Bioterios y Laboratorios de Experimentación Animal(LEA) Patricia Genovese CHEA-CSIC Universidad de la Republica “Se debe disponer de instalaciones bien diseñadas, equipadas, mantenidas y bien utilizadas para obtener resultados válidos y reproducibles” Definición de Bioterio: bíos, “vida” y terio "lugar". Lugar donde se alojan animales que cuentan con una calidad genética y microbiológica definida donde se realiza la cría, mantenimiento y experimentación. Se controla la calidad y cantidad de luz, las renovaciones de aire por hora, la temperatura y la humedad entre otros factores, acordes a las necesidades de la especie que allí se aloje. Fines: investigación, producción y docentes Definición de LEA: Lugar donde se alojan animales que cuentan con una calidad genética y microbiológica definida donde se realiza experimentación. Se controla la calidad y cantidad de luz, las renovaciones de aire por hora, la temperatura y la humedad entre otros factores, acordes a las necesidades de la especie que allí se aloje. Podrá o no estar físicamente incluido dentro del bioterio. Fines: investigación y docencia. Factores de mantenimiento de la calidad microbiológica y sanitaria: Infraestructura edilicia Equipamiento Barreras Sanitarias Funcionarios e Investigadores (principal factor) Macroambiente: ambiente físico del encierro secundario, temperatura, humedad, ventilación, luz, sonidos. Infraestructura Edilicia: 1. módulos con animales estabulados: - Aislamiento y cuarentena. - Producción. -Mantenimiento: racks y jaulas. -Experimentales: equipamiento para toma de muestras. 2. Servicios: - Vestuarios. - Almacenes. - Lavado y autoclave. - Eliminación de residuos. - Administrativa. - Pasillos. Estructura Física: Pisos y paredes: materiales lavables, resistentes a desinfectantes, lisos, uniformes y con ángulo sanitario. Techos: similares a pisos y paredes con ángulo sanitario y con leve inclinación o abovedados. Puertas: con cierres herméticos, lisas y de fácil limpieza, con ventanas de vista y con trampas de escape. NO deben existir ventanas al exterior Temperatura • adecuada a las necesidades de la especie que se esté utilizando, y del modelo experimental. • 21-23 ± 2 °C. • alimentos y productos perecederos de 15 a 20 ºC Humedad Relativa • 50 - 70% donde están los animales • en almacenes debe ser menor Ventilación • sin ventilación natural • con sistemas forzados de impulsión y extracción para: - suministro de oxígeno - eliminar calor producido por respiración,iluminación y equipos - diluir gases contaminantes y partículas - ajustar humedad • Aire filtrado (filtros HEPA (High Efficiency Particulate Air) evitan propagación de bacterias y virus. Suelen incorporar luz ultravioleta de alta energía para eliminar cualquier bacteria viva y virus atrapado por el filtro físico, llegando al 99.995% de eficiencia.) Renovación: • suministrar aire fresco • bajo nivel de olores, gases nocivos, polvo, etc. • zonas de mantenimiento al menos 20 renovaciones/hs. • zonas de lavado de 15 a 20 renovaciones/hs • zonas de almacenamiento y laboratorios. • Velocidad 0,5 mts/seg Impulsión y Extracción: • no directo sobre animales o personas • extracción en zonas bajas • presión diferencial en zonas contiguas Recordar: extracción en zonas bajas Modificado de: CCAC Lab animal facilities (2003) Sectores de producción Sectores de experimentación TIPOS DE BIOTERIO INSTALACIONES CONVENCIONALES: Cuartos para animales tienen un soló acceso por el que entran y salen artículos limpios y sucios. Existe riesgo de contaminación cruzada entre los cuartos. Dentro del cuarto debe haber presión negativa y afuera positiva. TIPOS DE BIOTERIO CORREDORES LIMPIO y SUCIO: Flujo de tráfico en una sola dirección, la entrada conduce desde el corredor limpio al cuarto y la salida del cuarto conduce al pasillo sucio. El flujo de aire tiene diferentes presiones. TIPOS DE BIOTERIO BIOTERIO DE BARRERA Y CONTENCIÓN: mantiene la contaminación fuera de un área y de contención mantiene la contaminación dentro de un área. Iluminación Espectro: •Sensibles a los verdes y azules, el resto son matices de gris. Importante para la rata no es el color sino el brillo. Tiene 1/30 la agudeza visual del humano. Poca visión binocular es “presa” con poca percepción de profundidad. Ven muy mal con luz brillante o tenue. Cómo iluminamos? • ideal la luz fluorescente “luz de día” • constante para disminuir variaciones fisiológicas (ej.: ciclo estral) • 12 hs luz / 12 hs oscuridad con encendido y apagado automático • uniforme en todas las zonas adecuada a la sp. •mayor o igual a 325 lux Ruido: Rango audible de las ratas 200hZ-80kHz (humanos 16hZ-20kHz) Se denomina ultrasonido por encima de 20kHz y por debajo infrasonido. Sonido indeseable, importante la intensidad, frecuencia y duración. El control del ruido se debe considerar en el diseño y operación de las instalaciones No usar: radares, alarmas etc. Actividades ruidosas en áreas separadas del alojamiento de animales Microambiente: ambiente físico que rodea al animal, es el encierro primario. Jaula y sus dimensiones, alimento, agua y “cama”. Debe permitir: -Necesidades comportamentales, fisiológicas, temperatura, posturas, Interacción social coespecífica y desarrollo de jerarquías -Limpio y seco -Ambiente seguro, sin escapes ni accidentes. -Poder observar con mínimo disturbio Factores Ambientales que Afectan a los Animales Climáticos: temperatura, humedad, ventilación, etc.. Fisicoquímicos: iluminación, ruido, contaminantes, desinfectantes, etc.. Habitacionales: forma, tamaño, tipo,población de las jaulas, etc.. Nutricionales: dietas, agua, esquema de administración, etc.. Situación experimental Nutricionales Ración: • no contaminada y nutircionalmente adecuada. • administrada diariamente o de acuerdo a los requerimientos de la especie. • transportada y almacenada en condiciones adecuadas. • comederos deben permitir fácil acceso y reducir contaminación con orina y heces y competencia por acceso a comida. Importante: temperatura mayor a 21 ºC y humedad elevada aceleran su deterioro Agua: • administrada diariamente o según necesidades • tratada • pipetas de bebederos y válvulas automáticas en buen estado • cambiarlos en lugar de rellenar las mamaderas CAMA : LIBRE DE POLVO AUTOCLAVABLE LIBRE DE PIGMENTOS LIBRE DE SUSTANCIAS TOXICAS Limpieza Macro y microambiente: Afectan a la salud, el comportamiento y el bienestar de los animales, que además influyen en los resultados de la investigación o pruebas experimentales. Barreras Sanitarias Conjunto de medidas técnicas, mecánicas, teóricas y sanitarias para evitar las contaminaciones en cualquier sentido, dentro de un área de producción, mantenimiento, experimentación o sistema mixto.(ILAR) Tipos de Barreras Barreras Técnicas: instalaciones que permiten tener al animal en el estado sanitario exigido (Arquitectos e Ingenieros expertos) Barreras Mecánicas: necesidades de funcionamiento, ventilación, iluminación, limpieza, esterilización, aislamiento acústico. (Ingenieros expertos) Barreras Teóricas: protocolos de trabajo, mantenimientos de aparatos y equipos, cuarentenas, etc. (Técnicos e Investigadores) Barreras Sanitarias: crear ambiente eficaz y seguro para evitar zoonosis y contaminaciones indeseadas (expertos en seguridad biológica, veterinarios) Ejemplos de Barreras • Sistemas de filtración • Presión diferencial • Sistemas de esterilización • Limpieza por aspiración • Doble puerta • Pasillos y Accesos • Zonas de seguridad biológica • Tratamiento del agua • Tanque de inmersión • Barreras anti-roedores e insectos (drenajes con tapas seguras) • Ropa específica Tanque de inmersión Barreras Para el Ingreso de Animales (Cuarentena): Certificado de procedencia Transporte adecuado Permanencia en sala especial antes del ingreso para repetir los análisis que se considere necesario Observación clínica mínima 15 días Derivación por histerectomía AIRE Estaciones de cambio Microaislador Aisladores Agua Acidificación con HCl a pH 2.5 – 3 Hipercloración de 3 a 6 ppm Filtración de agua Esterilización de botellas y picos: Autoclave Procedimiento para cajas y jaulas LAVADO y DESINFECCION mínimo ESTERILIZACION máximo Personal Funcionarios e Investigadores (principal factor) capacitado en el mantenimiento de buenas condiciones de higiene y en la aplicación de todas las medidas necesarias para prevenir la contaminación. Vestimenta: ropa estéril cubrezapatos gorro guantes y mascarilla Además: Acreditación en categoría correspondiente. Certificado sanitario (vacunas especificas) Detección de sensibilidad a alérgenos. Actualización de sus conocimientos. LEA Fac. de Química Entrada Vestimenta Preguntas??