Consejo Nacional de Rectores (CONARE) División de Coordinación Área de Investigación Ficha del proyecto Título del proyecto “Estudios Período de ejecución Universidades participantes 2011-2013 Universidad de Costa Rica Universidad Nacional Gustavo Gutiérrez Espeleta Nombre y apellidos (investigador principal) Nombre y apellidos (investigadores asociados) Asistentes Resumen/Abstract (máximo 300 palabras) genéticos, ambientales, infecciosos y epidemiológicos en Chelonia mydas agassizii anidante en el Pacífico Norte de Costa Rica” UCR: Eric Fuchs, Escuela de Biología Andrea Chaves, Escuela de Biología Norman Rojas, Facultad de Microbiología UNA: Mauricio Jiménez, Escuela de Medicina Veterinaria Kinndle Blanco, Escuela de Medicina Veterinaria Ana Jiménez, Escuela de Medicina Veterinaria Andrea Urbina, Escuela de Medicina Veterinaria Juan Alberto Morales, Escuela de Medicina Veterinaria Clemens Rupert, IRET En la actualidad, la mayoría del trabajo llevado a cabo en tortugas marinas es hecho de manera retrospectiva a nivel de manejo o durante situaciones de emergencia. Sin embargo, es importante transformar las evaluaciones periódicas de poblaciones a procedimientos más prospectivos, a través de investigaciones interdisciplinarias que faciliten el análisis de la situación global de los quelonios. La propuesta se desarrolló tomando en cuenta la necesidad de contribuir a la ardua labor desarrollada por organizaciones e investigadores nacionales e internacionales que colaboran en estudios de monitoreo, marcaje, vigilancia y otros en quelonios. Asimismo, reconociendo la necesidad de cubrir los campos del saber que se incluyen dentro de la propuesta y que no están siendo desarrolladas en Costa Rica ni en toda Centroamérica. Es necesario destacar que para mejorar las opciones evolutivas de la especie, es prioritario el estudio de los componentes genético, infecciosos, epidemiológico y ambientales, así como de las interrelaciones de estos. La evaluación de la variabilidad genética en una misma especie en distintas áreas geográficas es relevante debido a que se ha determinado una relación estrecha entre el grado de endogamia. Al mismo tiempo, la pérdida de opciones evolutivas tiene consecuencias negativas en la resistencia a enfermedades, siendo las manifestaciones clínicas del herpesvirus unas de las más importantes en tortugas marinas, así, como puede potenciar la presencia y éxito de agentes infecciosos (hongos, parásitos y bacterias) que afecten el grado de éxito de esta población de quelonios. Consejo Nacional de Rectores (CONARE) División de Coordinación Área de Investigación Objetivo general Resultados principales (los que considera más significativos) El análisis mediante SIG de estas interrelaciones permitirá establecer el comportamiento de las variables tanto en tiempo como en espacio, estableciendo diferencias epidemiológicas e infecciosas relacionadas con factores ambientales, temporales o genéticos que favorezcan la presencia de enfermedad. Analizar las opciones evolutivas de la tortuga negra (Chelonia mydas agassizii) y tortuga lora (Lepidochelys olivacea) que desova en el Pacífico de Costa Rica, con base en factores genéticos, infecciosos, epidemiológicos y ambientales. Herpesvirus/Fibropapilomatosis: De un total de 101 individuos analizados para la tortuga negra, 8 de playa Nancite, 16 de playa Naranjo (ambos sitios de tortugas anidantes) y 77 del Golfo Dulce (tortugas en forrajeo), 18 (17.8%) individuos, dos en playa Naranjo y 16 (20.8%) en Golfo Dulce resultaron positivos. De 77 tortugas muestreadas en el sitio de forrageo (Golfo Dulce), un 66% (51) fueron adultos y un 34% (26) juveniles. No se pudo determinar el sexo de las juveniles, pero todos los adultos capturados aparentemente fueron hembras, de acuerdo con las características morfológicas externas. Analizando los resultados de individuos positivos para CFPHV determinados para el Golfo Dulce, de los 20 individuos positivos, 13 (26%) positivas de 51 se trataban de tortugas juveniles y 7 (54%) positivas de 26 se trataban de tortugas adultas. En el caso de la tortuga lora, de un total de 154 muestras analizados, 14 de RVS Chacocente, 66 de RVS La Flor and 74 de RVS Ostional. En total 38 (24.7%) de estas muestras resultaron positivos, seis en RVS Chacocente, 36 (54.5%) en RVS La Flor y 10 (13.5%) en RVS Ostional resultaron positivos. Todas las tortugas capturadas para este estudio presentaron buen estado nutricional, es decir sin ojos y plastrón hundidos y sin presencia de cantidades anormales de percebes. A pesar de la revisión minuciosa de todas las tortugas analizadas, únicamente en el RVS Chacocente y en el RVS La Flor se observaron tortugas con tumoración evidente, todas ellas positivas a CFPHV, no fue observado para ningún otro sitio tortugas FP. De estos individuos con FP, las muestras de tumores fueron positivas en 82% (32 of 39) de los casos y en 34% (14 of 41) de los casos las muestras de tejido sano de estas mismas tortugas fueron positivas. Se determinó la presencia de CFPHV DNA en muestras de tejido sano para estas tortugas con FP, obteniendo cuatro positivas de ocho para Chacocente RVS y 30% de positividad de 33 muestras analizadas para La Flor RVS. Bacterias: Se obtuvo un total de 175 aislamientos bacterianos aerobios mesófilos de los cuales 150 pudieron ser identificados con el sistema Vitek lo que es igual a un 86% de organismos identificados. De estos el 90,7% corresponde a bacilos gram Consejo Nacional de Rectores (CONARE) División de Coordinación Área de Investigación negativos mientras el restante 9,3% representa a cocos gram positivos. La mayor cantidad de aislamientos se logró obtener de la cloaca siendo el 40 % de la totalidad de bacterias identificadas, seguidas por las aisladas de narinas (35,3%) y por último las de ojo (24,7%). El grupo con mayor porcentaje de aislamientos para los tres sitios anatómicos muestreados fue la familia Vibrionaceae (67,3%), seguido por los no fermentadores de lactosa (18,8%), cocos gram positivos (9,3%) y por último las enterobacterias (4,6%). Para el análisis de la susceptibilidad a los diferentes antibióticos la interpretación hecha con base en los criterios establecidos por Vitek fue concordante en la mayoría de los casos con los criterios que establece el Clinical and Laboratory Standars Institute (CLSI) 2011. El grupo de antibióticos utilizado para gram positivos y el porcentaje de organismos con resistencia o sensibilidad a estos. Todos los aislamientos presentaron resistencia a la penicilina G, mientras que a otras penicilinas como la amoxicilina con clavulonato y la ampicilina el 90% fue resistente, la oxacilina que también es una penicilina pero que presentó una resistencia mucho menor de un 37% al igual que a cefalosporinas de primera generación y eritromicina. Un 18% de resistencia se obtuvo para clindamicina y vancomicina (2/14) y de 10% para linezolid y tetraciclinas (1/11), por el contrario el 100% resultaron sensibles a ciprofloxacina, nitrofurantoína y a trimetoprim/sulfa. Para ningún antibiótico se presentó resistencia intermedia. Análisis parasitológico: Se identificó una especie de ectoparásito y 2 especies epibiontes en tortugas procedentes de Puerto Jiménez de Costa Rica. De los ectoparásitos, 3 ejemplares fueron sanguijuelas de la especie Ozobranchus branchiatus , recolectadas en una tortuga verde (plastrón), una tortuga negra (plastrón y aletas) y una tortuga carey (cuello), respectivamente. Los epibiontes fueron cirripedios de la especie Stephanolepas muricata (2 ejemplares) en 2 tortugas carey, y de la especie Cheonibia testudinaria (7 ejemplares) en una tortuga verde. Contaminantes ambientales-plaguicidas: Sedimento: Ningún plaguicida de los analizados fue encontrado en el sedimento muestreado. Pasto marino: De los plaguicidas analizados, se encontró el herbicida Clomazona en un punto de muestreo de pasto (4.2), ubicado cerca de la salida del Manglar. Agua: También se encontró el herbicida Clomazona en dos muestras de aguas tomadas del Manglar . Suero sanguíneo: De las diez muestras de suero sanguíneo, de las tortugas marinas analizadas, no se encontró ningún compuesto organoclorado. Composición haplotípica se identificaron cuatro haplotipos según 11 sitios variables, en la zona de anidación (CMP4, CMP8, CMP-CR6 y CMP-CR7). Dos Consejo Nacional de Rectores (CONARE) División de Coordinación Área de Investigación haplotipos no se lograron emparejar con los de referencia, los cuales fueron identificados como CMP-CR6 y CMP-CR7 para este estudio. Estos haplotipos implican nuevos aportes a la diversidad genética de esta población a nivel regional. En el Golfo Dulce se encontraron siete haplotipos, basados en 71 sitios polimórficos (Cuadro 1). El más común de la población muestreada fue el CMP4, con un 65 % (32), seguido por el CMP8 con 14 %. Diversidad de la estructura genética: La diversidad haplotípica del sitio de anidación presentó similitud con otras regiones del Pacífico (h 0.7636 + 0.083) y la nucleotídica (π 0.01069) fue sustancialmente más alta en Costa Rica que en los otros sitios de anidación del Pacífico, lo que refleja el aporte genético a la población de C. mydas. La variabilidad genética del sitio de forrajeo (h 0.5536 + 0.00602 y π: 0.01034) es baja s para otras poblaciones del Pacífico, específicamente para Japón (Dethmers et al. 2006). Sin embargo, fue más alta en comparación con sitios como Hawaii (Dutton et al. 2008), que se considera un sitio genéticamente diferenciado del resto del Pacífico. Al comparar la población de anidación con la de forrajeo, se obtuvo un valor FST =0.0385 (Chi=16.957, p=0.02, df=7), lo que implica que hay flujo génico entre ambas. Más Información (referencias impresas o digitales) Participación en eventos Póster: Análisis descriptivo de las condiciones ambientales y estado de salud de la tortuga negra (Chelonia mydas agassizii) que forrajea en el Golfo Dulce de Costa Rica, presentado en la Reunión Binacional de Medicina de la Conservación Costa Rica-México, en febrero del 2013. Ponencia: Evaluación ambiental y genética de sitios con presencia de la fibropapilomatosis en poblaciones de Chelonia mydas., presentada en el 2° Congreso Internacional en Ecología de Enfermedades y Medicina de la Conservación Kalaan-Kab. Ponencia: Análisis descriptivo de las condiciones ambientales y estado de salud de la tortuga negra (Chelonia mydas agassizii) en un sitio de forrajeo en el Golfo Dulce, Costa Rica, presentado en el congreso WDA Latin America en setiembre de 2013. Referencias de los artículos u otros productos que se proyectan y revista o medio de publicación: Presencia de herpes virus en tortuga negra (Chelonia mydas agassizii) y tortuga lora (Lepidochelys olivacea) del Pacífico de Costa Rica. En Revision – Journal of Wildlife Diseases Variabilidad Genética de la tortuga negra (Chelonia mydas agassizii) del Pacífico de Costa Rica. Hematología y Química Clínica de la Tortuga negra (Chelonia mydas agassizii) del Pacífico de Costa Rica. Consejo Nacional de Rectores (CONARE) División de Coordinación Área de Investigación Valores hormonales de la tortuga negra (Chelonia mydas agassizii) y tortuga lora (Lepidochelys olivacea) del Pacífico de Costa Rica.del Pacífico de Costa Rica. Tesis y proyectos de investigación nuevos: Estructura y diversidad genética de la tortuga Chelonia mydas (FAM: CHELONIIDAE) en el pacífico de Costa Rica, presentada por Carolina Salas Rojas para obtener su título de máster en la Escuela de Biología de la UCR. Perfiles hematológicos, bioquímicos y hormonales de la tortuga negra (Chelonia mydas agassizii) en el Golfo Dulce de Costa Rica. Se halla en proceso de presentación y es una tesis de pregrado de la Escuela de Medicina Veterinaria de la UNA. Contacto Dr. Gustavo Gutiérrez-Espeleta, gustavo.gutierrez@ucr.ac.cr