. (ΣΗΜΕΙΩΣΗ: 10 ml Άνω Στρώματος και 10 ml Κάτω Στρώματος, επεξεργάζονται κατά προσέγγιση 5 δείγματα σπέρματος.) Αρ. Καταλόγου 99306 - CONCENTRATE Συμπύκνωμα κολλοειδούς πυρίτιας για περαιτέρω διάλυση σε κλίσεις πυκνότητας. Σχηματίζεται σε ισοτονικό ρυθμιστικό διάλυμα και προσεγγίζει την πυκνότητα μη αραιωμένου Percoll®. Το ISolate® CONCENTRATE αξιολογήθηκε σύμφωνα με αυτό το φυλλάδιο συσκευασίας σε κλίσεις 50% και 90% . Κάθε εργαστήριο μπορεί να επιλέξει να δημιουργήσει κλίσεις με διαφορετικές συγκεντρώσεις που θα πρέπει να αξιολογηθούν για αποτελεσματικότητα. A. Προτεινόμενα Υλικά: ISolate® Συμπύκνωμα • Irvine Scientific Κατάλογος #99306 Modified Human Tubal Fluid • Irvine Scientific Κατάλογος #90126 Sperm Washing Medium • Irvine Scientific Κατάλογος #9983 Αποστειρωμένοι, κωνικοί σωλήνες φυγόκεντρου μιας χρήσης • Irvine Scientific Κατάλογος #IS-325 Πιπέτες Παστέρ, αποστειρωμένες Φυγόκεντρος Επωαστήρας, 37°C B. Προετοιμασία Κλίσης: Χρειάζονται δύο διαλύματα για την μέθοδο διαχωρισμού σπέρματος κλίσης: Ένα άνω και ένα κάτω στρώμα. 1. Διάλυμα Άνω Στρώματος - 50%: α) Πάρτε CONCENTRATE (αρ. Καταλόγου 99306) και πιπεταρίστε 4.5 ml σε αποστειρωμένο σωλήνα φυγόκεντρου β) Προσθέστε 5.5 ml από Modified Human Tubal Fluid (αρ. Καταλόγου 90126) γ) Κλείστε τον σωλήνα και αναποδογυρίστε το απαλά 3-4 φορές για να επιτραπεί η πλήρης ανάδευση δ) Αναγράψτε στην ετικέτα του σωλήνα «ΑΝΩ ΣΤΡΩΜΑ» 2. Διάλυμα Κάτω Στρώματος - 90%: α) Πάρτε CONCENTRATE (αρ. Καταλόγου 99306) και πιπεταρίστε 8.1 ml σε αποστειρωμένο σωλήνα φυγόκεντρου β) Προσθέστε 1.9 ml από Modified Human Tubal Fluid (αρ. Καταλόγου 90126) γ) Κλείστε τον σωλήνα και αναποδογυρίστε το απαλά 3-4 φορές για να επιτραπεί η πλήρης ανάδευση δ) Αναγράψτε στην ετικέτα του σωλήνα «ΚΑΤΩ ΣΤΡΩΜΑ» 3. Συνεχίστε στο τμήμα ΓΕΝΙΚΗ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑ του φυλλαδίου του προϊόντος. (ΣΗΜΕΙΩΣΗ: 10 ml Άνω Στρώματος και 10 ml Κάτω Στρώματος, επεξεργάζονται κατά προσέγγιση 5 δείγματα σπέρματος.) Σημείωση: Οι όροι 50% και 90% δεν αναφέρονται σε πραγματική συγκέντρωση. Τα 50% και 90% είναι σχετικές συγκεντρώσεις βασισμένες στην προηγούμενη ονοματολογία που όριζε διάλυμα 1:9 από Percoll® ως ίσο με 100% λειτουργικό, ισοτονικό διάλυμα. ΓΕΝΙΚΗ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑ Παρακάτω ακολουθεί η γενική διαδικασία για διαχωρισμό κλίσης δύο βημάτων του κινητού σπερματοζωαρίου από το σπέρμα. Ο όγκος και η συγκέντρωση μπορούν να τροποποιηθούν για να ανταποκρίνονται στις εργαστηριακές προτιμήσεις (δηλ. μινι-κλίση, κρυοσυντηρημένο σπέρμα, κλίση τριών στρωμάτων). 1. Φέρτε όλα τα εξαρτήματα των μέσων σε θερμοκρασία δωματίου ή στους 37°C. 2. Χρησιμοποιώντας αποστειρωμένη πιπέτα, μεταφέρετε 1.5 - 2.0 ml του «ΚΑΤΩ ΣΤΡΩΜΑΤΟΣ» σε αποστειρωμένο, μίας χρήσης, κωνικό φυγόκεντρο σωλήνα. 3. Χρησιμοποιώντας μια νέα αποστειρωμένη πιπέτα, μεταφέρετε ίσο όγκο «ΠΑΝΩ ΣΤΡΩΜΑΤΟΣ» πάνω από το «ΚΑΤΩ ΣΤΡΩΜΑ». Αυτό γίνεται με επαφή της επιφάνειας του «ΚΑΤΩ ΣΤΡΩΜΑΤΟΣ» στο πλάι του σωλήνα με την άκρη της πιπέτας. Διαχύστε προσεκτικά το «ΑΝΩ ΣΤΡΩΜΑ» στροβιλίζοντας την άκρη της πιπέτας γύρω από την περιφέρεια του σωλήνα με κινήσεις προς τα πάνω, καθώς το επίπεδο του «ΑΝΩ ΣΤΡΩΜΑΤΟΣ» ανυψώνεται. 4. Τοποθετήστε απαλά 1.5 - 2.0 ml ρευστοποιημένου σπέρματος στο «ΠΑΝΩ ΣΤΡΩΜΑ» χρησιμοποιώντας νέα αποστειρωμένη πιπέτα. 5. Τοποθετήστε για φυγοκέντρηση για 10-20 λεπτά σε περίπου 200 - 300xg.* Εκθέστε προσεκτικά το συσσωμάτωμα είτε με αναρρόφηση του «ΑΝΩ» και «ΚΑΤΩ ΣΤΡΩΜΑΤΟΣ» ή με άμεση αφαίρεση του και μεταφορά σε νέο αποστειρωμένο σωλήνα φυγόκεντρου. *Σημείωση: Η ποιότητα του δείγματος σπέρματος θα πρέπει να αξιολογείται και να λαμβάνεται υπόψη στον καθορισμό της σωστής ταχύτητας και του χρόνου φυγοκέντρησης. Θα πρέπει να προσαρμοστούν σύμφωνα με την ξεχωριστή ποιότητα δείγματος για βελτιστοποίηση της διαδικασίας. 6. Χρησιμοποιώντας νέα αποστειρωμένη πιπέτα, προσθέστε 2.0 - 3.0 ml κατάλληλου μέσου έκπλυσης όπως το Sperm Washing Medium (IS αρ. Καταλόγου 9983) ή Modified HTF (IS αρ. Καταλόγου 90126) με συμπλήρωμα πρωτεϊνών. Αιωρείστε ξανά το απομονωμένο συσσωμάτωμα. Υποβάλλετε σε φυγοκέντρηση (~200xg) για 8 -10 λεπτά και αφαιρέστε το υπερκείμενο υγρό. Επαναλάβετε αυτό το βήμα για δεύτερη έκπλυση. Απορρίψτε το υπερκείμενο υγρό και αιωρείστε ξανά το συσσωμάτωμα χρησιμοποιώντας κατάλληλο όγκο του κατάλληλου μέσου. Το δείγμα είναι πλέον έτοιμο για ανάλυση. Pro dodatečné podrobnosti o použití těchto výrobků by každá laboratoř měla konzultovat vlastní laboratorní metody a protokoly, které byly vytvořeny a optimalizovány zvlášť pro váš konkrétní zdravotnický program. ΟΔΗΓΙΕΣ ΦΥΛΑΞΗΣ ΚΑΙ ΣΤΑΘΕΡΟΤΗΤΑ Φυλάσσετε τα κλειστά δοχεία σε ψύξη στους 2º έως 8ºC. Θερμάνετε σε θερμοκρασία περιβάλλοντος ή επωαστήρα (37°C) πριν τη χρήση. Μην ψύχετε ή εκθέτετε σε υψηλές θερμοκρασίες. Το ISolate παραμένει σταθερό μέχρι την ημερομηνία λήξης που αναγράφεται στις ετικέτες του κουτιού και των φιαλών, όταν φυλάσσεται σύμφωνα με τις οδηγίες. ΠΡΟΦΥΛΑΞΕΙΣ ΚΑΙ ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΕΙΣ Η συσκευή αυτή προορίζεται για χρήση από προσωπικό που έχει εκπαιδευτεί σε διαδικασίες που περιλαμβάνουν τη συγκεκριμένη εφαρμογή για την οποία προορίζεται η συσκευή. Το ISolate έχει αδιαφανή εμφάνιση. Αυτό είναι φυσιολογικό για το συγκεκριμένο προϊόν. Μην κάνετε χρήση φιαλιδίου μέσου που παρουσιάζει ύπαρξη σωματιδίων ή μολυσματικών ουσιών (μη ενιαία θολότητας). Το ISolate πρέπει να είναι καλά κλειστό όταν χρησιμοποιείται σε επωαστήρα CO2, για να αποφεύγονται οι αλλαγές pH. Το προϊόν δεν περιέχει συντηρητικά, αντιβιοτικά ή συμπληρώματα πρωτεϊνών. Για να αποφύγετε προβλήματα μόλυνσης, χρησιμοποιήστε ασηπτικές τεχνικές. Σε περίπτωση ζημιάς, μην χρησιμοποιείτε. Παρακαλούμε απορρίψτε ή επιστρέψτε στον Παρασκευαστή για αντικατάσταση. ΠΡΟΣΟΧΗ: Η ομοσπονδιακή (Η.Π.Α.) νομοθεσία περιορίζει αυτή τη συσκευή σε πώληση από ή κατά εντολή γιατρού. POPIS VÝROBKU ISolate® je médium gradientu hustoty zhotovené na oddělení motilní frakce spermií ze semenné kapaliny. Protože je to dvouvrstevný gradientní systém, efektivně snižuje buňkovou kontaminaci jako např. odumřelé spermie, bílé krevní buňky a jiné nečistoty. Výsledný vzorek obsahuje většinou motilní spermie. ISolate asepticky zpracovaná koloidní suspenze křemíkových částic, filtrovaná přes membránu a stabilizovaná kovalentně vázaným hydrofilním silanem v pufrovaném HEPES HTF. Hladina zaručené sterilizace (SAL) je 10-3. ISolate bylo testováno a shledáno negativním na pyrogeny při pyrogenním testu provedeném na laboratorním králíkovi. NÁVOD K POUŽITÍ Kat. č. 99264 – KOLOIDNÍ KŘEMÍK VE DVOU KONCENTRACÍCH (50 % a 90 %) K OKAMŽITÉMU POUŽITÍ A. Doporučený materiál: ISolate • Irvine Scientific Katalog #99264 (sada 6ml, 50ml nebo 100 ml ampulek ) Sperm Washing Medium • Irvine Scientific Katalog #9983 Sterilní kónické odstředivkové trubičky • Irvine Scientific Katalog #IS-325 Sterilní pipety Pasteur Odstředivka Inkubátor, 37 °C B. Příprava gradientu: Žádné předběžné ředění není nutné. Každá ampulka gradientu horní a spodní vrstvy je připravena na použití. Pokračujte až po část příbalového letáku nazvanou OBECNÁ METODA. Kat. č. #99275 - ZÁSOBNÍ ROZTOK Médium s 90% gradientem hustoty na použití v jednokrokové proceduře nebo na další ředění. A. Doporučený materiál: ISolate STOCK SOLUTION • Irvine Scientific Katalog #99275 Modified Human Tubal Fluid • Irvine Scientific Katalog #90126 Sperm Washing Medium • Irvine Scientific Katalog #9983 Sterilní kónické odstředivkové trubičky • Irvine Scientific Katalog #IS-325 Sterilní pipety Pasteur Odstředivka Inkubátor, 37 °C B. Příprava gradientu: Jsou potřeba dva roztoky na provedení metody gradientní separace spermií: horní vrstvy a spodní vrstvy. Horní vrstva a spodní vrstva. 1. Roztok horní vrstvy – 50 %: a.) Napipetujte 5,6 ml koncentrátu CONCENTRATE (kat. č. 99275) do sterilní odstředivkové trubičky. b) Přidejte 4,4 ml Modified Human Tubal Fluid (kat. č. 90126) c) Zazátkujte zkumavku a opatrně ji převraťte 3-4krát, aby došlo k celkovému promíchání. d) Označte trubičku „HORNÍ VRSTVA“ 2. Roztok spodní vrstvy – 90 %: a) Nadávkujte alikvotní podíl 10 ml roztoku STOCK SOLUTION do sterilní odstředivkové trubičky se zátkou – (Dalšího ředění není třeba - STOCK SOLUTION je 90%) b) Označte trubičku “SPODNÍ VRSTVA“ 3. Pokračujte až po část příbalového letáku výrobku nazvanou ZÁKLADNÍ POSTUP. (POZNÁMKA: 10 ml Horní vrstvy a 10 ml Spodní vrstvy zpracuje přibližně 5 vzorků sperma.) Kat. č. #99306 - KONCENTRÁT Koncentrát koloidního křemíku pro další ředění na gradienty hustoty; je formulován v izotonickém pufru a má přibližnou hustotu neředěného přípravku Percoll®. ISolate® CONCENTRATE byl hodnocen podle tohoto příbalového letáku při 50% a 90% gradientech. Každá laboratoř si může zvolit vytvoření gradientů různých koncentrací, jejichž efektivnost by měla být ohodnocena. A. Doporučený materiál: Koncentrát ISolate® • Irvine Scientific Katalog #99306 Modified Human Tubal Fluid • Irvine Scientific Katalog #90126 Sperm Washing Medium • Irvine Scientific Katalog #9983 Sterilní kónické odstředivkové trubičky • Irvine Scientific Katalog #IS-325 Sterilní pipety Pasteur Odstředivka Inkubátor, 37 °C B. Příprava gradientu: Jsou potřeba dva roztoky na provedení metody gradientní separace spermií: horní vrstvy a spodní vrstvy. 1. Roztok horní vrstvy – 50 %: a) Napipetujte 4,5 ml CONCENTRATE (kat. č. 99306) do sterilní odstředivkové trubičky. b) Přidejte 5,5 ml Modified Human Tubal Fluid (kat. č. 90126) c) Zazátkujte zkumavku a opatrně ji převraťte 3-4krát, aby došlo k celkovému promíchání. d) Označte trubičku „HORNÍ VRSTVA“ 2. Roztok spodní vrstvy – 90 %: a) Napipetujte 8,1 ml CONCENTRATE (kat. č. 99306) do sterilní odstředivkové trubičky. b) Přidejte 1,9 ml Modified Human Tubal Fluid (kat. č. 90126) c) Zazátkujte zkumavku a opatrně ji převraťte 3-4krát, aby došlo k celkovému promíchání. d) Označte trubičku „SPODNÍ VRSTVA“ 3. Pokračujte až po část příbalového letáku výrobku nazvanou ZÁKLADNÍ POSTUP. (POZNÁMKA: 10 ml Horní vrstvy a 10 ml Spodní vrstvy zpracuje přibližně 5 vzorků sperma.) Poznámka: Hodnoty 50 % a 90 % nepředstavují skutečné koncentrace. 5 0% a 90 % jsou relativní koncentrace založené na dřívější terminologii, která definovala poměr 1:9 ředění přípravku Percoll ® jako rovnající se 100% účinnému isotonickému roztoku. OBECNÁ METODA Následující je obecný postup na dvoukrokovou gradientní separaci motilní spermie od spermatu. Objem a koncentrace mohou být upraveny, aby splňovaly preference každé laboratoře (např. mini-gradient, kryoprezervované semeno, trojvrstevní gradient). 1. Vytemperujte všechny složky média na pokojovou teplotu nebo na 37 °C. 2. Pomocí sterilní pipety převeďte 1,5 – 2,0 ml „SPODNÍ VRSTVY“ do sterilní, kónické odstředivkové trubičky na jedno použití. 3. Pomocí nové sterilní pipety převeďte stejný objem „HORNÍ VRSTVY“ na horní část „SPODNÍ VRSTVY“. Provádí se to dotykem povrchu „SPODNÍ VRSTVY” na straně zkumavky hrotem pipety. Opatrně dávkujte „HORNÍ VRSTVU“ kroužením hrotu pipety kolem obvodu trubičky pohybem směrem nahoru zatímco se hladina „HORNÍ VRSTVY“ bude zvedat. 4. Opatrně umístěte 1,5 – 2,0 ml zkapalněného spermatu do „HORNÍ VRSTVY“ pomocí nové sterilní pipety. 5. Odstřeďte 10-20 minut při odstředivé síle kolem 200 300xg.* Opatrně odhalte granuli buď aspirací „HORNÍ“ a „SPODNÍ VRSTVY“ nebo vyjměte granuli přímo a přeneste ji do nové sterilní odstředivkové trubičky. *Poznámka: Kvalita vzorku spermií by měla být zhodnocena a brána v úvahu při určování správné rychlosti odstředivky a doby odstředění. Měly by být upraveny podle kvality individuálních vzorků pro optimalizaci procedury. 6. Pomocí nové sterilní pipety přidejte 2,0 – 3,0 ml mycího média jako např. Sperm Washing Medium (IS kat. č. 9983) nebo Modified HTF (IS kat. č. 90126) s proteinovým suplementem. Resuspendujte separovanou granuli. Odstřeďte (~200xg) po dobu 8 -10 minut a odeberte supernatant. Zopakujte tento krok pro druhé promytí. Odstraňte supernatant a resuspendujte granuli pomocí vhodného objemového množství náležitého média. Vzorek je nyní připraven pro analýzu. Pro dodatečné podrobnosti o použití těchto výrobků by každá laboratoř měla konzultovat vlastní laboratorní metody a protokoly, které byly vytvořeny a optimalizovány zvlášť pro váš konkrétní zdravotnický program. POKYNY PRO SKLADOVÁNÍ A STÁLOST Skladujte neotevřené nádoby v lednici při 2 º až 8 ºC. Ohřejte na okolní teplotu nebo na teplotu inkubátoru (37 °C) před použitím. Nezmrazujte a nevystavujte vysokým teplotám. Při doporučeném skladování je ISolate stabilní do expirační doby, která je vyznačena na štítcích kartónu a láhve. VAROVÁNÍ A BEZPEČNOSTNÍ OPATŘENÍ Zařízení bylo určeno pro použití školeným personálem při zákrocích, které zahrnují indikovanou aplikaci, pro kterou je zařízení určeno. ISolate se bude jevit neprůhledné. Je to pro tento výrobek normální. Nepoužívejte žádné ampulky média, které jeví známky přítomnosti částic hmoty nebo nečistot (nerovnoměrně zakalené). ISolate by mělo být těsně uzavřeno, pokud bude používáno v CO2 inkubátoru, aby se předešlo změnám pH . Tento výrobek neobsahuje žádné konzervační látky, antibiotika, ani protein nebo jiné suplementy. Vyhněte se problémům kontaminace, při práci dodržujte aseptické metody. V případě poškození nepoužívejte. Likvidujte nebo zašlete výrobci na výměnu. POZOR: Federální zákony USA omezují prodej tohoto zařízení pouze na lékaře nebo na jeho předpis. ISolate er en membranfiltreret, aseptisk behandlet kolloid suspension af silicapartikler stabiliseret med kovalent bundet hydrofilt silan i HEPES-bufret HTF. Sterilitetssikringsniveauet (SAL) er 10-3. ISolate er blevet testet med en kaninpyrogentest og fundet pyrogentfrit. BRUGSANVISNING Katalognr. 99264 – BRUGSKLART KOLLOID SILIKA I TO KONCENTRATIONER (50 % og 90 %) A. Anbefalede materialer: ISolate • Irvine Scientific katalognr. 99264 (sæt med 6 ml, 50ml- eller 100 ml-hætteglas) Sperm Washing Medium • Irvine Scientific katalognr. 9983 Sterile, koniske centrifugerør til engangsbrug • Irvine Scientific katalognr. IS-325 Pasteurpipetter, sterile Centrifuge Inkubator, 37 ºC B. Forberedelse af gradientopløsning: Forudgående fortynding er ikke nødvendig. Hvert hætteglas med øverste eller underste lag gradient er klar til brug. Forsæt med afsnittet GENEREL PROCEDURE på indlægssedlen. Katalognr. 99275 – STOCK SOLUTION Medium med 90 % densitetsgradient til brug i en ét-trinsprocedure eller til yderligere fortynding. A. Anbefalede materialer: ISolate Stock Solution • Irvine Scientific katalognr. 99275 Modified Human Tubal Fluid • Irvine Scientific katalognr. 90126 Sperm Washing Medium • Irvine Scientific katalognr. 9983 Sterile, koniske centrifugerør til engangsbrug • Irvine Scientific katalognr. IS-325 Pasteurpipetter, sterile Centrifuge Inkubator, 37 ºC B. Forberedelse af gradientopløsning: Der kræves to opløsninger til at udføre gradientseparation af sæd: Et øverste lag og et nederste lag. 1. Opløsning i øverste lag - 50 %. a) Tag STOCK SOLUTION (katalognr. 99275) og pipetter 5,6 ml ned i et sterilt centrifugerør b) Tilsæt 4,4 ml Modified Human Tubal Fluid (katalognr. 90126) c) Sæt låg på røret og vend det forsigtigt 3-4 gange for at blande helt d) Skriv “ØVERSTE LAG” på rørets etiket 2. Opløsning i nederste lag - 90 %. a) Tag 10 ml STOCK SOLUTION op i et sterilt centrifugerør og sæt låg på - (det er ikke nødvendigt at fortynde yderligere - STOCK SOLUTION er 90 %) b) Skriv “NEDERSTE LAG” på rørets etiket 3. Forsæt med afsnittet GENEREL PROCEDURE på indlægssedlen. (BEMÆRK: 10 ml af det øverste lag og 10 ml af det nederste lag kan behandle ca. 5 sædprøver). 6. Brug en ny, steril pipette og tilsæt 2,0-3,0 ml af et passende vaskemedium såsom Sperm Washing Medium (IS katalognr. 9983) eller Modified HTF (IS katalognr. 90126) med tilsat protein. Resuspender de isolerede sædceller (pellet). Centrifuger (~ 200 xg) i 8-10 minutter og fjern supernatanten. Gentag dette trin og vask en gang til. Bortskaf supernatanten og resuspender sædcellerne (pellet) vha. en egnet volumen af passende medium. Prøven er nu klar til analysering. For yderligere oplysninger om brug af disse produkter skal hvert laboratorium henvise til egne procedurer og protokoller, som er blevet specifikt udviklet og optimeret til laboratoriets eget, medicinske program. ANVISNINGER ANG OPBEVARING OG STABILITET Uåbnede beholdere opbevares nedkølet ved 2-8 ºC. Opvarm til stuetemeperatur eller inkubatortemperatur (37 °C) inden brug. Må ikke nedfryses eller udsættes for høje temperaturer. ISolate er stabilt indtil udløbsdatoen på æskens og flaskens etiket, når det opbevares som anvist. FORHOLDSREGLER OG ADVARSLER Dette udstyr er beregnet til brug af personale, der er uddannet i procedurer, der inkluderer den indicerede anvendelse, som dette udstyr er beregnet til. ISolate er uigennemsigtigt. Det er normalt for dette produkt. Anvend ikke hætteglas med medium, der indeholder partikler eller viser tegn på at være kontamineret (uensartede uklarheder). Låget på ISolate skal sidde tæt til, hvis det skal bruges i en CO2-inkubator, for at undgå ændringer i pH-værdien. Dette produkt indeholder ingen konserveringsmidler, antibiotika eller proteinsupplementer. Undgå problemer med kontamination ved at bruge aseptiske teknikker. Må ikke anvendes i tilfælde af beskadigelse. Bortskaf eller returner til producenten med henblik på udskiftning. FORSIGTIG: Ifølge amerikansk lov (USA) må dette produkt kun sælges af eller efter ordination af en læge. TUOTTEEN KUVAUS ISolate ® on tiheysgradienttiliuos, jota käytetään erottamaan motiilien siittiöiden osa siemennesteestä. Kaksikerroksisena gradienttijärjestelmänä se tehokkaasti vähentää solukontaminantteja, kuten kuolleita siittiöitä, valkoisia verisoluja ja vastaavia jätteitä. Tuloksena saatu näyte sisältää pääasiassa motiileja siittiöitä. ISolate – HEPES on kalvosuodatettu ja aseptisesti käsitelty kolloidisuspensio, jossa silikahiukkaset on stabiloitu kovalenttisidoksessa hydrofiilisen silaanin kanssa HEPESpuskuroidussa HTF:ssä. Steriilisyystaso (SAL) on 10-3. ISolate on testattu ja todettu pyrogeeneille negatiiviseksi kanin pyrogeenitestissä. KÄYTTÖOHJEET L u e t t e l o n r o 9 9 2 6 4 - K Ä Y T T ÖVA L M I S KOLLOIDINEN SILIKA KAHDESSA PITOISUUDESSA (50 % ja 90 %) A. Suositellut materiaalit: ISolates • Irvine Scientific luettelonro 99264 (6ml:n, 50ml tai 100 ml:n pullopakkaus) Sperm Washing Medium • Irvine Scientific luettelonro 9983 Steriilit kertakäyttöiset kartiomaiset sentrifugiputket • Irvine Scientific luettelonro IS-325 Pasteur -pipetit, steriilit Sentrifugi Inkubaattori, 37 °C B. Gradientin valmistus: Alustavia laimennuksia ei tarvita. Kukin ylemmän tai alemman kerroksen gradienttipullo on käyttövalmis. Siirry tuote-esitteen osaan YLEISET TOIMENPITEET. Luettelonro 99275 - STOCK SOLUTION 90 %:n tiheysgradienttinen ravintoliuos, jota käytetään yksivaiheisessa toimenpiteessä tai lisälaimennuksessa. A. Suositellut materiaalit: ISolate STOCK SOLUTION • Irvine Scientific luettelonro 99275 Modified Human Tubal Fluid • Irvine Scientific luettelonro 90126 Sperm Washing Medium • Irvine Scientific luettelonro 9983 Steriilit kertakäyttöiset kartiomaiset sentrifugiputket • Irvine Scientific luettelonro IS-325 Pasteur -pipetit, steriilit Sentrifugi Inkubaattori, 37 °C B. Gradientin valmistus: Siittiöiden gradienttierotteluun tarvitaan kaksi liuosta: ylempi kerros ja alempi kerros. 1. Ylemmän kerroksen liuos 50 %. a) Ota STOCK SOLUTIONia (luettelonro 99275) ja pipetoi 5,6 ml steriiliin sentrifugiputkeen. b) Lisää 4,4 ml Modified Human Tubal Fluidia (luettelonro 90126). c) Sulje putki ja käännä se varovasti ylösalaisin 3 - 4 kertaa, jotta se saa täysin sekoittua. d) Merkitse putkeen “YLEMPI KERROS” 2. Alemman kerroksen liuos – 90 %. a) Jaa tasan 10 ml STOCK SOLUTIONia steriiliin sentrifugiputkeen ja sulje se – (Lisälaimennuksia ei tarvita -STOCK SOLUTION on 90-prosenttista). b) Merkitse putkeen “ALEMPI KERROS” 3. Jatka tuote-esitteen osaan YLEISET TOIMEN PITEET. (HUOM: 10 ml ylempää ja 10 ml alempaa kerrosta riittää noin 5:n siemennestenäytteen käsittelyyn.) Katalognr. 99306 – CONCENTRATE Koncentrat af kolloid silika til yderligere fortynding i densitetsgradienter; formuleret i en isotonisk buffer og svarende til densiteten af ufortyndet Percoll®. ISolate® CONCENTRATE er blevet evalueret ifølge denne indlægsseddel ved 50 % og 90 % gradienter. Hvert laboratorium kan vælge at lave gradienter i forskellige koncentrationer, som bør evalueres med henblik på effektivitet. Luettelonro 99306 - CONCENTRATE Kolloidisilikatiiviste, jolla saadaan aikaan laimennus tiheysgradientteihin; formuloitu isotonisessa puskurissa ja vastaa suunnilleen laimentamattoman Percoll®in tiheyttä. ISolate® CONCENTRATE on arvioitu pakkauksen esitteen mukaisesti 50 %- ja 90 %-gradienttia vastaaviksi. Kukin laboratorio voi valmistaa gradientteja eri pitoisuuksilla, joiden tehokkuus tulee arvioida. A. Anbefalede materialer: ISolate® koncentrat • Irvine Scientific katalognr. 99306 Modified Human Tubal Fluid • Irvine Scientific katalognr. 90126 Sperm Washing Medium • Irvine Scientific katalognr. 9983 Sterile, koniske centrifugerør til engangsbrug • Irvine Scientific katalognr. IS-325 Pasteurpipetter, sterile Centrifuge Inkubator, 37 ºC A. Suositellut materiaalit: ISolate® -tiiviste • Irvine Scientific luettelonro 99306 Modified Human Tubal Fluid • Irvine Scientific luettelonro 90126 Sperm Washing Medium • Irvine Scientific luettelonro 9983 Steriilit kertakäyttöiset kartiomaiset sentrifugiputket • Irvine Scientific luettelonro IS-325 Pasteur -pipetit, steriilit Sentrifugi Inkubaattori, 37 °C B. Forberedelse af gradientopløsning: Der kræves to opløsninger til at udføre gradientseparation af sæd: Et øverste lag og et nederste lag. 1. Opløsning i øverste lag - 50 %. a) Tag CONCENTRATE (katalognr. 99306) og pipetter 4,5 ml ned i et sterilt centrifugerør b) Tilsæt 5,5 ml Modified Human Tubal Fluid (katalognr. 90126) c) Sæt låg på røret og vend det forsigtigt 3-4 gange for at blande helt d) Skriv “ØVERSTE LAG” på rørets etiket 2. Opløsning i nederste lag - 90 %. a) Tag CONCENTRATE (katalognr. 99306) og pipetter 8,1 ml ned i et sterilt centrifugerør b) Tilsæt 1,9 ml Modified Human Tubal Fluid (katalognr. 90126) c) Sæt låg på røret og vend det forsigtigt 3-4 gange for at blande helt d) Skriv “NEDERSTE LAG” på rørets etiket 3. Forsæt med afsnittet GENEREL PROCEDURE på indlægssedlen. (BEMÆRK: 10 ml af det øverste lag og 10 ml af det nederste lag kan behandle ca. 5 sædprøver). B. Gradientin valmistus: Siittiöiden gradienttierotteluun tarvitaan kaksi liuosta: ylempi kerros ja alempi kerros. 1. Ylemmän kerroksen liuos - 50 %. a) Ota CONCENTRATE:a (luettelonro 99306) ja pipetoi 4,5 ml steriiliin sentrifugiputkeen. b) Lisää 5,5 ml Modified Human Tubal Fluidia (luettelonro 90126). c) Sulje putki ja käännä se varovasti ylösalaisin 3 - 4 kertaa, jotta se saa täysin sekoittua. d) Merkitse putkeen “YLEMPI KERROS” 2. Alemman kerroksen liuos – 90 %. a) Ota CONCENTRATE:a (luettelonro 99306) ja pipetoi 8,1 ml steriiliin sentrifugiputkeen b) Lisää 1,9 ml Modified Human Tubal Fluidia (luettelonro 90126). c) Sulje putki ja käännä se varovasti ylösalaisin 3 - 4 kertaa, jotta se saa täysin sekoittua. d) Merkitse putkeen “ALEMPI KERROS” 3. Jatka tuote-esitteen osaan YLEISET TOIMEN PITEET. (HUOM: 10 ml ylempää ja 10 ml alempaa kerrosta riittää noin 5:n siemennestenäytteen käsittelyyn.) Bemærk: Betegnelserne 50 % og 90 % angiver ikke en faktisk koncentration. 50 % og 90 % er relative koncentrationer baseret på det tidligere nomenklatur, der definerede en 1:9 fortynding af Percoll® som svarende til en 100 % isotonisk arbejdsopløsning. GENEREL PROCEDURE Følgende er en generel procedure for en gradientseparation af motile sædceller fra sædvæsken. Volumenen og koncentrationen kan modificeres i henhold til hvert enkelt laboratories præferencer (dvs. minigradient, cryopreserveret sæd, gradient i tre lag). 1. Bring alle mediekomponenter til stuetemperatur eller 37 °C. 2. Brug en steril pipette og overfør 1,5-2,0 ml af det “NEDERSTE LAG” til et sterilt, konisk centrifugerør til engangsbrug. 3. Brug en ny, steril pipette og overfør en tilsvarende volumen af “ØVERSTE LAG” oven på “NEDERSTE LAG”. Det gøres ved at berøre overfladen af det “UNDERSTE LAG” i siden af røret med pipettespidsen. Dispenser forsigtigt det “ØVERSTE LAG” ved at føre pipettespidsen i en opadgående spiralbevægelse mod rørets inderside efterhånden, som niveauet af det “ØVERSTE LAG” stiger. 4. Placer forsigtigt 1,5-2,0 ml flydende sæd oven på “ØVERSTE LAG” med en ny, steril pipette. 5. Centrifuger i 10-20 minutter ved ca. 200-300 x g.* Eksponer forsigtigt sædcellerne (pellet) ved enten at aspirere det “ØVERSTE” og “UNDERSTE” lag væk, eller direkte ved at fjerne sædcellerne og overføre dem til et nyt, sterilt centrifugerør. Bemærk: Kvaliteten af sædprøven skal evalueres og tages i betragtning, når den korrekte centrifugeringshastighed og -tid skal fastslås. Disse skal justeres i henhold til den enkelte sædprøves kvalitet med henblik på optimering af proceduren. LATVISKI SUOMI DANSK PRODUKTBESKRIVELSE ISolate® er et densitetsgradientmedium, der er fremstillet til at separere de motile sædceller fra sædvæsken. Som et gradientsystem i to lag reducerer det effektivt cellulære kontaminanter såsom død sæd, leukocytter og diverse restmaterialer. Den færdige prøve indeholder hovedsageligt motile sædceller. Huom: Termit 50 % ja 90 % eivät edusta todellista pitoisuutta. 50- ja 90-prosenttiset pitoisuudet ovat suhteellisia ja perustuvat aiempaan luokitukseen, jossa 1:9 laimennus Percoll®illa on määritelty 100 %:sti toimivaa isotonista liuosta vastaavaksi. YLEISET TOIMENPITEET Seuraavassa annetaan yleiset ohjeet kaksivaiheiseen siittiöiden siemennesteestä erottamiseen gradientin avulla. Tilavuutta ja pitoisuutta voidaan muunnella kunkin laboratorion toivomusten mukaan (so. minigradientti, kylmäsäilötty siemenneste, kolmikerroksinen gradientti). 1. Anna kaikkien ravintoliuosainesosien saavuttaa huoneenlämpötila tai 37 °C. 2. Steriiliä pipettiä käyttäen siirrä1,5 – 2,0 ml “ALEMPAA KERROSTA” steriiliin kertakäyttöiseen kartiomaiseen sentrifugiputkeen. 3. Siirrä steriilillä pipetillä sama tilavuus ”YLEMPÄÄ KERROSTA” ”ALEMMAN KERROKSEN” päälle. Tämä tapahtuu koskettamalla pipetin kärjellä ”ALEMMAN KERROKSEN” pintaa putken reunalla. Tyhjennä “YLEMPI KERROS” varovasti kiertäen pipetin kärkeä ympäri putkea yläsuuntaan samalla kun “YLEMMÄN KERROKSEN” taso nousee. 4. Aseta varovasti 1,5 – 2,0 ml nestemäistä siemennestettä “YLEMMÄLLE KERROKSELLE” uudella steriilillä pipetillä. 5. Linkoa 10 - 20 minuuttia asetuksella 200 – 300 x g.* Paljasta pelletti varovasti joko aspiroimalla se “YLEMMÄSTÄ” ja “ALEMMASTA KERROKSESTA” tai poistamalla pelletti suoraan ja siirtämällä se uuteen steriiliin sentrifugiputkeen. *Huom: Siittiönäytteen laatu tulee arvioida ja ottaa huomioon niiden linkoamisen tarkoituksenmukaista nopeutta ja kestoa määritettäessä. Näitä tulee säädellä yksittäisen näytteen laadun mukaisesti toimenpiteen optimoimiseksi. 6. Käyttäen uutta steriiliä pipettiä lisää 2,0 – 3,0 ml sopivaa pesuainetta, kuten Sperm Washing Medium (IS luettelonro 9983) tai Modified HTF (IS luettelonro 90126) proteiinilisineen. Upota eristetty pelletti uudelleen. Linkoa se (~ 200 x g) 8 -10 minuuttia ja poista pintaneste. Toista tämä vaihe uutta pesua varten. Hävitä pintaneste ja suspendoi pelletti uudelleen käyttäen asianmukaista ravintoliuosta sopivassa tilavuudessa. Näyte on nyt valmis analysoitavaksi. PRODUKTA APRAKSTS ISolate® blīvuma gradienta barotnes ir materiāls, kas paredzēts spermatozoīdu motilo frakciju atdalīšanai no sēklas šķidruma. Kā divslāņu gradientu sistēma tā efektīvi mazina šūnu izraisītas kontaminācijas iespējas, piemēram, kontamināciju ar nedzīviem spermatozoīdiem, baltajiem asinsķermenīšiem un dažādām pārpalikumšūnām. Rezultātā iegūtais paraugs galvenokārt satur kustīgus spermatozoīdus. Lisätietoja näiden tuotteiden käytöstä kunkin laboratorion tulee hakea omista menettelyohjeistaan ja protokollista, jotka on erityisesti kehitetty ja optimoitu paikallista lääkinnällistä ohjelmaa varten. ISolate ir caur membrānu filtrēta un aseptiski apstrādāta koloidāla silīcija dioksīda daļiņu suspensija, kas stabilizēta ar kovalenti piesaistītu hidrofīlu silānu HEPES buferētā HTF. Sterilitātes nodrošināšanas līmenis (SAL) ir 10-3. ISolate ir testēts, un ir konstatēts, ka tas ir negatīvs attiecībā uz pirogēnām baktērijām pirogēno baktēriju testā trušiem. SÄILYTYSOHJEET JA STABILITEETTI Avaamattomat säiliöt säilytettävä kylmässä, 2 – 8 ºC. Lämmitä ympäristölämpöön tai inkubaattorin lämpötilaan (37 °C) ennen käyttöä. Ei saa jäädyttää tai altistaa korkeille lämpötiloille. ISolate on stabiili pakkaukseen ja pullojen etiketteihin merkittyyn eräpäivään saakka ohjeiden mukaisesti säilytettynä. VAROITUKSIA JA VAROTOIMENPITEITÄ Tämä laite on tarkoitettu sellaisten henkilöiden käytettäväksi, jotka on koulutettu suorittamaan toimenpiteitä, joihin kuuluu laitteen käyttötarkoituksen mukainen asianmukainen käyttö. ISolate näyttää läpinäkymättömältä. Tämä on tuotteelle normaalia. Älä käytä ravintoliuospulloa, jossa näkyy hiukkasia tai saastumista (epätasaista sameutta). ISolaten korkin tulee olla tiiviisti kiinni, kun sitä käytetään hiilidioksidi-inkubaattorissa pH-muutosten välttämiseksi. Tässä tuotteessa ei ole säilöntäaineita, antibiootteja eikä proteiinilisäaineita. Kontaminaatio-ongelmat vältetään aseptisella käsittelytekniikalla. Jos pakkaus on vahingoittunut, älä käytä sitä. Hävitä tuote tai palauta se valmistajalle vaihdettavaksi. VAROITUS: Yhdysvaltain liittovaltion laki rajoittaa tämän välineen myynnin vain lääkärin toimesta tai määräyksestä tapahtuvaksi. LIETOŠANAS NORĀDĪJUMI Kataloga Nr. 99264 – LIETOŠANAI GATAVS KOLOIDĀLS SILĪCIJA DIOKSĪDS DIVĀS KONCENTRĀCIJĀS (50% un 90%) A. Ieteicamie materiāli: ISolate • Irvine Scientific kataloga Nr. 99264 (6ml, 50ml vai 100 ml flakonu komplekts) Sperm Washing Medium • Irvine Scientific kataloga Nr. 9983 Sterili, koniski vienreizējās lietošanas centrifūgas stobriņi • Irvine Scientific kataloga Nr. IS-325 Pastēra pipetes, sterilas Centrifūga Inkubators, 37°C B. Gradienta sagatavošana: Nav nepieciešama iepriekšēja atšķaidīšana. Katrs flakons ar augšējā un apakšējā slāņa gradientu ir gatavs lietošanai. Pārejiet pie izstrādājuma ieliktnī aprakstītās VISPĀRĒJĀS PROCEDŪRAS. Kataloga Nr. - 99275 - STOCK SOLUTION 90% specifiska barotne izmantošanai tūlītējā procedūrā vai atšķaidīšanai turpmāk. A. Ieteicamie materiāli: ISolate STOCK SOLUTION •Irvine Scientific kataloga Nr. 99275 Modified Human Tubal Fluid •Irvine Scientific kataloga Nr. 90126 Sperm Washing Medium •Irvine Scientific kataloga Nr. 9983 Sterili, koniski vienreizējās lietošanas centrifūgas stobriņi •Irvine Scientific kataloga Nr. IS-325 Pastēra pipetes, sterilas Centrifūga Inkubators, 37°C B. Gradienta sagatavošana: Lai lietotu spermatozoīda atdalīšanas metodi gradientā, nepieciešami divi šķīdumi: augšējais slānis un apakšējais slānis. 1. Augšējā slāņa šķīdums – 50%: a) Ievietojiet CONCENTRATE (kataloga Nr. 99275) un pipeti 5,6 ml sterilā centrifūgas stobriņā. b) Pievienojiet 4,4 ml Modified Human Tubal Fluid (kataloga Nr. 90126) c) Uzlieciet stobriņam aizbāzni un uzmanīgi apvērsiet 3-4 reizes, lai saturam ļautu pilnībā sajaukties. d) Piestipriniet stobriņam uzlīmi „AUGŠĒJAIS SLĀNIS” 2. Apakšējā slāņa šķīdums – 90%: a) Iedaliet 10 ml STOCK SOLUTION sterilā centrifūgas stobriņā un uzlieciet aizbāzni (Turpmāka atšķaidīšana nav nepieciešama – STOCK SOLUTION ir 90%). b) Piestipriniet stobriņam uzlīmi „APAKŠĒJAIS SLĀNIS” 3. Pārejiet pie produkta ieliktnī aprakstītās VISPĀRĒJĀS PROCEDŪRAS. (PIEZĪME: ar 10 ml augšējā slāņa un 10 ml apakšējā slāņa šķīdumu iespējams apstrādāt apmēram 5 spermas paraugus.) Kataloga Nr. 99306 - CONCENTRATE Koloidāls silīcija dioksīda koncentrāts turpmākai atšķaidīšanai blīvuma gradientos, tā sastāvā ir izotonisks buferis un tam piemīt aptuvenais neatšķaidīta Percoll® blīvums. Saskaņā ar šo iepakojuma ieliktni ISolate® CONCENTRATE ir ticis novērtēts 50% un 90% gradientā. Katra laboratorija var izvēlēties veidot atšķirīgu koncentrāciju gradientus, kuri jāizvērtē attiecībā uz efektivitāti. A. Ieteicamie materiāli: ISolate® koncentrāts •Irvine Scientific kataloga Nr. 99306 Modified Human Tubal Fluid •Irvine Scientific kataloga Nr. 90126 Sperm Washing Medium •Irvine Scientific kataloga Nr. 9983 Sterili, koniski vienreizējās lietošanas centrifūgas stobriņi •Irvine Scientific kataloga Nr. IS-325 Pastēra pipetes, sterilas Centrifūga Inkubators, 37°C B. Gradienta sagatavošana: Lai lietotu spermatozoīda atdalīšanas metodi gradientā, nepieciešami divi šķīdumi: augšējais slānis un apakšējais slānis. 1. Augšējā slāņa šķīdums – 50%: a) Ievietojiet CONCENTRATE (kataloga Nr. 99306) un pipeti 4.5 ml sterilā centrifūgas stobriņā. b) Pievienojiet 5,5 ml Modified Human Tubal Fluid (kataloga Nr. 90126) c) Uzlieciet stobriņam aizbāzni un uzmanīgi apvērsiet 3-4 reizes, lai saturam ļautu pilnībā sajaukties. d) Piestipriniet stobriņam uzlīmi „AUGŠĒJAIS SLĀNIS” 2. Apakšējā slāņa šķīdums – 90%: a) Ievietojiet CONCENTRATE (kataloga Nr. 99306) un pipeti 8,1 ml sterilā centrifūgas stobriņā. b) Pievienojiet 1,9 ml Modified Human Tubal Fluid (kataloga Nr. 90126) c) Uzlieciet stobriņam aizbāzni un uzmanīgi apvērsiet 3-4 reizes, lai saturam ļautu pilnībā sajaukties. d) Piestipriniet stobriņam uzlīmi „APAKŠĒJAIS SLĀNIS” 3. Pārejiet pie produkta ieliktnī aprakstītās ISPĀRĒJĀS PROCEDŪRAS. (PIEZĪME: ar 10 ml augšējā slāņa un 10 ml apakšējā slāņa šķīdumu iespējams apstrādāt apmēram 5 spermas paraugus.) Piezīme: Apzīmējumi 50% un 90% nenorāda faktisko koncentrāciju. 50% un 90% ir relatīvas koncentrācijas, kas pamatojas uz iepriekšējo nomenklatūru, kas definēja Percoll® atšķaidīšanu1:9 kā līdzvērtīgu 100% iedarbīgam, izotoniskam šķīdumam. VISPĀRĒJĀ PROCEDŪRA Turpmāk minētā ir vispārpieņemta procedūra izolēšanai gradientā divos posmos, atdalot kustīgu spermatozoīdu no spermas. Daudzumu un koncentrāciju iespējams mainīt, lai tos varētu izmantot atbilstoši laboratorijas galvenajiem mērķiem (t. i., kā mini-gradientu, ar kriokonservēto spermu, kā trīsslāņu gradientu). 1. Nodrošiniet, ka visu barotnes sastāvdaļu temperatūra ir sasniegusi istabas temperatūras līmeni vai 37°C. 2. Izmantojot sterilu pipeti, pārnesiet 1,5-2,0 ml “APAKŠĒJĀ SLĀŅA” uz sterilu, vienreizējās lietošanas, konisku centrifūgas stobriņu. 3. Izmantojot jaunu sterilu pipeti, pārnesiet to pašu daudzumu „AUGŠĒJĀ SLĀŅA” uz „APAKŠĒJĀ SLĀŅA” augšdaļu. To veic, ar pipetes galu pieskaroties „APAKŠĒJAM SLĀNIM” no stobriņa puses. Uzmanīgi izpiliniet „AUGŠĒJO SLĀNI”, spirālveidīgi virpinot pipetes galu pa stobriņa perimetru augšupejošas kustības veidā, „AUGŠĒJĀ SLĀŅA” līmenim paaugstinoties. 4. Ar jaunas sterilas pipetes palīdzību uzmanīgi ievietojiet 1,5-2,0 ml sašķidrinātas spermas „AUGŠĒJĀ SLĀNĪ”. 5. Centrifugējiet 10-20 minūtes ar apmēram 200-300 g paātrinājumu.* Uzmanīgi atdaliet lodīti, atvelkot nost „AUGŠĒJO” un ”APAKŠĒJO SLĀNI” vai tieši izņemot lodīti un pārnesot to uz citu sterilu centrifūgas stobriņu. *Piezīme: Spermatozoīda parauga kvalitāte jāizvērtē un jāņem vērā, nosakot atbilstošo centrifugēšanas ātrumu un ilgumu. Lai procedūru optimizētu, šos parametrus vajadzētu pielāgot atbilstoši atsevišķā parauga kvalitātei. 6. Izmantojot jaunu sterilu pipeti, pievienojiet 2,0-3,0 ml piemērota skalošanas materiāla, piemēram, Sperm Washing Medium (IS kataloga Nr. 9983) vai Modified HTF (IS kataloga Nr. 90126) ar proteīna papildinājumu. Suspendējiet atkārtoti izolēto lodīti. Centrifugējiet (ar ~200 g paātrinājumu) 8-10 minūtes un atdaliet supernatantu. Atkārtojiet šo soli, lai veiktu otru skalošanu. Novāciet supernatantu un no jauna suspendējiet lodīti, izmantojot atbilstošu piemērotas barotnes daudzumu. Tagad paraugs ir sagatavots analīzes veikšanai. Lai uzzinātu papildu informāciju par šo produktu lietošanu, katrai laboratorijai jāiepazīstas ar tajā noteiktajām procedūrām un protokoliem, kas īpaši izstrādāti un optimizēti individuālas medicīniskas programmas veikšanai. UZGLABĀŠANAS NORĀDĪJUMI UN STABILITĀTE Neatvērtus konteinerus uzglabāt atdzesētus no 2º līdz 8º C temperatūrā. Pirms lietošanas sasildiet līdz apkārtējās vides vai inkubatora (37°C) temperatūrai. Nesaldēt un nepakļaut augstu temperatūru iedarbībai. Uzglabājot, kā norādīts, ISolate saglabā stabilitāti līdz derīguma termiņam, kas norādīts uz kastes un uz pudeļu marķējuma. PIESARDZĪBAS PASĀKUMI UN BRĪDINĀJUMI Šo ierīci ir paredzēts izmantot personālam, kas ir apmācīts tādu procedūru veikšanai, kuras ietver norādīto izmantošanu, kurai šī ierīce ir paredzēta. ISolate izskatīsies necaurspīdīgs. Šim produktam tas ir normāli. Nelietot nevienu flakonu ar barotni, kurā saskatāmas vielas daļiņas vai piesārņojums (neviendabīgs duļķainums). ISolate cieši jānoslēdz ar aizbāzni, lietojot CO2 inkubatorā, lai nepieļautu pH līmeņa izmaiņas. Šis produkts nesatur konservantus, antibiotikas vai proteīna piedevas. Lai izvairītos no kontaminācijas problēmām, rīkojoties izmantojiet aseptiskas tehnikas. Ja bojāts, nelietot. Lūdzu, likvidējiet vai nosūtiet atpakaļ ražotājam atvietošanai. BRĪDINĀJUMS: Federālie (ASV) likumi pieļauj šīs ierīces tirdzniecību vienīgi ārstiem vai ar viņu norīkojumu. O ISolate é uma suspensão coloidal de partículas de sílica estabilizada com silano hidrofílico unido covalentemente em HTF tamponado com HEPES, que foi filtrado através de membrana e processado em condições estéreis. O nivel de garantia de esterilidade (SAL) é de 10-3. O ISolate foi testado para pirogénios com resultados negativos pelo teste de pirogénios no coelho. INSTRUÇÕES DE UTILIZAÇÃO Nº de Catálogo 99264 – SÍLICA COLOIDAL P R O N TA PA R A U T I L I Z A R A D U A S CONCENTRAÇÕES (50% E 90%) A. Material sugerido: ISolate • Irvine Scientific, Nº catálogo 99264 (kit de recipientes de6mL, 50mL ou kit de recipientes de 100mL) Meio de lavagem dos espermatozóides • Irvine Scientific, Nº catálogo 9983 Tubos de centrífuga cónicos estéreis e descartáveis • Irvine Scientific, Nº catálogo IS-325 Pipetas Pasteur, estéreis Centrífuga Incubadora a 37ºC B. Preparação do gradiente: Não são necessárias diluições preliminares. Cada recipiente de camada de gradiente superior e inferior está pronta para utilizar. Continue com a secção “PROCEDIMENTOS GERAIS” Nº de Catálogo 99275 – SOLUÇÃO STOCK Meio de gradiente de densidade a 90% para ser utilizado em protocolos de uma só etapa ou para posteriores diluições. A. Material sugerido: ISolate - Solução Stock • Irvine Scientific, Nº Cat. 99275 Meio HTF modificado • Irvine Scientific, Nº Cat. 90126 Meio de lavagem dos espermatozóides • Irvine Scientific, Nº Cat. 9983 Tubos de centrífuga cónicos estéreis e descartáveis • Irvine Scientific, Nº Cat. IS-325 Pipetas Pasteur, estéreis Centrífuga Incubadora a 37ºC B. Preparação do gradiente: Para levar a cabo uma separação de espermatozóides por gradiente necessitam-se de duas soluções: a camada superior e a camada inferior. 1. Solução da camada superior: 50% a. Pipetar da SOLUÇÃO STOCK (Nº Cat. 99275) 5,6mL para um tubo de centrífuga estéril. b. Adicionar 4,4 mL de HTF modificado (Nº Cat. 90126) c. Tapar o tubo e inverter suavemente 3 ou 4 vezes para permitir uma mistura completa. d. Etiquetar o tubo como “CAMADA SUPERIOR”. 2. Solução da camada inferior: 90% a. Inserir uma alíquota de 10mL da SOLUÇÃO STOCK num tubo estéril de centrífuga e tapá-lo. (Não são necessárias mais diluições. A solução stock está a 90%). b. Etiquetar o tubo como “CAMADA INFERIOR”. 3. Continuar na secção de “PROCEDIMENTOS GERAIS”. (Nota: 10 ml da “CAMADA SUPERIOR” e 10 ml da “CAMADA INFERIOR” processam aproximadamente 5 amostras de sémen) Nº de Catálogo 99306 – CONCENTRADO Concentrado de sílica coloidal para posteriores diluições em gradientes de densidade; formulado num tampão isotónico, aproxima-se da densidade do Percoll não diluído. O ISolate Concentrado foi avaliado em gradientes de 50% e 90% de acordo com este folheto informativo de produto. Cada laboratório pode escolher preparar os gradientes a concentrações diferentes, os quais devem ser previamente avaliados para a sua eficácia. A. Material sugerido: ISolate - Concentrado • Irvine Scientific, Nº Cat. 99306 Meio HTF modificado • Irvine Scientific, Nº Cat. 90126 Meio de lavagem dos espermatozóides • Irvine Scientific, Nº Cat. 9983 Tubos de centrífuga cónicos estéreis e descartáveis • Irvine Scientific, Nº Cat. IS-325 Pipetas Pasteur, estéreis Centrífuga Incubadora a 37ºC B. Preparação do gradiente: Para levar a cabo uma separação de espermatozóides por gradiente necessitam-se de duas soluções: a camada superior e a camada inferior. 1. Solução da camada superior: 50% a. Pipetar 4,5 mL do CONCENTRADO (Nº Cat. 99306) para um tubo de centrífuga estéril. b. Adicionar 5,5 mL de HTF modificado (Nº Cat. 90126) c. Tapar o tubo e inverter suavemente 3 ou 4 vezes para permitir uma mistura completa. d. Etiquetar o tubo como “CAMADA SUPERIOR”. 2. Solução da camada inferior: 90% a. Pipetar 8,1 mL do CONCENTRADO (Nº Cat. 99306) para um tubo de centrífuga estéril. b. Adicionar 1,9 mL de HTF modificado (Nº Cat. 90126) c. Tapar o tubo e inverter suavemente 3 ou 4 vezes para permitir uma mistura completa. d. Etiquetar o tubo como “CAMADA INFERIOR”. 3. Continue na secção de “PROCEDIMENTOS GERAIS”. Nota: Os valores 50% e 90% não representam uma conc tração real. Os valores 50% e 90% são concentrações relativas baseadas numa nomenclatura anterior que definia uma solução 1:9 de Percoll® como uma solução de trabalho isotónica a 100%. PROCEDIMENTOS GERAIS O protocolo que aqui se descreve é um procedimento geral para separar do sémen a fracção móvel dos espermatozoides através de um gradiente. O volume e a concentração podem-se modificar para ajustar-se às preferências de cada laboratório (p.ex. mini-gradiente, sémen crioconservado, gradiente de 3 camadas). 1. Coloque todos os meios à temperatura ambiente ou a 37ºC. 2. Utilizando uma pipeta estéril, transferir 1,5 – 2,0 mL de meio da “CAMADA INFERIOR” para um tubo de centrífuga cónico, estéril e descartável. 3. Utilizando outra pipeta estéril, transferir um volume igual ao do passo 1 de “CAMADA SUPERIOR” para a “CAMADA INFERIOR”. Para isso, colocar a ponta da pipeta na parte superior da “CAMADA INFERIOR” tocando na parede do tubo. Distribuir cuidadosamente a “CAMADA SUPERIOR” movendo a pipeta em círculos em redor da circunferência do tubo subindo à medida que aumenta o nível da “CAMADA SUPERIOR”. 4. Coloque suavemente 1,5 – 2,0 mL de sémen liquefeito sobre a “CAMADA SUPERIOR” com outra pipeta estéril. ČESKY ΕΛΛΗΝΙΚΆ PORTUGUÊS Descrição do Produto O ISolate ® é um meio de gradiente de densidades concebido para separar a fracção móvel do espermatozóide do fluído seminal. Como um sistema de gradiente de duas camadas, reduz eficazmente os contaminantes celulares como espermatozóides mortos, leucócitos e outros restos. 5. Centrifugar durante 10-20 minutos a 200-300 x g*. Cuidadosamente, exponha o sedimento quer através da aspiração das “CAMADAS SUPERIORES E INFERIORES”, ou directamente removendo o sedimento e transferindo-o para um novo tubo de centrífuga estéril. * Nota: a qualidade da amostra de espermatozóides deve ser avaliada e tomada em consideração para determinar o tempo e a velocidade de centrifugação adequadas. Estes parâmetros devem ajustar-se conforme a qualidade individual da amostra para optimizar o processo. 6. Utilizando uma nova pipeta estéril, adicionar 2.0 – 3.0 mL de meio de lavagem adequado como o Meio de Lavagem de Espermatozóides (IS Nº Cat 9983) ou HTF modificado (IS Nº Cat 90126) com suplemento proteico. Ressuspender o sedimento. Centrifugar (aprox. 200xg) 8-10 minutos e descartar o sobrenadante. Repetir este passo para numa segunda lavagem. Descartar o sobrenadante e ressuspender o sedimento utilizando um volume adequado de meio. A amostra está pronta para análise. Para detalhes adicionais sobre a utilização destes produtos, o laboratório deve consultar os seus próprios procedimentos padrão e protocolos que foram especificamente desenvolvidos e optimizados para a sua instituição. I N S T R U Ç Õ E S D E C O N S E R VA Ç Ã O E ESTABILIDADE Conserve os recipientes fechados refrigerados entre 2ºC e 8ºC. Aqueça à temperatura ambiente ou numa incubadora (37ºC) antes de utilizar. Não congele ou exponha a temperaturas altas. O ISolate é estável até à data de expiração indicada no rótulo do recipiente, sempre que seja conservado de acordo com as instruções recomendadas. PRECAUÇÕES E ADVERTÊNCIAS Este dispositivo deve ser utilizado por funcionários treinados em procedimentos aos quais se destina. O ISolate tem um aspecto opaco. Isto é normal para este produto. Não utilize nenhum recipiente de meio com evidências de conter partículas ou contaminação (turvação não homogénea). Os recipientes de ISolate devem estar hermeticamente fechados quando se utilizar uma incubadora de CO2 para evitar alterações de pH. Este meio não contém conservantes, antibióticos nem suplementos proteicos. Para evitar contaminações, manipule o produto em condições de esterilidade. E m caso de alteração do meio, não o utilize. Por favor, descarte-o o devolva-o ao fabricante para que seja substituído. CUIDADO: As leis federais dos EUA, restringem a venda deste dispositivo, apenas a médicos ou por sua prescrição. ΠΕΡΙΓΡΑΦΗ ΠΡΟΪΟΝΤΟΣ Το ISolate® είναι ένα μέσο κλίσης πυκνότητας σχεδιασμένο για διαχωρισμό του κινητικού κλάσματος του σπέρματος από το σπερματικό υγρό. Ως σύστημα κλίσης δύο στρωμάτων, μειώνει δραστικά τις κυτταρικές μολυσματικές ουσίες, όπως το νεκρό σπέρμα, τα λευκά αιμοσφαίρια και διάφορα υπολείμματα.Το δείγμα που προκύπτει περιέχει κυρίως κινητικό σπέρμα. Το ISolate είναι ένα φιλτραρισμένο με μεμβράνη, ασηπτικά επεξεργασμένο κολλοειδές αιώρημα από μόρια πυρίτιας σταθεροποιημένα με υδρόφιλο σιλάνιο με ισοσθενή δεσμό σε HEPES-ρυθμιστικό HTF. Το επίπεδο διασφάλισης αποστείρωσης (SAL) είναι 10-3. Το ISolate έχει ελεγχθεί και αποδειχθεί αρνητικό για πυρετογόνα από την εξέταση πυρετογόνων σε λαγούς. ΟΔΗΓΙΕΣ ΧΡΗΣΗΣ Αρ. Καταλόγου 99264 – ΕΤΟΙΜΗ ΓΙΑ ΧΡΗΣΗ ΚΟΛΛΟΕΙΔΗΣ ΠΥΡΙΤΙΑ ΣΕ ΔΥΟ ΣΥΓΚΕΝΤΡΩΣΕΙΣ (50% και 90%) A. Προτεινόμενα Υλικά: ISolate • Irvine Scientific Κατάλογος #99264 (6ml, 50ml ή 100 ml κιτ φιαλιδίων) Sperm Washing Medium • Irvine Scientific Κατάλογος #9983 Αποστειρωμένοι, κωνικοί σωλήνες φυγόκεντρου μιας χρήσης • Irvine Scientific Κατάλογος #IS-325 Πιπέτες Παστέρ, αποστειρωμένες Φυγόκεντρος Επωαστήρας, 37°C B. Προετοιμασία Κλίσης: Δεν χρειάζονται προκαταρκτικά διαλύματα. Κάθε φιαλίδιο κλίσης άνω και κάτω στρώματος είναι έτοιμο για χρήση. Προχωρήστε στο μέρος της ΓΕΝΙΚΗΣ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑΣ του φυλλαδίου του προϊόντος. Αρ. Καταλόγου 99275 - STOCK SOLUTION 90% πυκνότητας μέσο κλίσης για χρήση σε διαδικασία ενός βήματος ή για περαιτέρω διάλυση. A. Προτεινόμενα Υλικά: ISolate Stock Solution • Irvine Scientific Κατάλογος #99275 Modified Human Tubal Fluid • Irvine Scientific Κατάλογος #90126 Sperm Washing Medium • Irvine Scientific Κατάλογος #9983 Αποστειρωμένοι, κωνικοί σωλήνες φυγόκεντρου μιας χρήσης • Irvine Scientific Κατάλογος #IS-325 Πιπέτες Παστέρ, αποστειρωμένες Φυγόκεντρος Επωαστήρας, 37°C B. Προετοιμασία Κλίσης: Χρειάζονται δύο διαλύματα για την μέθοδο διαχωρισμού σπέρματος κλίσης: Ένα άνω και ένα κάτω στρώμα. Πάνω και κάτω στρώμα. 1.) Διάλυμα Άνω Στρώματος - 50%: α) Πάρτε STOCK SOLUTION (αρ. Καταλόγου 99275) και πιπεταρίστε 5.6 ml σε αποστειρωμένο σωλήνα φυγόκεντρου β) Προσθέστε 4.4 ml από Modified Human Tubal Fluid (αρ. Καταλόγου 90126) γ) Κλείστε τον σωλήνα και αναποδογυρίστε το απαλά 3-4 φορές για να επιτραπεί η πλήρης ανάδευση δ) Αναγράψτε στην ετικέτα του σωλήνα «ΑΝΩ ΣΤΡΩΜΑ» 2. Διάλυμα Κάτω Στρώματος - 90%: α) Υποπολλαπλασιάστε 10 ml του STOCK SOLUTION σε αποστειρωμένο σωλήνα φυγόκεντρου και σφραγίστε το – (Δεν χρειάζονται άλλες διαλύσεις - STOCK SOLUTION είναι 90%) β) Βάλτε ετικέτα στον σωλήνα ως «ΚΑΤΩ ΣΤΡΩΜΑ» 3. Συνεχίστε στο τμήμα ΓΕΝΙΚΗ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑ του φυλλαδίου του προϊόντος. (ΣΗΜΕΙΩΣΗ: 10 ml Άνω Στρώματος και 10 ml Κάτω Στρώματος, επεξεργάζονται κατά προσέγγιση 5 δείγματα σπέρματος.) Αρ. Καταλόγου 99306 - CONCENTRATE Συμπύκνωμα κολλοειδούς πυρίτιας για περαιτέρω διάλυση σε κλίσεις πυκνότητας. Σχηματίζεται σε ισοτονικό ρυθμιστικό διάλυμα και προσεγγίζει την πυκνότητα μη αραιωμένου Percoll®. Το ISolate® CONCENTRATE αξιολογήθηκε σύμφωνα με αυτό το φυλλάδιο συσκευασίας σε κλίσεις 50% και 90% . Κάθε εργαστήριο μπορεί να επιλέξει να δημιουργήσει κλίσεις με διαφορετικές συγκεντρώσεις που θα πρέπει να αξιολογηθούν για αποτελεσματικότητα. A. Προτεινόμενα Υλικά: ISolate® Συμπύκνωμα • Irvine Scientific Κατάλογος #99306 Modified Human Tubal Fluid • Irvine Scientific Κατάλογος #90126 Sperm Washing Medium • Irvine Scientific Κατάλογος #9983 Αποστειρωμένοι, κωνικοί σωλήνες φυγόκεντρου μιας χρήσης • Irvine Scientific Κατάλογος #IS-325 Πιπέτες Παστέρ, αποστειρωμένες Φυγόκεντρος Επωαστήρας, 37°C B. Προετοιμασία Κλίσης: Χρειάζονται δύο διαλύματα για την μέθοδο διαχωρισμού σπέρματος κλίσης: Ένα άνω και ένα κάτω στρώμα. 1. Διάλυμα Άνω Στρώματος - 50%: α) Πάρτε CONCENTRATE (αρ. Καταλόγου 99306) και πιπεταρίστε 4.5 ml σε αποστειρωμένο σωλήνα φυγόκεντρου β) Προσθέστε 5.5 ml από Modified Human Tubal Fluid (αρ. Καταλόγου 90126) γ) Κλείστε τον σωλήνα και αναποδογυρίστε το απαλά 3-4 φορές για να επιτραπεί η πλήρης ανάδευση δ) Αναγράψτε στην ετικέτα του σωλήνα «ΑΝΩ ΣΤΡΩΜΑ» 2. Διάλυμα Κάτω Στρώματος - 90%: α) Πάρτε CONCENTRATE (αρ. Καταλόγου 99306) και πιπεταρίστε 8.1 ml σε αποστειρωμένο σωλήνα φυγόκεντρου β) Προσθέστε 1.9 ml από Modified Human Tubal Fluid (αρ. Καταλόγου 90126) γ) Κλείστε τον σωλήνα και αναποδογυρίστε το απαλά 3-4 φορές για να επιτραπεί η πλήρης ανάδευση δ) Αναγράψτε στην ετικέτα του σωλήνα «ΚΑΤΩ ΣΤΡΩΜΑ» 3. Συνεχίστε στο τμήμα ΓΕΝΙΚΗ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑ του φυλλαδίου του προϊόντος. (ΣΗΜΕΙΩΣΗ: 10 ml Άνω Στρώματος και 10 ml Κάτω Στρώματος, επεξεργάζονται κατά προσέγγιση 5 δείγματα σπέρματος.) Σημείωση: Οι όροι 50% και 90% δεν αναφέρονται σε πραγματική συγκέντρωση. Τα 50% και 90% είναι σχετικές συγκεντρώσεις βασισμένες στην προηγούμενη ονοματολογία που όριζε διάλυμα 1:9 από Percoll® ως ίσο με 100% λειτουργικό, ισοτονικό διάλυμα. ΓΕΝΙΚΗ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑ Παρακάτω ακολουθεί η γενική διαδικασία για διαχωρισμό κλίσης δύο βημάτων του κινητού σπερματοζωαρίου από το σπέρμα. Ο όγκος και η συγκέντρωση μπορούν να τροποποιηθούν για να ανταποκρίνονται στις εργαστηριακές προτιμήσεις (δηλ. μινι-κλίση, κρυοσυντηρημένο σπέρμα, κλίση τριών στρωμάτων). 1. Φέρτε όλα τα εξαρτήματα των μέσων σε θερμοκρασία δωματίου ή στους 37°C. 2. Χρησιμοποιώντας αποστειρωμένη πιπέτα, μεταφέρετε 1.5 - 2.0 ml του «ΚΑΤΩ ΣΤΡΩΜΑΤΟΣ» σε αποστειρωμένο, μίας χρήσης, κωνικό φυγόκεντρο σωλήνα. 3. Χρησιμοποιώντας μια νέα αποστειρωμένη πιπέτα, μεταφέρετε ίσο όγκο «ΠΑΝΩ ΣΤΡΩΜΑΤΟΣ» πάνω από το «ΚΑΤΩ ΣΤΡΩΜΑ». Αυτό γίνεται με επαφή της επιφάνειας του «ΚΑΤΩ ΣΤΡΩΜΑΤΟΣ» στο πλάι του σωλήνα με την άκρη της πιπέτας. Διαχύστε προσεκτικά το «ΑΝΩ ΣΤΡΩΜΑ» στροβιλίζοντας την άκρη της πιπέτας γύρω από την περιφέρεια του σωλήνα με κινήσεις προς τα πάνω, καθώς το επίπεδο του «ΑΝΩ ΣΤΡΩΜΑΤΟΣ» ανυψώνεται. 4. Τοποθετήστε απαλά 1.5 - 2.0 ml ρευστοποιημένου σπέρματος στο «ΠΑΝΩ ΣΤΡΩΜΑ» χρησιμοποιώντας νέα αποστειρωμένη πιπέτα. 5. Τοποθετήστε για φυγοκέντρηση για 10-20 λεπτά σε περίπου 200 - 300xg.* Εκθέστε προσεκτικά το συσσωμάτωμα είτε με αναρρόφηση του «ΑΝΩ» και «ΚΑΤΩ ΣΤΡΩΜΑΤΟΣ» ή με άμεση αφαίρεση του και μεταφορά σε νέο αποστειρωμένο σωλήνα φυγόκεντρου. *Σημείωση: Η ποιότητα του δείγματος σπέρματος θα πρέπει να αξιολογείται και να λαμβάνεται υπόψη στον καθορισμό της σωστής ταχύτητας και του χρόνου φυγοκέντρησης. Θα πρέπει να προσαρμοστούν σύμφωνα με την ξεχωριστή ποιότητα δείγματος για βελτιστοποίηση της διαδικασίας. 6. Χρησιμοποιώντας νέα αποστειρωμένη πιπέτα, προσθέστε 2.0 - 3.0 ml κατάλληλου μέσου έκπλυσης όπως το Sperm Washing Medium (IS αρ. Καταλόγου 9983) ή Modified HTF (IS αρ. Καταλόγου 90126) με συμπλήρωμα πρωτεϊνών. Αιωρείστε ξανά το απομονωμένο συσσωμάτωμα. Υποβάλλετε σε φυγοκέντρηση (~200xg) για 8 -10 λεπτά και αφαιρέστε το υπερκείμενο υγρό. Επαναλάβετε αυτό το βήμα για δεύτερη έκπλυση. Απορρίψτε το υπερκείμενο υγρό και αιωρείστε ξανά το συσσωμάτωμα χρησιμοποιώντας κατάλληλο όγκο του κατάλληλου μέσου. Το δείγμα είναι πλέον έτοιμο για ανάλυση. Pro dodatečné podrobnosti o použití těchto výrobků by každá laboratoř měla konzultovat vlastní laboratorní metody a protokoly, které byly vytvořeny a optimalizovány zvlášť pro váš konkrétní zdravotnický program. ΟΔΗΓΙΕΣ ΦΥΛΑΞΗΣ ΚΑΙ ΣΤΑΘΕΡΟΤΗΤΑ Φυλάσσετε τα κλειστά δοχεία σε ψύξη στους 2º έως 8ºC. Θερμάνετε σε θερμοκρασία περιβάλλοντος ή επωαστήρα (37°C) πριν τη χρήση. Μην ψύχετε ή εκθέτετε σε υψηλές θερμοκρασίες. Το ISolate παραμένει σταθερό μέχρι την ημερομηνία λήξης που αναγράφεται στις ετικέτες του κουτιού και των φιαλών, όταν φυλάσσεται σύμφωνα με τις οδηγίες. ΠΡΟΦΥΛΑΞΕΙΣ ΚΑΙ ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΕΙΣ Η συσκευή αυτή προορίζεται για χρήση από προσωπικό που έχει εκπαιδευτεί σε διαδικασίες που περιλαμβάνουν τη συγκεκριμένη εφαρμογή για την οποία προορίζεται η συσκευή. Το ISolate έχει αδιαφανή εμφάνιση. Αυτό είναι φυσιολογικό για το συγκεκριμένο προϊόν. Μην κάνετε χρήση φιαλιδίου μέσου που παρουσιάζει ύπαρξη σωματιδίων ή μολυσματικών ουσιών (μη ενιαία θολότητας). Το ISolate πρέπει να είναι καλά κλειστό όταν χρησιμοποιείται σε επωαστήρα CO2, για να αποφεύγονται οι αλλαγές pH. Το προϊόν δεν περιέχει συντηρητικά, αντιβιοτικά ή συμπληρώματα πρωτεϊνών. Για να αποφύγετε προβλήματα μόλυνσης, χρησιμοποιήστε ασηπτικές τεχνικές. Σε περίπτωση ζημιάς, μην χρησιμοποιείτε. Παρακαλούμε απορρίψτε ή επιστρέψτε στον Παρασκευαστή για αντικατάσταση. ΠΡΟΣΟΧΗ: Η ομοσπονδιακή (Η.Π.Α.) νομοθεσία περιορίζει αυτή τη συσκευή σε πώληση από ή κατά εντολή γιατρού. POPIS VÝROBKU ISolate® je médium gradientu hustoty zhotovené na oddělení motilní frakce spermií ze semenné kapaliny. Protože je to dvouvrstevný gradientní systém, efektivně snižuje buňkovou kontaminaci jako např. odumřelé spermie, bílé krevní buňky a jiné nečistoty. Výsledný vzorek obsahuje většinou motilní spermie. ISolate asepticky zpracovaná koloidní suspenze křemíkových částic, filtrovaná přes membránu a stabilizovaná kovalentně vázaným hydrofilním silanem v pufrovaném HEPES HTF. Hladina zaručené sterilizace (SAL) je 10-3. ISolate bylo testováno a shledáno negativním na pyrogeny při pyrogenním testu provedeném na laboratorním králíkovi. NÁVOD K POUŽITÍ Kat. č. 99264 – KOLOIDNÍ KŘEMÍK VE DVOU KONCENTRACÍCH (50 % a 90 %) K OKAMŽITÉMU POUŽITÍ A. Doporučený materiál: ISolate • Irvine Scientific Katalog #99264 (sada 6ml, 50ml nebo 100 ml ampulek ) Sperm Washing Medium • Irvine Scientific Katalog #9983 Sterilní kónické odstředivkové trubičky • Irvine Scientific Katalog #IS-325 Sterilní pipety Pasteur Odstředivka Inkubátor, 37 °C B. Příprava gradientu: Žádné předběžné ředění není nutné. Každá ampulka gradientu horní a spodní vrstvy je připravena na použití. Pokračujte až po část příbalového letáku nazvanou OBECNÁ METODA. Kat. č. #99275 - ZÁSOBNÍ ROZTOK Médium s 90% gradientem hustoty na použití v jednokrokové proceduře nebo na další ředění. A. Doporučený materiál: ISolate STOCK SOLUTION • Irvine Scientific Katalog #99275 Modified Human Tubal Fluid • Irvine Scientific Katalog #90126 Sperm Washing Medium • Irvine Scientific Katalog #9983 Sterilní kónické odstředivkové trubičky • Irvine Scientific Katalog #IS-325 Sterilní pipety Pasteur Odstředivka Inkubátor, 37 °C B. Příprava gradientu: Jsou potřeba dva roztoky na provedení metody gradientní separace spermií: horní vrstvy a spodní vrstvy. Horní vrstva a spodní vrstva. 1. Roztok horní vrstvy – 50 %: a.) Napipetujte 5,6 ml koncentrátu CONCENTRATE (kat. č. 99275) do sterilní odstředivkové trubičky. b) Přidejte 4,4 ml Modified Human Tubal Fluid (kat. č. 90126) c) Zazátkujte zkumavku a opatrně ji převraťte 3-4krát, aby došlo k celkovému promíchání. d) Označte trubičku „HORNÍ VRSTVA“ 2. Roztok spodní vrstvy – 90 %: a) Nadávkujte alikvotní podíl 10 ml roztoku STOCK SOLUTION do sterilní odstředivkové trubičky se zátkou – (Dalšího ředění není třeba - STOCK SOLUTION je 90%) b) Označte trubičku “SPODNÍ VRSTVA“ 3. Pokračujte až po část příbalového letáku výrobku nazvanou ZÁKLADNÍ POSTUP. (POZNÁMKA: 10 ml Horní vrstvy a 10 ml Spodní vrstvy zpracuje přibližně 5 vzorků sperma.) Kat. č. #99306 - KONCENTRÁT Koncentrát koloidního křemíku pro další ředění na gradienty hustoty; je formulován v izotonickém pufru a má přibližnou hustotu neředěného přípravku Percoll®. ISolate® CONCENTRATE byl hodnocen podle tohoto příbalového letáku při 50% a 90% gradientech. Každá laboratoř si může zvolit vytvoření gradientů různých koncentrací, jejichž efektivnost by měla být ohodnocena. A. Doporučený materiál: Koncentrát ISolate® • Irvine Scientific Katalog #99306 Modified Human Tubal Fluid • Irvine Scientific Katalog #90126 Sperm Washing Medium • Irvine Scientific Katalog #9983 Sterilní kónické odstředivkové trubičky • Irvine Scientific Katalog #IS-325 Sterilní pipety Pasteur Odstředivka Inkubátor, 37 °C B. Příprava gradientu: Jsou potřeba dva roztoky na provedení metody gradientní separace spermií: horní vrstvy a spodní vrstvy. 1. Roztok horní vrstvy – 50 %: a) Napipetujte 4,5 ml CONCENTRATE (kat. č. 99306) do sterilní odstředivkové trubičky. b) Přidejte 5,5 ml Modified Human Tubal Fluid (kat. č. 90126) c) Zazátkujte zkumavku a opatrně ji převraťte 3-4krát, aby došlo k celkovému promíchání. d) Označte trubičku „HORNÍ VRSTVA“ 2. Roztok spodní vrstvy – 90 %: a) Napipetujte 8,1 ml CONCENTRATE (kat. č. 99306) do sterilní odstředivkové trubičky. b) Přidejte 1,9 ml Modified Human Tubal Fluid (kat. č. 90126) c) Zazátkujte zkumavku a opatrně ji převraťte 3-4krát, aby došlo k celkovému promíchání. d) Označte trubičku „SPODNÍ VRSTVA“ 3. Pokračujte až po část příbalového letáku výrobku nazvanou ZÁKLADNÍ POSTUP. (POZNÁMKA: 10 ml Horní vrstvy a 10 ml Spodní vrstvy zpracuje přibližně 5 vzorků sperma.) Poznámka: Hodnoty 50 % a 90 % nepředstavují skutečné koncentrace. 5 0% a 90 % jsou relativní koncentrace založené na dřívější terminologii, která definovala poměr 1:9 ředění přípravku Percoll ® jako rovnající se 100% účinnému isotonickému roztoku. OBECNÁ METODA Následující je obecný postup na dvoukrokovou gradientní separaci motilní spermie od spermatu. Objem a koncentrace mohou být upraveny, aby splňovaly preference každé laboratoře (např. mini-gradient, kryoprezervované semeno, trojvrstevní gradient). 1. Vytemperujte všechny složky média na pokojovou teplotu nebo na 37 °C. 2. Pomocí sterilní pipety převeďte 1,5 – 2,0 ml „SPODNÍ VRSTVY“ do sterilní, kónické odstředivkové trubičky na jedno použití. 3. Pomocí nové sterilní pipety převeďte stejný objem „HORNÍ VRSTVY“ na horní část „SPODNÍ VRSTVY“. Provádí se to dotykem povrchu „SPODNÍ VRSTVY” na straně zkumavky hrotem pipety. Opatrně dávkujte „HORNÍ VRSTVU“ kroužením hrotu pipety kolem obvodu trubičky pohybem směrem nahoru zatímco se hladina „HORNÍ VRSTVY“ bude zvedat. 4. Opatrně umístěte 1,5 – 2,0 ml zkapalněného spermatu do „HORNÍ VRSTVY“ pomocí nové sterilní pipety. 5. Odstřeďte 10-20 minut při odstředivé síle kolem 200 300xg.* Opatrně odhalte granuli buď aspirací „HORNÍ“ a „SPODNÍ VRSTVY“ nebo vyjměte granuli přímo a přeneste ji do nové sterilní odstředivkové trubičky. *Poznámka: Kvalita vzorku spermií by měla být zhodnocena a brána v úvahu při určování správné rychlosti odstředivky a doby odstředění. Měly by být upraveny podle kvality individuálních vzorků pro optimalizaci procedury. 6. Pomocí nové sterilní pipety přidejte 2,0 – 3,0 ml mycího média jako např. Sperm Washing Medium (IS kat. č. 9983) nebo Modified HTF (IS kat. č. 90126) s proteinovým suplementem. Resuspendujte separovanou granuli. Odstřeďte (~200xg) po dobu 8 -10 minut a odeberte supernatant. Zopakujte tento krok pro druhé promytí. Odstraňte supernatant a resuspendujte granuli pomocí vhodného objemového množství náležitého média. Vzorek je nyní připraven pro analýzu. Pro dodatečné podrobnosti o použití těchto výrobků by každá laboratoř měla konzultovat vlastní laboratorní metody a protokoly, které byly vytvořeny a optimalizovány zvlášť pro váš konkrétní zdravotnický program. POKYNY PRO SKLADOVÁNÍ A STÁLOST Skladujte neotevřené nádoby v lednici při 2 º až 8 ºC. Ohřejte na okolní teplotu nebo na teplotu inkubátoru (37 °C) před použitím. Nezmrazujte a nevystavujte vysokým teplotám. Při doporučeném skladování je ISolate stabilní do expirační doby, která je vyznačena na štítcích kartónu a láhve. VAROVÁNÍ A BEZPEČNOSTNÍ OPATŘENÍ Zařízení bylo určeno pro použití školeným personálem při zákrocích, které zahrnují indikovanou aplikaci, pro kterou je zařízení určeno. ISolate se bude jevit neprůhledné. Je to pro tento výrobek normální. Nepoužívejte žádné ampulky média, které jeví známky přítomnosti částic hmoty nebo nečistot (nerovnoměrně zakalené). ISolate by mělo být těsně uzavřeno, pokud bude používáno v CO2 inkubátoru, aby se předešlo změnám pH . Tento výrobek neobsahuje žádné konzervační látky, antibiotika, ani protein nebo jiné suplementy. Vyhněte se problémům kontaminace, při práci dodržujte aseptické metody. V případě poškození nepoužívejte. Likvidujte nebo zašlete výrobci na výměnu. POZOR: Federální zákony USA omezují prodej tohoto zařízení pouze na lékaře nebo na jeho předpis. ISolate er en membranfiltreret, aseptisk behandlet kolloid suspension af silicapartikler stabiliseret med kovalent bundet hydrofilt silan i HEPES-bufret HTF. Sterilitetssikringsniveauet (SAL) er 10-3. ISolate er blevet testet med en kaninpyrogentest og fundet pyrogentfrit. BRUGSANVISNING Katalognr. 99264 – BRUGSKLART KOLLOID SILIKA I TO KONCENTRATIONER (50 % og 90 %) A. Anbefalede materialer: ISolate • Irvine Scientific katalognr. 99264 (sæt med 6 ml, 50ml- eller 100 ml-hætteglas) Sperm Washing Medium • Irvine Scientific katalognr. 9983 Sterile, koniske centrifugerør til engangsbrug • Irvine Scientific katalognr. IS-325 Pasteurpipetter, sterile Centrifuge Inkubator, 37 ºC B. Forberedelse af gradientopløsning: Forudgående fortynding er ikke nødvendig. Hvert hætteglas med øverste eller underste lag gradient er klar til brug. Forsæt med afsnittet GENEREL PROCEDURE på indlægssedlen. Katalognr. 99275 – STOCK SOLUTION Medium med 90 % densitetsgradient til brug i en ét-trinsprocedure eller til yderligere fortynding. A. Anbefalede materialer: ISolate Stock Solution • Irvine Scientific katalognr. 99275 Modified Human Tubal Fluid • Irvine Scientific katalognr. 90126 Sperm Washing Medium • Irvine Scientific katalognr. 9983 Sterile, koniske centrifugerør til engangsbrug • Irvine Scientific katalognr. IS-325 Pasteurpipetter, sterile Centrifuge Inkubator, 37 ºC B. Forberedelse af gradientopløsning: Der kræves to opløsninger til at udføre gradientseparation af sæd: Et øverste lag og et nederste lag. 1. Opløsning i øverste lag - 50 %. a) Tag STOCK SOLUTION (katalognr. 99275) og pipetter 5,6 ml ned i et sterilt centrifugerør b) Tilsæt 4,4 ml Modified Human Tubal Fluid (katalognr. 90126) c) Sæt låg på røret og vend det forsigtigt 3-4 gange for at blande helt d) Skriv “ØVERSTE LAG” på rørets etiket 2. Opløsning i nederste lag - 90 %. a) Tag 10 ml STOCK SOLUTION op i et sterilt centrifugerør og sæt låg på - (det er ikke nødvendigt at fortynde yderligere - STOCK SOLUTION er 90 %) b) Skriv “NEDERSTE LAG” på rørets etiket 3. Forsæt med afsnittet GENEREL PROCEDURE på indlægssedlen. (BEMÆRK: 10 ml af det øverste lag og 10 ml af det nederste lag kan behandle ca. 5 sædprøver). 6. Brug en ny, steril pipette og tilsæt 2,0-3,0 ml af et passende vaskemedium såsom Sperm Washing Medium (IS katalognr. 9983) eller Modified HTF (IS katalognr. 90126) med tilsat protein. Resuspender de isolerede sædceller (pellet). Centrifuger (~ 200 xg) i 8-10 minutter og fjern supernatanten. Gentag dette trin og vask en gang til. Bortskaf supernatanten og resuspender sædcellerne (pellet) vha. en egnet volumen af passende medium. Prøven er nu klar til analysering. For yderligere oplysninger om brug af disse produkter skal hvert laboratorium henvise til egne procedurer og protokoller, som er blevet specifikt udviklet og optimeret til laboratoriets eget, medicinske program. ANVISNINGER ANG OPBEVARING OG STABILITET Uåbnede beholdere opbevares nedkølet ved 2-8 ºC. Opvarm til stuetemeperatur eller inkubatortemperatur (37 °C) inden brug. Må ikke nedfryses eller udsættes for høje temperaturer. ISolate er stabilt indtil udløbsdatoen på æskens og flaskens etiket, når det opbevares som anvist. FORHOLDSREGLER OG ADVARSLER Dette udstyr er beregnet til brug af personale, der er uddannet i procedurer, der inkluderer den indicerede anvendelse, som dette udstyr er beregnet til. ISolate er uigennemsigtigt. Det er normalt for dette produkt. Anvend ikke hætteglas med medium, der indeholder partikler eller viser tegn på at være kontamineret (uensartede uklarheder). Låget på ISolate skal sidde tæt til, hvis det skal bruges i en CO2-inkubator, for at undgå ændringer i pH-værdien. Dette produkt indeholder ingen konserveringsmidler, antibiotika eller proteinsupplementer. Undgå problemer med kontamination ved at bruge aseptiske teknikker. Må ikke anvendes i tilfælde af beskadigelse. Bortskaf eller returner til producenten med henblik på udskiftning. FORSIGTIG: Ifølge amerikansk lov (USA) må dette produkt kun sælges af eller efter ordination af en læge. TUOTTEEN KUVAUS ISolate ® on tiheysgradienttiliuos, jota käytetään erottamaan motiilien siittiöiden osa siemennesteestä. Kaksikerroksisena gradienttijärjestelmänä se tehokkaasti vähentää solukontaminantteja, kuten kuolleita siittiöitä, valkoisia verisoluja ja vastaavia jätteitä. Tuloksena saatu näyte sisältää pääasiassa motiileja siittiöitä. ISolate – HEPES on kalvosuodatettu ja aseptisesti käsitelty kolloidisuspensio, jossa silikahiukkaset on stabiloitu kovalenttisidoksessa hydrofiilisen silaanin kanssa HEPESpuskuroidussa HTF:ssä. Steriilisyystaso (SAL) on 10-3. ISolate on testattu ja todettu pyrogeeneille negatiiviseksi kanin pyrogeenitestissä. KÄYTTÖOHJEET L u e t t e l o n r o 9 9 2 6 4 - K Ä Y T T ÖVA L M I S KOLLOIDINEN SILIKA KAHDESSA PITOISUUDESSA (50 % ja 90 %) A. Suositellut materiaalit: ISolates • Irvine Scientific luettelonro 99264 (6ml:n, 50ml tai 100 ml:n pullopakkaus) Sperm Washing Medium • Irvine Scientific luettelonro 9983 Steriilit kertakäyttöiset kartiomaiset sentrifugiputket • Irvine Scientific luettelonro IS-325 Pasteur -pipetit, steriilit Sentrifugi Inkubaattori, 37 °C B. Gradientin valmistus: Alustavia laimennuksia ei tarvita. Kukin ylemmän tai alemman kerroksen gradienttipullo on käyttövalmis. Siirry tuote-esitteen osaan YLEISET TOIMENPITEET. Luettelonro 99275 - STOCK SOLUTION 90 %:n tiheysgradienttinen ravintoliuos, jota käytetään yksivaiheisessa toimenpiteessä tai lisälaimennuksessa. A. Suositellut materiaalit: ISolate STOCK SOLUTION • Irvine Scientific luettelonro 99275 Modified Human Tubal Fluid • Irvine Scientific luettelonro 90126 Sperm Washing Medium • Irvine Scientific luettelonro 9983 Steriilit kertakäyttöiset kartiomaiset sentrifugiputket • Irvine Scientific luettelonro IS-325 Pasteur -pipetit, steriilit Sentrifugi Inkubaattori, 37 °C B. Gradientin valmistus: Siittiöiden gradienttierotteluun tarvitaan kaksi liuosta: ylempi kerros ja alempi kerros. 1. Ylemmän kerroksen liuos 50 %. a) Ota STOCK SOLUTIONia (luettelonro 99275) ja pipetoi 5,6 ml steriiliin sentrifugiputkeen. b) Lisää 4,4 ml Modified Human Tubal Fluidia (luettelonro 90126). c) Sulje putki ja käännä se varovasti ylösalaisin 3 - 4 kertaa, jotta se saa täysin sekoittua. d) Merkitse putkeen “YLEMPI KERROS” 2. Alemman kerroksen liuos – 90 %. a) Jaa tasan 10 ml STOCK SOLUTIONia steriiliin sentrifugiputkeen ja sulje se – (Lisälaimennuksia ei tarvita -STOCK SOLUTION on 90-prosenttista). b) Merkitse putkeen “ALEMPI KERROS” 3. Jatka tuote-esitteen osaan YLEISET TOIMEN PITEET. (HUOM: 10 ml ylempää ja 10 ml alempaa kerrosta riittää noin 5:n siemennestenäytteen käsittelyyn.) Katalognr. 99306 – CONCENTRATE Koncentrat af kolloid silika til yderligere fortynding i densitetsgradienter; formuleret i en isotonisk buffer og svarende til densiteten af ufortyndet Percoll®. ISolate® CONCENTRATE er blevet evalueret ifølge denne indlægsseddel ved 50 % og 90 % gradienter. Hvert laboratorium kan vælge at lave gradienter i forskellige koncentrationer, som bør evalueres med henblik på effektivitet. Luettelonro 99306 - CONCENTRATE Kolloidisilikatiiviste, jolla saadaan aikaan laimennus tiheysgradientteihin; formuloitu isotonisessa puskurissa ja vastaa suunnilleen laimentamattoman Percoll®in tiheyttä. ISolate® CONCENTRATE on arvioitu pakkauksen esitteen mukaisesti 50 %- ja 90 %-gradienttia vastaaviksi. Kukin laboratorio voi valmistaa gradientteja eri pitoisuuksilla, joiden tehokkuus tulee arvioida. A. Anbefalede materialer: ISolate® koncentrat • Irvine Scientific katalognr. 99306 Modified Human Tubal Fluid • Irvine Scientific katalognr. 90126 Sperm Washing Medium • Irvine Scientific katalognr. 9983 Sterile, koniske centrifugerør til engangsbrug • Irvine Scientific katalognr. IS-325 Pasteurpipetter, sterile Centrifuge Inkubator, 37 ºC A. Suositellut materiaalit: ISolate® -tiiviste • Irvine Scientific luettelonro 99306 Modified Human Tubal Fluid • Irvine Scientific luettelonro 90126 Sperm Washing Medium • Irvine Scientific luettelonro 9983 Steriilit kertakäyttöiset kartiomaiset sentrifugiputket • Irvine Scientific luettelonro IS-325 Pasteur -pipetit, steriilit Sentrifugi Inkubaattori, 37 °C B. Forberedelse af gradientopløsning: Der kræves to opløsninger til at udføre gradientseparation af sæd: Et øverste lag og et nederste lag. 1. Opløsning i øverste lag - 50 %. a) Tag CONCENTRATE (katalognr. 99306) og pipetter 4,5 ml ned i et sterilt centrifugerør b) Tilsæt 5,5 ml Modified Human Tubal Fluid (katalognr. 90126) c) Sæt låg på røret og vend det forsigtigt 3-4 gange for at blande helt d) Skriv “ØVERSTE LAG” på rørets etiket 2. Opløsning i nederste lag - 90 %. a) Tag CONCENTRATE (katalognr. 99306) og pipetter 8,1 ml ned i et sterilt centrifugerør b) Tilsæt 1,9 ml Modified Human Tubal Fluid (katalognr. 90126) c) Sæt låg på røret og vend det forsigtigt 3-4 gange for at blande helt d) Skriv “NEDERSTE LAG” på rørets etiket 3. Forsæt med afsnittet GENEREL PROCEDURE på indlægssedlen. (BEMÆRK: 10 ml af det øverste lag og 10 ml af det nederste lag kan behandle ca. 5 sædprøver). B. Gradientin valmistus: Siittiöiden gradienttierotteluun tarvitaan kaksi liuosta: ylempi kerros ja alempi kerros. 1. Ylemmän kerroksen liuos - 50 %. a) Ota CONCENTRATE:a (luettelonro 99306) ja pipetoi 4,5 ml steriiliin sentrifugiputkeen. b) Lisää 5,5 ml Modified Human Tubal Fluidia (luettelonro 90126). c) Sulje putki ja käännä se varovasti ylösalaisin 3 - 4 kertaa, jotta se saa täysin sekoittua. d) Merkitse putkeen “YLEMPI KERROS” 2. Alemman kerroksen liuos – 90 %. a) Ota CONCENTRATE:a (luettelonro 99306) ja pipetoi 8,1 ml steriiliin sentrifugiputkeen b) Lisää 1,9 ml Modified Human Tubal Fluidia (luettelonro 90126). c) Sulje putki ja käännä se varovasti ylösalaisin 3 - 4 kertaa, jotta se saa täysin sekoittua. d) Merkitse putkeen “ALEMPI KERROS” 3. Jatka tuote-esitteen osaan YLEISET TOIMEN PITEET. (HUOM: 10 ml ylempää ja 10 ml alempaa kerrosta riittää noin 5:n siemennestenäytteen käsittelyyn.) Bemærk: Betegnelserne 50 % og 90 % angiver ikke en faktisk koncentration. 50 % og 90 % er relative koncentrationer baseret på det tidligere nomenklatur, der definerede en 1:9 fortynding af Percoll® som svarende til en 100 % isotonisk arbejdsopløsning. GENEREL PROCEDURE Følgende er en generel procedure for en gradientseparation af motile sædceller fra sædvæsken. Volumenen og koncentrationen kan modificeres i henhold til hvert enkelt laboratories præferencer (dvs. minigradient, cryopreserveret sæd, gradient i tre lag). 1. Bring alle mediekomponenter til stuetemperatur eller 37 °C. 2. Brug en steril pipette og overfør 1,5-2,0 ml af det “NEDERSTE LAG” til et sterilt, konisk centrifugerør til engangsbrug. 3. Brug en ny, steril pipette og overfør en tilsvarende volumen af “ØVERSTE LAG” oven på “NEDERSTE LAG”. Det gøres ved at berøre overfladen af det “UNDERSTE LAG” i siden af røret med pipettespidsen. Dispenser forsigtigt det “ØVERSTE LAG” ved at føre pipettespidsen i en opadgående spiralbevægelse mod rørets inderside efterhånden, som niveauet af det “ØVERSTE LAG” stiger. 4. Placer forsigtigt 1,5-2,0 ml flydende sæd oven på “ØVERSTE LAG” med en ny, steril pipette. 5. Centrifuger i 10-20 minutter ved ca. 200-300 x g.* Eksponer forsigtigt sædcellerne (pellet) ved enten at aspirere det “ØVERSTE” og “UNDERSTE” lag væk, eller direkte ved at fjerne sædcellerne og overføre dem til et nyt, sterilt centrifugerør. Bemærk: Kvaliteten af sædprøven skal evalueres og tages i betragtning, når den korrekte centrifugeringshastighed og -tid skal fastslås. Disse skal justeres i henhold til den enkelte sædprøves kvalitet med henblik på optimering af proceduren. LATVISKI SUOMI DANSK PRODUKTBESKRIVELSE ISolate® er et densitetsgradientmedium, der er fremstillet til at separere de motile sædceller fra sædvæsken. Som et gradientsystem i to lag reducerer det effektivt cellulære kontaminanter såsom død sæd, leukocytter og diverse restmaterialer. Den færdige prøve indeholder hovedsageligt motile sædceller. Huom: Termit 50 % ja 90 % eivät edusta todellista pitoisuutta. 50- ja 90-prosenttiset pitoisuudet ovat suhteellisia ja perustuvat aiempaan luokitukseen, jossa 1:9 laimennus Percoll®illa on määritelty 100 %:sti toimivaa isotonista liuosta vastaavaksi. YLEISET TOIMENPITEET Seuraavassa annetaan yleiset ohjeet kaksivaiheiseen siittiöiden siemennesteestä erottamiseen gradientin avulla. Tilavuutta ja pitoisuutta voidaan muunnella kunkin laboratorion toivomusten mukaan (so. minigradientti, kylmäsäilötty siemenneste, kolmikerroksinen gradientti). 1. Anna kaikkien ravintoliuosainesosien saavuttaa huoneenlämpötila tai 37 °C. 2. Steriiliä pipettiä käyttäen siirrä1,5 – 2,0 ml “ALEMPAA KERROSTA” steriiliin kertakäyttöiseen kartiomaiseen sentrifugiputkeen. 3. Siirrä steriilillä pipetillä sama tilavuus ”YLEMPÄÄ KERROSTA” ”ALEMMAN KERROKSEN” päälle. Tämä tapahtuu koskettamalla pipetin kärjellä ”ALEMMAN KERROKSEN” pintaa putken reunalla. Tyhjennä “YLEMPI KERROS” varovasti kiertäen pipetin kärkeä ympäri putkea yläsuuntaan samalla kun “YLEMMÄN KERROKSEN” taso nousee. 4. Aseta varovasti 1,5 – 2,0 ml nestemäistä siemennestettä “YLEMMÄLLE KERROKSELLE” uudella steriilillä pipetillä. 5. Linkoa 10 - 20 minuuttia asetuksella 200 – 300 x g.* Paljasta pelletti varovasti joko aspiroimalla se “YLEMMÄSTÄ” ja “ALEMMASTA KERROKSESTA” tai poistamalla pelletti suoraan ja siirtämällä se uuteen steriiliin sentrifugiputkeen. *Huom: Siittiönäytteen laatu tulee arvioida ja ottaa huomioon niiden linkoamisen tarkoituksenmukaista nopeutta ja kestoa määritettäessä. Näitä tulee säädellä yksittäisen näytteen laadun mukaisesti toimenpiteen optimoimiseksi. 6. Käyttäen uutta steriiliä pipettiä lisää 2,0 – 3,0 ml sopivaa pesuainetta, kuten Sperm Washing Medium (IS luettelonro 9983) tai Modified HTF (IS luettelonro 90126) proteiinilisineen. Upota eristetty pelletti uudelleen. Linkoa se (~ 200 x g) 8 -10 minuuttia ja poista pintaneste. Toista tämä vaihe uutta pesua varten. Hävitä pintaneste ja suspendoi pelletti uudelleen käyttäen asianmukaista ravintoliuosta sopivassa tilavuudessa. Näyte on nyt valmis analysoitavaksi. PRODUKTA APRAKSTS ISolate® blīvuma gradienta barotnes ir materiāls, kas paredzēts spermatozoīdu motilo frakciju atdalīšanai no sēklas šķidruma. Kā divslāņu gradientu sistēma tā efektīvi mazina šūnu izraisītas kontaminācijas iespējas, piemēram, kontamināciju ar nedzīviem spermatozoīdiem, baltajiem asinsķermenīšiem un dažādām pārpalikumšūnām. Rezultātā iegūtais paraugs galvenokārt satur kustīgus spermatozoīdus. Lisätietoja näiden tuotteiden käytöstä kunkin laboratorion tulee hakea omista menettelyohjeistaan ja protokollista, jotka on erityisesti kehitetty ja optimoitu paikallista lääkinnällistä ohjelmaa varten. ISolate ir caur membrānu filtrēta un aseptiski apstrādāta koloidāla silīcija dioksīda daļiņu suspensija, kas stabilizēta ar kovalenti piesaistītu hidrofīlu silānu HEPES buferētā HTF. Sterilitātes nodrošināšanas līmenis (SAL) ir 10-3. ISolate ir testēts, un ir konstatēts, ka tas ir negatīvs attiecībā uz pirogēnām baktērijām pirogēno baktēriju testā trušiem. SÄILYTYSOHJEET JA STABILITEETTI Avaamattomat säiliöt säilytettävä kylmässä, 2 – 8 ºC. Lämmitä ympäristölämpöön tai inkubaattorin lämpötilaan (37 °C) ennen käyttöä. Ei saa jäädyttää tai altistaa korkeille lämpötiloille. ISolate on stabiili pakkaukseen ja pullojen etiketteihin merkittyyn eräpäivään saakka ohjeiden mukaisesti säilytettynä. VAROITUKSIA JA VAROTOIMENPITEITÄ Tämä laite on tarkoitettu sellaisten henkilöiden käytettäväksi, jotka on koulutettu suorittamaan toimenpiteitä, joihin kuuluu laitteen käyttötarkoituksen mukainen asianmukainen käyttö. ISolate näyttää läpinäkymättömältä. Tämä on tuotteelle normaalia. Älä käytä ravintoliuospulloa, jossa näkyy hiukkasia tai saastumista (epätasaista sameutta). ISolaten korkin tulee olla tiiviisti kiinni, kun sitä käytetään hiilidioksidi-inkubaattorissa pH-muutosten välttämiseksi. Tässä tuotteessa ei ole säilöntäaineita, antibiootteja eikä proteiinilisäaineita. Kontaminaatio-ongelmat vältetään aseptisella käsittelytekniikalla. Jos pakkaus on vahingoittunut, älä käytä sitä. Hävitä tuote tai palauta se valmistajalle vaihdettavaksi. VAROITUS: Yhdysvaltain liittovaltion laki rajoittaa tämän välineen myynnin vain lääkärin toimesta tai määräyksestä tapahtuvaksi. LIETOŠANAS NORĀDĪJUMI Kataloga Nr. 99264 – LIETOŠANAI GATAVS KOLOIDĀLS SILĪCIJA DIOKSĪDS DIVĀS KONCENTRĀCIJĀS (50% un 90%) A. Ieteicamie materiāli: ISolate • Irvine Scientific kataloga Nr. 99264 (6ml, 50ml vai 100 ml flakonu komplekts) Sperm Washing Medium • Irvine Scientific kataloga Nr. 9983 Sterili, koniski vienreizējās lietošanas centrifūgas stobriņi • Irvine Scientific kataloga Nr. IS-325 Pastēra pipetes, sterilas Centrifūga Inkubators, 37°C B. Gradienta sagatavošana: Nav nepieciešama iepriekšēja atšķaidīšana. Katrs flakons ar augšējā un apakšējā slāņa gradientu ir gatavs lietošanai. Pārejiet pie izstrādājuma ieliktnī aprakstītās VISPĀRĒJĀS PROCEDŪRAS. Kataloga Nr. - 99275 - STOCK SOLUTION 90% specifiska barotne izmantošanai tūlītējā procedūrā vai atšķaidīšanai turpmāk. A. Ieteicamie materiāli: ISolate STOCK SOLUTION •Irvine Scientific kataloga Nr. 99275 Modified Human Tubal Fluid •Irvine Scientific kataloga Nr. 90126 Sperm Washing Medium •Irvine Scientific kataloga Nr. 9983 Sterili, koniski vienreizējās lietošanas centrifūgas stobriņi •Irvine Scientific kataloga Nr. IS-325 Pastēra pipetes, sterilas Centrifūga Inkubators, 37°C B. Gradienta sagatavošana: Lai lietotu spermatozoīda atdalīšanas metodi gradientā, nepieciešami divi šķīdumi: augšējais slānis un apakšējais slānis. 1. Augšējā slāņa šķīdums – 50%: a) Ievietojiet CONCENTRATE (kataloga Nr. 99275) un pipeti 5,6 ml sterilā centrifūgas stobriņā. b) Pievienojiet 4,4 ml Modified Human Tubal Fluid (kataloga Nr. 90126) c) Uzlieciet stobriņam aizbāzni un uzmanīgi apvērsiet 3-4 reizes, lai saturam ļautu pilnībā sajaukties. d) Piestipriniet stobriņam uzlīmi „AUGŠĒJAIS SLĀNIS” 2. Apakšējā slāņa šķīdums – 90%: a) Iedaliet 10 ml STOCK SOLUTION sterilā centrifūgas stobriņā un uzlieciet aizbāzni (Turpmāka atšķaidīšana nav nepieciešama – STOCK SOLUTION ir 90%). b) Piestipriniet stobriņam uzlīmi „APAKŠĒJAIS SLĀNIS” 3. Pārejiet pie produkta ieliktnī aprakstītās VISPĀRĒJĀS PROCEDŪRAS. (PIEZĪME: ar 10 ml augšējā slāņa un 10 ml apakšējā slāņa šķīdumu iespējams apstrādāt apmēram 5 spermas paraugus.) Kataloga Nr. 99306 - CONCENTRATE Koloidāls silīcija dioksīda koncentrāts turpmākai atšķaidīšanai blīvuma gradientos, tā sastāvā ir izotonisks buferis un tam piemīt aptuvenais neatšķaidīta Percoll® blīvums. Saskaņā ar šo iepakojuma ieliktni ISolate® CONCENTRATE ir ticis novērtēts 50% un 90% gradientā. Katra laboratorija var izvēlēties veidot atšķirīgu koncentrāciju gradientus, kuri jāizvērtē attiecībā uz efektivitāti. A. Ieteicamie materiāli: ISolate® koncentrāts •Irvine Scientific kataloga Nr. 99306 Modified Human Tubal Fluid •Irvine Scientific kataloga Nr. 90126 Sperm Washing Medium •Irvine Scientific kataloga Nr. 9983 Sterili, koniski vienreizējās lietošanas centrifūgas stobriņi •Irvine Scientific kataloga Nr. IS-325 Pastēra pipetes, sterilas Centrifūga Inkubators, 37°C B. Gradienta sagatavošana: Lai lietotu spermatozoīda atdalīšanas metodi gradientā, nepieciešami divi šķīdumi: augšējais slānis un apakšējais slānis. 1. Augšējā slāņa šķīdums – 50%: a) Ievietojiet CONCENTRATE (kataloga Nr. 99306) un pipeti 4.5 ml sterilā centrifūgas stobriņā. b) Pievienojiet 5,5 ml Modified Human Tubal Fluid (kataloga Nr. 90126) c) Uzlieciet stobriņam aizbāzni un uzmanīgi apvērsiet 3-4 reizes, lai saturam ļautu pilnībā sajaukties. d) Piestipriniet stobriņam uzlīmi „AUGŠĒJAIS SLĀNIS” 2. Apakšējā slāņa šķīdums – 90%: a) Ievietojiet CONCENTRATE (kataloga Nr. 99306) un pipeti 8,1 ml sterilā centrifūgas stobriņā. b) Pievienojiet 1,9 ml Modified Human Tubal Fluid (kataloga Nr. 90126) c) Uzlieciet stobriņam aizbāzni un uzmanīgi apvērsiet 3-4 reizes, lai saturam ļautu pilnībā sajaukties. d) Piestipriniet stobriņam uzlīmi „APAKŠĒJAIS SLĀNIS” 3. Pārejiet pie produkta ieliktnī aprakstītās ISPĀRĒJĀS PROCEDŪRAS. (PIEZĪME: ar 10 ml augšējā slāņa un 10 ml apakšējā slāņa šķīdumu iespējams apstrādāt apmēram 5 spermas paraugus.) Piezīme: Apzīmējumi 50% un 90% nenorāda faktisko koncentrāciju. 50% un 90% ir relatīvas koncentrācijas, kas pamatojas uz iepriekšējo nomenklatūru, kas definēja Percoll® atšķaidīšanu1:9 kā līdzvērtīgu 100% iedarbīgam, izotoniskam šķīdumam. VISPĀRĒJĀ PROCEDŪRA Turpmāk minētā ir vispārpieņemta procedūra izolēšanai gradientā divos posmos, atdalot kustīgu spermatozoīdu no spermas. Daudzumu un koncentrāciju iespējams mainīt, lai tos varētu izmantot atbilstoši laboratorijas galvenajiem mērķiem (t. i., kā mini-gradientu, ar kriokonservēto spermu, kā trīsslāņu gradientu). 1. Nodrošiniet, ka visu barotnes sastāvdaļu temperatūra ir sasniegusi istabas temperatūras līmeni vai 37°C. 2. Izmantojot sterilu pipeti, pārnesiet 1,5-2,0 ml “APAKŠĒJĀ SLĀŅA” uz sterilu, vienreizējās lietošanas, konisku centrifūgas stobriņu. 3. Izmantojot jaunu sterilu pipeti, pārnesiet to pašu daudzumu „AUGŠĒJĀ SLĀŅA” uz „APAKŠĒJĀ SLĀŅA” augšdaļu. To veic, ar pipetes galu pieskaroties „APAKŠĒJAM SLĀNIM” no stobriņa puses. Uzmanīgi izpiliniet „AUGŠĒJO SLĀNI”, spirālveidīgi virpinot pipetes galu pa stobriņa perimetru augšupejošas kustības veidā, „AUGŠĒJĀ SLĀŅA” līmenim paaugstinoties. 4. Ar jaunas sterilas pipetes palīdzību uzmanīgi ievietojiet 1,5-2,0 ml sašķidrinātas spermas „AUGŠĒJĀ SLĀNĪ”. 5. Centrifugējiet 10-20 minūtes ar apmēram 200-300 g paātrinājumu.* Uzmanīgi atdaliet lodīti, atvelkot nost „AUGŠĒJO” un ”APAKŠĒJO SLĀNI” vai tieši izņemot lodīti un pārnesot to uz citu sterilu centrifūgas stobriņu. *Piezīme: Spermatozoīda parauga kvalitāte jāizvērtē un jāņem vērā, nosakot atbilstošo centrifugēšanas ātrumu un ilgumu. Lai procedūru optimizētu, šos parametrus vajadzētu pielāgot atbilstoši atsevišķā parauga kvalitātei. 6. Izmantojot jaunu sterilu pipeti, pievienojiet 2,0-3,0 ml piemērota skalošanas materiāla, piemēram, Sperm Washing Medium (IS kataloga Nr. 9983) vai Modified HTF (IS kataloga Nr. 90126) ar proteīna papildinājumu. Suspendējiet atkārtoti izolēto lodīti. Centrifugējiet (ar ~200 g paātrinājumu) 8-10 minūtes un atdaliet supernatantu. Atkārtojiet šo soli, lai veiktu otru skalošanu. Novāciet supernatantu un no jauna suspendējiet lodīti, izmantojot atbilstošu piemērotas barotnes daudzumu. Tagad paraugs ir sagatavots analīzes veikšanai. Lai uzzinātu papildu informāciju par šo produktu lietošanu, katrai laboratorijai jāiepazīstas ar tajā noteiktajām procedūrām un protokoliem, kas īpaši izstrādāti un optimizēti individuālas medicīniskas programmas veikšanai. UZGLABĀŠANAS NORĀDĪJUMI UN STABILITĀTE Neatvērtus konteinerus uzglabāt atdzesētus no 2º līdz 8º C temperatūrā. Pirms lietošanas sasildiet līdz apkārtējās vides vai inkubatora (37°C) temperatūrai. Nesaldēt un nepakļaut augstu temperatūru iedarbībai. Uzglabājot, kā norādīts, ISolate saglabā stabilitāti līdz derīguma termiņam, kas norādīts uz kastes un uz pudeļu marķējuma. PIESARDZĪBAS PASĀKUMI UN BRĪDINĀJUMI Šo ierīci ir paredzēts izmantot personālam, kas ir apmācīts tādu procedūru veikšanai, kuras ietver norādīto izmantošanu, kurai šī ierīce ir paredzēta. ISolate izskatīsies necaurspīdīgs. Šim produktam tas ir normāli. Nelietot nevienu flakonu ar barotni, kurā saskatāmas vielas daļiņas vai piesārņojums (neviendabīgs duļķainums). ISolate cieši jānoslēdz ar aizbāzni, lietojot CO2 inkubatorā, lai nepieļautu pH līmeņa izmaiņas. Šis produkts nesatur konservantus, antibiotikas vai proteīna piedevas. Lai izvairītos no kontaminācijas problēmām, rīkojoties izmantojiet aseptiskas tehnikas. Ja bojāts, nelietot. Lūdzu, likvidējiet vai nosūtiet atpakaļ ražotājam atvietošanai. BRĪDINĀJUMS: Federālie (ASV) likumi pieļauj šīs ierīces tirdzniecību vienīgi ārstiem vai ar viņu norīkojumu. O ISolate é uma suspensão coloidal de partículas de sílica estabilizada com silano hidrofílico unido covalentemente em HTF tamponado com HEPES, que foi filtrado através de membrana e processado em condições estéreis. O nivel de garantia de esterilidade (SAL) é de 10-3. O ISolate foi testado para pirogénios com resultados negativos pelo teste de pirogénios no coelho. INSTRUÇÕES DE UTILIZAÇÃO Nº de Catálogo 99264 – SÍLICA COLOIDAL P R O N TA PA R A U T I L I Z A R A D U A S CONCENTRAÇÕES (50% E 90%) A. Material sugerido: ISolate • Irvine Scientific, Nº catálogo 99264 (kit de recipientes de6mL, 50mL ou kit de recipientes de 100mL) Meio de lavagem dos espermatozóides • Irvine Scientific, Nº catálogo 9983 Tubos de centrífuga cónicos estéreis e descartáveis • Irvine Scientific, Nº catálogo IS-325 Pipetas Pasteur, estéreis Centrífuga Incubadora a 37ºC B. Preparação do gradiente: Não são necessárias diluições preliminares. Cada recipiente de camada de gradiente superior e inferior está pronta para utilizar. Continue com a secção “PROCEDIMENTOS GERAIS” Nº de Catálogo 99275 – SOLUÇÃO STOCK Meio de gradiente de densidade a 90% para ser utilizado em protocolos de uma só etapa ou para posteriores diluições. A. Material sugerido: ISolate - Solução Stock • Irvine Scientific, Nº Cat. 99275 Meio HTF modificado • Irvine Scientific, Nº Cat. 90126 Meio de lavagem dos espermatozóides • Irvine Scientific, Nº Cat. 9983 Tubos de centrífuga cónicos estéreis e descartáveis • Irvine Scientific, Nº Cat. IS-325 Pipetas Pasteur, estéreis Centrífuga Incubadora a 37ºC B. Preparação do gradiente: Para levar a cabo uma separação de espermatozóides por gradiente necessitam-se de duas soluções: a camada superior e a camada inferior. 1. Solução da camada superior: 50% a. Pipetar da SOLUÇÃO STOCK (Nº Cat. 99275) 5,6mL para um tubo de centrífuga estéril. b. Adicionar 4,4 mL de HTF modificado (Nº Cat. 90126) c. Tapar o tubo e inverter suavemente 3 ou 4 vezes para permitir uma mistura completa. d. Etiquetar o tubo como “CAMADA SUPERIOR”. 2. Solução da camada inferior: 90% a. Inserir uma alíquota de 10mL da SOLUÇÃO STOCK num tubo estéril de centrífuga e tapá-lo. (Não são necessárias mais diluições. A solução stock está a 90%). b. Etiquetar o tubo como “CAMADA INFERIOR”. 3. Continuar na secção de “PROCEDIMENTOS GERAIS”. (Nota: 10 ml da “CAMADA SUPERIOR” e 10 ml da “CAMADA INFERIOR” processam aproximadamente 5 amostras de sémen) Nº de Catálogo 99306 – CONCENTRADO Concentrado de sílica coloidal para posteriores diluições em gradientes de densidade; formulado num tampão isotónico, aproxima-se da densidade do Percoll não diluído. O ISolate Concentrado foi avaliado em gradientes de 50% e 90% de acordo com este folheto informativo de produto. Cada laboratório pode escolher preparar os gradientes a concentrações diferentes, os quais devem ser previamente avaliados para a sua eficácia. A. Material sugerido: ISolate - Concentrado • Irvine Scientific, Nº Cat. 99306 Meio HTF modificado • Irvine Scientific, Nº Cat. 90126 Meio de lavagem dos espermatozóides • Irvine Scientific, Nº Cat. 9983 Tubos de centrífuga cónicos estéreis e descartáveis • Irvine Scientific, Nº Cat. IS-325 Pipetas Pasteur, estéreis Centrífuga Incubadora a 37ºC B. Preparação do gradiente: Para levar a cabo uma separação de espermatozóides por gradiente necessitam-se de duas soluções: a camada superior e a camada inferior. 1. Solução da camada superior: 50% a. Pipetar 4,5 mL do CONCENTRADO (Nº Cat. 99306) para um tubo de centrífuga estéril. b. Adicionar 5,5 mL de HTF modificado (Nº Cat. 90126) c. Tapar o tubo e inverter suavemente 3 ou 4 vezes para permitir uma mistura completa. d. Etiquetar o tubo como “CAMADA SUPERIOR”. 2. Solução da camada inferior: 90% a. Pipetar 8,1 mL do CONCENTRADO (Nº Cat. 99306) para um tubo de centrífuga estéril. b. Adicionar 1,9 mL de HTF modificado (Nº Cat. 90126) c. Tapar o tubo e inverter suavemente 3 ou 4 vezes para permitir uma mistura completa. d. Etiquetar o tubo como “CAMADA INFERIOR”. 3. Continue na secção de “PROCEDIMENTOS GERAIS”. Nota: Os valores 50% e 90% não representam uma conc tração real. Os valores 50% e 90% são concentrações relativas baseadas numa nomenclatura anterior que definia uma solução 1:9 de Percoll® como uma solução de trabalho isotónica a 100%. PROCEDIMENTOS GERAIS O protocolo que aqui se descreve é um procedimento geral para separar do sémen a fracção móvel dos espermatozoides através de um gradiente. O volume e a concentração podem-se modificar para ajustar-se às preferências de cada laboratório (p.ex. mini-gradiente, sémen crioconservado, gradiente de 3 camadas). 1. Coloque todos os meios à temperatura ambiente ou a 37ºC. 2. Utilizando uma pipeta estéril, transferir 1,5 – 2,0 mL de meio da “CAMADA INFERIOR” para um tubo de centrífuga cónico, estéril e descartável. 3. Utilizando outra pipeta estéril, transferir um volume igual ao do passo 1 de “CAMADA SUPERIOR” para a “CAMADA INFERIOR”. Para isso, colocar a ponta da pipeta na parte superior da “CAMADA INFERIOR” tocando na parede do tubo. Distribuir cuidadosamente a “CAMADA SUPERIOR” movendo a pipeta em círculos em redor da circunferência do tubo subindo à medida que aumenta o nível da “CAMADA SUPERIOR”. 4. Coloque suavemente 1,5 – 2,0 mL de sémen liquefeito sobre a “CAMADA SUPERIOR” com outra pipeta estéril. ČESKY ΕΛΛΗΝΙΚΆ PORTUGUÊS Descrição do Produto O ISolate ® é um meio de gradiente de densidades concebido para separar a fracção móvel do espermatozóide do fluído seminal. Como um sistema de gradiente de duas camadas, reduz eficazmente os contaminantes celulares como espermatozóides mortos, leucócitos e outros restos. 5. Centrifugar durante 10-20 minutos a 200-300 x g*. Cuidadosamente, exponha o sedimento quer através da aspiração das “CAMADAS SUPERIORES E INFERIORES”, ou directamente removendo o sedimento e transferindo-o para um novo tubo de centrífuga estéril. * Nota: a qualidade da amostra de espermatozóides deve ser avaliada e tomada em consideração para determinar o tempo e a velocidade de centrifugação adequadas. Estes parâmetros devem ajustar-se conforme a qualidade individual da amostra para optimizar o processo. 6. Utilizando uma nova pipeta estéril, adicionar 2.0 – 3.0 mL de meio de lavagem adequado como o Meio de Lavagem de Espermatozóides (IS Nº Cat 9983) ou HTF modificado (IS Nº Cat 90126) com suplemento proteico. Ressuspender o sedimento. Centrifugar (aprox. 200xg) 8-10 minutos e descartar o sobrenadante. Repetir este passo para numa segunda lavagem. Descartar o sobrenadante e ressuspender o sedimento utilizando um volume adequado de meio. A amostra está pronta para análise. Para detalhes adicionais sobre a utilização destes produtos, o laboratório deve consultar os seus próprios procedimentos padrão e protocolos que foram especificamente desenvolvidos e optimizados para a sua instituição. I N S T R U Ç Õ E S D E C O N S E R VA Ç Ã O E ESTABILIDADE Conserve os recipientes fechados refrigerados entre 2ºC e 8ºC. Aqueça à temperatura ambiente ou numa incubadora (37ºC) antes de utilizar. Não congele ou exponha a temperaturas altas. O ISolate é estável até à data de expiração indicada no rótulo do recipiente, sempre que seja conservado de acordo com as instruções recomendadas. PRECAUÇÕES E ADVERTÊNCIAS Este dispositivo deve ser utilizado por funcionários treinados em procedimentos aos quais se destina. O ISolate tem um aspecto opaco. Isto é normal para este produto. Não utilize nenhum recipiente de meio com evidências de conter partículas ou contaminação (turvação não homogénea). Os recipientes de ISolate devem estar hermeticamente fechados quando se utilizar uma incubadora de CO2 para evitar alterações de pH. Este meio não contém conservantes, antibióticos nem suplementos proteicos. Para evitar contaminações, manipule o produto em condições de esterilidade. E m caso de alteração do meio, não o utilize. Por favor, descarte-o o devolva-o ao fabricante para que seja substituído. CUIDADO: As leis federais dos EUA, restringem a venda deste dispositivo, apenas a médicos ou por sua prescrição. ΠΕΡΙΓΡΑΦΗ ΠΡΟΪΟΝΤΟΣ Το ISolate® είναι ένα μέσο κλίσης πυκνότητας σχεδιασμένο για διαχωρισμό του κινητικού κλάσματος του σπέρματος από το σπερματικό υγρό. Ως σύστημα κλίσης δύο στρωμάτων, μειώνει δραστικά τις κυτταρικές μολυσματικές ουσίες, όπως το νεκρό σπέρμα, τα λευκά αιμοσφαίρια και διάφορα υπολείμματα.Το δείγμα που προκύπτει περιέχει κυρίως κινητικό σπέρμα. Το ISolate είναι ένα φιλτραρισμένο με μεμβράνη, ασηπτικά επεξεργασμένο κολλοειδές αιώρημα από μόρια πυρίτιας σταθεροποιημένα με υδρόφιλο σιλάνιο με ισοσθενή δεσμό σε HEPES-ρυθμιστικό HTF. Το επίπεδο διασφάλισης αποστείρωσης (SAL) είναι 10-3. Το ISolate έχει ελεγχθεί και αποδειχθεί αρνητικό για πυρετογόνα από την εξέταση πυρετογόνων σε λαγούς. ΟΔΗΓΙΕΣ ΧΡΗΣΗΣ Αρ. Καταλόγου 99264 – ΕΤΟΙΜΗ ΓΙΑ ΧΡΗΣΗ ΚΟΛΛΟΕΙΔΗΣ ΠΥΡΙΤΙΑ ΣΕ ΔΥΟ ΣΥΓΚΕΝΤΡΩΣΕΙΣ (50% και 90%) A. Προτεινόμενα Υλικά: ISolate • Irvine Scientific Κατάλογος #99264 (6ml, 50ml ή 100 ml κιτ φιαλιδίων) Sperm Washing Medium • Irvine Scientific Κατάλογος #9983 Αποστειρωμένοι, κωνικοί σωλήνες φυγόκεντρου μιας χρήσης • Irvine Scientific Κατάλογος #IS-325 Πιπέτες Παστέρ, αποστειρωμένες Φυγόκεντρος Επωαστήρας, 37°C B. Προετοιμασία Κλίσης: Δεν χρειάζονται προκαταρκτικά διαλύματα. Κάθε φιαλίδιο κλίσης άνω και κάτω στρώματος είναι έτοιμο για χρήση. Προχωρήστε στο μέρος της ΓΕΝΙΚΗΣ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑΣ του φυλλαδίου του προϊόντος. Αρ. Καταλόγου 99275 - STOCK SOLUTION 90% πυκνότητας μέσο κλίσης για χρήση σε διαδικασία ενός βήματος ή για περαιτέρω διάλυση. A. Προτεινόμενα Υλικά: ISolate Stock Solution • Irvine Scientific Κατάλογος #99275 Modified Human Tubal Fluid • Irvine Scientific Κατάλογος #90126 Sperm Washing Medium • Irvine Scientific Κατάλογος #9983 Αποστειρωμένοι, κωνικοί σωλήνες φυγόκεντρου μιας χρήσης • Irvine Scientific Κατάλογος #IS-325 Πιπέτες Παστέρ, αποστειρωμένες Φυγόκεντρος Επωαστήρας, 37°C B. Προετοιμασία Κλίσης: Χρειάζονται δύο διαλύματα για την μέθοδο διαχωρισμού σπέρματος κλίσης: Ένα άνω και ένα κάτω στρώμα. Πάνω και κάτω στρώμα. 1.) Διάλυμα Άνω Στρώματος - 50%: α) Πάρτε STOCK SOLUTION (αρ. Καταλόγου 99275) και πιπεταρίστε 5.6 ml σε αποστειρωμένο σωλήνα φυγόκεντρου β) Προσθέστε 4.4 ml από Modified Human Tubal Fluid (αρ. Καταλόγου 90126) γ) Κλείστε τον σωλήνα και αναποδογυρίστε το απαλά 3-4 φορές για να επιτραπεί η πλήρης ανάδευση δ) Αναγράψτε στην ετικέτα του σωλήνα «ΑΝΩ ΣΤΡΩΜΑ» 2. Διάλυμα Κάτω Στρώματος - 90%: α) Υποπολλαπλασιάστε 10 ml του STOCK SOLUTION σε αποστειρωμένο σωλήνα φυγόκεντρου και σφραγίστε το – (Δεν χρειάζονται άλλες διαλύσεις - STOCK SOLUTION είναι 90%) β) Βάλτε ετικέτα στον σωλήνα ως «ΚΑΤΩ ΣΤΡΩΜΑ» 3. Συνεχίστε στο τμήμα ΓΕΝΙΚΗ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑ του φυλλαδίου του προϊόντος. (ΣΗΜΕΙΩΣΗ: 10 ml Άνω Στρώματος και 10 ml Κάτω Στρώματος, επεξεργάζονται κατά προσέγγιση 5 δείγματα σπέρματος.) Αρ. Καταλόγου 99306 - CONCENTRATE Συμπύκνωμα κολλοειδούς πυρίτιας για περαιτέρω διάλυση σε κλίσεις πυκνότητας. Σχηματίζεται σε ισοτονικό ρυθμιστικό διάλυμα και προσεγγίζει την πυκνότητα μη αραιωμένου Percoll®. Το ISolate® CONCENTRATE αξιολογήθηκε σύμφωνα με αυτό το φυλλάδιο συσκευασίας σε κλίσεις 50% και 90% . Κάθε εργαστήριο μπορεί να επιλέξει να δημιουργήσει κλίσεις με διαφορετικές συγκεντρώσεις που θα πρέπει να αξιολογηθούν για αποτελεσματικότητα. A. Προτεινόμενα Υλικά: ISolate® Συμπύκνωμα • Irvine Scientific Κατάλογος #99306 Modified Human Tubal Fluid • Irvine Scientific Κατάλογος #90126 Sperm Washing Medium • Irvine Scientific Κατάλογος #9983 Αποστειρωμένοι, κωνικοί σωλήνες φυγόκεντρου μιας χρήσης • Irvine Scientific Κατάλογος #IS-325 Πιπέτες Παστέρ, αποστειρωμένες Φυγόκεντρος Επωαστήρας, 37°C B. Προετοιμασία Κλίσης: Χρειάζονται δύο διαλύματα για την μέθοδο διαχωρισμού σπέρματος κλίσης: Ένα άνω και ένα κάτω στρώμα. 1. Διάλυμα Άνω Στρώματος - 50%: α) Πάρτε CONCENTRATE (αρ. Καταλόγου 99306) και πιπεταρίστε 4.5 ml σε αποστειρωμένο σωλήνα φυγόκεντρου β) Προσθέστε 5.5 ml από Modified Human Tubal Fluid (αρ. Καταλόγου 90126) γ) Κλείστε τον σωλήνα και αναποδογυρίστε το απαλά 3-4 φορές για να επιτραπεί η πλήρης ανάδευση δ) Αναγράψτε στην ετικέτα του σωλήνα «ΑΝΩ ΣΤΡΩΜΑ» 2. Διάλυμα Κάτω Στρώματος - 90%: α) Πάρτε CONCENTRATE (αρ. Καταλόγου 99306) και πιπεταρίστε 8.1 ml σε αποστειρωμένο σωλήνα φυγόκεντρου β) Προσθέστε 1.9 ml από Modified Human Tubal Fluid (αρ. Καταλόγου 90126) γ) Κλείστε τον σωλήνα και αναποδογυρίστε το απαλά 3-4 φορές για να επιτραπεί η πλήρης ανάδευση δ) Αναγράψτε στην ετικέτα του σωλήνα «ΚΑΤΩ ΣΤΡΩΜΑ» 3. Συνεχίστε στο τμήμα ΓΕΝΙΚΗ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑ του φυλλαδίου του προϊόντος. (ΣΗΜΕΙΩΣΗ: 10 ml Άνω Στρώματος και 10 ml Κάτω Στρώματος, επεξεργάζονται κατά προσέγγιση 5 δείγματα σπέρματος.) Σημείωση: Οι όροι 50% και 90% δεν αναφέρονται σε πραγματική συγκέντρωση. Τα 50% και 90% είναι σχετικές συγκεντρώσεις βασισμένες στην προηγούμενη ονοματολογία που όριζε διάλυμα 1:9 από Percoll® ως ίσο με 100% λειτουργικό, ισοτονικό διάλυμα. ΓΕΝΙΚΗ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑ Παρακάτω ακολουθεί η γενική διαδικασία για διαχωρισμό κλίσης δύο βημάτων του κινητού σπερματοζωαρίου από το σπέρμα. Ο όγκος και η συγκέντρωση μπορούν να τροποποιηθούν για να ανταποκρίνονται στις εργαστηριακές προτιμήσεις (δηλ. μινι-κλίση, κρυοσυντηρημένο σπέρμα, κλίση τριών στρωμάτων). 1. Φέρτε όλα τα εξαρτήματα των μέσων σε θερμοκρασία δωματίου ή στους 37°C. 2. Χρησιμοποιώντας αποστειρωμένη πιπέτα, μεταφέρετε 1.5 - 2.0 ml του «ΚΑΤΩ ΣΤΡΩΜΑΤΟΣ» σε αποστειρωμένο, μίας χρήσης, κωνικό φυγόκεντρο σωλήνα. 3. Χρησιμοποιώντας μια νέα αποστειρωμένη πιπέτα, μεταφέρετε ίσο όγκο «ΠΑΝΩ ΣΤΡΩΜΑΤΟΣ» πάνω από το «ΚΑΤΩ ΣΤΡΩΜΑ». Αυτό γίνεται με επαφή της επιφάνειας του «ΚΑΤΩ ΣΤΡΩΜΑΤΟΣ» στο πλάι του σωλήνα με την άκρη της πιπέτας. Διαχύστε προσεκτικά το «ΑΝΩ ΣΤΡΩΜΑ» στροβιλίζοντας την άκρη της πιπέτας γύρω από την περιφέρεια του σωλήνα με κινήσεις προς τα πάνω, καθώς το επίπεδο του «ΑΝΩ ΣΤΡΩΜΑΤΟΣ» ανυψώνεται. 4. Τοποθετήστε απαλά 1.5 - 2.0 ml ρευστοποιημένου σπέρματος στο «ΠΑΝΩ ΣΤΡΩΜΑ» χρησιμοποιώντας νέα αποστειρωμένη πιπέτα. 5. Τοποθετήστε για φυγοκέντρηση για 10-20 λεπτά σε περίπου 200 - 300xg.* Εκθέστε προσεκτικά το συσσωμάτωμα είτε με αναρρόφηση του «ΑΝΩ» και «ΚΑΤΩ ΣΤΡΩΜΑΤΟΣ» ή με άμεση αφαίρεση του και μεταφορά σε νέο αποστειρωμένο σωλήνα φυγόκεντρου. *Σημείωση: Η ποιότητα του δείγματος σπέρματος θα πρέπει να αξιολογείται και να λαμβάνεται υπόψη στον καθορισμό της σωστής ταχύτητας και του χρόνου φυγοκέντρησης. Θα πρέπει να προσαρμοστούν σύμφωνα με την ξεχωριστή ποιότητα δείγματος για βελτιστοποίηση της διαδικασίας. 6. Χρησιμοποιώντας νέα αποστειρωμένη πιπέτα, προσθέστε 2.0 - 3.0 ml κατάλληλου μέσου έκπλυσης όπως το Sperm Washing Medium (IS αρ. Καταλόγου 9983) ή Modified HTF (IS αρ. Καταλόγου 90126) με συμπλήρωμα πρωτεϊνών. Αιωρείστε ξανά το απομονωμένο συσσωμάτωμα. Υποβάλλετε σε φυγοκέντρηση (~200xg) για 8 -10 λεπτά και αφαιρέστε το υπερκείμενο υγρό. Επαναλάβετε αυτό το βήμα για δεύτερη έκπλυση. Απορρίψτε το υπερκείμενο υγρό και αιωρείστε ξανά το συσσωμάτωμα χρησιμοποιώντας κατάλληλο όγκο του κατάλληλου μέσου. Το δείγμα είναι πλέον έτοιμο για ανάλυση. Pro dodatečné podrobnosti o použití těchto výrobků by každá laboratoř měla konzultovat vlastní laboratorní metody a protokoly, které byly vytvořeny a optimalizovány zvlášť pro váš konkrétní zdravotnický program. ΟΔΗΓΙΕΣ ΦΥΛΑΞΗΣ ΚΑΙ ΣΤΑΘΕΡΟΤΗΤΑ Φυλάσσετε τα κλειστά δοχεία σε ψύξη στους 2º έως 8ºC. Θερμάνετε σε θερμοκρασία περιβάλλοντος ή επωαστήρα (37°C) πριν τη χρήση. Μην ψύχετε ή εκθέτετε σε υψηλές θερμοκρασίες. Το ISolate παραμένει σταθερό μέχρι την ημερομηνία λήξης που αναγράφεται στις ετικέτες του κουτιού και των φιαλών, όταν φυλάσσεται σύμφωνα με τις οδηγίες. ΠΡΟΦΥΛΑΞΕΙΣ ΚΑΙ ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΕΙΣ Η συσκευή αυτή προορίζεται για χρήση από προσωπικό που έχει εκπαιδευτεί σε διαδικασίες που περιλαμβάνουν τη συγκεκριμένη εφαρμογή για την οποία προορίζεται η συσκευή. Το ISolate έχει αδιαφανή εμφάνιση. Αυτό είναι φυσιολογικό για το συγκεκριμένο προϊόν. Μην κάνετε χρήση φιαλιδίου μέσου που παρουσιάζει ύπαρξη σωματιδίων ή μολυσματικών ουσιών (μη ενιαία θολότητας). Το ISolate πρέπει να είναι καλά κλειστό όταν χρησιμοποιείται σε επωαστήρα CO2, για να αποφεύγονται οι αλλαγές pH. Το προϊόν δεν περιέχει συντηρητικά, αντιβιοτικά ή συμπληρώματα πρωτεϊνών. Για να αποφύγετε προβλήματα μόλυνσης, χρησιμοποιήστε ασηπτικές τεχνικές. Σε περίπτωση ζημιάς, μην χρησιμοποιείτε. Παρακαλούμε απορρίψτε ή επιστρέψτε στον Παρασκευαστή για αντικατάσταση. ΠΡΟΣΟΧΗ: Η ομοσπονδιακή (Η.Π.Α.) νομοθεσία περιορίζει αυτή τη συσκευή σε πώληση από ή κατά εντολή γιατρού. POPIS VÝROBKU ISolate® je médium gradientu hustoty zhotovené na oddělení motilní frakce spermií ze semenné kapaliny. Protože je to dvouvrstevný gradientní systém, efektivně snižuje buňkovou kontaminaci jako např. odumřelé spermie, bílé krevní buňky a jiné nečistoty. Výsledný vzorek obsahuje většinou motilní spermie. ISolate asepticky zpracovaná koloidní suspenze křemíkových částic, filtrovaná přes membránu a stabilizovaná kovalentně vázaným hydrofilním silanem v pufrovaném HEPES HTF. Hladina zaručené sterilizace (SAL) je 10-3. ISolate bylo testováno a shledáno negativním na pyrogeny při pyrogenním testu provedeném na laboratorním králíkovi. NÁVOD K POUŽITÍ Kat. č. 99264 – KOLOIDNÍ KŘEMÍK VE DVOU KONCENTRACÍCH (50 % a 90 %) K OKAMŽITÉMU POUŽITÍ A. Doporučený materiál: ISolate • Irvine Scientific Katalog #99264 (sada 6ml, 50ml nebo 100 ml ampulek ) Sperm Washing Medium • Irvine Scientific Katalog #9983 Sterilní kónické odstředivkové trubičky • Irvine Scientific Katalog #IS-325 Sterilní pipety Pasteur Odstředivka Inkubátor, 37 °C B. Příprava gradientu: Žádné předběžné ředění není nutné. Každá ampulka gradientu horní a spodní vrstvy je připravena na použití. Pokračujte až po část příbalového letáku nazvanou OBECNÁ METODA. Kat. č. #99275 - ZÁSOBNÍ ROZTOK Médium s 90% gradientem hustoty na použití v jednokrokové proceduře nebo na další ředění. A. Doporučený materiál: ISolate STOCK SOLUTION • Irvine Scientific Katalog #99275 Modified Human Tubal Fluid • Irvine Scientific Katalog #90126 Sperm Washing Medium • Irvine Scientific Katalog #9983 Sterilní kónické odstředivkové trubičky • Irvine Scientific Katalog #IS-325 Sterilní pipety Pasteur Odstředivka Inkubátor, 37 °C B. Příprava gradientu: Jsou potřeba dva roztoky na provedení metody gradientní separace spermií: horní vrstvy a spodní vrstvy. Horní vrstva a spodní vrstva. 1. Roztok horní vrstvy – 50 %: a.) Napipetujte 5,6 ml koncentrátu CONCENTRATE (kat. č. 99275) do sterilní odstředivkové trubičky. b) Přidejte 4,4 ml Modified Human Tubal Fluid (kat. č. 90126) c) Zazátkujte zkumavku a opatrně ji převraťte 3-4krát, aby došlo k celkovému promíchání. d) Označte trubičku „HORNÍ VRSTVA“ 2. Roztok spodní vrstvy – 90 %: a) Nadávkujte alikvotní podíl 10 ml roztoku STOCK SOLUTION do sterilní odstředivkové trubičky se zátkou – (Dalšího ředění není třeba - STOCK SOLUTION je 90%) b) Označte trubičku “SPODNÍ VRSTVA“ 3. Pokračujte až po část příbalového letáku výrobku nazvanou ZÁKLADNÍ POSTUP. (POZNÁMKA: 10 ml Horní vrstvy a 10 ml Spodní vrstvy zpracuje přibližně 5 vzorků sperma.) Kat. č. #99306 - KONCENTRÁT Koncentrát koloidního křemíku pro další ředění na gradienty hustoty; je formulován v izotonickém pufru a má přibližnou hustotu neředěného přípravku Percoll®. ISolate® CONCENTRATE byl hodnocen podle tohoto příbalového letáku při 50% a 90% gradientech. Každá laboratoř si může zvolit vytvoření gradientů různých koncentrací, jejichž efektivnost by měla být ohodnocena. A. Doporučený materiál: Koncentrát ISolate® • Irvine Scientific Katalog #99306 Modified Human Tubal Fluid • Irvine Scientific Katalog #90126 Sperm Washing Medium • Irvine Scientific Katalog #9983 Sterilní kónické odstředivkové trubičky • Irvine Scientific Katalog #IS-325 Sterilní pipety Pasteur Odstředivka Inkubátor, 37 °C B. Příprava gradientu: Jsou potřeba dva roztoky na provedení metody gradientní separace spermií: horní vrstvy a spodní vrstvy. 1. Roztok horní vrstvy – 50 %: a) Napipetujte 4,5 ml CONCENTRATE (kat. č. 99306) do sterilní odstředivkové trubičky. b) Přidejte 5,5 ml Modified Human Tubal Fluid (kat. č. 90126) c) Zazátkujte zkumavku a opatrně ji převraťte 3-4krát, aby došlo k celkovému promíchání. d) Označte trubičku „HORNÍ VRSTVA“ 2. Roztok spodní vrstvy – 90 %: a) Napipetujte 8,1 ml CONCENTRATE (kat. č. 99306) do sterilní odstředivkové trubičky. b) Přidejte 1,9 ml Modified Human Tubal Fluid (kat. č. 90126) c) Zazátkujte zkumavku a opatrně ji převraťte 3-4krát, aby došlo k celkovému promíchání. d) Označte trubičku „SPODNÍ VRSTVA“ 3. Pokračujte až po část příbalového letáku výrobku nazvanou ZÁKLADNÍ POSTUP. (POZNÁMKA: 10 ml Horní vrstvy a 10 ml Spodní vrstvy zpracuje přibližně 5 vzorků sperma.) Poznámka: Hodnoty 50 % a 90 % nepředstavují skutečné koncentrace. 5 0% a 90 % jsou relativní koncentrace založené na dřívější terminologii, která definovala poměr 1:9 ředění přípravku Percoll ® jako rovnající se 100% účinnému isotonickému roztoku. OBECNÁ METODA Následující je obecný postup na dvoukrokovou gradientní separaci motilní spermie od spermatu. Objem a koncentrace mohou být upraveny, aby splňovaly preference každé laboratoře (např. mini-gradient, kryoprezervované semeno, trojvrstevní gradient). 1. Vytemperujte všechny složky média na pokojovou teplotu nebo na 37 °C. 2. Pomocí sterilní pipety převeďte 1,5 – 2,0 ml „SPODNÍ VRSTVY“ do sterilní, kónické odstředivkové trubičky na jedno použití. 3. Pomocí nové sterilní pipety převeďte stejný objem „HORNÍ VRSTVY“ na horní část „SPODNÍ VRSTVY“. Provádí se to dotykem povrchu „SPODNÍ VRSTVY” na straně zkumavky hrotem pipety. Opatrně dávkujte „HORNÍ VRSTVU“ kroužením hrotu pipety kolem obvodu trubičky pohybem směrem nahoru zatímco se hladina „HORNÍ VRSTVY“ bude zvedat. 4. Opatrně umístěte 1,5 – 2,0 ml zkapalněného spermatu do „HORNÍ VRSTVY“ pomocí nové sterilní pipety. 5. Odstřeďte 10-20 minut při odstředivé síle kolem 200 300xg.* Opatrně odhalte granuli buď aspirací „HORNÍ“ a „SPODNÍ VRSTVY“ nebo vyjměte granuli přímo a přeneste ji do nové sterilní odstředivkové trubičky. *Poznámka: Kvalita vzorku spermií by měla být zhodnocena a brána v úvahu při určování správné rychlosti odstředivky a doby odstředění. Měly by být upraveny podle kvality individuálních vzorků pro optimalizaci procedury. 6. Pomocí nové sterilní pipety přidejte 2,0 – 3,0 ml mycího média jako např. Sperm Washing Medium (IS kat. č. 9983) nebo Modified HTF (IS kat. č. 90126) s proteinovým suplementem. Resuspendujte separovanou granuli. Odstřeďte (~200xg) po dobu 8 -10 minut a odeberte supernatant. Zopakujte tento krok pro druhé promytí. Odstraňte supernatant a resuspendujte granuli pomocí vhodného objemového množství náležitého média. Vzorek je nyní připraven pro analýzu. Pro dodatečné podrobnosti o použití těchto výrobků by každá laboratoř měla konzultovat vlastní laboratorní metody a protokoly, které byly vytvořeny a optimalizovány zvlášť pro váš konkrétní zdravotnický program. POKYNY PRO SKLADOVÁNÍ A STÁLOST Skladujte neotevřené nádoby v lednici při 2 º až 8 ºC. Ohřejte na okolní teplotu nebo na teplotu inkubátoru (37 °C) před použitím. Nezmrazujte a nevystavujte vysokým teplotám. Při doporučeném skladování je ISolate stabilní do expirační doby, která je vyznačena na štítcích kartónu a láhve. VAROVÁNÍ A BEZPEČNOSTNÍ OPATŘENÍ Zařízení bylo určeno pro použití školeným personálem při zákrocích, které zahrnují indikovanou aplikaci, pro kterou je zařízení určeno. ISolate se bude jevit neprůhledné. Je to pro tento výrobek normální. Nepoužívejte žádné ampulky média, které jeví známky přítomnosti částic hmoty nebo nečistot (nerovnoměrně zakalené). ISolate by mělo být těsně uzavřeno, pokud bude používáno v CO2 inkubátoru, aby se předešlo změnám pH . Tento výrobek neobsahuje žádné konzervační látky, antibiotika, ani protein nebo jiné suplementy. Vyhněte se problémům kontaminace, při práci dodržujte aseptické metody. V případě poškození nepoužívejte. Likvidujte nebo zašlete výrobci na výměnu. POZOR: Federální zákony USA omezují prodej tohoto zařízení pouze na lékaře nebo na jeho předpis. ISolate er en membranfiltreret, aseptisk behandlet kolloid suspension af silicapartikler stabiliseret med kovalent bundet hydrofilt silan i HEPES-bufret HTF. Sterilitetssikringsniveauet (SAL) er 10-3. ISolate er blevet testet med en kaninpyrogentest og fundet pyrogentfrit. BRUGSANVISNING Katalognr. 99264 – BRUGSKLART KOLLOID SILIKA I TO KONCENTRATIONER (50 % og 90 %) A. Anbefalede materialer: ISolate • Irvine Scientific katalognr. 99264 (sæt med 6 ml, 50ml- eller 100 ml-hætteglas) Sperm Washing Medium • Irvine Scientific katalognr. 9983 Sterile, koniske centrifugerør til engangsbrug • Irvine Scientific katalognr. IS-325 Pasteurpipetter, sterile Centrifuge Inkubator, 37 ºC B. Forberedelse af gradientopløsning: Forudgående fortynding er ikke nødvendig. Hvert hætteglas med øverste eller underste lag gradient er klar til brug. Forsæt med afsnittet GENEREL PROCEDURE på indlægssedlen. Katalognr. 99275 – STOCK SOLUTION Medium med 90 % densitetsgradient til brug i en ét-trinsprocedure eller til yderligere fortynding. A. Anbefalede materialer: ISolate Stock Solution • Irvine Scientific katalognr. 99275 Modified Human Tubal Fluid • Irvine Scientific katalognr. 90126 Sperm Washing Medium • Irvine Scientific katalognr. 9983 Sterile, koniske centrifugerør til engangsbrug • Irvine Scientific katalognr. IS-325 Pasteurpipetter, sterile Centrifuge Inkubator, 37 ºC B. Forberedelse af gradientopløsning: Der kræves to opløsninger til at udføre gradientseparation af sæd: Et øverste lag og et nederste lag. 1. Opløsning i øverste lag - 50 %. a) Tag STOCK SOLUTION (katalognr. 99275) og pipetter 5,6 ml ned i et sterilt centrifugerør b) Tilsæt 4,4 ml Modified Human Tubal Fluid (katalognr. 90126) c) Sæt låg på røret og vend det forsigtigt 3-4 gange for at blande helt d) Skriv “ØVERSTE LAG” på rørets etiket 2. Opløsning i nederste lag - 90 %. a) Tag 10 ml STOCK SOLUTION op i et sterilt centrifugerør og sæt låg på - (det er ikke nødvendigt at fortynde yderligere - STOCK SOLUTION er 90 %) b) Skriv “NEDERSTE LAG” på rørets etiket 3. Forsæt med afsnittet GENEREL PROCEDURE på indlægssedlen. (BEMÆRK: 10 ml af det øverste lag og 10 ml af det nederste lag kan behandle ca. 5 sædprøver). 6. Brug en ny, steril pipette og tilsæt 2,0-3,0 ml af et passende vaskemedium såsom Sperm Washing Medium (IS katalognr. 9983) eller Modified HTF (IS katalognr. 90126) med tilsat protein. Resuspender de isolerede sædceller (pellet). Centrifuger (~ 200 xg) i 8-10 minutter og fjern supernatanten. Gentag dette trin og vask en gang til. Bortskaf supernatanten og resuspender sædcellerne (pellet) vha. en egnet volumen af passende medium. Prøven er nu klar til analysering. For yderligere oplysninger om brug af disse produkter skal hvert laboratorium henvise til egne procedurer og protokoller, som er blevet specifikt udviklet og optimeret til laboratoriets eget, medicinske program. ANVISNINGER ANG OPBEVARING OG STABILITET Uåbnede beholdere opbevares nedkølet ved 2-8 ºC. Opvarm til stuetemeperatur eller inkubatortemperatur (37 °C) inden brug. Må ikke nedfryses eller udsættes for høje temperaturer. ISolate er stabilt indtil udløbsdatoen på æskens og flaskens etiket, når det opbevares som anvist. FORHOLDSREGLER OG ADVARSLER Dette udstyr er beregnet til brug af personale, der er uddannet i procedurer, der inkluderer den indicerede anvendelse, som dette udstyr er beregnet til. ISolate er uigennemsigtigt. Det er normalt for dette produkt. Anvend ikke hætteglas med medium, der indeholder partikler eller viser tegn på at være kontamineret (uensartede uklarheder). Låget på ISolate skal sidde tæt til, hvis det skal bruges i en CO2-inkubator, for at undgå ændringer i pH-værdien. Dette produkt indeholder ingen konserveringsmidler, antibiotika eller proteinsupplementer. Undgå problemer med kontamination ved at bruge aseptiske teknikker. Må ikke anvendes i tilfælde af beskadigelse. Bortskaf eller returner til producenten med henblik på udskiftning. FORSIGTIG: Ifølge amerikansk lov (USA) må dette produkt kun sælges af eller efter ordination af en læge. TUOTTEEN KUVAUS ISolate ® on tiheysgradienttiliuos, jota käytetään erottamaan motiilien siittiöiden osa siemennesteestä. Kaksikerroksisena gradienttijärjestelmänä se tehokkaasti vähentää solukontaminantteja, kuten kuolleita siittiöitä, valkoisia verisoluja ja vastaavia jätteitä. Tuloksena saatu näyte sisältää pääasiassa motiileja siittiöitä. ISolate – HEPES on kalvosuodatettu ja aseptisesti käsitelty kolloidisuspensio, jossa silikahiukkaset on stabiloitu kovalenttisidoksessa hydrofiilisen silaanin kanssa HEPESpuskuroidussa HTF:ssä. Steriilisyystaso (SAL) on 10-3. ISolate on testattu ja todettu pyrogeeneille negatiiviseksi kanin pyrogeenitestissä. KÄYTTÖOHJEET L u e t t e l o n r o 9 9 2 6 4 - K Ä Y T T ÖVA L M I S KOLLOIDINEN SILIKA KAHDESSA PITOISUUDESSA (50 % ja 90 %) A. Suositellut materiaalit: ISolates • Irvine Scientific luettelonro 99264 (6ml:n, 50ml tai 100 ml:n pullopakkaus) Sperm Washing Medium • Irvine Scientific luettelonro 9983 Steriilit kertakäyttöiset kartiomaiset sentrifugiputket • Irvine Scientific luettelonro IS-325 Pasteur -pipetit, steriilit Sentrifugi Inkubaattori, 37 °C B. Gradientin valmistus: Alustavia laimennuksia ei tarvita. Kukin ylemmän tai alemman kerroksen gradienttipullo on käyttövalmis. Siirry tuote-esitteen osaan YLEISET TOIMENPITEET. Luettelonro 99275 - STOCK SOLUTION 90 %:n tiheysgradienttinen ravintoliuos, jota käytetään yksivaiheisessa toimenpiteessä tai lisälaimennuksessa. A. Suositellut materiaalit: ISolate STOCK SOLUTION • Irvine Scientific luettelonro 99275 Modified Human Tubal Fluid • Irvine Scientific luettelonro 90126 Sperm Washing Medium • Irvine Scientific luettelonro 9983 Steriilit kertakäyttöiset kartiomaiset sentrifugiputket • Irvine Scientific luettelonro IS-325 Pasteur -pipetit, steriilit Sentrifugi Inkubaattori, 37 °C B. Gradientin valmistus: Siittiöiden gradienttierotteluun tarvitaan kaksi liuosta: ylempi kerros ja alempi kerros. 1. Ylemmän kerroksen liuos 50 %. a) Ota STOCK SOLUTIONia (luettelonro 99275) ja pipetoi 5,6 ml steriiliin sentrifugiputkeen. b) Lisää 4,4 ml Modified Human Tubal Fluidia (luettelonro 90126). c) Sulje putki ja käännä se varovasti ylösalaisin 3 - 4 kertaa, jotta se saa täysin sekoittua. d) Merkitse putkeen “YLEMPI KERROS” 2. Alemman kerroksen liuos – 90 %. a) Jaa tasan 10 ml STOCK SOLUTIONia steriiliin sentrifugiputkeen ja sulje se – (Lisälaimennuksia ei tarvita -STOCK SOLUTION on 90-prosenttista). b) Merkitse putkeen “ALEMPI KERROS” 3. Jatka tuote-esitteen osaan YLEISET TOIMEN PITEET. (HUOM: 10 ml ylempää ja 10 ml alempaa kerrosta riittää noin 5:n siemennestenäytteen käsittelyyn.) Katalognr. 99306 – CONCENTRATE Koncentrat af kolloid silika til yderligere fortynding i densitetsgradienter; formuleret i en isotonisk buffer og svarende til densiteten af ufortyndet Percoll®. ISolate® CONCENTRATE er blevet evalueret ifølge denne indlægsseddel ved 50 % og 90 % gradienter. Hvert laboratorium kan vælge at lave gradienter i forskellige koncentrationer, som bør evalueres med henblik på effektivitet. Luettelonro 99306 - CONCENTRATE Kolloidisilikatiiviste, jolla saadaan aikaan laimennus tiheysgradientteihin; formuloitu isotonisessa puskurissa ja vastaa suunnilleen laimentamattoman Percoll®in tiheyttä. ISolate® CONCENTRATE on arvioitu pakkauksen esitteen mukaisesti 50 %- ja 90 %-gradienttia vastaaviksi. Kukin laboratorio voi valmistaa gradientteja eri pitoisuuksilla, joiden tehokkuus tulee arvioida. A. Anbefalede materialer: ISolate® koncentrat • Irvine Scientific katalognr. 99306 Modified Human Tubal Fluid • Irvine Scientific katalognr. 90126 Sperm Washing Medium • Irvine Scientific katalognr. 9983 Sterile, koniske centrifugerør til engangsbrug • Irvine Scientific katalognr. IS-325 Pasteurpipetter, sterile Centrifuge Inkubator, 37 ºC A. Suositellut materiaalit: ISolate® -tiiviste • Irvine Scientific luettelonro 99306 Modified Human Tubal Fluid • Irvine Scientific luettelonro 90126 Sperm Washing Medium • Irvine Scientific luettelonro 9983 Steriilit kertakäyttöiset kartiomaiset sentrifugiputket • Irvine Scientific luettelonro IS-325 Pasteur -pipetit, steriilit Sentrifugi Inkubaattori, 37 °C B. Forberedelse af gradientopløsning: Der kræves to opløsninger til at udføre gradientseparation af sæd: Et øverste lag og et nederste lag. 1. Opløsning i øverste lag - 50 %. a) Tag CONCENTRATE (katalognr. 99306) og pipetter 4,5 ml ned i et sterilt centrifugerør b) Tilsæt 5,5 ml Modified Human Tubal Fluid (katalognr. 90126) c) Sæt låg på røret og vend det forsigtigt 3-4 gange for at blande helt d) Skriv “ØVERSTE LAG” på rørets etiket 2. Opløsning i nederste lag - 90 %. a) Tag CONCENTRATE (katalognr. 99306) og pipetter 8,1 ml ned i et sterilt centrifugerør b) Tilsæt 1,9 ml Modified Human Tubal Fluid (katalognr. 90126) c) Sæt låg på røret og vend det forsigtigt 3-4 gange for at blande helt d) Skriv “NEDERSTE LAG” på rørets etiket 3. Forsæt med afsnittet GENEREL PROCEDURE på indlægssedlen. (BEMÆRK: 10 ml af det øverste lag og 10 ml af det nederste lag kan behandle ca. 5 sædprøver). B. Gradientin valmistus: Siittiöiden gradienttierotteluun tarvitaan kaksi liuosta: ylempi kerros ja alempi kerros. 1. Ylemmän kerroksen liuos - 50 %. a) Ota CONCENTRATE:a (luettelonro 99306) ja pipetoi 4,5 ml steriiliin sentrifugiputkeen. b) Lisää 5,5 ml Modified Human Tubal Fluidia (luettelonro 90126). c) Sulje putki ja käännä se varovasti ylösalaisin 3 - 4 kertaa, jotta se saa täysin sekoittua. d) Merkitse putkeen “YLEMPI KERROS” 2. Alemman kerroksen liuos – 90 %. a) Ota CONCENTRATE:a (luettelonro 99306) ja pipetoi 8,1 ml steriiliin sentrifugiputkeen b) Lisää 1,9 ml Modified Human Tubal Fluidia (luettelonro 90126). c) Sulje putki ja käännä se varovasti ylösalaisin 3 - 4 kertaa, jotta se saa täysin sekoittua. d) Merkitse putkeen “ALEMPI KERROS” 3. Jatka tuote-esitteen osaan YLEISET TOIMEN PITEET. (HUOM: 10 ml ylempää ja 10 ml alempaa kerrosta riittää noin 5:n siemennestenäytteen käsittelyyn.) Bemærk: Betegnelserne 50 % og 90 % angiver ikke en faktisk koncentration. 50 % og 90 % er relative koncentrationer baseret på det tidligere nomenklatur, der definerede en 1:9 fortynding af Percoll® som svarende til en 100 % isotonisk arbejdsopløsning. GENEREL PROCEDURE Følgende er en generel procedure for en gradientseparation af motile sædceller fra sædvæsken. Volumenen og koncentrationen kan modificeres i henhold til hvert enkelt laboratories præferencer (dvs. minigradient, cryopreserveret sæd, gradient i tre lag). 1. Bring alle mediekomponenter til stuetemperatur eller 37 °C. 2. Brug en steril pipette og overfør 1,5-2,0 ml af det “NEDERSTE LAG” til et sterilt, konisk centrifugerør til engangsbrug. 3. Brug en ny, steril pipette og overfør en tilsvarende volumen af “ØVERSTE LAG” oven på “NEDERSTE LAG”. Det gøres ved at berøre overfladen af det “UNDERSTE LAG” i siden af røret med pipettespidsen. Dispenser forsigtigt det “ØVERSTE LAG” ved at føre pipettespidsen i en opadgående spiralbevægelse mod rørets inderside efterhånden, som niveauet af det “ØVERSTE LAG” stiger. 4. Placer forsigtigt 1,5-2,0 ml flydende sæd oven på “ØVERSTE LAG” med en ny, steril pipette. 5. Centrifuger i 10-20 minutter ved ca. 200-300 x g.* Eksponer forsigtigt sædcellerne (pellet) ved enten at aspirere det “ØVERSTE” og “UNDERSTE” lag væk, eller direkte ved at fjerne sædcellerne og overføre dem til et nyt, sterilt centrifugerør. Bemærk: Kvaliteten af sædprøven skal evalueres og tages i betragtning, når den korrekte centrifugeringshastighed og -tid skal fastslås. Disse skal justeres i henhold til den enkelte sædprøves kvalitet med henblik på optimering af proceduren. LATVISKI SUOMI DANSK PRODUKTBESKRIVELSE ISolate® er et densitetsgradientmedium, der er fremstillet til at separere de motile sædceller fra sædvæsken. Som et gradientsystem i to lag reducerer det effektivt cellulære kontaminanter såsom død sæd, leukocytter og diverse restmaterialer. Den færdige prøve indeholder hovedsageligt motile sædceller. Huom: Termit 50 % ja 90 % eivät edusta todellista pitoisuutta. 50- ja 90-prosenttiset pitoisuudet ovat suhteellisia ja perustuvat aiempaan luokitukseen, jossa 1:9 laimennus Percoll®illa on määritelty 100 %:sti toimivaa isotonista liuosta vastaavaksi. YLEISET TOIMENPITEET Seuraavassa annetaan yleiset ohjeet kaksivaiheiseen siittiöiden siemennesteestä erottamiseen gradientin avulla. Tilavuutta ja pitoisuutta voidaan muunnella kunkin laboratorion toivomusten mukaan (so. minigradientti, kylmäsäilötty siemenneste, kolmikerroksinen gradientti). 1. Anna kaikkien ravintoliuosainesosien saavuttaa huoneenlämpötila tai 37 °C. 2. Steriiliä pipettiä käyttäen siirrä1,5 – 2,0 ml “ALEMPAA KERROSTA” steriiliin kertakäyttöiseen kartiomaiseen sentrifugiputkeen. 3. Siirrä steriilillä pipetillä sama tilavuus ”YLEMPÄÄ KERROSTA” ”ALEMMAN KERROKSEN” päälle. Tämä tapahtuu koskettamalla pipetin kärjellä ”ALEMMAN KERROKSEN” pintaa putken reunalla. Tyhjennä “YLEMPI KERROS” varovasti kiertäen pipetin kärkeä ympäri putkea yläsuuntaan samalla kun “YLEMMÄN KERROKSEN” taso nousee. 4. Aseta varovasti 1,5 – 2,0 ml nestemäistä siemennestettä “YLEMMÄLLE KERROKSELLE” uudella steriilillä pipetillä. 5. Linkoa 10 - 20 minuuttia asetuksella 200 – 300 x g.* Paljasta pelletti varovasti joko aspiroimalla se “YLEMMÄSTÄ” ja “ALEMMASTA KERROKSESTA” tai poistamalla pelletti suoraan ja siirtämällä se uuteen steriiliin sentrifugiputkeen. *Huom: Siittiönäytteen laatu tulee arvioida ja ottaa huomioon niiden linkoamisen tarkoituksenmukaista nopeutta ja kestoa määritettäessä. Näitä tulee säädellä yksittäisen näytteen laadun mukaisesti toimenpiteen optimoimiseksi. 6. Käyttäen uutta steriiliä pipettiä lisää 2,0 – 3,0 ml sopivaa pesuainetta, kuten Sperm Washing Medium (IS luettelonro 9983) tai Modified HTF (IS luettelonro 90126) proteiinilisineen. Upota eristetty pelletti uudelleen. Linkoa se (~ 200 x g) 8 -10 minuuttia ja poista pintaneste. Toista tämä vaihe uutta pesua varten. Hävitä pintaneste ja suspendoi pelletti uudelleen käyttäen asianmukaista ravintoliuosta sopivassa tilavuudessa. Näyte on nyt valmis analysoitavaksi. PRODUKTA APRAKSTS ISolate® blīvuma gradienta barotnes ir materiāls, kas paredzēts spermatozoīdu motilo frakciju atdalīšanai no sēklas šķidruma. Kā divslāņu gradientu sistēma tā efektīvi mazina šūnu izraisītas kontaminācijas iespējas, piemēram, kontamināciju ar nedzīviem spermatozoīdiem, baltajiem asinsķermenīšiem un dažādām pārpalikumšūnām. Rezultātā iegūtais paraugs galvenokārt satur kustīgus spermatozoīdus. Lisätietoja näiden tuotteiden käytöstä kunkin laboratorion tulee hakea omista menettelyohjeistaan ja protokollista, jotka on erityisesti kehitetty ja optimoitu paikallista lääkinnällistä ohjelmaa varten. ISolate ir caur membrānu filtrēta un aseptiski apstrādāta koloidāla silīcija dioksīda daļiņu suspensija, kas stabilizēta ar kovalenti piesaistītu hidrofīlu silānu HEPES buferētā HTF. Sterilitātes nodrošināšanas līmenis (SAL) ir 10-3. ISolate ir testēts, un ir konstatēts, ka tas ir negatīvs attiecībā uz pirogēnām baktērijām pirogēno baktēriju testā trušiem. SÄILYTYSOHJEET JA STABILITEETTI Avaamattomat säiliöt säilytettävä kylmässä, 2 – 8 ºC. Lämmitä ympäristölämpöön tai inkubaattorin lämpötilaan (37 °C) ennen käyttöä. Ei saa jäädyttää tai altistaa korkeille lämpötiloille. ISolate on stabiili pakkaukseen ja pullojen etiketteihin merkittyyn eräpäivään saakka ohjeiden mukaisesti säilytettynä. VAROITUKSIA JA VAROTOIMENPITEITÄ Tämä laite on tarkoitettu sellaisten henkilöiden käytettäväksi, jotka on koulutettu suorittamaan toimenpiteitä, joihin kuuluu laitteen käyttötarkoituksen mukainen asianmukainen käyttö. ISolate näyttää läpinäkymättömältä. Tämä on tuotteelle normaalia. Älä käytä ravintoliuospulloa, jossa näkyy hiukkasia tai saastumista (epätasaista sameutta). ISolaten korkin tulee olla tiiviisti kiinni, kun sitä käytetään hiilidioksidi-inkubaattorissa pH-muutosten välttämiseksi. Tässä tuotteessa ei ole säilöntäaineita, antibiootteja eikä proteiinilisäaineita. Kontaminaatio-ongelmat vältetään aseptisella käsittelytekniikalla. Jos pakkaus on vahingoittunut, älä käytä sitä. Hävitä tuote tai palauta se valmistajalle vaihdettavaksi. VAROITUS: Yhdysvaltain liittovaltion laki rajoittaa tämän välineen myynnin vain lääkärin toimesta tai määräyksestä tapahtuvaksi. LIETOŠANAS NORĀDĪJUMI Kataloga Nr. 99264 – LIETOŠANAI GATAVS KOLOIDĀLS SILĪCIJA DIOKSĪDS DIVĀS KONCENTRĀCIJĀS (50% un 90%) A. Ieteicamie materiāli: ISolate • Irvine Scientific kataloga Nr. 99264 (6ml, 50ml vai 100 ml flakonu komplekts) Sperm Washing Medium • Irvine Scientific kataloga Nr. 9983 Sterili, koniski vienreizējās lietošanas centrifūgas stobriņi • Irvine Scientific kataloga Nr. IS-325 Pastēra pipetes, sterilas Centrifūga Inkubators, 37°C B. Gradienta sagatavošana: Nav nepieciešama iepriekšēja atšķaidīšana. Katrs flakons ar augšējā un apakšējā slāņa gradientu ir gatavs lietošanai. Pārejiet pie izstrādājuma ieliktnī aprakstītās VISPĀRĒJĀS PROCEDŪRAS. Kataloga Nr. - 99275 - STOCK SOLUTION 90% specifiska barotne izmantošanai tūlītējā procedūrā vai atšķaidīšanai turpmāk. A. Ieteicamie materiāli: ISolate STOCK SOLUTION •Irvine Scientific kataloga Nr. 99275 Modified Human Tubal Fluid •Irvine Scientific kataloga Nr. 90126 Sperm Washing Medium •Irvine Scientific kataloga Nr. 9983 Sterili, koniski vienreizējās lietošanas centrifūgas stobriņi •Irvine Scientific kataloga Nr. IS-325 Pastēra pipetes, sterilas Centrifūga Inkubators, 37°C B. Gradienta sagatavošana: Lai lietotu spermatozoīda atdalīšanas metodi gradientā, nepieciešami divi šķīdumi: augšējais slānis un apakšējais slānis. 1. Augšējā slāņa šķīdums – 50%: a) Ievietojiet CONCENTRATE (kataloga Nr. 99275) un pipeti 5,6 ml sterilā centrifūgas stobriņā. b) Pievienojiet 4,4 ml Modified Human Tubal Fluid (kataloga Nr. 90126) c) Uzlieciet stobriņam aizbāzni un uzmanīgi apvērsiet 3-4 reizes, lai saturam ļautu pilnībā sajaukties. d) Piestipriniet stobriņam uzlīmi „AUGŠĒJAIS SLĀNIS” 2. Apakšējā slāņa šķīdums – 90%: a) Iedaliet 10 ml STOCK SOLUTION sterilā centrifūgas stobriņā un uzlieciet aizbāzni (Turpmāka atšķaidīšana nav nepieciešama – STOCK SOLUTION ir 90%). b) Piestipriniet stobriņam uzlīmi „APAKŠĒJAIS SLĀNIS” 3. Pārejiet pie produkta ieliktnī aprakstītās VISPĀRĒJĀS PROCEDŪRAS. (PIEZĪME: ar 10 ml augšējā slāņa un 10 ml apakšējā slāņa šķīdumu iespējams apstrādāt apmēram 5 spermas paraugus.) Kataloga Nr. 99306 - CONCENTRATE Koloidāls silīcija dioksīda koncentrāts turpmākai atšķaidīšanai blīvuma gradientos, tā sastāvā ir izotonisks buferis un tam piemīt aptuvenais neatšķaidīta Percoll® blīvums. Saskaņā ar šo iepakojuma ieliktni ISolate® CONCENTRATE ir ticis novērtēts 50% un 90% gradientā. Katra laboratorija var izvēlēties veidot atšķirīgu koncentrāciju gradientus, kuri jāizvērtē attiecībā uz efektivitāti. A. Ieteicamie materiāli: ISolate® koncentrāts •Irvine Scientific kataloga Nr. 99306 Modified Human Tubal Fluid •Irvine Scientific kataloga Nr. 90126 Sperm Washing Medium •Irvine Scientific kataloga Nr. 9983 Sterili, koniski vienreizējās lietošanas centrifūgas stobriņi •Irvine Scientific kataloga Nr. IS-325 Pastēra pipetes, sterilas Centrifūga Inkubators, 37°C B. Gradienta sagatavošana: Lai lietotu spermatozoīda atdalīšanas metodi gradientā, nepieciešami divi šķīdumi: augšējais slānis un apakšējais slānis. 1. Augšējā slāņa šķīdums – 50%: a) Ievietojiet CONCENTRATE (kataloga Nr. 99306) un pipeti 4.5 ml sterilā centrifūgas stobriņā. b) Pievienojiet 5,5 ml Modified Human Tubal Fluid (kataloga Nr. 90126) c) Uzlieciet stobriņam aizbāzni un uzmanīgi apvērsiet 3-4 reizes, lai saturam ļautu pilnībā sajaukties. d) Piestipriniet stobriņam uzlīmi „AUGŠĒJAIS SLĀNIS” 2. Apakšējā slāņa šķīdums – 90%: a) Ievietojiet CONCENTRATE (kataloga Nr. 99306) un pipeti 8,1 ml sterilā centrifūgas stobriņā. b) Pievienojiet 1,9 ml Modified Human Tubal Fluid (kataloga Nr. 90126) c) Uzlieciet stobriņam aizbāzni un uzmanīgi apvērsiet 3-4 reizes, lai saturam ļautu pilnībā sajaukties. d) Piestipriniet stobriņam uzlīmi „APAKŠĒJAIS SLĀNIS” 3. Pārejiet pie produkta ieliktnī aprakstītās ISPĀRĒJĀS PROCEDŪRAS. (PIEZĪME: ar 10 ml augšējā slāņa un 10 ml apakšējā slāņa šķīdumu iespējams apstrādāt apmēram 5 spermas paraugus.) Piezīme: Apzīmējumi 50% un 90% nenorāda faktisko koncentrāciju. 50% un 90% ir relatīvas koncentrācijas, kas pamatojas uz iepriekšējo nomenklatūru, kas definēja Percoll® atšķaidīšanu1:9 kā līdzvērtīgu 100% iedarbīgam, izotoniskam šķīdumam. VISPĀRĒJĀ PROCEDŪRA Turpmāk minētā ir vispārpieņemta procedūra izolēšanai gradientā divos posmos, atdalot kustīgu spermatozoīdu no spermas. Daudzumu un koncentrāciju iespējams mainīt, lai tos varētu izmantot atbilstoši laboratorijas galvenajiem mērķiem (t. i., kā mini-gradientu, ar kriokonservēto spermu, kā trīsslāņu gradientu). 1. Nodrošiniet, ka visu barotnes sastāvdaļu temperatūra ir sasniegusi istabas temperatūras līmeni vai 37°C. 2. Izmantojot sterilu pipeti, pārnesiet 1,5-2,0 ml “APAKŠĒJĀ SLĀŅA” uz sterilu, vienreizējās lietošanas, konisku centrifūgas stobriņu. 3. Izmantojot jaunu sterilu pipeti, pārnesiet to pašu daudzumu „AUGŠĒJĀ SLĀŅA” uz „APAKŠĒJĀ SLĀŅA” augšdaļu. To veic, ar pipetes galu pieskaroties „APAKŠĒJAM SLĀNIM” no stobriņa puses. Uzmanīgi izpiliniet „AUGŠĒJO SLĀNI”, spirālveidīgi virpinot pipetes galu pa stobriņa perimetru augšupejošas kustības veidā, „AUGŠĒJĀ SLĀŅA” līmenim paaugstinoties. 4. Ar jaunas sterilas pipetes palīdzību uzmanīgi ievietojiet 1,5-2,0 ml sašķidrinātas spermas „AUGŠĒJĀ SLĀNĪ”. 5. Centrifugējiet 10-20 minūtes ar apmēram 200-300 g paātrinājumu.* Uzmanīgi atdaliet lodīti, atvelkot nost „AUGŠĒJO” un ”APAKŠĒJO SLĀNI” vai tieši izņemot lodīti un pārnesot to uz citu sterilu centrifūgas stobriņu. *Piezīme: Spermatozoīda parauga kvalitāte jāizvērtē un jāņem vērā, nosakot atbilstošo centrifugēšanas ātrumu un ilgumu. Lai procedūru optimizētu, šos parametrus vajadzētu pielāgot atbilstoši atsevišķā parauga kvalitātei. 6. Izmantojot jaunu sterilu pipeti, pievienojiet 2,0-3,0 ml piemērota skalošanas materiāla, piemēram, Sperm Washing Medium (IS kataloga Nr. 9983) vai Modified HTF (IS kataloga Nr. 90126) ar proteīna papildinājumu. Suspendējiet atkārtoti izolēto lodīti. Centrifugējiet (ar ~200 g paātrinājumu) 8-10 minūtes un atdaliet supernatantu. Atkārtojiet šo soli, lai veiktu otru skalošanu. Novāciet supernatantu un no jauna suspendējiet lodīti, izmantojot atbilstošu piemērotas barotnes daudzumu. Tagad paraugs ir sagatavots analīzes veikšanai. Lai uzzinātu papildu informāciju par šo produktu lietošanu, katrai laboratorijai jāiepazīstas ar tajā noteiktajām procedūrām un protokoliem, kas īpaši izstrādāti un optimizēti individuālas medicīniskas programmas veikšanai. UZGLABĀŠANAS NORĀDĪJUMI UN STABILITĀTE Neatvērtus konteinerus uzglabāt atdzesētus no 2º līdz 8º C temperatūrā. Pirms lietošanas sasildiet līdz apkārtējās vides vai inkubatora (37°C) temperatūrai. Nesaldēt un nepakļaut augstu temperatūru iedarbībai. Uzglabājot, kā norādīts, ISolate saglabā stabilitāti līdz derīguma termiņam, kas norādīts uz kastes un uz pudeļu marķējuma. PIESARDZĪBAS PASĀKUMI UN BRĪDINĀJUMI Šo ierīci ir paredzēts izmantot personālam, kas ir apmācīts tādu procedūru veikšanai, kuras ietver norādīto izmantošanu, kurai šī ierīce ir paredzēta. ISolate izskatīsies necaurspīdīgs. Šim produktam tas ir normāli. Nelietot nevienu flakonu ar barotni, kurā saskatāmas vielas daļiņas vai piesārņojums (neviendabīgs duļķainums). ISolate cieši jānoslēdz ar aizbāzni, lietojot CO2 inkubatorā, lai nepieļautu pH līmeņa izmaiņas. Šis produkts nesatur konservantus, antibiotikas vai proteīna piedevas. Lai izvairītos no kontaminācijas problēmām, rīkojoties izmantojiet aseptiskas tehnikas. Ja bojāts, nelietot. Lūdzu, likvidējiet vai nosūtiet atpakaļ ražotājam atvietošanai. BRĪDINĀJUMS: Federālie (ASV) likumi pieļauj šīs ierīces tirdzniecību vienīgi ārstiem vai ar viņu norīkojumu. ISolate® Catalog No. 99264 12 x 6 mL, 2 x 50 mL, 2 x 100 mL Ready to Use Density Gradient Medium at Two Concentrations Catalog No. 99275 Stock Solution 100 mL Catalog No. 99306 Concentrate 100 mL REFERENCES Adaniya GK, Jackson KV: Comparison of Percoll® and ISolate® in the Preparation of Semen for use in Assisted Reproductive Technologies. 53rd Annual Meeting of the American Society for Reproductive Medicine, Cincinnati, Ohio; 0-113, 1997. Symbols: Catalog Number Lot Number Tarchala SM, Fahy MM, Hauserman HM, Kallmann K, Volentine K, Radwanska E, Binor Z, Molo MW, Rawlins RG: ISolate® As a New Method of Sperm Separation. 53rd Annual Meeting of the American Society for Reproductive Medicine, Cincinnati, Ohio; P-116, 1998. Miller, KF, Fry KL, Arciaga RL, Falcone T: Semen preparation for in-vitro fertilization using ISolate® results in sperm recovery, fertilization and pregnancy outcomes that are indistinguishable from those obtained with Percoll®. 14th Embryology, Goteborg, Sweden; P-116, 1998. Tarchala SM, Volentine KK, Rawlins RG: A comparison of sperm processing using ISolate® and Pure Sperm™. 14th Annual Meeting of the European Society of Human Reproduction and Embryology, Goteborg, Sweden; R-041, 1998. Sterilized using aseptic processing techniques (filtration) Expiration: Year - Month - Day Caution:See instructions for use European Representative MPIE Schutweg 13A 5145 NP Waalwijk, The Netherlands See instructions for use. Storage Temperature CE Mark 0050 0050 ISolate is a Registered Trademark of Irvine Scientific ® Percoll ® is a Registered Trademark of Pharmacia Biotech, AB Sweden MPIE Schutweg 13a 5145 NP Waalwijk, The Netherlands ISolate is een membraangefilterde, op aseptische wijze bewerkte colloïdale suspensie van silicadeeltjes die zijn gestabiliseerd met covalent gebonden, hydrofiel silaan in HEPES-gebufferde HTF. Het Sterility Assurance Level (SAL) is 10-3. ISolate is negatief gebleken voor pyrogenen bij een konijnpyrogeentest. GEBRUIKSAANWIJZING C a t a l o g u s n r. 9 9 2 6 4 - K A N T- E N KLAAR COLLOÏDAAL SILICA IN TWEE CONCENTRATIES (50% en 90%) A.Voorgestelde materialen: ISolate • Irvine Scientific catalogusnr. 99264 (6ml, 50ml of 100 ml ampulkit) Sperm Washing Medium • Irvine Scientific catalogusnr. 9983 Steriele, conische wegwerpcentrifugebuisjes • Irvine Scientific catalogusnr. IS-325 Pasteurpipetten, steriel Centrifugeren Incubator, 37 °C B. Gradiëntpreparatie: Geen voorafgaande verdunningen noodzakelijk. Elke ampul van bovenste en onderste laaggradiënt is klaar voor gebruik. Ga door naar het gedeelte ALGEMENE PROCEDURE in de productbijsluiter. Catalogusnr. 99275 - STOCK SOLUTION 90% dichtheidsgradiëntmedium voor gebruik in een enkelvoudige procedure of voor verdere verdunning. A.Voorgestelde materialen: ISolate STOCK SOLUTION •Irvine Scientific catalogusnr. 99275 Modified Human Tubal Fluid •Irvine Scientific catalogusnr. 90126 Sperm Washing Medium •Irvine Scientific catalogusnr. 9983 Steriele, conische wegwerpcentrifugebuisjes •Irvine Scientific catalogusnr. IS-325 Pasteurpipetten, steriel Centrifugeren Incubator, 37 °C 5. Centrifugeer gedurende 10-20 minuten bij ca. 200 - 300xg.* Stel de pellet voorzichtig bloot door de “BOVENSTE” en “ONDERSTE LAGEN” te aspireren of de pellet direct te verwijderen en over te brengen naar een nieuw steriel centrifugebuisje. *Opm.: de kwaliteit van het spermamonster dient te worden beoordeeld en in aanmerking te worden genomen bij het bepalen van de juiste centrifugeersnelheid en -tijd. Deze moeten worden aangepast aan de individuele monsterkwaliteit zodat een optimale procedure wordt verkregen. 6. Voeg met een nieuw steriel pipet 2,0 - 3,0 ml van een geschikt wasmiddel zoals Sperm Washing Medium (IS catalogusnr. 9983) of Modified HTF (IS catalogusnr. 90126) met eiwitsupplement toe. Resuspendeer de geïsoleerde pellet. Centrifugeer (~200xg) gedurende 8 -10 minuten en verwijder het supernatant. Herhaal deze stap voor een tweede wasbeurt. Voer het supernatant af en resuspendeer de pellet met een geschikt volume van het juiste medium. Het monster is nu klaar voor analyse. Voor aanvullende informatie over het gebruik van deze producten, dient elk laboratorium haar eigen laboratoriumprocedures en -protocollen te raadplegen die speciaal zijn ontwikkeld en geoptimaliseerd voor uw individueel medisch programma. BEWAARINSTRUCTIES EN STABILITEIT Bewaar de ongeopende containers gekoeld bij 2 °C tot 8 °C. Vóór gebruik opwarmen tot omgevingstemperatuur of incubatortemperatuur (37 °C). Niet invriezen of blootstellen aan hoge temperaturen. VOORZORGSMAATREGELEN EN WAARSCHUWINGEN Dit hulpmiddel is bedoeld voor gebruik door personeel dat opgeleid is voor procedures inclusief de aangegeven toepassing waarvoor het hulpmiddel is bedoeld. Catalogusnr. 99306 - CONCENTRATE Colloïdaal silicaconcentraat voor verdere verdunning in dichtheidsgradiënten; geformuleerd in een isotone buffer en benadert de dichtheid van onverdund Percoll®. ISolate® CONCENTRATE werd beoordeeld volgens deze bijsluiter bij een gradiënt van 50% en 90%. Elke laboratorium kan kiezen voor gradiënten bij verschillende concentraties die op effectiviteit dienen te worden gecontroleerd. A.Voorgestelde materialen: ISolate® concentraat •Irvine Scientific catalogusnr. 99306 Modified Human Tubal Fluid •Irvine Scientific catalogusnr. 90126 Sperm Washing Medium •Irvine Scientific catalogusnr. 9983 Steriele, conische wegwerpcentrifugebuisjes •Irvine Scientific catalogusnr. IS-325 Pasteurpipetten, steriel Centrifugeren Incubator, 37 °C B. Gradiëntpreparatie: Er zijn twee oplossingen nodig voor de gradiëntspermascheidingsmethode: een bovenste laag en een onderste laag. 1. Oplossing bovenste laag - 50%: a) Neem het CONCENTRATE (catalogusnr. 99306) en pipetteer 4,5 ml in een steriel centrifugebuisje b) Voeg 5,5 ml Modified Human Tubal Fluid (catalogusnr. 90126) toe c) Draai de dop op het buisje en keer deze voorzichtig 3-4 keer om zodat de inhoud goed wordt gemengd b) Plak een sticker met de tekst “BOVENSTE LAAG” op het buisje 2. Oplossing onderste laag - 90%: a) Neem het CONCENTRATE (catalogusnr. 99306) en pipetteer 8,1 ml in een steriel centrifugebuisje b) Voeg 1,9 ml Modified Human Tubal Fluid (catalogusnr. 90126) toe c) Draai de dop op het buisje en keer deze voorzichtig 3-4 keer om zodat de inhoud goed wordt gemengd b) Plak een sticker met de tekst “ONDERSTE LAAG” op het buisje 3. Ga door naar het gedeelte ALGEMENE PROCEDURE in de productbijsluiter. (OPM.: 10 ml bovenste laag en 10 ml onderste laag zijn voldoende voor de bewerking van ca. 5 semen monsters.) Opm.: de aanduidingen 50% en 90% vertegenwoordigen geen werkelijke concentraties. De 50% en 90% zijn relatieve concentraties gebaseerd op de vorige nomenclatuur waarbij een 1:9 oplossing van Percoll® gelijk staat aan een 100% werkende, isotone oplossing ALGEMENE PROCEDURE Hieronder wordt een algemene procedure beschreven voor een tweestaps gradiëntscheiding van motiel sperma en semen. Het volume en de concentratie kunnen worden aangepast aan de voorkeur van elk laboratorium (bijv. minigradiënt, cryopreservatiesemen, drielaagse gradiënt). op 2. Breng met een steriel pipet 1,5 - 2,0 ml van de “ONDERSTE LAAG” over naar een steriel, conisch wegwerpcentrifugebuisje. 2511 Daimler Street, Santa Ana, California 92705-5588 Telephone: 1 949 261 7800 • 1 800 437 5706 Fax: 1 949 261 6522 • www.irvinesci.com PN 40558 Rev.10 4. Plaats 1,5 - 2,0 ml van het vloeibaar geworden semen voorzichtig op de “BOVENSTE LAAG” met behulp van een nieuw steriel pipet. Als ISolate zoals voorgeschreven wordt bewaard, is het stabiel tot aan de houdbaarheidsdatum die op de sticker van de doos en fles is vermeld. B. Gradiëntpreparatie: Er zijn twee oplossingen nodig voor de gradiëntspermascheidingsmethode: een bovenste laag en een onderste laag. 1. Oplossing bovenste laag - 50%: a) Neem de STOCK SOLUTION (catalogusnr. 99275) en pipetteer 5,6 ml in een steriel centrifugebuisje b) Voeg 4.4 ml Modified Human Tubal Fluid (catalogusnr. 90126) toe c) Draai de dop op het buisje en keer deze voorzichtig 3-4 keer om zodat de inhoud goed wordt gemengd b) Plak een sticker met de tekst “BOVENSTE LAAG” op het buisje 2. Oplossing onderste laag - 90%: a) Vul een steriel centrifugebuisje met 10 ml van de STOCK SOLUTION en sluit dit af met een dop - (Geen verdere verdunningen noodzakelijk - STOCK SOLUTION is 90%) b) Plak een sticker met de tekst “ONDERSTE LAAG” op het buisje 3. Ga door naar het gedeelte ALGEMENE PROCE DURE in de productbijsluiter. (OPM.: 10 ml bovenste laag en 10 ml onderste laag zijn voldoende voor de bewerking van ca. 5 semenmonsters.) 1. B r e n g a l l e m e d i a c o m p o n e n t e n omgevingstemperatuur of 37 °C. ROMÂNĂ POLSKI NEDERLANDS PRODUCTBESCHRIJVING ISolate® is een dichtheidsgradiëntmedium dat ontworpen is om het motiele gedeelte van het sperma te scheiden van de spermavloeistof. Als een tweelaags gradiëntsysteem vermindert het effectief celverontreinigende stoffen zoals dood sperma, witte bloedcellen en ander afval. Het resulterende monster bevat voornamelijk motiel sperma. 3. Breng met een nieuw steriel pipet een gelijk volume van de “BOVENSTE LAAG” over naar het bovenste gedeelte van de “ONDERSTE LAAG”. Dit kan worden bereikt door het oppervlak van de “ONDERSTE LAAG” tegen de zijkant van het buisje te houden met de punt van het pipet. Pipetteer de “BOVENSTE LAAG” voorzichtig door de pipetpunt in een opwaartse spiraalbeweging rondom de omtrek van het buisje te draaien als het niveau van de “BOVENSTE LAAG” stijgt. ISolate zal er opaak uitzien. Dit is normaal voor dit product. Gebruik geen ampullen met een medium dat (vaste) deeltjes bevat of besmet is (niet-uniform troebel). ISolate dient goed met een dop te worden afgesloten als het wordt gebruikt in een CO2-incubator om pH-wijzigingen te vermijden. Dit product bevat geen conserveringsmiddelen, antibiotica of eiwitsupplementen. Gebruik aseptische methoden om besmettingsproblemen te vermijden. Niet gebruiken indien beschadigd. Afvoeren of terugsturen naar de fabrikant voor een vervanging. VOORZICHTIG: volgens de Amerikaanse federale wetgeving mag dit product alleen door of op voorschrift van een arts worden verkocht. OPIS PRODUKTU ISolate® jest pożywką z gradientem gęstości, stworzoną do rozdziału frakcji plemników ruchliwych od płynu nasiennego. Ten system o dwupoziomowym gradiencie jest skuteczny w redukowaniu zanieczyszczeń komórkowych, takich jak martwe plemniki, białe ciałka krwi i szczątkowe zanieczyszczenia. Powstała próbka zawiera głównie ruchliwe plemniki. ISolate jest to filtrowana membranowo, aseptycznie przetwarzana zawiesina krzemionkowa cząsek krzemu, stabilizowana kowalentnie związanym hydrofilowym krzemem w HTF zbuforowanym HEPES. Bezpieczny poziom sterylności (SAL) wynosi 10 -3. ISolate został przetestowany i reagował negatywnie na pirogeny, przy użyciu testu króliczych pirogenów., WSKAZÓWKI UŻYCIA Nr katalogowy: 99264 – KRZEMIONKA KOLOIDALNA GOTOWA DO UŻYCIA W DWÓCH STĘŻENIACH (50% i 90%) A. Sugerowane materiały: ISolate • Nr w Katalogu Irvine Scientific: 99264 (6ml, 50ml lub 100 ml zestaw fiolek) Pożywka do przemywania nasienia • Nr w Katalogu Irvine Scientific: 9983 Sterylne, jednorazowe, stożkowe probówki wirówkowe • Nr w Katalogu Irvine Scientific: IS-325 Sterylne pipety Pasteura Wirówka Inkubator, 37 °C B. Przygotowanie roztworu: Nie są konieczne wstępne rozcieńczenia. Każda fiolka z gradientem górnej i dolnej warstwy jest gotowa do użycia. Kontynuować według części PROCEDURA OGÓLNA tej ulotki o leku. Nr katalogowy: 99275 – ROZTWÓR ZAPASOWY Pożywka o gradiencie gęstości 90% do użycia w jednoetapowej procedurze lub do dalszego rozcieńczania. A. Sugerowane materiały: ISolate ROZTWÓR ZAPASOWY •Nr w Katalogu Irvine Scientific: 99275 Zmodyfikowany Ludzki Płyn Jajowodowy •Nr w Katalogu Irvine Scientific: 90126 Pożywka do przemywania nasienia •Nr w Katalogu Irvine Scientific: 9983 Sterylne, jednorazowe, stożkowe probówki wirówkowe •Nr w Katalogu Irvine Scientific: IS-325 Sterylne pipety Pasteura Wirówka Inkubator, 37 °C B. Przygotowanie roztworu: Następujące dwa roztwory są wymagane do przeprowadzenia metody rozdziału nasienia wg gradientu: Górna warstwa i dolna warstwa. 1. Górna warstwa roztworu - 50%: a) Wziąć ROZTWÓR ZAPASOWY (nr katalogowy: 99275) i odpipetować 5,6 ml do sterylnej probówki wirówkowej b) Dodać 4.4 ml do Modified Human Tubal Fluid (nr katalogowy: 90126) c) Zamknąć probówkę i delikatnie odwracać 3-4 razy, aby umożliwić dokładne wymiesza nie. d) Oznakować probówkę jako „GÓRNA WARSTWA” 2. Dolna warstwa roztworu - 90%: a) Wydzielić 10 ml alikwot ROZTWORU ZAPA SOWEGO do sterylnej probówki wirówkowej i zamknąć zatyczką – (nie jest konieczne dalsze rozcieńczanie – ROZTWÓR ZAPASOWY jest 90%) b) Oznakować probówkę jako „DOLNA WARSTWA” 3. Kontynuować według części PROCEDURA OGÓLNA tej ulotki o leku. (UWAGA: 10 ml warstwy górnej i 10 ml warstwy dolnej wystar czy na przygotowanie 5 próbek nasienia). Nr katalogowy: 99306 - ROZTWÓR STĘŻONY Stężona krzemionka koloidalna do dalszego rozcieńczania na gradienty gęstości; sporządzona w izotonicznym buforze i zbliżona do gęstości nierozcieńczonego roztworu Percoll®. STĘŻONY ROZTWÓR ISolate® badany był z gradiantem 50% i 90% zgodnie z informacją podaną w niniejszej ulotce. Każde laboratorium może przygotować swoje własne roztwory o różnych stężeniach, które będą badane pod względem ich skuteczności. A. Sugerowane materiały: Stężony roztwór ISolate® •Nr w Katalogu Irvine Scientific: 99306 Zmodyfikowany Ludzki Płyn Jajowodowy •Nr w Katalogu Irvine Scientific: 90126 Pożywka do przemywania nasienia •Nr w Katalogu Irvine Scientific: 9983 Sterylne, jednorazowe, stożkowe probówki wirówkowe •Nr w Katalogu Irvine Scientific: IS-325 Sterylne pipety Pasteura Wirówka Inkubator, 37 °C B. Przygotowanie roztworu: Następujące dwa roztwory są wymagane do przeprowadzenia metody rozdziału nasienia wg gradientu: Górna warstwa i dolna warstwa. 1. Górna warstwa roztworu - 50%: a) Wziąć ROZTWÓR STĘŻONY (nr katalogowy: 99306) i odpipetować 4.5 ml do sterylnej probówki wirówkowej b) Dodać 5.5 ml do Modified Human Tubal Fluid (nr katalogowy: 90126) c) Zamknąć probówkę i delikatnie odwracać 3-4 azy, aby umożliwić dokładne wymieszanie. d) Oznakować probówkę jako „GÓRNA WARSTWA” 2. Dolna warstwa roztworu - 90%: a) Wziąć ROZTWÓR STĘŻONY (nr katalogowy: 99306) i odpipetować 8.1 ml do sterylnej probówki wirówkowej b) Dodać 1.9 ml do Modified Human Tubal Fluid (nr katalogowy: 90126) c) Zamknąć probówkę i delikatnie odwracać 3-4 razy, aby umożliwić dokładne wymieszanie. d) Oznakować probówkę jako „DOLNA WARSTWA” 3. Kontynuować według części PROCEDURA OGÓLNA tej ulotki o leku. (UWAGA: 10 ml warstwy górnej i 10 ml warstwy dolnej wystarczy na przygotowanie 5 próbek nasienia). Uwaga: Terminy 50% i 90% nie odpowiadają właściwym stężeniom. 50% i 90% są odpowiadającymi stężeniami opartymi na porzedniej nomenklaturze, która definiowała rozcieńczenie 1:9 roztworu Percoll® jako równe z 100% pracującym, roztworem izotonicznym. PROCEDURA OGÓLNA Poniżej podana jest ogólna procedura dla dwustopniowej separacji plemników ruchliwych od nasienia. Objętość i stężenie mogą być zmodyfikowane w celu zgodności z preferencjami laboratorium (tzn.: mini-gradient, nasienie zabezpieczone kriogeniczne, roztwór trzywarstwowy). 1. Podgrzać wszystkie podłoża do temperatury pokojowej lub 37 °C. 2. Przy użyciu sterylnej pipety, przenieść 1,5 – 2,0 ml „DOLNEJ WARSTWY” do sterylnej, jednorazowej, stożkowej probówki wirówkowej. 3. Przy użyciu nowej sterylnej pipety, przenieść jednakową objętość „GÓRNEJ WARSTWY” na wierzch „DOLNEJ WARSTWY”. Jest to wykonane przez dotknięcie końcówką pipety powierzchni „DOLNEJ WARSTWY” z boku probówki. Ostrożnie odebrać „GÓRNĄ WARSTWĘ” poprzez poruszanie spiralnym ruchem końcówki pipety po obwodzie probówki ruchem wznoszącym, podczas podnoszenia się poziomu „GÓRNEJ WARSTWY”. 4. Ostrożnie umieścić 1,5 – 2,0 ml płynnego nasienia na „GÓRNEJ WARSTWIE” przy użyciu nowej sterylnej pipety. 5. Wirować przez 10-20 minut, przy użyciu siły około 200 - 300xg.* Ostrożnie odsłonić pelet poprzez zaaspirowanie „GÓRNEJ ” i „DOLNEJ WARSTWY” lub bezpośrednie zebranie peletu i przeniesienie do nowej sterylnej probówki. *Uwaga: Jakość próbki nasienia należy zbadać i wziąć pod uwagę podczas określania odpowiedniego czasu i szybkości wirowania. Należy je dopasować zgodnie z jakością indywidualnej próbki w celu optymalizacji procedury. 6. Przy użyciu nowej, sterylnej pipety dodać 2,0 – 3,0 ml odpowiedniej pożywki przemywającej, jak np.: Sperm Washing Medium (nr katalogowy IS: 9983) lub Modified HTF (nr katalogowy IS: 90126) z dodatkiem białka. Ponownie zawiesić odebrany pelet. Zwirować (~200xg) przez 8-10 minut i usunąć nadsącz. Powtórzyć ten etap w drugim przepłukiwaniu. Odebrać nadsącz i ponownie zawiesić pelet w odpowiedniej objętości właściwej pożywki. Teraz próbka jest gotowa do analizy. Aby zapoznać się z dodatkowymi szczegółami użycia tych produktów, każde laboratorium powinno odwołać się do jego własnych procedur laboratoryjnych i protokołów, które zostały specjalnie opracowane i zoptymalizowane dla indywidulanego programu medycznego. INSTRUKCJE DOTYCZĄCE PRZECHOWYWANIA I STABILNOŚCI Przechowywać w nieotwartych pojemnikach, w chłodziarce o temperaturze 2º C do 8 ºC. Podgrzać do temperatury otoczenia lub inkubatora (37 °C) przed użyciem. Nie zamrażać ani nie poddawać działaniu wysokich temperatur. ISolate jest stabilny do upłynięcia daty ważności wydrukowanej na pudełku i etykiecie butelki, gdy przechowywany zgodnie z instrukcją. ŚRODKI OSTROŻNOŚCI I OSTRZEŻENIA To urządzenie jest przeznaczone do użycia przez personel wykwalifikowany w dziedzinie procedur obejmujących wskazane zastosowanie, dla którego to urządzenie jest przeznaczone. ISolate będzie nieprzejrzysty. To jest normalne dla tego produktu. Nie używać żadnej fiolki z pożywką, w której widoczne są cząsteczki materii lub zanieczyszczenie (nierównomierne zmętnienie). ISolate należy zamknąć szczelnie w przypadku używania inkubatora CO2, aby uniknąć zmian pH. Ten produkt nie zawiera środków konserwujących, antybiotyków ani dodatków białkowych. Aby uniknąć próblemów z zanieczyszczeniem, posługując się tym produktem należy stosować technikę aseptyczną. Nie używać w przypadku uszkodzenia. Należy wyrzucić lub zwrócić do producenta w celu dokonania wymiany. U WA G A : P r a w o f e d e r a l n e ( S t a n ó w Zjednoczonych) zezwala na sprzedaż tego urządzenia tylko przez lub na polecenie lekarza. DESCRIEREA PRODUSULUI ISolate® este un mediu cu un gradient de concentraţie destinat să separe fracţiunile de spermatozoizi mobili din lichidul seminal Ca şi un sistem gradual pe 2 straturi, reduce contaminarea celulară de exemplu cu spermă moartă, leucocite sau alte reziduuri. Rezultă mostre care conţin predominant spermatozoizi mobile. ISolate este filtrat prin membrană, prelucrat aseptic care conţine particule de silicat în suspensie coloidală, stabilizate prin legături covalente hidrofilice silane solutia tamponată HEPES- HTF . Nivelul de sterilitate asigurat este de (SAL)10-3. ISolate a fost testat cu test pirogen de iepure şi găsit apirogen . INSTRUCŢIUNI DE UTILIZARE Catalog #99264- GATA PENTRU FOLOSIREA S I L I C AT U L U I C O L O I D A L L A D O U Ă CONCENTRAŢII ( 50 % ŞI 90%) A. Materiale propuse: ISolate • Irvine Scientific Catalog #99264 (kit fiolă de 6mL, 50mL sau 100 mL ) Sperm Washing Medium • Irvine Scientific Catalog #9983 Tuburi conice sterile de centrifugă de unică folosinţă • Irvine Scientific Catalog #IS-325 Pipetă sterilă Pasteur Centrifugă Incubator, 37ºC B. Prepararea Gradientului: Nu este necesară diluarea preliminară. Fiecare fiolă cu gradientul stratului de sus şi jos este gata pentru folosinţă. Continuaţi cu PROCEDURI GENERALE, paragraful utilizarea produsului. Catalog # 99275 STOCK SOLUTION Se utilizează 90% din densitatea gradientului de mediu în prima treaptă sau pentru diluări ulterioare. A. Materiale propuse: ISolate STOCK SOLUTION stoc de soluţie ISolate •Irvine Scientific Catalog #99275 Lichid uman tubal modificat •Irvine Scientific Catalog #90126 Sperm Washing Medium •Irvine Scientific Catalog #9983 Tuburi conice sterile de centrifugă de unică folosinţă •Irvine Scientific Catalog #IS-325 Pipetă sterilă Pasteur Centrifugă Incubator, 37ºC B. Prepararea Gradientului: Două soluţii sunt necesare pentru a executa procedeul de separare a spermatozoizilor Stratul de sus şi stratul de jos. Stratul de sus şi stratul de jos. 1. Soluţie stratul de sus -50%. a) Luaţi STOCK SOLUTION (Catalog #99275) şi pipaaţi de 5.6 ml într-un tub de centrifugă sterilă b) Adăugaţi 4.4 ml de Modified Human Tubal Fluid (Catalog# 90126) c) Puneţi capacul tubului şi prin răsturnare efectuată cu grijă de 3-4 ori, veţi realiza amestecarea completă. d) Etichetaţi tubul ca şi “ STRAT DE SUS” 2. Soluţie stratul de jos -90%. a) Alicot în 10 ml de soluţie STOCK într-un tub steril de centrifugă cu capac - (nu este necesară diluţia ulterioară - soluţia STOCK are concentraţia de 90%) b) Etichetaţi tubul “ STRATUL DE JOS” 3. Continuaţi la procedurile generale din instrucţiunile de folosire. (NOTĂ: 10 ml din stratul de sus şi 10 ml din stratul de jos, va prelucra aproximativ 5 mostre de spermă). Catalog # 99306 CONCENTRATE Concentratul de silicat coloidal pentru mai multă diluare a densităţii gradientului ; formulat în tamponare isotonică şi aproximează densitatea nediluată al Percoll®-ului. ISolate® CONCENTRATE a fost evaluat conform concentraţiei de 50% şi 90%, înscrisă pe pachet gradient de la 50% până la 90%). Fiecare laborator îşi poate alege să facă gradienţii la diferite concentraţii, care ar trebui evaluat pentru eficacitate. A. Materiale propuse: ISolate® Concentrat •Irvine Scientific Catalog #99306 Lichid uman tubal modificat •Irvine Scientific Catalog #90126 Sperm Washing Medium •Irvine Scientific Catalog #9983 Tuburi conice sterile de centrifugă de unică folosinţă •Irvine Scientific Catalog #IS-325 Pipetă sterilă Pasteur Centrifugă Incubator, 37ºC B. Prepararea Gradientului: Două soluţii sunt necesare pentru a executa procedeul de separare a spermatozoizilor Stratul de sus şi stratul de jos. 1. Soluţie stratul de sus -50%. a) Luaţi CONCENTRATE (Catalog #99306) şi pipete de 4.5 ml într-un tub steril de centrifugă b) Adăugaţi 5.5 ml de Modified Human Tubal Fluid (Catalog# 90126) c) Puneţi capacul tubului şi prin răsturnare efectuată cu grijă de 3-4 ori, veţi realiza amestecarea completă. d) Etichetaţi tubul ca şi “ STRAT DE SUS” 2. Soluţie stratul de jos -90%. a) Luaţi CONCENTRATE (Catalog #99306) şi pipete de 8.1 ml într-un tub steril de centrifugă b) Adăugaţi 1.9 ml de Modified Human Tubal Fluid (Catalog# 90126) c) Puneţi capacul tubului şi prin răsturnare efectuată cu grijă de 3-4 ori, veţi realiza amestecarea completă. d) Etichetaţi tubul ca şi “ STRAT DE JOS” 3. Continuaţi la procedurile generale din instrucţiunile de folosire. (NOTĂ: 10 ml din stratul de sus şi 10 ml din stratul de jos, va prelucra aproximativ 5 mostre de spermă). Notă: Termeni de 50% şi 90% nu reprezintă concentraţia actuală. Cele de 50% şi 90% sunt concentraţii bazate pe nomenclatura anterioară care defineşte o diluţie de 1:9 de Percoll® , identică în totalitate cu soluţia izotonică de lucru. PROCEDURI GENERALE Urmează a doua treaptă de procedură generală şi anume de separare a spermatozoidului mobil din spermă. Volumul şi concentraţia pot fi modificate în funcţie de preferinţele fiecărui laborator. (ex: mini-gradient, crioconservarea spermei, gradient în trei straturi.) 1. Aduceţi toţi componenţii mediului la temperatura camerei sau 37°C. 2. Folosind pipetă sterilă, transferaţi 1.5 - 2.0 ml din “STRATUL DE JOS” într-un tub steril de centrifugă conică de unică folosinţă. 3. Cu ajutorul unei pipete noi sterile, transferaţi un volum egal cu cel situat între cele două semne care delimitează “stratul de sus” şi “stratul de jos”. Aceasta este făcută prin contactul cu suprafaţei “STRATULUI JOS” de la marginea tubului cu vârful pipetei. Preparaţi cu grijă “STRATUL DE SUS” prin învârtirea spiralată a vârfului pipetei în sus, în jurul circumferinţei tubului aşa cum “STRATUL DE SUS” se ridică. 4. Cu ajutorul unei pipete sterile puneţi cu blândeţe 1,5-2 ml de spermă lichefiată până la “nivelul de sus” a tubului. EESTI SVENSKA 5. Centrifugaţi timp de 10-20 de minute, la aproximativ 200- 300 xg.* Granulele vor fi expuse cu grijă prin aspirarea “ STRATULUI DE SUS” şi a “STRATULUI DE JOS” sau prin scoaterea directă a acestora şi mutarea lor într-un tub steril de centrifugă. *Notă: Calitatea mostrei de spermatozoids trebuie să fie evaluată şi luată în considerare când se determină timpul şi viteza proprie pentru centrifugare. Acestea trebuie ajustate în concordanţă cu calitatea mostrei individuale în vederea optimizării procesului de prelucrare. 6. Folosind o pipetă sterilă nouă, adăugaţi 2.0 - 3.0 ml mediu de spălare utilizând Sperm Washing Medium (IS Catalog# 9983) sau Modified HTF (IS Catalog #90126) cu adaos de proteine. Resuspendaţi granulele izolate. Centrifugaţi (~200xg) pentru 8-10 minute şi îndepărtaţi supernatantul. Repetaţi această treaptă pentru a doua spălare. Îndepărtaţi supernatantul şi resuspendaţi granula folosind un volum potrivit de mediu adecvat. Mostra acum este gata pentru analiză. Pentru detalii suplimentare privind folosirea acestui produs, fiecare laborator trebuie să consulte protocolul pentru procedurile utilizate în laborator care sunt specifice şi optimizate pentru programul medical individual. INSTRUCŢIUNI PENTRU PĂSTRARE ŞI STABILITATE Păstraţi sticlele sau containerele nedeschise refrigerate la 2º to 8ºC. Încălziţi la temperatura mediului ambiant sau la incubator la temperatură (37°C) înainte de a utilliza. Nu congelaţi sau expuneţi la temperaturi mari. ISolate este stabil până la data expirării înscrise pe eticheta de pe cutie dacă sunt respectate condiţiile de depozitare. PRECAUŢII ŞI AVERTISMENTE Acest dispozitiv este destinat să fie utilizat de personalul specializat în proceduri care includ aplicarea indicată pentru care a fost creat dispozitivul. ISolate va apărea opac. Este normal pentru acest produs. Nu utilizaţi fiole cu mediu care prezintă reziduuri de particule sau semne de contaminare (înceţoşare neuniformă) ISolate ar trebui să fie închis ermetic atunci când se foloseşte în incubator cu CO2 pentru a evita schimbări ale nivelurilor de pH. Acest produs nu conţine conservanţi, antibiotice, sau suplemente de proteină. Pentru a evita probleme de contaminare, mânuiţi folosind tehnici aseptice. Nu se utilizează în caz de deteriorare. Vă rugăm aruncaţi sau înapoiaţi producătorului pentru a fi înlocuit. AVERTISMENT: Legile Federale în (SUA) nu permit vânzarea acestui aparat numai la comanda unui medic sau pe bază de comanadă. PRODUKTBESKRIVNING ISolate® är ett densitetsgradientmedium framtaget för att separera den rörliga spermiefraktionen från sädesvätska. Detta gradientsystem med två skikt minskar effektivt förekomsten av cellulära kontaminanter, såsom döda spermier, vita blodkroppar och annat skräp. Det resulterande provet innehåller huvudsakligen rörliga spermier. ISolate är en membranfiltrerad, aseptiskt behandlad kolloidal suspension av kiselpartiklar stabiliserade med kovalent bundet hydrofilt silan i HEPES-buffrad HTF. Sterilitetsnivån (SAL, sterility assurance level) är 10 -3. ISolate har testats med pyrogentest på kanin och befunnits negativ för pyrogener. BRUKSANVISNING Katalognr 99264 - KOLLOIDAL KISELDIOXID, FÄRDIG ATT ANVÄNDA, I TVÅ KONCENTRATIONER (50 % och 90 %) A. Rekommenderat material: ISolate • Irvine Scientific katalognr 99264 (sats med 6 mL, 50mL eller 100 mL ampuller) Sperm Washing Medium • Irvine Scientific katalognr 9983 Sterila, konformade centrifugrör för engångsbruk • Irvine Scientific katalognr IS-325 Pasteurpipetter, sterila Centrifug Inkubator, 37 °C B. Gradientberedning: Inga förspädningar krävs. Varje ampull med topp- och bottengradient är färdig att användas. Fortsätt till avsnittet ALLMÄNT FÖRFARANDE i produktens bipacksedel. Katalognr 99275 - STOCK SOLUTION 90 % densitetsgradient-medium för användning i en procedur i ett steg eller för ytterligare spädning. A. Rekommenderat material: ISolate Stock Solution • Irvine Scientific katalognr 99275 Modified Human Tubal Fluid • Irvine Scientific katalognr 90126 Sperm Washing Medium • Irvine Scientific katalognr 9983 Sterila, konformade centrifugrör för engångsbruk • Irvine Scientific katalognr IS-325 Pasteurpipetter, sterila Centrifug Inkubator, 37 °C B. Gradientberedning: Två lösningar krävs för att utföra spermieseparation med gradientmetoden: En toppskikts- och en bottenskiktslösning. 1. Toppskiktslösning - 50 %: a) Ta STOCK SOLUTION (katalognr 99275) och pipettera 5,6 mL i ett sterilt centrifugrör b) Tillsätt 4,4 mL Modified Human Tubal Fluid (katalognr 90126) c) Förslut röret och vänd det varligt 3-4 gånger så att innehållet blandas fullständigt d) Märk röret med “TOPPSKIKT” 2. Bottenskiktslösning - 90 %: a) Häll en alikvot på 10 mL av Stock Solution i ett sterilt centrifugrör och förslut - (ingen ytterligare spädning krävs - Stock Solution är på 90 %) b) Märk röret med “BOTTENSKIKT” 3. Fortsätt till avsnittet ALLMÄNT FÖRFARANDE i produktens bipacksedel. (OBS! 10 mL toppskikt och 10 mL bottenskikt räcker till cirka 5 spermaprover). Katalognr 99306 - CONCENTRATE Kolloidalt kisel-koncentrat för ytterligare spädning till densitetsgradienter; i isoton buffert och med ungefär samma densitet som ospädd Percoll®. ISolate® CONCENTRATE har utvärderats enligt denna bipacksedel vid gradienterna 50 % och 90 %. Varje laboratorium kan välja att framställa gradienter i andra koncentrationer, som bör utvärderas för effektivitet. A. Rekommenderat material: ISolate® Concentrate • Irvine Scientific katalognr 99306 Modified Human Tubal Fluid • Irvine Scientific katalognr 90126 Sperm Washing Medium • Irvine Scientific katalognr 9983 Sterila, konformade centrifugrör för engångsbruk • Irvine Scientific katalognr IS-325 Pasteurpipetter, sterila Centrifug Inkubator, 37 °C B. Gradientberedning: Två lösningar krävs för att utföra spermieseparation med gradientmetoden: En toppskikts- och en bottenskiktslösning. 1. Toppskiktslösning - 50 %: a) Ta CONCENTRATE (katalognr 99306) och pipettera 4,5 mL i ett sterilt centrifugrör b) Tillsätt 5,5 mL Modified Human Tubal Fluid (katalognr 90126) c) Förslut röret och vänd det varligt 3-4 gånger så att innehållet blandas fullständigt d) Märk röret med “TOPPSKIKT” 2. Bottenskiktslösning - 90 %: a) Ta CONCENTRATE (katalognr 99306) och pipettera 8,1 mL i ett sterilt centrifugrör b) Tillsätt 1,9 mL Modified Human Tubal Fluid (katalognr 90126) c) Förslut röret och vänd det varligt 3-4 gånger så att innehållet blandas fullständigt d) Märk röret med “BOTTENSKIKT” 3. Fortsätt till avsnittet ALLMÄNT FÖRFARANDE i produktens bipacksedel. Obs! Termerna 50 % och 90 % anger inte en faktisk koncentration. 50 % och 90 % är relativa koncentrationer baserade på tidigare nomenklatur som definierade en 1:9-spädning av Percoll ® såsom likvärdig med en 100 % fungerande, isoton lösning. ALLMÄNT FÖRFARANDE Följande är en generell procedur för en tvåstegsgradientseparation av rörliga spermier från sädesvätska. Volymen och koncentrationen kan modifieras för att passa det enskilda laboratoriets preferenser (dvs. minigradient, kryopreserverad sperma, treskiktsgradient). 1. Låt alla mediekomponenter uppnå rumstemperatur eller 37 °C. 2. Använd en steril pipett och överför 1,5 - 2,0 mL av “BOTTENSKIKTET” till ett sterilt, konformat centrifugrör för engångsbruk. 3. Använd en ny steril pipett och överför en lika stor volym “TOPPSKIKT” ovanpå “BOTTENSKIKTET” . Detta görs genom att vidröra ytan på “BOTTENSKIKTET” vid röret sida med pipettens spets. Dispensera omsorgsfullt “TOPPSKIKTET” genom att vrida pipettspetsen i spiral runt rörets omkrets i en uppåtriktad rörelse efterhand som “TOPPSKIKT”-nivån ökar. 4. Placera försiktigt 1,5 - 2,0 mL likvifierad sperma på “TOPPSKIKTET” med användning av en ny, steril pipett. 5. Centrifugera i 10 - 20 minuter vid cirka 200 - 300 x g.* Exponera pelleten omsorgsfullt genom att antingen suga av “TOPP-” och “BOTTENSKIKTEN”, eller genom att ta upp pelleten och föra över den till ett nytt, sterilt centrifugrör. *Obs! Spermaprovets kvalitet skall bedömas och tas i beaktande vid bestämning av korrekt centrifugeringshastighet och -tid. Dessa bör justeras i enlighet med det enskilda provets kvalitet, för optimering av förfarandet. 6. Använd en ny steril pipett och tillsätt 2,0 - 3,0 mL lämpligt tvättmedium såsom Sperm Washing Medium (IS katalognr 9983) eller Modified HTF (IS katalognr 90126) med proteinsupplement. Resuspendera den isolerade pelleten. Centrifugera (~200xg) i 8 - 10 minuter och avlägsna supernatanten. Upprepa detta steg för en andra tvätt. Kassera supernatanten och resuspendera pelleten med användning av en adekvat volym lämpligt medium. Provet är nu klart för analys. För ytterligare information om användning av dessa produkter bör varje laboratorium konsultera sina egna laboratorieförfaranden och -protokoll som utvecklats och optimerats särskilt för de egna medicinska programmen. FÖRVARING OCH HÅLLBARHET Oöppnade behållare skall förvaras i kylskåp vid 2 - 8 ºC. Värm till omgivnings- eller inkubator(37 °C)-temperatur före användning. Får ej frysas eller exponeras för höga temperaturer. ISolate är hållbart fram till det utgångsdatum som anges på kartongen och flasketiketterna, vid förvaring enligt anvisningarna. FÖRSIKTIGHETSÅTGÄRDER OCH VARNINGAR Denna produkt är avsedd att användas av personal med utbildning i procedurer vilka inkluderar den indicerade tillämpning för vilken produkten är avsedd. ISolate är ogenomskinligt. Detta är normalt för denna produkt. Använd inga ampuller med medium som innehåller partiklar eller företer tecken på kontamination (ojämn grumlighet). ISolate skall vara ordentligt förslutet vid användning i en CO2-inkubator så att pH-förändringar undviks. Denna produkt innehåller inga konserveringsmedel, antibiotika eller proteinsupplement. Använd aseptisk teknik vid hantering, så att kontamination undviks. Om produkten är skadad får den inte användas. Kassera den eller returnera den till tillverkaren för utbyte. OBS! Enligt federal (USA) lag får denna produkt endast säljas av eller på ordination av läkare. TOOTE KIRJELDUS ISolate® on tihedusgradiendi lahus, mis on koostatud liikuva sperma eraldamiseks seemnevedelikust. Kahekihilise gradiendi süsteem vähendab tõhusalt rakuliste saasteainete, sh surnud sperma, valgevererakkude ja mitmesuguste jäätmete hulka. Sellest saadud proov sisaldab peamiselt liikuvaid spermatosoide. ISolate on HEPESiga puhverdatud HTFis membraanfiltreeritud ja aseptilised töödeldud räniosakeste kolloiodne suspensioon kovalentselt seotud hüdrofiilse silaaniga. Garanteeritud steriilsustase (SAL) on 10 -3. Küüliku pürogeenitesti tegemisega on leitud, et ISolate on pürogeenide suhtes negatiivne. KASUTUSJUHEND Kataloogi nr 99264 - KASUTAMISVALMIS KOLLOIDNE RÄNIMULD KAHES KONTSENTRATSIOONIS (50% ja 90%) A. Soovitatavad materjalid: ISolate • Irvine Scientific katalooginr 99264 (6mL, 50mL või 100mL viaaliga komplekt) Sperm Washing Medium • Irvine Scientific katalooginr 9983 Steriilsed, ühekordsed koonilised tsentrifuugi tuubid • Irvine Scientific katalooginr IS-325 Pasteuri pipetid, steriilsed Tsentrifuug Inkubaator, 37°C B. Gradiendi valmistamine: Eelnevat lahjendamist ei ole vaja. Iga ülemise ja alumise gradiendi kihti sisaldav viaal on kasutamiseks valmis. Jätkake toote pakendi infolehel toodud ÜLDPROTSEDUURIDEGA. Kataloogi nr 99275 - STOCK SOLUTION 90%-ne tihedusgradiendi sööde kasutamiseks üheetapilises protseduuris või edasiseks lahjendamiseks. A. Soovitatavad materjalid: ISolate STOCK SOLUTION •Irvine Scientific katalooginr 99275 Modified Human Tubal Fluid •Irvine Scientific katalooginr 90126 Sperm Washing Medium •Irvine Scientific katalooginr 9983 Steriilsed, ühekordsed koonilised tsentrifuugi tuubid •Irvine Scientific katalooginr IS-325 Pasteuri pipetid, steriilsed Tsentrifuug Inkubaator, 37°C B. Gradiendi valmistamine: Sperma eraldamise gradientmeetodi jaoks on vaja kaks lahust: ülemine kiht ja alumine kiht. Ülemine kiht ja alumine kiht. 1. Ülemise kihi lahus - 50%: a) Võtke STOCK SOLUTION (kataloogi nr 99275) ja pipettige 5,6 mL steriilsesse tsentrifuugi tuubi. b) Lisage 4.4 mL lahust Modified Human Tubal Fluid (kataloogi nr 90126) c) Katke katsut korgiga ja keerake 3...4 korda põhi õrnalt üles-alla, et sisu täielikult seguneks d) Märkige katsutile “ÜLEMINE KIHT” 2. Alumise kihi lahus - 90%: a) Alikvootige 10 mL STOCK SOLUTIONit steriilsesse tsentrifuugi tuubi ja korgistage - (edasine lahjendamine ei ole vajalik - STOCK SOLUTION on 90%) b) Märkige katsutile “ALUMINE KIHT” 3. Jätkake toote pakendi infolehel toodud ÜLDPROTSEDUURIDEGA. (MÄRKUS: Kogusega 10 mL ülemist kihti ja 10 mL alumist kihti on võimalik töödelda umbes 5 eemnevedeliku proovi.) Kataloogi nr 99306 - CONCENTRATE Kolloidse ränimulla kontsentraat edasiseks lahjendamiseks tihedusgradientideks; valmistatud isotoonilises puhvris ja tiheduse poolest on lähedane lahustamata Percoll®-ile. ISolate® analüüsiti vastavalt pakendi infolehes toodule ning leiti gradiendid 50% ja 90%. Iga labor võib oma äranägemisel valmistada erinevates kontsentratsioonides gradiente, mille tõhusust tuleb hinnata. A. Soovitatavad materjalid: ISolate® kontsentraat •Irvine Scientific katalooginr 99306 Modified Human Tubal Fluid •Irvine Scientific katalooginr 90126 Sperm Washing Medium •Irvine Scientific katalooginr 9983 Steriilsed, ühekordsed koonilised tsentrifuugi tuubid •Irvine Scientific katalooginr IS-325 Pasteuri pipetid, steriilsed Tsentrifuug Inkubaator, 37°C B. Gradiendi valmistamine: Sperma eraldamise gradientmeetodi jaoks on vaja kaks lahust: ülemine kiht ja alumine kiht. 1. Ülemise kihi lahus - 50%: a) Võtke CONCENTRATE (kataloogi nr 99306) ja pipettige 4.5 mL steriilsesse tsentrifuugi tuubi. b) Lisage 5.5 mL lahust Modified Human Tubal Fluid (kataloogi nr 90126) c) Katke katsut korgiga ja keerake 3...4 korda põhi õrnalt üles-alla, et sisu täielikult seguneks d) Märkige katsutile “ÜLEMINE KIHT” 2. Alumise kihi lahus - 90%: a) Võtke CONCENTRATE (kataloogi nr 99306) ja pipettige 8.1 mL steriilsesse tsentrifuugi tuubi. b) Lisage 1.9 mL lahust Modified Human Tubal Fluid (kataloogi nr 90126) c) Katke katsut korgiga ja keerake 3...4 korda põhi õrnalt üles-alla, et sisu täielikult seguneks d) Märkige katsutile “ALUMINE KIHT” 3. Jätkake toote pakendi infolehel toodud ÜLDPROTSEDUURIDEGA. Märkus: Nimetusele lisatud 50% ja 90% ei kujuta endast tegelikku kontsentratsiooni. 50% ja 90% kujutavad endast relatiivseid kontsentratsioone, mis põhinevad varasemal nomenklatuuril, mille järgi Percoll’i® 1:9 lahus võrdus 100% isotoonilise töölahusega. ÜLDINE PROTSEDUUR Järgnevalt on toodud liikuva sperma seemnevedelikust gradiendiga eraldamise kahe-etapiline üldprotseduur Mahtu ja kontsentratsiooni võib muuta vastavalt labori eelistustele (st minigradient, külmutatult säilitatud seemnevedelik, kolmekihiline gradient). 1. Tooge kõik söötme komponendid toatemperatuurile, st 37°C. 2. Kasutades steriilset pipetti, viige 1,5...2,0 mL ALUMIST KIHTI steriilsesse, ühekordsesse, koonilisse tsentrifuugituubi. 3. Kasutades uut steriilset pipetti, viige ALUMISE KIHI peale võrdne kogus ÜLEMIST KIHTI. Selleks viige pipeti ots katsuti seinal vastu ALUMISE KIHI pinda. Ettevaatlikult dispenseerige ÜLEMINE KIHT pipeti otsaga spiraalselt mööda katsuti sisemist seina ülespoole tõmmates ÜLEMISE KIHI pinna tõustes. 4. Õ r n a l t a s e t a g e 1 , 5 . . . 2 , 0 m L v e d e l d a t u d seemnevedelikku ÜLEMISSE KIHTI, kasutades selleks uut steriilset pipetti. 5. Tsentrifuugige umbes 200...300 g juures 10...20 minutit.* Ettevaatlikult tooge välja settetombuke, kas ÜLEMISE ja ALUMISE KIHI pealt ära aspireerimise teel või settetombukese otseselt välja võtmise ja uude steriilsesse tsentrifuugi tuubi sisse kandmise teel. *Märkus: Tsentrifuugimiskiiruse ja -aja määramisel tuleb hinnata ja arvesse võtta spermaproovi kvaliteeti. Protseduuri optimeerimiseks tuleb kiirust ja aega korrigeerida vastavalt proovi kvaliteedite. 6. Kasutades uut steriilset pipetti, lisage 2,0...3,0 mL sobivat pesemisvahendit nagu Sperm Washing Medium (IS kataloogi nr 9983) või Modified HTF (IS kataloogi nr 90126) koos proteiinilisandiga. Resuspendeerige isoleeritud settetombuke. Tsentrifuugige ~200 g juures 8...10 minutit ja eemaldage supernatant. Korrake seda sammu teistkordseks pesemiseks. Visake supernatant ära ja resuspendeerige settetombuke, kasutades selleks sobiva söötme vastavat kogust. Proov on nüüd analüüsimiseks valmis. Toodete kasutamise üksikasjaliku informatsiooni vajamise korral peab iga labor kasutama oma labori protseduure ja protokolle, mis on välja arendatud ja optimeeritud konkreetselt teie oma meditsiiniprogrammi jaoks. SÄILITAMISJUHISED JA STABIILSUS Hoidke avamata anumad külmkapis temperatuuril 2 º... 8 ºC. Enne kasutamist soojendage ümbritseva õhu või inkubaatori temperatuurile (37°C). Ärge külmutage ega jätke kõrgete temperatuuride kätte. ISolate on stabiilne karbi ja pudeli etiketile märgitud tähtpäevani, kui seda on säilitatud juhendis ettenähtud tingimustes. ETTEVAATUSABINÕUD JA HOIATUSED See seade on ette nähtud kasutamiseks tervishoiutöötajatele, kes on saanud vastava koolituse, kaasa arvatud selle seadme kavandatud kasutuse alal. ISolate on läbipaistmatu. See on selle toote puhul normaalne. Ärge kasutage söödet viaalist, milles on märgata osakesi või saastumist (st ebaühtlane hägusus). ISolate peab CO2 inkubaatoris kasutamise korral olema tihedalt korgistatud vältimaks muutusi pH-s. Toode ei sisalda säilitusaineid, antibiootikume ega proteiinilisandeid. Saastamise vältimiseks käsitsege vahendeid aseptilist tehnikat kasutades. Kahjustuste ilmnemise korral mitte kasutada. Palun visake ära või tagastage tootjale, kes selle asendab. ETTEVAATUST: Riiklik (USA) seadusandlus piirab seadme müüki ning see võib toimuda üksnes arsti poolt või arsti korraldusel. ISolate® Catalog No. 99264 12 x 6 mL, 2 x 50 mL, 2 x 100 mL Ready to Use Density Gradient Medium at Two Concentrations Catalog No. 99275 Stock Solution 100 mL Catalog No. 99306 Concentrate 100 mL REFERENCES Adaniya GK, Jackson KV: Comparison of Percoll® and ISolate® in the Preparation of Semen for use in Assisted Reproductive Technologies. 53rd Annual Meeting of the American Society for Reproductive Medicine, Cincinnati, Ohio; 0-113, 1997. Symbols: Catalog Number Lot Number Tarchala SM, Fahy MM, Hauserman HM, Kallmann K, Volentine K, Radwanska E, Binor Z, Molo MW, Rawlins RG: ISolate® As a New Method of Sperm Separation. 53rd Annual Meeting of the American Society for Reproductive Medicine, Cincinnati, Ohio; P-116, 1998. Miller, KF, Fry KL, Arciaga RL, Falcone T: Semen preparation for in-vitro fertilization using ISolate® results in sperm recovery, fertilization and pregnancy outcomes that are indistinguishable from those obtained with Percoll®. 14th Embryology, Goteborg, Sweden; P-116, 1998. Tarchala SM, Volentine KK, Rawlins RG: A comparison of sperm processing using ISolate® and Pure Sperm™. 14th Annual Meeting of the European Society of Human Reproduction and Embryology, Goteborg, Sweden; R-041, 1998. Sterilized using aseptic processing techniques (filtration) Expiration: Year - Month - Day Caution:See instructions for use European Representative MPIE Schutweg 13A 5145 NP Waalwijk, The Netherlands See instructions for use. Storage Temperature CE Mark 0050 0050 ISolate is a Registered Trademark of Irvine Scientific ® Percoll ® is a Registered Trademark of Pharmacia Biotech, AB Sweden MPIE Schutweg 13a 5145 NP Waalwijk, The Netherlands ISolate is een membraangefilterde, op aseptische wijze bewerkte colloïdale suspensie van silicadeeltjes die zijn gestabiliseerd met covalent gebonden, hydrofiel silaan in HEPES-gebufferde HTF. Het Sterility Assurance Level (SAL) is 10-3. ISolate is negatief gebleken voor pyrogenen bij een konijnpyrogeentest. GEBRUIKSAANWIJZING C a t a l o g u s n r. 9 9 2 6 4 - K A N T- E N KLAAR COLLOÏDAAL SILICA IN TWEE CONCENTRATIES (50% en 90%) A.Voorgestelde materialen: ISolate • Irvine Scientific catalogusnr. 99264 (6ml, 50ml of 100 ml ampulkit) Sperm Washing Medium • Irvine Scientific catalogusnr. 9983 Steriele, conische wegwerpcentrifugebuisjes • Irvine Scientific catalogusnr. IS-325 Pasteurpipetten, steriel Centrifugeren Incubator, 37 °C B. Gradiëntpreparatie: Geen voorafgaande verdunningen noodzakelijk. Elke ampul van bovenste en onderste laaggradiënt is klaar voor gebruik. Ga door naar het gedeelte ALGEMENE PROCEDURE in de productbijsluiter. Catalogusnr. 99275 - STOCK SOLUTION 90% dichtheidsgradiëntmedium voor gebruik in een enkelvoudige procedure of voor verdere verdunning. A.Voorgestelde materialen: ISolate STOCK SOLUTION •Irvine Scientific catalogusnr. 99275 Modified Human Tubal Fluid •Irvine Scientific catalogusnr. 90126 Sperm Washing Medium •Irvine Scientific catalogusnr. 9983 Steriele, conische wegwerpcentrifugebuisjes •Irvine Scientific catalogusnr. IS-325 Pasteurpipetten, steriel Centrifugeren Incubator, 37 °C 5. Centrifugeer gedurende 10-20 minuten bij ca. 200 - 300xg.* Stel de pellet voorzichtig bloot door de “BOVENSTE” en “ONDERSTE LAGEN” te aspireren of de pellet direct te verwijderen en over te brengen naar een nieuw steriel centrifugebuisje. *Opm.: de kwaliteit van het spermamonster dient te worden beoordeeld en in aanmerking te worden genomen bij het bepalen van de juiste centrifugeersnelheid en -tijd. Deze moeten worden aangepast aan de individuele monsterkwaliteit zodat een optimale procedure wordt verkregen. 6. Voeg met een nieuw steriel pipet 2,0 - 3,0 ml van een geschikt wasmiddel zoals Sperm Washing Medium (IS catalogusnr. 9983) of Modified HTF (IS catalogusnr. 90126) met eiwitsupplement toe. Resuspendeer de geïsoleerde pellet. Centrifugeer (~200xg) gedurende 8 -10 minuten en verwijder het supernatant. Herhaal deze stap voor een tweede wasbeurt. Voer het supernatant af en resuspendeer de pellet met een geschikt volume van het juiste medium. Het monster is nu klaar voor analyse. Voor aanvullende informatie over het gebruik van deze producten, dient elk laboratorium haar eigen laboratoriumprocedures en -protocollen te raadplegen die speciaal zijn ontwikkeld en geoptimaliseerd voor uw individueel medisch programma. BEWAARINSTRUCTIES EN STABILITEIT Bewaar de ongeopende containers gekoeld bij 2 °C tot 8 °C. Vóór gebruik opwarmen tot omgevingstemperatuur of incubatortemperatuur (37 °C). Niet invriezen of blootstellen aan hoge temperaturen. VOORZORGSMAATREGELEN EN WAARSCHUWINGEN Dit hulpmiddel is bedoeld voor gebruik door personeel dat opgeleid is voor procedures inclusief de aangegeven toepassing waarvoor het hulpmiddel is bedoeld. Catalogusnr. 99306 - CONCENTRATE Colloïdaal silicaconcentraat voor verdere verdunning in dichtheidsgradiënten; geformuleerd in een isotone buffer en benadert de dichtheid van onverdund Percoll®. ISolate® CONCENTRATE werd beoordeeld volgens deze bijsluiter bij een gradiënt van 50% en 90%. Elke laboratorium kan kiezen voor gradiënten bij verschillende concentraties die op effectiviteit dienen te worden gecontroleerd. A.Voorgestelde materialen: ISolate® concentraat •Irvine Scientific catalogusnr. 99306 Modified Human Tubal Fluid •Irvine Scientific catalogusnr. 90126 Sperm Washing Medium •Irvine Scientific catalogusnr. 9983 Steriele, conische wegwerpcentrifugebuisjes •Irvine Scientific catalogusnr. IS-325 Pasteurpipetten, steriel Centrifugeren Incubator, 37 °C B. Gradiëntpreparatie: Er zijn twee oplossingen nodig voor de gradiëntspermascheidingsmethode: een bovenste laag en een onderste laag. 1. Oplossing bovenste laag - 50%: a) Neem het CONCENTRATE (catalogusnr. 99306) en pipetteer 4,5 ml in een steriel centrifugebuisje b) Voeg 5,5 ml Modified Human Tubal Fluid (catalogusnr. 90126) toe c) Draai de dop op het buisje en keer deze voorzichtig 3-4 keer om zodat de inhoud goed wordt gemengd b) Plak een sticker met de tekst “BOVENSTE LAAG” op het buisje 2. Oplossing onderste laag - 90%: a) Neem het CONCENTRATE (catalogusnr. 99306) en pipetteer 8,1 ml in een steriel centrifugebuisje b) Voeg 1,9 ml Modified Human Tubal Fluid (catalogusnr. 90126) toe c) Draai de dop op het buisje en keer deze voorzichtig 3-4 keer om zodat de inhoud goed wordt gemengd b) Plak een sticker met de tekst “ONDERSTE LAAG” op het buisje 3. Ga door naar het gedeelte ALGEMENE PROCEDURE in de productbijsluiter. (OPM.: 10 ml bovenste laag en 10 ml onderste laag zijn voldoende voor de bewerking van ca. 5 semen monsters.) Opm.: de aanduidingen 50% en 90% vertegenwoordigen geen werkelijke concentraties. De 50% en 90% zijn relatieve concentraties gebaseerd op de vorige nomenclatuur waarbij een 1:9 oplossing van Percoll® gelijk staat aan een 100% werkende, isotone oplossing ALGEMENE PROCEDURE Hieronder wordt een algemene procedure beschreven voor een tweestaps gradiëntscheiding van motiel sperma en semen. Het volume en de concentratie kunnen worden aangepast aan de voorkeur van elk laboratorium (bijv. minigradiënt, cryopreservatiesemen, drielaagse gradiënt). op 2. Breng met een steriel pipet 1,5 - 2,0 ml van de “ONDERSTE LAAG” over naar een steriel, conisch wegwerpcentrifugebuisje. 2511 Daimler Street, Santa Ana, California 92705-5588 Telephone: 1 949 261 7800 • 1 800 437 5706 Fax: 1 949 261 6522 • www.irvinesci.com PN 40558 Rev.10 4. Plaats 1,5 - 2,0 ml van het vloeibaar geworden semen voorzichtig op de “BOVENSTE LAAG” met behulp van een nieuw steriel pipet. Als ISolate zoals voorgeschreven wordt bewaard, is het stabiel tot aan de houdbaarheidsdatum die op de sticker van de doos en fles is vermeld. B. Gradiëntpreparatie: Er zijn twee oplossingen nodig voor de gradiëntspermascheidingsmethode: een bovenste laag en een onderste laag. 1. Oplossing bovenste laag - 50%: a) Neem de STOCK SOLUTION (catalogusnr. 99275) en pipetteer 5,6 ml in een steriel centrifugebuisje b) Voeg 4.4 ml Modified Human Tubal Fluid (catalogusnr. 90126) toe c) Draai de dop op het buisje en keer deze voorzichtig 3-4 keer om zodat de inhoud goed wordt gemengd b) Plak een sticker met de tekst “BOVENSTE LAAG” op het buisje 2. Oplossing onderste laag - 90%: a) Vul een steriel centrifugebuisje met 10 ml van de STOCK SOLUTION en sluit dit af met een dop - (Geen verdere verdunningen noodzakelijk - STOCK SOLUTION is 90%) b) Plak een sticker met de tekst “ONDERSTE LAAG” op het buisje 3. Ga door naar het gedeelte ALGEMENE PROCE DURE in de productbijsluiter. (OPM.: 10 ml bovenste laag en 10 ml onderste laag zijn voldoende voor de bewerking van ca. 5 semenmonsters.) 1. B r e n g a l l e m e d i a c o m p o n e n t e n omgevingstemperatuur of 37 °C. ROMÂNĂ POLSKI NEDERLANDS PRODUCTBESCHRIJVING ISolate® is een dichtheidsgradiëntmedium dat ontworpen is om het motiele gedeelte van het sperma te scheiden van de spermavloeistof. Als een tweelaags gradiëntsysteem vermindert het effectief celverontreinigende stoffen zoals dood sperma, witte bloedcellen en ander afval. Het resulterende monster bevat voornamelijk motiel sperma. 3. Breng met een nieuw steriel pipet een gelijk volume van de “BOVENSTE LAAG” over naar het bovenste gedeelte van de “ONDERSTE LAAG”. Dit kan worden bereikt door het oppervlak van de “ONDERSTE LAAG” tegen de zijkant van het buisje te houden met de punt van het pipet. Pipetteer de “BOVENSTE LAAG” voorzichtig door de pipetpunt in een opwaartse spiraalbeweging rondom de omtrek van het buisje te draaien als het niveau van de “BOVENSTE LAAG” stijgt. ISolate zal er opaak uitzien. Dit is normaal voor dit product. Gebruik geen ampullen met een medium dat (vaste) deeltjes bevat of besmet is (niet-uniform troebel). ISolate dient goed met een dop te worden afgesloten als het wordt gebruikt in een CO2-incubator om pH-wijzigingen te vermijden. Dit product bevat geen conserveringsmiddelen, antibiotica of eiwitsupplementen. Gebruik aseptische methoden om besmettingsproblemen te vermijden. Niet gebruiken indien beschadigd. Afvoeren of terugsturen naar de fabrikant voor een vervanging. VOORZICHTIG: volgens de Amerikaanse federale wetgeving mag dit product alleen door of op voorschrift van een arts worden verkocht. OPIS PRODUKTU ISolate® jest pożywką z gradientem gęstości, stworzoną do rozdziału frakcji plemników ruchliwych od płynu nasiennego. Ten system o dwupoziomowym gradiencie jest skuteczny w redukowaniu zanieczyszczeń komórkowych, takich jak martwe plemniki, białe ciałka krwi i szczątkowe zanieczyszczenia. Powstała próbka zawiera głównie ruchliwe plemniki. ISolate jest to filtrowana membranowo, aseptycznie przetwarzana zawiesina krzemionkowa cząsek krzemu, stabilizowana kowalentnie związanym hydrofilowym krzemem w HTF zbuforowanym HEPES. Bezpieczny poziom sterylności (SAL) wynosi 10 -3. ISolate został przetestowany i reagował negatywnie na pirogeny, przy użyciu testu króliczych pirogenów., WSKAZÓWKI UŻYCIA Nr katalogowy: 99264 – KRZEMIONKA KOLOIDALNA GOTOWA DO UŻYCIA W DWÓCH STĘŻENIACH (50% i 90%) A. Sugerowane materiały: ISolate • Nr w Katalogu Irvine Scientific: 99264 (6ml, 50ml lub 100 ml zestaw fiolek) Pożywka do przemywania nasienia • Nr w Katalogu Irvine Scientific: 9983 Sterylne, jednorazowe, stożkowe probówki wirówkowe • Nr w Katalogu Irvine Scientific: IS-325 Sterylne pipety Pasteura Wirówka Inkubator, 37 °C B. Przygotowanie roztworu: Nie są konieczne wstępne rozcieńczenia. Każda fiolka z gradientem górnej i dolnej warstwy jest gotowa do użycia. Kontynuować według części PROCEDURA OGÓLNA tej ulotki o leku. Nr katalogowy: 99275 – ROZTWÓR ZAPASOWY Pożywka o gradiencie gęstości 90% do użycia w jednoetapowej procedurze lub do dalszego rozcieńczania. A. Sugerowane materiały: ISolate ROZTWÓR ZAPASOWY •Nr w Katalogu Irvine Scientific: 99275 Zmodyfikowany Ludzki Płyn Jajowodowy •Nr w Katalogu Irvine Scientific: 90126 Pożywka do przemywania nasienia •Nr w Katalogu Irvine Scientific: 9983 Sterylne, jednorazowe, stożkowe probówki wirówkowe •Nr w Katalogu Irvine Scientific: IS-325 Sterylne pipety Pasteura Wirówka Inkubator, 37 °C B. Przygotowanie roztworu: Następujące dwa roztwory są wymagane do przeprowadzenia metody rozdziału nasienia wg gradientu: Górna warstwa i dolna warstwa. 1. Górna warstwa roztworu - 50%: a) Wziąć ROZTWÓR ZAPASOWY (nr katalogowy: 99275) i odpipetować 5,6 ml do sterylnej probówki wirówkowej b) Dodać 4.4 ml do Modified Human Tubal Fluid (nr katalogowy: 90126) c) Zamknąć probówkę i delikatnie odwracać 3-4 razy, aby umożliwić dokładne wymiesza nie. d) Oznakować probówkę jako „GÓRNA WARSTWA” 2. Dolna warstwa roztworu - 90%: a) Wydzielić 10 ml alikwot ROZTWORU ZAPA SOWEGO do sterylnej probówki wirówkowej i zamknąć zatyczką – (nie jest konieczne dalsze rozcieńczanie – ROZTWÓR ZAPASOWY jest 90%) b) Oznakować probówkę jako „DOLNA WARSTWA” 3. Kontynuować według części PROCEDURA OGÓLNA tej ulotki o leku. (UWAGA: 10 ml warstwy górnej i 10 ml warstwy dolnej wystar czy na przygotowanie 5 próbek nasienia). Nr katalogowy: 99306 - ROZTWÓR STĘŻONY Stężona krzemionka koloidalna do dalszego rozcieńczania na gradienty gęstości; sporządzona w izotonicznym buforze i zbliżona do gęstości nierozcieńczonego roztworu Percoll®. STĘŻONY ROZTWÓR ISolate® badany był z gradiantem 50% i 90% zgodnie z informacją podaną w niniejszej ulotce. Każde laboratorium może przygotować swoje własne roztwory o różnych stężeniach, które będą badane pod względem ich skuteczności. A. Sugerowane materiały: Stężony roztwór ISolate® •Nr w Katalogu Irvine Scientific: 99306 Zmodyfikowany Ludzki Płyn Jajowodowy •Nr w Katalogu Irvine Scientific: 90126 Pożywka do przemywania nasienia •Nr w Katalogu Irvine Scientific: 9983 Sterylne, jednorazowe, stożkowe probówki wirówkowe •Nr w Katalogu Irvine Scientific: IS-325 Sterylne pipety Pasteura Wirówka Inkubator, 37 °C B. Przygotowanie roztworu: Następujące dwa roztwory są wymagane do przeprowadzenia metody rozdziału nasienia wg gradientu: Górna warstwa i dolna warstwa. 1. Górna warstwa roztworu - 50%: a) Wziąć ROZTWÓR STĘŻONY (nr katalogowy: 99306) i odpipetować 4.5 ml do sterylnej probówki wirówkowej b) Dodać 5.5 ml do Modified Human Tubal Fluid (nr katalogowy: 90126) c) Zamknąć probówkę i delikatnie odwracać 3-4 azy, aby umożliwić dokładne wymieszanie. d) Oznakować probówkę jako „GÓRNA WARSTWA” 2. Dolna warstwa roztworu - 90%: a) Wziąć ROZTWÓR STĘŻONY (nr katalogowy: 99306) i odpipetować 8.1 ml do sterylnej probówki wirówkowej b) Dodać 1.9 ml do Modified Human Tubal Fluid (nr katalogowy: 90126) c) Zamknąć probówkę i delikatnie odwracać 3-4 razy, aby umożliwić dokładne wymieszanie. d) Oznakować probówkę jako „DOLNA WARSTWA” 3. Kontynuować według części PROCEDURA OGÓLNA tej ulotki o leku. (UWAGA: 10 ml warstwy górnej i 10 ml warstwy dolnej wystarczy na przygotowanie 5 próbek nasienia). Uwaga: Terminy 50% i 90% nie odpowiadają właściwym stężeniom. 50% i 90% są odpowiadającymi stężeniami opartymi na porzedniej nomenklaturze, która definiowała rozcieńczenie 1:9 roztworu Percoll® jako równe z 100% pracującym, roztworem izotonicznym. PROCEDURA OGÓLNA Poniżej podana jest ogólna procedura dla dwustopniowej separacji plemników ruchliwych od nasienia. Objętość i stężenie mogą być zmodyfikowane w celu zgodności z preferencjami laboratorium (tzn.: mini-gradient, nasienie zabezpieczone kriogeniczne, roztwór trzywarstwowy). 1. Podgrzać wszystkie podłoża do temperatury pokojowej lub 37 °C. 2. Przy użyciu sterylnej pipety, przenieść 1,5 – 2,0 ml „DOLNEJ WARSTWY” do sterylnej, jednorazowej, stożkowej probówki wirówkowej. 3. Przy użyciu nowej sterylnej pipety, przenieść jednakową objętość „GÓRNEJ WARSTWY” na wierzch „DOLNEJ WARSTWY”. Jest to wykonane przez dotknięcie końcówką pipety powierzchni „DOLNEJ WARSTWY” z boku probówki. Ostrożnie odebrać „GÓRNĄ WARSTWĘ” poprzez poruszanie spiralnym ruchem końcówki pipety po obwodzie probówki ruchem wznoszącym, podczas podnoszenia się poziomu „GÓRNEJ WARSTWY”. 4. Ostrożnie umieścić 1,5 – 2,0 ml płynnego nasienia na „GÓRNEJ WARSTWIE” przy użyciu nowej sterylnej pipety. 5. Wirować przez 10-20 minut, przy użyciu siły około 200 - 300xg.* Ostrożnie odsłonić pelet poprzez zaaspirowanie „GÓRNEJ ” i „DOLNEJ WARSTWY” lub bezpośrednie zebranie peletu i przeniesienie do nowej sterylnej probówki. *Uwaga: Jakość próbki nasienia należy zbadać i wziąć pod uwagę podczas określania odpowiedniego czasu i szybkości wirowania. Należy je dopasować zgodnie z jakością indywidualnej próbki w celu optymalizacji procedury. 6. Przy użyciu nowej, sterylnej pipety dodać 2,0 – 3,0 ml odpowiedniej pożywki przemywającej, jak np.: Sperm Washing Medium (nr katalogowy IS: 9983) lub Modified HTF (nr katalogowy IS: 90126) z dodatkiem białka. Ponownie zawiesić odebrany pelet. Zwirować (~200xg) przez 8-10 minut i usunąć nadsącz. Powtórzyć ten etap w drugim przepłukiwaniu. Odebrać nadsącz i ponownie zawiesić pelet w odpowiedniej objętości właściwej pożywki. Teraz próbka jest gotowa do analizy. Aby zapoznać się z dodatkowymi szczegółami użycia tych produktów, każde laboratorium powinno odwołać się do jego własnych procedur laboratoryjnych i protokołów, które zostały specjalnie opracowane i zoptymalizowane dla indywidulanego programu medycznego. INSTRUKCJE DOTYCZĄCE PRZECHOWYWANIA I STABILNOŚCI Przechowywać w nieotwartych pojemnikach, w chłodziarce o temperaturze 2º C do 8 ºC. Podgrzać do temperatury otoczenia lub inkubatora (37 °C) przed użyciem. Nie zamrażać ani nie poddawać działaniu wysokich temperatur. ISolate jest stabilny do upłynięcia daty ważności wydrukowanej na pudełku i etykiecie butelki, gdy przechowywany zgodnie z instrukcją. ŚRODKI OSTROŻNOŚCI I OSTRZEŻENIA To urządzenie jest przeznaczone do użycia przez personel wykwalifikowany w dziedzinie procedur obejmujących wskazane zastosowanie, dla którego to urządzenie jest przeznaczone. ISolate będzie nieprzejrzysty. To jest normalne dla tego produktu. Nie używać żadnej fiolki z pożywką, w której widoczne są cząsteczki materii lub zanieczyszczenie (nierównomierne zmętnienie). ISolate należy zamknąć szczelnie w przypadku używania inkubatora CO2, aby uniknąć zmian pH. Ten produkt nie zawiera środków konserwujących, antybiotyków ani dodatków białkowych. Aby uniknąć próblemów z zanieczyszczeniem, posługując się tym produktem należy stosować technikę aseptyczną. Nie używać w przypadku uszkodzenia. Należy wyrzucić lub zwrócić do producenta w celu dokonania wymiany. U WA G A : P r a w o f e d e r a l n e ( S t a n ó w Zjednoczonych) zezwala na sprzedaż tego urządzenia tylko przez lub na polecenie lekarza. DESCRIEREA PRODUSULUI ISolate® este un mediu cu un gradient de concentraţie destinat să separe fracţiunile de spermatozoizi mobili din lichidul seminal Ca şi un sistem gradual pe 2 straturi, reduce contaminarea celulară de exemplu cu spermă moartă, leucocite sau alte reziduuri. Rezultă mostre care conţin predominant spermatozoizi mobile. ISolate este filtrat prin membrană, prelucrat aseptic care conţine particule de silicat în suspensie coloidală, stabilizate prin legături covalente hidrofilice silane solutia tamponată HEPES- HTF . Nivelul de sterilitate asigurat este de (SAL)10-3. ISolate a fost testat cu test pirogen de iepure şi găsit apirogen . INSTRUCŢIUNI DE UTILIZARE Catalog #99264- GATA PENTRU FOLOSIREA S I L I C AT U L U I C O L O I D A L L A D O U Ă CONCENTRAŢII ( 50 % ŞI 90%) A. Materiale propuse: ISolate • Irvine Scientific Catalog #99264 (kit fiolă de 6mL, 50mL sau 100 mL ) Sperm Washing Medium • Irvine Scientific Catalog #9983 Tuburi conice sterile de centrifugă de unică folosinţă • Irvine Scientific Catalog #IS-325 Pipetă sterilă Pasteur Centrifugă Incubator, 37ºC B. Prepararea Gradientului: Nu este necesară diluarea preliminară. Fiecare fiolă cu gradientul stratului de sus şi jos este gata pentru folosinţă. Continuaţi cu PROCEDURI GENERALE, paragraful utilizarea produsului. Catalog # 99275 STOCK SOLUTION Se utilizează 90% din densitatea gradientului de mediu în prima treaptă sau pentru diluări ulterioare. A. Materiale propuse: ISolate STOCK SOLUTION stoc de soluţie ISolate •Irvine Scientific Catalog #99275 Lichid uman tubal modificat •Irvine Scientific Catalog #90126 Sperm Washing Medium •Irvine Scientific Catalog #9983 Tuburi conice sterile de centrifugă de unică folosinţă •Irvine Scientific Catalog #IS-325 Pipetă sterilă Pasteur Centrifugă Incubator, 37ºC B. Prepararea Gradientului: Două soluţii sunt necesare pentru a executa procedeul de separare a spermatozoizilor Stratul de sus şi stratul de jos. Stratul de sus şi stratul de jos. 1. Soluţie stratul de sus -50%. a) Luaţi STOCK SOLUTION (Catalog #99275) şi pipaaţi de 5.6 ml într-un tub de centrifugă sterilă b) Adăugaţi 4.4 ml de Modified Human Tubal Fluid (Catalog# 90126) c) Puneţi capacul tubului şi prin răsturnare efectuată cu grijă de 3-4 ori, veţi realiza amestecarea completă. d) Etichetaţi tubul ca şi “ STRAT DE SUS” 2. Soluţie stratul de jos -90%. a) Alicot în 10 ml de soluţie STOCK într-un tub steril de centrifugă cu capac - (nu este necesară diluţia ulterioară - soluţia STOCK are concentraţia de 90%) b) Etichetaţi tubul “ STRATUL DE JOS” 3. Continuaţi la procedurile generale din instrucţiunile de folosire. (NOTĂ: 10 ml din stratul de sus şi 10 ml din stratul de jos, va prelucra aproximativ 5 mostre de spermă). Catalog # 99306 CONCENTRATE Concentratul de silicat coloidal pentru mai multă diluare a densităţii gradientului ; formulat în tamponare isotonică şi aproximează densitatea nediluată al Percoll®-ului. ISolate® CONCENTRATE a fost evaluat conform concentraţiei de 50% şi 90%, înscrisă pe pachet gradient de la 50% până la 90%). Fiecare laborator îşi poate alege să facă gradienţii la diferite concentraţii, care ar trebui evaluat pentru eficacitate. A. Materiale propuse: ISolate® Concentrat •Irvine Scientific Catalog #99306 Lichid uman tubal modificat •Irvine Scientific Catalog #90126 Sperm Washing Medium •Irvine Scientific Catalog #9983 Tuburi conice sterile de centrifugă de unică folosinţă •Irvine Scientific Catalog #IS-325 Pipetă sterilă Pasteur Centrifugă Incubator, 37ºC B. Prepararea Gradientului: Două soluţii sunt necesare pentru a executa procedeul de separare a spermatozoizilor Stratul de sus şi stratul de jos. 1. Soluţie stratul de sus -50%. a) Luaţi CONCENTRATE (Catalog #99306) şi pipete de 4.5 ml într-un tub steril de centrifugă b) Adăugaţi 5.5 ml de Modified Human Tubal Fluid (Catalog# 90126) c) Puneţi capacul tubului şi prin răsturnare efectuată cu grijă de 3-4 ori, veţi realiza amestecarea completă. d) Etichetaţi tubul ca şi “ STRAT DE SUS” 2. Soluţie stratul de jos -90%. a) Luaţi CONCENTRATE (Catalog #99306) şi pipete de 8.1 ml într-un tub steril de centrifugă b) Adăugaţi 1.9 ml de Modified Human Tubal Fluid (Catalog# 90126) c) Puneţi capacul tubului şi prin răsturnare efectuată cu grijă de 3-4 ori, veţi realiza amestecarea completă. d) Etichetaţi tubul ca şi “ STRAT DE JOS” 3. Continuaţi la procedurile generale din instrucţiunile de folosire. (NOTĂ: 10 ml din stratul de sus şi 10 ml din stratul de jos, va prelucra aproximativ 5 mostre de spermă). Notă: Termeni de 50% şi 90% nu reprezintă concentraţia actuală. Cele de 50% şi 90% sunt concentraţii bazate pe nomenclatura anterioară care defineşte o diluţie de 1:9 de Percoll® , identică în totalitate cu soluţia izotonică de lucru. PROCEDURI GENERALE Urmează a doua treaptă de procedură generală şi anume de separare a spermatozoidului mobil din spermă. Volumul şi concentraţia pot fi modificate în funcţie de preferinţele fiecărui laborator. (ex: mini-gradient, crioconservarea spermei, gradient în trei straturi.) 1. Aduceţi toţi componenţii mediului la temperatura camerei sau 37°C. 2. Folosind pipetă sterilă, transferaţi 1.5 - 2.0 ml din “STRATUL DE JOS” într-un tub steril de centrifugă conică de unică folosinţă. 3. Cu ajutorul unei pipete noi sterile, transferaţi un volum egal cu cel situat între cele două semne care delimitează “stratul de sus” şi “stratul de jos”. Aceasta este făcută prin contactul cu suprafaţei “STRATULUI JOS” de la marginea tubului cu vârful pipetei. Preparaţi cu grijă “STRATUL DE SUS” prin învârtirea spiralată a vârfului pipetei în sus, în jurul circumferinţei tubului aşa cum “STRATUL DE SUS” se ridică. 4. Cu ajutorul unei pipete sterile puneţi cu blândeţe 1,5-2 ml de spermă lichefiată până la “nivelul de sus” a tubului. EESTI SVENSKA 5. Centrifugaţi timp de 10-20 de minute, la aproximativ 200- 300 xg.* Granulele vor fi expuse cu grijă prin aspirarea “ STRATULUI DE SUS” şi a “STRATULUI DE JOS” sau prin scoaterea directă a acestora şi mutarea lor într-un tub steril de centrifugă. *Notă: Calitatea mostrei de spermatozoids trebuie să fie evaluată şi luată în considerare când se determină timpul şi viteza proprie pentru centrifugare. Acestea trebuie ajustate în concordanţă cu calitatea mostrei individuale în vederea optimizării procesului de prelucrare. 6. Folosind o pipetă sterilă nouă, adăugaţi 2.0 - 3.0 ml mediu de spălare utilizând Sperm Washing Medium (IS Catalog# 9983) sau Modified HTF (IS Catalog #90126) cu adaos de proteine. Resuspendaţi granulele izolate. Centrifugaţi (~200xg) pentru 8-10 minute şi îndepărtaţi supernatantul. Repetaţi această treaptă pentru a doua spălare. Îndepărtaţi supernatantul şi resuspendaţi granula folosind un volum potrivit de mediu adecvat. Mostra acum este gata pentru analiză. Pentru detalii suplimentare privind folosirea acestui produs, fiecare laborator trebuie să consulte protocolul pentru procedurile utilizate în laborator care sunt specifice şi optimizate pentru programul medical individual. INSTRUCŢIUNI PENTRU PĂSTRARE ŞI STABILITATE Păstraţi sticlele sau containerele nedeschise refrigerate la 2º to 8ºC. Încălziţi la temperatura mediului ambiant sau la incubator la temperatură (37°C) înainte de a utilliza. Nu congelaţi sau expuneţi la temperaturi mari. ISolate este stabil până la data expirării înscrise pe eticheta de pe cutie dacă sunt respectate condiţiile de depozitare. PRECAUŢII ŞI AVERTISMENTE Acest dispozitiv este destinat să fie utilizat de personalul specializat în proceduri care includ aplicarea indicată pentru care a fost creat dispozitivul. ISolate va apărea opac. Este normal pentru acest produs. Nu utilizaţi fiole cu mediu care prezintă reziduuri de particule sau semne de contaminare (înceţoşare neuniformă) ISolate ar trebui să fie închis ermetic atunci când se foloseşte în incubator cu CO2 pentru a evita schimbări ale nivelurilor de pH. Acest produs nu conţine conservanţi, antibiotice, sau suplemente de proteină. Pentru a evita probleme de contaminare, mânuiţi folosind tehnici aseptice. Nu se utilizează în caz de deteriorare. Vă rugăm aruncaţi sau înapoiaţi producătorului pentru a fi înlocuit. AVERTISMENT: Legile Federale în (SUA) nu permit vânzarea acestui aparat numai la comanda unui medic sau pe bază de comanadă. PRODUKTBESKRIVNING ISolate® är ett densitetsgradientmedium framtaget för att separera den rörliga spermiefraktionen från sädesvätska. Detta gradientsystem med två skikt minskar effektivt förekomsten av cellulära kontaminanter, såsom döda spermier, vita blodkroppar och annat skräp. Det resulterande provet innehåller huvudsakligen rörliga spermier. ISolate är en membranfiltrerad, aseptiskt behandlad kolloidal suspension av kiselpartiklar stabiliserade med kovalent bundet hydrofilt silan i HEPES-buffrad HTF. Sterilitetsnivån (SAL, sterility assurance level) är 10 -3. ISolate har testats med pyrogentest på kanin och befunnits negativ för pyrogener. BRUKSANVISNING Katalognr 99264 - KOLLOIDAL KISELDIOXID, FÄRDIG ATT ANVÄNDA, I TVÅ KONCENTRATIONER (50 % och 90 %) A. Rekommenderat material: ISolate • Irvine Scientific katalognr 99264 (sats med 6 mL, 50mL eller 100 mL ampuller) Sperm Washing Medium • Irvine Scientific katalognr 9983 Sterila, konformade centrifugrör för engångsbruk • Irvine Scientific katalognr IS-325 Pasteurpipetter, sterila Centrifug Inkubator, 37 °C B. Gradientberedning: Inga förspädningar krävs. Varje ampull med topp- och bottengradient är färdig att användas. Fortsätt till avsnittet ALLMÄNT FÖRFARANDE i produktens bipacksedel. Katalognr 99275 - STOCK SOLUTION 90 % densitetsgradient-medium för användning i en procedur i ett steg eller för ytterligare spädning. A. Rekommenderat material: ISolate Stock Solution • Irvine Scientific katalognr 99275 Modified Human Tubal Fluid • Irvine Scientific katalognr 90126 Sperm Washing Medium • Irvine Scientific katalognr 9983 Sterila, konformade centrifugrör för engångsbruk • Irvine Scientific katalognr IS-325 Pasteurpipetter, sterila Centrifug Inkubator, 37 °C B. Gradientberedning: Två lösningar krävs för att utföra spermieseparation med gradientmetoden: En toppskikts- och en bottenskiktslösning. 1. Toppskiktslösning - 50 %: a) Ta STOCK SOLUTION (katalognr 99275) och pipettera 5,6 mL i ett sterilt centrifugrör b) Tillsätt 4,4 mL Modified Human Tubal Fluid (katalognr 90126) c) Förslut röret och vänd det varligt 3-4 gånger så att innehållet blandas fullständigt d) Märk röret med “TOPPSKIKT” 2. Bottenskiktslösning - 90 %: a) Häll en alikvot på 10 mL av Stock Solution i ett sterilt centrifugrör och förslut - (ingen ytterligare spädning krävs - Stock Solution är på 90 %) b) Märk röret med “BOTTENSKIKT” 3. Fortsätt till avsnittet ALLMÄNT FÖRFARANDE i produktens bipacksedel. (OBS! 10 mL toppskikt och 10 mL bottenskikt räcker till cirka 5 spermaprover). Katalognr 99306 - CONCENTRATE Kolloidalt kisel-koncentrat för ytterligare spädning till densitetsgradienter; i isoton buffert och med ungefär samma densitet som ospädd Percoll®. ISolate® CONCENTRATE har utvärderats enligt denna bipacksedel vid gradienterna 50 % och 90 %. Varje laboratorium kan välja att framställa gradienter i andra koncentrationer, som bör utvärderas för effektivitet. A. Rekommenderat material: ISolate® Concentrate • Irvine Scientific katalognr 99306 Modified Human Tubal Fluid • Irvine Scientific katalognr 90126 Sperm Washing Medium • Irvine Scientific katalognr 9983 Sterila, konformade centrifugrör för engångsbruk • Irvine Scientific katalognr IS-325 Pasteurpipetter, sterila Centrifug Inkubator, 37 °C B. Gradientberedning: Två lösningar krävs för att utföra spermieseparation med gradientmetoden: En toppskikts- och en bottenskiktslösning. 1. Toppskiktslösning - 50 %: a) Ta CONCENTRATE (katalognr 99306) och pipettera 4,5 mL i ett sterilt centrifugrör b) Tillsätt 5,5 mL Modified Human Tubal Fluid (katalognr 90126) c) Förslut röret och vänd det varligt 3-4 gånger så att innehållet blandas fullständigt d) Märk röret med “TOPPSKIKT” 2. Bottenskiktslösning - 90 %: a) Ta CONCENTRATE (katalognr 99306) och pipettera 8,1 mL i ett sterilt centrifugrör b) Tillsätt 1,9 mL Modified Human Tubal Fluid (katalognr 90126) c) Förslut röret och vänd det varligt 3-4 gånger så att innehållet blandas fullständigt d) Märk röret med “BOTTENSKIKT” 3. Fortsätt till avsnittet ALLMÄNT FÖRFARANDE i produktens bipacksedel. Obs! Termerna 50 % och 90 % anger inte en faktisk koncentration. 50 % och 90 % är relativa koncentrationer baserade på tidigare nomenklatur som definierade en 1:9-spädning av Percoll ® såsom likvärdig med en 100 % fungerande, isoton lösning. ALLMÄNT FÖRFARANDE Följande är en generell procedur för en tvåstegsgradientseparation av rörliga spermier från sädesvätska. Volymen och koncentrationen kan modifieras för att passa det enskilda laboratoriets preferenser (dvs. minigradient, kryopreserverad sperma, treskiktsgradient). 1. Låt alla mediekomponenter uppnå rumstemperatur eller 37 °C. 2. Använd en steril pipett och överför 1,5 - 2,0 mL av “BOTTENSKIKTET” till ett sterilt, konformat centrifugrör för engångsbruk. 3. Använd en ny steril pipett och överför en lika stor volym “TOPPSKIKT” ovanpå “BOTTENSKIKTET” . Detta görs genom att vidröra ytan på “BOTTENSKIKTET” vid röret sida med pipettens spets. Dispensera omsorgsfullt “TOPPSKIKTET” genom att vrida pipettspetsen i spiral runt rörets omkrets i en uppåtriktad rörelse efterhand som “TOPPSKIKT”-nivån ökar. 4. Placera försiktigt 1,5 - 2,0 mL likvifierad sperma på “TOPPSKIKTET” med användning av en ny, steril pipett. 5. Centrifugera i 10 - 20 minuter vid cirka 200 - 300 x g.* Exponera pelleten omsorgsfullt genom att antingen suga av “TOPP-” och “BOTTENSKIKTEN”, eller genom att ta upp pelleten och föra över den till ett nytt, sterilt centrifugrör. *Obs! Spermaprovets kvalitet skall bedömas och tas i beaktande vid bestämning av korrekt centrifugeringshastighet och -tid. Dessa bör justeras i enlighet med det enskilda provets kvalitet, för optimering av förfarandet. 6. Använd en ny steril pipett och tillsätt 2,0 - 3,0 mL lämpligt tvättmedium såsom Sperm Washing Medium (IS katalognr 9983) eller Modified HTF (IS katalognr 90126) med proteinsupplement. Resuspendera den isolerade pelleten. Centrifugera (~200xg) i 8 - 10 minuter och avlägsna supernatanten. Upprepa detta steg för en andra tvätt. Kassera supernatanten och resuspendera pelleten med användning av en adekvat volym lämpligt medium. Provet är nu klart för analys. För ytterligare information om användning av dessa produkter bör varje laboratorium konsultera sina egna laboratorieförfaranden och -protokoll som utvecklats och optimerats särskilt för de egna medicinska programmen. FÖRVARING OCH HÅLLBARHET Oöppnade behållare skall förvaras i kylskåp vid 2 - 8 ºC. Värm till omgivnings- eller inkubator(37 °C)-temperatur före användning. Får ej frysas eller exponeras för höga temperaturer. ISolate är hållbart fram till det utgångsdatum som anges på kartongen och flasketiketterna, vid förvaring enligt anvisningarna. FÖRSIKTIGHETSÅTGÄRDER OCH VARNINGAR Denna produkt är avsedd att användas av personal med utbildning i procedurer vilka inkluderar den indicerade tillämpning för vilken produkten är avsedd. ISolate är ogenomskinligt. Detta är normalt för denna produkt. Använd inga ampuller med medium som innehåller partiklar eller företer tecken på kontamination (ojämn grumlighet). ISolate skall vara ordentligt förslutet vid användning i en CO2-inkubator så att pH-förändringar undviks. Denna produkt innehåller inga konserveringsmedel, antibiotika eller proteinsupplement. Använd aseptisk teknik vid hantering, så att kontamination undviks. Om produkten är skadad får den inte användas. Kassera den eller returnera den till tillverkaren för utbyte. OBS! Enligt federal (USA) lag får denna produkt endast säljas av eller på ordination av läkare. TOOTE KIRJELDUS ISolate® on tihedusgradiendi lahus, mis on koostatud liikuva sperma eraldamiseks seemnevedelikust. Kahekihilise gradiendi süsteem vähendab tõhusalt rakuliste saasteainete, sh surnud sperma, valgevererakkude ja mitmesuguste jäätmete hulka. Sellest saadud proov sisaldab peamiselt liikuvaid spermatosoide. ISolate on HEPESiga puhverdatud HTFis membraanfiltreeritud ja aseptilised töödeldud räniosakeste kolloiodne suspensioon kovalentselt seotud hüdrofiilse silaaniga. Garanteeritud steriilsustase (SAL) on 10 -3. Küüliku pürogeenitesti tegemisega on leitud, et ISolate on pürogeenide suhtes negatiivne. KASUTUSJUHEND Kataloogi nr 99264 - KASUTAMISVALMIS KOLLOIDNE RÄNIMULD KAHES KONTSENTRATSIOONIS (50% ja 90%) A. Soovitatavad materjalid: ISolate • Irvine Scientific katalooginr 99264 (6mL, 50mL või 100mL viaaliga komplekt) Sperm Washing Medium • Irvine Scientific katalooginr 9983 Steriilsed, ühekordsed koonilised tsentrifuugi tuubid • Irvine Scientific katalooginr IS-325 Pasteuri pipetid, steriilsed Tsentrifuug Inkubaator, 37°C B. Gradiendi valmistamine: Eelnevat lahjendamist ei ole vaja. Iga ülemise ja alumise gradiendi kihti sisaldav viaal on kasutamiseks valmis. Jätkake toote pakendi infolehel toodud ÜLDPROTSEDUURIDEGA. Kataloogi nr 99275 - STOCK SOLUTION 90%-ne tihedusgradiendi sööde kasutamiseks üheetapilises protseduuris või edasiseks lahjendamiseks. A. Soovitatavad materjalid: ISolate STOCK SOLUTION •Irvine Scientific katalooginr 99275 Modified Human Tubal Fluid •Irvine Scientific katalooginr 90126 Sperm Washing Medium •Irvine Scientific katalooginr 9983 Steriilsed, ühekordsed koonilised tsentrifuugi tuubid •Irvine Scientific katalooginr IS-325 Pasteuri pipetid, steriilsed Tsentrifuug Inkubaator, 37°C B. Gradiendi valmistamine: Sperma eraldamise gradientmeetodi jaoks on vaja kaks lahust: ülemine kiht ja alumine kiht. Ülemine kiht ja alumine kiht. 1. Ülemise kihi lahus - 50%: a) Võtke STOCK SOLUTION (kataloogi nr 99275) ja pipettige 5,6 mL steriilsesse tsentrifuugi tuubi. b) Lisage 4.4 mL lahust Modified Human Tubal Fluid (kataloogi nr 90126) c) Katke katsut korgiga ja keerake 3...4 korda põhi õrnalt üles-alla, et sisu täielikult seguneks d) Märkige katsutile “ÜLEMINE KIHT” 2. Alumise kihi lahus - 90%: a) Alikvootige 10 mL STOCK SOLUTIONit steriilsesse tsentrifuugi tuubi ja korgistage - (edasine lahjendamine ei ole vajalik - STOCK SOLUTION on 90%) b) Märkige katsutile “ALUMINE KIHT” 3. Jätkake toote pakendi infolehel toodud ÜLDPROTSEDUURIDEGA. (MÄRKUS: Kogusega 10 mL ülemist kihti ja 10 mL alumist kihti on võimalik töödelda umbes 5 eemnevedeliku proovi.) Kataloogi nr 99306 - CONCENTRATE Kolloidse ränimulla kontsentraat edasiseks lahjendamiseks tihedusgradientideks; valmistatud isotoonilises puhvris ja tiheduse poolest on lähedane lahustamata Percoll®-ile. ISolate® analüüsiti vastavalt pakendi infolehes toodule ning leiti gradiendid 50% ja 90%. Iga labor võib oma äranägemisel valmistada erinevates kontsentratsioonides gradiente, mille tõhusust tuleb hinnata. A. Soovitatavad materjalid: ISolate® kontsentraat •Irvine Scientific katalooginr 99306 Modified Human Tubal Fluid •Irvine Scientific katalooginr 90126 Sperm Washing Medium •Irvine Scientific katalooginr 9983 Steriilsed, ühekordsed koonilised tsentrifuugi tuubid •Irvine Scientific katalooginr IS-325 Pasteuri pipetid, steriilsed Tsentrifuug Inkubaator, 37°C B. Gradiendi valmistamine: Sperma eraldamise gradientmeetodi jaoks on vaja kaks lahust: ülemine kiht ja alumine kiht. 1. Ülemise kihi lahus - 50%: a) Võtke CONCENTRATE (kataloogi nr 99306) ja pipettige 4.5 mL steriilsesse tsentrifuugi tuubi. b) Lisage 5.5 mL lahust Modified Human Tubal Fluid (kataloogi nr 90126) c) Katke katsut korgiga ja keerake 3...4 korda põhi õrnalt üles-alla, et sisu täielikult seguneks d) Märkige katsutile “ÜLEMINE KIHT” 2. Alumise kihi lahus - 90%: a) Võtke CONCENTRATE (kataloogi nr 99306) ja pipettige 8.1 mL steriilsesse tsentrifuugi tuubi. b) Lisage 1.9 mL lahust Modified Human Tubal Fluid (kataloogi nr 90126) c) Katke katsut korgiga ja keerake 3...4 korda põhi õrnalt üles-alla, et sisu täielikult seguneks d) Märkige katsutile “ALUMINE KIHT” 3. Jätkake toote pakendi infolehel toodud ÜLDPROTSEDUURIDEGA. Märkus: Nimetusele lisatud 50% ja 90% ei kujuta endast tegelikku kontsentratsiooni. 50% ja 90% kujutavad endast relatiivseid kontsentratsioone, mis põhinevad varasemal nomenklatuuril, mille järgi Percoll’i® 1:9 lahus võrdus 100% isotoonilise töölahusega. ÜLDINE PROTSEDUUR Järgnevalt on toodud liikuva sperma seemnevedelikust gradiendiga eraldamise kahe-etapiline üldprotseduur Mahtu ja kontsentratsiooni võib muuta vastavalt labori eelistustele (st minigradient, külmutatult säilitatud seemnevedelik, kolmekihiline gradient). 1. Tooge kõik söötme komponendid toatemperatuurile, st 37°C. 2. Kasutades steriilset pipetti, viige 1,5...2,0 mL ALUMIST KIHTI steriilsesse, ühekordsesse, koonilisse tsentrifuugituubi. 3. Kasutades uut steriilset pipetti, viige ALUMISE KIHI peale võrdne kogus ÜLEMIST KIHTI. Selleks viige pipeti ots katsuti seinal vastu ALUMISE KIHI pinda. Ettevaatlikult dispenseerige ÜLEMINE KIHT pipeti otsaga spiraalselt mööda katsuti sisemist seina ülespoole tõmmates ÜLEMISE KIHI pinna tõustes. 4. Õ r n a l t a s e t a g e 1 , 5 . . . 2 , 0 m L v e d e l d a t u d seemnevedelikku ÜLEMISSE KIHTI, kasutades selleks uut steriilset pipetti. 5. Tsentrifuugige umbes 200...300 g juures 10...20 minutit.* Ettevaatlikult tooge välja settetombuke, kas ÜLEMISE ja ALUMISE KIHI pealt ära aspireerimise teel või settetombukese otseselt välja võtmise ja uude steriilsesse tsentrifuugi tuubi sisse kandmise teel. *Märkus: Tsentrifuugimiskiiruse ja -aja määramisel tuleb hinnata ja arvesse võtta spermaproovi kvaliteeti. Protseduuri optimeerimiseks tuleb kiirust ja aega korrigeerida vastavalt proovi kvaliteedite. 6. Kasutades uut steriilset pipetti, lisage 2,0...3,0 mL sobivat pesemisvahendit nagu Sperm Washing Medium (IS kataloogi nr 9983) või Modified HTF (IS kataloogi nr 90126) koos proteiinilisandiga. Resuspendeerige isoleeritud settetombuke. Tsentrifuugige ~200 g juures 8...10 minutit ja eemaldage supernatant. Korrake seda sammu teistkordseks pesemiseks. Visake supernatant ära ja resuspendeerige settetombuke, kasutades selleks sobiva söötme vastavat kogust. Proov on nüüd analüüsimiseks valmis. Toodete kasutamise üksikasjaliku informatsiooni vajamise korral peab iga labor kasutama oma labori protseduure ja protokolle, mis on välja arendatud ja optimeeritud konkreetselt teie oma meditsiiniprogrammi jaoks. SÄILITAMISJUHISED JA STABIILSUS Hoidke avamata anumad külmkapis temperatuuril 2 º... 8 ºC. Enne kasutamist soojendage ümbritseva õhu või inkubaatori temperatuurile (37°C). Ärge külmutage ega jätke kõrgete temperatuuride kätte. ISolate on stabiilne karbi ja pudeli etiketile märgitud tähtpäevani, kui seda on säilitatud juhendis ettenähtud tingimustes. ETTEVAATUSABINÕUD JA HOIATUSED See seade on ette nähtud kasutamiseks tervishoiutöötajatele, kes on saanud vastava koolituse, kaasa arvatud selle seadme kavandatud kasutuse alal. ISolate on läbipaistmatu. See on selle toote puhul normaalne. Ärge kasutage söödet viaalist, milles on märgata osakesi või saastumist (st ebaühtlane hägusus). ISolate peab CO2 inkubaatoris kasutamise korral olema tihedalt korgistatud vältimaks muutusi pH-s. Toode ei sisalda säilitusaineid, antibiootikume ega proteiinilisandeid. Saastamise vältimiseks käsitsege vahendeid aseptilist tehnikat kasutades. Kahjustuste ilmnemise korral mitte kasutada. Palun visake ära või tagastage tootjale, kes selle asendab. ETTEVAATUST: Riiklik (USA) seadusandlus piirab seadme müüki ning see võib toimuda üksnes arsti poolt või arsti korraldusel. ISolate® Catalog No. 99264 12 x 6 mL, 2 x 50 mL, 2 x 100 mL Ready to Use Density Gradient Medium at Two Concentrations Catalog No. 99275 Stock Solution 100 mL Catalog No. 99306 Concentrate 100 mL REFERENCES Adaniya GK, Jackson KV: Comparison of Percoll® and ISolate® in the Preparation of Semen for use in Assisted Reproductive Technologies. 53rd Annual Meeting of the American Society for Reproductive Medicine, Cincinnati, Ohio; 0-113, 1997. Symbols: Catalog Number Lot Number Tarchala SM, Fahy MM, Hauserman HM, Kallmann K, Volentine K, Radwanska E, Binor Z, Molo MW, Rawlins RG: ISolate® As a New Method of Sperm Separation. 53rd Annual Meeting of the American Society for Reproductive Medicine, Cincinnati, Ohio; P-116, 1998. Miller, KF, Fry KL, Arciaga RL, Falcone T: Semen preparation for in-vitro fertilization using ISolate® results in sperm recovery, fertilization and pregnancy outcomes that are indistinguishable from those obtained with Percoll®. 14th Embryology, Goteborg, Sweden; P-116, 1998. Tarchala SM, Volentine KK, Rawlins RG: A comparison of sperm processing using ISolate® and Pure Sperm™. 14th Annual Meeting of the European Society of Human Reproduction and Embryology, Goteborg, Sweden; R-041, 1998. Sterilized using aseptic processing techniques (filtration) Expiration: Year - Month - Day Caution:See instructions for use European Representative MPIE Schutweg 13A 5145 NP Waalwijk, The Netherlands See instructions for use. Storage Temperature CE Mark 0050 0050 ISolate is a Registered Trademark of Irvine Scientific ® Percoll ® is a Registered Trademark of Pharmacia Biotech, AB Sweden MPIE Schutweg 13a 5145 NP Waalwijk, The Netherlands ISolate is een membraangefilterde, op aseptische wijze bewerkte colloïdale suspensie van silicadeeltjes die zijn gestabiliseerd met covalent gebonden, hydrofiel silaan in HEPES-gebufferde HTF. Het Sterility Assurance Level (SAL) is 10-3. ISolate is negatief gebleken voor pyrogenen bij een konijnpyrogeentest. GEBRUIKSAANWIJZING C a t a l o g u s n r. 9 9 2 6 4 - K A N T- E N KLAAR COLLOÏDAAL SILICA IN TWEE CONCENTRATIES (50% en 90%) A.Voorgestelde materialen: ISolate • Irvine Scientific catalogusnr. 99264 (6ml, 50ml of 100 ml ampulkit) Sperm Washing Medium • Irvine Scientific catalogusnr. 9983 Steriele, conische wegwerpcentrifugebuisjes • Irvine Scientific catalogusnr. IS-325 Pasteurpipetten, steriel Centrifugeren Incubator, 37 °C B. Gradiëntpreparatie: Geen voorafgaande verdunningen noodzakelijk. Elke ampul van bovenste en onderste laaggradiënt is klaar voor gebruik. Ga door naar het gedeelte ALGEMENE PROCEDURE in de productbijsluiter. Catalogusnr. 99275 - STOCK SOLUTION 90% dichtheidsgradiëntmedium voor gebruik in een enkelvoudige procedure of voor verdere verdunning. A.Voorgestelde materialen: ISolate STOCK SOLUTION •Irvine Scientific catalogusnr. 99275 Modified Human Tubal Fluid •Irvine Scientific catalogusnr. 90126 Sperm Washing Medium •Irvine Scientific catalogusnr. 9983 Steriele, conische wegwerpcentrifugebuisjes •Irvine Scientific catalogusnr. IS-325 Pasteurpipetten, steriel Centrifugeren Incubator, 37 °C 5. Centrifugeer gedurende 10-20 minuten bij ca. 200 - 300xg.* Stel de pellet voorzichtig bloot door de “BOVENSTE” en “ONDERSTE LAGEN” te aspireren of de pellet direct te verwijderen en over te brengen naar een nieuw steriel centrifugebuisje. *Opm.: de kwaliteit van het spermamonster dient te worden beoordeeld en in aanmerking te worden genomen bij het bepalen van de juiste centrifugeersnelheid en -tijd. Deze moeten worden aangepast aan de individuele monsterkwaliteit zodat een optimale procedure wordt verkregen. 6. Voeg met een nieuw steriel pipet 2,0 - 3,0 ml van een geschikt wasmiddel zoals Sperm Washing Medium (IS catalogusnr. 9983) of Modified HTF (IS catalogusnr. 90126) met eiwitsupplement toe. Resuspendeer de geïsoleerde pellet. Centrifugeer (~200xg) gedurende 8 -10 minuten en verwijder het supernatant. Herhaal deze stap voor een tweede wasbeurt. Voer het supernatant af en resuspendeer de pellet met een geschikt volume van het juiste medium. Het monster is nu klaar voor analyse. Voor aanvullende informatie over het gebruik van deze producten, dient elk laboratorium haar eigen laboratoriumprocedures en -protocollen te raadplegen die speciaal zijn ontwikkeld en geoptimaliseerd voor uw individueel medisch programma. BEWAARINSTRUCTIES EN STABILITEIT Bewaar de ongeopende containers gekoeld bij 2 °C tot 8 °C. Vóór gebruik opwarmen tot omgevingstemperatuur of incubatortemperatuur (37 °C). Niet invriezen of blootstellen aan hoge temperaturen. VOORZORGSMAATREGELEN EN WAARSCHUWINGEN Dit hulpmiddel is bedoeld voor gebruik door personeel dat opgeleid is voor procedures inclusief de aangegeven toepassing waarvoor het hulpmiddel is bedoeld. Catalogusnr. 99306 - CONCENTRATE Colloïdaal silicaconcentraat voor verdere verdunning in dichtheidsgradiënten; geformuleerd in een isotone buffer en benadert de dichtheid van onverdund Percoll®. ISolate® CONCENTRATE werd beoordeeld volgens deze bijsluiter bij een gradiënt van 50% en 90%. Elke laboratorium kan kiezen voor gradiënten bij verschillende concentraties die op effectiviteit dienen te worden gecontroleerd. A.Voorgestelde materialen: ISolate® concentraat •Irvine Scientific catalogusnr. 99306 Modified Human Tubal Fluid •Irvine Scientific catalogusnr. 90126 Sperm Washing Medium •Irvine Scientific catalogusnr. 9983 Steriele, conische wegwerpcentrifugebuisjes •Irvine Scientific catalogusnr. IS-325 Pasteurpipetten, steriel Centrifugeren Incubator, 37 °C B. Gradiëntpreparatie: Er zijn twee oplossingen nodig voor de gradiëntspermascheidingsmethode: een bovenste laag en een onderste laag. 1. Oplossing bovenste laag - 50%: a) Neem het CONCENTRATE (catalogusnr. 99306) en pipetteer 4,5 ml in een steriel centrifugebuisje b) Voeg 5,5 ml Modified Human Tubal Fluid (catalogusnr. 90126) toe c) Draai de dop op het buisje en keer deze voorzichtig 3-4 keer om zodat de inhoud goed wordt gemengd b) Plak een sticker met de tekst “BOVENSTE LAAG” op het buisje 2. Oplossing onderste laag - 90%: a) Neem het CONCENTRATE (catalogusnr. 99306) en pipetteer 8,1 ml in een steriel centrifugebuisje b) Voeg 1,9 ml Modified Human Tubal Fluid (catalogusnr. 90126) toe c) Draai de dop op het buisje en keer deze voorzichtig 3-4 keer om zodat de inhoud goed wordt gemengd b) Plak een sticker met de tekst “ONDERSTE LAAG” op het buisje 3. Ga door naar het gedeelte ALGEMENE PROCEDURE in de productbijsluiter. (OPM.: 10 ml bovenste laag en 10 ml onderste laag zijn voldoende voor de bewerking van ca. 5 semen monsters.) Opm.: de aanduidingen 50% en 90% vertegenwoordigen geen werkelijke concentraties. De 50% en 90% zijn relatieve concentraties gebaseerd op de vorige nomenclatuur waarbij een 1:9 oplossing van Percoll® gelijk staat aan een 100% werkende, isotone oplossing ALGEMENE PROCEDURE Hieronder wordt een algemene procedure beschreven voor een tweestaps gradiëntscheiding van motiel sperma en semen. Het volume en de concentratie kunnen worden aangepast aan de voorkeur van elk laboratorium (bijv. minigradiënt, cryopreservatiesemen, drielaagse gradiënt). op 2. Breng met een steriel pipet 1,5 - 2,0 ml van de “ONDERSTE LAAG” over naar een steriel, conisch wegwerpcentrifugebuisje. 2511 Daimler Street, Santa Ana, California 92705-5588 Telephone: 1 949 261 7800 • 1 800 437 5706 Fax: 1 949 261 6522 • www.irvinesci.com PN 40558 Rev.10 4. Plaats 1,5 - 2,0 ml van het vloeibaar geworden semen voorzichtig op de “BOVENSTE LAAG” met behulp van een nieuw steriel pipet. Als ISolate zoals voorgeschreven wordt bewaard, is het stabiel tot aan de houdbaarheidsdatum die op de sticker van de doos en fles is vermeld. B. Gradiëntpreparatie: Er zijn twee oplossingen nodig voor de gradiëntspermascheidingsmethode: een bovenste laag en een onderste laag. 1. Oplossing bovenste laag - 50%: a) Neem de STOCK SOLUTION (catalogusnr. 99275) en pipetteer 5,6 ml in een steriel centrifugebuisje b) Voeg 4.4 ml Modified Human Tubal Fluid (catalogusnr. 90126) toe c) Draai de dop op het buisje en keer deze voorzichtig 3-4 keer om zodat de inhoud goed wordt gemengd b) Plak een sticker met de tekst “BOVENSTE LAAG” op het buisje 2. Oplossing onderste laag - 90%: a) Vul een steriel centrifugebuisje met 10 ml van de STOCK SOLUTION en sluit dit af met een dop - (Geen verdere verdunningen noodzakelijk - STOCK SOLUTION is 90%) b) Plak een sticker met de tekst “ONDERSTE LAAG” op het buisje 3. Ga door naar het gedeelte ALGEMENE PROCE DURE in de productbijsluiter. (OPM.: 10 ml bovenste laag en 10 ml onderste laag zijn voldoende voor de bewerking van ca. 5 semenmonsters.) 1. B r e n g a l l e m e d i a c o m p o n e n t e n omgevingstemperatuur of 37 °C. ROMÂNĂ POLSKI NEDERLANDS PRODUCTBESCHRIJVING ISolate® is een dichtheidsgradiëntmedium dat ontworpen is om het motiele gedeelte van het sperma te scheiden van de spermavloeistof. Als een tweelaags gradiëntsysteem vermindert het effectief celverontreinigende stoffen zoals dood sperma, witte bloedcellen en ander afval. Het resulterende monster bevat voornamelijk motiel sperma. 3. Breng met een nieuw steriel pipet een gelijk volume van de “BOVENSTE LAAG” over naar het bovenste gedeelte van de “ONDERSTE LAAG”. Dit kan worden bereikt door het oppervlak van de “ONDERSTE LAAG” tegen de zijkant van het buisje te houden met de punt van het pipet. Pipetteer de “BOVENSTE LAAG” voorzichtig door de pipetpunt in een opwaartse spiraalbeweging rondom de omtrek van het buisje te draaien als het niveau van de “BOVENSTE LAAG” stijgt. ISolate zal er opaak uitzien. Dit is normaal voor dit product. Gebruik geen ampullen met een medium dat (vaste) deeltjes bevat of besmet is (niet-uniform troebel). ISolate dient goed met een dop te worden afgesloten als het wordt gebruikt in een CO2-incubator om pH-wijzigingen te vermijden. Dit product bevat geen conserveringsmiddelen, antibiotica of eiwitsupplementen. Gebruik aseptische methoden om besmettingsproblemen te vermijden. Niet gebruiken indien beschadigd. Afvoeren of terugsturen naar de fabrikant voor een vervanging. VOORZICHTIG: volgens de Amerikaanse federale wetgeving mag dit product alleen door of op voorschrift van een arts worden verkocht. OPIS PRODUKTU ISolate® jest pożywką z gradientem gęstości, stworzoną do rozdziału frakcji plemników ruchliwych od płynu nasiennego. Ten system o dwupoziomowym gradiencie jest skuteczny w redukowaniu zanieczyszczeń komórkowych, takich jak martwe plemniki, białe ciałka krwi i szczątkowe zanieczyszczenia. Powstała próbka zawiera głównie ruchliwe plemniki. ISolate jest to filtrowana membranowo, aseptycznie przetwarzana zawiesina krzemionkowa cząsek krzemu, stabilizowana kowalentnie związanym hydrofilowym krzemem w HTF zbuforowanym HEPES. Bezpieczny poziom sterylności (SAL) wynosi 10 -3. ISolate został przetestowany i reagował negatywnie na pirogeny, przy użyciu testu króliczych pirogenów., WSKAZÓWKI UŻYCIA Nr katalogowy: 99264 – KRZEMIONKA KOLOIDALNA GOTOWA DO UŻYCIA W DWÓCH STĘŻENIACH (50% i 90%) A. Sugerowane materiały: ISolate • Nr w Katalogu Irvine Scientific: 99264 (6ml, 50ml lub 100 ml zestaw fiolek) Pożywka do przemywania nasienia • Nr w Katalogu Irvine Scientific: 9983 Sterylne, jednorazowe, stożkowe probówki wirówkowe • Nr w Katalogu Irvine Scientific: IS-325 Sterylne pipety Pasteura Wirówka Inkubator, 37 °C B. Przygotowanie roztworu: Nie są konieczne wstępne rozcieńczenia. Każda fiolka z gradientem górnej i dolnej warstwy jest gotowa do użycia. Kontynuować według części PROCEDURA OGÓLNA tej ulotki o leku. Nr katalogowy: 99275 – ROZTWÓR ZAPASOWY Pożywka o gradiencie gęstości 90% do użycia w jednoetapowej procedurze lub do dalszego rozcieńczania. A. Sugerowane materiały: ISolate ROZTWÓR ZAPASOWY •Nr w Katalogu Irvine Scientific: 99275 Zmodyfikowany Ludzki Płyn Jajowodowy •Nr w Katalogu Irvine Scientific: 90126 Pożywka do przemywania nasienia •Nr w Katalogu Irvine Scientific: 9983 Sterylne, jednorazowe, stożkowe probówki wirówkowe •Nr w Katalogu Irvine Scientific: IS-325 Sterylne pipety Pasteura Wirówka Inkubator, 37 °C B. Przygotowanie roztworu: Następujące dwa roztwory są wymagane do przeprowadzenia metody rozdziału nasienia wg gradientu: Górna warstwa i dolna warstwa. 1. Górna warstwa roztworu - 50%: a) Wziąć ROZTWÓR ZAPASOWY (nr katalogowy: 99275) i odpipetować 5,6 ml do sterylnej probówki wirówkowej b) Dodać 4.4 ml do Modified Human Tubal Fluid (nr katalogowy: 90126) c) Zamknąć probówkę i delikatnie odwracać 3-4 razy, aby umożliwić dokładne wymiesza nie. d) Oznakować probówkę jako „GÓRNA WARSTWA” 2. Dolna warstwa roztworu - 90%: a) Wydzielić 10 ml alikwot ROZTWORU ZAPA SOWEGO do sterylnej probówki wirówkowej i zamknąć zatyczką – (nie jest konieczne dalsze rozcieńczanie – ROZTWÓR ZAPASOWY jest 90%) b) Oznakować probówkę jako „DOLNA WARSTWA” 3. Kontynuować według części PROCEDURA OGÓLNA tej ulotki o leku. (UWAGA: 10 ml warstwy górnej i 10 ml warstwy dolnej wystar czy na przygotowanie 5 próbek nasienia). Nr katalogowy: 99306 - ROZTWÓR STĘŻONY Stężona krzemionka koloidalna do dalszego rozcieńczania na gradienty gęstości; sporządzona w izotonicznym buforze i zbliżona do gęstości nierozcieńczonego roztworu Percoll®. STĘŻONY ROZTWÓR ISolate® badany był z gradiantem 50% i 90% zgodnie z informacją podaną w niniejszej ulotce. Każde laboratorium może przygotować swoje własne roztwory o różnych stężeniach, które będą badane pod względem ich skuteczności. A. Sugerowane materiały: Stężony roztwór ISolate® •Nr w Katalogu Irvine Scientific: 99306 Zmodyfikowany Ludzki Płyn Jajowodowy •Nr w Katalogu Irvine Scientific: 90126 Pożywka do przemywania nasienia •Nr w Katalogu Irvine Scientific: 9983 Sterylne, jednorazowe, stożkowe probówki wirówkowe •Nr w Katalogu Irvine Scientific: IS-325 Sterylne pipety Pasteura Wirówka Inkubator, 37 °C B. Przygotowanie roztworu: Następujące dwa roztwory są wymagane do przeprowadzenia metody rozdziału nasienia wg gradientu: Górna warstwa i dolna warstwa. 1. Górna warstwa roztworu - 50%: a) Wziąć ROZTWÓR STĘŻONY (nr katalogowy: 99306) i odpipetować 4.5 ml do sterylnej probówki wirówkowej b) Dodać 5.5 ml do Modified Human Tubal Fluid (nr katalogowy: 90126) c) Zamknąć probówkę i delikatnie odwracać 3-4 azy, aby umożliwić dokładne wymieszanie. d) Oznakować probówkę jako „GÓRNA WARSTWA” 2. Dolna warstwa roztworu - 90%: a) Wziąć ROZTWÓR STĘŻONY (nr katalogowy: 99306) i odpipetować 8.1 ml do sterylnej probówki wirówkowej b) Dodać 1.9 ml do Modified Human Tubal Fluid (nr katalogowy: 90126) c) Zamknąć probówkę i delikatnie odwracać 3-4 razy, aby umożliwić dokładne wymieszanie. d) Oznakować probówkę jako „DOLNA WARSTWA” 3. Kontynuować według części PROCEDURA OGÓLNA tej ulotki o leku. (UWAGA: 10 ml warstwy górnej i 10 ml warstwy dolnej wystarczy na przygotowanie 5 próbek nasienia). Uwaga: Terminy 50% i 90% nie odpowiadają właściwym stężeniom. 50% i 90% są odpowiadającymi stężeniami opartymi na porzedniej nomenklaturze, która definiowała rozcieńczenie 1:9 roztworu Percoll® jako równe z 100% pracującym, roztworem izotonicznym. PROCEDURA OGÓLNA Poniżej podana jest ogólna procedura dla dwustopniowej separacji plemników ruchliwych od nasienia. Objętość i stężenie mogą być zmodyfikowane w celu zgodności z preferencjami laboratorium (tzn.: mini-gradient, nasienie zabezpieczone kriogeniczne, roztwór trzywarstwowy). 1. Podgrzać wszystkie podłoża do temperatury pokojowej lub 37 °C. 2. Przy użyciu sterylnej pipety, przenieść 1,5 – 2,0 ml „DOLNEJ WARSTWY” do sterylnej, jednorazowej, stożkowej probówki wirówkowej. 3. Przy użyciu nowej sterylnej pipety, przenieść jednakową objętość „GÓRNEJ WARSTWY” na wierzch „DOLNEJ WARSTWY”. Jest to wykonane przez dotknięcie końcówką pipety powierzchni „DOLNEJ WARSTWY” z boku probówki. Ostrożnie odebrać „GÓRNĄ WARSTWĘ” poprzez poruszanie spiralnym ruchem końcówki pipety po obwodzie probówki ruchem wznoszącym, podczas podnoszenia się poziomu „GÓRNEJ WARSTWY”. 4. Ostrożnie umieścić 1,5 – 2,0 ml płynnego nasienia na „GÓRNEJ WARSTWIE” przy użyciu nowej sterylnej pipety. 5. Wirować przez 10-20 minut, przy użyciu siły około 200 - 300xg.* Ostrożnie odsłonić pelet poprzez zaaspirowanie „GÓRNEJ ” i „DOLNEJ WARSTWY” lub bezpośrednie zebranie peletu i przeniesienie do nowej sterylnej probówki. *Uwaga: Jakość próbki nasienia należy zbadać i wziąć pod uwagę podczas określania odpowiedniego czasu i szybkości wirowania. Należy je dopasować zgodnie z jakością indywidualnej próbki w celu optymalizacji procedury. 6. Przy użyciu nowej, sterylnej pipety dodać 2,0 – 3,0 ml odpowiedniej pożywki przemywającej, jak np.: Sperm Washing Medium (nr katalogowy IS: 9983) lub Modified HTF (nr katalogowy IS: 90126) z dodatkiem białka. Ponownie zawiesić odebrany pelet. Zwirować (~200xg) przez 8-10 minut i usunąć nadsącz. Powtórzyć ten etap w drugim przepłukiwaniu. Odebrać nadsącz i ponownie zawiesić pelet w odpowiedniej objętości właściwej pożywki. Teraz próbka jest gotowa do analizy. Aby zapoznać się z dodatkowymi szczegółami użycia tych produktów, każde laboratorium powinno odwołać się do jego własnych procedur laboratoryjnych i protokołów, które zostały specjalnie opracowane i zoptymalizowane dla indywidulanego programu medycznego. INSTRUKCJE DOTYCZĄCE PRZECHOWYWANIA I STABILNOŚCI Przechowywać w nieotwartych pojemnikach, w chłodziarce o temperaturze 2º C do 8 ºC. Podgrzać do temperatury otoczenia lub inkubatora (37 °C) przed użyciem. Nie zamrażać ani nie poddawać działaniu wysokich temperatur. ISolate jest stabilny do upłynięcia daty ważności wydrukowanej na pudełku i etykiecie butelki, gdy przechowywany zgodnie z instrukcją. ŚRODKI OSTROŻNOŚCI I OSTRZEŻENIA To urządzenie jest przeznaczone do użycia przez personel wykwalifikowany w dziedzinie procedur obejmujących wskazane zastosowanie, dla którego to urządzenie jest przeznaczone. ISolate będzie nieprzejrzysty. To jest normalne dla tego produktu. Nie używać żadnej fiolki z pożywką, w której widoczne są cząsteczki materii lub zanieczyszczenie (nierównomierne zmętnienie). ISolate należy zamknąć szczelnie w przypadku używania inkubatora CO2, aby uniknąć zmian pH. Ten produkt nie zawiera środków konserwujących, antybiotyków ani dodatków białkowych. Aby uniknąć próblemów z zanieczyszczeniem, posługując się tym produktem należy stosować technikę aseptyczną. Nie używać w przypadku uszkodzenia. Należy wyrzucić lub zwrócić do producenta w celu dokonania wymiany. U WA G A : P r a w o f e d e r a l n e ( S t a n ó w Zjednoczonych) zezwala na sprzedaż tego urządzenia tylko przez lub na polecenie lekarza. DESCRIEREA PRODUSULUI ISolate® este un mediu cu un gradient de concentraţie destinat să separe fracţiunile de spermatozoizi mobili din lichidul seminal Ca şi un sistem gradual pe 2 straturi, reduce contaminarea celulară de exemplu cu spermă moartă, leucocite sau alte reziduuri. Rezultă mostre care conţin predominant spermatozoizi mobile. ISolate este filtrat prin membrană, prelucrat aseptic care conţine particule de silicat în suspensie coloidală, stabilizate prin legături covalente hidrofilice silane solutia tamponată HEPES- HTF . Nivelul de sterilitate asigurat este de (SAL)10-3. ISolate a fost testat cu test pirogen de iepure şi găsit apirogen . INSTRUCŢIUNI DE UTILIZARE Catalog #99264- GATA PENTRU FOLOSIREA S I L I C AT U L U I C O L O I D A L L A D O U Ă CONCENTRAŢII ( 50 % ŞI 90%) A. Materiale propuse: ISolate • Irvine Scientific Catalog #99264 (kit fiolă de 6mL, 50mL sau 100 mL ) Sperm Washing Medium • Irvine Scientific Catalog #9983 Tuburi conice sterile de centrifugă de unică folosinţă • Irvine Scientific Catalog #IS-325 Pipetă sterilă Pasteur Centrifugă Incubator, 37ºC B. Prepararea Gradientului: Nu este necesară diluarea preliminară. Fiecare fiolă cu gradientul stratului de sus şi jos este gata pentru folosinţă. Continuaţi cu PROCEDURI GENERALE, paragraful utilizarea produsului. Catalog # 99275 STOCK SOLUTION Se utilizează 90% din densitatea gradientului de mediu în prima treaptă sau pentru diluări ulterioare. A. Materiale propuse: ISolate STOCK SOLUTION stoc de soluţie ISolate •Irvine Scientific Catalog #99275 Lichid uman tubal modificat •Irvine Scientific Catalog #90126 Sperm Washing Medium •Irvine Scientific Catalog #9983 Tuburi conice sterile de centrifugă de unică folosinţă •Irvine Scientific Catalog #IS-325 Pipetă sterilă Pasteur Centrifugă Incubator, 37ºC B. Prepararea Gradientului: Două soluţii sunt necesare pentru a executa procedeul de separare a spermatozoizilor Stratul de sus şi stratul de jos. Stratul de sus şi stratul de jos. 1. Soluţie stratul de sus -50%. a) Luaţi STOCK SOLUTION (Catalog #99275) şi pipaaţi de 5.6 ml într-un tub de centrifugă sterilă b) Adăugaţi 4.4 ml de Modified Human Tubal Fluid (Catalog# 90126) c) Puneţi capacul tubului şi prin răsturnare efectuată cu grijă de 3-4 ori, veţi realiza amestecarea completă. d) Etichetaţi tubul ca şi “ STRAT DE SUS” 2. Soluţie stratul de jos -90%. a) Alicot în 10 ml de soluţie STOCK într-un tub steril de centrifugă cu capac - (nu este necesară diluţia ulterioară - soluţia STOCK are concentraţia de 90%) b) Etichetaţi tubul “ STRATUL DE JOS” 3. Continuaţi la procedurile generale din instrucţiunile de folosire. (NOTĂ: 10 ml din stratul de sus şi 10 ml din stratul de jos, va prelucra aproximativ 5 mostre de spermă). Catalog # 99306 CONCENTRATE Concentratul de silicat coloidal pentru mai multă diluare a densităţii gradientului ; formulat în tamponare isotonică şi aproximează densitatea nediluată al Percoll®-ului. ISolate® CONCENTRATE a fost evaluat conform concentraţiei de 50% şi 90%, înscrisă pe pachet gradient de la 50% până la 90%). Fiecare laborator îşi poate alege să facă gradienţii la diferite concentraţii, care ar trebui evaluat pentru eficacitate. A. Materiale propuse: ISolate® Concentrat •Irvine Scientific Catalog #99306 Lichid uman tubal modificat •Irvine Scientific Catalog #90126 Sperm Washing Medium •Irvine Scientific Catalog #9983 Tuburi conice sterile de centrifugă de unică folosinţă •Irvine Scientific Catalog #IS-325 Pipetă sterilă Pasteur Centrifugă Incubator, 37ºC B. Prepararea Gradientului: Două soluţii sunt necesare pentru a executa procedeul de separare a spermatozoizilor Stratul de sus şi stratul de jos. 1. Soluţie stratul de sus -50%. a) Luaţi CONCENTRATE (Catalog #99306) şi pipete de 4.5 ml într-un tub steril de centrifugă b) Adăugaţi 5.5 ml de Modified Human Tubal Fluid (Catalog# 90126) c) Puneţi capacul tubului şi prin răsturnare efectuată cu grijă de 3-4 ori, veţi realiza amestecarea completă. d) Etichetaţi tubul ca şi “ STRAT DE SUS” 2. Soluţie stratul de jos -90%. a) Luaţi CONCENTRATE (Catalog #99306) şi pipete de 8.1 ml într-un tub steril de centrifugă b) Adăugaţi 1.9 ml de Modified Human Tubal Fluid (Catalog# 90126) c) Puneţi capacul tubului şi prin răsturnare efectuată cu grijă de 3-4 ori, veţi realiza amestecarea completă. d) Etichetaţi tubul ca şi “ STRAT DE JOS” 3. Continuaţi la procedurile generale din instrucţiunile de folosire. (NOTĂ: 10 ml din stratul de sus şi 10 ml din stratul de jos, va prelucra aproximativ 5 mostre de spermă). Notă: Termeni de 50% şi 90% nu reprezintă concentraţia actuală. Cele de 50% şi 90% sunt concentraţii bazate pe nomenclatura anterioară care defineşte o diluţie de 1:9 de Percoll® , identică în totalitate cu soluţia izotonică de lucru. PROCEDURI GENERALE Urmează a doua treaptă de procedură generală şi anume de separare a spermatozoidului mobil din spermă. Volumul şi concentraţia pot fi modificate în funcţie de preferinţele fiecărui laborator. (ex: mini-gradient, crioconservarea spermei, gradient în trei straturi.) 1. Aduceţi toţi componenţii mediului la temperatura camerei sau 37°C. 2. Folosind pipetă sterilă, transferaţi 1.5 - 2.0 ml din “STRATUL DE JOS” într-un tub steril de centrifugă conică de unică folosinţă. 3. Cu ajutorul unei pipete noi sterile, transferaţi un volum egal cu cel situat între cele două semne care delimitează “stratul de sus” şi “stratul de jos”. Aceasta este făcută prin contactul cu suprafaţei “STRATULUI JOS” de la marginea tubului cu vârful pipetei. Preparaţi cu grijă “STRATUL DE SUS” prin învârtirea spiralată a vârfului pipetei în sus, în jurul circumferinţei tubului aşa cum “STRATUL DE SUS” se ridică. 4. Cu ajutorul unei pipete sterile puneţi cu blândeţe 1,5-2 ml de spermă lichefiată până la “nivelul de sus” a tubului. EESTI SVENSKA 5. Centrifugaţi timp de 10-20 de minute, la aproximativ 200- 300 xg.* Granulele vor fi expuse cu grijă prin aspirarea “ STRATULUI DE SUS” şi a “STRATULUI DE JOS” sau prin scoaterea directă a acestora şi mutarea lor într-un tub steril de centrifugă. *Notă: Calitatea mostrei de spermatozoids trebuie să fie evaluată şi luată în considerare când se determină timpul şi viteza proprie pentru centrifugare. Acestea trebuie ajustate în concordanţă cu calitatea mostrei individuale în vederea optimizării procesului de prelucrare. 6. Folosind o pipetă sterilă nouă, adăugaţi 2.0 - 3.0 ml mediu de spălare utilizând Sperm Washing Medium (IS Catalog# 9983) sau Modified HTF (IS Catalog #90126) cu adaos de proteine. Resuspendaţi granulele izolate. Centrifugaţi (~200xg) pentru 8-10 minute şi îndepărtaţi supernatantul. Repetaţi această treaptă pentru a doua spălare. Îndepărtaţi supernatantul şi resuspendaţi granula folosind un volum potrivit de mediu adecvat. Mostra acum este gata pentru analiză. Pentru detalii suplimentare privind folosirea acestui produs, fiecare laborator trebuie să consulte protocolul pentru procedurile utilizate în laborator care sunt specifice şi optimizate pentru programul medical individual. INSTRUCŢIUNI PENTRU PĂSTRARE ŞI STABILITATE Păstraţi sticlele sau containerele nedeschise refrigerate la 2º to 8ºC. Încălziţi la temperatura mediului ambiant sau la incubator la temperatură (37°C) înainte de a utilliza. Nu congelaţi sau expuneţi la temperaturi mari. ISolate este stabil până la data expirării înscrise pe eticheta de pe cutie dacă sunt respectate condiţiile de depozitare. PRECAUŢII ŞI AVERTISMENTE Acest dispozitiv este destinat să fie utilizat de personalul specializat în proceduri care includ aplicarea indicată pentru care a fost creat dispozitivul. ISolate va apărea opac. Este normal pentru acest produs. Nu utilizaţi fiole cu mediu care prezintă reziduuri de particule sau semne de contaminare (înceţoşare neuniformă) ISolate ar trebui să fie închis ermetic atunci când se foloseşte în incubator cu CO2 pentru a evita schimbări ale nivelurilor de pH. Acest produs nu conţine conservanţi, antibiotice, sau suplemente de proteină. Pentru a evita probleme de contaminare, mânuiţi folosind tehnici aseptice. Nu se utilizează în caz de deteriorare. Vă rugăm aruncaţi sau înapoiaţi producătorului pentru a fi înlocuit. AVERTISMENT: Legile Federale în (SUA) nu permit vânzarea acestui aparat numai la comanda unui medic sau pe bază de comanadă. PRODUKTBESKRIVNING ISolate® är ett densitetsgradientmedium framtaget för att separera den rörliga spermiefraktionen från sädesvätska. Detta gradientsystem med två skikt minskar effektivt förekomsten av cellulära kontaminanter, såsom döda spermier, vita blodkroppar och annat skräp. Det resulterande provet innehåller huvudsakligen rörliga spermier. ISolate är en membranfiltrerad, aseptiskt behandlad kolloidal suspension av kiselpartiklar stabiliserade med kovalent bundet hydrofilt silan i HEPES-buffrad HTF. Sterilitetsnivån (SAL, sterility assurance level) är 10 -3. ISolate har testats med pyrogentest på kanin och befunnits negativ för pyrogener. BRUKSANVISNING Katalognr 99264 - KOLLOIDAL KISELDIOXID, FÄRDIG ATT ANVÄNDA, I TVÅ KONCENTRATIONER (50 % och 90 %) A. Rekommenderat material: ISolate • Irvine Scientific katalognr 99264 (sats med 6 mL, 50mL eller 100 mL ampuller) Sperm Washing Medium • Irvine Scientific katalognr 9983 Sterila, konformade centrifugrör för engångsbruk • Irvine Scientific katalognr IS-325 Pasteurpipetter, sterila Centrifug Inkubator, 37 °C B. Gradientberedning: Inga förspädningar krävs. Varje ampull med topp- och bottengradient är färdig att användas. Fortsätt till avsnittet ALLMÄNT FÖRFARANDE i produktens bipacksedel. Katalognr 99275 - STOCK SOLUTION 90 % densitetsgradient-medium för användning i en procedur i ett steg eller för ytterligare spädning. A. Rekommenderat material: ISolate Stock Solution • Irvine Scientific katalognr 99275 Modified Human Tubal Fluid • Irvine Scientific katalognr 90126 Sperm Washing Medium • Irvine Scientific katalognr 9983 Sterila, konformade centrifugrör för engångsbruk • Irvine Scientific katalognr IS-325 Pasteurpipetter, sterila Centrifug Inkubator, 37 °C B. Gradientberedning: Två lösningar krävs för att utföra spermieseparation med gradientmetoden: En toppskikts- och en bottenskiktslösning. 1. Toppskiktslösning - 50 %: a) Ta STOCK SOLUTION (katalognr 99275) och pipettera 5,6 mL i ett sterilt centrifugrör b) Tillsätt 4,4 mL Modified Human Tubal Fluid (katalognr 90126) c) Förslut röret och vänd det varligt 3-4 gånger så att innehållet blandas fullständigt d) Märk röret med “TOPPSKIKT” 2. Bottenskiktslösning - 90 %: a) Häll en alikvot på 10 mL av Stock Solution i ett sterilt centrifugrör och förslut - (ingen ytterligare spädning krävs - Stock Solution är på 90 %) b) Märk röret med “BOTTENSKIKT” 3. Fortsätt till avsnittet ALLMÄNT FÖRFARANDE i produktens bipacksedel. (OBS! 10 mL toppskikt och 10 mL bottenskikt räcker till cirka 5 spermaprover). Katalognr 99306 - CONCENTRATE Kolloidalt kisel-koncentrat för ytterligare spädning till densitetsgradienter; i isoton buffert och med ungefär samma densitet som ospädd Percoll®. ISolate® CONCENTRATE har utvärderats enligt denna bipacksedel vid gradienterna 50 % och 90 %. Varje laboratorium kan välja att framställa gradienter i andra koncentrationer, som bör utvärderas för effektivitet. A. Rekommenderat material: ISolate® Concentrate • Irvine Scientific katalognr 99306 Modified Human Tubal Fluid • Irvine Scientific katalognr 90126 Sperm Washing Medium • Irvine Scientific katalognr 9983 Sterila, konformade centrifugrör för engångsbruk • Irvine Scientific katalognr IS-325 Pasteurpipetter, sterila Centrifug Inkubator, 37 °C B. Gradientberedning: Två lösningar krävs för att utföra spermieseparation med gradientmetoden: En toppskikts- och en bottenskiktslösning. 1. Toppskiktslösning - 50 %: a) Ta CONCENTRATE (katalognr 99306) och pipettera 4,5 mL i ett sterilt centrifugrör b) Tillsätt 5,5 mL Modified Human Tubal Fluid (katalognr 90126) c) Förslut röret och vänd det varligt 3-4 gånger så att innehållet blandas fullständigt d) Märk röret med “TOPPSKIKT” 2. Bottenskiktslösning - 90 %: a) Ta CONCENTRATE (katalognr 99306) och pipettera 8,1 mL i ett sterilt centrifugrör b) Tillsätt 1,9 mL Modified Human Tubal Fluid (katalognr 90126) c) Förslut röret och vänd det varligt 3-4 gånger så att innehållet blandas fullständigt d) Märk röret med “BOTTENSKIKT” 3. Fortsätt till avsnittet ALLMÄNT FÖRFARANDE i produktens bipacksedel. Obs! Termerna 50 % och 90 % anger inte en faktisk koncentration. 50 % och 90 % är relativa koncentrationer baserade på tidigare nomenklatur som definierade en 1:9-spädning av Percoll ® såsom likvärdig med en 100 % fungerande, isoton lösning. ALLMÄNT FÖRFARANDE Följande är en generell procedur för en tvåstegsgradientseparation av rörliga spermier från sädesvätska. Volymen och koncentrationen kan modifieras för att passa det enskilda laboratoriets preferenser (dvs. minigradient, kryopreserverad sperma, treskiktsgradient). 1. Låt alla mediekomponenter uppnå rumstemperatur eller 37 °C. 2. Använd en steril pipett och överför 1,5 - 2,0 mL av “BOTTENSKIKTET” till ett sterilt, konformat centrifugrör för engångsbruk. 3. Använd en ny steril pipett och överför en lika stor volym “TOPPSKIKT” ovanpå “BOTTENSKIKTET” . Detta görs genom att vidröra ytan på “BOTTENSKIKTET” vid röret sida med pipettens spets. Dispensera omsorgsfullt “TOPPSKIKTET” genom att vrida pipettspetsen i spiral runt rörets omkrets i en uppåtriktad rörelse efterhand som “TOPPSKIKT”-nivån ökar. 4. Placera försiktigt 1,5 - 2,0 mL likvifierad sperma på “TOPPSKIKTET” med användning av en ny, steril pipett. 5. Centrifugera i 10 - 20 minuter vid cirka 200 - 300 x g.* Exponera pelleten omsorgsfullt genom att antingen suga av “TOPP-” och “BOTTENSKIKTEN”, eller genom att ta upp pelleten och föra över den till ett nytt, sterilt centrifugrör. *Obs! Spermaprovets kvalitet skall bedömas och tas i beaktande vid bestämning av korrekt centrifugeringshastighet och -tid. Dessa bör justeras i enlighet med det enskilda provets kvalitet, för optimering av förfarandet. 6. Använd en ny steril pipett och tillsätt 2,0 - 3,0 mL lämpligt tvättmedium såsom Sperm Washing Medium (IS katalognr 9983) eller Modified HTF (IS katalognr 90126) med proteinsupplement. Resuspendera den isolerade pelleten. Centrifugera (~200xg) i 8 - 10 minuter och avlägsna supernatanten. Upprepa detta steg för en andra tvätt. Kassera supernatanten och resuspendera pelleten med användning av en adekvat volym lämpligt medium. Provet är nu klart för analys. För ytterligare information om användning av dessa produkter bör varje laboratorium konsultera sina egna laboratorieförfaranden och -protokoll som utvecklats och optimerats särskilt för de egna medicinska programmen. FÖRVARING OCH HÅLLBARHET Oöppnade behållare skall förvaras i kylskåp vid 2 - 8 ºC. Värm till omgivnings- eller inkubator(37 °C)-temperatur före användning. Får ej frysas eller exponeras för höga temperaturer. ISolate är hållbart fram till det utgångsdatum som anges på kartongen och flasketiketterna, vid förvaring enligt anvisningarna. FÖRSIKTIGHETSÅTGÄRDER OCH VARNINGAR Denna produkt är avsedd att användas av personal med utbildning i procedurer vilka inkluderar den indicerade tillämpning för vilken produkten är avsedd. ISolate är ogenomskinligt. Detta är normalt för denna produkt. Använd inga ampuller med medium som innehåller partiklar eller företer tecken på kontamination (ojämn grumlighet). ISolate skall vara ordentligt förslutet vid användning i en CO2-inkubator så att pH-förändringar undviks. Denna produkt innehåller inga konserveringsmedel, antibiotika eller proteinsupplement. Använd aseptisk teknik vid hantering, så att kontamination undviks. Om produkten är skadad får den inte användas. Kassera den eller returnera den till tillverkaren för utbyte. OBS! Enligt federal (USA) lag får denna produkt endast säljas av eller på ordination av läkare. TOOTE KIRJELDUS ISolate® on tihedusgradiendi lahus, mis on koostatud liikuva sperma eraldamiseks seemnevedelikust. Kahekihilise gradiendi süsteem vähendab tõhusalt rakuliste saasteainete, sh surnud sperma, valgevererakkude ja mitmesuguste jäätmete hulka. Sellest saadud proov sisaldab peamiselt liikuvaid spermatosoide. ISolate on HEPESiga puhverdatud HTFis membraanfiltreeritud ja aseptilised töödeldud räniosakeste kolloiodne suspensioon kovalentselt seotud hüdrofiilse silaaniga. Garanteeritud steriilsustase (SAL) on 10 -3. Küüliku pürogeenitesti tegemisega on leitud, et ISolate on pürogeenide suhtes negatiivne. KASUTUSJUHEND Kataloogi nr 99264 - KASUTAMISVALMIS KOLLOIDNE RÄNIMULD KAHES KONTSENTRATSIOONIS (50% ja 90%) A. Soovitatavad materjalid: ISolate • Irvine Scientific katalooginr 99264 (6mL, 50mL või 100mL viaaliga komplekt) Sperm Washing Medium • Irvine Scientific katalooginr 9983 Steriilsed, ühekordsed koonilised tsentrifuugi tuubid • Irvine Scientific katalooginr IS-325 Pasteuri pipetid, steriilsed Tsentrifuug Inkubaator, 37°C B. Gradiendi valmistamine: Eelnevat lahjendamist ei ole vaja. Iga ülemise ja alumise gradiendi kihti sisaldav viaal on kasutamiseks valmis. Jätkake toote pakendi infolehel toodud ÜLDPROTSEDUURIDEGA. Kataloogi nr 99275 - STOCK SOLUTION 90%-ne tihedusgradiendi sööde kasutamiseks üheetapilises protseduuris või edasiseks lahjendamiseks. A. Soovitatavad materjalid: ISolate STOCK SOLUTION •Irvine Scientific katalooginr 99275 Modified Human Tubal Fluid •Irvine Scientific katalooginr 90126 Sperm Washing Medium •Irvine Scientific katalooginr 9983 Steriilsed, ühekordsed koonilised tsentrifuugi tuubid •Irvine Scientific katalooginr IS-325 Pasteuri pipetid, steriilsed Tsentrifuug Inkubaator, 37°C B. Gradiendi valmistamine: Sperma eraldamise gradientmeetodi jaoks on vaja kaks lahust: ülemine kiht ja alumine kiht. Ülemine kiht ja alumine kiht. 1. Ülemise kihi lahus - 50%: a) Võtke STOCK SOLUTION (kataloogi nr 99275) ja pipettige 5,6 mL steriilsesse tsentrifuugi tuubi. b) Lisage 4.4 mL lahust Modified Human Tubal Fluid (kataloogi nr 90126) c) Katke katsut korgiga ja keerake 3...4 korda põhi õrnalt üles-alla, et sisu täielikult seguneks d) Märkige katsutile “ÜLEMINE KIHT” 2. Alumise kihi lahus - 90%: a) Alikvootige 10 mL STOCK SOLUTIONit steriilsesse tsentrifuugi tuubi ja korgistage - (edasine lahjendamine ei ole vajalik - STOCK SOLUTION on 90%) b) Märkige katsutile “ALUMINE KIHT” 3. Jätkake toote pakendi infolehel toodud ÜLDPROTSEDUURIDEGA. (MÄRKUS: Kogusega 10 mL ülemist kihti ja 10 mL alumist kihti on võimalik töödelda umbes 5 eemnevedeliku proovi.) Kataloogi nr 99306 - CONCENTRATE Kolloidse ränimulla kontsentraat edasiseks lahjendamiseks tihedusgradientideks; valmistatud isotoonilises puhvris ja tiheduse poolest on lähedane lahustamata Percoll®-ile. ISolate® analüüsiti vastavalt pakendi infolehes toodule ning leiti gradiendid 50% ja 90%. Iga labor võib oma äranägemisel valmistada erinevates kontsentratsioonides gradiente, mille tõhusust tuleb hinnata. A. Soovitatavad materjalid: ISolate® kontsentraat •Irvine Scientific katalooginr 99306 Modified Human Tubal Fluid •Irvine Scientific katalooginr 90126 Sperm Washing Medium •Irvine Scientific katalooginr 9983 Steriilsed, ühekordsed koonilised tsentrifuugi tuubid •Irvine Scientific katalooginr IS-325 Pasteuri pipetid, steriilsed Tsentrifuug Inkubaator, 37°C B. Gradiendi valmistamine: Sperma eraldamise gradientmeetodi jaoks on vaja kaks lahust: ülemine kiht ja alumine kiht. 1. Ülemise kihi lahus - 50%: a) Võtke CONCENTRATE (kataloogi nr 99306) ja pipettige 4.5 mL steriilsesse tsentrifuugi tuubi. b) Lisage 5.5 mL lahust Modified Human Tubal Fluid (kataloogi nr 90126) c) Katke katsut korgiga ja keerake 3...4 korda põhi õrnalt üles-alla, et sisu täielikult seguneks d) Märkige katsutile “ÜLEMINE KIHT” 2. Alumise kihi lahus - 90%: a) Võtke CONCENTRATE (kataloogi nr 99306) ja pipettige 8.1 mL steriilsesse tsentrifuugi tuubi. b) Lisage 1.9 mL lahust Modified Human Tubal Fluid (kataloogi nr 90126) c) Katke katsut korgiga ja keerake 3...4 korda põhi õrnalt üles-alla, et sisu täielikult seguneks d) Märkige katsutile “ALUMINE KIHT” 3. Jätkake toote pakendi infolehel toodud ÜLDPROTSEDUURIDEGA. Märkus: Nimetusele lisatud 50% ja 90% ei kujuta endast tegelikku kontsentratsiooni. 50% ja 90% kujutavad endast relatiivseid kontsentratsioone, mis põhinevad varasemal nomenklatuuril, mille järgi Percoll’i® 1:9 lahus võrdus 100% isotoonilise töölahusega. ÜLDINE PROTSEDUUR Järgnevalt on toodud liikuva sperma seemnevedelikust gradiendiga eraldamise kahe-etapiline üldprotseduur Mahtu ja kontsentratsiooni võib muuta vastavalt labori eelistustele (st minigradient, külmutatult säilitatud seemnevedelik, kolmekihiline gradient). 1. Tooge kõik söötme komponendid toatemperatuurile, st 37°C. 2. Kasutades steriilset pipetti, viige 1,5...2,0 mL ALUMIST KIHTI steriilsesse, ühekordsesse, koonilisse tsentrifuugituubi. 3. Kasutades uut steriilset pipetti, viige ALUMISE KIHI peale võrdne kogus ÜLEMIST KIHTI. Selleks viige pipeti ots katsuti seinal vastu ALUMISE KIHI pinda. Ettevaatlikult dispenseerige ÜLEMINE KIHT pipeti otsaga spiraalselt mööda katsuti sisemist seina ülespoole tõmmates ÜLEMISE KIHI pinna tõustes. 4. Õ r n a l t a s e t a g e 1 , 5 . . . 2 , 0 m L v e d e l d a t u d seemnevedelikku ÜLEMISSE KIHTI, kasutades selleks uut steriilset pipetti. 5. Tsentrifuugige umbes 200...300 g juures 10...20 minutit.* Ettevaatlikult tooge välja settetombuke, kas ÜLEMISE ja ALUMISE KIHI pealt ära aspireerimise teel või settetombukese otseselt välja võtmise ja uude steriilsesse tsentrifuugi tuubi sisse kandmise teel. *Märkus: Tsentrifuugimiskiiruse ja -aja määramisel tuleb hinnata ja arvesse võtta spermaproovi kvaliteeti. Protseduuri optimeerimiseks tuleb kiirust ja aega korrigeerida vastavalt proovi kvaliteedite. 6. Kasutades uut steriilset pipetti, lisage 2,0...3,0 mL sobivat pesemisvahendit nagu Sperm Washing Medium (IS kataloogi nr 9983) või Modified HTF (IS kataloogi nr 90126) koos proteiinilisandiga. Resuspendeerige isoleeritud settetombuke. Tsentrifuugige ~200 g juures 8...10 minutit ja eemaldage supernatant. Korrake seda sammu teistkordseks pesemiseks. Visake supernatant ära ja resuspendeerige settetombuke, kasutades selleks sobiva söötme vastavat kogust. Proov on nüüd analüüsimiseks valmis. Toodete kasutamise üksikasjaliku informatsiooni vajamise korral peab iga labor kasutama oma labori protseduure ja protokolle, mis on välja arendatud ja optimeeritud konkreetselt teie oma meditsiiniprogrammi jaoks. SÄILITAMISJUHISED JA STABIILSUS Hoidke avamata anumad külmkapis temperatuuril 2 º... 8 ºC. Enne kasutamist soojendage ümbritseva õhu või inkubaatori temperatuurile (37°C). Ärge külmutage ega jätke kõrgete temperatuuride kätte. ISolate on stabiilne karbi ja pudeli etiketile märgitud tähtpäevani, kui seda on säilitatud juhendis ettenähtud tingimustes. ETTEVAATUSABINÕUD JA HOIATUSED See seade on ette nähtud kasutamiseks tervishoiutöötajatele, kes on saanud vastava koolituse, kaasa arvatud selle seadme kavandatud kasutuse alal. ISolate on läbipaistmatu. See on selle toote puhul normaalne. Ärge kasutage söödet viaalist, milles on märgata osakesi või saastumist (st ebaühtlane hägusus). ISolate peab CO2 inkubaatoris kasutamise korral olema tihedalt korgistatud vältimaks muutusi pH-s. Toode ei sisalda säilitusaineid, antibiootikume ega proteiinilisandeid. Saastamise vältimiseks käsitsege vahendeid aseptilist tehnikat kasutades. Kahjustuste ilmnemise korral mitte kasutada. Palun visake ära või tagastage tootjale, kes selle asendab. ETTEVAATUST: Riiklik (USA) seadusandlus piirab seadme müüki ning see võib toimuda üksnes arsti poolt või arsti korraldusel. ISolate® Catalog No. 99264 12 x 6 mL, 2 x 50 mL, 2 x 100 mL Ready to Use Density Gradient Medium at Two Concentrations Catalog No. 99275 Stock Solution 100 mL Catalog No. 99306 Concentrate 100 mL REFERENCES Adaniya GK, Jackson KV: Comparison of Percoll® and ISolate® in the Preparation of Semen for use in Assisted Reproductive Technologies. 53rd Annual Meeting of the American Society for Reproductive Medicine, Cincinnati, Ohio; 0-113, 1997. Symbols: Catalog Number Lot Number Tarchala SM, Fahy MM, Hauserman HM, Kallmann K, Volentine K, Radwanska E, Binor Z, Molo MW, Rawlins RG: ISolate® As a New Method of Sperm Separation. 53rd Annual Meeting of the American Society for Reproductive Medicine, Cincinnati, Ohio; P-116, 1998. Miller, KF, Fry KL, Arciaga RL, Falcone T: Semen preparation for in-vitro fertilization using ISolate® results in sperm recovery, fertilization and pregnancy outcomes that are indistinguishable from those obtained with Percoll®. 14th Embryology, Goteborg, Sweden; P-116, 1998. Tarchala SM, Volentine KK, Rawlins RG: A comparison of sperm processing using ISolate® and Pure Sperm™. 14th Annual Meeting of the European Society of Human Reproduction and Embryology, Goteborg, Sweden; R-041, 1998. Sterilized using aseptic processing techniques (filtration) Expiration: Year - Month - Day Caution:See instructions for use European Representative MPIE Schutweg 13A 5145 NP Waalwijk, The Netherlands See instructions for use. Storage Temperature CE Mark 0050 0050 ISolate is a Registered Trademark of Irvine Scientific ® Percoll ® is a Registered Trademark of Pharmacia Biotech, AB Sweden MPIE Schutweg 13a 5145 NP Waalwijk, The Netherlands ISolate is een membraangefilterde, op aseptische wijze bewerkte colloïdale suspensie van silicadeeltjes die zijn gestabiliseerd met covalent gebonden, hydrofiel silaan in HEPES-gebufferde HTF. Het Sterility Assurance Level (SAL) is 10-3. ISolate is negatief gebleken voor pyrogenen bij een konijnpyrogeentest. GEBRUIKSAANWIJZING C a t a l o g u s n r. 9 9 2 6 4 - K A N T- E N KLAAR COLLOÏDAAL SILICA IN TWEE CONCENTRATIES (50% en 90%) A.Voorgestelde materialen: ISolate • Irvine Scientific catalogusnr. 99264 (6ml, 50ml of 100 ml ampulkit) Sperm Washing Medium • Irvine Scientific catalogusnr. 9983 Steriele, conische wegwerpcentrifugebuisjes • Irvine Scientific catalogusnr. IS-325 Pasteurpipetten, steriel Centrifugeren Incubator, 37 °C B. Gradiëntpreparatie: Geen voorafgaande verdunningen noodzakelijk. Elke ampul van bovenste en onderste laaggradiënt is klaar voor gebruik. Ga door naar het gedeelte ALGEMENE PROCEDURE in de productbijsluiter. Catalogusnr. 99275 - STOCK SOLUTION 90% dichtheidsgradiëntmedium voor gebruik in een enkelvoudige procedure of voor verdere verdunning. A.Voorgestelde materialen: ISolate STOCK SOLUTION •Irvine Scientific catalogusnr. 99275 Modified Human Tubal Fluid •Irvine Scientific catalogusnr. 90126 Sperm Washing Medium •Irvine Scientific catalogusnr. 9983 Steriele, conische wegwerpcentrifugebuisjes •Irvine Scientific catalogusnr. IS-325 Pasteurpipetten, steriel Centrifugeren Incubator, 37 °C 5. Centrifugeer gedurende 10-20 minuten bij ca. 200 - 300xg.* Stel de pellet voorzichtig bloot door de “BOVENSTE” en “ONDERSTE LAGEN” te aspireren of de pellet direct te verwijderen en over te brengen naar een nieuw steriel centrifugebuisje. *Opm.: de kwaliteit van het spermamonster dient te worden beoordeeld en in aanmerking te worden genomen bij het bepalen van de juiste centrifugeersnelheid en -tijd. Deze moeten worden aangepast aan de individuele monsterkwaliteit zodat een optimale procedure wordt verkregen. 6. Voeg met een nieuw steriel pipet 2,0 - 3,0 ml van een geschikt wasmiddel zoals Sperm Washing Medium (IS catalogusnr. 9983) of Modified HTF (IS catalogusnr. 90126) met eiwitsupplement toe. Resuspendeer de geïsoleerde pellet. Centrifugeer (~200xg) gedurende 8 -10 minuten en verwijder het supernatant. Herhaal deze stap voor een tweede wasbeurt. Voer het supernatant af en resuspendeer de pellet met een geschikt volume van het juiste medium. Het monster is nu klaar voor analyse. Voor aanvullende informatie over het gebruik van deze producten, dient elk laboratorium haar eigen laboratoriumprocedures en -protocollen te raadplegen die speciaal zijn ontwikkeld en geoptimaliseerd voor uw individueel medisch programma. BEWAARINSTRUCTIES EN STABILITEIT Bewaar de ongeopende containers gekoeld bij 2 °C tot 8 °C. Vóór gebruik opwarmen tot omgevingstemperatuur of incubatortemperatuur (37 °C). Niet invriezen of blootstellen aan hoge temperaturen. VOORZORGSMAATREGELEN EN WAARSCHUWINGEN Dit hulpmiddel is bedoeld voor gebruik door personeel dat opgeleid is voor procedures inclusief de aangegeven toepassing waarvoor het hulpmiddel is bedoeld. Catalogusnr. 99306 - CONCENTRATE Colloïdaal silicaconcentraat voor verdere verdunning in dichtheidsgradiënten; geformuleerd in een isotone buffer en benadert de dichtheid van onverdund Percoll®. ISolate® CONCENTRATE werd beoordeeld volgens deze bijsluiter bij een gradiënt van 50% en 90%. Elke laboratorium kan kiezen voor gradiënten bij verschillende concentraties die op effectiviteit dienen te worden gecontroleerd. A.Voorgestelde materialen: ISolate® concentraat •Irvine Scientific catalogusnr. 99306 Modified Human Tubal Fluid •Irvine Scientific catalogusnr. 90126 Sperm Washing Medium •Irvine Scientific catalogusnr. 9983 Steriele, conische wegwerpcentrifugebuisjes •Irvine Scientific catalogusnr. IS-325 Pasteurpipetten, steriel Centrifugeren Incubator, 37 °C B. Gradiëntpreparatie: Er zijn twee oplossingen nodig voor de gradiëntspermascheidingsmethode: een bovenste laag en een onderste laag. 1. Oplossing bovenste laag - 50%: a) Neem het CONCENTRATE (catalogusnr. 99306) en pipetteer 4,5 ml in een steriel centrifugebuisje b) Voeg 5,5 ml Modified Human Tubal Fluid (catalogusnr. 90126) toe c) Draai de dop op het buisje en keer deze voorzichtig 3-4 keer om zodat de inhoud goed wordt gemengd b) Plak een sticker met de tekst “BOVENSTE LAAG” op het buisje 2. Oplossing onderste laag - 90%: a) Neem het CONCENTRATE (catalogusnr. 99306) en pipetteer 8,1 ml in een steriel centrifugebuisje b) Voeg 1,9 ml Modified Human Tubal Fluid (catalogusnr. 90126) toe c) Draai de dop op het buisje en keer deze voorzichtig 3-4 keer om zodat de inhoud goed wordt gemengd b) Plak een sticker met de tekst “ONDERSTE LAAG” op het buisje 3. Ga door naar het gedeelte ALGEMENE PROCEDURE in de productbijsluiter. (OPM.: 10 ml bovenste laag en 10 ml onderste laag zijn voldoende voor de bewerking van ca. 5 semen monsters.) Opm.: de aanduidingen 50% en 90% vertegenwoordigen geen werkelijke concentraties. De 50% en 90% zijn relatieve concentraties gebaseerd op de vorige nomenclatuur waarbij een 1:9 oplossing van Percoll® gelijk staat aan een 100% werkende, isotone oplossing ALGEMENE PROCEDURE Hieronder wordt een algemene procedure beschreven voor een tweestaps gradiëntscheiding van motiel sperma en semen. Het volume en de concentratie kunnen worden aangepast aan de voorkeur van elk laboratorium (bijv. minigradiënt, cryopreservatiesemen, drielaagse gradiënt). op 2. Breng met een steriel pipet 1,5 - 2,0 ml van de “ONDERSTE LAAG” over naar een steriel, conisch wegwerpcentrifugebuisje. 2511 Daimler Street, Santa Ana, California 92705-5588 Telephone: 1 949 261 7800 • 1 800 437 5706 Fax: 1 949 261 6522 • www.irvinesci.com PN 40558 Rev.10 4. Plaats 1,5 - 2,0 ml van het vloeibaar geworden semen voorzichtig op de “BOVENSTE LAAG” met behulp van een nieuw steriel pipet. Als ISolate zoals voorgeschreven wordt bewaard, is het stabiel tot aan de houdbaarheidsdatum die op de sticker van de doos en fles is vermeld. B. Gradiëntpreparatie: Er zijn twee oplossingen nodig voor de gradiëntspermascheidingsmethode: een bovenste laag en een onderste laag. 1. Oplossing bovenste laag - 50%: a) Neem de STOCK SOLUTION (catalogusnr. 99275) en pipetteer 5,6 ml in een steriel centrifugebuisje b) Voeg 4.4 ml Modified Human Tubal Fluid (catalogusnr. 90126) toe c) Draai de dop op het buisje en keer deze voorzichtig 3-4 keer om zodat de inhoud goed wordt gemengd b) Plak een sticker met de tekst “BOVENSTE LAAG” op het buisje 2. Oplossing onderste laag - 90%: a) Vul een steriel centrifugebuisje met 10 ml van de STOCK SOLUTION en sluit dit af met een dop - (Geen verdere verdunningen noodzakelijk - STOCK SOLUTION is 90%) b) Plak een sticker met de tekst “ONDERSTE LAAG” op het buisje 3. Ga door naar het gedeelte ALGEMENE PROCE DURE in de productbijsluiter. (OPM.: 10 ml bovenste laag en 10 ml onderste laag zijn voldoende voor de bewerking van ca. 5 semenmonsters.) 1. B r e n g a l l e m e d i a c o m p o n e n t e n omgevingstemperatuur of 37 °C. ROMÂNĂ POLSKI NEDERLANDS PRODUCTBESCHRIJVING ISolate® is een dichtheidsgradiëntmedium dat ontworpen is om het motiele gedeelte van het sperma te scheiden van de spermavloeistof. Als een tweelaags gradiëntsysteem vermindert het effectief celverontreinigende stoffen zoals dood sperma, witte bloedcellen en ander afval. Het resulterende monster bevat voornamelijk motiel sperma. 3. Breng met een nieuw steriel pipet een gelijk volume van de “BOVENSTE LAAG” over naar het bovenste gedeelte van de “ONDERSTE LAAG”. Dit kan worden bereikt door het oppervlak van de “ONDERSTE LAAG” tegen de zijkant van het buisje te houden met de punt van het pipet. Pipetteer de “BOVENSTE LAAG” voorzichtig door de pipetpunt in een opwaartse spiraalbeweging rondom de omtrek van het buisje te draaien als het niveau van de “BOVENSTE LAAG” stijgt. ISolate zal er opaak uitzien. Dit is normaal voor dit product. Gebruik geen ampullen met een medium dat (vaste) deeltjes bevat of besmet is (niet-uniform troebel). ISolate dient goed met een dop te worden afgesloten als het wordt gebruikt in een CO2-incubator om pH-wijzigingen te vermijden. Dit product bevat geen conserveringsmiddelen, antibiotica of eiwitsupplementen. Gebruik aseptische methoden om besmettingsproblemen te vermijden. Niet gebruiken indien beschadigd. Afvoeren of terugsturen naar de fabrikant voor een vervanging. VOORZICHTIG: volgens de Amerikaanse federale wetgeving mag dit product alleen door of op voorschrift van een arts worden verkocht. OPIS PRODUKTU ISolate® jest pożywką z gradientem gęstości, stworzoną do rozdziału frakcji plemników ruchliwych od płynu nasiennego. Ten system o dwupoziomowym gradiencie jest skuteczny w redukowaniu zanieczyszczeń komórkowych, takich jak martwe plemniki, białe ciałka krwi i szczątkowe zanieczyszczenia. Powstała próbka zawiera głównie ruchliwe plemniki. ISolate jest to filtrowana membranowo, aseptycznie przetwarzana zawiesina krzemionkowa cząsek krzemu, stabilizowana kowalentnie związanym hydrofilowym krzemem w HTF zbuforowanym HEPES. Bezpieczny poziom sterylności (SAL) wynosi 10 -3. ISolate został przetestowany i reagował negatywnie na pirogeny, przy użyciu testu króliczych pirogenów., WSKAZÓWKI UŻYCIA Nr katalogowy: 99264 – KRZEMIONKA KOLOIDALNA GOTOWA DO UŻYCIA W DWÓCH STĘŻENIACH (50% i 90%) A. Sugerowane materiały: ISolate • Nr w Katalogu Irvine Scientific: 99264 (6ml, 50ml lub 100 ml zestaw fiolek) Pożywka do przemywania nasienia • Nr w Katalogu Irvine Scientific: 9983 Sterylne, jednorazowe, stożkowe probówki wirówkowe • Nr w Katalogu Irvine Scientific: IS-325 Sterylne pipety Pasteura Wirówka Inkubator, 37 °C B. Przygotowanie roztworu: Nie są konieczne wstępne rozcieńczenia. Każda fiolka z gradientem górnej i dolnej warstwy jest gotowa do użycia. Kontynuować według części PROCEDURA OGÓLNA tej ulotki o leku. Nr katalogowy: 99275 – ROZTWÓR ZAPASOWY Pożywka o gradiencie gęstości 90% do użycia w jednoetapowej procedurze lub do dalszego rozcieńczania. A. Sugerowane materiały: ISolate ROZTWÓR ZAPASOWY •Nr w Katalogu Irvine Scientific: 99275 Zmodyfikowany Ludzki Płyn Jajowodowy •Nr w Katalogu Irvine Scientific: 90126 Pożywka do przemywania nasienia •Nr w Katalogu Irvine Scientific: 9983 Sterylne, jednorazowe, stożkowe probówki wirówkowe •Nr w Katalogu Irvine Scientific: IS-325 Sterylne pipety Pasteura Wirówka Inkubator, 37 °C B. Przygotowanie roztworu: Następujące dwa roztwory są wymagane do przeprowadzenia metody rozdziału nasienia wg gradientu: Górna warstwa i dolna warstwa. 1. Górna warstwa roztworu - 50%: a) Wziąć ROZTWÓR ZAPASOWY (nr katalogowy: 99275) i odpipetować 5,6 ml do sterylnej probówki wirówkowej b) Dodać 4.4 ml do Modified Human Tubal Fluid (nr katalogowy: 90126) c) Zamknąć probówkę i delikatnie odwracać 3-4 razy, aby umożliwić dokładne wymiesza nie. d) Oznakować probówkę jako „GÓRNA WARSTWA” 2. Dolna warstwa roztworu - 90%: a) Wydzielić 10 ml alikwot ROZTWORU ZAPA SOWEGO do sterylnej probówki wirówkowej i zamknąć zatyczką – (nie jest konieczne dalsze rozcieńczanie – ROZTWÓR ZAPASOWY jest 90%) b) Oznakować probówkę jako „DOLNA WARSTWA” 3. Kontynuować według części PROCEDURA OGÓLNA tej ulotki o leku. (UWAGA: 10 ml warstwy górnej i 10 ml warstwy dolnej wystar czy na przygotowanie 5 próbek nasienia). Nr katalogowy: 99306 - ROZTWÓR STĘŻONY Stężona krzemionka koloidalna do dalszego rozcieńczania na gradienty gęstości; sporządzona w izotonicznym buforze i zbliżona do gęstości nierozcieńczonego roztworu Percoll®. STĘŻONY ROZTWÓR ISolate® badany był z gradiantem 50% i 90% zgodnie z informacją podaną w niniejszej ulotce. Każde laboratorium może przygotować swoje własne roztwory o różnych stężeniach, które będą badane pod względem ich skuteczności. A. Sugerowane materiały: Stężony roztwór ISolate® •Nr w Katalogu Irvine Scientific: 99306 Zmodyfikowany Ludzki Płyn Jajowodowy •Nr w Katalogu Irvine Scientific: 90126 Pożywka do przemywania nasienia •Nr w Katalogu Irvine Scientific: 9983 Sterylne, jednorazowe, stożkowe probówki wirówkowe •Nr w Katalogu Irvine Scientific: IS-325 Sterylne pipety Pasteura Wirówka Inkubator, 37 °C B. Przygotowanie roztworu: Następujące dwa roztwory są wymagane do przeprowadzenia metody rozdziału nasienia wg gradientu: Górna warstwa i dolna warstwa. 1. Górna warstwa roztworu - 50%: a) Wziąć ROZTWÓR STĘŻONY (nr katalogowy: 99306) i odpipetować 4.5 ml do sterylnej probówki wirówkowej b) Dodać 5.5 ml do Modified Human Tubal Fluid (nr katalogowy: 90126) c) Zamknąć probówkę i delikatnie odwracać 3-4 azy, aby umożliwić dokładne wymieszanie. d) Oznakować probówkę jako „GÓRNA WARSTWA” 2. Dolna warstwa roztworu - 90%: a) Wziąć ROZTWÓR STĘŻONY (nr katalogowy: 99306) i odpipetować 8.1 ml do sterylnej probówki wirówkowej b) Dodać 1.9 ml do Modified Human Tubal Fluid (nr katalogowy: 90126) c) Zamknąć probówkę i delikatnie odwracać 3-4 razy, aby umożliwić dokładne wymieszanie. d) Oznakować probówkę jako „DOLNA WARSTWA” 3. Kontynuować według części PROCEDURA OGÓLNA tej ulotki o leku. (UWAGA: 10 ml warstwy górnej i 10 ml warstwy dolnej wystarczy na przygotowanie 5 próbek nasienia). Uwaga: Terminy 50% i 90% nie odpowiadają właściwym stężeniom. 50% i 90% są odpowiadającymi stężeniami opartymi na porzedniej nomenklaturze, która definiowała rozcieńczenie 1:9 roztworu Percoll® jako równe z 100% pracującym, roztworem izotonicznym. PROCEDURA OGÓLNA Poniżej podana jest ogólna procedura dla dwustopniowej separacji plemników ruchliwych od nasienia. Objętość i stężenie mogą być zmodyfikowane w celu zgodności z preferencjami laboratorium (tzn.: mini-gradient, nasienie zabezpieczone kriogeniczne, roztwór trzywarstwowy). 1. Podgrzać wszystkie podłoża do temperatury pokojowej lub 37 °C. 2. Przy użyciu sterylnej pipety, przenieść 1,5 – 2,0 ml „DOLNEJ WARSTWY” do sterylnej, jednorazowej, stożkowej probówki wirówkowej. 3. Przy użyciu nowej sterylnej pipety, przenieść jednakową objętość „GÓRNEJ WARSTWY” na wierzch „DOLNEJ WARSTWY”. Jest to wykonane przez dotknięcie końcówką pipety powierzchni „DOLNEJ WARSTWY” z boku probówki. Ostrożnie odebrać „GÓRNĄ WARSTWĘ” poprzez poruszanie spiralnym ruchem końcówki pipety po obwodzie probówki ruchem wznoszącym, podczas podnoszenia się poziomu „GÓRNEJ WARSTWY”. 4. Ostrożnie umieścić 1,5 – 2,0 ml płynnego nasienia na „GÓRNEJ WARSTWIE” przy użyciu nowej sterylnej pipety. 5. Wirować przez 10-20 minut, przy użyciu siły około 200 - 300xg.* Ostrożnie odsłonić pelet poprzez zaaspirowanie „GÓRNEJ ” i „DOLNEJ WARSTWY” lub bezpośrednie zebranie peletu i przeniesienie do nowej sterylnej probówki. *Uwaga: Jakość próbki nasienia należy zbadać i wziąć pod uwagę podczas określania odpowiedniego czasu i szybkości wirowania. Należy je dopasować zgodnie z jakością indywidualnej próbki w celu optymalizacji procedury. 6. Przy użyciu nowej, sterylnej pipety dodać 2,0 – 3,0 ml odpowiedniej pożywki przemywającej, jak np.: Sperm Washing Medium (nr katalogowy IS: 9983) lub Modified HTF (nr katalogowy IS: 90126) z dodatkiem białka. Ponownie zawiesić odebrany pelet. Zwirować (~200xg) przez 8-10 minut i usunąć nadsącz. Powtórzyć ten etap w drugim przepłukiwaniu. Odebrać nadsącz i ponownie zawiesić pelet w odpowiedniej objętości właściwej pożywki. Teraz próbka jest gotowa do analizy. Aby zapoznać się z dodatkowymi szczegółami użycia tych produktów, każde laboratorium powinno odwołać się do jego własnych procedur laboratoryjnych i protokołów, które zostały specjalnie opracowane i zoptymalizowane dla indywidulanego programu medycznego. INSTRUKCJE DOTYCZĄCE PRZECHOWYWANIA I STABILNOŚCI Przechowywać w nieotwartych pojemnikach, w chłodziarce o temperaturze 2º C do 8 ºC. Podgrzać do temperatury otoczenia lub inkubatora (37 °C) przed użyciem. Nie zamrażać ani nie poddawać działaniu wysokich temperatur. ISolate jest stabilny do upłynięcia daty ważności wydrukowanej na pudełku i etykiecie butelki, gdy przechowywany zgodnie z instrukcją. ŚRODKI OSTROŻNOŚCI I OSTRZEŻENIA To urządzenie jest przeznaczone do użycia przez personel wykwalifikowany w dziedzinie procedur obejmujących wskazane zastosowanie, dla którego to urządzenie jest przeznaczone. ISolate będzie nieprzejrzysty. To jest normalne dla tego produktu. Nie używać żadnej fiolki z pożywką, w której widoczne są cząsteczki materii lub zanieczyszczenie (nierównomierne zmętnienie). ISolate należy zamknąć szczelnie w przypadku używania inkubatora CO2, aby uniknąć zmian pH. Ten produkt nie zawiera środków konserwujących, antybiotyków ani dodatków białkowych. Aby uniknąć próblemów z zanieczyszczeniem, posługując się tym produktem należy stosować technikę aseptyczną. Nie używać w przypadku uszkodzenia. Należy wyrzucić lub zwrócić do producenta w celu dokonania wymiany. U WA G A : P r a w o f e d e r a l n e ( S t a n ó w Zjednoczonych) zezwala na sprzedaż tego urządzenia tylko przez lub na polecenie lekarza. DESCRIEREA PRODUSULUI ISolate® este un mediu cu un gradient de concentraţie destinat să separe fracţiunile de spermatozoizi mobili din lichidul seminal Ca şi un sistem gradual pe 2 straturi, reduce contaminarea celulară de exemplu cu spermă moartă, leucocite sau alte reziduuri. Rezultă mostre care conţin predominant spermatozoizi mobile. ISolate este filtrat prin membrană, prelucrat aseptic care conţine particule de silicat în suspensie coloidală, stabilizate prin legături covalente hidrofilice silane solutia tamponată HEPES- HTF . Nivelul de sterilitate asigurat este de (SAL)10-3. ISolate a fost testat cu test pirogen de iepure şi găsit apirogen . INSTRUCŢIUNI DE UTILIZARE Catalog #99264- GATA PENTRU FOLOSIREA S I L I C AT U L U I C O L O I D A L L A D O U Ă CONCENTRAŢII ( 50 % ŞI 90%) A. Materiale propuse: ISolate • Irvine Scientific Catalog #99264 (kit fiolă de 6mL, 50mL sau 100 mL ) Sperm Washing Medium • Irvine Scientific Catalog #9983 Tuburi conice sterile de centrifugă de unică folosinţă • Irvine Scientific Catalog #IS-325 Pipetă sterilă Pasteur Centrifugă Incubator, 37ºC B. Prepararea Gradientului: Nu este necesară diluarea preliminară. Fiecare fiolă cu gradientul stratului de sus şi jos este gata pentru folosinţă. Continuaţi cu PROCEDURI GENERALE, paragraful utilizarea produsului. Catalog # 99275 STOCK SOLUTION Se utilizează 90% din densitatea gradientului de mediu în prima treaptă sau pentru diluări ulterioare. A. Materiale propuse: ISolate STOCK SOLUTION stoc de soluţie ISolate •Irvine Scientific Catalog #99275 Lichid uman tubal modificat •Irvine Scientific Catalog #90126 Sperm Washing Medium •Irvine Scientific Catalog #9983 Tuburi conice sterile de centrifugă de unică folosinţă •Irvine Scientific Catalog #IS-325 Pipetă sterilă Pasteur Centrifugă Incubator, 37ºC B. Prepararea Gradientului: Două soluţii sunt necesare pentru a executa procedeul de separare a spermatozoizilor Stratul de sus şi stratul de jos. Stratul de sus şi stratul de jos. 1. Soluţie stratul de sus -50%. a) Luaţi STOCK SOLUTION (Catalog #99275) şi pipaaţi de 5.6 ml într-un tub de centrifugă sterilă b) Adăugaţi 4.4 ml de Modified Human Tubal Fluid (Catalog# 90126) c) Puneţi capacul tubului şi prin răsturnare efectuată cu grijă de 3-4 ori, veţi realiza amestecarea completă. d) Etichetaţi tubul ca şi “ STRAT DE SUS” 2. Soluţie stratul de jos -90%. a) Alicot în 10 ml de soluţie STOCK într-un tub steril de centrifugă cu capac - (nu este necesară diluţia ulterioară - soluţia STOCK are concentraţia de 90%) b) Etichetaţi tubul “ STRATUL DE JOS” 3. Continuaţi la procedurile generale din instrucţiunile de folosire. (NOTĂ: 10 ml din stratul de sus şi 10 ml din stratul de jos, va prelucra aproximativ 5 mostre de spermă). Catalog # 99306 CONCENTRATE Concentratul de silicat coloidal pentru mai multă diluare a densităţii gradientului ; formulat în tamponare isotonică şi aproximează densitatea nediluată al Percoll®-ului. ISolate® CONCENTRATE a fost evaluat conform concentraţiei de 50% şi 90%, înscrisă pe pachet gradient de la 50% până la 90%). Fiecare laborator îşi poate alege să facă gradienţii la diferite concentraţii, care ar trebui evaluat pentru eficacitate. A. Materiale propuse: ISolate® Concentrat •Irvine Scientific Catalog #99306 Lichid uman tubal modificat •Irvine Scientific Catalog #90126 Sperm Washing Medium •Irvine Scientific Catalog #9983 Tuburi conice sterile de centrifugă de unică folosinţă •Irvine Scientific Catalog #IS-325 Pipetă sterilă Pasteur Centrifugă Incubator, 37ºC B. Prepararea Gradientului: Două soluţii sunt necesare pentru a executa procedeul de separare a spermatozoizilor Stratul de sus şi stratul de jos. 1. Soluţie stratul de sus -50%. a) Luaţi CONCENTRATE (Catalog #99306) şi pipete de 4.5 ml într-un tub steril de centrifugă b) Adăugaţi 5.5 ml de Modified Human Tubal Fluid (Catalog# 90126) c) Puneţi capacul tubului şi prin răsturnare efectuată cu grijă de 3-4 ori, veţi realiza amestecarea completă. d) Etichetaţi tubul ca şi “ STRAT DE SUS” 2. Soluţie stratul de jos -90%. a) Luaţi CONCENTRATE (Catalog #99306) şi pipete de 8.1 ml într-un tub steril de centrifugă b) Adăugaţi 1.9 ml de Modified Human Tubal Fluid (Catalog# 90126) c) Puneţi capacul tubului şi prin răsturnare efectuată cu grijă de 3-4 ori, veţi realiza amestecarea completă. d) Etichetaţi tubul ca şi “ STRAT DE JOS” 3. Continuaţi la procedurile generale din instrucţiunile de folosire. (NOTĂ: 10 ml din stratul de sus şi 10 ml din stratul de jos, va prelucra aproximativ 5 mostre de spermă). Notă: Termeni de 50% şi 90% nu reprezintă concentraţia actuală. Cele de 50% şi 90% sunt concentraţii bazate pe nomenclatura anterioară care defineşte o diluţie de 1:9 de Percoll® , identică în totalitate cu soluţia izotonică de lucru. PROCEDURI GENERALE Urmează a doua treaptă de procedură generală şi anume de separare a spermatozoidului mobil din spermă. Volumul şi concentraţia pot fi modificate în funcţie de preferinţele fiecărui laborator. (ex: mini-gradient, crioconservarea spermei, gradient în trei straturi.) 1. Aduceţi toţi componenţii mediului la temperatura camerei sau 37°C. 2. Folosind pipetă sterilă, transferaţi 1.5 - 2.0 ml din “STRATUL DE JOS” într-un tub steril de centrifugă conică de unică folosinţă. 3. Cu ajutorul unei pipete noi sterile, transferaţi un volum egal cu cel situat între cele două semne care delimitează “stratul de sus” şi “stratul de jos”. Aceasta este făcută prin contactul cu suprafaţei “STRATULUI JOS” de la marginea tubului cu vârful pipetei. Preparaţi cu grijă “STRATUL DE SUS” prin învârtirea spiralată a vârfului pipetei în sus, în jurul circumferinţei tubului aşa cum “STRATUL DE SUS” se ridică. 4. Cu ajutorul unei pipete sterile puneţi cu blândeţe 1,5-2 ml de spermă lichefiată până la “nivelul de sus” a tubului. EESTI SVENSKA 5. Centrifugaţi timp de 10-20 de minute, la aproximativ 200- 300 xg.* Granulele vor fi expuse cu grijă prin aspirarea “ STRATULUI DE SUS” şi a “STRATULUI DE JOS” sau prin scoaterea directă a acestora şi mutarea lor într-un tub steril de centrifugă. *Notă: Calitatea mostrei de spermatozoids trebuie să fie evaluată şi luată în considerare când se determină timpul şi viteza proprie pentru centrifugare. Acestea trebuie ajustate în concordanţă cu calitatea mostrei individuale în vederea optimizării procesului de prelucrare. 6. Folosind o pipetă sterilă nouă, adăugaţi 2.0 - 3.0 ml mediu de spălare utilizând Sperm Washing Medium (IS Catalog# 9983) sau Modified HTF (IS Catalog #90126) cu adaos de proteine. Resuspendaţi granulele izolate. Centrifugaţi (~200xg) pentru 8-10 minute şi îndepărtaţi supernatantul. Repetaţi această treaptă pentru a doua spălare. Îndepărtaţi supernatantul şi resuspendaţi granula folosind un volum potrivit de mediu adecvat. Mostra acum este gata pentru analiză. Pentru detalii suplimentare privind folosirea acestui produs, fiecare laborator trebuie să consulte protocolul pentru procedurile utilizate în laborator care sunt specifice şi optimizate pentru programul medical individual. INSTRUCŢIUNI PENTRU PĂSTRARE ŞI STABILITATE Păstraţi sticlele sau containerele nedeschise refrigerate la 2º to 8ºC. Încălziţi la temperatura mediului ambiant sau la incubator la temperatură (37°C) înainte de a utilliza. Nu congelaţi sau expuneţi la temperaturi mari. ISolate este stabil până la data expirării înscrise pe eticheta de pe cutie dacă sunt respectate condiţiile de depozitare. PRECAUŢII ŞI AVERTISMENTE Acest dispozitiv este destinat să fie utilizat de personalul specializat în proceduri care includ aplicarea indicată pentru care a fost creat dispozitivul. ISolate va apărea opac. Este normal pentru acest produs. Nu utilizaţi fiole cu mediu care prezintă reziduuri de particule sau semne de contaminare (înceţoşare neuniformă) ISolate ar trebui să fie închis ermetic atunci când se foloseşte în incubator cu CO2 pentru a evita schimbări ale nivelurilor de pH. Acest produs nu conţine conservanţi, antibiotice, sau suplemente de proteină. Pentru a evita probleme de contaminare, mânuiţi folosind tehnici aseptice. Nu se utilizează în caz de deteriorare. Vă rugăm aruncaţi sau înapoiaţi producătorului pentru a fi înlocuit. AVERTISMENT: Legile Federale în (SUA) nu permit vânzarea acestui aparat numai la comanda unui medic sau pe bază de comanadă. PRODUKTBESKRIVNING ISolate® är ett densitetsgradientmedium framtaget för att separera den rörliga spermiefraktionen från sädesvätska. Detta gradientsystem med två skikt minskar effektivt förekomsten av cellulära kontaminanter, såsom döda spermier, vita blodkroppar och annat skräp. Det resulterande provet innehåller huvudsakligen rörliga spermier. ISolate är en membranfiltrerad, aseptiskt behandlad kolloidal suspension av kiselpartiklar stabiliserade med kovalent bundet hydrofilt silan i HEPES-buffrad HTF. Sterilitetsnivån (SAL, sterility assurance level) är 10 -3. ISolate har testats med pyrogentest på kanin och befunnits negativ för pyrogener. BRUKSANVISNING Katalognr 99264 - KOLLOIDAL KISELDIOXID, FÄRDIG ATT ANVÄNDA, I TVÅ KONCENTRATIONER (50 % och 90 %) A. Rekommenderat material: ISolate • Irvine Scientific katalognr 99264 (sats med 6 mL, 50mL eller 100 mL ampuller) Sperm Washing Medium • Irvine Scientific katalognr 9983 Sterila, konformade centrifugrör för engångsbruk • Irvine Scientific katalognr IS-325 Pasteurpipetter, sterila Centrifug Inkubator, 37 °C B. Gradientberedning: Inga förspädningar krävs. Varje ampull med topp- och bottengradient är färdig att användas. Fortsätt till avsnittet ALLMÄNT FÖRFARANDE i produktens bipacksedel. Katalognr 99275 - STOCK SOLUTION 90 % densitetsgradient-medium för användning i en procedur i ett steg eller för ytterligare spädning. A. Rekommenderat material: ISolate Stock Solution • Irvine Scientific katalognr 99275 Modified Human Tubal Fluid • Irvine Scientific katalognr 90126 Sperm Washing Medium • Irvine Scientific katalognr 9983 Sterila, konformade centrifugrör för engångsbruk • Irvine Scientific katalognr IS-325 Pasteurpipetter, sterila Centrifug Inkubator, 37 °C B. Gradientberedning: Två lösningar krävs för att utföra spermieseparation med gradientmetoden: En toppskikts- och en bottenskiktslösning. 1. Toppskiktslösning - 50 %: a) Ta STOCK SOLUTION (katalognr 99275) och pipettera 5,6 mL i ett sterilt centrifugrör b) Tillsätt 4,4 mL Modified Human Tubal Fluid (katalognr 90126) c) Förslut röret och vänd det varligt 3-4 gånger så att innehållet blandas fullständigt d) Märk röret med “TOPPSKIKT” 2. Bottenskiktslösning - 90 %: a) Häll en alikvot på 10 mL av Stock Solution i ett sterilt centrifugrör och förslut - (ingen ytterligare spädning krävs - Stock Solution är på 90 %) b) Märk röret med “BOTTENSKIKT” 3. Fortsätt till avsnittet ALLMÄNT FÖRFARANDE i produktens bipacksedel. (OBS! 10 mL toppskikt och 10 mL bottenskikt räcker till cirka 5 spermaprover). Katalognr 99306 - CONCENTRATE Kolloidalt kisel-koncentrat för ytterligare spädning till densitetsgradienter; i isoton buffert och med ungefär samma densitet som ospädd Percoll®. ISolate® CONCENTRATE har utvärderats enligt denna bipacksedel vid gradienterna 50 % och 90 %. Varje laboratorium kan välja att framställa gradienter i andra koncentrationer, som bör utvärderas för effektivitet. A. Rekommenderat material: ISolate® Concentrate • Irvine Scientific katalognr 99306 Modified Human Tubal Fluid • Irvine Scientific katalognr 90126 Sperm Washing Medium • Irvine Scientific katalognr 9983 Sterila, konformade centrifugrör för engångsbruk • Irvine Scientific katalognr IS-325 Pasteurpipetter, sterila Centrifug Inkubator, 37 °C B. Gradientberedning: Två lösningar krävs för att utföra spermieseparation med gradientmetoden: En toppskikts- och en bottenskiktslösning. 1. Toppskiktslösning - 50 %: a) Ta CONCENTRATE (katalognr 99306) och pipettera 4,5 mL i ett sterilt centrifugrör b) Tillsätt 5,5 mL Modified Human Tubal Fluid (katalognr 90126) c) Förslut röret och vänd det varligt 3-4 gånger så att innehållet blandas fullständigt d) Märk röret med “TOPPSKIKT” 2. Bottenskiktslösning - 90 %: a) Ta CONCENTRATE (katalognr 99306) och pipettera 8,1 mL i ett sterilt centrifugrör b) Tillsätt 1,9 mL Modified Human Tubal Fluid (katalognr 90126) c) Förslut röret och vänd det varligt 3-4 gånger så att innehållet blandas fullständigt d) Märk röret med “BOTTENSKIKT” 3. Fortsätt till avsnittet ALLMÄNT FÖRFARANDE i produktens bipacksedel. Obs! Termerna 50 % och 90 % anger inte en faktisk koncentration. 50 % och 90 % är relativa koncentrationer baserade på tidigare nomenklatur som definierade en 1:9-spädning av Percoll ® såsom likvärdig med en 100 % fungerande, isoton lösning. ALLMÄNT FÖRFARANDE Följande är en generell procedur för en tvåstegsgradientseparation av rörliga spermier från sädesvätska. Volymen och koncentrationen kan modifieras för att passa det enskilda laboratoriets preferenser (dvs. minigradient, kryopreserverad sperma, treskiktsgradient). 1. Låt alla mediekomponenter uppnå rumstemperatur eller 37 °C. 2. Använd en steril pipett och överför 1,5 - 2,0 mL av “BOTTENSKIKTET” till ett sterilt, konformat centrifugrör för engångsbruk. 3. Använd en ny steril pipett och överför en lika stor volym “TOPPSKIKT” ovanpå “BOTTENSKIKTET” . Detta görs genom att vidröra ytan på “BOTTENSKIKTET” vid röret sida med pipettens spets. Dispensera omsorgsfullt “TOPPSKIKTET” genom att vrida pipettspetsen i spiral runt rörets omkrets i en uppåtriktad rörelse efterhand som “TOPPSKIKT”-nivån ökar. 4. Placera försiktigt 1,5 - 2,0 mL likvifierad sperma på “TOPPSKIKTET” med användning av en ny, steril pipett. 5. Centrifugera i 10 - 20 minuter vid cirka 200 - 300 x g.* Exponera pelleten omsorgsfullt genom att antingen suga av “TOPP-” och “BOTTENSKIKTEN”, eller genom att ta upp pelleten och föra över den till ett nytt, sterilt centrifugrör. *Obs! Spermaprovets kvalitet skall bedömas och tas i beaktande vid bestämning av korrekt centrifugeringshastighet och -tid. Dessa bör justeras i enlighet med det enskilda provets kvalitet, för optimering av förfarandet. 6. Använd en ny steril pipett och tillsätt 2,0 - 3,0 mL lämpligt tvättmedium såsom Sperm Washing Medium (IS katalognr 9983) eller Modified HTF (IS katalognr 90126) med proteinsupplement. Resuspendera den isolerade pelleten. Centrifugera (~200xg) i 8 - 10 minuter och avlägsna supernatanten. Upprepa detta steg för en andra tvätt. Kassera supernatanten och resuspendera pelleten med användning av en adekvat volym lämpligt medium. Provet är nu klart för analys. För ytterligare information om användning av dessa produkter bör varje laboratorium konsultera sina egna laboratorieförfaranden och -protokoll som utvecklats och optimerats särskilt för de egna medicinska programmen. FÖRVARING OCH HÅLLBARHET Oöppnade behållare skall förvaras i kylskåp vid 2 - 8 ºC. Värm till omgivnings- eller inkubator(37 °C)-temperatur före användning. Får ej frysas eller exponeras för höga temperaturer. ISolate är hållbart fram till det utgångsdatum som anges på kartongen och flasketiketterna, vid förvaring enligt anvisningarna. FÖRSIKTIGHETSÅTGÄRDER OCH VARNINGAR Denna produkt är avsedd att användas av personal med utbildning i procedurer vilka inkluderar den indicerade tillämpning för vilken produkten är avsedd. ISolate är ogenomskinligt. Detta är normalt för denna produkt. Använd inga ampuller med medium som innehåller partiklar eller företer tecken på kontamination (ojämn grumlighet). ISolate skall vara ordentligt förslutet vid användning i en CO2-inkubator så att pH-förändringar undviks. Denna produkt innehåller inga konserveringsmedel, antibiotika eller proteinsupplement. Använd aseptisk teknik vid hantering, så att kontamination undviks. Om produkten är skadad får den inte användas. Kassera den eller returnera den till tillverkaren för utbyte. OBS! Enligt federal (USA) lag får denna produkt endast säljas av eller på ordination av läkare. TOOTE KIRJELDUS ISolate® on tihedusgradiendi lahus, mis on koostatud liikuva sperma eraldamiseks seemnevedelikust. Kahekihilise gradiendi süsteem vähendab tõhusalt rakuliste saasteainete, sh surnud sperma, valgevererakkude ja mitmesuguste jäätmete hulka. Sellest saadud proov sisaldab peamiselt liikuvaid spermatosoide. ISolate on HEPESiga puhverdatud HTFis membraanfiltreeritud ja aseptilised töödeldud räniosakeste kolloiodne suspensioon kovalentselt seotud hüdrofiilse silaaniga. Garanteeritud steriilsustase (SAL) on 10 -3. Küüliku pürogeenitesti tegemisega on leitud, et ISolate on pürogeenide suhtes negatiivne. KASUTUSJUHEND Kataloogi nr 99264 - KASUTAMISVALMIS KOLLOIDNE RÄNIMULD KAHES KONTSENTRATSIOONIS (50% ja 90%) A. Soovitatavad materjalid: ISolate • Irvine Scientific katalooginr 99264 (6mL, 50mL või 100mL viaaliga komplekt) Sperm Washing Medium • Irvine Scientific katalooginr 9983 Steriilsed, ühekordsed koonilised tsentrifuugi tuubid • Irvine Scientific katalooginr IS-325 Pasteuri pipetid, steriilsed Tsentrifuug Inkubaator, 37°C B. Gradiendi valmistamine: Eelnevat lahjendamist ei ole vaja. Iga ülemise ja alumise gradiendi kihti sisaldav viaal on kasutamiseks valmis. Jätkake toote pakendi infolehel toodud ÜLDPROTSEDUURIDEGA. Kataloogi nr 99275 - STOCK SOLUTION 90%-ne tihedusgradiendi sööde kasutamiseks üheetapilises protseduuris või edasiseks lahjendamiseks. A. Soovitatavad materjalid: ISolate STOCK SOLUTION •Irvine Scientific katalooginr 99275 Modified Human Tubal Fluid •Irvine Scientific katalooginr 90126 Sperm Washing Medium •Irvine Scientific katalooginr 9983 Steriilsed, ühekordsed koonilised tsentrifuugi tuubid •Irvine Scientific katalooginr IS-325 Pasteuri pipetid, steriilsed Tsentrifuug Inkubaator, 37°C B. Gradiendi valmistamine: Sperma eraldamise gradientmeetodi jaoks on vaja kaks lahust: ülemine kiht ja alumine kiht. Ülemine kiht ja alumine kiht. 1. Ülemise kihi lahus - 50%: a) Võtke STOCK SOLUTION (kataloogi nr 99275) ja pipettige 5,6 mL steriilsesse tsentrifuugi tuubi. b) Lisage 4.4 mL lahust Modified Human Tubal Fluid (kataloogi nr 90126) c) Katke katsut korgiga ja keerake 3...4 korda põhi õrnalt üles-alla, et sisu täielikult seguneks d) Märkige katsutile “ÜLEMINE KIHT” 2. Alumise kihi lahus - 90%: a) Alikvootige 10 mL STOCK SOLUTIONit steriilsesse tsentrifuugi tuubi ja korgistage - (edasine lahjendamine ei ole vajalik - STOCK SOLUTION on 90%) b) Märkige katsutile “ALUMINE KIHT” 3. Jätkake toote pakendi infolehel toodud ÜLDPROTSEDUURIDEGA. (MÄRKUS: Kogusega 10 mL ülemist kihti ja 10 mL alumist kihti on võimalik töödelda umbes 5 eemnevedeliku proovi.) Kataloogi nr 99306 - CONCENTRATE Kolloidse ränimulla kontsentraat edasiseks lahjendamiseks tihedusgradientideks; valmistatud isotoonilises puhvris ja tiheduse poolest on lähedane lahustamata Percoll®-ile. ISolate® analüüsiti vastavalt pakendi infolehes toodule ning leiti gradiendid 50% ja 90%. Iga labor võib oma äranägemisel valmistada erinevates kontsentratsioonides gradiente, mille tõhusust tuleb hinnata. A. Soovitatavad materjalid: ISolate® kontsentraat •Irvine Scientific katalooginr 99306 Modified Human Tubal Fluid •Irvine Scientific katalooginr 90126 Sperm Washing Medium •Irvine Scientific katalooginr 9983 Steriilsed, ühekordsed koonilised tsentrifuugi tuubid •Irvine Scientific katalooginr IS-325 Pasteuri pipetid, steriilsed Tsentrifuug Inkubaator, 37°C B. Gradiendi valmistamine: Sperma eraldamise gradientmeetodi jaoks on vaja kaks lahust: ülemine kiht ja alumine kiht. 1. Ülemise kihi lahus - 50%: a) Võtke CONCENTRATE (kataloogi nr 99306) ja pipettige 4.5 mL steriilsesse tsentrifuugi tuubi. b) Lisage 5.5 mL lahust Modified Human Tubal Fluid (kataloogi nr 90126) c) Katke katsut korgiga ja keerake 3...4 korda põhi õrnalt üles-alla, et sisu täielikult seguneks d) Märkige katsutile “ÜLEMINE KIHT” 2. Alumise kihi lahus - 90%: a) Võtke CONCENTRATE (kataloogi nr 99306) ja pipettige 8.1 mL steriilsesse tsentrifuugi tuubi. b) Lisage 1.9 mL lahust Modified Human Tubal Fluid (kataloogi nr 90126) c) Katke katsut korgiga ja keerake 3...4 korda põhi õrnalt üles-alla, et sisu täielikult seguneks d) Märkige katsutile “ALUMINE KIHT” 3. Jätkake toote pakendi infolehel toodud ÜLDPROTSEDUURIDEGA. Märkus: Nimetusele lisatud 50% ja 90% ei kujuta endast tegelikku kontsentratsiooni. 50% ja 90% kujutavad endast relatiivseid kontsentratsioone, mis põhinevad varasemal nomenklatuuril, mille järgi Percoll’i® 1:9 lahus võrdus 100% isotoonilise töölahusega. ÜLDINE PROTSEDUUR Järgnevalt on toodud liikuva sperma seemnevedelikust gradiendiga eraldamise kahe-etapiline üldprotseduur Mahtu ja kontsentratsiooni võib muuta vastavalt labori eelistustele (st minigradient, külmutatult säilitatud seemnevedelik, kolmekihiline gradient). 1. Tooge kõik söötme komponendid toatemperatuurile, st 37°C. 2. Kasutades steriilset pipetti, viige 1,5...2,0 mL ALUMIST KIHTI steriilsesse, ühekordsesse, koonilisse tsentrifuugituubi. 3. Kasutades uut steriilset pipetti, viige ALUMISE KIHI peale võrdne kogus ÜLEMIST KIHTI. Selleks viige pipeti ots katsuti seinal vastu ALUMISE KIHI pinda. Ettevaatlikult dispenseerige ÜLEMINE KIHT pipeti otsaga spiraalselt mööda katsuti sisemist seina ülespoole tõmmates ÜLEMISE KIHI pinna tõustes. 4. Õ r n a l t a s e t a g e 1 , 5 . . . 2 , 0 m L v e d e l d a t u d seemnevedelikku ÜLEMISSE KIHTI, kasutades selleks uut steriilset pipetti. 5. Tsentrifuugige umbes 200...300 g juures 10...20 minutit.* Ettevaatlikult tooge välja settetombuke, kas ÜLEMISE ja ALUMISE KIHI pealt ära aspireerimise teel või settetombukese otseselt välja võtmise ja uude steriilsesse tsentrifuugi tuubi sisse kandmise teel. *Märkus: Tsentrifuugimiskiiruse ja -aja määramisel tuleb hinnata ja arvesse võtta spermaproovi kvaliteeti. Protseduuri optimeerimiseks tuleb kiirust ja aega korrigeerida vastavalt proovi kvaliteedite. 6. Kasutades uut steriilset pipetti, lisage 2,0...3,0 mL sobivat pesemisvahendit nagu Sperm Washing Medium (IS kataloogi nr 9983) või Modified HTF (IS kataloogi nr 90126) koos proteiinilisandiga. Resuspendeerige isoleeritud settetombuke. Tsentrifuugige ~200 g juures 8...10 minutit ja eemaldage supernatant. Korrake seda sammu teistkordseks pesemiseks. Visake supernatant ära ja resuspendeerige settetombuke, kasutades selleks sobiva söötme vastavat kogust. Proov on nüüd analüüsimiseks valmis. Toodete kasutamise üksikasjaliku informatsiooni vajamise korral peab iga labor kasutama oma labori protseduure ja protokolle, mis on välja arendatud ja optimeeritud konkreetselt teie oma meditsiiniprogrammi jaoks. SÄILITAMISJUHISED JA STABIILSUS Hoidke avamata anumad külmkapis temperatuuril 2 º... 8 ºC. Enne kasutamist soojendage ümbritseva õhu või inkubaatori temperatuurile (37°C). Ärge külmutage ega jätke kõrgete temperatuuride kätte. ISolate on stabiilne karbi ja pudeli etiketile märgitud tähtpäevani, kui seda on säilitatud juhendis ettenähtud tingimustes. ETTEVAATUSABINÕUD JA HOIATUSED See seade on ette nähtud kasutamiseks tervishoiutöötajatele, kes on saanud vastava koolituse, kaasa arvatud selle seadme kavandatud kasutuse alal. ISolate on läbipaistmatu. See on selle toote puhul normaalne. Ärge kasutage söödet viaalist, milles on märgata osakesi või saastumist (st ebaühtlane hägusus). ISolate peab CO2 inkubaatoris kasutamise korral olema tihedalt korgistatud vältimaks muutusi pH-s. Toode ei sisalda säilitusaineid, antibiootikume ega proteiinilisandeid. Saastamise vältimiseks käsitsege vahendeid aseptilist tehnikat kasutades. Kahjustuste ilmnemise korral mitte kasutada. Palun visake ära või tagastage tootjale, kes selle asendab. ETTEVAATUST: Riiklik (USA) seadusandlus piirab seadme müüki ning see võib toimuda üksnes arsti poolt või arsti korraldusel. ISolate® Catalog No. 99264 12 x 6 mL, 2 x 50 mL, 2 x 100 mL Ready to Use Density Gradient Medium at Two Concentrations Catalog No. 99275 Stock Solution 100 mL Catalog No. 99306 Concentrate 100 mL REFERENCES Adaniya GK, Jackson KV: Comparison of Percoll® and ISolate® in the Preparation of Semen for use in Assisted Reproductive Technologies. 53rd Annual Meeting of the American Society for Reproductive Medicine, Cincinnati, Ohio; 0-113, 1997. Symbols: Catalog Number Lot Number Tarchala SM, Fahy MM, Hauserman HM, Kallmann K, Volentine K, Radwanska E, Binor Z, Molo MW, Rawlins RG: ISolate® As a New Method of Sperm Separation. 53rd Annual Meeting of the American Society for Reproductive Medicine, Cincinnati, Ohio; P-116, 1998. Miller, KF, Fry KL, Arciaga RL, Falcone T: Semen preparation for in-vitro fertilization using ISolate® results in sperm recovery, fertilization and pregnancy outcomes that are indistinguishable from those obtained with Percoll®. 14th Embryology, Goteborg, Sweden; P-116, 1998. Tarchala SM, Volentine KK, Rawlins RG: A comparison of sperm processing using ISolate® and Pure Sperm™. 14th Annual Meeting of the European Society of Human Reproduction and Embryology, Goteborg, Sweden; R-041, 1998. Sterilized using aseptic processing techniques (filtration) Expiration: Year - Month - Day Caution:See instructions for use European Representative MPIE Schutweg 13A 5145 NP Waalwijk, The Netherlands See instructions for use. Storage Temperature CE Mark 0050 0050 ISolate is a Registered Trademark of Irvine Scientific ® Percoll ® is a Registered Trademark of Pharmacia Biotech, AB Sweden MPIE Schutweg 13a 5145 NP Waalwijk, The Netherlands ISolate is een membraangefilterde, op aseptische wijze bewerkte colloïdale suspensie van silicadeeltjes die zijn gestabiliseerd met covalent gebonden, hydrofiel silaan in HEPES-gebufferde HTF. Het Sterility Assurance Level (SAL) is 10-3. ISolate is negatief gebleken voor pyrogenen bij een konijnpyrogeentest. GEBRUIKSAANWIJZING C a t a l o g u s n r. 9 9 2 6 4 - K A N T- E N KLAAR COLLOÏDAAL SILICA IN TWEE CONCENTRATIES (50% en 90%) A.Voorgestelde materialen: ISolate • Irvine Scientific catalogusnr. 99264 (6ml, 50ml of 100 ml ampulkit) Sperm Washing Medium • Irvine Scientific catalogusnr. 9983 Steriele, conische wegwerpcentrifugebuisjes • Irvine Scientific catalogusnr. IS-325 Pasteurpipetten, steriel Centrifugeren Incubator, 37 °C B. Gradiëntpreparatie: Geen voorafgaande verdunningen noodzakelijk. Elke ampul van bovenste en onderste laaggradiënt is klaar voor gebruik. Ga door naar het gedeelte ALGEMENE PROCEDURE in de productbijsluiter. Catalogusnr. 99275 - STOCK SOLUTION 90% dichtheidsgradiëntmedium voor gebruik in een enkelvoudige procedure of voor verdere verdunning. A.Voorgestelde materialen: ISolate STOCK SOLUTION •Irvine Scientific catalogusnr. 99275 Modified Human Tubal Fluid •Irvine Scientific catalogusnr. 90126 Sperm Washing Medium •Irvine Scientific catalogusnr. 9983 Steriele, conische wegwerpcentrifugebuisjes •Irvine Scientific catalogusnr. IS-325 Pasteurpipetten, steriel Centrifugeren Incubator, 37 °C 5. Centrifugeer gedurende 10-20 minuten bij ca. 200 - 300xg.* Stel de pellet voorzichtig bloot door de “BOVENSTE” en “ONDERSTE LAGEN” te aspireren of de pellet direct te verwijderen en over te brengen naar een nieuw steriel centrifugebuisje. *Opm.: de kwaliteit van het spermamonster dient te worden beoordeeld en in aanmerking te worden genomen bij het bepalen van de juiste centrifugeersnelheid en -tijd. Deze moeten worden aangepast aan de individuele monsterkwaliteit zodat een optimale procedure wordt verkregen. 6. Voeg met een nieuw steriel pipet 2,0 - 3,0 ml van een geschikt wasmiddel zoals Sperm Washing Medium (IS catalogusnr. 9983) of Modified HTF (IS catalogusnr. 90126) met eiwitsupplement toe. Resuspendeer de geïsoleerde pellet. Centrifugeer (~200xg) gedurende 8 -10 minuten en verwijder het supernatant. Herhaal deze stap voor een tweede wasbeurt. Voer het supernatant af en resuspendeer de pellet met een geschikt volume van het juiste medium. Het monster is nu klaar voor analyse. Voor aanvullende informatie over het gebruik van deze producten, dient elk laboratorium haar eigen laboratoriumprocedures en -protocollen te raadplegen die speciaal zijn ontwikkeld en geoptimaliseerd voor uw individueel medisch programma. BEWAARINSTRUCTIES EN STABILITEIT Bewaar de ongeopende containers gekoeld bij 2 °C tot 8 °C. Vóór gebruik opwarmen tot omgevingstemperatuur of incubatortemperatuur (37 °C). Niet invriezen of blootstellen aan hoge temperaturen. VOORZORGSMAATREGELEN EN WAARSCHUWINGEN Dit hulpmiddel is bedoeld voor gebruik door personeel dat opgeleid is voor procedures inclusief de aangegeven toepassing waarvoor het hulpmiddel is bedoeld. Catalogusnr. 99306 - CONCENTRATE Colloïdaal silicaconcentraat voor verdere verdunning in dichtheidsgradiënten; geformuleerd in een isotone buffer en benadert de dichtheid van onverdund Percoll®. ISolate® CONCENTRATE werd beoordeeld volgens deze bijsluiter bij een gradiënt van 50% en 90%. Elke laboratorium kan kiezen voor gradiënten bij verschillende concentraties die op effectiviteit dienen te worden gecontroleerd. A.Voorgestelde materialen: ISolate® concentraat •Irvine Scientific catalogusnr. 99306 Modified Human Tubal Fluid •Irvine Scientific catalogusnr. 90126 Sperm Washing Medium •Irvine Scientific catalogusnr. 9983 Steriele, conische wegwerpcentrifugebuisjes •Irvine Scientific catalogusnr. IS-325 Pasteurpipetten, steriel Centrifugeren Incubator, 37 °C B. Gradiëntpreparatie: Er zijn twee oplossingen nodig voor de gradiëntspermascheidingsmethode: een bovenste laag en een onderste laag. 1. Oplossing bovenste laag - 50%: a) Neem het CONCENTRATE (catalogusnr. 99306) en pipetteer 4,5 ml in een steriel centrifugebuisje b) Voeg 5,5 ml Modified Human Tubal Fluid (catalogusnr. 90126) toe c) Draai de dop op het buisje en keer deze voorzichtig 3-4 keer om zodat de inhoud goed wordt gemengd b) Plak een sticker met de tekst “BOVENSTE LAAG” op het buisje 2. Oplossing onderste laag - 90%: a) Neem het CONCENTRATE (catalogusnr. 99306) en pipetteer 8,1 ml in een steriel centrifugebuisje b) Voeg 1,9 ml Modified Human Tubal Fluid (catalogusnr. 90126) toe c) Draai de dop op het buisje en keer deze voorzichtig 3-4 keer om zodat de inhoud goed wordt gemengd b) Plak een sticker met de tekst “ONDERSTE LAAG” op het buisje 3. Ga door naar het gedeelte ALGEMENE PROCEDURE in de productbijsluiter. (OPM.: 10 ml bovenste laag en 10 ml onderste laag zijn voldoende voor de bewerking van ca. 5 semen monsters.) Opm.: de aanduidingen 50% en 90% vertegenwoordigen geen werkelijke concentraties. De 50% en 90% zijn relatieve concentraties gebaseerd op de vorige nomenclatuur waarbij een 1:9 oplossing van Percoll® gelijk staat aan een 100% werkende, isotone oplossing ALGEMENE PROCEDURE Hieronder wordt een algemene procedure beschreven voor een tweestaps gradiëntscheiding van motiel sperma en semen. Het volume en de concentratie kunnen worden aangepast aan de voorkeur van elk laboratorium (bijv. minigradiënt, cryopreservatiesemen, drielaagse gradiënt). op 2. Breng met een steriel pipet 1,5 - 2,0 ml van de “ONDERSTE LAAG” over naar een steriel, conisch wegwerpcentrifugebuisje. 2511 Daimler Street, Santa Ana, California 92705-5588 Telephone: 1 949 261 7800 • 1 800 437 5706 Fax: 1 949 261 6522 • www.irvinesci.com PN 40558 Rev.10 4. Plaats 1,5 - 2,0 ml van het vloeibaar geworden semen voorzichtig op de “BOVENSTE LAAG” met behulp van een nieuw steriel pipet. Als ISolate zoals voorgeschreven wordt bewaard, is het stabiel tot aan de houdbaarheidsdatum die op de sticker van de doos en fles is vermeld. B. Gradiëntpreparatie: Er zijn twee oplossingen nodig voor de gradiëntspermascheidingsmethode: een bovenste laag en een onderste laag. 1. Oplossing bovenste laag - 50%: a) Neem de STOCK SOLUTION (catalogusnr. 99275) en pipetteer 5,6 ml in een steriel centrifugebuisje b) Voeg 4.4 ml Modified Human Tubal Fluid (catalogusnr. 90126) toe c) Draai de dop op het buisje en keer deze voorzichtig 3-4 keer om zodat de inhoud goed wordt gemengd b) Plak een sticker met de tekst “BOVENSTE LAAG” op het buisje 2. Oplossing onderste laag - 90%: a) Vul een steriel centrifugebuisje met 10 ml van de STOCK SOLUTION en sluit dit af met een dop - (Geen verdere verdunningen noodzakelijk - STOCK SOLUTION is 90%) b) Plak een sticker met de tekst “ONDERSTE LAAG” op het buisje 3. Ga door naar het gedeelte ALGEMENE PROCE DURE in de productbijsluiter. (OPM.: 10 ml bovenste laag en 10 ml onderste laag zijn voldoende voor de bewerking van ca. 5 semenmonsters.) 1. B r e n g a l l e m e d i a c o m p o n e n t e n omgevingstemperatuur of 37 °C. ROMÂNĂ POLSKI NEDERLANDS PRODUCTBESCHRIJVING ISolate® is een dichtheidsgradiëntmedium dat ontworpen is om het motiele gedeelte van het sperma te scheiden van de spermavloeistof. Als een tweelaags gradiëntsysteem vermindert het effectief celverontreinigende stoffen zoals dood sperma, witte bloedcellen en ander afval. Het resulterende monster bevat voornamelijk motiel sperma. 3. Breng met een nieuw steriel pipet een gelijk volume van de “BOVENSTE LAAG” over naar het bovenste gedeelte van de “ONDERSTE LAAG”. Dit kan worden bereikt door het oppervlak van de “ONDERSTE LAAG” tegen de zijkant van het buisje te houden met de punt van het pipet. Pipetteer de “BOVENSTE LAAG” voorzichtig door de pipetpunt in een opwaartse spiraalbeweging rondom de omtrek van het buisje te draaien als het niveau van de “BOVENSTE LAAG” stijgt. ISolate zal er opaak uitzien. Dit is normaal voor dit product. Gebruik geen ampullen met een medium dat (vaste) deeltjes bevat of besmet is (niet-uniform troebel). ISolate dient goed met een dop te worden afgesloten als het wordt gebruikt in een CO2-incubator om pH-wijzigingen te vermijden. Dit product bevat geen conserveringsmiddelen, antibiotica of eiwitsupplementen. Gebruik aseptische methoden om besmettingsproblemen te vermijden. Niet gebruiken indien beschadigd. Afvoeren of terugsturen naar de fabrikant voor een vervanging. VOORZICHTIG: volgens de Amerikaanse federale wetgeving mag dit product alleen door of op voorschrift van een arts worden verkocht. OPIS PRODUKTU ISolate® jest pożywką z gradientem gęstości, stworzoną do rozdziału frakcji plemników ruchliwych od płynu nasiennego. Ten system o dwupoziomowym gradiencie jest skuteczny w redukowaniu zanieczyszczeń komórkowych, takich jak martwe plemniki, białe ciałka krwi i szczątkowe zanieczyszczenia. Powstała próbka zawiera głównie ruchliwe plemniki. ISolate jest to filtrowana membranowo, aseptycznie przetwarzana zawiesina krzemionkowa cząsek krzemu, stabilizowana kowalentnie związanym hydrofilowym krzemem w HTF zbuforowanym HEPES. Bezpieczny poziom sterylności (SAL) wynosi 10 -3. ISolate został przetestowany i reagował negatywnie na pirogeny, przy użyciu testu króliczych pirogenów., WSKAZÓWKI UŻYCIA Nr katalogowy: 99264 – KRZEMIONKA KOLOIDALNA GOTOWA DO UŻYCIA W DWÓCH STĘŻENIACH (50% i 90%) A. Sugerowane materiały: ISolate • Nr w Katalogu Irvine Scientific: 99264 (6ml, 50ml lub 100 ml zestaw fiolek) Pożywka do przemywania nasienia • Nr w Katalogu Irvine Scientific: 9983 Sterylne, jednorazowe, stożkowe probówki wirówkowe • Nr w Katalogu Irvine Scientific: IS-325 Sterylne pipety Pasteura Wirówka Inkubator, 37 °C B. Przygotowanie roztworu: Nie są konieczne wstępne rozcieńczenia. Każda fiolka z gradientem górnej i dolnej warstwy jest gotowa do użycia. Kontynuować według części PROCEDURA OGÓLNA tej ulotki o leku. Nr katalogowy: 99275 – ROZTWÓR ZAPASOWY Pożywka o gradiencie gęstości 90% do użycia w jednoetapowej procedurze lub do dalszego rozcieńczania. A. Sugerowane materiały: ISolate ROZTWÓR ZAPASOWY •Nr w Katalogu Irvine Scientific: 99275 Zmodyfikowany Ludzki Płyn Jajowodowy •Nr w Katalogu Irvine Scientific: 90126 Pożywka do przemywania nasienia •Nr w Katalogu Irvine Scientific: 9983 Sterylne, jednorazowe, stożkowe probówki wirówkowe •Nr w Katalogu Irvine Scientific: IS-325 Sterylne pipety Pasteura Wirówka Inkubator, 37 °C B. Przygotowanie roztworu: Następujące dwa roztwory są wymagane do przeprowadzenia metody rozdziału nasienia wg gradientu: Górna warstwa i dolna warstwa. 1. Górna warstwa roztworu - 50%: a) Wziąć ROZTWÓR ZAPASOWY (nr katalogowy: 99275) i odpipetować 5,6 ml do sterylnej probówki wirówkowej b) Dodać 4.4 ml do Modified Human Tubal Fluid (nr katalogowy: 90126) c) Zamknąć probówkę i delikatnie odwracać 3-4 razy, aby umożliwić dokładne wymiesza nie. d) Oznakować probówkę jako „GÓRNA WARSTWA” 2. Dolna warstwa roztworu - 90%: a) Wydzielić 10 ml alikwot ROZTWORU ZAPA SOWEGO do sterylnej probówki wirówkowej i zamknąć zatyczką – (nie jest konieczne dalsze rozcieńczanie – ROZTWÓR ZAPASOWY jest 90%) b) Oznakować probówkę jako „DOLNA WARSTWA” 3. Kontynuować według części PROCEDURA OGÓLNA tej ulotki o leku. (UWAGA: 10 ml warstwy górnej i 10 ml warstwy dolnej wystar czy na przygotowanie 5 próbek nasienia). Nr katalogowy: 99306 - ROZTWÓR STĘŻONY Stężona krzemionka koloidalna do dalszego rozcieńczania na gradienty gęstości; sporządzona w izotonicznym buforze i zbliżona do gęstości nierozcieńczonego roztworu Percoll®. STĘŻONY ROZTWÓR ISolate® badany był z gradiantem 50% i 90% zgodnie z informacją podaną w niniejszej ulotce. Każde laboratorium może przygotować swoje własne roztwory o różnych stężeniach, które będą badane pod względem ich skuteczności. A. Sugerowane materiały: Stężony roztwór ISolate® •Nr w Katalogu Irvine Scientific: 99306 Zmodyfikowany Ludzki Płyn Jajowodowy •Nr w Katalogu Irvine Scientific: 90126 Pożywka do przemywania nasienia •Nr w Katalogu Irvine Scientific: 9983 Sterylne, jednorazowe, stożkowe probówki wirówkowe •Nr w Katalogu Irvine Scientific: IS-325 Sterylne pipety Pasteura Wirówka Inkubator, 37 °C B. Przygotowanie roztworu: Następujące dwa roztwory są wymagane do przeprowadzenia metody rozdziału nasienia wg gradientu: Górna warstwa i dolna warstwa. 1. Górna warstwa roztworu - 50%: a) Wziąć ROZTWÓR STĘŻONY (nr katalogowy: 99306) i odpipetować 4.5 ml do sterylnej probówki wirówkowej b) Dodać 5.5 ml do Modified Human Tubal Fluid (nr katalogowy: 90126) c) Zamknąć probówkę i delikatnie odwracać 3-4 azy, aby umożliwić dokładne wymieszanie. d) Oznakować probówkę jako „GÓRNA WARSTWA” 2. Dolna warstwa roztworu - 90%: a) Wziąć ROZTWÓR STĘŻONY (nr katalogowy: 99306) i odpipetować 8.1 ml do sterylnej probówki wirówkowej b) Dodać 1.9 ml do Modified Human Tubal Fluid (nr katalogowy: 90126) c) Zamknąć probówkę i delikatnie odwracać 3-4 razy, aby umożliwić dokładne wymieszanie. d) Oznakować probówkę jako „DOLNA WARSTWA” 3. Kontynuować według części PROCEDURA OGÓLNA tej ulotki o leku. (UWAGA: 10 ml warstwy górnej i 10 ml warstwy dolnej wystarczy na przygotowanie 5 próbek nasienia). Uwaga: Terminy 50% i 90% nie odpowiadają właściwym stężeniom. 50% i 90% są odpowiadającymi stężeniami opartymi na porzedniej nomenklaturze, która definiowała rozcieńczenie 1:9 roztworu Percoll® jako równe z 100% pracującym, roztworem izotonicznym. PROCEDURA OGÓLNA Poniżej podana jest ogólna procedura dla dwustopniowej separacji plemników ruchliwych od nasienia. Objętość i stężenie mogą być zmodyfikowane w celu zgodności z preferencjami laboratorium (tzn.: mini-gradient, nasienie zabezpieczone kriogeniczne, roztwór trzywarstwowy). 1. Podgrzać wszystkie podłoża do temperatury pokojowej lub 37 °C. 2. Przy użyciu sterylnej pipety, przenieść 1,5 – 2,0 ml „DOLNEJ WARSTWY” do sterylnej, jednorazowej, stożkowej probówki wirówkowej. 3. Przy użyciu nowej sterylnej pipety, przenieść jednakową objętość „GÓRNEJ WARSTWY” na wierzch „DOLNEJ WARSTWY”. Jest to wykonane przez dotknięcie końcówką pipety powierzchni „DOLNEJ WARSTWY” z boku probówki. Ostrożnie odebrać „GÓRNĄ WARSTWĘ” poprzez poruszanie spiralnym ruchem końcówki pipety po obwodzie probówki ruchem wznoszącym, podczas podnoszenia się poziomu „GÓRNEJ WARSTWY”. 4. Ostrożnie umieścić 1,5 – 2,0 ml płynnego nasienia na „GÓRNEJ WARSTWIE” przy użyciu nowej sterylnej pipety. 5. Wirować przez 10-20 minut, przy użyciu siły około 200 - 300xg.* Ostrożnie odsłonić pelet poprzez zaaspirowanie „GÓRNEJ ” i „DOLNEJ WARSTWY” lub bezpośrednie zebranie peletu i przeniesienie do nowej sterylnej probówki. *Uwaga: Jakość próbki nasienia należy zbadać i wziąć pod uwagę podczas określania odpowiedniego czasu i szybkości wirowania. Należy je dopasować zgodnie z jakością indywidualnej próbki w celu optymalizacji procedury. 6. Przy użyciu nowej, sterylnej pipety dodać 2,0 – 3,0 ml odpowiedniej pożywki przemywającej, jak np.: Sperm Washing Medium (nr katalogowy IS: 9983) lub Modified HTF (nr katalogowy IS: 90126) z dodatkiem białka. Ponownie zawiesić odebrany pelet. Zwirować (~200xg) przez 8-10 minut i usunąć nadsącz. Powtórzyć ten etap w drugim przepłukiwaniu. Odebrać nadsącz i ponownie zawiesić pelet w odpowiedniej objętości właściwej pożywki. Teraz próbka jest gotowa do analizy. Aby zapoznać się z dodatkowymi szczegółami użycia tych produktów, każde laboratorium powinno odwołać się do jego własnych procedur laboratoryjnych i protokołów, które zostały specjalnie opracowane i zoptymalizowane dla indywidulanego programu medycznego. INSTRUKCJE DOTYCZĄCE PRZECHOWYWANIA I STABILNOŚCI Przechowywać w nieotwartych pojemnikach, w chłodziarce o temperaturze 2º C do 8 ºC. Podgrzać do temperatury otoczenia lub inkubatora (37 °C) przed użyciem. Nie zamrażać ani nie poddawać działaniu wysokich temperatur. ISolate jest stabilny do upłynięcia daty ważności wydrukowanej na pudełku i etykiecie butelki, gdy przechowywany zgodnie z instrukcją. ŚRODKI OSTROŻNOŚCI I OSTRZEŻENIA To urządzenie jest przeznaczone do użycia przez personel wykwalifikowany w dziedzinie procedur obejmujących wskazane zastosowanie, dla którego to urządzenie jest przeznaczone. ISolate będzie nieprzejrzysty. To jest normalne dla tego produktu. Nie używać żadnej fiolki z pożywką, w której widoczne są cząsteczki materii lub zanieczyszczenie (nierównomierne zmętnienie). ISolate należy zamknąć szczelnie w przypadku używania inkubatora CO2, aby uniknąć zmian pH. Ten produkt nie zawiera środków konserwujących, antybiotyków ani dodatków białkowych. Aby uniknąć próblemów z zanieczyszczeniem, posługując się tym produktem należy stosować technikę aseptyczną. Nie używać w przypadku uszkodzenia. Należy wyrzucić lub zwrócić do producenta w celu dokonania wymiany. U WA G A : P r a w o f e d e r a l n e ( S t a n ó w Zjednoczonych) zezwala na sprzedaż tego urządzenia tylko przez lub na polecenie lekarza. DESCRIEREA PRODUSULUI ISolate® este un mediu cu un gradient de concentraţie destinat să separe fracţiunile de spermatozoizi mobili din lichidul seminal Ca şi un sistem gradual pe 2 straturi, reduce contaminarea celulară de exemplu cu spermă moartă, leucocite sau alte reziduuri. Rezultă mostre care conţin predominant spermatozoizi mobile. ISolate este filtrat prin membrană, prelucrat aseptic care conţine particule de silicat în suspensie coloidală, stabilizate prin legături covalente hidrofilice silane solutia tamponată HEPES- HTF . Nivelul de sterilitate asigurat este de (SAL)10-3. ISolate a fost testat cu test pirogen de iepure şi găsit apirogen . INSTRUCŢIUNI DE UTILIZARE Catalog #99264- GATA PENTRU FOLOSIREA S I L I C AT U L U I C O L O I D A L L A D O U Ă CONCENTRAŢII ( 50 % ŞI 90%) A. Materiale propuse: ISolate • Irvine Scientific Catalog #99264 (kit fiolă de 6mL, 50mL sau 100 mL ) Sperm Washing Medium • Irvine Scientific Catalog #9983 Tuburi conice sterile de centrifugă de unică folosinţă • Irvine Scientific Catalog #IS-325 Pipetă sterilă Pasteur Centrifugă Incubator, 37ºC B. Prepararea Gradientului: Nu este necesară diluarea preliminară. Fiecare fiolă cu gradientul stratului de sus şi jos este gata pentru folosinţă. Continuaţi cu PROCEDURI GENERALE, paragraful utilizarea produsului. Catalog # 99275 STOCK SOLUTION Se utilizează 90% din densitatea gradientului de mediu în prima treaptă sau pentru diluări ulterioare. A. Materiale propuse: ISolate STOCK SOLUTION stoc de soluţie ISolate •Irvine Scientific Catalog #99275 Lichid uman tubal modificat •Irvine Scientific Catalog #90126 Sperm Washing Medium •Irvine Scientific Catalog #9983 Tuburi conice sterile de centrifugă de unică folosinţă •Irvine Scientific Catalog #IS-325 Pipetă sterilă Pasteur Centrifugă Incubator, 37ºC B. Prepararea Gradientului: Două soluţii sunt necesare pentru a executa procedeul de separare a spermatozoizilor Stratul de sus şi stratul de jos. Stratul de sus şi stratul de jos. 1. Soluţie stratul de sus -50%. a) Luaţi STOCK SOLUTION (Catalog #99275) şi pipaaţi de 5.6 ml într-un tub de centrifugă sterilă b) Adăugaţi 4.4 ml de Modified Human Tubal Fluid (Catalog# 90126) c) Puneţi capacul tubului şi prin răsturnare efectuată cu grijă de 3-4 ori, veţi realiza amestecarea completă. d) Etichetaţi tubul ca şi “ STRAT DE SUS” 2. Soluţie stratul de jos -90%. a) Alicot în 10 ml de soluţie STOCK într-un tub steril de centrifugă cu capac - (nu este necesară diluţia ulterioară - soluţia STOCK are concentraţia de 90%) b) Etichetaţi tubul “ STRATUL DE JOS” 3. Continuaţi la procedurile generale din instrucţiunile de folosire. (NOTĂ: 10 ml din stratul de sus şi 10 ml din stratul de jos, va prelucra aproximativ 5 mostre de spermă). Catalog # 99306 CONCENTRATE Concentratul de silicat coloidal pentru mai multă diluare a densităţii gradientului ; formulat în tamponare isotonică şi aproximează densitatea nediluată al Percoll®-ului. ISolate® CONCENTRATE a fost evaluat conform concentraţiei de 50% şi 90%, înscrisă pe pachet gradient de la 50% până la 90%). Fiecare laborator îşi poate alege să facă gradienţii la diferite concentraţii, care ar trebui evaluat pentru eficacitate. A. Materiale propuse: ISolate® Concentrat •Irvine Scientific Catalog #99306 Lichid uman tubal modificat •Irvine Scientific Catalog #90126 Sperm Washing Medium •Irvine Scientific Catalog #9983 Tuburi conice sterile de centrifugă de unică folosinţă •Irvine Scientific Catalog #IS-325 Pipetă sterilă Pasteur Centrifugă Incubator, 37ºC B. Prepararea Gradientului: Două soluţii sunt necesare pentru a executa procedeul de separare a spermatozoizilor Stratul de sus şi stratul de jos. 1. Soluţie stratul de sus -50%. a) Luaţi CONCENTRATE (Catalog #99306) şi pipete de 4.5 ml într-un tub steril de centrifugă b) Adăugaţi 5.5 ml de Modified Human Tubal Fluid (Catalog# 90126) c) Puneţi capacul tubului şi prin răsturnare efectuată cu grijă de 3-4 ori, veţi realiza amestecarea completă. d) Etichetaţi tubul ca şi “ STRAT DE SUS” 2. Soluţie stratul de jos -90%. a) Luaţi CONCENTRATE (Catalog #99306) şi pipete de 8.1 ml într-un tub steril de centrifugă b) Adăugaţi 1.9 ml de Modified Human Tubal Fluid (Catalog# 90126) c) Puneţi capacul tubului şi prin răsturnare efectuată cu grijă de 3-4 ori, veţi realiza amestecarea completă. d) Etichetaţi tubul ca şi “ STRAT DE JOS” 3. Continuaţi la procedurile generale din instrucţiunile de folosire. (NOTĂ: 10 ml din stratul de sus şi 10 ml din stratul de jos, va prelucra aproximativ 5 mostre de spermă). Notă: Termeni de 50% şi 90% nu reprezintă concentraţia actuală. Cele de 50% şi 90% sunt concentraţii bazate pe nomenclatura anterioară care defineşte o diluţie de 1:9 de Percoll® , identică în totalitate cu soluţia izotonică de lucru. PROCEDURI GENERALE Urmează a doua treaptă de procedură generală şi anume de separare a spermatozoidului mobil din spermă. Volumul şi concentraţia pot fi modificate în funcţie de preferinţele fiecărui laborator. (ex: mini-gradient, crioconservarea spermei, gradient în trei straturi.) 1. Aduceţi toţi componenţii mediului la temperatura camerei sau 37°C. 2. Folosind pipetă sterilă, transferaţi 1.5 - 2.0 ml din “STRATUL DE JOS” într-un tub steril de centrifugă conică de unică folosinţă. 3. Cu ajutorul unei pipete noi sterile, transferaţi un volum egal cu cel situat între cele două semne care delimitează “stratul de sus” şi “stratul de jos”. Aceasta este făcută prin contactul cu suprafaţei “STRATULUI JOS” de la marginea tubului cu vârful pipetei. Preparaţi cu grijă “STRATUL DE SUS” prin învârtirea spiralată a vârfului pipetei în sus, în jurul circumferinţei tubului aşa cum “STRATUL DE SUS” se ridică. 4. Cu ajutorul unei pipete sterile puneţi cu blândeţe 1,5-2 ml de spermă lichefiată până la “nivelul de sus” a tubului. EESTI SVENSKA 5. Centrifugaţi timp de 10-20 de minute, la aproximativ 200- 300 xg.* Granulele vor fi expuse cu grijă prin aspirarea “ STRATULUI DE SUS” şi a “STRATULUI DE JOS” sau prin scoaterea directă a acestora şi mutarea lor într-un tub steril de centrifugă. *Notă: Calitatea mostrei de spermatozoids trebuie să fie evaluată şi luată în considerare când se determină timpul şi viteza proprie pentru centrifugare. Acestea trebuie ajustate în concordanţă cu calitatea mostrei individuale în vederea optimizării procesului de prelucrare. 6. Folosind o pipetă sterilă nouă, adăugaţi 2.0 - 3.0 ml mediu de spălare utilizând Sperm Washing Medium (IS Catalog# 9983) sau Modified HTF (IS Catalog #90126) cu adaos de proteine. Resuspendaţi granulele izolate. Centrifugaţi (~200xg) pentru 8-10 minute şi îndepărtaţi supernatantul. Repetaţi această treaptă pentru a doua spălare. Îndepărtaţi supernatantul şi resuspendaţi granula folosind un volum potrivit de mediu adecvat. Mostra acum este gata pentru analiză. Pentru detalii suplimentare privind folosirea acestui produs, fiecare laborator trebuie să consulte protocolul pentru procedurile utilizate în laborator care sunt specifice şi optimizate pentru programul medical individual. INSTRUCŢIUNI PENTRU PĂSTRARE ŞI STABILITATE Păstraţi sticlele sau containerele nedeschise refrigerate la 2º to 8ºC. Încălziţi la temperatura mediului ambiant sau la incubator la temperatură (37°C) înainte de a utilliza. Nu congelaţi sau expuneţi la temperaturi mari. ISolate este stabil până la data expirării înscrise pe eticheta de pe cutie dacă sunt respectate condiţiile de depozitare. PRECAUŢII ŞI AVERTISMENTE Acest dispozitiv este destinat să fie utilizat de personalul specializat în proceduri care includ aplicarea indicată pentru care a fost creat dispozitivul. ISolate va apărea opac. Este normal pentru acest produs. Nu utilizaţi fiole cu mediu care prezintă reziduuri de particule sau semne de contaminare (înceţoşare neuniformă) ISolate ar trebui să fie închis ermetic atunci când se foloseşte în incubator cu CO2 pentru a evita schimbări ale nivelurilor de pH. Acest produs nu conţine conservanţi, antibiotice, sau suplemente de proteină. Pentru a evita probleme de contaminare, mânuiţi folosind tehnici aseptice. Nu se utilizează în caz de deteriorare. Vă rugăm aruncaţi sau înapoiaţi producătorului pentru a fi înlocuit. AVERTISMENT: Legile Federale în (SUA) nu permit vânzarea acestui aparat numai la comanda unui medic sau pe bază de comanadă. PRODUKTBESKRIVNING ISolate® är ett densitetsgradientmedium framtaget för att separera den rörliga spermiefraktionen från sädesvätska. Detta gradientsystem med två skikt minskar effektivt förekomsten av cellulära kontaminanter, såsom döda spermier, vita blodkroppar och annat skräp. Det resulterande provet innehåller huvudsakligen rörliga spermier. ISolate är en membranfiltrerad, aseptiskt behandlad kolloidal suspension av kiselpartiklar stabiliserade med kovalent bundet hydrofilt silan i HEPES-buffrad HTF. Sterilitetsnivån (SAL, sterility assurance level) är 10 -3. ISolate har testats med pyrogentest på kanin och befunnits negativ för pyrogener. BRUKSANVISNING Katalognr 99264 - KOLLOIDAL KISELDIOXID, FÄRDIG ATT ANVÄNDA, I TVÅ KONCENTRATIONER (50 % och 90 %) A. Rekommenderat material: ISolate • Irvine Scientific katalognr 99264 (sats med 6 mL, 50mL eller 100 mL ampuller) Sperm Washing Medium • Irvine Scientific katalognr 9983 Sterila, konformade centrifugrör för engångsbruk • Irvine Scientific katalognr IS-325 Pasteurpipetter, sterila Centrifug Inkubator, 37 °C B. Gradientberedning: Inga förspädningar krävs. Varje ampull med topp- och bottengradient är färdig att användas. Fortsätt till avsnittet ALLMÄNT FÖRFARANDE i produktens bipacksedel. Katalognr 99275 - STOCK SOLUTION 90 % densitetsgradient-medium för användning i en procedur i ett steg eller för ytterligare spädning. A. Rekommenderat material: ISolate Stock Solution • Irvine Scientific katalognr 99275 Modified Human Tubal Fluid • Irvine Scientific katalognr 90126 Sperm Washing Medium • Irvine Scientific katalognr 9983 Sterila, konformade centrifugrör för engångsbruk • Irvine Scientific katalognr IS-325 Pasteurpipetter, sterila Centrifug Inkubator, 37 °C B. Gradientberedning: Två lösningar krävs för att utföra spermieseparation med gradientmetoden: En toppskikts- och en bottenskiktslösning. 1. Toppskiktslösning - 50 %: a) Ta STOCK SOLUTION (katalognr 99275) och pipettera 5,6 mL i ett sterilt centrifugrör b) Tillsätt 4,4 mL Modified Human Tubal Fluid (katalognr 90126) c) Förslut röret och vänd det varligt 3-4 gånger så att innehållet blandas fullständigt d) Märk röret med “TOPPSKIKT” 2. Bottenskiktslösning - 90 %: a) Häll en alikvot på 10 mL av Stock Solution i ett sterilt centrifugrör och förslut - (ingen ytterligare spädning krävs - Stock Solution är på 90 %) b) Märk röret med “BOTTENSKIKT” 3. Fortsätt till avsnittet ALLMÄNT FÖRFARANDE i produktens bipacksedel. (OBS! 10 mL toppskikt och 10 mL bottenskikt räcker till cirka 5 spermaprover). Katalognr 99306 - CONCENTRATE Kolloidalt kisel-koncentrat för ytterligare spädning till densitetsgradienter; i isoton buffert och med ungefär samma densitet som ospädd Percoll®. ISolate® CONCENTRATE har utvärderats enligt denna bipacksedel vid gradienterna 50 % och 90 %. Varje laboratorium kan välja att framställa gradienter i andra koncentrationer, som bör utvärderas för effektivitet. A. Rekommenderat material: ISolate® Concentrate • Irvine Scientific katalognr 99306 Modified Human Tubal Fluid • Irvine Scientific katalognr 90126 Sperm Washing Medium • Irvine Scientific katalognr 9983 Sterila, konformade centrifugrör för engångsbruk • Irvine Scientific katalognr IS-325 Pasteurpipetter, sterila Centrifug Inkubator, 37 °C B. Gradientberedning: Två lösningar krävs för att utföra spermieseparation med gradientmetoden: En toppskikts- och en bottenskiktslösning. 1. Toppskiktslösning - 50 %: a) Ta CONCENTRATE (katalognr 99306) och pipettera 4,5 mL i ett sterilt centrifugrör b) Tillsätt 5,5 mL Modified Human Tubal Fluid (katalognr 90126) c) Förslut röret och vänd det varligt 3-4 gånger så att innehållet blandas fullständigt d) Märk röret med “TOPPSKIKT” 2. Bottenskiktslösning - 90 %: a) Ta CONCENTRATE (katalognr 99306) och pipettera 8,1 mL i ett sterilt centrifugrör b) Tillsätt 1,9 mL Modified Human Tubal Fluid (katalognr 90126) c) Förslut röret och vänd det varligt 3-4 gånger så att innehållet blandas fullständigt d) Märk röret med “BOTTENSKIKT” 3. Fortsätt till avsnittet ALLMÄNT FÖRFARANDE i produktens bipacksedel. Obs! Termerna 50 % och 90 % anger inte en faktisk koncentration. 50 % och 90 % är relativa koncentrationer baserade på tidigare nomenklatur som definierade en 1:9-spädning av Percoll ® såsom likvärdig med en 100 % fungerande, isoton lösning. ALLMÄNT FÖRFARANDE Följande är en generell procedur för en tvåstegsgradientseparation av rörliga spermier från sädesvätska. Volymen och koncentrationen kan modifieras för att passa det enskilda laboratoriets preferenser (dvs. minigradient, kryopreserverad sperma, treskiktsgradient). 1. Låt alla mediekomponenter uppnå rumstemperatur eller 37 °C. 2. Använd en steril pipett och överför 1,5 - 2,0 mL av “BOTTENSKIKTET” till ett sterilt, konformat centrifugrör för engångsbruk. 3. Använd en ny steril pipett och överför en lika stor volym “TOPPSKIKT” ovanpå “BOTTENSKIKTET” . Detta görs genom att vidröra ytan på “BOTTENSKIKTET” vid röret sida med pipettens spets. Dispensera omsorgsfullt “TOPPSKIKTET” genom att vrida pipettspetsen i spiral runt rörets omkrets i en uppåtriktad rörelse efterhand som “TOPPSKIKT”-nivån ökar. 4. Placera försiktigt 1,5 - 2,0 mL likvifierad sperma på “TOPPSKIKTET” med användning av en ny, steril pipett. 5. Centrifugera i 10 - 20 minuter vid cirka 200 - 300 x g.* Exponera pelleten omsorgsfullt genom att antingen suga av “TOPP-” och “BOTTENSKIKTEN”, eller genom att ta upp pelleten och föra över den till ett nytt, sterilt centrifugrör. *Obs! Spermaprovets kvalitet skall bedömas och tas i beaktande vid bestämning av korrekt centrifugeringshastighet och -tid. Dessa bör justeras i enlighet med det enskilda provets kvalitet, för optimering av förfarandet. 6. Använd en ny steril pipett och tillsätt 2,0 - 3,0 mL lämpligt tvättmedium såsom Sperm Washing Medium (IS katalognr 9983) eller Modified HTF (IS katalognr 90126) med proteinsupplement. Resuspendera den isolerade pelleten. Centrifugera (~200xg) i 8 - 10 minuter och avlägsna supernatanten. Upprepa detta steg för en andra tvätt. Kassera supernatanten och resuspendera pelleten med användning av en adekvat volym lämpligt medium. Provet är nu klart för analys. För ytterligare information om användning av dessa produkter bör varje laboratorium konsultera sina egna laboratorieförfaranden och -protokoll som utvecklats och optimerats särskilt för de egna medicinska programmen. FÖRVARING OCH HÅLLBARHET Oöppnade behållare skall förvaras i kylskåp vid 2 - 8 ºC. Värm till omgivnings- eller inkubator(37 °C)-temperatur före användning. Får ej frysas eller exponeras för höga temperaturer. ISolate är hållbart fram till det utgångsdatum som anges på kartongen och flasketiketterna, vid förvaring enligt anvisningarna. FÖRSIKTIGHETSÅTGÄRDER OCH VARNINGAR Denna produkt är avsedd att användas av personal med utbildning i procedurer vilka inkluderar den indicerade tillämpning för vilken produkten är avsedd. ISolate är ogenomskinligt. Detta är normalt för denna produkt. Använd inga ampuller med medium som innehåller partiklar eller företer tecken på kontamination (ojämn grumlighet). ISolate skall vara ordentligt förslutet vid användning i en CO2-inkubator så att pH-förändringar undviks. Denna produkt innehåller inga konserveringsmedel, antibiotika eller proteinsupplement. Använd aseptisk teknik vid hantering, så att kontamination undviks. Om produkten är skadad får den inte användas. Kassera den eller returnera den till tillverkaren för utbyte. OBS! Enligt federal (USA) lag får denna produkt endast säljas av eller på ordination av läkare. TOOTE KIRJELDUS ISolate® on tihedusgradiendi lahus, mis on koostatud liikuva sperma eraldamiseks seemnevedelikust. Kahekihilise gradiendi süsteem vähendab tõhusalt rakuliste saasteainete, sh surnud sperma, valgevererakkude ja mitmesuguste jäätmete hulka. Sellest saadud proov sisaldab peamiselt liikuvaid spermatosoide. ISolate on HEPESiga puhverdatud HTFis membraanfiltreeritud ja aseptilised töödeldud räniosakeste kolloiodne suspensioon kovalentselt seotud hüdrofiilse silaaniga. Garanteeritud steriilsustase (SAL) on 10 -3. Küüliku pürogeenitesti tegemisega on leitud, et ISolate on pürogeenide suhtes negatiivne. KASUTUSJUHEND Kataloogi nr 99264 - KASUTAMISVALMIS KOLLOIDNE RÄNIMULD KAHES KONTSENTRATSIOONIS (50% ja 90%) A. Soovitatavad materjalid: ISolate • Irvine Scientific katalooginr 99264 (6mL, 50mL või 100mL viaaliga komplekt) Sperm Washing Medium • Irvine Scientific katalooginr 9983 Steriilsed, ühekordsed koonilised tsentrifuugi tuubid • Irvine Scientific katalooginr IS-325 Pasteuri pipetid, steriilsed Tsentrifuug Inkubaator, 37°C B. Gradiendi valmistamine: Eelnevat lahjendamist ei ole vaja. Iga ülemise ja alumise gradiendi kihti sisaldav viaal on kasutamiseks valmis. Jätkake toote pakendi infolehel toodud ÜLDPROTSEDUURIDEGA. Kataloogi nr 99275 - STOCK SOLUTION 90%-ne tihedusgradiendi sööde kasutamiseks üheetapilises protseduuris või edasiseks lahjendamiseks. A. Soovitatavad materjalid: ISolate STOCK SOLUTION •Irvine Scientific katalooginr 99275 Modified Human Tubal Fluid •Irvine Scientific katalooginr 90126 Sperm Washing Medium •Irvine Scientific katalooginr 9983 Steriilsed, ühekordsed koonilised tsentrifuugi tuubid •Irvine Scientific katalooginr IS-325 Pasteuri pipetid, steriilsed Tsentrifuug Inkubaator, 37°C B. Gradiendi valmistamine: Sperma eraldamise gradientmeetodi jaoks on vaja kaks lahust: ülemine kiht ja alumine kiht. Ülemine kiht ja alumine kiht. 1. Ülemise kihi lahus - 50%: a) Võtke STOCK SOLUTION (kataloogi nr 99275) ja pipettige 5,6 mL steriilsesse tsentrifuugi tuubi. b) Lisage 4.4 mL lahust Modified Human Tubal Fluid (kataloogi nr 90126) c) Katke katsut korgiga ja keerake 3...4 korda põhi õrnalt üles-alla, et sisu täielikult seguneks d) Märkige katsutile “ÜLEMINE KIHT” 2. Alumise kihi lahus - 90%: a) Alikvootige 10 mL STOCK SOLUTIONit steriilsesse tsentrifuugi tuubi ja korgistage - (edasine lahjendamine ei ole vajalik - STOCK SOLUTION on 90%) b) Märkige katsutile “ALUMINE KIHT” 3. Jätkake toote pakendi infolehel toodud ÜLDPROTSEDUURIDEGA. (MÄRKUS: Kogusega 10 mL ülemist kihti ja 10 mL alumist kihti on võimalik töödelda umbes 5 eemnevedeliku proovi.) Kataloogi nr 99306 - CONCENTRATE Kolloidse ränimulla kontsentraat edasiseks lahjendamiseks tihedusgradientideks; valmistatud isotoonilises puhvris ja tiheduse poolest on lähedane lahustamata Percoll®-ile. ISolate® analüüsiti vastavalt pakendi infolehes toodule ning leiti gradiendid 50% ja 90%. Iga labor võib oma äranägemisel valmistada erinevates kontsentratsioonides gradiente, mille tõhusust tuleb hinnata. A. Soovitatavad materjalid: ISolate® kontsentraat •Irvine Scientific katalooginr 99306 Modified Human Tubal Fluid •Irvine Scientific katalooginr 90126 Sperm Washing Medium •Irvine Scientific katalooginr 9983 Steriilsed, ühekordsed koonilised tsentrifuugi tuubid •Irvine Scientific katalooginr IS-325 Pasteuri pipetid, steriilsed Tsentrifuug Inkubaator, 37°C B. Gradiendi valmistamine: Sperma eraldamise gradientmeetodi jaoks on vaja kaks lahust: ülemine kiht ja alumine kiht. 1. Ülemise kihi lahus - 50%: a) Võtke CONCENTRATE (kataloogi nr 99306) ja pipettige 4.5 mL steriilsesse tsentrifuugi tuubi. b) Lisage 5.5 mL lahust Modified Human Tubal Fluid (kataloogi nr 90126) c) Katke katsut korgiga ja keerake 3...4 korda põhi õrnalt üles-alla, et sisu täielikult seguneks d) Märkige katsutile “ÜLEMINE KIHT” 2. Alumise kihi lahus - 90%: a) Võtke CONCENTRATE (kataloogi nr 99306) ja pipettige 8.1 mL steriilsesse tsentrifuugi tuubi. b) Lisage 1.9 mL lahust Modified Human Tubal Fluid (kataloogi nr 90126) c) Katke katsut korgiga ja keerake 3...4 korda põhi õrnalt üles-alla, et sisu täielikult seguneks d) Märkige katsutile “ALUMINE KIHT” 3. Jätkake toote pakendi infolehel toodud ÜLDPROTSEDUURIDEGA. Märkus: Nimetusele lisatud 50% ja 90% ei kujuta endast tegelikku kontsentratsiooni. 50% ja 90% kujutavad endast relatiivseid kontsentratsioone, mis põhinevad varasemal nomenklatuuril, mille järgi Percoll’i® 1:9 lahus võrdus 100% isotoonilise töölahusega. ÜLDINE PROTSEDUUR Järgnevalt on toodud liikuva sperma seemnevedelikust gradiendiga eraldamise kahe-etapiline üldprotseduur Mahtu ja kontsentratsiooni võib muuta vastavalt labori eelistustele (st minigradient, külmutatult säilitatud seemnevedelik, kolmekihiline gradient). 1. Tooge kõik söötme komponendid toatemperatuurile, st 37°C. 2. Kasutades steriilset pipetti, viige 1,5...2,0 mL ALUMIST KIHTI steriilsesse, ühekordsesse, koonilisse tsentrifuugituubi. 3. Kasutades uut steriilset pipetti, viige ALUMISE KIHI peale võrdne kogus ÜLEMIST KIHTI. Selleks viige pipeti ots katsuti seinal vastu ALUMISE KIHI pinda. Ettevaatlikult dispenseerige ÜLEMINE KIHT pipeti otsaga spiraalselt mööda katsuti sisemist seina ülespoole tõmmates ÜLEMISE KIHI pinna tõustes. 4. Õ r n a l t a s e t a g e 1 , 5 . . . 2 , 0 m L v e d e l d a t u d seemnevedelikku ÜLEMISSE KIHTI, kasutades selleks uut steriilset pipetti. 5. Tsentrifuugige umbes 200...300 g juures 10...20 minutit.* Ettevaatlikult tooge välja settetombuke, kas ÜLEMISE ja ALUMISE KIHI pealt ära aspireerimise teel või settetombukese otseselt välja võtmise ja uude steriilsesse tsentrifuugi tuubi sisse kandmise teel. *Märkus: Tsentrifuugimiskiiruse ja -aja määramisel tuleb hinnata ja arvesse võtta spermaproovi kvaliteeti. Protseduuri optimeerimiseks tuleb kiirust ja aega korrigeerida vastavalt proovi kvaliteedite. 6. Kasutades uut steriilset pipetti, lisage 2,0...3,0 mL sobivat pesemisvahendit nagu Sperm Washing Medium (IS kataloogi nr 9983) või Modified HTF (IS kataloogi nr 90126) koos proteiinilisandiga. Resuspendeerige isoleeritud settetombuke. Tsentrifuugige ~200 g juures 8...10 minutit ja eemaldage supernatant. Korrake seda sammu teistkordseks pesemiseks. Visake supernatant ära ja resuspendeerige settetombuke, kasutades selleks sobiva söötme vastavat kogust. Proov on nüüd analüüsimiseks valmis. Toodete kasutamise üksikasjaliku informatsiooni vajamise korral peab iga labor kasutama oma labori protseduure ja protokolle, mis on välja arendatud ja optimeeritud konkreetselt teie oma meditsiiniprogrammi jaoks. SÄILITAMISJUHISED JA STABIILSUS Hoidke avamata anumad külmkapis temperatuuril 2 º... 8 ºC. Enne kasutamist soojendage ümbritseva õhu või inkubaatori temperatuurile (37°C). Ärge külmutage ega jätke kõrgete temperatuuride kätte. ISolate on stabiilne karbi ja pudeli etiketile märgitud tähtpäevani, kui seda on säilitatud juhendis ettenähtud tingimustes. ETTEVAATUSABINÕUD JA HOIATUSED See seade on ette nähtud kasutamiseks tervishoiutöötajatele, kes on saanud vastava koolituse, kaasa arvatud selle seadme kavandatud kasutuse alal. ISolate on läbipaistmatu. See on selle toote puhul normaalne. Ärge kasutage söödet viaalist, milles on märgata osakesi või saastumist (st ebaühtlane hägusus). ISolate peab CO2 inkubaatoris kasutamise korral olema tihedalt korgistatud vältimaks muutusi pH-s. Toode ei sisalda säilitusaineid, antibiootikume ega proteiinilisandeid. Saastamise vältimiseks käsitsege vahendeid aseptilist tehnikat kasutades. Kahjustuste ilmnemise korral mitte kasutada. Palun visake ära või tagastage tootjale, kes selle asendab. ETTEVAATUST: Riiklik (USA) seadusandlus piirab seadme müüki ning see võib toimuda üksnes arsti poolt või arsti korraldusel. ISolate® Catalog No. 99264 12 x 6 mL, 2 x 50 mL, 2 x 100 mL Ready to Use Density Gradient Medium at Two Concentrations Catalog No. 99275 Stock Solution 100 mL Catalog No. 99306 Concentrate 100 mL REFERENCES Adaniya GK, Jackson KV: Comparison of Percoll® and ISolate® in the Preparation of Semen for use in Assisted Reproductive Technologies. 53rd Annual Meeting of the American Society for Reproductive Medicine, Cincinnati, Ohio; 0-113, 1997. Symbols: Catalog Number Lot Number Tarchala SM, Fahy MM, Hauserman HM, Kallmann K, Volentine K, Radwanska E, Binor Z, Molo MW, Rawlins RG: ISolate® As a New Method of Sperm Separation. 53rd Annual Meeting of the American Society for Reproductive Medicine, Cincinnati, Ohio; P-116, 1998. Miller, KF, Fry KL, Arciaga RL, Falcone T: Semen preparation for in-vitro fertilization using ISolate® results in sperm recovery, fertilization and pregnancy outcomes that are indistinguishable from those obtained with Percoll®. 14th Embryology, Goteborg, Sweden; P-116, 1998. Tarchala SM, Volentine KK, Rawlins RG: A comparison of sperm processing using ISolate® and Pure Sperm™. 14th Annual Meeting of the European Society of Human Reproduction and Embryology, Goteborg, Sweden; R-041, 1998. Sterilized using aseptic processing techniques (filtration) Expiration: Year - Month - Day Caution:See instructions for use European Representative MPIE Schutweg 13A 5145 NP Waalwijk, The Netherlands See instructions for use. Storage Temperature CE Mark 0050 0050 ISolate is a Registered Trademark of Irvine Scientific ® Percoll ® is a Registered Trademark of Pharmacia Biotech, AB Sweden MPIE Schutweg 13a 5145 NP Waalwijk, The Netherlands ISolate is een membraangefilterde, op aseptische wijze bewerkte colloïdale suspensie van silicadeeltjes die zijn gestabiliseerd met covalent gebonden, hydrofiel silaan in HEPES-gebufferde HTF. Het Sterility Assurance Level (SAL) is 10-3. ISolate is negatief gebleken voor pyrogenen bij een konijnpyrogeentest. GEBRUIKSAANWIJZING C a t a l o g u s n r. 9 9 2 6 4 - K A N T- E N KLAAR COLLOÏDAAL SILICA IN TWEE CONCENTRATIES (50% en 90%) A.Voorgestelde materialen: ISolate • Irvine Scientific catalogusnr. 99264 (6ml, 50ml of 100 ml ampulkit) Sperm Washing Medium • Irvine Scientific catalogusnr. 9983 Steriele, conische wegwerpcentrifugebuisjes • Irvine Scientific catalogusnr. IS-325 Pasteurpipetten, steriel Centrifugeren Incubator, 37 °C B. Gradiëntpreparatie: Geen voorafgaande verdunningen noodzakelijk. Elke ampul van bovenste en onderste laaggradiënt is klaar voor gebruik. Ga door naar het gedeelte ALGEMENE PROCEDURE in de productbijsluiter. Catalogusnr. 99275 - STOCK SOLUTION 90% dichtheidsgradiëntmedium voor gebruik in een enkelvoudige procedure of voor verdere verdunning. A.Voorgestelde materialen: ISolate STOCK SOLUTION •Irvine Scientific catalogusnr. 99275 Modified Human Tubal Fluid •Irvine Scientific catalogusnr. 90126 Sperm Washing Medium •Irvine Scientific catalogusnr. 9983 Steriele, conische wegwerpcentrifugebuisjes •Irvine Scientific catalogusnr. IS-325 Pasteurpipetten, steriel Centrifugeren Incubator, 37 °C 5. Centrifugeer gedurende 10-20 minuten bij ca. 200 - 300xg.* Stel de pellet voorzichtig bloot door de “BOVENSTE” en “ONDERSTE LAGEN” te aspireren of de pellet direct te verwijderen en over te brengen naar een nieuw steriel centrifugebuisje. *Opm.: de kwaliteit van het spermamonster dient te worden beoordeeld en in aanmerking te worden genomen bij het bepalen van de juiste centrifugeersnelheid en -tijd. Deze moeten worden aangepast aan de individuele monsterkwaliteit zodat een optimale procedure wordt verkregen. 6. Voeg met een nieuw steriel pipet 2,0 - 3,0 ml van een geschikt wasmiddel zoals Sperm Washing Medium (IS catalogusnr. 9983) of Modified HTF (IS catalogusnr. 90126) met eiwitsupplement toe. Resuspendeer de geïsoleerde pellet. Centrifugeer (~200xg) gedurende 8 -10 minuten en verwijder het supernatant. Herhaal deze stap voor een tweede wasbeurt. Voer het supernatant af en resuspendeer de pellet met een geschikt volume van het juiste medium. Het monster is nu klaar voor analyse. Voor aanvullende informatie over het gebruik van deze producten, dient elk laboratorium haar eigen laboratoriumprocedures en -protocollen te raadplegen die speciaal zijn ontwikkeld en geoptimaliseerd voor uw individueel medisch programma. BEWAARINSTRUCTIES EN STABILITEIT Bewaar de ongeopende containers gekoeld bij 2 °C tot 8 °C. Vóór gebruik opwarmen tot omgevingstemperatuur of incubatortemperatuur (37 °C). Niet invriezen of blootstellen aan hoge temperaturen. VOORZORGSMAATREGELEN EN WAARSCHUWINGEN Dit hulpmiddel is bedoeld voor gebruik door personeel dat opgeleid is voor procedures inclusief de aangegeven toepassing waarvoor het hulpmiddel is bedoeld. Catalogusnr. 99306 - CONCENTRATE Colloïdaal silicaconcentraat voor verdere verdunning in dichtheidsgradiënten; geformuleerd in een isotone buffer en benadert de dichtheid van onverdund Percoll®. ISolate® CONCENTRATE werd beoordeeld volgens deze bijsluiter bij een gradiënt van 50% en 90%. Elke laboratorium kan kiezen voor gradiënten bij verschillende concentraties die op effectiviteit dienen te worden gecontroleerd. A.Voorgestelde materialen: ISolate® concentraat •Irvine Scientific catalogusnr. 99306 Modified Human Tubal Fluid •Irvine Scientific catalogusnr. 90126 Sperm Washing Medium •Irvine Scientific catalogusnr. 9983 Steriele, conische wegwerpcentrifugebuisjes •Irvine Scientific catalogusnr. IS-325 Pasteurpipetten, steriel Centrifugeren Incubator, 37 °C B. Gradiëntpreparatie: Er zijn twee oplossingen nodig voor de gradiëntspermascheidingsmethode: een bovenste laag en een onderste laag. 1. Oplossing bovenste laag - 50%: a) Neem het CONCENTRATE (catalogusnr. 99306) en pipetteer 4,5 ml in een steriel centrifugebuisje b) Voeg 5,5 ml Modified Human Tubal Fluid (catalogusnr. 90126) toe c) Draai de dop op het buisje en keer deze voorzichtig 3-4 keer om zodat de inhoud goed wordt gemengd b) Plak een sticker met de tekst “BOVENSTE LAAG” op het buisje 2. Oplossing onderste laag - 90%: a) Neem het CONCENTRATE (catalogusnr. 99306) en pipetteer 8,1 ml in een steriel centrifugebuisje b) Voeg 1,9 ml Modified Human Tubal Fluid (catalogusnr. 90126) toe c) Draai de dop op het buisje en keer deze voorzichtig 3-4 keer om zodat de inhoud goed wordt gemengd b) Plak een sticker met de tekst “ONDERSTE LAAG” op het buisje 3. Ga door naar het gedeelte ALGEMENE PROCEDURE in de productbijsluiter. (OPM.: 10 ml bovenste laag en 10 ml onderste laag zijn voldoende voor de bewerking van ca. 5 semen monsters.) Opm.: de aanduidingen 50% en 90% vertegenwoordigen geen werkelijke concentraties. De 50% en 90% zijn relatieve concentraties gebaseerd op de vorige nomenclatuur waarbij een 1:9 oplossing van Percoll® gelijk staat aan een 100% werkende, isotone oplossing ALGEMENE PROCEDURE Hieronder wordt een algemene procedure beschreven voor een tweestaps gradiëntscheiding van motiel sperma en semen. Het volume en de concentratie kunnen worden aangepast aan de voorkeur van elk laboratorium (bijv. minigradiënt, cryopreservatiesemen, drielaagse gradiënt). op 2. Breng met een steriel pipet 1,5 - 2,0 ml van de “ONDERSTE LAAG” over naar een steriel, conisch wegwerpcentrifugebuisje. 2511 Daimler Street, Santa Ana, California 92705-5588 Telephone: 1 949 261 7800 • 1 800 437 5706 Fax: 1 949 261 6522 • www.irvinesci.com PN 40558 Rev.10 4. Plaats 1,5 - 2,0 ml van het vloeibaar geworden semen voorzichtig op de “BOVENSTE LAAG” met behulp van een nieuw steriel pipet. Als ISolate zoals voorgeschreven wordt bewaard, is het stabiel tot aan de houdbaarheidsdatum die op de sticker van de doos en fles is vermeld. B. Gradiëntpreparatie: Er zijn twee oplossingen nodig voor de gradiëntspermascheidingsmethode: een bovenste laag en een onderste laag. 1. Oplossing bovenste laag - 50%: a) Neem de STOCK SOLUTION (catalogusnr. 99275) en pipetteer 5,6 ml in een steriel centrifugebuisje b) Voeg 4.4 ml Modified Human Tubal Fluid (catalogusnr. 90126) toe c) Draai de dop op het buisje en keer deze voorzichtig 3-4 keer om zodat de inhoud goed wordt gemengd b) Plak een sticker met de tekst “BOVENSTE LAAG” op het buisje 2. Oplossing onderste laag - 90%: a) Vul een steriel centrifugebuisje met 10 ml van de STOCK SOLUTION en sluit dit af met een dop - (Geen verdere verdunningen noodzakelijk - STOCK SOLUTION is 90%) b) Plak een sticker met de tekst “ONDERSTE LAAG” op het buisje 3. Ga door naar het gedeelte ALGEMENE PROCE DURE in de productbijsluiter. (OPM.: 10 ml bovenste laag en 10 ml onderste laag zijn voldoende voor de bewerking van ca. 5 semenmonsters.) 1. B r e n g a l l e m e d i a c o m p o n e n t e n omgevingstemperatuur of 37 °C. ROMÂNĂ POLSKI NEDERLANDS PRODUCTBESCHRIJVING ISolate® is een dichtheidsgradiëntmedium dat ontworpen is om het motiele gedeelte van het sperma te scheiden van de spermavloeistof. Als een tweelaags gradiëntsysteem vermindert het effectief celverontreinigende stoffen zoals dood sperma, witte bloedcellen en ander afval. Het resulterende monster bevat voornamelijk motiel sperma. 3. Breng met een nieuw steriel pipet een gelijk volume van de “BOVENSTE LAAG” over naar het bovenste gedeelte van de “ONDERSTE LAAG”. Dit kan worden bereikt door het oppervlak van de “ONDERSTE LAAG” tegen de zijkant van het buisje te houden met de punt van het pipet. Pipetteer de “BOVENSTE LAAG” voorzichtig door de pipetpunt in een opwaartse spiraalbeweging rondom de omtrek van het buisje te draaien als het niveau van de “BOVENSTE LAAG” stijgt. ISolate zal er opaak uitzien. Dit is normaal voor dit product. Gebruik geen ampullen met een medium dat (vaste) deeltjes bevat of besmet is (niet-uniform troebel). ISolate dient goed met een dop te worden afgesloten als het wordt gebruikt in een CO2-incubator om pH-wijzigingen te vermijden. Dit product bevat geen conserveringsmiddelen, antibiotica of eiwitsupplementen. Gebruik aseptische methoden om besmettingsproblemen te vermijden. Niet gebruiken indien beschadigd. Afvoeren of terugsturen naar de fabrikant voor een vervanging. VOORZICHTIG: volgens de Amerikaanse federale wetgeving mag dit product alleen door of op voorschrift van een arts worden verkocht. OPIS PRODUKTU ISolate® jest pożywką z gradientem gęstości, stworzoną do rozdziału frakcji plemników ruchliwych od płynu nasiennego. Ten system o dwupoziomowym gradiencie jest skuteczny w redukowaniu zanieczyszczeń komórkowych, takich jak martwe plemniki, białe ciałka krwi i szczątkowe zanieczyszczenia. Powstała próbka zawiera głównie ruchliwe plemniki. ISolate jest to filtrowana membranowo, aseptycznie przetwarzana zawiesina krzemionkowa cząsek krzemu, stabilizowana kowalentnie związanym hydrofilowym krzemem w HTF zbuforowanym HEPES. Bezpieczny poziom sterylności (SAL) wynosi 10 -3. ISolate został przetestowany i reagował negatywnie na pirogeny, przy użyciu testu króliczych pirogenów., WSKAZÓWKI UŻYCIA Nr katalogowy: 99264 – KRZEMIONKA KOLOIDALNA GOTOWA DO UŻYCIA W DWÓCH STĘŻENIACH (50% i 90%) A. Sugerowane materiały: ISolate • Nr w Katalogu Irvine Scientific: 99264 (6ml, 50ml lub 100 ml zestaw fiolek) Pożywka do przemywania nasienia • Nr w Katalogu Irvine Scientific: 9983 Sterylne, jednorazowe, stożkowe probówki wirówkowe • Nr w Katalogu Irvine Scientific: IS-325 Sterylne pipety Pasteura Wirówka Inkubator, 37 °C B. Przygotowanie roztworu: Nie są konieczne wstępne rozcieńczenia. Każda fiolka z gradientem górnej i dolnej warstwy jest gotowa do użycia. Kontynuować według części PROCEDURA OGÓLNA tej ulotki o leku. Nr katalogowy: 99275 – ROZTWÓR ZAPASOWY Pożywka o gradiencie gęstości 90% do użycia w jednoetapowej procedurze lub do dalszego rozcieńczania. A. Sugerowane materiały: ISolate ROZTWÓR ZAPASOWY •Nr w Katalogu Irvine Scientific: 99275 Zmodyfikowany Ludzki Płyn Jajowodowy •Nr w Katalogu Irvine Scientific: 90126 Pożywka do przemywania nasienia •Nr w Katalogu Irvine Scientific: 9983 Sterylne, jednorazowe, stożkowe probówki wirówkowe •Nr w Katalogu Irvine Scientific: IS-325 Sterylne pipety Pasteura Wirówka Inkubator, 37 °C B. Przygotowanie roztworu: Następujące dwa roztwory są wymagane do przeprowadzenia metody rozdziału nasienia wg gradientu: Górna warstwa i dolna warstwa. 1. Górna warstwa roztworu - 50%: a) Wziąć ROZTWÓR ZAPASOWY (nr katalogowy: 99275) i odpipetować 5,6 ml do sterylnej probówki wirówkowej b) Dodać 4.4 ml do Modified Human Tubal Fluid (nr katalogowy: 90126) c) Zamknąć probówkę i delikatnie odwracać 3-4 razy, aby umożliwić dokładne wymiesza nie. d) Oznakować probówkę jako „GÓRNA WARSTWA” 2. Dolna warstwa roztworu - 90%: a) Wydzielić 10 ml alikwot ROZTWORU ZAPA SOWEGO do sterylnej probówki wirówkowej i zamknąć zatyczką – (nie jest konieczne dalsze rozcieńczanie – ROZTWÓR ZAPASOWY jest 90%) b) Oznakować probówkę jako „DOLNA WARSTWA” 3. Kontynuować według części PROCEDURA OGÓLNA tej ulotki o leku. (UWAGA: 10 ml warstwy górnej i 10 ml warstwy dolnej wystar czy na przygotowanie 5 próbek nasienia). Nr katalogowy: 99306 - ROZTWÓR STĘŻONY Stężona krzemionka koloidalna do dalszego rozcieńczania na gradienty gęstości; sporządzona w izotonicznym buforze i zbliżona do gęstości nierozcieńczonego roztworu Percoll®. STĘŻONY ROZTWÓR ISolate® badany był z gradiantem 50% i 90% zgodnie z informacją podaną w niniejszej ulotce. Każde laboratorium może przygotować swoje własne roztwory o różnych stężeniach, które będą badane pod względem ich skuteczności. A. Sugerowane materiały: Stężony roztwór ISolate® •Nr w Katalogu Irvine Scientific: 99306 Zmodyfikowany Ludzki Płyn Jajowodowy •Nr w Katalogu Irvine Scientific: 90126 Pożywka do przemywania nasienia •Nr w Katalogu Irvine Scientific: 9983 Sterylne, jednorazowe, stożkowe probówki wirówkowe •Nr w Katalogu Irvine Scientific: IS-325 Sterylne pipety Pasteura Wirówka Inkubator, 37 °C B. Przygotowanie roztworu: Następujące dwa roztwory są wymagane do przeprowadzenia metody rozdziału nasienia wg gradientu: Górna warstwa i dolna warstwa. 1. Górna warstwa roztworu - 50%: a) Wziąć ROZTWÓR STĘŻONY (nr katalogowy: 99306) i odpipetować 4.5 ml do sterylnej probówki wirówkowej b) Dodać 5.5 ml do Modified Human Tubal Fluid (nr katalogowy: 90126) c) Zamknąć probówkę i delikatnie odwracać 3-4 azy, aby umożliwić dokładne wymieszanie. d) Oznakować probówkę jako „GÓRNA WARSTWA” 2. Dolna warstwa roztworu - 90%: a) Wziąć ROZTWÓR STĘŻONY (nr katalogowy: 99306) i odpipetować 8.1 ml do sterylnej probówki wirówkowej b) Dodać 1.9 ml do Modified Human Tubal Fluid (nr katalogowy: 90126) c) Zamknąć probówkę i delikatnie odwracać 3-4 razy, aby umożliwić dokładne wymieszanie. d) Oznakować probówkę jako „DOLNA WARSTWA” 3. Kontynuować według części PROCEDURA OGÓLNA tej ulotki o leku. (UWAGA: 10 ml warstwy górnej i 10 ml warstwy dolnej wystarczy na przygotowanie 5 próbek nasienia). Uwaga: Terminy 50% i 90% nie odpowiadają właściwym stężeniom. 50% i 90% są odpowiadającymi stężeniami opartymi na porzedniej nomenklaturze, która definiowała rozcieńczenie 1:9 roztworu Percoll® jako równe z 100% pracującym, roztworem izotonicznym. PROCEDURA OGÓLNA Poniżej podana jest ogólna procedura dla dwustopniowej separacji plemników ruchliwych od nasienia. Objętość i stężenie mogą być zmodyfikowane w celu zgodności z preferencjami laboratorium (tzn.: mini-gradient, nasienie zabezpieczone kriogeniczne, roztwór trzywarstwowy). 1. Podgrzać wszystkie podłoża do temperatury pokojowej lub 37 °C. 2. Przy użyciu sterylnej pipety, przenieść 1,5 – 2,0 ml „DOLNEJ WARSTWY” do sterylnej, jednorazowej, stożkowej probówki wirówkowej. 3. Przy użyciu nowej sterylnej pipety, przenieść jednakową objętość „GÓRNEJ WARSTWY” na wierzch „DOLNEJ WARSTWY”. Jest to wykonane przez dotknięcie końcówką pipety powierzchni „DOLNEJ WARSTWY” z boku probówki. Ostrożnie odebrać „GÓRNĄ WARSTWĘ” poprzez poruszanie spiralnym ruchem końcówki pipety po obwodzie probówki ruchem wznoszącym, podczas podnoszenia się poziomu „GÓRNEJ WARSTWY”. 4. Ostrożnie umieścić 1,5 – 2,0 ml płynnego nasienia na „GÓRNEJ WARSTWIE” przy użyciu nowej sterylnej pipety. 5. Wirować przez 10-20 minut, przy użyciu siły około 200 - 300xg.* Ostrożnie odsłonić pelet poprzez zaaspirowanie „GÓRNEJ ” i „DOLNEJ WARSTWY” lub bezpośrednie zebranie peletu i przeniesienie do nowej sterylnej probówki. *Uwaga: Jakość próbki nasienia należy zbadać i wziąć pod uwagę podczas określania odpowiedniego czasu i szybkości wirowania. Należy je dopasować zgodnie z jakością indywidualnej próbki w celu optymalizacji procedury. 6. Przy użyciu nowej, sterylnej pipety dodać 2,0 – 3,0 ml odpowiedniej pożywki przemywającej, jak np.: Sperm Washing Medium (nr katalogowy IS: 9983) lub Modified HTF (nr katalogowy IS: 90126) z dodatkiem białka. Ponownie zawiesić odebrany pelet. Zwirować (~200xg) przez 8-10 minut i usunąć nadsącz. Powtórzyć ten etap w drugim przepłukiwaniu. Odebrać nadsącz i ponownie zawiesić pelet w odpowiedniej objętości właściwej pożywki. Teraz próbka jest gotowa do analizy. Aby zapoznać się z dodatkowymi szczegółami użycia tych produktów, każde laboratorium powinno odwołać się do jego własnych procedur laboratoryjnych i protokołów, które zostały specjalnie opracowane i zoptymalizowane dla indywidulanego programu medycznego. INSTRUKCJE DOTYCZĄCE PRZECHOWYWANIA I STABILNOŚCI Przechowywać w nieotwartych pojemnikach, w chłodziarce o temperaturze 2º C do 8 ºC. Podgrzać do temperatury otoczenia lub inkubatora (37 °C) przed użyciem. Nie zamrażać ani nie poddawać działaniu wysokich temperatur. ISolate jest stabilny do upłynięcia daty ważności wydrukowanej na pudełku i etykiecie butelki, gdy przechowywany zgodnie z instrukcją. ŚRODKI OSTROŻNOŚCI I OSTRZEŻENIA To urządzenie jest przeznaczone do użycia przez personel wykwalifikowany w dziedzinie procedur obejmujących wskazane zastosowanie, dla którego to urządzenie jest przeznaczone. ISolate będzie nieprzejrzysty. To jest normalne dla tego produktu. Nie używać żadnej fiolki z pożywką, w której widoczne są cząsteczki materii lub zanieczyszczenie (nierównomierne zmętnienie). ISolate należy zamknąć szczelnie w przypadku używania inkubatora CO2, aby uniknąć zmian pH. Ten produkt nie zawiera środków konserwujących, antybiotyków ani dodatków białkowych. Aby uniknąć próblemów z zanieczyszczeniem, posługując się tym produktem należy stosować technikę aseptyczną. Nie używać w przypadku uszkodzenia. Należy wyrzucić lub zwrócić do producenta w celu dokonania wymiany. U WA G A : P r a w o f e d e r a l n e ( S t a n ó w Zjednoczonych) zezwala na sprzedaż tego urządzenia tylko przez lub na polecenie lekarza. DESCRIEREA PRODUSULUI ISolate® este un mediu cu un gradient de concentraţie destinat să separe fracţiunile de spermatozoizi mobili din lichidul seminal Ca şi un sistem gradual pe 2 straturi, reduce contaminarea celulară de exemplu cu spermă moartă, leucocite sau alte reziduuri. Rezultă mostre care conţin predominant spermatozoizi mobile. ISolate este filtrat prin membrană, prelucrat aseptic care conţine particule de silicat în suspensie coloidală, stabilizate prin legături covalente hidrofilice silane solutia tamponată HEPES- HTF . Nivelul de sterilitate asigurat este de (SAL)10-3. ISolate a fost testat cu test pirogen de iepure şi găsit apirogen . INSTRUCŢIUNI DE UTILIZARE Catalog #99264- GATA PENTRU FOLOSIREA S I L I C AT U L U I C O L O I D A L L A D O U Ă CONCENTRAŢII ( 50 % ŞI 90%) A. Materiale propuse: ISolate • Irvine Scientific Catalog #99264 (kit fiolă de 6mL, 50mL sau 100 mL ) Sperm Washing Medium • Irvine Scientific Catalog #9983 Tuburi conice sterile de centrifugă de unică folosinţă • Irvine Scientific Catalog #IS-325 Pipetă sterilă Pasteur Centrifugă Incubator, 37ºC B. Prepararea Gradientului: Nu este necesară diluarea preliminară. Fiecare fiolă cu gradientul stratului de sus şi jos este gata pentru folosinţă. Continuaţi cu PROCEDURI GENERALE, paragraful utilizarea produsului. Catalog # 99275 STOCK SOLUTION Se utilizează 90% din densitatea gradientului de mediu în prima treaptă sau pentru diluări ulterioare. A. Materiale propuse: ISolate STOCK SOLUTION stoc de soluţie ISolate •Irvine Scientific Catalog #99275 Lichid uman tubal modificat •Irvine Scientific Catalog #90126 Sperm Washing Medium •Irvine Scientific Catalog #9983 Tuburi conice sterile de centrifugă de unică folosinţă •Irvine Scientific Catalog #IS-325 Pipetă sterilă Pasteur Centrifugă Incubator, 37ºC B. Prepararea Gradientului: Două soluţii sunt necesare pentru a executa procedeul de separare a spermatozoizilor Stratul de sus şi stratul de jos. Stratul de sus şi stratul de jos. 1. Soluţie stratul de sus -50%. a) Luaţi STOCK SOLUTION (Catalog #99275) şi pipaaţi de 5.6 ml într-un tub de centrifugă sterilă b) Adăugaţi 4.4 ml de Modified Human Tubal Fluid (Catalog# 90126) c) Puneţi capacul tubului şi prin răsturnare efectuată cu grijă de 3-4 ori, veţi realiza amestecarea completă. d) Etichetaţi tubul ca şi “ STRAT DE SUS” 2. Soluţie stratul de jos -90%. a) Alicot în 10 ml de soluţie STOCK într-un tub steril de centrifugă cu capac - (nu este necesară diluţia ulterioară - soluţia STOCK are concentraţia de 90%) b) Etichetaţi tubul “ STRATUL DE JOS” 3. Continuaţi la procedurile generale din instrucţiunile de folosire. (NOTĂ: 10 ml din stratul de sus şi 10 ml din stratul de jos, va prelucra aproximativ 5 mostre de spermă). Catalog # 99306 CONCENTRATE Concentratul de silicat coloidal pentru mai multă diluare a densităţii gradientului ; formulat în tamponare isotonică şi aproximează densitatea nediluată al Percoll®-ului. ISolate® CONCENTRATE a fost evaluat conform concentraţiei de 50% şi 90%, înscrisă pe pachet gradient de la 50% până la 90%). Fiecare laborator îşi poate alege să facă gradienţii la diferite concentraţii, care ar trebui evaluat pentru eficacitate. A. Materiale propuse: ISolate® Concentrat •Irvine Scientific Catalog #99306 Lichid uman tubal modificat •Irvine Scientific Catalog #90126 Sperm Washing Medium •Irvine Scientific Catalog #9983 Tuburi conice sterile de centrifugă de unică folosinţă •Irvine Scientific Catalog #IS-325 Pipetă sterilă Pasteur Centrifugă Incubator, 37ºC B. Prepararea Gradientului: Două soluţii sunt necesare pentru a executa procedeul de separare a spermatozoizilor Stratul de sus şi stratul de jos. 1. Soluţie stratul de sus -50%. a) Luaţi CONCENTRATE (Catalog #99306) şi pipete de 4.5 ml într-un tub steril de centrifugă b) Adăugaţi 5.5 ml de Modified Human Tubal Fluid (Catalog# 90126) c) Puneţi capacul tubului şi prin răsturnare efectuată cu grijă de 3-4 ori, veţi realiza amestecarea completă. d) Etichetaţi tubul ca şi “ STRAT DE SUS” 2. Soluţie stratul de jos -90%. a) Luaţi CONCENTRATE (Catalog #99306) şi pipete de 8.1 ml într-un tub steril de centrifugă b) Adăugaţi 1.9 ml de Modified Human Tubal Fluid (Catalog# 90126) c) Puneţi capacul tubului şi prin răsturnare efectuată cu grijă de 3-4 ori, veţi realiza amestecarea completă. d) Etichetaţi tubul ca şi “ STRAT DE JOS” 3. Continuaţi la procedurile generale din instrucţiunile de folosire. (NOTĂ: 10 ml din stratul de sus şi 10 ml din stratul de jos, va prelucra aproximativ 5 mostre de spermă). Notă: Termeni de 50% şi 90% nu reprezintă concentraţia actuală. Cele de 50% şi 90% sunt concentraţii bazate pe nomenclatura anterioară care defineşte o diluţie de 1:9 de Percoll® , identică în totalitate cu soluţia izotonică de lucru. PROCEDURI GENERALE Urmează a doua treaptă de procedură generală şi anume de separare a spermatozoidului mobil din spermă. Volumul şi concentraţia pot fi modificate în funcţie de preferinţele fiecărui laborator. (ex: mini-gradient, crioconservarea spermei, gradient în trei straturi.) 1. Aduceţi toţi componenţii mediului la temperatura camerei sau 37°C. 2. Folosind pipetă sterilă, transferaţi 1.5 - 2.0 ml din “STRATUL DE JOS” într-un tub steril de centrifugă conică de unică folosinţă. 3. Cu ajutorul unei pipete noi sterile, transferaţi un volum egal cu cel situat între cele două semne care delimitează “stratul de sus” şi “stratul de jos”. Aceasta este făcută prin contactul cu suprafaţei “STRATULUI JOS” de la marginea tubului cu vârful pipetei. Preparaţi cu grijă “STRATUL DE SUS” prin învârtirea spiralată a vârfului pipetei în sus, în jurul circumferinţei tubului aşa cum “STRATUL DE SUS” se ridică. 4. Cu ajutorul unei pipete sterile puneţi cu blândeţe 1,5-2 ml de spermă lichefiată până la “nivelul de sus” a tubului. EESTI SVENSKA 5. Centrifugaţi timp de 10-20 de minute, la aproximativ 200- 300 xg.* Granulele vor fi expuse cu grijă prin aspirarea “ STRATULUI DE SUS” şi a “STRATULUI DE JOS” sau prin scoaterea directă a acestora şi mutarea lor într-un tub steril de centrifugă. *Notă: Calitatea mostrei de spermatozoids trebuie să fie evaluată şi luată în considerare când se determină timpul şi viteza proprie pentru centrifugare. Acestea trebuie ajustate în concordanţă cu calitatea mostrei individuale în vederea optimizării procesului de prelucrare. 6. Folosind o pipetă sterilă nouă, adăugaţi 2.0 - 3.0 ml mediu de spălare utilizând Sperm Washing Medium (IS Catalog# 9983) sau Modified HTF (IS Catalog #90126) cu adaos de proteine. Resuspendaţi granulele izolate. Centrifugaţi (~200xg) pentru 8-10 minute şi îndepărtaţi supernatantul. Repetaţi această treaptă pentru a doua spălare. Îndepărtaţi supernatantul şi resuspendaţi granula folosind un volum potrivit de mediu adecvat. Mostra acum este gata pentru analiză. Pentru detalii suplimentare privind folosirea acestui produs, fiecare laborator trebuie să consulte protocolul pentru procedurile utilizate în laborator care sunt specifice şi optimizate pentru programul medical individual. INSTRUCŢIUNI PENTRU PĂSTRARE ŞI STABILITATE Păstraţi sticlele sau containerele nedeschise refrigerate la 2º to 8ºC. Încălziţi la temperatura mediului ambiant sau la incubator la temperatură (37°C) înainte de a utilliza. Nu congelaţi sau expuneţi la temperaturi mari. ISolate este stabil până la data expirării înscrise pe eticheta de pe cutie dacă sunt respectate condiţiile de depozitare. PRECAUŢII ŞI AVERTISMENTE Acest dispozitiv este destinat să fie utilizat de personalul specializat în proceduri care includ aplicarea indicată pentru care a fost creat dispozitivul. ISolate va apărea opac. Este normal pentru acest produs. Nu utilizaţi fiole cu mediu care prezintă reziduuri de particule sau semne de contaminare (înceţoşare neuniformă) ISolate ar trebui să fie închis ermetic atunci când se foloseşte în incubator cu CO2 pentru a evita schimbări ale nivelurilor de pH. Acest produs nu conţine conservanţi, antibiotice, sau suplemente de proteină. Pentru a evita probleme de contaminare, mânuiţi folosind tehnici aseptice. Nu se utilizează în caz de deteriorare. Vă rugăm aruncaţi sau înapoiaţi producătorului pentru a fi înlocuit. AVERTISMENT: Legile Federale în (SUA) nu permit vânzarea acestui aparat numai la comanda unui medic sau pe bază de comanadă. PRODUKTBESKRIVNING ISolate® är ett densitetsgradientmedium framtaget för att separera den rörliga spermiefraktionen från sädesvätska. Detta gradientsystem med två skikt minskar effektivt förekomsten av cellulära kontaminanter, såsom döda spermier, vita blodkroppar och annat skräp. Det resulterande provet innehåller huvudsakligen rörliga spermier. ISolate är en membranfiltrerad, aseptiskt behandlad kolloidal suspension av kiselpartiklar stabiliserade med kovalent bundet hydrofilt silan i HEPES-buffrad HTF. Sterilitetsnivån (SAL, sterility assurance level) är 10 -3. ISolate har testats med pyrogentest på kanin och befunnits negativ för pyrogener. BRUKSANVISNING Katalognr 99264 - KOLLOIDAL KISELDIOXID, FÄRDIG ATT ANVÄNDA, I TVÅ KONCENTRATIONER (50 % och 90 %) A. Rekommenderat material: ISolate • Irvine Scientific katalognr 99264 (sats med 6 mL, 50mL eller 100 mL ampuller) Sperm Washing Medium • Irvine Scientific katalognr 9983 Sterila, konformade centrifugrör för engångsbruk • Irvine Scientific katalognr IS-325 Pasteurpipetter, sterila Centrifug Inkubator, 37 °C B. Gradientberedning: Inga förspädningar krävs. Varje ampull med topp- och bottengradient är färdig att användas. Fortsätt till avsnittet ALLMÄNT FÖRFARANDE i produktens bipacksedel. Katalognr 99275 - STOCK SOLUTION 90 % densitetsgradient-medium för användning i en procedur i ett steg eller för ytterligare spädning. A. Rekommenderat material: ISolate Stock Solution • Irvine Scientific katalognr 99275 Modified Human Tubal Fluid • Irvine Scientific katalognr 90126 Sperm Washing Medium • Irvine Scientific katalognr 9983 Sterila, konformade centrifugrör för engångsbruk • Irvine Scientific katalognr IS-325 Pasteurpipetter, sterila Centrifug Inkubator, 37 °C B. Gradientberedning: Två lösningar krävs för att utföra spermieseparation med gradientmetoden: En toppskikts- och en bottenskiktslösning. 1. Toppskiktslösning - 50 %: a) Ta STOCK SOLUTION (katalognr 99275) och pipettera 5,6 mL i ett sterilt centrifugrör b) Tillsätt 4,4 mL Modified Human Tubal Fluid (katalognr 90126) c) Förslut röret och vänd det varligt 3-4 gånger så att innehållet blandas fullständigt d) Märk röret med “TOPPSKIKT” 2. Bottenskiktslösning - 90 %: a) Häll en alikvot på 10 mL av Stock Solution i ett sterilt centrifugrör och förslut - (ingen ytterligare spädning krävs - Stock Solution är på 90 %) b) Märk röret med “BOTTENSKIKT” 3. Fortsätt till avsnittet ALLMÄNT FÖRFARANDE i produktens bipacksedel. (OBS! 10 mL toppskikt och 10 mL bottenskikt räcker till cirka 5 spermaprover). Katalognr 99306 - CONCENTRATE Kolloidalt kisel-koncentrat för ytterligare spädning till densitetsgradienter; i isoton buffert och med ungefär samma densitet som ospädd Percoll®. ISolate® CONCENTRATE har utvärderats enligt denna bipacksedel vid gradienterna 50 % och 90 %. Varje laboratorium kan välja att framställa gradienter i andra koncentrationer, som bör utvärderas för effektivitet. A. Rekommenderat material: ISolate® Concentrate • Irvine Scientific katalognr 99306 Modified Human Tubal Fluid • Irvine Scientific katalognr 90126 Sperm Washing Medium • Irvine Scientific katalognr 9983 Sterila, konformade centrifugrör för engångsbruk • Irvine Scientific katalognr IS-325 Pasteurpipetter, sterila Centrifug Inkubator, 37 °C B. Gradientberedning: Två lösningar krävs för att utföra spermieseparation med gradientmetoden: En toppskikts- och en bottenskiktslösning. 1. Toppskiktslösning - 50 %: a) Ta CONCENTRATE (katalognr 99306) och pipettera 4,5 mL i ett sterilt centrifugrör b) Tillsätt 5,5 mL Modified Human Tubal Fluid (katalognr 90126) c) Förslut röret och vänd det varligt 3-4 gånger så att innehållet blandas fullständigt d) Märk röret med “TOPPSKIKT” 2. Bottenskiktslösning - 90 %: a) Ta CONCENTRATE (katalognr 99306) och pipettera 8,1 mL i ett sterilt centrifugrör b) Tillsätt 1,9 mL Modified Human Tubal Fluid (katalognr 90126) c) Förslut röret och vänd det varligt 3-4 gånger så att innehållet blandas fullständigt d) Märk röret med “BOTTENSKIKT” 3. Fortsätt till avsnittet ALLMÄNT FÖRFARANDE i produktens bipacksedel. Obs! Termerna 50 % och 90 % anger inte en faktisk koncentration. 50 % och 90 % är relativa koncentrationer baserade på tidigare nomenklatur som definierade en 1:9-spädning av Percoll ® såsom likvärdig med en 100 % fungerande, isoton lösning. ALLMÄNT FÖRFARANDE Följande är en generell procedur för en tvåstegsgradientseparation av rörliga spermier från sädesvätska. Volymen och koncentrationen kan modifieras för att passa det enskilda laboratoriets preferenser (dvs. minigradient, kryopreserverad sperma, treskiktsgradient). 1. Låt alla mediekomponenter uppnå rumstemperatur eller 37 °C. 2. Använd en steril pipett och överför 1,5 - 2,0 mL av “BOTTENSKIKTET” till ett sterilt, konformat centrifugrör för engångsbruk. 3. Använd en ny steril pipett och överför en lika stor volym “TOPPSKIKT” ovanpå “BOTTENSKIKTET” . Detta görs genom att vidröra ytan på “BOTTENSKIKTET” vid röret sida med pipettens spets. Dispensera omsorgsfullt “TOPPSKIKTET” genom att vrida pipettspetsen i spiral runt rörets omkrets i en uppåtriktad rörelse efterhand som “TOPPSKIKT”-nivån ökar. 4. Placera försiktigt 1,5 - 2,0 mL likvifierad sperma på “TOPPSKIKTET” med användning av en ny, steril pipett. 5. Centrifugera i 10 - 20 minuter vid cirka 200 - 300 x g.* Exponera pelleten omsorgsfullt genom att antingen suga av “TOPP-” och “BOTTENSKIKTEN”, eller genom att ta upp pelleten och föra över den till ett nytt, sterilt centrifugrör. *Obs! Spermaprovets kvalitet skall bedömas och tas i beaktande vid bestämning av korrekt centrifugeringshastighet och -tid. Dessa bör justeras i enlighet med det enskilda provets kvalitet, för optimering av förfarandet. 6. Använd en ny steril pipett och tillsätt 2,0 - 3,0 mL lämpligt tvättmedium såsom Sperm Washing Medium (IS katalognr 9983) eller Modified HTF (IS katalognr 90126) med proteinsupplement. Resuspendera den isolerade pelleten. Centrifugera (~200xg) i 8 - 10 minuter och avlägsna supernatanten. Upprepa detta steg för en andra tvätt. Kassera supernatanten och resuspendera pelleten med användning av en adekvat volym lämpligt medium. Provet är nu klart för analys. För ytterligare information om användning av dessa produkter bör varje laboratorium konsultera sina egna laboratorieförfaranden och -protokoll som utvecklats och optimerats särskilt för de egna medicinska programmen. FÖRVARING OCH HÅLLBARHET Oöppnade behållare skall förvaras i kylskåp vid 2 - 8 ºC. Värm till omgivnings- eller inkubator(37 °C)-temperatur före användning. Får ej frysas eller exponeras för höga temperaturer. ISolate är hållbart fram till det utgångsdatum som anges på kartongen och flasketiketterna, vid förvaring enligt anvisningarna. FÖRSIKTIGHETSÅTGÄRDER OCH VARNINGAR Denna produkt är avsedd att användas av personal med utbildning i procedurer vilka inkluderar den indicerade tillämpning för vilken produkten är avsedd. ISolate är ogenomskinligt. Detta är normalt för denna produkt. Använd inga ampuller med medium som innehåller partiklar eller företer tecken på kontamination (ojämn grumlighet). ISolate skall vara ordentligt förslutet vid användning i en CO2-inkubator så att pH-förändringar undviks. Denna produkt innehåller inga konserveringsmedel, antibiotika eller proteinsupplement. Använd aseptisk teknik vid hantering, så att kontamination undviks. Om produkten är skadad får den inte användas. Kassera den eller returnera den till tillverkaren för utbyte. OBS! Enligt federal (USA) lag får denna produkt endast säljas av eller på ordination av läkare. TOOTE KIRJELDUS ISolate® on tihedusgradiendi lahus, mis on koostatud liikuva sperma eraldamiseks seemnevedelikust. Kahekihilise gradiendi süsteem vähendab tõhusalt rakuliste saasteainete, sh surnud sperma, valgevererakkude ja mitmesuguste jäätmete hulka. Sellest saadud proov sisaldab peamiselt liikuvaid spermatosoide. ISolate on HEPESiga puhverdatud HTFis membraanfiltreeritud ja aseptilised töödeldud räniosakeste kolloiodne suspensioon kovalentselt seotud hüdrofiilse silaaniga. Garanteeritud steriilsustase (SAL) on 10 -3. Küüliku pürogeenitesti tegemisega on leitud, et ISolate on pürogeenide suhtes negatiivne. KASUTUSJUHEND Kataloogi nr 99264 - KASUTAMISVALMIS KOLLOIDNE RÄNIMULD KAHES KONTSENTRATSIOONIS (50% ja 90%) A. Soovitatavad materjalid: ISolate • Irvine Scientific katalooginr 99264 (6mL, 50mL või 100mL viaaliga komplekt) Sperm Washing Medium • Irvine Scientific katalooginr 9983 Steriilsed, ühekordsed koonilised tsentrifuugi tuubid • Irvine Scientific katalooginr IS-325 Pasteuri pipetid, steriilsed Tsentrifuug Inkubaator, 37°C B. Gradiendi valmistamine: Eelnevat lahjendamist ei ole vaja. Iga ülemise ja alumise gradiendi kihti sisaldav viaal on kasutamiseks valmis. Jätkake toote pakendi infolehel toodud ÜLDPROTSEDUURIDEGA. Kataloogi nr 99275 - STOCK SOLUTION 90%-ne tihedusgradiendi sööde kasutamiseks üheetapilises protseduuris või edasiseks lahjendamiseks. A. Soovitatavad materjalid: ISolate STOCK SOLUTION •Irvine Scientific katalooginr 99275 Modified Human Tubal Fluid •Irvine Scientific katalooginr 90126 Sperm Washing Medium •Irvine Scientific katalooginr 9983 Steriilsed, ühekordsed koonilised tsentrifuugi tuubid •Irvine Scientific katalooginr IS-325 Pasteuri pipetid, steriilsed Tsentrifuug Inkubaator, 37°C B. Gradiendi valmistamine: Sperma eraldamise gradientmeetodi jaoks on vaja kaks lahust: ülemine kiht ja alumine kiht. Ülemine kiht ja alumine kiht. 1. Ülemise kihi lahus - 50%: a) Võtke STOCK SOLUTION (kataloogi nr 99275) ja pipettige 5,6 mL steriilsesse tsentrifuugi tuubi. b) Lisage 4.4 mL lahust Modified Human Tubal Fluid (kataloogi nr 90126) c) Katke katsut korgiga ja keerake 3...4 korda põhi õrnalt üles-alla, et sisu täielikult seguneks d) Märkige katsutile “ÜLEMINE KIHT” 2. Alumise kihi lahus - 90%: a) Alikvootige 10 mL STOCK SOLUTIONit steriilsesse tsentrifuugi tuubi ja korgistage - (edasine lahjendamine ei ole vajalik - STOCK SOLUTION on 90%) b) Märkige katsutile “ALUMINE KIHT” 3. Jätkake toote pakendi infolehel toodud ÜLDPROTSEDUURIDEGA. (MÄRKUS: Kogusega 10 mL ülemist kihti ja 10 mL alumist kihti on võimalik töödelda umbes 5 eemnevedeliku proovi.) Kataloogi nr 99306 - CONCENTRATE Kolloidse ränimulla kontsentraat edasiseks lahjendamiseks tihedusgradientideks; valmistatud isotoonilises puhvris ja tiheduse poolest on lähedane lahustamata Percoll®-ile. ISolate® analüüsiti vastavalt pakendi infolehes toodule ning leiti gradiendid 50% ja 90%. Iga labor võib oma äranägemisel valmistada erinevates kontsentratsioonides gradiente, mille tõhusust tuleb hinnata. A. Soovitatavad materjalid: ISolate® kontsentraat •Irvine Scientific katalooginr 99306 Modified Human Tubal Fluid •Irvine Scientific katalooginr 90126 Sperm Washing Medium •Irvine Scientific katalooginr 9983 Steriilsed, ühekordsed koonilised tsentrifuugi tuubid •Irvine Scientific katalooginr IS-325 Pasteuri pipetid, steriilsed Tsentrifuug Inkubaator, 37°C B. Gradiendi valmistamine: Sperma eraldamise gradientmeetodi jaoks on vaja kaks lahust: ülemine kiht ja alumine kiht. 1. Ülemise kihi lahus - 50%: a) Võtke CONCENTRATE (kataloogi nr 99306) ja pipettige 4.5 mL steriilsesse tsentrifuugi tuubi. b) Lisage 5.5 mL lahust Modified Human Tubal Fluid (kataloogi nr 90126) c) Katke katsut korgiga ja keerake 3...4 korda põhi õrnalt üles-alla, et sisu täielikult seguneks d) Märkige katsutile “ÜLEMINE KIHT” 2. Alumise kihi lahus - 90%: a) Võtke CONCENTRATE (kataloogi nr 99306) ja pipettige 8.1 mL steriilsesse tsentrifuugi tuubi. b) Lisage 1.9 mL lahust Modified Human Tubal Fluid (kataloogi nr 90126) c) Katke katsut korgiga ja keerake 3...4 korda põhi õrnalt üles-alla, et sisu täielikult seguneks d) Märkige katsutile “ALUMINE KIHT” 3. Jätkake toote pakendi infolehel toodud ÜLDPROTSEDUURIDEGA. Märkus: Nimetusele lisatud 50% ja 90% ei kujuta endast tegelikku kontsentratsiooni. 50% ja 90% kujutavad endast relatiivseid kontsentratsioone, mis põhinevad varasemal nomenklatuuril, mille järgi Percoll’i® 1:9 lahus võrdus 100% isotoonilise töölahusega. ÜLDINE PROTSEDUUR Järgnevalt on toodud liikuva sperma seemnevedelikust gradiendiga eraldamise kahe-etapiline üldprotseduur Mahtu ja kontsentratsiooni võib muuta vastavalt labori eelistustele (st minigradient, külmutatult säilitatud seemnevedelik, kolmekihiline gradient). 1. Tooge kõik söötme komponendid toatemperatuurile, st 37°C. 2. Kasutades steriilset pipetti, viige 1,5...2,0 mL ALUMIST KIHTI steriilsesse, ühekordsesse, koonilisse tsentrifuugituubi. 3. Kasutades uut steriilset pipetti, viige ALUMISE KIHI peale võrdne kogus ÜLEMIST KIHTI. Selleks viige pipeti ots katsuti seinal vastu ALUMISE KIHI pinda. Ettevaatlikult dispenseerige ÜLEMINE KIHT pipeti otsaga spiraalselt mööda katsuti sisemist seina ülespoole tõmmates ÜLEMISE KIHI pinna tõustes. 4. Õ r n a l t a s e t a g e 1 , 5 . . . 2 , 0 m L v e d e l d a t u d seemnevedelikku ÜLEMISSE KIHTI, kasutades selleks uut steriilset pipetti. 5. Tsentrifuugige umbes 200...300 g juures 10...20 minutit.* Ettevaatlikult tooge välja settetombuke, kas ÜLEMISE ja ALUMISE KIHI pealt ära aspireerimise teel või settetombukese otseselt välja võtmise ja uude steriilsesse tsentrifuugi tuubi sisse kandmise teel. *Märkus: Tsentrifuugimiskiiruse ja -aja määramisel tuleb hinnata ja arvesse võtta spermaproovi kvaliteeti. Protseduuri optimeerimiseks tuleb kiirust ja aega korrigeerida vastavalt proovi kvaliteedite. 6. Kasutades uut steriilset pipetti, lisage 2,0...3,0 mL sobivat pesemisvahendit nagu Sperm Washing Medium (IS kataloogi nr 9983) või Modified HTF (IS kataloogi nr 90126) koos proteiinilisandiga. Resuspendeerige isoleeritud settetombuke. Tsentrifuugige ~200 g juures 8...10 minutit ja eemaldage supernatant. Korrake seda sammu teistkordseks pesemiseks. Visake supernatant ära ja resuspendeerige settetombuke, kasutades selleks sobiva söötme vastavat kogust. Proov on nüüd analüüsimiseks valmis. Toodete kasutamise üksikasjaliku informatsiooni vajamise korral peab iga labor kasutama oma labori protseduure ja protokolle, mis on välja arendatud ja optimeeritud konkreetselt teie oma meditsiiniprogrammi jaoks. SÄILITAMISJUHISED JA STABIILSUS Hoidke avamata anumad külmkapis temperatuuril 2 º... 8 ºC. Enne kasutamist soojendage ümbritseva õhu või inkubaatori temperatuurile (37°C). Ärge külmutage ega jätke kõrgete temperatuuride kätte. ISolate on stabiilne karbi ja pudeli etiketile märgitud tähtpäevani, kui seda on säilitatud juhendis ettenähtud tingimustes. ETTEVAATUSABINÕUD JA HOIATUSED See seade on ette nähtud kasutamiseks tervishoiutöötajatele, kes on saanud vastava koolituse, kaasa arvatud selle seadme kavandatud kasutuse alal. ISolate on läbipaistmatu. See on selle toote puhul normaalne. Ärge kasutage söödet viaalist, milles on märgata osakesi või saastumist (st ebaühtlane hägusus). ISolate peab CO2 inkubaatoris kasutamise korral olema tihedalt korgistatud vältimaks muutusi pH-s. Toode ei sisalda säilitusaineid, antibiootikume ega proteiinilisandeid. Saastamise vältimiseks käsitsege vahendeid aseptilist tehnikat kasutades. Kahjustuste ilmnemise korral mitte kasutada. Palun visake ära või tagastage tootjale, kes selle asendab. ETTEVAATUST: Riiklik (USA) seadusandlus piirab seadme müüki ning see võib toimuda üksnes arsti poolt või arsti korraldusel. LIETUVIŲ K. MAGYAR TERMÉKLEIRÁS Az ISolate ® egy sűrűség gradiens médium, amit a sperma mozgékony frakciójának az ondófolyadéktól való elválasztására terveztek. Egy kétrétegű gradiens rendszerként hatékonyan csökkenti a sejtszennyezéseket, mint pl. a holt spermát, fehér vérsejteket és más törmelékeket. Az eredményként kapott minta túlnyomóan mozgékony spermiumot tartalmaz. Az ISolate a szilika részecskéknek egy membránszűrt, aszeptikusan készült kolloid szuszpenzója, kovalens kötéssel kapcsolódó hidrofil szilánnal stabilizálva, HEPESel pufferolt HTF-ben. A sterilitás biztonsági szint (Sterilty Assurance Level (SAL ))10-3. Az ISolate nyúl pirogénteszttel megvizsgálva pirogénekre negativ volt. HASZNÁLATI UTASITÁS Katalógusszám: 99264- FELHASZNÁLÁSRA KÉSZ KOLLOID SZILIKA KÉT KONCENTRÁCIÓBAN (50% és 90%) A. Javasolt anyagok: ISolate • Irvine Scientific Katalógusszám: 99264 (6ml, 50ml vagy 100ml fiola kit) Sperm Washing Medium • Irvine Scientific Katalógusszám: 9983 Steril, egyszer használatos, kúpos centrifugacsövek • Irvine Scientific Katalógusszám: IS-325 Pasteur-pipetták, steril Centrifuga Inkubátor, 37 C° B. Gradiens készítés: Előzetes higítások nem szükségesek. A felső és alsó réteg gradiens minden fiolája kész a használatra. Folytassa a termékismertető betétlap ÁLTALÁNOS ELJÁRÁS részénél. Katalógusszám: 99275 - STOCK SOLUTION 90% sűrűség gradiens médium egy-lépéses eljárásban, vagy további higításra való alkalmazásra. A. Javasolt anyagok: ISOLATE STOCK SOLUTION •Irvine Scientific Katalógusszám: 99275 Modified Human Tubal Fluid •Irvine Scientific Katalógusszám: 90126 Sperm Washing Medium •Irvine Scientific Katalógusszám: 9983 Steril, egyszer használatos, kúpos centrifugacsövek •Irvine Scientific Katalógusszám: IS-325 Pasteur-pipetták, steril Centrifuga Inkubátor, 37C° B. Gradiens készítés: A gradiens sperma elválasztási módszer végrehajtásához két oldat szükséges: Egy felső réteg és egy alsó réteg. 1. Felső réteg oldat-50% a) Vegye a STOCK SOLUTION-t (katalógusszám: 99275) és pipettázzon 5,6 ml–t egy steril centrifugacsőbe. b) Adjon hozzá 4.4 ml Modified Human Tubal Fluidot (Katalógusszám: 90126) c) Dugaszolja be a csövet és fordítsa fel óvatosan 3-4-szer, hogy teljesen összekeveredjen. d) Címkézze meg a csövet „FELSŐ RÉTEG” ként 2. Alsó Réteg oldat-90% a) Mérjen 10ml STOCK SOLUTION-t egy steril centrifugacsőbe, és zárja le. (További higítás nem szükséges, a -STOCK SOLUTION 90%-os) b) Címkézze meg a csövet „ALSÓ RÉTEG” ként 3. Folytassa a termékismertető betétlap ÁLTALÁNOS ELJÁRÁS részénél. (MEGJEGYZÉS: 10ml Felső Réteg és 10ml Alsó Réteg körülbelül 5 ondó minta feldolgozására elegendő) Katalógusszám: 99306- CONCENTRATE Kolloid szilika koncentrátum további higításra sűrűség gradiensekre; izotóniás pufferben formulázott, és megközelíti a higítatlan Percoll® sűrűségét. Az ISolate® CONCENTRATE 50% és 90% gradiensnél volt értékelve ennek a csomag betétlapnak megfelelően. A laboratóriumok készithetnek más koncentrációju gradienseket, amelyeket értékelni kell hatékonyság szempontjából. A. Javasolt anyagok: ISolate® koncentrátum •Irvine Scientific Katalógusszám: 99306 Modified Human Tubal Fluid •Irvine Scientific Katalógusszám: 90126 Sperm Washing Medium •Irvine Scientific Katalógusszám: 9983 Steril, egyszer használatos, kúpos centrifugacsövek •Irvine Scientific Katalógusszám: IS-325 Pasteur-pipetták, steril Centrifuga Inkubátor, 37 C° B. Gradiens készítés: A gradiens sperma elválasztási módszer végrehajtásához két oldat szükséges. Egy felső réteg és egy alsó réteg 1. Felső réteg oldat-50% a) Vegye a CONCENTRATEt (Katalógusszám: 99306) és pipettázzon 4.5 ml-t egy steril centrifugacsőbe. b) Adjon 5.5 ml Modified Human Tubal Fluidot (Katalógusszám: 90126) c) Dugaszolja be a csövet és fordítsa fel óvatosan 3-4-szer, hogy teljesen összekev eredjen. d) Címkézze meg a csövet „FELSŐ RÉTEG” ként 2. Alsó Réteg oldat-90% a) Vegye a CONCENTRATEt (Katalógusszám: 99306) és pipettázzon 8.1 ml-t egy steril centrifugacsőbe. b) Adjon 1.9 ml Modified Human Tubal Fluidot (Katalógusszám: 90126) c) Dugaszolja be a csövet és fordítsa fel óvatosan 3-4-szer, hogy teljesen összekeveredjen. d) Címkézze meg a csövet „ALSÓ RÉTEG”-ként 3. Folytassa a termékismertető betétlap ÁLTALÁNOS ELJÁRÁS részénél. Megjegyzés: Az 50% és 90% kifejezések nem jelentenek tényleges koncentrációt. Az 50% és 90% relatív koncentrációk egy korábbi nomenklatúra alapján, amely az 1:9 higítású Percoll® –t definiálja 100% működő, izotóniás oldatként. ÁLTALÁNOS ELJÁRÁS A következő egy általános eljárás a mozgékony spermának az ondóból történő két-lépéses gradiens elválasztására. A térfogat és koncentráció változtatható, hogy megfeleljen az egyes laboratóriumok preferenciáinak (pl. mini-gradiens, krioprezervált ondó, három-rétegű gradiens) 1. Hozzon minden médium alkotót szobahőmérsékletre, vagy 37 C°-ra. 2. Steril pipettát használva, vigyen át 1,5-2,0 ml-t az „ALSÓ RÉTEG”-ből egy steril, egyszer használatos, kúpos centrifuga-csőbe. 3. Új, steril pipettát használva, vigyen a „FELSŐ RÉTEG” –ből egyenlő térfogatot az „ALSÓ RÉTEG” tetejére. Ezt tegye úgy, hogy a pipetta hegyével a cső oldalán az „ALSÓ RÉTEG” felszínét érinti.Óvatosan adagolja a „FELSŐ RÉTEGET” a pipetta hegyének spirális mozgatásával a cső külső szélénél felfelé, ahogy a „FELSŐ RÉTEG” emelkedik. 4. Óvatosan helyezzen 1,5-2,0 ml elfolyósodott ondót a „FELSŐ RÉTEGRE” egy új steril pipettát használva. 5. Centrifugálja 10-20 percig körülbelül 200-300x g-vel.* Óvatosan tegye szabaddá a pelletet, vagy a „FELSŐ RÉTEG” és az „ALSÓ RÉTEG” elszívásával, vagy közvetlenül, a pellet eltávolításával és egy új steril centrifugacsőbe való átvitelével. *Megjegyzés: A sperma minta minőségét értékelni kell, és figyelembe kell venni a megfelelő centrifugálási sebesség és idő meghatározásánál. Ezeket az egyes minta minősége szerint kell módosítani az eljárás optimalizálása érdekében. 6. Egy új steril pipettát használva adagoljon 2,0-3,0 ml megfelelő mosómédiumot, például Sperm Washing Mediumot, (IS Katalógusszám: 9983), vagy Modified HTF –t (IS Katalógusszám:90126) fehérje kiegészítővel. Szuszpendálja újra az izolált pelletet. Centrifugálja (~200xg)-vel 8-10 percig, majd távolítsa el a felülúszót. Ismételje meg ezt a lépést egy második mosásra. Szabaduljon meg a felülúszótól és szuszpendálja újra a pelletet a megfelelő médium alkalmas térfogatával. A minta most kész az analízisre. E termékek használatára vonatkozóan a további részletekért minden laboratóriumnak a sajátos orvosi programjukra speciálisan kifejlesztett és optimalizált saját laboratóriumi eljárásaikban és protokolljaikban kell utánanéznie. TÁROLÁSI UTASITÁSOK ÉS STABILITÁS Tárolja a bontatlan konténereket hűtve, 2° és 8 C° között. Használat előtt melegítse a környezeti hőmérsékletre vagy az inkubátor hőmérsékletére (37 C°)-ra. Ne fagyassza, ne tegye ki magas hőmérsékletnek. Az ISolate stabil a doboz és az üveg címkéjén feltüntetett lejárati időpontig, amennyiben tárolása az utasításoknak megfelelően történt. ÓVINTÉZKEDÉSEK ÉS FIGYELMEZTETÉSEK Ezt az eszközt úgy tervezték, hogy használata az eszköz tervezett alkalmazását is magába foglaló eljárásokban kiképzett személyzet által történjen. A ISolate opálosnak fog tűnni. Ez normális ennél a terméknél. Ne használja a médium olyan fioláját, ami részecskék jelenlétét, vagy szennyezés jelét mutatja (nem egyenletes zavarosság). Az ISolate-nek szorosan lezártnak kell lennie, amikor CO2 inkubátorban használják a pH változások elkerülésére. Ez a termék nem tartalmaz tartósítót, antibiotikumot sem fehérje kiegészítőt. A szennyezéssel járó problémák elkerülése érdekében, aszeptikus technikák alkalmazásával kezelje. Ha sérült, ne használja. Dobja el, vagy juttassa vissza a gyártóhoz, cserére. VIGYÁZAT: A Szövetségi (US) törvény korlátozza ennek az eszköznek az értékesítését, csak orvos által, vagy orvosi utasításra történhet. Türk PRODUKTO APRAŠYMAS ISolate® yra tankio gradiento terpė, skirta iš sėklos sekreto atskirti judriąją spermatozoidų frakciją. Ši dviejų sluoksnių gradientinė sistema veiksmingai sumažina ląstelinius teršalus, tokius kaip negyvi spermatozoidai, leukocitai ir įvairios dalelių atplaišos. Galutinis mėginys daugiausia susideda iš judrių spermatozoidų. 3. Nauja sterilia pipete ant APATINIO SLUOKSNIO viršaus perkelkite tokį patį VIRŠUTINIO SLUOKSNIO tirpalo kiekį. Tai atliekama pipetės antgaliu paliečiant APATINIO SLUOKSNIO paviršių prie mėgintuvėlio šono. Atsargiai išlašinkite VIRŠUTINĮ SLUOKSNĮ spirališkai sukdami pipetės antgalį aplink mėgintuvėlio kraštą link viršaus, kai VIRŠUTINIO SLUOKSNIO lygis kyla. ISolate yra membraninį filtrą naudojant filtruota, aseptiškai apdorota koloidinė silicio dioksido dalelių suspensija, stabilizuota kovalentinėmis jungtimis prisijungusiu hidrofiliniu silanu HEPES buferintame HTF skystyje. Sterilumo užtikrinimo lygis (SAL) yra 10-3. Atlikus pirogenų nustatymo bandymą su triušiais, ISolate karščiavimo nesukėlė. 4. Nauja sterilia pipete 1,5–2,0 ml suskystėjusios spermos atsargiai užlašinkite ant VIRŠUTINIO SLUOKSNIO. NAUDOJIMO NURODYMAI Katalogo Nr. 99264 – PARUOŠTAS NAUDOTI KOLOIDINIS SILICIO DIOKSIDAS, DVIEJŲ KONCENTRACIJŲ (50% ir 90%) A. Rekomenduojamos medžiagos: ISolate • Irvine Scientific katalogo Nr. 99264 (6 ml, 50ml arba 100 ml buteliukų rinkinys) Sperm Washing Medium (spermos plovimo terpė) • Irvine Scientific katalogo Nr. 9983 Sterilūs, vienkartiniai kūginiai centrifuginiai mėgintuvėliai • Irvine Scientific katalogo Nr. IS-325 Pastero pipetės, sterilios Centrifuga Inkubatorius, 37 °C temperatūra B. Gradiento paruošimas: Iš anksto praskiesti nereikia. Visi viršutinio ir apatinio sluoksnio gradiento buteliukai yra paruošti naudoti. Toliau žiūrėkite produkto pakuotės lapelio skyrių BENDROJI PROCEDŪRA. Katalogo Nr. 99275 – STOCK SOLUTION (pradinis tirpalas) 90% tankio grandientinė terpė, skirta vieno etapo procedūrai arba tolesniam skiedimui. A. Rekomenduojamos medžiagos: ISolate STOCK SOLUTION (pradinis tirpalas) •Irvine Scientific katalogo Nr. 99275 Modified Human Tubal Fluid •Irvine Scientific katalogo Nr. 90126 Sperm Washing Medium (spermos plovimo terpė) •Irvine Scientific katalogo Nr. 9983 Sterilūs, vienkartiniai kūginiai centrifuginiai mėgintuvėliai •Irvine Scientific katalogo Nr. IS-325 Pastero pipetės, sterilios Centrifuga Inkubatorius, 37 °C temperatūra B. Gradiento paruošimas: Taikant gradientinį spermatozoidų atskyrimo metodą, naudojami du tirpalai: viršutinio sluoksnio tirpalas ir apatinio sluoksnio tirpalas. 1. Viršutinio sluoksnio tirpalas – 50%: a) Paėmę STOCK SOLUTION (katalogo Nr. 99275), 5,6 ml pradinio tirpalo pipete įlašinkite į sterilų centrifuginį mėgintuvėlį; b) Pridėkite 4.4 ml Modified Human Tubal Fluid terpės (katalogo Nr. 90126); c) Mėgintuvėlį uždenkite ir atsargiai 3–4 kartus apverskite, kad jo turinys visiškai susimaišytų; d) Mėgintuvėlį pažymėkite VIRŠUTINIS SLUOK SNIS; 2. Apatinio sluoksnio tirpalas – 90%: a) 10 ml STOCK SOLUTION pradinio tirpalo atid alinkite į sterilų centrifuginį mėgintuvėlį ir uždenkite (daugiau skiesti nereikia – STOCK SOLUTION yra 90% koncentracijos). b) Mėgintuvėlį pažymėkite APATINIS SLUOK SNIS; 3. Toliau žiūrėkite produkto pakuotės lapelio skyrių BENDROJI PROCEDŪRA. (PASTABA: 10 ml virš utinio sluoksnio tirpalo ir 10 ml apatinio sluoksnio tirpalo kiekis yra skirtas apdoroti apytikriai 5 spermos mėginius.) Katalogo Nr. 99306 – CONCENTRATE (koncentratas) Koloidinio silicio dioksido koncentratas, skirtas tolesniam skiedimui pagal tankio gradientą; paruoštas izotoniniame buferiniame tirpale, tankis apytikriai atitinka neskiestos Percoll ® terpės tankį. ISolate ® CONCENTRATE koncentratą ištyrus šiame pakuotės lapelyje nurodytais metodais, nustatyta 50% ir 90% gradientų koncentracija. Kiekviena laboratorija gali pasigaminti skirtingų koncentracijų gradientus, kurių veiksmingumą reikia įvertinti. A. Rekomenduojamos medžiagos: ISolate® koncentratas •Irvine Scientific katalogo Nr. 99306 Modified Human Tubal Fluid •Irvine Scientific katalogo Nr. 90126 Sperm Washing Medium (spermos plovimo terpė) •Irvine Scientific katalogo Nr. 9983 Sterilūs, vienkartiniai kūginiai centrifuginiai mėgintuvėliai •Irvine Scientific katalogo Nr. IS-325 Pastero pipetės, sterilios Centrifuga Inkubatorius, 37 °C temperatūra B. Gradiento paruošimas: Taikant gradientinį spermatozoidų atskyrimo metodą, naudojami du tirpalai: viršutinio sluoksnio tirpalas ir apatinio sluoksnio tirpalas. 1. Viršutinio sluoksnio tirpalas – 50%: a) Paėmę CONCENTRATE (katalogo Nr. 99306), 4.5 ml koncentrato pipete įlašinkite į sterilų centrifuginį mėgintuvėlį; b) Pridėkite 5.5 ml Modified Human Tubal Fluid terpės (katalogo Nr. 90126); c) Mėgintuvėlį uždenkite ir atsargiai 3–4 kartus apverskite, kad jo turinys visiškai susimaišytų; d) Mėgintuvėlį pažymėkite VIRŠUTINIS SLUOK SNIS; 2. Apatinio sluoksnio tirpalas – 90%: a) Paėmę CONCENTRATE (katalogo Nr. 99306), 8.1 ml koncentrato pipete įlašinkite į sterilų centrifuginį mėgintuvėlį; b) Pridėkite 1.9 ml Modified Human Tubal Fluid terpės (katalogo Nr. 90126); c) Mėgintuvėlį uždenkite ir atsargiai 3–4 kartus apverskite, kad jo turinys visiškai susimaišytų; d) Mėgintuvėlį pažymėkite APATINIS SLUOK SNIS; 3. Toliau žiūrėkite produkto pakuotės lapelio skyrių BENDROJI PROCEDŪRA. (PASTABA: 10 ml viršutinio sluoksnio tirpalo ir 10 ml apatinio sluoksnio tirpalo kiekis yra skirtas apdoroti apytikriai 5 spermos mėginius.) Pastaba: 50% ir 90% dydžiai neapibrėžia konkrečios koncentracijos. 50% ir 90% yra santykinės koncentracijos dydžiai, pagrįsti ankstesne nomenklatūra, kuri apibrėžė 1:9 santykiu praskiestą Percoll ® preparatą kaip lygiavertį 100% darbiniam izotoniniam tirpalui. BENDROJI PROCEDŪRA Toliau aprašyta bendroji procedūra dviejų etapų grandientiniam judrių spermotozoidų išskyrimui iš spermos. Tūrį ir koncentraciją galima keisti pagal atskiros laboratorijos poreikius (t. y., minigradientas, kriokonservuota sėkla, trisluoksnis gradientas). 1. Visus terpės komponentus atšildykite iki kambario arba 37 °C temperatūros. 2. Sterilia pipete perkelkite 1,5–2,0 ml APATINIO SLUOKSNIO tirpalo į sterilų vienkartinį kūginį centrifūgavimo mėgintuvėlį 5. Centrifuguokite 10–20 minučių esant apytikriai 200–300 x g režimui.* Atsargiai išskirkite granulę įsiurbdami VIRŠUTINIO ir APATINIO SLUOKSNIO tirpalo arba granulę tiesiai išsiurbdami ir perkeldami į naują sterilų centrifuginį mėgintuvėlį. Pastaba: Reikia įvertinti spermos mėginio kokybę ir į tai atsižvelgiant numatyti tinkamą centrifugavimo greitį ir laiką. Procedūros optimizavimui, juos reikia pakoreguoti atsižvelgiant į atskiro mėginio kokybę. 6. Nauja sterilia pipete įlašinkite 2,0–3,0 ml atitinkamos plovimo terpės, tokios kaip Sperm Washing Medium (IS katalogo Nr. 9983) arba Modified HTF (IS katalogo Nr. 90126) su baltyminiais priedais. Izoliuotą granulę resuspenduokite. Centrifuguokite 8–10 minučių (~200 x g režimu) ir pašalinkite supernatantą. Pakartokite šį etapą antrojo plovimo metu. Išmeskite supernatantą, o granulę resuspenduokite tinkamame reikiamos terpės kiekyje. Dabar mėginys yra paruoštas analizei. Dėl išsamesnių šių produktų naudojimo gairių kiekviena laboratorija turi žiūrėti savo vidaus darbo tvarkos taisykles ir metodinius nurodymus, specialiai parengtus ir optimizuotus pagal atskiros medicininės programos nuostatas. LAIKYMO SĄLYGOS IR STABILUMAS Neatidarytas talpykles laikykite šaldytuve 2 ºC–8 ºC temperatūroje. Prieš naudojimą atšildykite iki aplinkos arba inkubatoriaus (37 °C) temperatūros. Negalima užšaldyti, būtina saugoti nuo aukštos temperatūros. Laikant pagal nurodymus, ISolate produktas išlieka stabilus iki tinkamumo datos, pažymėtos dėžutės ir butelio etiketėse. ATSARGUMO PRIEMONĖS IR ĮSPĖJIMAI Šis prietaisas yra skirtas naudoti darbuotojams, apmokytiems atlikti procedūras, susijusias su prietaiso taikymu pagal numatytą paskirtį. ISolate išvaizda yra matinė. Tai šiam produktui yra normalu. Negalima naudoti jokio terpės buteliuko, jei skystyje matyti kietųjų dalelių ar užterštumo (nevienalytis drumstumas). Laikant CO 2 inkubatoriuje, ISolate reikia sandariai uždengti, kad nepasikeistų pH pusiausvyra. Šio produkto sudėtyje nėra konservantų, antibiotikų ir baltymų priedų. Norint išvengti užkrėtimo, naudojimo metu reikia laikytis metodinių aseptikos reikalavimų. Jei produktas pažeistas, jo nenaudokite. Išmeskite arba grąžinkite gamintojui, kad pakeistų. PERSPĖJIMAS: Pagal federalinius (JAV) įstatymus, šis prietaisas gali būti parduodamas tik gydytojų arba jų užsakymu. ÜRÜN TANIMI ISolate® spermin motil fraksiyonunu seminal sıvıdan ayırmak için tasarlanmış bir yoğunluk aşamalı medyumdur. İki katmanlı bir sistem olarak ölü hücre, beyaz kan hücreleri ve debris gibi hücre kontaminantlarını etkili bir şekilde azaltır. Elde edilen örnek, baskın olarak motil sperm içerir. ISolate membran filtreli, aseptik olarak işlenmiş bir kolloidal silika partikülleri süspansiyonudur. HEPES-tamponlu HTF’deki eşdeğerli bir şekilde bağlanmış hidrofilik silanla stabilize edilmiştir. Sterilite güvence düzeyi 10-3’tür. ISolate test edilmiştir ve tavşan pirojeni testinde pirojenlere karşı negatif olduğu bulunmuştur. KULLANIM YÖNERGELERİ Katalog #99264 – İKİ KONSANTRASYON HALİNDE (%50 ve %90) KULLANIMA HAZIR KOLLOİDAL SİLİKA A. Önerilen Materyaller: ISolate • Irvine Scientic Katalog #99264 (6mL , 50 mL veya 100 mL viyal kiti) Sperm Yıkama Medyumu • Irvine Scientic Katalog #9983; Steril, tek kullanımlık konik santrifüj tüpleri • Irvine Scientic Katalog #IS-325 Pastör Pipetleri, steril Santrifüj İnkübatör, 37°C B. Gradyan Hazırlama: Hiçbir ön dilüzyon gerekmez. Üst ve alt katman gradyanın her bir viyali kullanıma hazırdır. Ürün broşürünün GENEL PROSEDÜR bölümüne geçin. Katalog #99275 - STOK SOLÜSYON Tek adımlı bir prosedürde veya daha fazla dilüsyon için kullanıma yönelik %90 yoğunluk aşamalı medyum. A. Önerilen Materyaller: ISolate Stok Solüsyon • Irvine Scientic Katalog #99275 Modifiye İnsan Tübal Sıvısı • Irvine Scientic Katalog #90126 Sperm Yıkama Medyumu • Irvine Scientic Katalog #9983 Steril, tek kullanımlık konik santrifüj tüpleri • Irvine Scientic Katalog #IS-325 Pastör Pipetleri, steril Santrifüj İnkübatör, 37°C B. Gradyan Hazırlama: Gradyan sperm ayırma yöntemini uygulamak için iki solüsyon gerekir: bir üst katman ve bir alt katman. 1. Üst Katman solüsyonu - %50: a) STOK SOLÜSYON’u alın (Katalog #99275) ve steril bir santrifüj tüpüne 5.6 mL pipetleyin b) Modifiye İnsan Tübal Sıvısından (Katalog #90126) 4.4 mL ekleyin c) Tüpü tıpalayın ve tam karışma için 3-4 kez nazikçe ters çevirin d) Tüpü “ÜST KATMAN” diye etiketleyin 2. Alt Katman solüsyonu - %90: a) STOK SOLÜSYON’un 10 mL’sini steril bir santrifüj tüpüne alikotlayın ve tıpalayın (Başka dilüsyon gerekmez; Stok Solüsyon %90’dır) b) Tüpü “ALT KATMAN” diye etiketleyin 3. Ürün broşürünün GENEL PROSEDÜR bölümüne geçin. (NOT: 10 mL Üst Katman ve 10 mL Alt Katman yaklaşık 5 semen örneğinin işlenmesini sağlar.) Katalog #99306 – KONSANTRAT Yoğunluk aşamalarına daha fazla dilüsyon için kolloidal silika konsantratı; izotonik bir tamponda formüle edilmiştir ve seyreltilmemiş Percoll®’un yoğunluğuna yakındır. ISolate® KONSANTRAT bu paket proşürüne göre %50 ve %90’lık gradyanlarda değerlendirilmiştir. Her laboratuar, etkililiğini değerlendirmek üzere farklı konsantrasyonlarda gradyanlar yapmak isteyebilir. A. Önerilen Materyaller: ISolate® Konsantrat • Irvine Scientic Katalog #99306 Modifiye İnsan Tübal Sıvısı • Irvine Scientic Katalog #90126 Sperm Yıkama Medyumu • Irvine Scientic Katalog #9983 Steril, tek kullanımlık konik santrifüj tüpleri • Irvine Scientic Katalog #IS-325 Pastör Pipetleri, steril Santrifüj İnkübatör, 37°C B. Gradyan Hazırlama: Gradyan sperm ayırma yöntemini uygulamak için iki solüsyon gerekir: bir üst katman ve bir alt katman. 1. Üst Katman solüsyonu - %50: a) KONSANTRATI (Katalog #99306) alın ve steril bir santrifüj tüpüne 4.5 mL pipetleyin b) Modifiye İnsan Tübal Sıvısından (Katalog #90126) 5.5 mL ekleyin c) Tüpü tıpalayın ve tam karışma için 3-4 kez nazikçe ters çevirin d) Tüpü “ÜST KATMAN” diye etiketleyin 2. Alt Katman solüsyonu - %90: a) KONSANTRATI (Katalog #99306) alın ve steril bir santrifüj tüpüne 8.1 mL pipetleyin b) Modifiye İnsan Tübal Sıvısından (Katalog #90126) 1.9 mL ekleyin c) Tüpü tıpalayın ve tam karışma için 3-4 kez nazikçe ters çevirin d) Tüpü “ALT KATMAN” diye etiketleyin 3. Ürün broşürünün GENEL PROSEDÜR bölümüne geçin. NOT: %50 ve %90 terimleri gerçek konsantrasyonu temsil etmez. %50 ve %90, Percoll®’un 1:9 dilüsyonunu %100 çalışan, izotonik bir solüsyona eşit olarak tanımlayan önceki nomenklatüre dayalı göreli konsantrasyonlardır. GENEL PROSEDÜR Aşağıda, motil spermi semenden ayırmaya yönelik iki adımlı bir gradyan ayırma genel prosedürü sunulmaktadır. Hacim ve kontrasyon, her bir laboratuarın tercihini karşılayacak şekilde değiştirilebilir (yani mini-gradyan kriyoprezerve semen, üç-katmanlı gradyan). 1. Tüm medya bileşenlerini oda sıcaklığına veya 37°C’a getirin. 2. Steril bir pipet kullanarak “ALT KATMAN”ın 1.5-2.0 mL’sini steril, tek kullanımlık, konik bir santrifüj tüpüne aktarın. 3. Yeni bir steril pipet kullanarak eşit hacimde “ÜST KATMAN”ı “ALT KATMAN”ın üzerine aktarın. Bu, “ALT KATMAN”ın yüzeyinin pipet ucuyla tüpün yan tarafına temas ettirilmesiyle sağlanır. Pipet ucunu tüp etrafında yukarı doğru bir hareketle spiral şekilde hareket ettirerek “ÜST KATMAN”ı dikkatli bir şekilde aktarın. 4. Yeni bir steril pipet kullanarak “ÜST KATMAN”a nazikça 1.5-2.0 mL sıvı semen yerleştirin. 5. Yaklaşık 200 - 300xg ile 10-20 dakika santrifüjleme yapın.* Ya “ÜST” ve “ALT KATMANLARI” çıkararak, ya da doğrudan pelleti çıkarıp yeni bir steril santrifüj tüpüne aktararak pelleti dikkatli bir şekilde ortaya çıkarın. Not: Sperm örneğinin kalitesi değerlendirilmeli ve uygun santrifüjleme hızı ve zamanı belirlenirken göz önünde bulundurulmalıdır. Bunlar, prosedürün optimizasyonuna yönelik örnek kalitesine göre ayarlanmalıdır. 6. Yeni bir steril pipet kullanarak, Sperm Yıkama Medyumu (IS Katalog #9983) veya Modifiye Edilmiş HTF’den (IS Katalog #90126) 2.0 - 3.0 mL’lik bir miktarı protein takviyesiyle birlikte ekleyin. İzole pelleti yeniden süspanse edin. 8-10 dakika boyunca santrifüjleme (~200xg) yapın ve üst fazı çıkarın. İkinci bir yıkama için bu adımı tekrarlayın. Üst fazı atın ve uygun medyumdan uygun bir hacim kullanarak pelleti yeniden süspanse edin. Örnek şimdi analiz için hazırdır. Bu ürünlerin kullanımıyla ilgili ek ayrıntılar için, her laboratuar, kendi medikal programınız için özel olarak geliştirilmiş ve optimize edilmiş olan kendi laboratuar prosedürlerine ve protokollerine başvurmalıdır. SAKLAMA TALİMATLARI VE STABİLİTE Açılmamış kapları 2°-8°C’da saklayın. Kullanım öncesi ortam sıcaklığıan veya inkübatör (37°C) sıcaklığına getirin. Dondurmayın veya yüksek sıcaklıklara maruz bırakmayın. ISolate bu şekilde saklandığında, kutu ve şişe etiketi üzerinde belirtilen son kullanım tarihine kadar stabildir. ÖNLEMLER VE UYARILAR Bu cihaz, cihazla ilgili olarak tanımlanan uygulamaları da kapsayan yardımla üreme prosedürlerinde eğitimli personel tarafından kullanıma yönelik olarak tasarlanmıştır. ISolate opak görünür. Bu ürün için bu normaldir. Partikülat madde veya kontaminasyon (tektip olmayan bulanıklık) kanıtı içeren herhangi bir medyum viyali kullanmayın. Bu üründe hiçbir koruyucu madde, antibiyotik veya protein takviyesi bulunmamaktadır. Kontaminasyonla ilgili sorunlardan sakınmak için aseptik teknikler kullanın. Hasar durumunda kullanmayın. Atın veya değiştirmek için üreticiye iade edin. Dikkat: Federal (ABD) yasalar bu cihazın bir doktor tarafından satılması veya sipariş edilmesi sınırlamasını getirmektedir. LIETUVIŲ K. MAGYAR TERMÉKLEIRÁS Az ISolate ® egy sűrűség gradiens médium, amit a sperma mozgékony frakciójának az ondófolyadéktól való elválasztására terveztek. Egy kétrétegű gradiens rendszerként hatékonyan csökkenti a sejtszennyezéseket, mint pl. a holt spermát, fehér vérsejteket és más törmelékeket. Az eredményként kapott minta túlnyomóan mozgékony spermiumot tartalmaz. Az ISolate a szilika részecskéknek egy membránszűrt, aszeptikusan készült kolloid szuszpenzója, kovalens kötéssel kapcsolódó hidrofil szilánnal stabilizálva, HEPESel pufferolt HTF-ben. A sterilitás biztonsági szint (Sterilty Assurance Level (SAL ))10-3. Az ISolate nyúl pirogénteszttel megvizsgálva pirogénekre negativ volt. HASZNÁLATI UTASITÁS Katalógusszám: 99264- FELHASZNÁLÁSRA KÉSZ KOLLOID SZILIKA KÉT KONCENTRÁCIÓBAN (50% és 90%) A. Javasolt anyagok: ISolate • Irvine Scientific Katalógusszám: 99264 (6ml, 50ml vagy 100ml fiola kit) Sperm Washing Medium • Irvine Scientific Katalógusszám: 9983 Steril, egyszer használatos, kúpos centrifugacsövek • Irvine Scientific Katalógusszám: IS-325 Pasteur-pipetták, steril Centrifuga Inkubátor, 37 C° B. Gradiens készítés: Előzetes higítások nem szükségesek. A felső és alsó réteg gradiens minden fiolája kész a használatra. Folytassa a termékismertető betétlap ÁLTALÁNOS ELJÁRÁS részénél. Katalógusszám: 99275 - STOCK SOLUTION 90% sűrűség gradiens médium egy-lépéses eljárásban, vagy további higításra való alkalmazásra. A. Javasolt anyagok: ISOLATE STOCK SOLUTION •Irvine Scientific Katalógusszám: 99275 Modified Human Tubal Fluid •Irvine Scientific Katalógusszám: 90126 Sperm Washing Medium •Irvine Scientific Katalógusszám: 9983 Steril, egyszer használatos, kúpos centrifugacsövek •Irvine Scientific Katalógusszám: IS-325 Pasteur-pipetták, steril Centrifuga Inkubátor, 37C° B. Gradiens készítés: A gradiens sperma elválasztási módszer végrehajtásához két oldat szükséges: Egy felső réteg és egy alsó réteg. 1. Felső réteg oldat-50% a) Vegye a STOCK SOLUTION-t (katalógusszám: 99275) és pipettázzon 5,6 ml–t egy steril centrifugacsőbe. b) Adjon hozzá 4.4 ml Modified Human Tubal Fluidot (Katalógusszám: 90126) c) Dugaszolja be a csövet és fordítsa fel óvatosan 3-4-szer, hogy teljesen összekeveredjen. d) Címkézze meg a csövet „FELSŐ RÉTEG” ként 2. Alsó Réteg oldat-90% a) Mérjen 10ml STOCK SOLUTION-t egy steril centrifugacsőbe, és zárja le. (További higítás nem szükséges, a -STOCK SOLUTION 90%-os) b) Címkézze meg a csövet „ALSÓ RÉTEG” ként 3. Folytassa a termékismertető betétlap ÁLTALÁNOS ELJÁRÁS részénél. (MEGJEGYZÉS: 10ml Felső Réteg és 10ml Alsó Réteg körülbelül 5 ondó minta feldolgozására elegendő) Katalógusszám: 99306- CONCENTRATE Kolloid szilika koncentrátum további higításra sűrűség gradiensekre; izotóniás pufferben formulázott, és megközelíti a higítatlan Percoll® sűrűségét. Az ISolate® CONCENTRATE 50% és 90% gradiensnél volt értékelve ennek a csomag betétlapnak megfelelően. A laboratóriumok készithetnek más koncentrációju gradienseket, amelyeket értékelni kell hatékonyság szempontjából. A. Javasolt anyagok: ISolate® koncentrátum •Irvine Scientific Katalógusszám: 99306 Modified Human Tubal Fluid •Irvine Scientific Katalógusszám: 90126 Sperm Washing Medium •Irvine Scientific Katalógusszám: 9983 Steril, egyszer használatos, kúpos centrifugacsövek •Irvine Scientific Katalógusszám: IS-325 Pasteur-pipetták, steril Centrifuga Inkubátor, 37 C° B. Gradiens készítés: A gradiens sperma elválasztási módszer végrehajtásához két oldat szükséges. Egy felső réteg és egy alsó réteg 1. Felső réteg oldat-50% a) Vegye a CONCENTRATEt (Katalógusszám: 99306) és pipettázzon 4.5 ml-t egy steril centrifugacsőbe. b) Adjon 5.5 ml Modified Human Tubal Fluidot (Katalógusszám: 90126) c) Dugaszolja be a csövet és fordítsa fel óvatosan 3-4-szer, hogy teljesen összekev eredjen. d) Címkézze meg a csövet „FELSŐ RÉTEG” ként 2. Alsó Réteg oldat-90% a) Vegye a CONCENTRATEt (Katalógusszám: 99306) és pipettázzon 8.1 ml-t egy steril centrifugacsőbe. b) Adjon 1.9 ml Modified Human Tubal Fluidot (Katalógusszám: 90126) c) Dugaszolja be a csövet és fordítsa fel óvatosan 3-4-szer, hogy teljesen összekeveredjen. d) Címkézze meg a csövet „ALSÓ RÉTEG”-ként 3. Folytassa a termékismertető betétlap ÁLTALÁNOS ELJÁRÁS részénél. Megjegyzés: Az 50% és 90% kifejezések nem jelentenek tényleges koncentrációt. Az 50% és 90% relatív koncentrációk egy korábbi nomenklatúra alapján, amely az 1:9 higítású Percoll® –t definiálja 100% működő, izotóniás oldatként. ÁLTALÁNOS ELJÁRÁS A következő egy általános eljárás a mozgékony spermának az ondóból történő két-lépéses gradiens elválasztására. A térfogat és koncentráció változtatható, hogy megfeleljen az egyes laboratóriumok preferenciáinak (pl. mini-gradiens, krioprezervált ondó, három-rétegű gradiens) 1. Hozzon minden médium alkotót szobahőmérsékletre, vagy 37 C°-ra. 2. Steril pipettát használva, vigyen át 1,5-2,0 ml-t az „ALSÓ RÉTEG”-ből egy steril, egyszer használatos, kúpos centrifuga-csőbe. 3. Új, steril pipettát használva, vigyen a „FELSŐ RÉTEG” –ből egyenlő térfogatot az „ALSÓ RÉTEG” tetejére. Ezt tegye úgy, hogy a pipetta hegyével a cső oldalán az „ALSÓ RÉTEG” felszínét érinti.Óvatosan adagolja a „FELSŐ RÉTEGET” a pipetta hegyének spirális mozgatásával a cső külső szélénél felfelé, ahogy a „FELSŐ RÉTEG” emelkedik. 4. Óvatosan helyezzen 1,5-2,0 ml elfolyósodott ondót a „FELSŐ RÉTEGRE” egy új steril pipettát használva. 5. Centrifugálja 10-20 percig körülbelül 200-300x g-vel.* Óvatosan tegye szabaddá a pelletet, vagy a „FELSŐ RÉTEG” és az „ALSÓ RÉTEG” elszívásával, vagy közvetlenül, a pellet eltávolításával és egy új steril centrifugacsőbe való átvitelével. *Megjegyzés: A sperma minta minőségét értékelni kell, és figyelembe kell venni a megfelelő centrifugálási sebesség és idő meghatározásánál. Ezeket az egyes minta minősége szerint kell módosítani az eljárás optimalizálása érdekében. 6. Egy új steril pipettát használva adagoljon 2,0-3,0 ml megfelelő mosómédiumot, például Sperm Washing Mediumot, (IS Katalógusszám: 9983), vagy Modified HTF –t (IS Katalógusszám:90126) fehérje kiegészítővel. Szuszpendálja újra az izolált pelletet. Centrifugálja (~200xg)-vel 8-10 percig, majd távolítsa el a felülúszót. Ismételje meg ezt a lépést egy második mosásra. Szabaduljon meg a felülúszótól és szuszpendálja újra a pelletet a megfelelő médium alkalmas térfogatával. A minta most kész az analízisre. E termékek használatára vonatkozóan a további részletekért minden laboratóriumnak a sajátos orvosi programjukra speciálisan kifejlesztett és optimalizált saját laboratóriumi eljárásaikban és protokolljaikban kell utánanéznie. TÁROLÁSI UTASITÁSOK ÉS STABILITÁS Tárolja a bontatlan konténereket hűtve, 2° és 8 C° között. Használat előtt melegítse a környezeti hőmérsékletre vagy az inkubátor hőmérsékletére (37 C°)-ra. Ne fagyassza, ne tegye ki magas hőmérsékletnek. Az ISolate stabil a doboz és az üveg címkéjén feltüntetett lejárati időpontig, amennyiben tárolása az utasításoknak megfelelően történt. ÓVINTÉZKEDÉSEK ÉS FIGYELMEZTETÉSEK Ezt az eszközt úgy tervezték, hogy használata az eszköz tervezett alkalmazását is magába foglaló eljárásokban kiképzett személyzet által történjen. A ISolate opálosnak fog tűnni. Ez normális ennél a terméknél. Ne használja a médium olyan fioláját, ami részecskék jelenlétét, vagy szennyezés jelét mutatja (nem egyenletes zavarosság). Az ISolate-nek szorosan lezártnak kell lennie, amikor CO2 inkubátorban használják a pH változások elkerülésére. Ez a termék nem tartalmaz tartósítót, antibiotikumot sem fehérje kiegészítőt. A szennyezéssel járó problémák elkerülése érdekében, aszeptikus technikák alkalmazásával kezelje. Ha sérült, ne használja. Dobja el, vagy juttassa vissza a gyártóhoz, cserére. VIGYÁZAT: A Szövetségi (US) törvény korlátozza ennek az eszköznek az értékesítését, csak orvos által, vagy orvosi utasításra történhet. Türk PRODUKTO APRAŠYMAS ISolate® yra tankio gradiento terpė, skirta iš sėklos sekreto atskirti judriąją spermatozoidų frakciją. Ši dviejų sluoksnių gradientinė sistema veiksmingai sumažina ląstelinius teršalus, tokius kaip negyvi spermatozoidai, leukocitai ir įvairios dalelių atplaišos. Galutinis mėginys daugiausia susideda iš judrių spermatozoidų. 3. Nauja sterilia pipete ant APATINIO SLUOKSNIO viršaus perkelkite tokį patį VIRŠUTINIO SLUOKSNIO tirpalo kiekį. Tai atliekama pipetės antgaliu paliečiant APATINIO SLUOKSNIO paviršių prie mėgintuvėlio šono. Atsargiai išlašinkite VIRŠUTINĮ SLUOKSNĮ spirališkai sukdami pipetės antgalį aplink mėgintuvėlio kraštą link viršaus, kai VIRŠUTINIO SLUOKSNIO lygis kyla. ISolate yra membraninį filtrą naudojant filtruota, aseptiškai apdorota koloidinė silicio dioksido dalelių suspensija, stabilizuota kovalentinėmis jungtimis prisijungusiu hidrofiliniu silanu HEPES buferintame HTF skystyje. Sterilumo užtikrinimo lygis (SAL) yra 10-3. Atlikus pirogenų nustatymo bandymą su triušiais, ISolate karščiavimo nesukėlė. 4. Nauja sterilia pipete 1,5–2,0 ml suskystėjusios spermos atsargiai užlašinkite ant VIRŠUTINIO SLUOKSNIO. NAUDOJIMO NURODYMAI Katalogo Nr. 99264 – PARUOŠTAS NAUDOTI KOLOIDINIS SILICIO DIOKSIDAS, DVIEJŲ KONCENTRACIJŲ (50% ir 90%) A. Rekomenduojamos medžiagos: ISolate • Irvine Scientific katalogo Nr. 99264 (6 ml, 50ml arba 100 ml buteliukų rinkinys) Sperm Washing Medium (spermos plovimo terpė) • Irvine Scientific katalogo Nr. 9983 Sterilūs, vienkartiniai kūginiai centrifuginiai mėgintuvėliai • Irvine Scientific katalogo Nr. IS-325 Pastero pipetės, sterilios Centrifuga Inkubatorius, 37 °C temperatūra B. Gradiento paruošimas: Iš anksto praskiesti nereikia. Visi viršutinio ir apatinio sluoksnio gradiento buteliukai yra paruošti naudoti. Toliau žiūrėkite produkto pakuotės lapelio skyrių BENDROJI PROCEDŪRA. Katalogo Nr. 99275 – STOCK SOLUTION (pradinis tirpalas) 90% tankio grandientinė terpė, skirta vieno etapo procedūrai arba tolesniam skiedimui. A. Rekomenduojamos medžiagos: ISolate STOCK SOLUTION (pradinis tirpalas) •Irvine Scientific katalogo Nr. 99275 Modified Human Tubal Fluid •Irvine Scientific katalogo Nr. 90126 Sperm Washing Medium (spermos plovimo terpė) •Irvine Scientific katalogo Nr. 9983 Sterilūs, vienkartiniai kūginiai centrifuginiai mėgintuvėliai •Irvine Scientific katalogo Nr. IS-325 Pastero pipetės, sterilios Centrifuga Inkubatorius, 37 °C temperatūra B. Gradiento paruošimas: Taikant gradientinį spermatozoidų atskyrimo metodą, naudojami du tirpalai: viršutinio sluoksnio tirpalas ir apatinio sluoksnio tirpalas. 1. Viršutinio sluoksnio tirpalas – 50%: a) Paėmę STOCK SOLUTION (katalogo Nr. 99275), 5,6 ml pradinio tirpalo pipete įlašinkite į sterilų centrifuginį mėgintuvėlį; b) Pridėkite 4.4 ml Modified Human Tubal Fluid terpės (katalogo Nr. 90126); c) Mėgintuvėlį uždenkite ir atsargiai 3–4 kartus apverskite, kad jo turinys visiškai susimaišytų; d) Mėgintuvėlį pažymėkite VIRŠUTINIS SLUOK SNIS; 2. Apatinio sluoksnio tirpalas – 90%: a) 10 ml STOCK SOLUTION pradinio tirpalo atid alinkite į sterilų centrifuginį mėgintuvėlį ir uždenkite (daugiau skiesti nereikia – STOCK SOLUTION yra 90% koncentracijos). b) Mėgintuvėlį pažymėkite APATINIS SLUOK SNIS; 3. Toliau žiūrėkite produkto pakuotės lapelio skyrių BENDROJI PROCEDŪRA. (PASTABA: 10 ml virš utinio sluoksnio tirpalo ir 10 ml apatinio sluoksnio tirpalo kiekis yra skirtas apdoroti apytikriai 5 spermos mėginius.) Katalogo Nr. 99306 – CONCENTRATE (koncentratas) Koloidinio silicio dioksido koncentratas, skirtas tolesniam skiedimui pagal tankio gradientą; paruoštas izotoniniame buferiniame tirpale, tankis apytikriai atitinka neskiestos Percoll ® terpės tankį. ISolate ® CONCENTRATE koncentratą ištyrus šiame pakuotės lapelyje nurodytais metodais, nustatyta 50% ir 90% gradientų koncentracija. Kiekviena laboratorija gali pasigaminti skirtingų koncentracijų gradientus, kurių veiksmingumą reikia įvertinti. A. Rekomenduojamos medžiagos: ISolate® koncentratas •Irvine Scientific katalogo Nr. 99306 Modified Human Tubal Fluid •Irvine Scientific katalogo Nr. 90126 Sperm Washing Medium (spermos plovimo terpė) •Irvine Scientific katalogo Nr. 9983 Sterilūs, vienkartiniai kūginiai centrifuginiai mėgintuvėliai •Irvine Scientific katalogo Nr. IS-325 Pastero pipetės, sterilios Centrifuga Inkubatorius, 37 °C temperatūra B. Gradiento paruošimas: Taikant gradientinį spermatozoidų atskyrimo metodą, naudojami du tirpalai: viršutinio sluoksnio tirpalas ir apatinio sluoksnio tirpalas. 1. Viršutinio sluoksnio tirpalas – 50%: a) Paėmę CONCENTRATE (katalogo Nr. 99306), 4.5 ml koncentrato pipete įlašinkite į sterilų centrifuginį mėgintuvėlį; b) Pridėkite 5.5 ml Modified Human Tubal Fluid terpės (katalogo Nr. 90126); c) Mėgintuvėlį uždenkite ir atsargiai 3–4 kartus apverskite, kad jo turinys visiškai susimaišytų; d) Mėgintuvėlį pažymėkite VIRŠUTINIS SLUOK SNIS; 2. Apatinio sluoksnio tirpalas – 90%: a) Paėmę CONCENTRATE (katalogo Nr. 99306), 8.1 ml koncentrato pipete įlašinkite į sterilų centrifuginį mėgintuvėlį; b) Pridėkite 1.9 ml Modified Human Tubal Fluid terpės (katalogo Nr. 90126); c) Mėgintuvėlį uždenkite ir atsargiai 3–4 kartus apverskite, kad jo turinys visiškai susimaišytų; d) Mėgintuvėlį pažymėkite APATINIS SLUOK SNIS; 3. Toliau žiūrėkite produkto pakuotės lapelio skyrių BENDROJI PROCEDŪRA. (PASTABA: 10 ml viršutinio sluoksnio tirpalo ir 10 ml apatinio sluoksnio tirpalo kiekis yra skirtas apdoroti apytikriai 5 spermos mėginius.) Pastaba: 50% ir 90% dydžiai neapibrėžia konkrečios koncentracijos. 50% ir 90% yra santykinės koncentracijos dydžiai, pagrįsti ankstesne nomenklatūra, kuri apibrėžė 1:9 santykiu praskiestą Percoll ® preparatą kaip lygiavertį 100% darbiniam izotoniniam tirpalui. BENDROJI PROCEDŪRA Toliau aprašyta bendroji procedūra dviejų etapų grandientiniam judrių spermotozoidų išskyrimui iš spermos. Tūrį ir koncentraciją galima keisti pagal atskiros laboratorijos poreikius (t. y., minigradientas, kriokonservuota sėkla, trisluoksnis gradientas). 1. Visus terpės komponentus atšildykite iki kambario arba 37 °C temperatūros. 2. Sterilia pipete perkelkite 1,5–2,0 ml APATINIO SLUOKSNIO tirpalo į sterilų vienkartinį kūginį centrifūgavimo mėgintuvėlį 5. Centrifuguokite 10–20 minučių esant apytikriai 200–300 x g režimui.* Atsargiai išskirkite granulę įsiurbdami VIRŠUTINIO ir APATINIO SLUOKSNIO tirpalo arba granulę tiesiai išsiurbdami ir perkeldami į naują sterilų centrifuginį mėgintuvėlį. Pastaba: Reikia įvertinti spermos mėginio kokybę ir į tai atsižvelgiant numatyti tinkamą centrifugavimo greitį ir laiką. Procedūros optimizavimui, juos reikia pakoreguoti atsižvelgiant į atskiro mėginio kokybę. 6. Nauja sterilia pipete įlašinkite 2,0–3,0 ml atitinkamos plovimo terpės, tokios kaip Sperm Washing Medium (IS katalogo Nr. 9983) arba Modified HTF (IS katalogo Nr. 90126) su baltyminiais priedais. Izoliuotą granulę resuspenduokite. Centrifuguokite 8–10 minučių (~200 x g režimu) ir pašalinkite supernatantą. Pakartokite šį etapą antrojo plovimo metu. Išmeskite supernatantą, o granulę resuspenduokite tinkamame reikiamos terpės kiekyje. Dabar mėginys yra paruoštas analizei. Dėl išsamesnių šių produktų naudojimo gairių kiekviena laboratorija turi žiūrėti savo vidaus darbo tvarkos taisykles ir metodinius nurodymus, specialiai parengtus ir optimizuotus pagal atskiros medicininės programos nuostatas. LAIKYMO SĄLYGOS IR STABILUMAS Neatidarytas talpykles laikykite šaldytuve 2 ºC–8 ºC temperatūroje. Prieš naudojimą atšildykite iki aplinkos arba inkubatoriaus (37 °C) temperatūros. Negalima užšaldyti, būtina saugoti nuo aukštos temperatūros. Laikant pagal nurodymus, ISolate produktas išlieka stabilus iki tinkamumo datos, pažymėtos dėžutės ir butelio etiketėse. ATSARGUMO PRIEMONĖS IR ĮSPĖJIMAI Šis prietaisas yra skirtas naudoti darbuotojams, apmokytiems atlikti procedūras, susijusias su prietaiso taikymu pagal numatytą paskirtį. ISolate išvaizda yra matinė. Tai šiam produktui yra normalu. Negalima naudoti jokio terpės buteliuko, jei skystyje matyti kietųjų dalelių ar užterštumo (nevienalytis drumstumas). Laikant CO 2 inkubatoriuje, ISolate reikia sandariai uždengti, kad nepasikeistų pH pusiausvyra. Šio produkto sudėtyje nėra konservantų, antibiotikų ir baltymų priedų. Norint išvengti užkrėtimo, naudojimo metu reikia laikytis metodinių aseptikos reikalavimų. Jei produktas pažeistas, jo nenaudokite. Išmeskite arba grąžinkite gamintojui, kad pakeistų. PERSPĖJIMAS: Pagal federalinius (JAV) įstatymus, šis prietaisas gali būti parduodamas tik gydytojų arba jų užsakymu. ÜRÜN TANIMI ISolate® spermin motil fraksiyonunu seminal sıvıdan ayırmak için tasarlanmış bir yoğunluk aşamalı medyumdur. İki katmanlı bir sistem olarak ölü hücre, beyaz kan hücreleri ve debris gibi hücre kontaminantlarını etkili bir şekilde azaltır. Elde edilen örnek, baskın olarak motil sperm içerir. ISolate membran filtreli, aseptik olarak işlenmiş bir kolloidal silika partikülleri süspansiyonudur. HEPES-tamponlu HTF’deki eşdeğerli bir şekilde bağlanmış hidrofilik silanla stabilize edilmiştir. Sterilite güvence düzeyi 10-3’tür. ISolate test edilmiştir ve tavşan pirojeni testinde pirojenlere karşı negatif olduğu bulunmuştur. KULLANIM YÖNERGELERİ Katalog #99264 – İKİ KONSANTRASYON HALİNDE (%50 ve %90) KULLANIMA HAZIR KOLLOİDAL SİLİKA A. Önerilen Materyaller: ISolate • Irvine Scientic Katalog #99264 (6mL , 50 mL veya 100 mL viyal kiti) Sperm Yıkama Medyumu • Irvine Scientic Katalog #9983; Steril, tek kullanımlık konik santrifüj tüpleri • Irvine Scientic Katalog #IS-325 Pastör Pipetleri, steril Santrifüj İnkübatör, 37°C B. Gradyan Hazırlama: Hiçbir ön dilüzyon gerekmez. Üst ve alt katman gradyanın her bir viyali kullanıma hazırdır. Ürün broşürünün GENEL PROSEDÜR bölümüne geçin. Katalog #99275 - STOK SOLÜSYON Tek adımlı bir prosedürde veya daha fazla dilüsyon için kullanıma yönelik %90 yoğunluk aşamalı medyum. A. Önerilen Materyaller: ISolate Stok Solüsyon • Irvine Scientic Katalog #99275 Modifiye İnsan Tübal Sıvısı • Irvine Scientic Katalog #90126 Sperm Yıkama Medyumu • Irvine Scientic Katalog #9983 Steril, tek kullanımlık konik santrifüj tüpleri • Irvine Scientic Katalog #IS-325 Pastör Pipetleri, steril Santrifüj İnkübatör, 37°C B. Gradyan Hazırlama: Gradyan sperm ayırma yöntemini uygulamak için iki solüsyon gerekir: bir üst katman ve bir alt katman. 1. Üst Katman solüsyonu - %50: a) STOK SOLÜSYON’u alın (Katalog #99275) ve steril bir santrifüj tüpüne 5.6 mL pipetleyin b) Modifiye İnsan Tübal Sıvısından (Katalog #90126) 4.4 mL ekleyin c) Tüpü tıpalayın ve tam karışma için 3-4 kez nazikçe ters çevirin d) Tüpü “ÜST KATMAN” diye etiketleyin 2. Alt Katman solüsyonu - %90: a) STOK SOLÜSYON’un 10 mL’sini steril bir santrifüj tüpüne alikotlayın ve tıpalayın (Başka dilüsyon gerekmez; Stok Solüsyon %90’dır) b) Tüpü “ALT KATMAN” diye etiketleyin 3. Ürün broşürünün GENEL PROSEDÜR bölümüne geçin. (NOT: 10 mL Üst Katman ve 10 mL Alt Katman yaklaşık 5 semen örneğinin işlenmesini sağlar.) Katalog #99306 – KONSANTRAT Yoğunluk aşamalarına daha fazla dilüsyon için kolloidal silika konsantratı; izotonik bir tamponda formüle edilmiştir ve seyreltilmemiş Percoll®’un yoğunluğuna yakındır. ISolate® KONSANTRAT bu paket proşürüne göre %50 ve %90’lık gradyanlarda değerlendirilmiştir. Her laboratuar, etkililiğini değerlendirmek üzere farklı konsantrasyonlarda gradyanlar yapmak isteyebilir. A. Önerilen Materyaller: ISolate® Konsantrat • Irvine Scientic Katalog #99306 Modifiye İnsan Tübal Sıvısı • Irvine Scientic Katalog #90126 Sperm Yıkama Medyumu • Irvine Scientic Katalog #9983 Steril, tek kullanımlık konik santrifüj tüpleri • Irvine Scientic Katalog #IS-325 Pastör Pipetleri, steril Santrifüj İnkübatör, 37°C B. Gradyan Hazırlama: Gradyan sperm ayırma yöntemini uygulamak için iki solüsyon gerekir: bir üst katman ve bir alt katman. 1. Üst Katman solüsyonu - %50: a) KONSANTRATI (Katalog #99306) alın ve steril bir santrifüj tüpüne 4.5 mL pipetleyin b) Modifiye İnsan Tübal Sıvısından (Katalog #90126) 5.5 mL ekleyin c) Tüpü tıpalayın ve tam karışma için 3-4 kez nazikçe ters çevirin d) Tüpü “ÜST KATMAN” diye etiketleyin 2. Alt Katman solüsyonu - %90: a) KONSANTRATI (Katalog #99306) alın ve steril bir santrifüj tüpüne 8.1 mL pipetleyin b) Modifiye İnsan Tübal Sıvısından (Katalog #90126) 1.9 mL ekleyin c) Tüpü tıpalayın ve tam karışma için 3-4 kez nazikçe ters çevirin d) Tüpü “ALT KATMAN” diye etiketleyin 3. Ürün broşürünün GENEL PROSEDÜR bölümüne geçin. NOT: %50 ve %90 terimleri gerçek konsantrasyonu temsil etmez. %50 ve %90, Percoll®’un 1:9 dilüsyonunu %100 çalışan, izotonik bir solüsyona eşit olarak tanımlayan önceki nomenklatüre dayalı göreli konsantrasyonlardır. GENEL PROSEDÜR Aşağıda, motil spermi semenden ayırmaya yönelik iki adımlı bir gradyan ayırma genel prosedürü sunulmaktadır. Hacim ve kontrasyon, her bir laboratuarın tercihini karşılayacak şekilde değiştirilebilir (yani mini-gradyan kriyoprezerve semen, üç-katmanlı gradyan). 1. Tüm medya bileşenlerini oda sıcaklığına veya 37°C’a getirin. 2. Steril bir pipet kullanarak “ALT KATMAN”ın 1.5-2.0 mL’sini steril, tek kullanımlık, konik bir santrifüj tüpüne aktarın. 3. Yeni bir steril pipet kullanarak eşit hacimde “ÜST KATMAN”ı “ALT KATMAN”ın üzerine aktarın. Bu, “ALT KATMAN”ın yüzeyinin pipet ucuyla tüpün yan tarafına temas ettirilmesiyle sağlanır. Pipet ucunu tüp etrafında yukarı doğru bir hareketle spiral şekilde hareket ettirerek “ÜST KATMAN”ı dikkatli bir şekilde aktarın. 4. Yeni bir steril pipet kullanarak “ÜST KATMAN”a nazikça 1.5-2.0 mL sıvı semen yerleştirin. 5. Yaklaşık 200 - 300xg ile 10-20 dakika santrifüjleme yapın.* Ya “ÜST” ve “ALT KATMANLARI” çıkararak, ya da doğrudan pelleti çıkarıp yeni bir steril santrifüj tüpüne aktararak pelleti dikkatli bir şekilde ortaya çıkarın. Not: Sperm örneğinin kalitesi değerlendirilmeli ve uygun santrifüjleme hızı ve zamanı belirlenirken göz önünde bulundurulmalıdır. Bunlar, prosedürün optimizasyonuna yönelik örnek kalitesine göre ayarlanmalıdır. 6. Yeni bir steril pipet kullanarak, Sperm Yıkama Medyumu (IS Katalog #9983) veya Modifiye Edilmiş HTF’den (IS Katalog #90126) 2.0 - 3.0 mL’lik bir miktarı protein takviyesiyle birlikte ekleyin. İzole pelleti yeniden süspanse edin. 8-10 dakika boyunca santrifüjleme (~200xg) yapın ve üst fazı çıkarın. İkinci bir yıkama için bu adımı tekrarlayın. Üst fazı atın ve uygun medyumdan uygun bir hacim kullanarak pelleti yeniden süspanse edin. Örnek şimdi analiz için hazırdır. Bu ürünlerin kullanımıyla ilgili ek ayrıntılar için, her laboratuar, kendi medikal programınız için özel olarak geliştirilmiş ve optimize edilmiş olan kendi laboratuar prosedürlerine ve protokollerine başvurmalıdır. SAKLAMA TALİMATLARI VE STABİLİTE Açılmamış kapları 2°-8°C’da saklayın. Kullanım öncesi ortam sıcaklığıan veya inkübatör (37°C) sıcaklığına getirin. Dondurmayın veya yüksek sıcaklıklara maruz bırakmayın. ISolate bu şekilde saklandığında, kutu ve şişe etiketi üzerinde belirtilen son kullanım tarihine kadar stabildir. ÖNLEMLER VE UYARILAR Bu cihaz, cihazla ilgili olarak tanımlanan uygulamaları da kapsayan yardımla üreme prosedürlerinde eğitimli personel tarafından kullanıma yönelik olarak tasarlanmıştır. ISolate opak görünür. Bu ürün için bu normaldir. Partikülat madde veya kontaminasyon (tektip olmayan bulanıklık) kanıtı içeren herhangi bir medyum viyali kullanmayın. Bu üründe hiçbir koruyucu madde, antibiyotik veya protein takviyesi bulunmamaktadır. Kontaminasyonla ilgili sorunlardan sakınmak için aseptik teknikler kullanın. Hasar durumunda kullanmayın. Atın veya değiştirmek için üreticiye iade edin. Dikkat: Federal (ABD) yasalar bu cihazın bir doktor tarafından satılması veya sipariş edilmesi sınırlamasını getirmektedir. LIETUVIŲ K. MAGYAR TERMÉKLEIRÁS Az ISolate ® egy sűrűség gradiens médium, amit a sperma mozgékony frakciójának az ondófolyadéktól való elválasztására terveztek. Egy kétrétegű gradiens rendszerként hatékonyan csökkenti a sejtszennyezéseket, mint pl. a holt spermát, fehér vérsejteket és más törmelékeket. Az eredményként kapott minta túlnyomóan mozgékony spermiumot tartalmaz. Az ISolate a szilika részecskéknek egy membránszűrt, aszeptikusan készült kolloid szuszpenzója, kovalens kötéssel kapcsolódó hidrofil szilánnal stabilizálva, HEPESel pufferolt HTF-ben. A sterilitás biztonsági szint (Sterilty Assurance Level (SAL ))10-3. Az ISolate nyúl pirogénteszttel megvizsgálva pirogénekre negativ volt. HASZNÁLATI UTASITÁS Katalógusszám: 99264- FELHASZNÁLÁSRA KÉSZ KOLLOID SZILIKA KÉT KONCENTRÁCIÓBAN (50% és 90%) A. Javasolt anyagok: ISolate • Irvine Scientific Katalógusszám: 99264 (6ml, 50ml vagy 100ml fiola kit) Sperm Washing Medium • Irvine Scientific Katalógusszám: 9983 Steril, egyszer használatos, kúpos centrifugacsövek • Irvine Scientific Katalógusszám: IS-325 Pasteur-pipetták, steril Centrifuga Inkubátor, 37 C° B. Gradiens készítés: Előzetes higítások nem szükségesek. A felső és alsó réteg gradiens minden fiolája kész a használatra. Folytassa a termékismertető betétlap ÁLTALÁNOS ELJÁRÁS részénél. Katalógusszám: 99275 - STOCK SOLUTION 90% sűrűség gradiens médium egy-lépéses eljárásban, vagy további higításra való alkalmazásra. A. Javasolt anyagok: ISOLATE STOCK SOLUTION •Irvine Scientific Katalógusszám: 99275 Modified Human Tubal Fluid •Irvine Scientific Katalógusszám: 90126 Sperm Washing Medium •Irvine Scientific Katalógusszám: 9983 Steril, egyszer használatos, kúpos centrifugacsövek •Irvine Scientific Katalógusszám: IS-325 Pasteur-pipetták, steril Centrifuga Inkubátor, 37C° B. Gradiens készítés: A gradiens sperma elválasztási módszer végrehajtásához két oldat szükséges: Egy felső réteg és egy alsó réteg. 1. Felső réteg oldat-50% a) Vegye a STOCK SOLUTION-t (katalógusszám: 99275) és pipettázzon 5,6 ml–t egy steril centrifugacsőbe. b) Adjon hozzá 4.4 ml Modified Human Tubal Fluidot (Katalógusszám: 90126) c) Dugaszolja be a csövet és fordítsa fel óvatosan 3-4-szer, hogy teljesen összekeveredjen. d) Címkézze meg a csövet „FELSŐ RÉTEG” ként 2. Alsó Réteg oldat-90% a) Mérjen 10ml STOCK SOLUTION-t egy steril centrifugacsőbe, és zárja le. (További higítás nem szükséges, a -STOCK SOLUTION 90%-os) b) Címkézze meg a csövet „ALSÓ RÉTEG” ként 3. Folytassa a termékismertető betétlap ÁLTALÁNOS ELJÁRÁS részénél. (MEGJEGYZÉS: 10ml Felső Réteg és 10ml Alsó Réteg körülbelül 5 ondó minta feldolgozására elegendő) Katalógusszám: 99306- CONCENTRATE Kolloid szilika koncentrátum további higításra sűrűség gradiensekre; izotóniás pufferben formulázott, és megközelíti a higítatlan Percoll® sűrűségét. Az ISolate® CONCENTRATE 50% és 90% gradiensnél volt értékelve ennek a csomag betétlapnak megfelelően. A laboratóriumok készithetnek más koncentrációju gradienseket, amelyeket értékelni kell hatékonyság szempontjából. A. Javasolt anyagok: ISolate® koncentrátum •Irvine Scientific Katalógusszám: 99306 Modified Human Tubal Fluid •Irvine Scientific Katalógusszám: 90126 Sperm Washing Medium •Irvine Scientific Katalógusszám: 9983 Steril, egyszer használatos, kúpos centrifugacsövek •Irvine Scientific Katalógusszám: IS-325 Pasteur-pipetták, steril Centrifuga Inkubátor, 37 C° B. Gradiens készítés: A gradiens sperma elválasztási módszer végrehajtásához két oldat szükséges. Egy felső réteg és egy alsó réteg 1. Felső réteg oldat-50% a) Vegye a CONCENTRATEt (Katalógusszám: 99306) és pipettázzon 4.5 ml-t egy steril centrifugacsőbe. b) Adjon 5.5 ml Modified Human Tubal Fluidot (Katalógusszám: 90126) c) Dugaszolja be a csövet és fordítsa fel óvatosan 3-4-szer, hogy teljesen összekev eredjen. d) Címkézze meg a csövet „FELSŐ RÉTEG” ként 2. Alsó Réteg oldat-90% a) Vegye a CONCENTRATEt (Katalógusszám: 99306) és pipettázzon 8.1 ml-t egy steril centrifugacsőbe. b) Adjon 1.9 ml Modified Human Tubal Fluidot (Katalógusszám: 90126) c) Dugaszolja be a csövet és fordítsa fel óvatosan 3-4-szer, hogy teljesen összekeveredjen. d) Címkézze meg a csövet „ALSÓ RÉTEG”-ként 3. Folytassa a termékismertető betétlap ÁLTALÁNOS ELJÁRÁS részénél. Megjegyzés: Az 50% és 90% kifejezések nem jelentenek tényleges koncentrációt. Az 50% és 90% relatív koncentrációk egy korábbi nomenklatúra alapján, amely az 1:9 higítású Percoll® –t definiálja 100% működő, izotóniás oldatként. ÁLTALÁNOS ELJÁRÁS A következő egy általános eljárás a mozgékony spermának az ondóból történő két-lépéses gradiens elválasztására. A térfogat és koncentráció változtatható, hogy megfeleljen az egyes laboratóriumok preferenciáinak (pl. mini-gradiens, krioprezervált ondó, három-rétegű gradiens) 1. Hozzon minden médium alkotót szobahőmérsékletre, vagy 37 C°-ra. 2. Steril pipettát használva, vigyen át 1,5-2,0 ml-t az „ALSÓ RÉTEG”-ből egy steril, egyszer használatos, kúpos centrifuga-csőbe. 3. Új, steril pipettát használva, vigyen a „FELSŐ RÉTEG” –ből egyenlő térfogatot az „ALSÓ RÉTEG” tetejére. Ezt tegye úgy, hogy a pipetta hegyével a cső oldalán az „ALSÓ RÉTEG” felszínét érinti.Óvatosan adagolja a „FELSŐ RÉTEGET” a pipetta hegyének spirális mozgatásával a cső külső szélénél felfelé, ahogy a „FELSŐ RÉTEG” emelkedik. 4. Óvatosan helyezzen 1,5-2,0 ml elfolyósodott ondót a „FELSŐ RÉTEGRE” egy új steril pipettát használva. 5. Centrifugálja 10-20 percig körülbelül 200-300x g-vel.* Óvatosan tegye szabaddá a pelletet, vagy a „FELSŐ RÉTEG” és az „ALSÓ RÉTEG” elszívásával, vagy közvetlenül, a pellet eltávolításával és egy új steril centrifugacsőbe való átvitelével. *Megjegyzés: A sperma minta minőségét értékelni kell, és figyelembe kell venni a megfelelő centrifugálási sebesség és idő meghatározásánál. Ezeket az egyes minta minősége szerint kell módosítani az eljárás optimalizálása érdekében. 6. Egy új steril pipettát használva adagoljon 2,0-3,0 ml megfelelő mosómédiumot, például Sperm Washing Mediumot, (IS Katalógusszám: 9983), vagy Modified HTF –t (IS Katalógusszám:90126) fehérje kiegészítővel. Szuszpendálja újra az izolált pelletet. Centrifugálja (~200xg)-vel 8-10 percig, majd távolítsa el a felülúszót. Ismételje meg ezt a lépést egy második mosásra. Szabaduljon meg a felülúszótól és szuszpendálja újra a pelletet a megfelelő médium alkalmas térfogatával. A minta most kész az analízisre. E termékek használatára vonatkozóan a további részletekért minden laboratóriumnak a sajátos orvosi programjukra speciálisan kifejlesztett és optimalizált saját laboratóriumi eljárásaikban és protokolljaikban kell utánanéznie. TÁROLÁSI UTASITÁSOK ÉS STABILITÁS Tárolja a bontatlan konténereket hűtve, 2° és 8 C° között. Használat előtt melegítse a környezeti hőmérsékletre vagy az inkubátor hőmérsékletére (37 C°)-ra. Ne fagyassza, ne tegye ki magas hőmérsékletnek. Az ISolate stabil a doboz és az üveg címkéjén feltüntetett lejárati időpontig, amennyiben tárolása az utasításoknak megfelelően történt. ÓVINTÉZKEDÉSEK ÉS FIGYELMEZTETÉSEK Ezt az eszközt úgy tervezték, hogy használata az eszköz tervezett alkalmazását is magába foglaló eljárásokban kiképzett személyzet által történjen. A ISolate opálosnak fog tűnni. Ez normális ennél a terméknél. Ne használja a médium olyan fioláját, ami részecskék jelenlétét, vagy szennyezés jelét mutatja (nem egyenletes zavarosság). Az ISolate-nek szorosan lezártnak kell lennie, amikor CO2 inkubátorban használják a pH változások elkerülésére. Ez a termék nem tartalmaz tartósítót, antibiotikumot sem fehérje kiegészítőt. A szennyezéssel járó problémák elkerülése érdekében, aszeptikus technikák alkalmazásával kezelje. Ha sérült, ne használja. Dobja el, vagy juttassa vissza a gyártóhoz, cserére. VIGYÁZAT: A Szövetségi (US) törvény korlátozza ennek az eszköznek az értékesítését, csak orvos által, vagy orvosi utasításra történhet. Türk PRODUKTO APRAŠYMAS ISolate® yra tankio gradiento terpė, skirta iš sėklos sekreto atskirti judriąją spermatozoidų frakciją. Ši dviejų sluoksnių gradientinė sistema veiksmingai sumažina ląstelinius teršalus, tokius kaip negyvi spermatozoidai, leukocitai ir įvairios dalelių atplaišos. Galutinis mėginys daugiausia susideda iš judrių spermatozoidų. 3. Nauja sterilia pipete ant APATINIO SLUOKSNIO viršaus perkelkite tokį patį VIRŠUTINIO SLUOKSNIO tirpalo kiekį. Tai atliekama pipetės antgaliu paliečiant APATINIO SLUOKSNIO paviršių prie mėgintuvėlio šono. Atsargiai išlašinkite VIRŠUTINĮ SLUOKSNĮ spirališkai sukdami pipetės antgalį aplink mėgintuvėlio kraštą link viršaus, kai VIRŠUTINIO SLUOKSNIO lygis kyla. ISolate yra membraninį filtrą naudojant filtruota, aseptiškai apdorota koloidinė silicio dioksido dalelių suspensija, stabilizuota kovalentinėmis jungtimis prisijungusiu hidrofiliniu silanu HEPES buferintame HTF skystyje. Sterilumo užtikrinimo lygis (SAL) yra 10-3. Atlikus pirogenų nustatymo bandymą su triušiais, ISolate karščiavimo nesukėlė. 4. Nauja sterilia pipete 1,5–2,0 ml suskystėjusios spermos atsargiai užlašinkite ant VIRŠUTINIO SLUOKSNIO. NAUDOJIMO NURODYMAI Katalogo Nr. 99264 – PARUOŠTAS NAUDOTI KOLOIDINIS SILICIO DIOKSIDAS, DVIEJŲ KONCENTRACIJŲ (50% ir 90%) A. Rekomenduojamos medžiagos: ISolate • Irvine Scientific katalogo Nr. 99264 (6 ml, 50ml arba 100 ml buteliukų rinkinys) Sperm Washing Medium (spermos plovimo terpė) • Irvine Scientific katalogo Nr. 9983 Sterilūs, vienkartiniai kūginiai centrifuginiai mėgintuvėliai • Irvine Scientific katalogo Nr. IS-325 Pastero pipetės, sterilios Centrifuga Inkubatorius, 37 °C temperatūra B. Gradiento paruošimas: Iš anksto praskiesti nereikia. Visi viršutinio ir apatinio sluoksnio gradiento buteliukai yra paruošti naudoti. Toliau žiūrėkite produkto pakuotės lapelio skyrių BENDROJI PROCEDŪRA. Katalogo Nr. 99275 – STOCK SOLUTION (pradinis tirpalas) 90% tankio grandientinė terpė, skirta vieno etapo procedūrai arba tolesniam skiedimui. A. Rekomenduojamos medžiagos: ISolate STOCK SOLUTION (pradinis tirpalas) •Irvine Scientific katalogo Nr. 99275 Modified Human Tubal Fluid •Irvine Scientific katalogo Nr. 90126 Sperm Washing Medium (spermos plovimo terpė) •Irvine Scientific katalogo Nr. 9983 Sterilūs, vienkartiniai kūginiai centrifuginiai mėgintuvėliai •Irvine Scientific katalogo Nr. IS-325 Pastero pipetės, sterilios Centrifuga Inkubatorius, 37 °C temperatūra B. Gradiento paruošimas: Taikant gradientinį spermatozoidų atskyrimo metodą, naudojami du tirpalai: viršutinio sluoksnio tirpalas ir apatinio sluoksnio tirpalas. 1. Viršutinio sluoksnio tirpalas – 50%: a) Paėmę STOCK SOLUTION (katalogo Nr. 99275), 5,6 ml pradinio tirpalo pipete įlašinkite į sterilų centrifuginį mėgintuvėlį; b) Pridėkite 4.4 ml Modified Human Tubal Fluid terpės (katalogo Nr. 90126); c) Mėgintuvėlį uždenkite ir atsargiai 3–4 kartus apverskite, kad jo turinys visiškai susimaišytų; d) Mėgintuvėlį pažymėkite VIRŠUTINIS SLUOK SNIS; 2. Apatinio sluoksnio tirpalas – 90%: a) 10 ml STOCK SOLUTION pradinio tirpalo atid alinkite į sterilų centrifuginį mėgintuvėlį ir uždenkite (daugiau skiesti nereikia – STOCK SOLUTION yra 90% koncentracijos). b) Mėgintuvėlį pažymėkite APATINIS SLUOK SNIS; 3. Toliau žiūrėkite produkto pakuotės lapelio skyrių BENDROJI PROCEDŪRA. (PASTABA: 10 ml virš utinio sluoksnio tirpalo ir 10 ml apatinio sluoksnio tirpalo kiekis yra skirtas apdoroti apytikriai 5 spermos mėginius.) Katalogo Nr. 99306 – CONCENTRATE (koncentratas) Koloidinio silicio dioksido koncentratas, skirtas tolesniam skiedimui pagal tankio gradientą; paruoštas izotoniniame buferiniame tirpale, tankis apytikriai atitinka neskiestos Percoll ® terpės tankį. ISolate ® CONCENTRATE koncentratą ištyrus šiame pakuotės lapelyje nurodytais metodais, nustatyta 50% ir 90% gradientų koncentracija. Kiekviena laboratorija gali pasigaminti skirtingų koncentracijų gradientus, kurių veiksmingumą reikia įvertinti. A. Rekomenduojamos medžiagos: ISolate® koncentratas •Irvine Scientific katalogo Nr. 99306 Modified Human Tubal Fluid •Irvine Scientific katalogo Nr. 90126 Sperm Washing Medium (spermos plovimo terpė) •Irvine Scientific katalogo Nr. 9983 Sterilūs, vienkartiniai kūginiai centrifuginiai mėgintuvėliai •Irvine Scientific katalogo Nr. IS-325 Pastero pipetės, sterilios Centrifuga Inkubatorius, 37 °C temperatūra B. Gradiento paruošimas: Taikant gradientinį spermatozoidų atskyrimo metodą, naudojami du tirpalai: viršutinio sluoksnio tirpalas ir apatinio sluoksnio tirpalas. 1. Viršutinio sluoksnio tirpalas – 50%: a) Paėmę CONCENTRATE (katalogo Nr. 99306), 4.5 ml koncentrato pipete įlašinkite į sterilų centrifuginį mėgintuvėlį; b) Pridėkite 5.5 ml Modified Human Tubal Fluid terpės (katalogo Nr. 90126); c) Mėgintuvėlį uždenkite ir atsargiai 3–4 kartus apverskite, kad jo turinys visiškai susimaišytų; d) Mėgintuvėlį pažymėkite VIRŠUTINIS SLUOK SNIS; 2. Apatinio sluoksnio tirpalas – 90%: a) Paėmę CONCENTRATE (katalogo Nr. 99306), 8.1 ml koncentrato pipete įlašinkite į sterilų centrifuginį mėgintuvėlį; b) Pridėkite 1.9 ml Modified Human Tubal Fluid terpės (katalogo Nr. 90126); c) Mėgintuvėlį uždenkite ir atsargiai 3–4 kartus apverskite, kad jo turinys visiškai susimaišytų; d) Mėgintuvėlį pažymėkite APATINIS SLUOK SNIS; 3. Toliau žiūrėkite produkto pakuotės lapelio skyrių BENDROJI PROCEDŪRA. (PASTABA: 10 ml viršutinio sluoksnio tirpalo ir 10 ml apatinio sluoksnio tirpalo kiekis yra skirtas apdoroti apytikriai 5 spermos mėginius.) Pastaba: 50% ir 90% dydžiai neapibrėžia konkrečios koncentracijos. 50% ir 90% yra santykinės koncentracijos dydžiai, pagrįsti ankstesne nomenklatūra, kuri apibrėžė 1:9 santykiu praskiestą Percoll ® preparatą kaip lygiavertį 100% darbiniam izotoniniam tirpalui. BENDROJI PROCEDŪRA Toliau aprašyta bendroji procedūra dviejų etapų grandientiniam judrių spermotozoidų išskyrimui iš spermos. Tūrį ir koncentraciją galima keisti pagal atskiros laboratorijos poreikius (t. y., minigradientas, kriokonservuota sėkla, trisluoksnis gradientas). 1. Visus terpės komponentus atšildykite iki kambario arba 37 °C temperatūros. 2. Sterilia pipete perkelkite 1,5–2,0 ml APATINIO SLUOKSNIO tirpalo į sterilų vienkartinį kūginį centrifūgavimo mėgintuvėlį 5. Centrifuguokite 10–20 minučių esant apytikriai 200–300 x g režimui.* Atsargiai išskirkite granulę įsiurbdami VIRŠUTINIO ir APATINIO SLUOKSNIO tirpalo arba granulę tiesiai išsiurbdami ir perkeldami į naują sterilų centrifuginį mėgintuvėlį. Pastaba: Reikia įvertinti spermos mėginio kokybę ir į tai atsižvelgiant numatyti tinkamą centrifugavimo greitį ir laiką. Procedūros optimizavimui, juos reikia pakoreguoti atsižvelgiant į atskiro mėginio kokybę. 6. Nauja sterilia pipete įlašinkite 2,0–3,0 ml atitinkamos plovimo terpės, tokios kaip Sperm Washing Medium (IS katalogo Nr. 9983) arba Modified HTF (IS katalogo Nr. 90126) su baltyminiais priedais. Izoliuotą granulę resuspenduokite. Centrifuguokite 8–10 minučių (~200 x g režimu) ir pašalinkite supernatantą. Pakartokite šį etapą antrojo plovimo metu. Išmeskite supernatantą, o granulę resuspenduokite tinkamame reikiamos terpės kiekyje. Dabar mėginys yra paruoštas analizei. Dėl išsamesnių šių produktų naudojimo gairių kiekviena laboratorija turi žiūrėti savo vidaus darbo tvarkos taisykles ir metodinius nurodymus, specialiai parengtus ir optimizuotus pagal atskiros medicininės programos nuostatas. LAIKYMO SĄLYGOS IR STABILUMAS Neatidarytas talpykles laikykite šaldytuve 2 ºC–8 ºC temperatūroje. Prieš naudojimą atšildykite iki aplinkos arba inkubatoriaus (37 °C) temperatūros. Negalima užšaldyti, būtina saugoti nuo aukštos temperatūros. Laikant pagal nurodymus, ISolate produktas išlieka stabilus iki tinkamumo datos, pažymėtos dėžutės ir butelio etiketėse. ATSARGUMO PRIEMONĖS IR ĮSPĖJIMAI Šis prietaisas yra skirtas naudoti darbuotojams, apmokytiems atlikti procedūras, susijusias su prietaiso taikymu pagal numatytą paskirtį. ISolate išvaizda yra matinė. Tai šiam produktui yra normalu. Negalima naudoti jokio terpės buteliuko, jei skystyje matyti kietųjų dalelių ar užterštumo (nevienalytis drumstumas). Laikant CO 2 inkubatoriuje, ISolate reikia sandariai uždengti, kad nepasikeistų pH pusiausvyra. Šio produkto sudėtyje nėra konservantų, antibiotikų ir baltymų priedų. Norint išvengti užkrėtimo, naudojimo metu reikia laikytis metodinių aseptikos reikalavimų. Jei produktas pažeistas, jo nenaudokite. Išmeskite arba grąžinkite gamintojui, kad pakeistų. PERSPĖJIMAS: Pagal federalinius (JAV) įstatymus, šis prietaisas gali būti parduodamas tik gydytojų arba jų užsakymu. ÜRÜN TANIMI ISolate® spermin motil fraksiyonunu seminal sıvıdan ayırmak için tasarlanmış bir yoğunluk aşamalı medyumdur. İki katmanlı bir sistem olarak ölü hücre, beyaz kan hücreleri ve debris gibi hücre kontaminantlarını etkili bir şekilde azaltır. Elde edilen örnek, baskın olarak motil sperm içerir. ISolate membran filtreli, aseptik olarak işlenmiş bir kolloidal silika partikülleri süspansiyonudur. HEPES-tamponlu HTF’deki eşdeğerli bir şekilde bağlanmış hidrofilik silanla stabilize edilmiştir. Sterilite güvence düzeyi 10-3’tür. ISolate test edilmiştir ve tavşan pirojeni testinde pirojenlere karşı negatif olduğu bulunmuştur. KULLANIM YÖNERGELERİ Katalog #99264 – İKİ KONSANTRASYON HALİNDE (%50 ve %90) KULLANIMA HAZIR KOLLOİDAL SİLİKA A. Önerilen Materyaller: ISolate • Irvine Scientic Katalog #99264 (6mL , 50 mL veya 100 mL viyal kiti) Sperm Yıkama Medyumu • Irvine Scientic Katalog #9983; Steril, tek kullanımlık konik santrifüj tüpleri • Irvine Scientic Katalog #IS-325 Pastör Pipetleri, steril Santrifüj İnkübatör, 37°C B. Gradyan Hazırlama: Hiçbir ön dilüzyon gerekmez. Üst ve alt katman gradyanın her bir viyali kullanıma hazırdır. Ürün broşürünün GENEL PROSEDÜR bölümüne geçin. Katalog #99275 - STOK SOLÜSYON Tek adımlı bir prosedürde veya daha fazla dilüsyon için kullanıma yönelik %90 yoğunluk aşamalı medyum. A. Önerilen Materyaller: ISolate Stok Solüsyon • Irvine Scientic Katalog #99275 Modifiye İnsan Tübal Sıvısı • Irvine Scientic Katalog #90126 Sperm Yıkama Medyumu • Irvine Scientic Katalog #9983 Steril, tek kullanımlık konik santrifüj tüpleri • Irvine Scientic Katalog #IS-325 Pastör Pipetleri, steril Santrifüj İnkübatör, 37°C B. Gradyan Hazırlama: Gradyan sperm ayırma yöntemini uygulamak için iki solüsyon gerekir: bir üst katman ve bir alt katman. 1. Üst Katman solüsyonu - %50: a) STOK SOLÜSYON’u alın (Katalog #99275) ve steril bir santrifüj tüpüne 5.6 mL pipetleyin b) Modifiye İnsan Tübal Sıvısından (Katalog #90126) 4.4 mL ekleyin c) Tüpü tıpalayın ve tam karışma için 3-4 kez nazikçe ters çevirin d) Tüpü “ÜST KATMAN” diye etiketleyin 2. Alt Katman solüsyonu - %90: a) STOK SOLÜSYON’un 10 mL’sini steril bir santrifüj tüpüne alikotlayın ve tıpalayın (Başka dilüsyon gerekmez; Stok Solüsyon %90’dır) b) Tüpü “ALT KATMAN” diye etiketleyin 3. Ürün broşürünün GENEL PROSEDÜR bölümüne geçin. (NOT: 10 mL Üst Katman ve 10 mL Alt Katman yaklaşık 5 semen örneğinin işlenmesini sağlar.) Katalog #99306 – KONSANTRAT Yoğunluk aşamalarına daha fazla dilüsyon için kolloidal silika konsantratı; izotonik bir tamponda formüle edilmiştir ve seyreltilmemiş Percoll®’un yoğunluğuna yakındır. ISolate® KONSANTRAT bu paket proşürüne göre %50 ve %90’lık gradyanlarda değerlendirilmiştir. Her laboratuar, etkililiğini değerlendirmek üzere farklı konsantrasyonlarda gradyanlar yapmak isteyebilir. A. Önerilen Materyaller: ISolate® Konsantrat • Irvine Scientic Katalog #99306 Modifiye İnsan Tübal Sıvısı • Irvine Scientic Katalog #90126 Sperm Yıkama Medyumu • Irvine Scientic Katalog #9983 Steril, tek kullanımlık konik santrifüj tüpleri • Irvine Scientic Katalog #IS-325 Pastör Pipetleri, steril Santrifüj İnkübatör, 37°C B. Gradyan Hazırlama: Gradyan sperm ayırma yöntemini uygulamak için iki solüsyon gerekir: bir üst katman ve bir alt katman. 1. Üst Katman solüsyonu - %50: a) KONSANTRATI (Katalog #99306) alın ve steril bir santrifüj tüpüne 4.5 mL pipetleyin b) Modifiye İnsan Tübal Sıvısından (Katalog #90126) 5.5 mL ekleyin c) Tüpü tıpalayın ve tam karışma için 3-4 kez nazikçe ters çevirin d) Tüpü “ÜST KATMAN” diye etiketleyin 2. Alt Katman solüsyonu - %90: a) KONSANTRATI (Katalog #99306) alın ve steril bir santrifüj tüpüne 8.1 mL pipetleyin b) Modifiye İnsan Tübal Sıvısından (Katalog #90126) 1.9 mL ekleyin c) Tüpü tıpalayın ve tam karışma için 3-4 kez nazikçe ters çevirin d) Tüpü “ALT KATMAN” diye etiketleyin 3. Ürün broşürünün GENEL PROSEDÜR bölümüne geçin. NOT: %50 ve %90 terimleri gerçek konsantrasyonu temsil etmez. %50 ve %90, Percoll®’un 1:9 dilüsyonunu %100 çalışan, izotonik bir solüsyona eşit olarak tanımlayan önceki nomenklatüre dayalı göreli konsantrasyonlardır. GENEL PROSEDÜR Aşağıda, motil spermi semenden ayırmaya yönelik iki adımlı bir gradyan ayırma genel prosedürü sunulmaktadır. Hacim ve kontrasyon, her bir laboratuarın tercihini karşılayacak şekilde değiştirilebilir (yani mini-gradyan kriyoprezerve semen, üç-katmanlı gradyan). 1. Tüm medya bileşenlerini oda sıcaklığına veya 37°C’a getirin. 2. Steril bir pipet kullanarak “ALT KATMAN”ın 1.5-2.0 mL’sini steril, tek kullanımlık, konik bir santrifüj tüpüne aktarın. 3. Yeni bir steril pipet kullanarak eşit hacimde “ÜST KATMAN”ı “ALT KATMAN”ın üzerine aktarın. Bu, “ALT KATMAN”ın yüzeyinin pipet ucuyla tüpün yan tarafına temas ettirilmesiyle sağlanır. Pipet ucunu tüp etrafında yukarı doğru bir hareketle spiral şekilde hareket ettirerek “ÜST KATMAN”ı dikkatli bir şekilde aktarın. 4. Yeni bir steril pipet kullanarak “ÜST KATMAN”a nazikça 1.5-2.0 mL sıvı semen yerleştirin. 5. Yaklaşık 200 - 300xg ile 10-20 dakika santrifüjleme yapın.* Ya “ÜST” ve “ALT KATMANLARI” çıkararak, ya da doğrudan pelleti çıkarıp yeni bir steril santrifüj tüpüne aktararak pelleti dikkatli bir şekilde ortaya çıkarın. Not: Sperm örneğinin kalitesi değerlendirilmeli ve uygun santrifüjleme hızı ve zamanı belirlenirken göz önünde bulundurulmalıdır. Bunlar, prosedürün optimizasyonuna yönelik örnek kalitesine göre ayarlanmalıdır. 6. Yeni bir steril pipet kullanarak, Sperm Yıkama Medyumu (IS Katalog #9983) veya Modifiye Edilmiş HTF’den (IS Katalog #90126) 2.0 - 3.0 mL’lik bir miktarı protein takviyesiyle birlikte ekleyin. İzole pelleti yeniden süspanse edin. 8-10 dakika boyunca santrifüjleme (~200xg) yapın ve üst fazı çıkarın. İkinci bir yıkama için bu adımı tekrarlayın. Üst fazı atın ve uygun medyumdan uygun bir hacim kullanarak pelleti yeniden süspanse edin. Örnek şimdi analiz için hazırdır. Bu ürünlerin kullanımıyla ilgili ek ayrıntılar için, her laboratuar, kendi medikal programınız için özel olarak geliştirilmiş ve optimize edilmiş olan kendi laboratuar prosedürlerine ve protokollerine başvurmalıdır. SAKLAMA TALİMATLARI VE STABİLİTE Açılmamış kapları 2°-8°C’da saklayın. Kullanım öncesi ortam sıcaklığıan veya inkübatör (37°C) sıcaklığına getirin. Dondurmayın veya yüksek sıcaklıklara maruz bırakmayın. ISolate bu şekilde saklandığında, kutu ve şişe etiketi üzerinde belirtilen son kullanım tarihine kadar stabildir. ÖNLEMLER VE UYARILAR Bu cihaz, cihazla ilgili olarak tanımlanan uygulamaları da kapsayan yardımla üreme prosedürlerinde eğitimli personel tarafından kullanıma yönelik olarak tasarlanmıştır. ISolate opak görünür. Bu ürün için bu normaldir. Partikülat madde veya kontaminasyon (tektip olmayan bulanıklık) kanıtı içeren herhangi bir medyum viyali kullanmayın. Bu üründe hiçbir koruyucu madde, antibiyotik veya protein takviyesi bulunmamaktadır. Kontaminasyonla ilgili sorunlardan sakınmak için aseptik teknikler kullanın. Hasar durumunda kullanmayın. Atın veya değiştirmek için üreticiye iade edin. Dikkat: Federal (ABD) yasalar bu cihazın bir doktor tarafından satılması veya sipariş edilmesi sınırlamasını getirmektedir. LIETUVIŲ K. MAGYAR TERMÉKLEIRÁS Az ISolate ® egy sűrűség gradiens médium, amit a sperma mozgékony frakciójának az ondófolyadéktól való elválasztására terveztek. Egy kétrétegű gradiens rendszerként hatékonyan csökkenti a sejtszennyezéseket, mint pl. a holt spermát, fehér vérsejteket és más törmelékeket. Az eredményként kapott minta túlnyomóan mozgékony spermiumot tartalmaz. Az ISolate a szilika részecskéknek egy membránszűrt, aszeptikusan készült kolloid szuszpenzója, kovalens kötéssel kapcsolódó hidrofil szilánnal stabilizálva, HEPESel pufferolt HTF-ben. A sterilitás biztonsági szint (Sterilty Assurance Level (SAL ))10-3. Az ISolate nyúl pirogénteszttel megvizsgálva pirogénekre negativ volt. HASZNÁLATI UTASITÁS Katalógusszám: 99264- FELHASZNÁLÁSRA KÉSZ KOLLOID SZILIKA KÉT KONCENTRÁCIÓBAN (50% és 90%) A. Javasolt anyagok: ISolate • Irvine Scientific Katalógusszám: 99264 (6ml, 50ml vagy 100ml fiola kit) Sperm Washing Medium • Irvine Scientific Katalógusszám: 9983 Steril, egyszer használatos, kúpos centrifugacsövek • Irvine Scientific Katalógusszám: IS-325 Pasteur-pipetták, steril Centrifuga Inkubátor, 37 C° B. Gradiens készítés: Előzetes higítások nem szükségesek. A felső és alsó réteg gradiens minden fiolája kész a használatra. Folytassa a termékismertető betétlap ÁLTALÁNOS ELJÁRÁS részénél. Katalógusszám: 99275 - STOCK SOLUTION 90% sűrűség gradiens médium egy-lépéses eljárásban, vagy további higításra való alkalmazásra. A. Javasolt anyagok: ISOLATE STOCK SOLUTION •Irvine Scientific Katalógusszám: 99275 Modified Human Tubal Fluid •Irvine Scientific Katalógusszám: 90126 Sperm Washing Medium •Irvine Scientific Katalógusszám: 9983 Steril, egyszer használatos, kúpos centrifugacsövek •Irvine Scientific Katalógusszám: IS-325 Pasteur-pipetták, steril Centrifuga Inkubátor, 37C° B. Gradiens készítés: A gradiens sperma elválasztási módszer végrehajtásához két oldat szükséges: Egy felső réteg és egy alsó réteg. 1. Felső réteg oldat-50% a) Vegye a STOCK SOLUTION-t (katalógusszám: 99275) és pipettázzon 5,6 ml–t egy steril centrifugacsőbe. b) Adjon hozzá 4.4 ml Modified Human Tubal Fluidot (Katalógusszám: 90126) c) Dugaszolja be a csövet és fordítsa fel óvatosan 3-4-szer, hogy teljesen összekeveredjen. d) Címkézze meg a csövet „FELSŐ RÉTEG” ként 2. Alsó Réteg oldat-90% a) Mérjen 10ml STOCK SOLUTION-t egy steril centrifugacsőbe, és zárja le. (További higítás nem szükséges, a -STOCK SOLUTION 90%-os) b) Címkézze meg a csövet „ALSÓ RÉTEG” ként 3. Folytassa a termékismertető betétlap ÁLTALÁNOS ELJÁRÁS részénél. (MEGJEGYZÉS: 10ml Felső Réteg és 10ml Alsó Réteg körülbelül 5 ondó minta feldolgozására elegendő) Katalógusszám: 99306- CONCENTRATE Kolloid szilika koncentrátum további higításra sűrűség gradiensekre; izotóniás pufferben formulázott, és megközelíti a higítatlan Percoll® sűrűségét. Az ISolate® CONCENTRATE 50% és 90% gradiensnél volt értékelve ennek a csomag betétlapnak megfelelően. A laboratóriumok készithetnek más koncentrációju gradienseket, amelyeket értékelni kell hatékonyság szempontjából. A. Javasolt anyagok: ISolate® koncentrátum •Irvine Scientific Katalógusszám: 99306 Modified Human Tubal Fluid •Irvine Scientific Katalógusszám: 90126 Sperm Washing Medium •Irvine Scientific Katalógusszám: 9983 Steril, egyszer használatos, kúpos centrifugacsövek •Irvine Scientific Katalógusszám: IS-325 Pasteur-pipetták, steril Centrifuga Inkubátor, 37 C° B. Gradiens készítés: A gradiens sperma elválasztási módszer végrehajtásához két oldat szükséges. Egy felső réteg és egy alsó réteg 1. Felső réteg oldat-50% a) Vegye a CONCENTRATEt (Katalógusszám: 99306) és pipettázzon 4.5 ml-t egy steril centrifugacsőbe. b) Adjon 5.5 ml Modified Human Tubal Fluidot (Katalógusszám: 90126) c) Dugaszolja be a csövet és fordítsa fel óvatosan 3-4-szer, hogy teljesen összekev eredjen. d) Címkézze meg a csövet „FELSŐ RÉTEG” ként 2. Alsó Réteg oldat-90% a) Vegye a CONCENTRATEt (Katalógusszám: 99306) és pipettázzon 8.1 ml-t egy steril centrifugacsőbe. b) Adjon 1.9 ml Modified Human Tubal Fluidot (Katalógusszám: 90126) c) Dugaszolja be a csövet és fordítsa fel óvatosan 3-4-szer, hogy teljesen összekeveredjen. d) Címkézze meg a csövet „ALSÓ RÉTEG”-ként 3. Folytassa a termékismertető betétlap ÁLTALÁNOS ELJÁRÁS részénél. Megjegyzés: Az 50% és 90% kifejezések nem jelentenek tényleges koncentrációt. Az 50% és 90% relatív koncentrációk egy korábbi nomenklatúra alapján, amely az 1:9 higítású Percoll® –t definiálja 100% működő, izotóniás oldatként. ÁLTALÁNOS ELJÁRÁS A következő egy általános eljárás a mozgékony spermának az ondóból történő két-lépéses gradiens elválasztására. A térfogat és koncentráció változtatható, hogy megfeleljen az egyes laboratóriumok preferenciáinak (pl. mini-gradiens, krioprezervált ondó, három-rétegű gradiens) 1. Hozzon minden médium alkotót szobahőmérsékletre, vagy 37 C°-ra. 2. Steril pipettát használva, vigyen át 1,5-2,0 ml-t az „ALSÓ RÉTEG”-ből egy steril, egyszer használatos, kúpos centrifuga-csőbe. 3. Új, steril pipettát használva, vigyen a „FELSŐ RÉTEG” –ből egyenlő térfogatot az „ALSÓ RÉTEG” tetejére. Ezt tegye úgy, hogy a pipetta hegyével a cső oldalán az „ALSÓ RÉTEG” felszínét érinti.Óvatosan adagolja a „FELSŐ RÉTEGET” a pipetta hegyének spirális mozgatásával a cső külső szélénél felfelé, ahogy a „FELSŐ RÉTEG” emelkedik. 4. Óvatosan helyezzen 1,5-2,0 ml elfolyósodott ondót a „FELSŐ RÉTEGRE” egy új steril pipettát használva. 5. Centrifugálja 10-20 percig körülbelül 200-300x g-vel.* Óvatosan tegye szabaddá a pelletet, vagy a „FELSŐ RÉTEG” és az „ALSÓ RÉTEG” elszívásával, vagy közvetlenül, a pellet eltávolításával és egy új steril centrifugacsőbe való átvitelével. *Megjegyzés: A sperma minta minőségét értékelni kell, és figyelembe kell venni a megfelelő centrifugálási sebesség és idő meghatározásánál. Ezeket az egyes minta minősége szerint kell módosítani az eljárás optimalizálása érdekében. 6. Egy új steril pipettát használva adagoljon 2,0-3,0 ml megfelelő mosómédiumot, például Sperm Washing Mediumot, (IS Katalógusszám: 9983), vagy Modified HTF –t (IS Katalógusszám:90126) fehérje kiegészítővel. Szuszpendálja újra az izolált pelletet. Centrifugálja (~200xg)-vel 8-10 percig, majd távolítsa el a felülúszót. Ismételje meg ezt a lépést egy második mosásra. Szabaduljon meg a felülúszótól és szuszpendálja újra a pelletet a megfelelő médium alkalmas térfogatával. A minta most kész az analízisre. E termékek használatára vonatkozóan a további részletekért minden laboratóriumnak a sajátos orvosi programjukra speciálisan kifejlesztett és optimalizált saját laboratóriumi eljárásaikban és protokolljaikban kell utánanéznie. TÁROLÁSI UTASITÁSOK ÉS STABILITÁS Tárolja a bontatlan konténereket hűtve, 2° és 8 C° között. Használat előtt melegítse a környezeti hőmérsékletre vagy az inkubátor hőmérsékletére (37 C°)-ra. Ne fagyassza, ne tegye ki magas hőmérsékletnek. Az ISolate stabil a doboz és az üveg címkéjén feltüntetett lejárati időpontig, amennyiben tárolása az utasításoknak megfelelően történt. ÓVINTÉZKEDÉSEK ÉS FIGYELMEZTETÉSEK Ezt az eszközt úgy tervezték, hogy használata az eszköz tervezett alkalmazását is magába foglaló eljárásokban kiképzett személyzet által történjen. A ISolate opálosnak fog tűnni. Ez normális ennél a terméknél. Ne használja a médium olyan fioláját, ami részecskék jelenlétét, vagy szennyezés jelét mutatja (nem egyenletes zavarosság). Az ISolate-nek szorosan lezártnak kell lennie, amikor CO2 inkubátorban használják a pH változások elkerülésére. Ez a termék nem tartalmaz tartósítót, antibiotikumot sem fehérje kiegészítőt. A szennyezéssel járó problémák elkerülése érdekében, aszeptikus technikák alkalmazásával kezelje. Ha sérült, ne használja. Dobja el, vagy juttassa vissza a gyártóhoz, cserére. VIGYÁZAT: A Szövetségi (US) törvény korlátozza ennek az eszköznek az értékesítését, csak orvos által, vagy orvosi utasításra történhet. Türk PRODUKTO APRAŠYMAS ISolate® yra tankio gradiento terpė, skirta iš sėklos sekreto atskirti judriąją spermatozoidų frakciją. Ši dviejų sluoksnių gradientinė sistema veiksmingai sumažina ląstelinius teršalus, tokius kaip negyvi spermatozoidai, leukocitai ir įvairios dalelių atplaišos. Galutinis mėginys daugiausia susideda iš judrių spermatozoidų. 3. Nauja sterilia pipete ant APATINIO SLUOKSNIO viršaus perkelkite tokį patį VIRŠUTINIO SLUOKSNIO tirpalo kiekį. Tai atliekama pipetės antgaliu paliečiant APATINIO SLUOKSNIO paviršių prie mėgintuvėlio šono. Atsargiai išlašinkite VIRŠUTINĮ SLUOKSNĮ spirališkai sukdami pipetės antgalį aplink mėgintuvėlio kraštą link viršaus, kai VIRŠUTINIO SLUOKSNIO lygis kyla. ISolate yra membraninį filtrą naudojant filtruota, aseptiškai apdorota koloidinė silicio dioksido dalelių suspensija, stabilizuota kovalentinėmis jungtimis prisijungusiu hidrofiliniu silanu HEPES buferintame HTF skystyje. Sterilumo užtikrinimo lygis (SAL) yra 10-3. Atlikus pirogenų nustatymo bandymą su triušiais, ISolate karščiavimo nesukėlė. 4. Nauja sterilia pipete 1,5–2,0 ml suskystėjusios spermos atsargiai užlašinkite ant VIRŠUTINIO SLUOKSNIO. NAUDOJIMO NURODYMAI Katalogo Nr. 99264 – PARUOŠTAS NAUDOTI KOLOIDINIS SILICIO DIOKSIDAS, DVIEJŲ KONCENTRACIJŲ (50% ir 90%) A. Rekomenduojamos medžiagos: ISolate • Irvine Scientific katalogo Nr. 99264 (6 ml, 50ml arba 100 ml buteliukų rinkinys) Sperm Washing Medium (spermos plovimo terpė) • Irvine Scientific katalogo Nr. 9983 Sterilūs, vienkartiniai kūginiai centrifuginiai mėgintuvėliai • Irvine Scientific katalogo Nr. IS-325 Pastero pipetės, sterilios Centrifuga Inkubatorius, 37 °C temperatūra B. Gradiento paruošimas: Iš anksto praskiesti nereikia. Visi viršutinio ir apatinio sluoksnio gradiento buteliukai yra paruošti naudoti. Toliau žiūrėkite produkto pakuotės lapelio skyrių BENDROJI PROCEDŪRA. Katalogo Nr. 99275 – STOCK SOLUTION (pradinis tirpalas) 90% tankio grandientinė terpė, skirta vieno etapo procedūrai arba tolesniam skiedimui. A. Rekomenduojamos medžiagos: ISolate STOCK SOLUTION (pradinis tirpalas) •Irvine Scientific katalogo Nr. 99275 Modified Human Tubal Fluid •Irvine Scientific katalogo Nr. 90126 Sperm Washing Medium (spermos plovimo terpė) •Irvine Scientific katalogo Nr. 9983 Sterilūs, vienkartiniai kūginiai centrifuginiai mėgintuvėliai •Irvine Scientific katalogo Nr. IS-325 Pastero pipetės, sterilios Centrifuga Inkubatorius, 37 °C temperatūra B. Gradiento paruošimas: Taikant gradientinį spermatozoidų atskyrimo metodą, naudojami du tirpalai: viršutinio sluoksnio tirpalas ir apatinio sluoksnio tirpalas. 1. Viršutinio sluoksnio tirpalas – 50%: a) Paėmę STOCK SOLUTION (katalogo Nr. 99275), 5,6 ml pradinio tirpalo pipete įlašinkite į sterilų centrifuginį mėgintuvėlį; b) Pridėkite 4.4 ml Modified Human Tubal Fluid terpės (katalogo Nr. 90126); c) Mėgintuvėlį uždenkite ir atsargiai 3–4 kartus apverskite, kad jo turinys visiškai susimaišytų; d) Mėgintuvėlį pažymėkite VIRŠUTINIS SLUOK SNIS; 2. Apatinio sluoksnio tirpalas – 90%: a) 10 ml STOCK SOLUTION pradinio tirpalo atid alinkite į sterilų centrifuginį mėgintuvėlį ir uždenkite (daugiau skiesti nereikia – STOCK SOLUTION yra 90% koncentracijos). b) Mėgintuvėlį pažymėkite APATINIS SLUOK SNIS; 3. Toliau žiūrėkite produkto pakuotės lapelio skyrių BENDROJI PROCEDŪRA. (PASTABA: 10 ml virš utinio sluoksnio tirpalo ir 10 ml apatinio sluoksnio tirpalo kiekis yra skirtas apdoroti apytikriai 5 spermos mėginius.) Katalogo Nr. 99306 – CONCENTRATE (koncentratas) Koloidinio silicio dioksido koncentratas, skirtas tolesniam skiedimui pagal tankio gradientą; paruoštas izotoniniame buferiniame tirpale, tankis apytikriai atitinka neskiestos Percoll ® terpės tankį. ISolate ® CONCENTRATE koncentratą ištyrus šiame pakuotės lapelyje nurodytais metodais, nustatyta 50% ir 90% gradientų koncentracija. Kiekviena laboratorija gali pasigaminti skirtingų koncentracijų gradientus, kurių veiksmingumą reikia įvertinti. A. Rekomenduojamos medžiagos: ISolate® koncentratas •Irvine Scientific katalogo Nr. 99306 Modified Human Tubal Fluid •Irvine Scientific katalogo Nr. 90126 Sperm Washing Medium (spermos plovimo terpė) •Irvine Scientific katalogo Nr. 9983 Sterilūs, vienkartiniai kūginiai centrifuginiai mėgintuvėliai •Irvine Scientific katalogo Nr. IS-325 Pastero pipetės, sterilios Centrifuga Inkubatorius, 37 °C temperatūra B. Gradiento paruošimas: Taikant gradientinį spermatozoidų atskyrimo metodą, naudojami du tirpalai: viršutinio sluoksnio tirpalas ir apatinio sluoksnio tirpalas. 1. Viršutinio sluoksnio tirpalas – 50%: a) Paėmę CONCENTRATE (katalogo Nr. 99306), 4.5 ml koncentrato pipete įlašinkite į sterilų centrifuginį mėgintuvėlį; b) Pridėkite 5.5 ml Modified Human Tubal Fluid terpės (katalogo Nr. 90126); c) Mėgintuvėlį uždenkite ir atsargiai 3–4 kartus apverskite, kad jo turinys visiškai susimaišytų; d) Mėgintuvėlį pažymėkite VIRŠUTINIS SLUOK SNIS; 2. Apatinio sluoksnio tirpalas – 90%: a) Paėmę CONCENTRATE (katalogo Nr. 99306), 8.1 ml koncentrato pipete įlašinkite į sterilų centrifuginį mėgintuvėlį; b) Pridėkite 1.9 ml Modified Human Tubal Fluid terpės (katalogo Nr. 90126); c) Mėgintuvėlį uždenkite ir atsargiai 3–4 kartus apverskite, kad jo turinys visiškai susimaišytų; d) Mėgintuvėlį pažymėkite APATINIS SLUOK SNIS; 3. Toliau žiūrėkite produkto pakuotės lapelio skyrių BENDROJI PROCEDŪRA. (PASTABA: 10 ml viršutinio sluoksnio tirpalo ir 10 ml apatinio sluoksnio tirpalo kiekis yra skirtas apdoroti apytikriai 5 spermos mėginius.) Pastaba: 50% ir 90% dydžiai neapibrėžia konkrečios koncentracijos. 50% ir 90% yra santykinės koncentracijos dydžiai, pagrįsti ankstesne nomenklatūra, kuri apibrėžė 1:9 santykiu praskiestą Percoll ® preparatą kaip lygiavertį 100% darbiniam izotoniniam tirpalui. BENDROJI PROCEDŪRA Toliau aprašyta bendroji procedūra dviejų etapų grandientiniam judrių spermotozoidų išskyrimui iš spermos. Tūrį ir koncentraciją galima keisti pagal atskiros laboratorijos poreikius (t. y., minigradientas, kriokonservuota sėkla, trisluoksnis gradientas). 1. Visus terpės komponentus atšildykite iki kambario arba 37 °C temperatūros. 2. Sterilia pipete perkelkite 1,5–2,0 ml APATINIO SLUOKSNIO tirpalo į sterilų vienkartinį kūginį centrifūgavimo mėgintuvėlį 5. Centrifuguokite 10–20 minučių esant apytikriai 200–300 x g režimui.* Atsargiai išskirkite granulę įsiurbdami VIRŠUTINIO ir APATINIO SLUOKSNIO tirpalo arba granulę tiesiai išsiurbdami ir perkeldami į naują sterilų centrifuginį mėgintuvėlį. Pastaba: Reikia įvertinti spermos mėginio kokybę ir į tai atsižvelgiant numatyti tinkamą centrifugavimo greitį ir laiką. Procedūros optimizavimui, juos reikia pakoreguoti atsižvelgiant į atskiro mėginio kokybę. 6. Nauja sterilia pipete įlašinkite 2,0–3,0 ml atitinkamos plovimo terpės, tokios kaip Sperm Washing Medium (IS katalogo Nr. 9983) arba Modified HTF (IS katalogo Nr. 90126) su baltyminiais priedais. Izoliuotą granulę resuspenduokite. Centrifuguokite 8–10 minučių (~200 x g režimu) ir pašalinkite supernatantą. Pakartokite šį etapą antrojo plovimo metu. Išmeskite supernatantą, o granulę resuspenduokite tinkamame reikiamos terpės kiekyje. Dabar mėginys yra paruoštas analizei. Dėl išsamesnių šių produktų naudojimo gairių kiekviena laboratorija turi žiūrėti savo vidaus darbo tvarkos taisykles ir metodinius nurodymus, specialiai parengtus ir optimizuotus pagal atskiros medicininės programos nuostatas. LAIKYMO SĄLYGOS IR STABILUMAS Neatidarytas talpykles laikykite šaldytuve 2 ºC–8 ºC temperatūroje. Prieš naudojimą atšildykite iki aplinkos arba inkubatoriaus (37 °C) temperatūros. Negalima užšaldyti, būtina saugoti nuo aukštos temperatūros. Laikant pagal nurodymus, ISolate produktas išlieka stabilus iki tinkamumo datos, pažymėtos dėžutės ir butelio etiketėse. ATSARGUMO PRIEMONĖS IR ĮSPĖJIMAI Šis prietaisas yra skirtas naudoti darbuotojams, apmokytiems atlikti procedūras, susijusias su prietaiso taikymu pagal numatytą paskirtį. ISolate išvaizda yra matinė. Tai šiam produktui yra normalu. Negalima naudoti jokio terpės buteliuko, jei skystyje matyti kietųjų dalelių ar užterštumo (nevienalytis drumstumas). Laikant CO 2 inkubatoriuje, ISolate reikia sandariai uždengti, kad nepasikeistų pH pusiausvyra. Šio produkto sudėtyje nėra konservantų, antibiotikų ir baltymų priedų. Norint išvengti užkrėtimo, naudojimo metu reikia laikytis metodinių aseptikos reikalavimų. Jei produktas pažeistas, jo nenaudokite. Išmeskite arba grąžinkite gamintojui, kad pakeistų. PERSPĖJIMAS: Pagal federalinius (JAV) įstatymus, šis prietaisas gali būti parduodamas tik gydytojų arba jų užsakymu. ÜRÜN TANIMI ISolate® spermin motil fraksiyonunu seminal sıvıdan ayırmak için tasarlanmış bir yoğunluk aşamalı medyumdur. İki katmanlı bir sistem olarak ölü hücre, beyaz kan hücreleri ve debris gibi hücre kontaminantlarını etkili bir şekilde azaltır. Elde edilen örnek, baskın olarak motil sperm içerir. ISolate membran filtreli, aseptik olarak işlenmiş bir kolloidal silika partikülleri süspansiyonudur. HEPES-tamponlu HTF’deki eşdeğerli bir şekilde bağlanmış hidrofilik silanla stabilize edilmiştir. Sterilite güvence düzeyi 10-3’tür. ISolate test edilmiştir ve tavşan pirojeni testinde pirojenlere karşı negatif olduğu bulunmuştur. KULLANIM YÖNERGELERİ Katalog #99264 – İKİ KONSANTRASYON HALİNDE (%50 ve %90) KULLANIMA HAZIR KOLLOİDAL SİLİKA A. Önerilen Materyaller: ISolate • Irvine Scientic Katalog #99264 (6mL , 50 mL veya 100 mL viyal kiti) Sperm Yıkama Medyumu • Irvine Scientic Katalog #9983; Steril, tek kullanımlık konik santrifüj tüpleri • Irvine Scientic Katalog #IS-325 Pastör Pipetleri, steril Santrifüj İnkübatör, 37°C B. Gradyan Hazırlama: Hiçbir ön dilüzyon gerekmez. Üst ve alt katman gradyanın her bir viyali kullanıma hazırdır. Ürün broşürünün GENEL PROSEDÜR bölümüne geçin. Katalog #99275 - STOK SOLÜSYON Tek adımlı bir prosedürde veya daha fazla dilüsyon için kullanıma yönelik %90 yoğunluk aşamalı medyum. A. Önerilen Materyaller: ISolate Stok Solüsyon • Irvine Scientic Katalog #99275 Modifiye İnsan Tübal Sıvısı • Irvine Scientic Katalog #90126 Sperm Yıkama Medyumu • Irvine Scientic Katalog #9983 Steril, tek kullanımlık konik santrifüj tüpleri • Irvine Scientic Katalog #IS-325 Pastör Pipetleri, steril Santrifüj İnkübatör, 37°C B. Gradyan Hazırlama: Gradyan sperm ayırma yöntemini uygulamak için iki solüsyon gerekir: bir üst katman ve bir alt katman. 1. Üst Katman solüsyonu - %50: a) STOK SOLÜSYON’u alın (Katalog #99275) ve steril bir santrifüj tüpüne 5.6 mL pipetleyin b) Modifiye İnsan Tübal Sıvısından (Katalog #90126) 4.4 mL ekleyin c) Tüpü tıpalayın ve tam karışma için 3-4 kez nazikçe ters çevirin d) Tüpü “ÜST KATMAN” diye etiketleyin 2. Alt Katman solüsyonu - %90: a) STOK SOLÜSYON’un 10 mL’sini steril bir santrifüj tüpüne alikotlayın ve tıpalayın (Başka dilüsyon gerekmez; Stok Solüsyon %90’dır) b) Tüpü “ALT KATMAN” diye etiketleyin 3. Ürün broşürünün GENEL PROSEDÜR bölümüne geçin. (NOT: 10 mL Üst Katman ve 10 mL Alt Katman yaklaşık 5 semen örneğinin işlenmesini sağlar.) Katalog #99306 – KONSANTRAT Yoğunluk aşamalarına daha fazla dilüsyon için kolloidal silika konsantratı; izotonik bir tamponda formüle edilmiştir ve seyreltilmemiş Percoll®’un yoğunluğuna yakındır. ISolate® KONSANTRAT bu paket proşürüne göre %50 ve %90’lık gradyanlarda değerlendirilmiştir. Her laboratuar, etkililiğini değerlendirmek üzere farklı konsantrasyonlarda gradyanlar yapmak isteyebilir. A. Önerilen Materyaller: ISolate® Konsantrat • Irvine Scientic Katalog #99306 Modifiye İnsan Tübal Sıvısı • Irvine Scientic Katalog #90126 Sperm Yıkama Medyumu • Irvine Scientic Katalog #9983 Steril, tek kullanımlık konik santrifüj tüpleri • Irvine Scientic Katalog #IS-325 Pastör Pipetleri, steril Santrifüj İnkübatör, 37°C B. Gradyan Hazırlama: Gradyan sperm ayırma yöntemini uygulamak için iki solüsyon gerekir: bir üst katman ve bir alt katman. 1. Üst Katman solüsyonu - %50: a) KONSANTRATI (Katalog #99306) alın ve steril bir santrifüj tüpüne 4.5 mL pipetleyin b) Modifiye İnsan Tübal Sıvısından (Katalog #90126) 5.5 mL ekleyin c) Tüpü tıpalayın ve tam karışma için 3-4 kez nazikçe ters çevirin d) Tüpü “ÜST KATMAN” diye etiketleyin 2. Alt Katman solüsyonu - %90: a) KONSANTRATI (Katalog #99306) alın ve steril bir santrifüj tüpüne 8.1 mL pipetleyin b) Modifiye İnsan Tübal Sıvısından (Katalog #90126) 1.9 mL ekleyin c) Tüpü tıpalayın ve tam karışma için 3-4 kez nazikçe ters çevirin d) Tüpü “ALT KATMAN” diye etiketleyin 3. Ürün broşürünün GENEL PROSEDÜR bölümüne geçin. NOT: %50 ve %90 terimleri gerçek konsantrasyonu temsil etmez. %50 ve %90, Percoll®’un 1:9 dilüsyonunu %100 çalışan, izotonik bir solüsyona eşit olarak tanımlayan önceki nomenklatüre dayalı göreli konsantrasyonlardır. GENEL PROSEDÜR Aşağıda, motil spermi semenden ayırmaya yönelik iki adımlı bir gradyan ayırma genel prosedürü sunulmaktadır. Hacim ve kontrasyon, her bir laboratuarın tercihini karşılayacak şekilde değiştirilebilir (yani mini-gradyan kriyoprezerve semen, üç-katmanlı gradyan). 1. Tüm medya bileşenlerini oda sıcaklığına veya 37°C’a getirin. 2. Steril bir pipet kullanarak “ALT KATMAN”ın 1.5-2.0 mL’sini steril, tek kullanımlık, konik bir santrifüj tüpüne aktarın. 3. Yeni bir steril pipet kullanarak eşit hacimde “ÜST KATMAN”ı “ALT KATMAN”ın üzerine aktarın. Bu, “ALT KATMAN”ın yüzeyinin pipet ucuyla tüpün yan tarafına temas ettirilmesiyle sağlanır. Pipet ucunu tüp etrafında yukarı doğru bir hareketle spiral şekilde hareket ettirerek “ÜST KATMAN”ı dikkatli bir şekilde aktarın. 4. Yeni bir steril pipet kullanarak “ÜST KATMAN”a nazikça 1.5-2.0 mL sıvı semen yerleştirin. 5. Yaklaşık 200 - 300xg ile 10-20 dakika santrifüjleme yapın.* Ya “ÜST” ve “ALT KATMANLARI” çıkararak, ya da doğrudan pelleti çıkarıp yeni bir steril santrifüj tüpüne aktararak pelleti dikkatli bir şekilde ortaya çıkarın. Not: Sperm örneğinin kalitesi değerlendirilmeli ve uygun santrifüjleme hızı ve zamanı belirlenirken göz önünde bulundurulmalıdır. Bunlar, prosedürün optimizasyonuna yönelik örnek kalitesine göre ayarlanmalıdır. 6. Yeni bir steril pipet kullanarak, Sperm Yıkama Medyumu (IS Katalog #9983) veya Modifiye Edilmiş HTF’den (IS Katalog #90126) 2.0 - 3.0 mL’lik bir miktarı protein takviyesiyle birlikte ekleyin. İzole pelleti yeniden süspanse edin. 8-10 dakika boyunca santrifüjleme (~200xg) yapın ve üst fazı çıkarın. İkinci bir yıkama için bu adımı tekrarlayın. Üst fazı atın ve uygun medyumdan uygun bir hacim kullanarak pelleti yeniden süspanse edin. Örnek şimdi analiz için hazırdır. Bu ürünlerin kullanımıyla ilgili ek ayrıntılar için, her laboratuar, kendi medikal programınız için özel olarak geliştirilmiş ve optimize edilmiş olan kendi laboratuar prosedürlerine ve protokollerine başvurmalıdır. SAKLAMA TALİMATLARI VE STABİLİTE Açılmamış kapları 2°-8°C’da saklayın. Kullanım öncesi ortam sıcaklığıan veya inkübatör (37°C) sıcaklığına getirin. Dondurmayın veya yüksek sıcaklıklara maruz bırakmayın. ISolate bu şekilde saklandığında, kutu ve şişe etiketi üzerinde belirtilen son kullanım tarihine kadar stabildir. ÖNLEMLER VE UYARILAR Bu cihaz, cihazla ilgili olarak tanımlanan uygulamaları da kapsayan yardımla üreme prosedürlerinde eğitimli personel tarafından kullanıma yönelik olarak tasarlanmıştır. ISolate opak görünür. Bu ürün için bu normaldir. Partikülat madde veya kontaminasyon (tektip olmayan bulanıklık) kanıtı içeren herhangi bir medyum viyali kullanmayın. Bu üründe hiçbir koruyucu madde, antibiyotik veya protein takviyesi bulunmamaktadır. Kontaminasyonla ilgili sorunlardan sakınmak için aseptik teknikler kullanın. Hasar durumunda kullanmayın. Atın veya değiştirmek için üreticiye iade edin. Dikkat: Federal (ABD) yasalar bu cihazın bir doktor tarafından satılması veya sipariş edilmesi sınırlamasını getirmektedir.