GAINtm medium GAINtm medium GAINtm medium

METHOD
GAIN medium
tm
EN
GAIN medium Early Stage
GAIN medium Blastocyst
Cell culture media for the in vitro culture
of human embryos and gametes
Doc.: FP09 I79 R01 C.3
Update: 16.10.2015
GAIN medium is sterilized by sterile filtration
USED ABBREVIATIONS
ICSI IntraCytoplasmatic Sperm Injection
IUI Intra-Uterine Insemination
IVF In Vitro Fertilization
OCCOocyte-Corona-Cumulus
INTENDED USE
GAIN medium consists of 2 types of ready to use cell culture
media for use with human embryos and gametes.
The media can be used for fertilization, zygotes and embryos
culture through the cleavage stages and up to the expanded
blastocyst stage and for embryo transfer.
»
»
GAIN medium Early Stage (GAIN ES) can be used for the
handling of oocytes (in preparation of, or during IVF/ICSI)
and for cell culture from fertilization up to 4-cell stage, for
the processing of semen and for embryo transfer
GAIN medium Blastocyst (GAIN BL) is designed for
embryo culture from 4-cell up to expanded blastocyst
stage and for embryo transfer. Alternatively, the medium
can be used immediately after fertilization, up till expanded
blastocyst stage.
For professional use only
COMPOSITION
GAIN media are bicarbonate-buffered balanced salt solutions with 10mg/liter gentamicin and 3.5g/liter human
serum albumin.
MATERIAL INCLUDED WITH THE KIT
Product code
Product description
GAIN010ES
GAIN010BL
1x 10ml GAIN medium Early Stage
1x 10ml GAIN medium Blastocyst
MATERIAL NOT INCLUDED WITH THE KIT
» Well dishes
»CO 2 incubator (37°C – 5% CO 2 )
» LAF bench (ISO Class 5)
»Microscope
» Syringe (e.g. 1ml Plastipack)
» Catheter (for embryo transfer)
PRODUCT SPECIFICATIONS
»
»
»
»
»
»
»
»
Chemical composition
pH @ 37°C and 5% CO 2: 7.20-7.45
Osmolality: 270-290 mOsm/kg
Sterility: SAL 10 -­­­­­ 3
Endotoxins: < 0.25 EU/ml
Mouse Embryo Assay (blastocysts after 96h): ≥ 80%
after 30min of exposure (zygote stage)
Use of Ph Eur or USP grade products if applicable
The certificate of analysis and MSDS are available
upon request
PRE-USE CHECKS
»
»
Do not use the product if it becomes cloudy, or shows any
evidence of microbial contamination.
Do not use the product if the seal of the container is
opened or defect when the product is delivered.
STORAGE INSTRUCTIONS
»
»
»
»
»
Suitable for transport or short term storage at elevated
temperatures (up to 5 days at 37°C).
Store at 2-8°C, do not freeze before use.
Keep away from (sun)light.
The products can be used safely up to 7 days after opening,
when sterile conditions are maintained and the products
are stored at 2-8°C.
Do not use after expiry date.
WARNINGS AND PRECAUTIONS
Standard measures to prevent infections resulting from the
use of medicinal products prepared from human blood or
plasma include selection of donors, screening of individual
donations and plasma pools for specific markers of infection
and the inclusion of effective manufacturing steps for the
inactivation/removal of viruses. Despite this, when medicinal products prepared from human blood or plasma are
administered, the possibility of transmitting infective agents
cannot be totally excluded. This also applies to unknown or
emerging viruses and other pathogens. There are no reports
of proven virus transmissions with albumin manufactured
to European Pharmacopoeia specifications by established
processes. Therefore, handle all specimens as if capable of
transmitting HIV or hepatitis. Always wear protective clothing
when handling specimens. Always work under strict hygienic
conditions (e.g. LAF-bench ISO Class 5) to avoid possible
contamination.
GAIN media contain the antibiotic Gentamicin Sulphate.
Appropriate precautions should be taken to ensure that the
patient is not sensitized to this antibiotic.
GAIN_medium_04.01.16.indd 1
MÉTHODE
Medium pre-equilibration
Incubate the medium (in culture dishes or flasks with
loosened screw tops) for at least 4 hours in a CO 2 incubator
at 37°C and 5% CO 2. Ideally the medium should be preincubated overnight before use.
GAIN medium
General notes for use
GAIN medium should generally be used in an incubator at
37°C and 5% CO 2 at normal atmospheric pressure (see Note
on optimal pH and the atmospheric pressure).
The medium works well in 6 cm dishes with six 50 µl
droplets covered with 6ml light paraffin oil (FertiCult Mineral
Oil, FertiPro NV, Belgium). Per droplet 4 trimmed OCCs
can be cultured and inseminated with approximately 0.1
million sperms.
Milieux de culture cellulaire
pour la culture in vitro d'embryons et
de gamètes humains
Standard culture method
» Use GAIN medium Early Stage for the handling of oocytes
(in preparation of, or during IVF/ICSI), and culture of
zygotes and embryos up to 4-cell stage.
Note: After fertilization and denudation the zygotes have to
be transferred to a fresh droplet of GAIN medium Early Stage.
» Use GAIN medium Blastocyst for the culture of embryos
from 4-cell up to expanded blastocyst stage. Make sure
that the fresh medium is pre-incubated before transfer of
the 4-cell stage embryos.
ABRÉVIATIONS EMPLOYÉES
Alternative culture method
» Use GAIN medium Early Stage for the handling of oocytes
(in preparation of, or during IVF/ICSI) and fertilization.
» Use GAIN medium Blastocyst for the culture of zygotes
to expanded blastocyst stage. Make sure that the fresh
medium is pre-incubated before transfer of the embryos.
Refreshing of culture media
It is advisable (but not mandatory) to transfer the embryos
to fresh pre-incubated medium at least every 48 hours in
culture. Of course shorter culture times are possible (e.g.
to the 8 cell stage at day 3, or morula/compaction at day 4).
Sperm processing
GAIN Early Stage medium can be used to dilute and to wash
semen for centrifugation. It can also be used in combination
with a density gradient (Sil-Select Plus, FertiPro NV, Belgium)
and/or swim-up, following standard procedures.
The inseminates can be used for IUI, IVF and ICSI. Good
quality sperm cells survive well over a period of 48 hours
in GAIN medium.
Note: however that GAIN medium does not contain HEPES so in
order to maintain a physiological pH, CO 2 incubation is necessary. If a HEPES-buffered medium is preferred, we recommend
to use FertiCult Flushing medium (FertiPro N.V., Belgium).
Note on optimal pH and the atmospheric pressure
GAIN medium must generally be used in an incubator at 37°C
and 5% CO 2. At normal atmospheric pressure at sea level
(101.3 kPa, range: 99 - 103 kPa) this will result in a medium
with a pH of approximately 7.28. At lower atmospheric pressure or higher altitudes, the percentage CO 2 in the incubator
must be increased.
Below is a table with estimated CO 2 setpoint at different air
pressures. The only way to obtain certainty about the pH is
to measure directly under culture conditions with a suitable
well-calibrated pH meter. For optimal embryo culture the pH
should be: 7.28 ± 0.05.
GAIN medium contains a low concentration of Phenol Red
(approx. 0.001 mM) which is sufficient to indicate the pH. At
the correct pH the colour is a pale bright red. If the medium
turns orange or yellowish the pH is too low, if it turns pink or
purplish the pH is too high.
Altitude
(meters)
AtmosphericCO 2 set point*
air pressure 0 (sea level)
0 - 400 m
400 - 800 m
800 - 1200 m
101.3 kPa
100 - 96 kPa
96 - 92 kPa
92 - 89 kPa
5.0%
5.0 - 5.2%
5.3 - 5.5%
5.6 - 5.8%
* Calculated as follows: (pressure sea level / pressure altitude) x 5%.
tm
FR
GAIN medium Early Stage
GAIN medium Blastocyst
Doc. : FP09 I79 R01 C.3
Mise à jour : 16.10.2015
GAIN medium est stérilisé par filtration stérile
ICSI
IU
FIV
COC
Injection spermatique intracytoplasmique
Insémination intra-utérine
Fécondation in vitro
Complexe ovocyte-cumulus
UTILISATION PRÉVUE
GAIN medium est composé de deux types de milieux de culture cellulaire prêts à l'emploi à utiliser avec des embryons
et des gamètes humains.
Les milieux peuvent être employés pour la fécondation, la
culture de zygotes et d'embryons pendant les stades de
segmentation et jusqu'au stade blastocyste expansé et le
transfert d'embryon.
»
»
GAIN medium Early Stage (GAIN ES) peut être utilisé
pour la manipulation d'ovocytes (en préparation à, ou
pendant, la FIV/ICSI), la culture cellulaire de la fécondation au stade quatre cellules, le traitement du sperme et
le transfert d'embryon.
GAIN medium Blastocyst (GAIN BL) est conçu pour la
culture d'embryons du stade quatre cellules au stade
blastocyste expansé et le transfert d'embryon. Il est
également possible d'utiliser le milieu immédiatement
après la fécondation, jusqu'au stade blastocyste expansé.
Réservé à l'usage professionnel
COMPOSITION
GAIN medium, solutions salines équilibrées tamponnées au
bicarbonate contenant 10 mg/l de gentamicine et 3,5 g/l de
sérum-albumine humaine.
MATÉRIEL FOURNI AVEC LE KIT
Code de produit
Description du produit
GAIN010ES
GAIN010BL
1x 10ml GAIN medium Early Stage
1x 10ml GAIN medium Blastocyst
MATÉRIEL NON FOURNI AVEC LE KIT
» Boîtes à puits
» Incubateur à CO 2 (37°C – 5% CO 2 )
» Poste de travail à flux d’air laminaire (classe ISO 5)
»Microscope.
» Seringue (par ex., Plastipack 1 ml)
» Cathéter (pour le transfert d'embryon)
CARACTÉRISTIQUES DU PRODUIT
»
»
»
»
»
»
»
»
Composition chimique
pH à 37°C et 5% CO 2 : 7.20-7.45
Osmolalité : 270-290 mOsm/kg
Stérilité : Niveau garanti de stérilité : 10 -­­­­­ 3
Endotoxines : < 0.25 EU/ml
Essai sur embryon de souris
(blastocystes après 96 h) : ≥ 80%
Utilisation de produits de qualité Ph. Eur. ou USP,
le cas échéant.
Le certificat d'analyse et la FS sont disponibles
sur demande.
VÉRIFICATIONS PRÉALABLES
À L'UTILISATION
»
»
Ne pas utiliser le produit s’il devient trouble ou s’il
présente des signes de contamination microbienne.
Ne pas utiliser le produit si le scellé du contenant est
rompu ou défectueux à la livraison du produit.
INSTRUCTIONS POUR LA CONSERVATION
»
»
»
»
»
Possibilité de transport ou de conservation de courte
durée à des températures élevées (jusqu'à 5 jours à 37°C).
Conserver entre 2 et 8°C, ne pas congeler avant utilisation.
Tenir à l’abri de la lumière (du soleil).
Les produits peuvent être utilisés en toute sécurité
jusqu’à 7 jours après ouverture si des conditions de
stérilité sont respectées et si les produits sont conservés
entre 2 et 8°C.
Ne pas utiliser après la date de péremption
MISES EN GARDE ET PRÉCAUTIONS
Les mesures standard pour prévenir les infections résultant
de l’utilisation des médicaments préparés à partir de sang
ou de plasma humains incluent la sélection des donneurs, la
recherche de marqueurs spécifiques d’infection sur les dons
individuels et les mélanges de plasma et l’inclusion d’étapes
de fabrication efficaces pour l’inactivation/élimination virale.
Toutefois, lorsque des médicaments préparés à partir de
sang ou de plasma humains sont administrés, la possibilité
de transmission d’agents infectieux ne peut être totalement
exclue. Ceci s’applique également aux virus inconnus ou
émergents et autres agents pathogènes. Aucune transmission avérée de virus n’a été rapportée avec l’albumine
fabriquée conformément aux spécifications de la pharmacopée européenne selon les procédés établis. Manipuler
par conséquent tous les échantillons comme s'ils pouvaient
transmettre le VIH ou l'hépatite. Toujours porter des vêtements de protection lors de la manipulation des échantillons.
Toujours travailler dans des conditions d’hygiène strictes
(par ex., poste de travail à flux d’air laminaire, classe ISO 5)
pour éviter une éventuelle contamination.
Les milieux GAIN contiennent du sulfate de gentamicine,
un antibiotique. Des précautions adaptées devront être
prises pour garantir que le patient n’est pas allergique à
cet antibiotique.
Prééquilibrage du milieu
Incuber le milieu (dans des boîtes ou des flacons de culture
dont le couvercle ou le bouchon a été desserré) pendant au
moins quatre heures dans un incubateur à CO 2 à 37°C et 5%
de CO 2. Idéalement, le milieu doit être préincubé pendant une
nuit avant utilisation.
Considérations générales pour l'utilisation
GAIN medium doit en règle générale être utilisé dans un
incubateur à 37°C et 5% de CO 2 à la pression atmosphérique
normale (voir Remarque sur le pH optimal et la pression
atmosphérique).
Le milieu fonctionne correctement dans des boîtes de 6 cm
contenant six gouttelettes de 50 µl couvertes de 6 ml
d'huile de paraffine légère (FertiCult Mineral Oil, FertiPro
NV, Belgique). Pour chaque goutte, quatre COC dénudés
peuvent être cultivés et inséminés au moyen d'environ 100
000 spermatozoïdes.
Méthode de culture standard
» Utiliser GAIN medium Early Stage pour la manipulation
d'ovocytes (en préparation à, ou pendant, la FIV/ICSI) et
la culture de zygotes et d'embryons jusqu'au stade quatre
cellules.
Remarque : Après la fécondation et la dénudation, les zygotes
doivent être transférés dans une gouttelette fraîche de GAIN
medium Early Stage.
» Utiliser GAIN medium Blastocyst pour la culture d'embryons
du stade quatre cellules au stade blastocyste expansé.
S'assurer que le milieu frais a été préincubé avant le trans fert des embryons au stade quatre cellules.
Méthode de culture alternative
» Utiliser GAIN medium Early Stage pour la manipulation
d'ovocytes (en préparation à, ou pendant, la FIV/ICSI) et
la fécondation.
» Utiliser GAIN medium Blastocyst pour la culture de zygotes
jusqu'au stade blastocyste expansé. S'assurer que le milieu
frais a été préincubé avant le transfert des embryons.
Rafraîchissement des milieux de culture
Pendant la culture, il est recommandé (mais pas obligatoire)
de transférer les embryons dans du milieu frais préincubé
toutes les 48 heures au moins.
Des durées de culture plus courtes sont bien entendu possibles (par ex., jusqu'au stade huit cellules au troisième jour
ou morula/compaction au quatrième jour).
Traitement des spermatozoïdes
GAIN medium Early Stage peut être utilisé pour diluer et
laver le sperme avant la centrifugation. Il peut également
être employé en combinaison avec un gradient de densité
(Sil-Select Plus, FertiPro NV, Belgique) et/ou une migration
ascendante, conformément aux procédures standard.
Les inséminats peuvent être utilisés pour l'IIU, la FIV et l'ICSI.
Les spermatozoïdes de bonne qualité survivent facilement
pendant une période de 48 heures dans GAIN medium.
Remarque : Il convient toutefois de remarquer que GAIN medium ne contient pas d'HEPES, de sorte qu'une incubation dans
du CO 2 est nécessaire pour maintenir un pH physiologique. Si
un milieu tamponné à l'HEPES est préféré, nous recommandons
d'utiliser FertiCult Flushing medium (FertiPro N.V., Belgique).
Remarque sur le pH optimal et la pression
atmosphérique
GAIN medium doit en règle générale être utilisé dans un incubateur à 37°C et 5 % de CO 2. À la pression atmosphérique
normale au niveau de la mer (101,3 kPa, fourchette : 99-103
kPa), le milieu obtenu aura un pH de 7,28 environ. Si la pression atmosphérique est plus faible ou l'altitude plus élevée,
le pourcentage de CO 2 dans l'incubateur doit être accru.
Le tableau ci-après fournit la valeur prédéfinie estimée de
CO 2 pour différentes pressions atmosphériques. La seule
façon de connaître le pH avec certitude est de le mesurer
directement dans les conditions de culture au moyen d'un
pH-mètre approprié et correctement étalonné. Pour une culture embryonnaire optimale, le pH doit être de : 7,28 ± 0,05.
GAIN medium contient du rouge de phénol à faible concentration (environ 0,001 mM), une quantité suffisante pour
indiquer le pH. Au pH adéquat, la couleur est rouge pâle. Si
le milieu devient orange ou jaunâtre, le pH est trop bas ; s'il
prend une teinte violacée, le pH est trop élevé.
Altitude
(mètres)
Pression atmosphérique
Valeur prédéfinie
de CO 2 *
0 (niveau de la mer)
0 - 400 m
400 - 800 m
800 - 1200 m
101.3 kPa
100 - 96 kPa
96 - 92 kPa
92 - 89 kPa
5.0%
5.0 - 5.2%
5.3 - 5.5%
5.6 - 5.8%
* Calculé comme suit : (pression au niveau de la mer/pression à
l'altitude réelle) x 5 %.
GAIN medium
tm
IT
GAIN medium Early Stage
GAIN medium Blastocyst
Terreni di coltura cellulare per la coltura
in vitro di embrioni e gameti umani
Doc.: FP09 I79 R01 C.3
Aggiornamento: 16.10.2015
GAIN Medium è sterilizzato per filtrazione
ABBREVIAZIONI UTILIZZATE
ICSI Iniezione intracitoplasmatica di sperma
IUI Inseminazione intrauterina
IVF Fecondazione in vitro
OCCCumulo-corona-ovocita
USO PREVISTO
GAIN medium consiste di 2 tipi di terreni, pronti all’uso, per
coltura cellulare di embrioni e gameti umani.
Il terreno può essere utilizzato per la fecondazione, per
la coltura degli zigoti e degli embrioni durante gli stadi di
scissione e fino allo stadio di blastocisti espansa e per il
trasferimento dell’embrione.
»
»
GAIN medium Early Stage (GAIN ES) può essere utilizzato
per la manipolazione degli ovociti (in preparazione o durante
la IVF/ICSI) e per la coltura cellulare dalla fecondazione
allo stadio di 4 cellule, per il trattamento del seme e per il
trasferimento dell’embrione.
GAIN medium Blastocyst (GAIN BL) è ideato per la coltura
dell’embrione dallo stadio di 4 cellule allo stadio di blastocisti espansa e per il trasferimento dell’embrione.
In alternativa, il terreno di coltura può essere utilizzato
immediatamente dopo la fecondazione, fino allo stadio di
blastocisti espansa.
Per esclusivo uso professionale
COMPOSIZIONE
Il terreno GAIN consiste in soluzioni saline bilanciate e
tamponate con bicarbonato, con aggiunta di 10mg/litro di
gentamicina e 3,5 g/litro di albumina sierica umana.
MATERIALI INCLUSI NEL KIT
Codice del prodotto
Descrizione del prodotto
GAIN010ES
GAIN010BL
1x 10ml GAIN medium Early Stage
1x 10ml GAIN medium Blastocyst
MATERIALI NON INCLUSI NEL KIT
» Piastre a pozzetto
» Incubatore a CO 2 (37°C – 5% CO 2 )
» Cappa a flusso laminare (ambiente ISO 5)
»Microscopio
» Siringa (p.es. Plastipack 1ml)
» Catetere (per il trasferimento dell’embrione)
SPECIFICHE DEL PRODOTTO
»
»
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»
Composizione chimica
pH a 37°C e CO 2 al 5%: 7,20-7,45
Osmolalità: 270-290 mOsm/kg
Sterilità: SAL 10 ­­­­­- 3
Endotossine < 0,25 EU/ml
Analisi su embrioni di topo (mouse embryo assay)
(blastocisti dopo 96 ore): ≥ 80%
Utilizzare prodotti di grado Ph Eur o USP, se applicabile
Il certificato di analisi e la MSDS sono disponibili
su richiesta
VERIFICHE PRE-UTILIZZO
»
»
Non utilizzare il prodotto se questo diventa torbido o mostra
evidenza di contaminazione batterica.
Non utilizzare il prodotto se il sigillo del contenitore è aperto
o difettoso quando il prodotto viene consegnato.
MODALITÀ DI CONSERVAZIONE
»
»
»
»
»
Idoneo per il trasporto o la conservazione per un tempo
breve a temperature elevate (fino a 5 giorni a 37°C).
Conservare a 2-8°C, non congelare prima dell’uso.
Tenere lontano dalla luce (solare).
I prodotti possono essere usati in sicurezza fino a 7 giorni
dopo l’apertura, quando le condizioni sterili sono mantenute e i prodotti sono conservati a 2-8°C.
Non usare dopo la data di scadenza.
AVVERTENZE E PRECAUZIONI
Le misure standard per prevenire infezioni derivanti
dall’utilizzo dei medicinali preparati da sangue o plasma
umano includono la selezione dei donatori, lo screening di
donazioni individuali e delle riserve di plasma per marcatori
specifici dell’infezione e l’inclusione di fasi produttive efficaci
per l’inattivazione/rimozione dei virus. Ciononostante, quando vengono somministrati medicinali preparati da sangue o
plasma umano, la possibilità di trasmettere
agenti infettivi non può essere esclusa del tutto. Ciò si
applica anche a virus e altri patogeni emergenti o sconosciuti. Non vi sono segnalazioni di trasmissioni comprovate
di virus con l’albumina prodotta secondo le specifiche della
Farmacopea Europea
mediante processi consolidati. Di conseguenza, è necessario
manipolare tutti i campioni come potenzialmente in grado di
trasmettere HIV o epatite. Indossare sempre un abbigliamento protettivo quando si manipolano i campioni.
Lavorare sempre rispettando rigorose condizioni igieniche
(ambiente ISO 5, ad es. cappa a flusso laminare) per evitare
una possibile contaminazione.
GAIN medium contengono l’antibiotico gentamicina solfato. È
opportuno prendere le adeguate precauzioni per evitare che
il paziente sviluppi una sensibilizzazione a questo antibiotico.
15/01/16 09:27
METODO
Terreno di coltura pre-equilibrazione
Incubare il terreno di coltura (in piastre per coltura o matracci
con tappo a vite allentato) per almeno 4 ore in un incubatore
a CO 2 a 37°C e CO 2 al 5%. È preferibile preincubare il terreno
di coltura durante la notte precedente all’uso.
GAIN medium
Note generali per l’uso
Generalmente, GAIN medium deve essere usato in un incubatore a 37°C e CO 2 al 5% a pressione atmosferica normale
(vedere Nota sul pH e sulla pressione atmosferica ottimali).
Il terreno di coltura è adatto a piastre da 6 cm con sei
gocce da 50 µl coperte con 6 ml di olio di paraffina leggero
(FertiCult Mineral Oil, FertiPro NV, Belgio). Per ogni goccia
è possibile coltivare ed inseminare 4 ovocita per mezzo di
100.000 cellule spermatiche.
Medios de cultivo celular para el cultivo
in vitro de gametos y embriones humanos
Metodo di coltura standard
» Utilizzare GAIN medium Early Stage per la manipolazione
degli ovociti (in preparazione o durante la IVF/ICSI) e per
la coltura degli zigoti e degli embrioni fino allo stadio di
4 cellule.
NOTA: Dopo la fecondazione e la denudazione, gli zigoti
devono essere trasferiti in una nuova goccia di GAIN medium
Early Stage.
» Utilizzare GAIN medium Blastocyst per la coltura di
embrioni dallo stadio di 4 cellule allo stadio di blastocisti
espansa. Assicurarsi che il nuovo terreno di coltura sia
stato preincubato prima del trasferimento degli embrioni
allo stadio di 4 cellule.
Metodo di coltura alternativo
» Utilizzare GAIN medium Early Stage per la manipolazione
degli ovociti (in preparazione o durante la IVF/ICSI) e per
la fecondazione.
» Utilizzare GAIN medium Blastocyst per la coltura degli
zigoti fino allo stadio di blastocisti espansa. Assicurarsi
che il terreno di coltura nuovo sia stato preincubato prima
del trasferimento degli embrioni.
Ricambio del terreno di coltura
È consigliabile (benché non indispensabile) trasferire gli
embrioni in un nuovo terreno di coltura preincubato almeno
ogni 48 ore di coltura.
Naturalmente sono possibili tempi di coltura più brevi (p.es.
fino allo stadio di 8 cellule al giorno 3 o fino alla morula/
compattazione al giorno 4).
Trattamento dello sperma
GAIN medium Early Stage può essere usato per diluire e
lavare il seme per la centrifugazione. Inoltre, può essere
usato in associazione a un gradiente di densità (Sil-Select
Plus, FertiPro NV, Belgio) e/o alla migrazione ascendente
(swim-up), dopo le procedure standard.
I semi possono essere utilizzati per l’IUI, per la IVF e per
l’ICSI. Gli spermatozoi di buona qualità sopravvivono per
almeno 48 ore nel GAIN medium.
NOTA: Tuttavia si noti che il GAIN medium non contiene HEPES,
perciò per mantenere un pH fisiologico è necessaria l’incubazione in CO 2. Se si preferisce usare un terreno tamponato con
HEPES, si consiglia l’uso di FertiCult Flushing medium (FertiPro
N.V., Belgio).
Nota sul pH e sulla pressione atmosferica ottimali
Generalmente il terreno di GAIN medium deve essere usato
in un incubatore a 37°C e CO 2 al 5%. In questo modo, a una
pressione atmosferica a livello del mare normale (101,3
kPa, intervallo: 99-103 kPa), risulterà un terreno di coltura
di un pH di circa 7,28. A pressione atmosferica minore o ad
altitudine maggiore, la percentuale di CO 2 nell’incubatore
deve essere aumentata.
Qui di seguito è riportata una tabella con i parametri di CO 2
stimati a diverse pressioni atmosferiche. L’unico modo per
determinare il pH con certezza è misurarlo direttamente
in condizioni di coltura con un misuratore di pH adatto e
ben calibrato. Per una coltura ottimale dell’embrione, il pH
dovrebbe essere: 7,28 ± 0,05.
GAIN Medium contiene una bassa concentrazione di rosso
fenolo (circa 0,001 mM), sufficiente a indicare il pH. Al pH
corretto il colore è rosso acceso chiaro. Se il terreno diventa
arancione o giallastro il pH è troppo basso, mentre se diventa
rosa o violaceo il pH è troppo alto.
Altitudine (metri)
Pressione atmosferica
Parametri
di CO 2 *
0 (a livello del mare)
0 - 400 m
400 - 800 m
800 - 1200 m
101.3 kPa
100 - 96 kPa
96 - 92 kPa
92 - 89 kPa
5.0%
5.0 - 5.2%
5.3 - 5.5%
5.6 - 5.8%
* Calcolati come segue: (pressione a livello del mare / pressione in
altitudine) x 5%.
tm
ES
GAIN medium Early Stage
GAIN medium Blastocyst
Documento: FP09 I79 R01 C.3
Actualización: 16.10.2015
GAIN medium est stérilisé par filtration stérile
ABREVIATURAS UTILIZADAS
ICSI Inyección intracitoplasmática de espermatozoides
IUI Inseminación intrauterina
IVF Fertilización in vitro
OCCCúmulo-Corona-Ovocito
USO
GAIN medium consiste en 2 tipos de medios de cultivo celular
listos para utilizar con gametos y embriones humanos.
Estos medios pueden ser utilizados para la fertilización, el
cultivo de cigotos y embriones desde los estadios de segmentación hasta el estadio de expansión del Blastocisto, y
para la transferencia de embriones.
» GAIN medium Early Stage (GAIN ES) se puede utilizar
para la manipulación de ovocitos (durante los proce dimientos de FIV, ICSI), para el cultivo celular desde la
Fertilización hasta el estadio de 4 células, para el proce samiento de semen y para la transferencia embrionaria.
» GAIN medium Blastocyst (GAIN BL) Ha sido desarrollado
para el cultivo de embriones desde el estadio de 4 células
hasta Blastocisto y para la transferencia embrionaria. El
medio puede utilizarse también desde la Fertilización
hasta el estadio de Blastocisto y para la transferencia
embrionaria.
Solo para uso profesional
COMPOSICIÓN
GAIN medium es una solución salina con un Buffer
Bicarbonato, 10 mg/ml de Gentamicina y 3,5 g/l de Sero
Albúmina Humana
MATERIAL SUMINISTRADO CON EL KIT
Código del producto
Descripción del producto
GAIN010ES
GAIN010BL
1x 10ml GAIN medium Early Stage
1x 10ml GAIN medium Blastocyst
MATERIAL NO INCLUIDO EN EL KIT
» Placas de cultivo
» Incubadora de CO 2 (37°C – 5% CO 2 )
» Cabina de flujo laminar (ISO clase 5)
»Microscopio
» Jeringa (por ejemplo, 1 ml de Plastipack)
» Catéter (para la transferencia de embriones)
ESPECIFICACIONES DEL PRODUCTO
» Composición química
» pH @ 37°C y 5 % de CO 2: 7.20-7.45
» Osmolalidad: 270-290 mOsm/kg
» Esterilidad: SAL 10 ­­­­­- 3
» Endotoxinas: < 0,25 UE/ml
» MEA (desarrollo de Blastocistos a las 96 horas): ≥ 80 %
» Use productos de grado Farm. Eur. o USP, si corresponde
» El certificado de análisis y la ficha de seguridad del
material (MSDS, por su sigla en inglés) están disponibles
a solicitud
COMPROBACIONES ANTES DEL USO
»
»
No utilice el producto si se torna turbio o presenta cualquier
evidencia de contaminación microbiana.
No utilizar el producto si el precinto del envase está abierto
o defectuoso en el momento de la entrega.
INSTRUCCIONES DE ALMACENAMIENTO
»
»
»
»
»
Adecuado para el transporte o el almacenamiento a corto
plazo a temperaturas elevadas (hasta 5 días a 37°C).
Almacenar a una temperatura entre 2 y 8°C. No debe
ser congelado antes de usar.
Manténgalo alejado de la luz (solar).
Los productos se pueden utilizar de forma segura hasta
7 días después de su apertura, siempre que se mantengan
las condiciones de esterilidad y los productos se almacenen a una temperatura entre 2 y 8°C.
No lo utilice después de la fecha de caducidad.
ADVERTENCIAS Y PRECAUCIONES
Las medidas estándar, evitan infecciones que puedan resultar del uso de productos medicinales derivados de la sangre
o plasma humanos incluyen la selección de donantes, el
análisis de las donaciones individuales y las reservas de
plasma para detectar marcadores específicos de infección y
la inclusión de pasos de fabricación eficaces para la desactivación o eliminación de virus. A pesar de esto, cuando se
administran productos medicinales preparados con sangre
o plasma humanos, la posibilidad de transmitir agentes
infecciosos no se puede excluir por completo. Esto también
se aplica a los virus desconocidos o emergentes y a otros
BIBLIOGRAPHY
BIBLIOGRAFIA
BIBLIOGRAPHIE
BIBLIOGRAPHIE
BIBLIOGRAFÍA
GAIN_medium_04.01.16.indd 2
1.
2.
3.
4.
5.
6.
agentes patógenos. No existen informes de transmisiones de
virus comprobadas con albúmina fabricada según las especificaciones de la Farmacopea Europea por medio de procesos
establecidos. Por tanto, manipule todas las muestras como
si fueran capaces de transmitir el VIH o hepatitis. Utilizar
siempre ropa protectora cuando manipule las muestras.
Siempre trabaje en estrictas condiciones de higiene (por
ejemplo, cabina de flujo laminar ISO clase 5) para evitar una
posible contaminación.
GAIN medium contienen el antibiótico sulfato de gentamicina. Se deben tomar las precauciones adecuadas para asegurarse de que el paciente no sea sensible a dicho antibiótico.
MÉTODO
Equilibrio previo del medio
Incube el medio (en placas de cultivo o frascos con tapas
a rosca sin ajustar) durante al menos 4 horas en una
incubadora de CO 2 a 37°C y 5 % de CO 2. Idealmente, el
medio debe incubarse previamente durante la noche antes
de ser utilizado.
Notas generales para el uso
GAIN medium debe utilizarse generalmente en una incubadora a 37°C y 5 % de CO 2 a una presión atmosférica normal
(véase la Nota sobre el pH óptimo y la presión atmosférica).
El medio funciona bien en placas de 6 cm con seis gotas
de 50 µl cubiertas con 6 ml de aceite de parafina liviano
(FertiCult Mineral Oil, FertiPro NV, Bélgica). Por cada gota se
pueden cultivar 4 OCC extraídos e inseminados con aproximadamente 0,1 millón de espermatozoides.
Método de cultivo estándar
» Utilice GAIN medium Early Stage para manipular ovocitos
(durante los procedimientos de FIV o ICSI), y para el cultivo
de cigotos y embriones hasta el estadio de 4 células.
Nota: Después de la fertilización y denudación, los cigotos
deben ser transferidos a una nueva gota de GAIN medium
Early Stage
» Utilice GAIN medium Blastocyst para el cultivo de embriones
desde el estadio de 4 células hasta el estadio de expansión
del Blastocisto. Asegúrese de que el nuevo medio haya sido
incubado previamente antes de transferir los embriones en
estadio de 4 células.
Método de cultivo alternativo
» Utilice GAIN medium Early Stage para manipular ovocitos
(durante los procedimientos de FIV o ICSI), y para la
fertilización.
» Utilice GAIN medium Blastocyst para el cultivo de cigotos
hasta el estadio de expansión del Blastocisto. Asegúrese
de que el nuevo medio haya sido incubado previamente
antes de transferir los embriones.
Renovación del medio de cultivo
Es aconsejable (pero no obligatorio) transferir los embriones a
las 48 horas a Medio de cultivo fresco, previamente incubado.
También puede cultivarse hasta el Dia +3 en estadio de 8
células o hasta el Dia +4 en estadio de mórula/compactación.
Procesamiento de espermatozoides
GAIN medium Early Stage puede utilizarse para diluir y limpiar
el semen para el centrifugado. También puede utilizarse en
combinación con un gradiente de densidad (Sil-Select Plus,
FertiPro NV, Bélgica) o la técnica de "swim-up", siguiendo los
procedimientos estándar.
Las inseminaciones pueden utilizarse para IUI, IVF e ICSI. Los
espermatozoides de buena calidad pueden sobrevivir en buen
estado durante un período de 48 horas en un GAIN medium.
NOTA : Sin embargo, cabe señalar GAIN medium no contiene
HEPES, por lo que para mantener el pH fisiológico es necesaria
la incubación de CO 2. Si se prefiere un medio neutralizado con
HEPES, recomendamos el uso de FertiCult Flushing medium
(FertiPro N.V., Bélgica).
Nota sobre el pH óptimo y la presión atmosférica
GAIN medium debe utilizarse generalmente en una incubadora a 37° C y 5 % de CO 2. A una presión atmosférica
normal a nivel del mar (101,3 kPa, entre 99 y 103 kPa) esto
resultará en un medio con un pH aproximado de 7,28. A una
presión atmosférica inferior o a una altitud superior, se debe
aumentar el porcentaje de CO 2 en la incubadora.
A continuación, encontrará una tabla con los parámetros de
CO 2 estimados para diferentes presiones atmosféricas. La
única manera de obtener certeza respecto del pH es medirlo
directamente en las condiciones de cultivo con un medidor
de pH apropiado bien calibrado. Para el cultivo óptimo del
embrión el pH debe ser: 7,28 ± 0.05.
GAIN medium contiene una baja concentración de Rojo de
Fenol (aproximadamente 0,001 mm), lo que resulta suficiente para indicar el pH. Con el pH correcto, el color es rojo
pálido brillante. Si el medio se torna naranja o amarillento,
el pH es demasiado bajo; si se torna rosa o purpurino, el pH
es demasiado alto.
Altitud
(metros)
Presión atmosférica
Parámetro
de CO 2 *
0 (nivel del mar)
0 - 400 m
400 - 800 m
800 - 1200 m
101.3 kPa
100 - 96 kPa
96 - 92 kPa
92 - 89 kPa
5.0%
5.0 - 5.2%
5.3 - 5.5%
5.6 - 5.8%
* Calculado de acuerdo a la siguiente fórmula: (Presión a nivel del
mar / altitud de presión) x 5 %.
Huisman GJ, Alberda AT, Leerentveld RA, Verhoeff A, Zeilmaker GH, 1994. A comparison of in vitro fertilization results after embryo
transfer after 2, 3, and 4 days of embryo culture. Fertil Steril 61, 970-72
Scholtes MCW, Zeilmaker GH, 1996. A prospective, randomized study of embryo transfer results after 3 or 5 days of embryo culture
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Rijnders PM, Jansen CAM, 1998. The predictive value of day 3 embryo-morphology for blastocyst formation and implantation rate
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randomised study. Human Reprod 14, 2333-7
Macklon NS, Pieters MHEC, Hassan MA, Jeucken PHM, Eijkemans MJC, Fauser BCJM, 2002. A prospective randomized comparison
of sequential versus monoculture systems for in-vitro human blastocyst development. Human Reprod 17, 2700-05
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catheter. Poster presented at the 3rd International Alpha Congress (International Society of Clinical Embryologists), “ART, Science
and Fiction”. 9-11 September, New York 2001
GAIN medium
tm
DE
GAIN medium Early Stage
GAIN medium Blastocyst
Zellkulturmedien für die In-vitro-Kultur
von menschlichen Embryonen und
Gameten
Dok: FP09 I79 R01 C.3
Aktualisierung: 16.10.2015
GAIN medium wird durch Sterilfiltration sterilisiert
VERWENDETE ABKÜRZUNGEN
ICSI IntraCytoplasmatic Sperm Injection
(Intrazytoplasmatische Spermieninjektion)
IUI Intra-Uterine Insemination (Intrauterine Insemination)
IVF In Vitro Fertilization (In-vitro-Fertilisation)
OCC Oocyte-Corona-Cumulus (Oozyte-Corona-Kumulus)
VORGESEHENE VERWENDUNG
GAIN medium besteht aus 2 Arten von gebrauchsfertigen Zellkulturmedien zur Verwendung mit menschlichen
Embryonen und Gameten.
Das Medium kann für die Fertilisation, für Zygoten- und
Embryonenkulturen im Teilungsstadium und bis zum
ausgebildeten Blastozystenstadium sowie für den
Embryonentransfer verwendet werden.
»
»
GAIN medium Early Stage (GAIN ES) kann für die
Handhabung von Oozyten (bei der Vorbereitung oder
während der IVF/ICSI) und für Zellkulturen ab Fertilisation
bis zum 4-Zell-Stadium, für die Spermien-aufbereitung
und für den Embryonentransfer verwendet werden.
GAIN medium Blastocyst (GAIN BL) wurde für die
Embryonenkultur ab dem 4-Zell-Stadium bis zum ausgebildeten Blastozystenstadium und für den Embryonentransfer entwickelt. Alternativ dazu kann das
Medium unmittelbar nach der Fertilisation bis zum ausgebildeten Blastozystenstadium verwendet werden.
Nur für die professionelle Nutzung
ZUSAMMENSETZUNG
GAIN media sind bikarbonatgepufferte, ausgewogene
Salzlösungen mit 10 mg/Liter Gentamicin und 3,5 g/Liter
Humanalbumin.
IM KIT ENTHALTENES MATERIAL
ProduktcodeProduktbeschreibung
GAIN010ES
GAIN010BL
1x 10ml GAIN medium Early Stage
1x 10ml GAIN medium Blastocyst
IM KIT NICHT ENTHALTENES MATERIAL
» Schalen mit Vertiefungen
»CO 2 Inkubator (37°C – 5% CO 2 )
» LAF-Sterilbank (ISO-Klasse 5)
»Mikroskop
» Spritze (z. B. 1 ml Plastipack)
» Katheter (für den Embryonentransfer)
PRODUKTSPEZIFIKATIONEN
» Chemische Zusammensetzung
» pH-Wert bei 37°C und 5 % CO 2: 7,20 – 7,45
» Osmolalität: 270 – 290 mOsm/kg
» Sterilität: SAL 10 ­­­­­- 3
» Endotoxine < 0,25 EU/ml
»Maus-Embryo-Test
(Blastozysten pro 96 Stunden Kultur): ≥ 80 %
» Verwendung von Ph Eur oder USP-Qualitätsprodukten,
falls zutreffend
» Analysezertifikat und Materialsicherheitsdatenblätter
sind auf Anfrage erhältlich
ÜBERPRÜFUNGEN VOR DER VERWENDUNG
» Das Produkt nicht verwenden, wenn es trüb wird oder
Anzeichen einer mikrobiellen Kontamination aufweist.
» Das Produkt nicht verwenden, wenn der Verschluss des
Behälters bei der Lieferung des Produkts geöffnet oder
beschädigt ist.
LAGERUNGSHINWEISE
» Geeignet für Transport oder kurzfristige Lagerung bei
erhöhten Temperaturen (bis zu 5 Tage bei 37°C).
» Bei 2 – 8°C lagern, vor der Verwendung nicht einfrieren.
» Vor (Sonnen-)Licht schützen.
» Die Produkte können nach dem Öffnen bis zu 7 Tage lang
unbedenklich verwendet werden, sofern sterile Bedingungen
gewahrt bleiben und die Produkte bei 2 – 8°C aufbewahrt
werden.
» Nicht nach dem Ablaufdatum verwenden.
WARNHINWEISE UND
VORSICHTSMASSNAHMEN
Maßnahmen zur Verhinderung von Infektionen, die durch
die Anwendung von Arzneimitteln aus menschlichem Blut
oder Plasma hergestellt wurden, umfassen die Auswahl
von Spendern, das Screening von individuellen Spenden
und Plasmapools auf spezifische Infektionsmarker und
die Einbeziehung effektiver Herstellungsschritte zur
Inaktivierung/Entfernung von Viren. Trotzdem kann die
TECHNICAL SUPPORT
SUPPORTO TECNICO
ASSISTANCE TECHNIQUE
ASISTENCIA TÉCNICA
TECHNISCHE UNTERSTÜTZUNG
Möglichkeit einer Übertragung von Krankheitserregern bei
Medizinprodukten aus menschlichem Blut oder Plasma nicht
völlig ausgeschlossen werden. Dies gilt auch für unbekannte
oder neuartige Viren und andere Krankheitserreger. Es gibt
keine Berichte über gesicherte Virusübertragungen durch
nach den Spezifikationen des Europäischen Arzneibuchs
unter Anwendung etablierter Prozesse hergestelltes
Albumin. Alle Proben sind daher so zu handhaben, als ob
sie HIV oder Hepatitis übertragen könnten. Beim Umgang mit
den Proben ist stets Schutzkleidung zu tragen.
Immer unter streng aseptischen Bedingungen arbeiten (z.
B. LAF-Sterilbank der ISO-Klasse 5), um eine mögliche
Kontamination zu vermeiden.
GAIN media enthalten das Antibiotikum Gentamicinsulfat.
Es sind entsprechende Vorsichtsmaßnahmen zu treffen, um
sicherzustellen, dass der Patient/die Patientin gegenüber
dem Antibiotikum nicht sensibilisiert wird.
METHODE
Voräquilibrieren des Mediums
Medium (in Kulturschale oder -flasche mit geöffnetem
Schraubverschluss) mindestens 4 Stunden lang in einem
CO2-Inkubator bei 37°C und 5 % CO 2 inkubieren. Idealerweise
sollte das Medium vor der Verwendung über Nacht vorinkubiert werden.
Allgemeine Verwendungshinweise
GAIN medium sollte im Allgemeinen in einem Inkubator bei
37°C und 5 % CO2 bei normalem atmosphärischem Druck
(siehe Hinweis zum optimalen pH-Wert und atmosphärischen
Druck) verwendet werden.
Das Medium funktioniert gut in 6-cm-Schalen mit sechs
50-µl-Tropfen unter 6 ml leichtem Paraffinöl (FertiCult
Mineral Oil, FertiPro NV, Belgien). Pro Tropfen können 4 vorbereitete OCC kultiviert und mit etwa 0,1 Millionen Spermien
inseminiert werden.
Standard-Kulturmethode
» GAIN medium Early Stage wird für den Umgang mit
Oozyten (bei der Vorbereitung oder während der IVF/
ICSI) und für die Kultur von Zygoten und Embryonen bis
zum 4-Zell-Stadium verwendet.
HINWEIS: Nach der Fertilisation und Denudation müssen
die Zygoten in einen frischen Tropfen GAIN medium Early
Stage transferiert werden
» GAIN medium Blastocyst wird für die Embryonenkultur ab
dem 4-Zell-Stadium bis zum ausgebildeten Blastozysten stadium verwendet. Stellen Sie sicher, dass das frische
Medium vor dem Transfer der Embryonen im 4-Zell-Stadium
vorinkubiert wird.
Alternative Kulturmethode
» GAIN medium Early Stage wird für die Handhabung von
Oozyten (bei der Vorbereitung oder während der IVF/ICSI)
und für die Fertilisation verwendet.
» GAIN medium Blastocyst wird für die Kultur von Zygoten
bis zum ausgebildeten Blastozystenstadium verwendet.
Stellen Sie sicher, dass das frische Medium vor dem
Transfer der Embryonen vorinkubiert wird.
Erneuerung des Kulturmediums
Es ist ratsam (jedoch nicht zwingend erforderlich), die
Embryonen mindestens nach jeweils 48 Stunden in Kultur in
frisches, vorinkubiertes Medium zu transferieren.
Natürlich sind auch kürzere Kulturzeiten möglich (z. B. bis zum
8-Zell-Stadium an Tag 3 oder bis zur Morula / Kompaktierung
an Tag 4).
Verarbeitung der Spermien
GAIN Early Stage-Medium kann zum Verdünnen und Waschen
von Samen für die Zentrifugierung verwendet werden. Es
kann auch in Kombination mit einem Dichtegradienten (SilSelect Plus, FertiPro NV, Belgien) und/oder Swim-Up im
Standardverfahren verwendet werden.
Kann für IUI, IVF und ICSI verwendet werden. In GAIN medium
überleben Spermienzellen von guter Qualität deutlich länger
als 48 Stunden.
HINWEIS: GAIN medium enthält jedoch kein HEPES; um also
einen physiologischen pH-Wert aufrechterhalten zu können, ist
eine CO2-Inkubation erforderlich. Wird ein HEPES-gepuffertes
Medium bevorzugt, empfehlen wir FertiCult Flushing medium
(FertiPro N.V., Belgien).
Hinweis zum optimalen pH-Wert und
atmosphärischen Druck
GAIN medium muss in der Regel in einem Inkubator bei 37°C
und 5 % CO 2 verwendet werden. Bei normalem atmosphärischen Druck auf Meereshöhe (101,3 kPa, Bereich: 99 – 103
kPa) führt dies zu einem pH-Wert des Mediums von etwa
7,28. Bei niedrigerem atmosphärischen Druck oder in höheren Lagen muss der CO 2 -Gehalt im Inkubator erhöht werden.
Nachfolgend ist eine Tabelle angeführt, in der der geschätzte
CO 2 -Sollwert bei unterschiedlichem Luftdruck angegeben
ist. Eine Gewissheit über den pH-Wert kann nur durch
Messung unter Kulturbedingungen mit einem geeigneten,
gut kalibrierten pH-Messgerät erlangt werden. pH-Wert für
eine optimale Embryonenkultur: 7,28 ± 0,05.
GAIN medium enthält Phenolrot in niedriger Konzentration
(ca. 0,001 mM), was für die Anzeige des pH-Werts ausreicht.
Bei korrektem pH-Wert ist die Farbe blass hellrot. Wird das
Medium orange oder gelblich, ist der pH-Wert zu niedrig,
wird es rosa oder purpurn, ist der pH-Wert zu hoch.
Höhe
Atmosphärischer CO 2 -Sollwert*
(Meter)Druck
0 (Meereshöhe)
0 - 400 m
400 - 800 m
800 - 1200 m
101.3 kPa
100 - 96 kPa
96 - 92 kPa
92 - 89 kPa
5.0%
5.0 - 5.2%
5.3 - 5.5%
5.6 - 5.8%
* Wird berechnet wie folgt: (Druck auf Meereshöhe/Druck auf
Höhe) x 5 %.
FertiPro N.V.
Industriepark Noord 32, 8730 Beernem, Belgium
Tel +32 (0)50 79 18 05
Fax +32 (0)50 79 17 99
URL: www.fertipro.com
E-mail: info@fertipro.com
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