ELISA caracterización por anticuerpos monoclonales

Informes de los Laboratorios de
Referencia de la OIE
Actividades del año 2011
Enfermedad (o tema) para la(el) cual
es designado laboratorio de referencia
de la OIE:
Fiebre aftosa
Dirección del laboratorio:
Av. Fleming 1653, CP 1640, Martínez,
Provincia De Buenos Aires
REPUBLICA ARGENTINA
Tel.:
+54 11 4836 1992
Fax:
+54 11 4836 1992
Dirección de correo electrónico:
emaradei@senasa.gov.ar , emaradei@yahoo.com ,
Sitio web:
www.senasa.gov.ar
Nombre (incluir título y puesto) del
Jefe de laboratorio (responsable
oficial):
Médico Veterinario
Jorge Rodríguez Toledo
Director
Dirección Laboratorio Animal
Nombre (incluir título y puesto) del
experto de referencia
de la OIE:
Nombre (incluir título y puesto) del
redactor de este informe (si difiere del
anterior):
Informes anuales de los Centros de referencia de la OIE, 2011
Médico Veterinario
Eduardo D. Maradei
Coordinador
Coordinación Virología Animal
Médica Veterinaria
Claudia Perez Beascoechea
Responsable Diagnóstico Virológico
Departamento Control Vacunas/Virología
Aftosa
1
Fiebre aftosa
Parte I: Resumen de las actividades generales relacionadas con la enfermedad
1.
Prueba(s) usada(s) o disponible(s) en su laboratorio para la enfermedad o tema especificados
Prueba
Cultivo celular BHK-21
ELISA Sandwich indirecto
Fijación de complemento 50%
Virus Neutralización
ELISA Fase Liquida
ELISA 3 ABC
Western blott (EITB)
Inmunodifusión en agar (IDGA)
ELISA Tipificación monoclonal
ELISA caracterización por
anticuerpos monoclonales
Determinación Masa Antigénica
RT-PCR
RT-PCR
Secuenciación Viral
2.
Para
Especificidad
Total de Pruebas
Tipo y Subtipo
125
Tipo
Tipo y Subtipo
Tipo y Subtipo
Tipo y Subtipo
Grupo
Grupo
Grupo
Tipo y Subtipo
225
1808
1112
75.978
26.302
1.946
5.251
105
Antígeno
Tipo y subtipo
36
Antígeno
Ácido nucleico
Ácido nucleico
Grupo
Grupo 3D
VP1
Análisis de secuencia
nucleotídica
39
35
35
Aislamiento y amplificación
viral
Antígeno
Antígeno
Anticuerpo
Anticuerpo
Anticuerpo
Anticuerpo
Anticuerpo
Antígeno
Ácido nucleico
Producción y distribución de reactivos de diagnóstico
Tipo de reactivo
Suero hiperinmune de referencia de cobayo O1
Campos, A24 Cruzeiro, A Arg 2001 y C3 Indaial, O1
Taiwán
Suero hiperinmune de cobayo O Ecuador 46-10
Complemento
Hemolisina
Suero Bovino Tetravalente: A24 Cruzeiro- A
Argentina 2001-O1 Campos-C3 Indaial 7DPV-14
DPV
Suero Bovino Tetravalente: A24 Cruzeiro-A
Argentina 2001-O1 Campos-C3 Indaial 7DPI-14 DPI21DPI-28DPI
Suero Bovino O1 Ecuador 46-10 30 DPV
Suero Bovino O1 Ecuador 46-10 7 DPI
Suero Bovino O1 Ecuador 46-10 10DPI
Suero Bovino Tetravalente: A24 Cruzeiro- A
Argentina 2001-O1 Campos-C3 Indaial 79 DPV
Suero Bovino Trivalente: A24 Cruzeiro- O1 CamposC3 Indaial 79 DPRV
Suspensión viral para prueba de desafío viral en
bovinos para control de vacuna antiaftosa
Suspensión viral inactivada con BEI, O1 Corrientes
2006, O1 Ecuador-46, O1 Campos.
Virus en epitelio bovino
Kit ELISA FL serotipos O1 Campos, A24 Cruzeiro,
C3 Indaial, A2001
2
35
Cantidad
Producida
(en ml)
130
Cantidad suministrada
a nivel nacional (en ml)
(incluso para uso
propio)
61
Cantidad
suministrada
a otros países
(en ml)
32
8
305
132
270
1
175
95
25
2
5
-
576
35
-
250
900
1100
100
25
25
25
15
-
100
5
-
1695
700
-
6000
1500
-
250 g
1052
5g
942
110
Informes anuales de los Centros de referencia de la OIE, 2011
Fiebre aftosa
Cantidad
Producida
(en ml)
Tipo de reactivo
Kit ELISA 3 ABC
KIT ELISA tipificación monoclonales
KIT ELISA IBR
KIT ELIS BVD
280
269
60
66
Cantidad suministrada
a nivel nacional (en ml)
(incluso para uso
propio)
260
59
60
66
Cantidad
suministrada
a otros países
(en ml)
20
210
-
Referencias: DPV: días pos vacunación. DVRV: días pos revacunación. DPI: días pos infección
Parte II: Actividades específicamente relacionadas con el mandato
de los Laboratorios de Referencia de la OIE
3.
Armonización y normalización internacional de los métodos para las pruebas de diagnóstico o
la producción y evaluación de vacunas
a)
Creación y mantenimiento de una red de contactos con otros laboratorios de referencia de
la OIE designados para el mismo patógeno o enfermedad y organización de evaluaciones
de calidad regulares interlaboratoriales para asegurar la comparabilidad de resultados
Participación de Ensayos Internacionales en Anillo organizado por otros laboratorios:
Laboratorio
Organizador
Ámbito de investigación
Nivel de
participación
Estado del
Interlaboratorio
PANAFTOSA
ELISA 3ABC/EITB
Regional
Finalizado
Institute Animal
Health Pirbright (UK)
Viruneutralización bidimensional para
cálculo del valor r1.
Global
Finalizado
Institute Animal
Health Pirbright (UK)
Aislamiento Viral, Diagnostico diferencial
Fiebre Aftosa-Enfermedad Vesicular del
cerdo por ELISA y RT-PCR
Global
Finalizado
o
Cooperación internacional sobre los métodos de armonización de la producción y control
de calidad de las vacunas:
Se realizó el control de calidad tanto de las vacunas antiaftosa y antígenos que se utilizan en Argentina como
de las exportaciones a Bolivia, Brasil, Paraguay y Venezuela:
o
Vacunas antiaftosa de uso local: 71.719.840 dosis
o
Vacunas antiaftosa de exportación: 55.388.645 dosis
o
Antígenos de exportación: 2240 litros
Se participo de las auditorías realizadas a laboratorios productores de vacunas antiaftosas de Argentina,
Brasil y Paraguay en el marco del Programa Aftosa MERCOSUR Ampliado (PAMA):
Laboratorio Productor Visitado
País
Fecha de la Misión
Ouro Fino
Brasil
12 al 16 de Septiembre
Lauda
Paraguay
28 de noviembre al 2 de diciembre
Galmedic
Paraguay
14 al 18 de noviembre
ACA
Argentina
12 al 16 de diciembre
Informes anuales de los Centros de referencia de la OIE, 2011
3
Fiebre aftosa
b)
Organización de evaluaciones de calidad interlaboratoriales con otros laboratorios que no
sean de referencia de la OIE que usen pruebas para los mismos patógenos y enfermedades
para asegurar la equivalencia de resultados.

Organización de Ensayos Internacionales en anillo:
Ámbito de Investigación
Nivel de
Participación
Número de Participantes
Concordancia vacunal: ELISA FL para cálculo del
valor “r1”*
Global
5 : Argentina, Alemania, Bélgica,
Inglaterra y Sudáfrica
*Este interlaboratorio se organizó en conjunto con el WRL, Pirbright, y el VAR, Bélgica.
o
Organización y/o participación de evaluaciones interlaboratorio:
Se ha participado en la evaluación e interpretación del Interlaboratorio “Concordancia vacunal: ELISA FL para
cálculo del valor “r1”
4.
Preparación y suministro de estándares internacionales de referencia para las pruebas de
diagnóstico o las vacunas
o
Material estándar reconocido oficialmente por la OIE
Por el momento el laboratorio no cuenta con material estándar de referencia reconocido por la OIE.
o
Material de Referencia suministrado:
Material de Referencia
Cantidad suministrada
Organismo/institución
receptora
Cepa de Virus de Referencia para producción y
control de Vacunas A24 Cruzeiro, A Arg 2001,
O1 Campos, C3 Indaial
1 criovial x 1ml de cada
cepa
Laboratorio Centro Diagnóstico
Veterinario
Antígeno O Ecuador 46-10 Inactivado con BEI
5.
50 ml
Laboratorio de Salud Animal del
Instituto Nacional de Higiene y
Medicina Tropical de Quito.
Investigación y desarrollo de nuevos procedimientos de diagnóstico y control
Como se ha descripto en el informe anual a la OIE del año 2009 y 2010, el Laboratorio de Referencia del
SENASA integra la Red Interinstitucional para Investigación y Desarrollo en Fiebre Aftosa (RIIDFA) de
Argentina con quien realiza trabajos en cooperación. Se encuentra en su etapa final el Proyecto para Áreas
Estratégicas (PAE) 2007: “Acciones coordinadas de investigación y desarrollo en fiebre aftosa para asegurar el
estatus de país libre de la enfermedad” financiado por la Agencia Nacional de Promoción Científica y Tecnológica
Este PAE-2007 está conformado por 14 proyectos de investigación, de los cuales el Laboratorio de Referencia
para Fiebre Aftosa de SENASA, participa en los siguientes proyectos:
PID-PAE 2007-74: Desarrollo y optimización de métodos de control alternativos de calidad y eficacia de vacuna
antiaftosa.
PID-PAE 2007-87: Evaluación de la protección cruzada de cepas vacúnales del VFA frente a cepas heterólogas en
bovinos
PICT-PAE 2007-67: Cuantificación de la transmisión del virus de fiebre aftosa en bovinos no vacunados y
bovinos vacunados.
PICT-PAE 2007-13: Desarrollo de métodos de PCR en tiempo real para el diagnóstico rápido del VFA.
PFDT-202: Programa de Capacitación en Bioseguridad
4
Informes anuales de los Centros de referencia de la OIE, 2011
Fiebre aftosa
PICT-PAE 2007-33: Estudio de la evolución molecular del VFA utilizando el brote Argentino correspondiente a la
cepa A Argentina 2001 como modelo.
PICT-PAE 2007-73: Desarrollo y escalado de producción de reactivos de diagnóstico para la evaluación del VFA
y sus anticuerpos.
6.
Recopilación, análisis y difusión de datos epizootiológicos concernientes a la lucha
internacional contra las enfermedades
Informes sobre situación sanitaria Internacional
País y Tema al que se
refiere el Informe
República del Ecuador
Caracterización de
aislamientos virales
provenientes de focos de
Fiebre Aftosa.
Año 2009-2010
República del Ecuador
Caracterización de
aislamientos virales
provenientes de focos de
Fiebre Aftosa
Año 2011
Paraguay
Caracterización de
aislamientos virales
provenientes de focos de
Fiebre Aftosa.
Año 2011
Lugar de la
Reunión
Reunión Comité
Veterinario Permanente
del Cono Sur. Buenos
Aires, Argentina
Dirección de
Laboratorio Animal,
SENASA. Buenos
Aires, Argentina
CAN, Comunidad
Andina de Naciones,
Lima, Perú
Tipo de Informe
Fecha
Destinatario
Presentación de
resultados y
conclusiones.
Enero 2011
-
Presentación de
resultados,
conclusiones y
recomendaciones.
Marzo 2011
-
Presentación Reunión
Técnica
Marzo 2011
-
Presentación Reunión
Técnica grupo ad-hoc
Noviembre
2011
-
OIE-París-Francia
Presentación de
resultados y
conclusiones
Noviembre
2011
-
OIE/FAO 7ª Reunión
Laboratorios de
Referencia IAH,
Pribright, Inglaterra
Informe resultados de
laboratorio
Octubre
2011
SENACSAParaguay
Presentación de
resultados y
conclusiones
Noviembre
2011
OIE/FAO 7ª Reunión
Laboratorios de
Referencia IAH,
Pirbright, Inglaterra
-
Notificaciones enviadas a la OIE
Fecha de la
notificación
Tipo de
Notificación
Tema de la Notificación
Resultado
Virus aislados: serotipo O, topotipo eurosudamericano.
Abril 2011
Octubre 2011
Carta dirigida
al Director
General de la
OIE
Informe de resultados de
laboratorio y prueba de
desafío en bovinos muestras
brote Fiebre aftosa Ecuador
2010
-
Informe de resultados de
laboratorio muestra brote
Fiebre Aftosa Paraguay
2011
Informes anuales de los Centros de referencia de la OIE, 2011
Resultados de las pruebas de vaccine matching tanto
in vitro como in vivo indican que la cepa O1 Ecuador
es diferente de la cepa vacunal O1 Campos, las
pruebas de desafío viral en bovinos (Golden
standard) indican que las vacunas en uso con la Cepa
O1 Campos no protegen adecuadamente los animales
que han recibido una o dos dosis de vacunas.
Virus aislados: Serotipo O, topotipo eurosudamericano.
Sueros: positivos EITB
5
Fiebre aftosa
7.
Mantenimiento de un sistema de control de calidad, bioseguridad y seguridad biológica en
relación al patógeno y a la enfermedad
El laboratorio central de SENASA, acreditado en las Normas ISO 17.025, por el Organismo Argentino de
Acreditación (OAA) cuenta con instalaciones de Bioseguridad nivel NBS-3A (nivel 4 OIE), cumpliendo así con
las normas de Bioseguridad establecidas por el SENASA y la OIE para la manipulación del virus de la Fiebre
Aftosa y otros agentes de riesgo, incluidos los exóticos, siendo el único laboratorio oficial en Sudamérica con estas
características.
A su vez SENASA, en el marco de un convenio de colaboración científico tecnológico con el Instituto Nacional de
Investigación Agropecuaria (INTA) tiene el uso prioritario de los boxes con nivel de bioseguridad NBS 3 A (nivel
4 OIE) para trabajar con grandes animales, permitiendo la manipulación biosegura del virus de la Fiebre Aftosa en
pruebas de desafío viral para el control oficial de vacunas antiaftosas, test de vaccine matching, y
experimentación.
Ambos laboratorios cuentan con Oficiales de Bioseguridad, responsables del control y mantenimiento tanto de las
normas de buenas prácticas de laboratorio como del estricto sistema de bioseguridad y seguridad biológica, y
personal altamente capacitado para trabajar en dichos niveles de contención biológica.
El acceso del personal no sólo es restringido sino también controlado por un sistema de claves personales,
registrado y monitoreado electrónicamente.
El laboratorio central de SENASA, es el único laboratorio del país autorizado a conservar y manipular cepas
exóticas del virus de Fiebre Aftosa, El manejo e inventario de este cepario, que se encuentra conservado en
freezers y termos de Nitrógeno liquido siempre bajo llave, solo es realizado por personal autorizado.
8.
Suministro de asesoramiento experto a la OIE o a los Países Miembros de la OIE
 Participación en las comisiones y grupos ad hoc de la OIE para brindar asesoramiento
experto
Reunion
Fecha
Lugar
Reunión de Actualización y discusión de las normas de la OIE para su
adopción en la sesión general de 2011.
5 al 7 de enero
Buenos Aires,
Argentina
OIE/FAO FMD Reference Laboratories Network Annual Meeting
14 al 16 de
noviembre
Pirbright-Inglaterra
Reunión expertos en Pruebas Vaccine Matching muestras focos Fiebre
Aftosa Ecuador 2009-2010
17 y 18 de
noviembre
Paris, Francia
 Misiones internacionales
9.
Nombre de la Misión
Participantes
Auditoría Bioseguridad a Laboratorio MERIAL,
SAUDE ANIMAL
Auditoría Producción de vacuna antiaftosa a
MERIAL, SAUDE ANIMAL
Comisión de Bioseguridad
SENASA
Expertos producción vacuna
SENASA
Fecha
Brasil
20 al 24 de junio
Brasil
22 al 26 de
agosto
Suministro de formación científica y técnica al personal de otros Países Miembros de la OIE
Institución
6
Lugar
Número de
participantes
Fecha
Tema de Formación
Informes anuales de los Centros de referencia de la OIE, 2011
Fiebre aftosa
Control de Calidad Vacuna Antiaftosa.
Aislamiento viral, tipificación,
caracterización de cepas virales, y
pruebas de vaccine matching.
SENACSA-Paraguay *
4
13 de Junio al 29 de
julio
SENASA-Perú
1
13 de junio al 24
Capacitación ELISA inmunidad
Poblacional
Laboratorio de Salud
Animal del Instituto
Nacional de Higiene y
Medicina Tropical de
Quito. Ecuador
1
29 de agosto al 9 de
septiembre
Aislamiento viral, tipificación,
caracterización, PCR y pruebas de
vaccine matching
SENACSA-Paraguay
1
26 de septiembre al 7
de Octubre
Aislamiento viral, tipificación,
caracterización, PCR y pruebas de
vaccine matching
SENASAG, Bolivia
1
LIDIVET, Bolivia
1
27 de septiembre al 7
de Octubre
27 de septiembre al 7
de Octubre
Control de Calidad Vacuna Antiaftosa
Control de Calidad Vacuna Antiaftosa
*En el marco del “Proyecto de Hermanamiento para el Fortalecimiento del Laboratorio del Servicio Nacional de Calidad y
Sanidad Animal (SENACSA) Paraguay” en control de Vacuna Antiaftosa
10. Suministro de servicios para las pruebas de diagnóstico a otros Países Miembros de la OIE
Emisor de la
muestra
Muestras
Remitidas
Laboratorio de
Salud Animal del
Instituto Nacional
de Higiene y
Medicina
Tropical de
Quito. Ecuador
Epitelio bovino
de focos de
Fiebre Aftosa de
los años 2011,
2008 2006 y
2005
Cantidad
Diagnóstico
previo realizado
por el país de
origen
8
Fiebre Aftosa tipo O
por Fijación de
Complemento
SENACSAParaguay
Epitelio bovino
de foco Fiebre
Aftosa año 2011
1
Fiebre Aftosa tipo O
por Fijación de
Complemento
SENACSAParaguay
Sueros Bovinos
foco Fiebre
Aftosa año 2011
13
Pruebas diagnósticas
realizadas en SENASA
Aislamiento viral,
tipificación por ELISA y
PCR, caracterización por
anticuerpos monoclonales,
secuenciamiento y pruebas
de vaccine matching por
virus neutralización
bidimensional.
Aislamiento viral,
tipificación por ELISA y
PCR, caracterización por
anticuerpos monoclonales,
secuenciamiento y pruebas
de vaccine matching por
virusneutralización
bidimensional.
Informe
a OIE
Si
Si
Positivo EITB
EITB
Si
11. Organización de reuniones científicas internacionales en nombre de la OIE o de otros
organismos internacionales
“Cross-protection, Vaccine Matching and Vaccine Banks: Challenge and Opportunities” Buenos Aires, 14 al 16 de
junio de 2011. Organizado en conjunto con la GFRA y el FMD-WRL en el marco del proyecto FMDDISCONVAC.
12. Participación en estudios científicos internacionales colaborativos
Informes anuales de los Centros de referencia de la OIE, 2011
7
Fiebre aftosa

Proyecto Coordinado de Investigación (CPR Nº16050) con la Agencia Internacional de Energía
Atómica: “El Control de la Fiebre Aftosa”
Este proyecto tiene una duración de tres años, renovable anualmente y ha sido aprobada la primera
renovación.

Proyecto Colaborativo (UE): FP7KBBE-2008 1: 7º Programa de Marco de Trabajo:
“Desarrollo, mejoramiento y complementación en el ahorro de uso de animales en las estrategias para el
control de vacunas en regiones libres y endémicas” (FMD-DISCONVAC).
“Development, enhancement and complementation of animal-sparing, foot-and-mouth disease vaccine-base
control strategies for free and endemic regions” (FMD-DISCONVAC).
Se participa en los siguientes paquetes de trabajo (WP):
WP2: Reducción y refinamiento de los test in vivo por métodos in vitro para control de calidad de vacunas
WP3: Determinación y mejoramiento de la protección heteróloga conferida por vacunas antiaftosas.
WP4: Desarrollo de vacunas y alternativos (antivirales) con rápida respuesta humoral y basados en métodos
de producción más seguros.
13. Publicación y difusión de información concerniente al trabajo de la OIE (incluidas una lista de
las publicaciones científicas, las actividades de publicación por internet, las presentaciones en
conferencias internacionales)

Reunión/conferencia
Título de la presentación
Fecha
Lugar
IAEA: First Technical Meeting on
Molecular and Nuclear Technologies for
the Control of Foot and Mouth Disease.
Fiebre Aftosa: Situación
Epidemiológica en Argentina,
Técnicas de Diagnóstico. Vaccine
Matching
10 al 14 de enero
FAO,
Roma,
Italia
Cross-protection, Vaccine Matching and
vaccine Banks: Challenge and
opportunities”
Banco de Antígenos y
VacunasVaccine matching
14 al 16 de junio
Buenos
Aires,
Argentina
Congreso Argentino de Virología
Situación de la Fiebre Aftosa en
Sudamérica
29 de septiembre
Buenos
Aires,
Argentina
7th OIE/FAO FMD Reference
Laboratories Network Annual Meeting
Caracterización muestras Focos
Fiebre Aftosa Ecuador 2010-2011
14 al 16 de
noviembre
PirbrightInglaterra

8
Presentaciones en conferencias y reuniones internacionales
Publicaciones científicas en revistas con examen por pares
o
Characterization of foot-and-mouth-disease virus from outbreaks in Ecuador during 2009-2010 and
cross-protection studies with the vaccine strain in use in the region. Vaccine 29 (20011) 8230-8240.
Eduardo Maradei, Claudia Perez Beascoechea, Viviana Malirat, Gustavo Salgado, Cristina Seki, Andrea
Pedemonte, Paula Bonastre, Ricardo D’Aloia, José La Torre, Nora Mattion, Jorge Rodríguez Toledo,
Ingrid Bergmann.
o
Reducing animal experimentation in foot-and-mouth disease vaccine potency tests. Vaccine 33 (2011)
5467-73 Reeve R, Cox S, Smitsaart E, Perez Beascoechea C, Haas B, Maradei E, Haydon DT, Barnett
P.
Informes anuales de los Centros de referencia de la OIE, 2011
Fiebre aftosa
_______________
Informes anuales de los Centros de referencia de la OIE, 2011
9